KR20070071350A - 피부질환 치료에 유용한 은행잎 추출물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부질환 치료에 유용한 은행잎 추출물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 은행잎 추출물이 표피 증식 억제 효과가 우수함을 확인함으로써, 건선 등의 피부질환 예방 및 치료에 유용한 은행잎 추출물을 함유하는 약제에 관한 것이다.

피부질환, 은행잎, 표피 증식 억제, 건선

Description

피부질환 치료에 유용한 은행잎 추출물{Ginkgo biloba extract for the treatment of dermatological disease}

본 발명은 피부질환 치료에 유용한 은행잎 추출물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 은행잎 추출물 및 이로부터 분리된 바이플라보노이드가 표피 증식 억제 효과가 우수함을 확인함으로써, 건선 등의 피부질환 예방 및 치료에 유용한 은행잎 추출물을 함유하는 약제에 관한 것이다.

건선은 피부표면이 은백색의 인설로 덮여있고 주위피부와 경계가 뚜렷하며, 다양한 크기의 붉은 반점상의 딱지가 생겨 점차 크기가 커져 가는 피부질환으로서,

우리 몸 중에서 팔꿈치, 무릎, 엉덩이, 머리의 피부에 가장 잘 생기며, 손이나 발바닥에도 간혹 생긴다. 이러한 피부 부위는 살아가면서 자극을 많이 받는 부위로서, 성별에 관계없이 발생하며 가장 초기 발병율이 높은 연령층은 20대 초반이다.

건선은 유전적인 원인과 환경적인 요인 등 복합적으로 작용하여 발생하는데,그 원인이 아직 확실히 밝혀지지 않았으나, 호르몬의 변화, 스트레스, 외상, 편도 선염과 같은 감염, 기후, 건조한 피부, 약물, 유전 등으로 그 발병소인이 다양하다. 건선은 이러한 요인들로 인하여 피부세포가 정상세포보다 6~7배 빠르게 증식하기 때문에 생겨나며, 이렇게 과다하면서도 불완전하게 증식된 각질 세포가 하얀 인설의 비늘로 겹겹이 쌓여 떨어져 나가게 된다.

건선은 진행성이면서 만성인 질환으로 재발이 잘되며, 한번 발병되면 완치가 어렵다.

이러한 건선 등의 만성피부병으로 인하여 많은 사람들이 고통스러워하고 있지만, 특효의 적절한 치료제가 없어 현재까지는 질병의 경감만을 목표로 치료하는 실정이다. 그러므로 상기 질환을 위하여 새로운 기전의 약물 개발이 필수적이다. 그러나, 현재까지는 상기 질환의 원인 물질이나 핵심적인 발명 원인 등이 구명되지 않아 최적의 치료제 개발이 성공될 수 없었다. 그러나, 최근 임상에서 이들 환자들에 있어서 병변이 있는 피부의 조직학을 통해 관찰한 결과는 호산구(eosinophil), 비만 세포(mast cell) 및 호중구(neutrophil) 등의 세포들의 침윤(infiltration) 외에도, 표피가 비정상적으로 증식한다는 것(epidermal hyperplasia, epidermal hyperproliferation)을 알았고, 이의 원인은 케라틴 6과 같은 표피 분화(epidermal differentiation) 및 표피의 증식에 관여하는 유전자들의 비정상적인 발현이 중심적으로 관련이 있다는 것이 보고되었다[Sugiura 등, Br. J. Dermatol. 152, 146-149, 2005). 이러한 표피 증식이 상기 질환의 중요한 팩터이므로, 표피 증식을 억제하는 물질은 건선 등의 피부 질환 치료제로 사용될 수 있다.

하지만, 아직까지 표피 증식을 억제하는 물질이 많이 밝혀진 바 없고, 있더라고 화학 물질로서 다른 부작용이 동반되어 장기간 사용하기에는 어려움이 있어 천연물 추출물이 효과적인 치료제가 될 수 있다.

한편, 본 발명에서 사용하는 생약인 은행잎(백과엽)은 은행나무(Ginkgo biloba L.)의 잎으로 매우 다양한 성분을 포함하나 주성분은 플라보노이드 및 이의 배당체, 테르펜(terpene)계 화합물 등이며, 이들 성분이 다양한 생리 활성 및 약리 작용을 가지고 있음이 알려져 현재는 은행잎 플라본 글리코사이드(flavone glycoside)를 말초 혈액순환 개선제로서 제품화하여 시판되고 있다. 또한, 은행잎에 다량 함유된 이소깅제틴(isoginkgetin), 깅제틴(ginkgetin) 등의 바이플라보노이드 성분들도 항염증 작용, 항류마티스 작용, 항암 작용 및 진통작용 등의 생리 활성에 대하여 보고된 바 있다[대한민국 특허등록 제100744호, 제106308호, 제267060호].

이에, 본 발명자들은 피부 질환 치료 약제를 개발하기 위하여 연구한 결과, 은행잎 추출물이 표피 증식 억제 효과가 우수함을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 은행잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 표피 증식에 의한 질환 예방 및 치료용 약제를 제공하는 데 그 목적이 있다.

본 발명은 은행잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 표피 증식에 의한 질환 예방 및 치료용 약제를 그 특징으로 한다.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 은행잎 추출물 및 이로부터 분리된 바이플라보노이드가 표피 증식 억제 효과가 우수함을 확인함으로써, 건선 등의 피부질환 예방 및 치료에 유용한 은행잎 추출물을 함유하는 약제에 관한 것이다.

본 발명에 따른 은행잎 추출물의 제조과정을 간략히 설명하면,

1) 은행잎 생약을 물 또는 알콜 수용액으로 용매 추출한 후 여과하고, 다시 잔사에 상기 혼합생약 중량의 7 ∼ 12배의 물 또는 알콜 수용액을 가하고 공비 농축하여 추출물을 수득하는 단계;

2) 상기 1)에서 얻어진 여액을 동량의 저급 알콜 또는 비극성 용매로 층분리한 후, 농축하는 단계; 및

3) 상기 2)의 농축물을 노말 헥산으로 세척한 후 여과하여 진공 건조하는 단계를 포함하여 이루어진다.

이를 상세히 설명하면, 은행잎 원생약에 물 또는 알콜 수용액을 가하고 2 ∼ 4회 용매 추출하는데, 이때 물 또는 알콜 수용액의 사용량은 상기 생약원료 중량의 10 ∼ 15배가 적당하다. 그 다음 여과하여 감압 농축하여 다시 생약원료 중량의 7 ∼ 12배의 물을 가하여 공비 농축하여 추출물을 얻는다. 여기서 물의 양이 너무 적으면 교반이 어렵게 되고 추출물의 용해도가 낮아져 추출효율이 떨어지 게 되고, 지나치게 많은 경우는 다음 정제단계에서 사용되는 저급 알콜 및 비극성용매의 사용량이 많아져 경제적이지 못하여 취급상 문제가 발생할 수 있다. 상기 추출물 중량 대비 2 ~ 3배량의 증류수에 추출물을 완전히 현탁시킨다.

상기 현탁액에는 불필요한 단백질, 다당류 및 지방산 등의 불순물을 정제하는데, 본 발명에서는 여액과 동량의 저급 알콜 또는 비극성 용매로 2 ∼ 4회 층 분리를 실시하여 용매 분획을 얻음으로써 불순물을 정제한다. 이때 저급 알콜로는 탄소수 1 내지 6개의 알콜이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 부틸알콜, 프로필알콜 또는 이소프로필알콜을 사용하며, 비극성용매는 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 사염화탄소 및 메틸에틸케톤을 사용하는데, 저급 알콜 또는 비극성용매의 사용량이 여액에 비하여 적을 경우에는 지방산 등의 불필요한 성분들에 의한 미립자가 형성되어 층 분리가 원활하지 못할 뿐만 아니라 유효활성성분의 추출 함량이 낮아지게 되므로 효율적이지 못하다.

층 분리 후 얻어진 저급 알콜 또는 비극성용매 분획을 농축하여 이를 NaCl 함유 증류수로 세척한다. 이렇게 얻어진 분획물에 노말 헥산을 가하여 여과 후 진공 건조하여 은행잎 추출물을 수득한다.

은행잎 바이플라보노이드를 얻기위하여 상기 노란은행잎 저급알콜 또는 비극성 용매 분획층을 완전 농축한 다음 메탄올:클로로포름 혼합액(1.5:98.5)에서 혼합비율을 3:97로 극성을 높이면서 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 은행잎 바이플라보노이드인 징게틴 및 이소징게틴 혼합 분말을 획득한다.

이렇게 얻어진 은행잎 추출물 및 바이플라보노이드는 표피 증식 억제 작용 등이 우수하므로 건선 등과 같은 피부 질환의 예방 및 치료제로 매우 유용하리라 기대된다.

본 발명에 따른 은행잎 추출물을 함유하여 통상의 제조방법으로 제형화하여 정제, 캅셀제, 주사제 등을 제조하는데, 이들 중 정제 제조시 기제로 사용되는 락토오스, 미세결정 셀룰로오스, 스테아린산 마그네슘 등을 합한 것과 상기 추출물을 2 : 1의 비율로 사용하면 피부질환의 예방 및 치료에 활성을 갖는 정제를 제조할 수 있다.

이러한 의약물의 제조시에는 생약 추출물 그 자체로도 사용할 수 있지만, 약학적으로 허용되는 담체(carrier), 부형제(forming agent), 희석제(diluent) 등과 혼합하여 분말, 과립, 캡슐 또는 주사제 등으로도 제조가 가능하다. 또한, 본 발명에 따른 은행잎 추출물은 예로부터 식용 및 약용으로 사용되어온 것으로 그 투여용량에 특별한 제약은 없고, 체내 흡수도, 체중, 환자의 연령, 성별, 건강상태 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. 일반적으로 은행잎 추출물은 체중 1 ㎏당 0.1 ∼ 10 ㎎ 정도를 투여하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 유효성분을 포함하는 추출물은 유효량 범위를 고려하여 제조하도록 하며, 이렇게 제형화된 단위투여형 제제는 필요에 따라 약제의 투여를 감시하거나 관찰하는 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나 일정시간 간격으로 수회 투여할 수 있다.

이하, 본 발명은 다음 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는바, 본 발 명이 이에 한정되는 것은 아니다.

제조예 1 : 은행잎 추출물의 제조

건조한 노란 은행잎 6 kg을 메탄올에 넣고 2 ~ 4 회 용매 추출한 후 여과하여 감압 농축하며 다시 일정량의 증류수를 넣어 공비 농축을 하여 추출액 내의 메탄올을 완전 제거하여 메탄올 추출물을 얻었다. 위 추출물 중량 대비 약 2 ~ 3 배량(v/w) 정도의 증류수로 추출물을 완전히 현탁시켰다. 동량의 에틸 아세테이트(Ethyl acetate)를 넣어 약 20 ∼ 60 분간 30 ∼ 80 rpm 정도로 교반하고 정체시켜, 층을 분리한 뒤 에틸아세테이트 분획물을 얻었다. 에틸아세테이트로 2 ~ 3 회 재분획한 후 얻어진 에틸아세테이트 분획물을 합하여 농축한 후 이를 동량의 0.5 ~ 2% NaCl 함유 증류수로 3회 세척하였다. 에틸아세테이트 분획물에 2 ~ 5 배량(v/v)의 노말 헥산을 교반하면서 서서히 넣어 주었다. 오버나이트(Overnight)한 후 생성된 침전 분획물을 노말 헥산으로 세척하면서 여과한 다음, 진공 건조하고 분쇄하여 은행잎 추출물을 18 g 얻었다.

제조예 2: 바이플라보노이드 제조

상기 제조과정 중 노란은행잎 에틸아세테이트 분획물을 완전 농축하였다. 분획물 72 g을 정제수 1L에 현탁시킨 후 1L 페트롤리움 에테르로 2회 탈지하였다. 이때 생성되는 중간층(24 g)만을 농축하여 농축물을 만들었다. 실리카겔 300 g을 클로로포름상에서 유리 컬럼에 충진하였다. 실리카겔(30 g)에 위 농축물 10 g을 흡착시켜 로딩한 다음, 컬럼에 1.5% 메탄올/클로로포름 용액(2.5L)을 흘려 불필요한 성분을 제거하였다. 다시 3% 메탄올/클로로포름 용액(2.5L)로 필요한 성분을 용출시켰다. 이 분획물을 완전 농축한 후 진공 건조하여 최종 징게틴 및 이소징게틴 혼합 분말(0.5 g, 함량 92% 이상)을 얻었다.

실시예 1: 표피 증식 억제 시험

상기 제조예 1에 의해 제조된 은행잎 추출물 및 제조예 2의 바이플라보노이드의 표피 증식 억제 활성을 평가하기 위해 다음의 방법으로 실시하였으며, 그 결과는 다음 표 1에 나타낸 바와 같다.

[실험방법]

(1) TPA 투여 동물 모델

SPF ICR 마우스(웅성, 18 ~ 22 g)는 (주)오리엔트에서 구입하였다. 각 그룹당 5마리로 하고, TPA 1 ㎍/ear를 귀에 발랐다(1일째). 그 후 1시간과 12시간 후에 각각의 시료들을 귀에 발랐다.

(2) 조직학 샘플 제조

파라필름(parafilm) 처리 및 H&E(Haematoxylin & Eosin) 염색의 표준법을 사용하여 샘을을 제조하고, 슬라이드를 현미경 하에서 마이크로미터로 표피세포(epidermis)의 두께를 측정하였다. 각 그룹당 3개의 슬라이드에서 무작위로 지정한 위치 각 5개씩의 평균값을 구하였다. 이와 병행하여 각질형성세포(keratinocyte) 층의 개수를 기록하였고, 그 결과는 다음 표 1에 나타내었다.

구분	투여량(㎍/ear)	표피세포 두께(MM)a	각질형성세포 층 수
무처리	-	0.01±0.01	1~2
7일-TPA	-	0.07±0.01	>6
은행잎 추출물	20	0.06±0.02	5~6
	80	0.04±0.01*	3~4
바이플라보노이드	20	-	4~5
	80	-	2~3
양성대조군 (prednisolon)	10	0.03±0.00*	2~3
a: 평균±표준편차(n=15); *: P<0.05, 7일-TPA 처리군과는 유의적으로 다름.

상기 표 1에서 보는 바와 같이, 은행잎 추출물 및 바이플라보노이드는 유의적으로 TPA에 의한 표피증식을 억제하였다.

실시예 2: 랫트에 대한 경구투여 급성 독성실험

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성 독성실험을 다음과 같이 실시하였다.

군당 2 마리씩의 동물에 제조예 1에 의해 제조된 은행잎 추출물 및 제조예 2의 바이플라보노이드 각각을 용해시켜 1 g/kg/㎖의 용량으로 단회 경구 투여하였다. 시험물질 투여 후 동물의 폐사 여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다. 그 결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 따라서, 본 발명에 따른 은행잎 추출물 및 바이플라보노이드는 모든 랫트에서 2,000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않으며, 경구 투여 최소 치사량(LD₅₀)은 2,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

제제예 1: 정제의 제조

본 발명의 은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드를 이용하여 다음과 같은 조성으로 경구투여용 정제를 습식과립법 및 건식과립법을 이용하여 제조하였다.

[조성]

은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드 200 mg, 경질 무수규산 10 mg, 스테아린산 마그네슘 2 mg, 미세결정 셀룰로오즈 50 mg, 전분 글리콜산 나트륨 25 mg, 옥수수 전분 113 mg, 무수에탄올 적량.

제제예 2: 연고제의 제조

본 발명의 은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드를 이용하여 다음과 같은 조성으로 연고제를 제조하였다.

[조성]

은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드 5 g, 세틸팔미테이트 20 g, 세탄올 40 g, 스테아릴알콜 40 g, 미리스탄이소프로필 80 g, 모노스테아린산 소르비탄 20 g, 폴리솔베이트 60 g, 파라옥시안식향산 프로필 1 g, 파라옥시안식향산 메틸 1 g, 인산 및 정제수 적량

제제예 3: 주사제의 제조

본 발명의 은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드를 이용하여 다음과 같은 조성으로 주사제를 제조하였다.

[조성]

은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드 100 mg, 만니톨 180 mg, 인산일수소나트륨 25 mg, 주사용 물 2974 mg

제제예 4: 경피제의 제조

본 발명의 은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드를 이용하여 다음과 같은 방법으로 경피제를 제조하였다.

[조성 1]

은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드 0.4 g, 폴리아크릴산 나트륨 1.3 g, 글리세린 3.6 g, 수산화 알루미늄 0.04 g, 메틸 파라벤 0.2 g, 물 14 g.

[조성 2]

은행잎 추출물 또는 바이플라보노이드 0.8 g, 프로필렌 글리콜 1.6 g, 유동 파라핀 0.8 g, 미리스틴산 이소프로필 0.4 g, 젤바 1430 16.4 g.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 은행잎 추출물 및 바이플라보노 이드가 표피 증식 억제 작용에 우수하므로 피부 질환, 즉 건선 등의 예방 및 치료에 매우 유용하리라 기대된다.

Claims (3)

1. 은행잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 표피 증식에 의한 질환 예방 및 치료용 약제.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 피부 표피 증식에 의한 질환이 건선인 것을 특징으로 하는 약제.
3. 제 1 항에 있어서, 상기 은행잎 추출물에는 바이플라보노이드가 함유된 것임을 특징으로 하는 약제.