KR20070036158A

KR20070036158A - 알츠하이머병을 예방하거나 치료하기 위한 복합 치료법 및이를 위한 키트

Info

Publication number: KR20070036158A
Application number: KR1020077002208A
Authority: KR
Inventors: 프랑크 마트너; 발터 슈미트
Original assignee: 아피리스 포르슝즈- 운트 엔트비클룽스 게엠베하
Priority date: 2004-07-13
Filing date: 2005-07-06
Publication date: 2007-04-02
Also published as: JP2008506665A; AT500483A4; AU2005261687B2; ES2414872T8; PT1765388E; JP5642333B2; US7935348B2; AU2005261687A1; WO2006005706A3; CA2577332A1; US20080051690A1; AT500483B1; EP1765388B1; TW200602072A; JP2013116903A; CA2577332C; WO2006005706A8; US20110201987A1; ES2414872T3; CN101022825B

Abstract

본 발명은 알츠하이머병(AE)을 예방하거나 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법에 따라, 아밀로이드 β (Aβ)를 혈장으로 격리시키는 수단을 사람에 투여하고, 사람을, 혈액 또는 혈장 유동물과 접촉할 수 있으며 아밀로이드-β-전구 단백질 (APP)에 결합하는 수용체를 포함하는 고정된 담체를 포함하는 분리반출 장치에 의해 처리하고, 상기 APP는 분리반출 장치에 의해 사람의 혈액으로부터 제거된다. 본 발명은 또한, 이러한 방법을 수행하기 위한 세트에 관한 것이다.

Description

알츠하이머병을 예방하거나 치료하기 위한 복합 치료법 및 이를 위한 키트 {COMBINATION THERAPY FOR PREVENTING OR TREATING ALZHEIMER'S DISEASE, AND KIT THEREFOR}

본 발명은 알츠하이머 질환(AD)을 예방하고 치료하기 위한 복합 치료법 및 이러한 복합 치료법을 수행하기 위한 키트에 관한 것이다.

아밀로이드-β 펩티드(Aβ)는 알츠하이머 질환의 신경병리에 중추적인 역학을 한다[참조: Roher et al 1993: "β-Amyloid-(1-42) is a major component of cerebrovascular amyloid deposits: Implications for the pathology of Alzheimer disease" PANS 90: 10836]. 상기 질환의 가족형은 아밀로이드 전구 단백질 (APP) 및 프레세닐린 유전자에서 돌연변이와 관련된다. 이러한 유전자에서의 질환 연관된 돌연변이는 상기 펩티드의 42-아미노산형(Aβ42)의 생성 증가를 초래하는 데, 이러한 아미노산형은 알츠하이머 질환의 아밀로이드 플라크에서 발견되는 가장 우세한 형태이다. 상기 질환에 대한 동물 모델은 구입할 수 있다. 돌연변이 사람 APP(여기서, 717 위치에서 아미노산이 V 대신 F임)를 과발현시키는 PDAPP 유전자이식 마우스는 연령 및 뇌 의존적 방식으로 알츠하이머 질환의 다수의 신경병리학적 홀마크(hallmark)를 점진적으로 발전시켰다[참조: Games et al 1995: "Alzheimer-type neuropathology in transgenic mice overexpressing V717F β-amyloid precursor protein" Nature 373:523].

미모토프(mimotope) 기재 백신이 아닌 "정상"에 의한 백신화 연구는 이미 수행되었다. 유전자이식 동물이 AD 타입 신경병리 상태의 발병 (6주) 이전에 또는 보다 높은 연령(11개월)에서 응집화된 Aβ42로 면역화되었다; 어린 동물의 면역화는 플라크 형성, 신경염 위축 및 성상교세포증의 진행을 억제하였다. 보다 높은 연령의 동물의 치료에서는 AD 형 신경병리상태를 현저히 감소시켰다. 이러한 실험적 백신화 방법이 혈액-뇌 장벽을 통과할 수 있고, 아밀로이드 플라크를 공격할 수 있는 Aβ42에 대한 항체의 개발을 유도하였다[참조: Schenk et al 1999:" Immunization with amyloid-β attenuates Alzheimer-disease-like pathology in the PD-APP mouse" Nature 400:173]. 상기 플라크는 이후 Fc 수용체 매개된 식세포작용을 포함하는 다수의 메카니즘에 의해 제거된다[참조; Bard et al 2000: "Peripherally administered antibodies against amyloid β-peptide enter the central nervous system and reduce pathology in a mouse model of Alzheimer disease" Nature Med 6: 916]. 또한, 이러한 백신은 기억력 결핍을 지연시킬 수 있다[참조: Janus et al 2000: "Aβ peptide immunization reduces behavioural impairment and plaques in a model of Alzheimer's disease" Nature 408:979].

AD에 대한 가장 유망한 면역화 치료법이 1999년 말부터 임상 시험이 이루어져왔다. 면역화는 근간이 되는 정확한 메카니즘이 보다 자세히 특징화될 필요가 있기는 하나, 면역 시스템이 플라크를 공격하여 영향을 받고 있는 사람의 뇌로부터 이러한 침착물을 제거하도록 하는 것으로 추정된다.

상기 임상 실험은 제약 회사인 엘란(Elan)과 협력 업체인 어메리칸 홈 프로 덕츠(American Home Products)(치료 백신 AN-1792, 애주번트로서 QS21)에 의해 수행되었다. 제 II 단계 실험은 2001년 말에 시작되어 경도에서 중등도 수준의 AD를 앓고 있는 환자 패널에서의 효능을 시험하였다.

이제 이러한 제 II 단계 시험은, 여러 환자들의 뇌의 염증반응(neuroinflammation)으로 인해 완전히 중단되었다[참조: Editorial 2002 "Insoluble problem?" Nature Med 8:191]. 이러한 증상에는 전세계적 실험의 즉각적인 중단을 이끄는 무균성 수막뇌염을 포함한다. 최악 시나리오의 경우, 감염된 환자들은 많은 면역치료법에서 고유의 위험인 자가면역 반응이 안착된 것으로 나타날 것이다. 자가면역질환 합병증은 제시된 APP의 편재성으로 예측할 수 있으며, 이것이 단백질분해적 생성물과 공통적으로 항원성 결정인자를 지님은 물론이다. 보다 최근에, 응집된 Aβ42 면역화 유도된 항체(사람 및 마우스에서)의 특성에 대해 추가 연구가 집중되는 데, 이는 대부분의 항체가 Aβ42의 아미노산 4와 10(Aβ4-10) 사이의 작은 도메인을 인식한다는 것을 밝히고 있다. 마우스 항체는 Aβ원섬유형성(fibrillogenesis)을 블록킹할 수 있으며, 이미 존재하는 Aβ 섬유를 분열시킨다[참조: McLaurin et al 2002: "Therapeutically effective antibodies against amyloid-β peptide target amyloid-β residues 4-10 and inhibit cytotoxicity and fibrillogenesis" Nature Med 8":1263]. 상기 사람 항체는 세포의 표면에 노출된 APP 또는 상기 전구의 임의의 다른 비응집된 단백질 분해 생성물과 반응하지 않는다[참조: Hock et al 2002: "Generation of antibodies specific for β-amyloid by vaccination of patients with Alzheimer disease" Nature Med 8: 1270]. 사람과 마우스 혈청 간에는 분명한 차이가 관찰되었다: 사람 항체와 대조적으로, 마우스 항체는 모노머성, 올리고머성, 및 섬유성 Aβ를 검출한다. 이는 사람 안티-Aβ에 의해 인식되지 않은 Aβ의 작은 올리고머가 질병에 있어서 주요한 독성 역할체라는 증거가 증대되고 있기 때문에 중요하며, 치료적 효능에 대한 전제 조건일 수 있다[참조: Walsh et al 2002: "Naturally secreted oligomers of amyloid β protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo" Nature 416:535]. 따라서, 유효한 새로운 전략은 β-아밀로이드 아미노산 4-10(응집된 Aβ42 대신에)을 함유하는 백신으로 면역화하는 것이다. 미공지된 효능에도 불구하고, 이러한 전략은 또한 환자가 (선형 B 세포) "자기(self)" 에피토프에 의해 직접적으로 면역화되어야 하기 때문에 자가면역 문제에 직면할 수 있다.

최근 AD 백신화 전략에서의 이러한 기대에 어긋나는 개발에도 불구하고, Aβ 백신은 여전히 AD를 구제하는 가장 유망한 방식으로서 간주된다. 그러나, AD 백신화에서의 개선 및 새로운 전략이 시급하다. 특히, 이러한 백신은 자가반응성 T 및/또는 B 세포를 유도하지 않아야 한다.

그럼에도 불구하고, 아밀로이드-β 생성, 아밀로이드-β-응집 또는 이러한 응집에 의해 촉발된 신경독소 경우를 예방해야 하는 더 많은 다른 치료제가 개발중에 있다. 지금까지 조사된 AD에 대한 치료 요법은 울페(Wolfe)의 개관 (Nature Review Drug Discovery 1: 2002 859-866)에 요약되어 있다.

아밀로이드-β 플라크 형성을 위한 주성분은 소위 아밀로이드-β 전구 단백질 (APP)이며, 이는 내재성 트랜스멤브레인 단백질이다 (이에 대한 공지된 생리학 적 작용에 대해서는 명백하게 입증되지 않았다; 그러나, 대부분의 최근 연구는 APP가 소위 키네신 I에 대한 멤브레인 수송 수용체로서 작용함을 시사한다). APP는 소위 세크레타아제로 단백질분해에 의해 절단되며, 여기서 특히 40개 아미노산 길이의 Aβ 펩티드 (Aβ40)가 생리학적으로 형성된다. 기타 더 짧고 더 긴 형태의 Aβ 특히, 높은 응집력을 갖는 42-아미노산 버젼 (Aβ42) 또한, 발생된다. 결론적으로, 상기 Aβ42 형태는 대부분의 아밀로이드 플라크에서 발생하는 형태이다. 이는 AD에 대한 한 가능한 치료법이 주로 상기 상이한 절단을 유도하는 세크레타아제 (α- 및 특히, β- 및 ν-세크레타아제)를 공격하는데 주로 촛점을 맞추는 이유이다. 이와 같이, AD 치료에서 상기 효소에 대한 조절제 및 억제제 (예컨대, 벤조디아제핀, 설폰아미드, 벤조카프롤락탐)를 각각 사용하고자 시도되었다.

AD와 관련된 추가의 유전자는 아포리포단백질 E이며, 여기서 세개의 대립유전자 변이체가 존재한다 (APOE2, APOE3 및 APOE4). 하나 또는 두개의 APOE4 복사제를 갖는 사람이 전체 군집과 비교할 경우, APOE2의 담체를 갖는 사람보다 AD에 걸릴 위험성이 더 크다는 것은 공지되어 있다. 스타틴 즉, 콜레스테롤 생합성을 억제하는 약제를 섭취한 사람이 AD에 걸릴 위험성이 현저하게 낮아진다는 것 또한 공지되어 있다. 이는 AD에 대한 추가의 치료 요법이 예를 들어, 스타틴으로 콜레스테롤 생합성을 억제하는데 촛점을 맞추는 이유이다.

AD 치료의 추가의 양태는 세크레타아제 억제제에 의해 또한 실현될 수 있는 대뇌 플라크에서의 아밀로이드 응집 억제이다. 또한, 아연이 생리학적 관련 농도로 존재하는 경우, Aβ의 응집을 유도할 수 있기 때문에 아연 함량을 감소시킬 것 이 제안되었다.

종래에 제안된 AD에 대한 추가의 치료법은 APP 발현의 억제 및 Aβ 제거의 증가에 관한 것이며, 여기서 상기 억제를 위해 APP 프로모터 영역과 상호작용하는 물질에 대해 조사되었다. Aβ 제거에 있어서, 특정 프로테아제 예컨대, 인슐린-분해 효소 및 네프로리신의 활성 증가, 또는 항-Aβ 항체의 말초 적용이 제시되었다 (De Mattos et al., PNAS 98 (15) (2001), 8850-8855). 그러나, 이러한 시험은 마우스 모델에서 모순된 결과를 초래하였다 (Wolfe, (2002)). 최종적으로, 예를 들어, AD 환자의 혈청에서 아밀로이드-β 수준을 감소시킴으로써 이미 존재하는 아밀로이드 플라크를 재분리시키는 것이 시도되었다. 이와 관련하여, AD에서는 입증되지 않았지만 분리반출 방법을 사용하여 뇌에서 β-아밀로이드 단백질의 플라크 증착을 감소시키는 것이 제안되었다 (US 6,551,266, 여기서, 분리반출에 의해 500kD 초과의 분자량을 거대분자를 제거할 것이 제안됨). 그럼에도 불구하고, 뇌 세포에서 이미 존재하는 플라크의 분리는 분리반출 방법에 의해 직접적으로 가능하지 않았다 (500kd를 초과하는 플라크 또는 분자는 혈액/뇌 배리어를 통과할 수 없다).

상기 언급된 바와 같이, β-아밀로이드 (Aβ40 및 Aβ42) 플라크의 존재는 AD의 가장 두드러진 병리학적 특성에 해당한다. 이는 Aβ의 감소가 AD 예방 및 치료에서 주된 약제학적 목적으로서 간주되는 이유이다. 활성 면역화에 의해 항-Aβ 항체를 유도함으로써 상기 기술된 아밀로이드를 제거한다 하더라도, 치료 중단을 초래하는 여러 부작용으로 인해 상기 면역화에서의 임상 실험이 지금까지 실패하였다. 더욱 최근의 전임상 결과는 항체가 또한, Aβ의 말초 감소를 유도할 수 있으 며, 따라서 Aβ 말초 뇌 동태를 가능하게는, 변화시킬 수 있음을 보여주었다.

또한, Aβ에 대한 높은 친화도를 갖는 제제 (예컨대, 겔솔린 또는 GM1)로의 말초 처리는 뇌에서 Aβ 양의 감소를 초래한다 (Masouka et al., Journal of Neuroscience 2003:29-33). 따라서, 혈장에서 Aβ 함량을 감소시킬 수 있으며, 뇌에서 아밀로이드를 감소시키거나 억제할 수 있는 화합물이 일반적인 방법으로서 제안되었다. 여기에 근거하여, 혈액/뇌 배리어를 통과하는 것에 좌우되지 않는 활성을 갖는 신규한 치료제가 개발될 수 있다.

혈장에서 Aβ 함량에 대한 방법 의존적 효과는 뇌로부터의 상기 혈장-Aβ-격리-유도된 Aβ 유출물에 대해 입증되었다: 혈장에서의 Aβ 함량은 겔솔린에 의해 감소되지 않는다; 대신, 겔솔린의 투여 및 항-Aβ 모노클로날 항체로의 수동적 면역화는 혈장에서 증가된 Aβ 함량을 유도한다. 그러나, 뇌에서 Aβ 부하는 실험에서 단지 상대적으로 어린 APP 형질전환 마우스를 사용할 경우에만 감소되었으며; 6개월을 초과한 마우스를 사용할 경우, 이러한 처리는 효과적이지 않은 것으로 드러났다. 이는 더 늙은 마우스 뇌에서 Aβ의 증가된 불용해성으로 기인한 것일 수 있다. 다른 한편으로, 더 오랜 기간의 처리는 가능하게는 성공적일 수 있으나, 겔솔린 또는 GM1의 투여 또는 수동 면역화 어느 것도 장기간 투여에 적합하지 않다.

따라서, 본 발명의 목적은 특히, 성공적인 면역화에 기초한 알츠하이머의 신규한 치료법 및 예방법을 제공하는 것이다.

따라서, 본 발명은 Aβ-유출물-유도제 및 Aβ-펩티드-특이적 분리반출을 포함하는 복합 치료법을 제공한다. 본 발명에 있어서, Aβ 유출물이 (제제 예컨대, 겔솔린, GM1, Aβ-특이적 활성 또는 수동 백신에 의해) 유도되고, 이러한 유출물은 Aβ 분리반출에 의해 유지된다. 이와 관련하여, 심지어 Aβ, Aβ 유도체 또는 Aβ 미모토프를 함유하는 백신으로의 1회 또는 2회 처리된 활성 면역화도 혈장 Aβ의 IgM 및/또는 IgG-매개된 격리를 유도하는데 충분하다.

이는 본 발명의 양태가 특히 우선적으로,

- 혈장에서 아밀로이드 β(Aβ)의 격리를 유도하는 제제, 및

- 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있으며, 아밀로이드-β-전구 단백질 (APP)에 결합하는 수용체를 갖는 고체 담체를 포함하는 분리반출 장치를 포함하는, 알츠하이머 질환 (AD)을 예방하거나 치료하는 키트에 대한 것인 이유이다.

본 발명의 키트에서, APP-결합 수용체는 바람직하게는, 항-APP 항체, (가용성) Aβ-결합 수용체 예컨대, 항-Aβ40 항체 또는 항-Aβ42 항체, APP-결합 단백질 특히, 겔솔린, apoJ 또는 apoE, APP-결합 펩티드, APP-결합 갱글리오사이드, 특히 GM1, 또는 APP-결합 핵산 특히, 압타머, 또는 이러한 수용체의 혼합물로부터 선택된다.

키트에서, 멸균된 발열물질 비함유 칼럼이 바람직하게는, 분리반출 담체로서 사용된다.

키트에서, 혈장중의 아밀로이드 β(Aβ)의 격리를 유도하는 제제는 바람직하게는, Aβ에 대한 높은 친화도를 갖는 제제 특히, 겔솔린 또는 GM1, Aβ-특이적 펩티드 리간드 또는 핵산 리간드, Aβ-특이적 활성 또는 수동 백신 또는 Aβ-특이적 사람화된 모노클로날 항체로부터 선택된다.

Aβ-특이적 활성 백신은 바람직하게는, Aβ 유도체 또는 Aβ 미모토프이다.

특히 바람직한 Aβ 유도체는 D-아미노산으로 부분적으로 또는 전체적으로 이루어지고/거나 천연 아미노산으로 구성되지 않은 펩티드로부터 선택된다.

Aβ 미모토프는 바람직하게는 하기 식의 펩티드로 이루어지거나 포함하며, 이러한 펩티드는 천연 N-말단 Aβ42 서열 DAEFRH에 대해 특이적인 항체에 대해 결합능력을 지니며, 상기 펩티드의 5량체는 천연 N-말단 Aβ42 서열 DAEFRH에 대해 특이적인 상기 항체에 대한 결합능력을 가진다:

X₁X₂X₃X₄X₅X₆

여기서, X₁은 C를 제외한 아미노산이고,

X₂는 C를 제외한 아미노산이고,

X₃는 C를 제외한 아미노산이고,

X₄는 C를 제외한 아미노산이고,

X₅는 C를 제외한 아미노산이고,

X₆은 C를 제외한 아미노산이며,

단, X₁X₂X₃X₄X₅X₆는 DAEFRH가 아니다.

특히, X1은 G 이거나, 히드록시기를 지닌 아미노산 또는 음 하전된 아미노산, 바람직하게는, E, Y, S 또는 D이고,

X2는 소수성 아미노산, 또는 양 하전된 아미노산, 바람직하게는, I, L, V, K, W, R, Y, F 또는 A이고,

X3은 음 하전된 아미노산, 바람직하게는, D 또는 E이고,

X4는 방향족 아미노산 또는 L, 바람직하게는, Y, F 또는 L이고,

X5는 H, K, Y, F 또는 R, 바람직하게는, H, F 또는 R이고,

X6은 S, T, N, Q, D, E, R, I, K, Y 또는 G 이거나, 바람직하게는, T, N, D, R, I 또는 G인 식 X1X2X3X4X5X6의 펩티드가 바람직하다.

이와 관련하여, 단백질에서 자연적으로 발생하는 20개 아미노산은 화학적 유사체 또는 D-아미노산에 의해 대체될 수 있다: 예를 들어, L, I 및 V는 Nle, Nva, Cha 또는 다른 선형 또는 고리형 지방족 측쇄를 지닌 알파 아미노산에 의해 치환될 수 있으며, W 및 F는 방향족 아미노산에 의해 치환될 수 있고, R 및 K는 오르니틴 또는 호모아르기닌과 같은 알칼리성 아미노산에 의해 치환될 수 있다. 세린 및 트레오닌은 말단 OH기를 지닌 지방족 및/또는 방향족 측쇄를 갖는 아미노산에 의한 치환에 적합하다. 이러한 치환의 효율 및 효과는 예를 들어, PCT/EP04/00162에 기술된 실험 모델로 용이하게 체크될 수 있다. 또한, 항체를 펩티드에 결합시키는데 있어서 입체적 사항이 (컴퓨터 모델의 도움으로) 고려될 수 있다.

특히 적합한 에피토프는 하기 에피토프중 하나 이상으로부터 선택된다: EIDYHR, ELDYHR, EVDYHR, DIDYHR, DLDYHR, DVDYHR, DIDYRR, DLDYRR, DVDYRR, DKELRI, DWELRI, YREFFI, YREFRI, YAEFRG, EAEFRG, DYEFRG, ELEFRG, DRELRI, DKELKI, DRELKI, GREFRN, EYEFRG, DWEFRDA, SWEFRT, DKELR, SFEFRG, DAEFRWP, DNEFRSP, GSEFRDY, GAEFRFT, SAEFRTQ, SAEFRAT, SWEFRNP, SWEFRLY, SWELRQA, SVEFRYH, SYEFRHH, SQEFRTP, SSEFRVS, DWEFRD, DAELRY, DWELRQ, SLEFRF, GPEFRW, GKEFRT, AYEFRH, DKE(NIe)R, DKE (Nva)R 또는 DKE (Cha)R.

본 발명에 따르면, Aβ 미모토프는 AD에 대한 백신화에 사용된다: 미모토프는 Aβ42에 대한 항체의 생성을 유도하지만, 네이티브 APP에 대한 항체의 생성은 유도하지 않는다. 미모토프는 (모노클로날) 항체 및 (시판되는) 펩티드 라이브러리(예를 들어, 문헌 [Reineke et al. 2002: "Identification of distinct antibody epotopes and mimotopes from a peptide array of 5520 randomly generated sequences" J Immunol Methods 267:37]에 따름)로 확인될 수 있다. APP는 인식하지 않으나 아미노-말단 아스파르트산을 지닌 상이한 Aβ 종 만 검출하는 (모노클로날) 항체가 사용된다 (이러한 항체의 예는 문헌 [Johnson-Wood et al 1997: "Amyloid precursor protein processing and Aβ42 deposition in a transgenic mouse model of Alzheimer disease" PNAS 94:1550]에 기술됨). 이러한 항체는, 본 발명의 과정에서 백신에 적합한 미모토프를 확인하기 위한 이상적인 도구인 것으로 입증되었다. 이러한 모노클로날 항체가 마우스에 직접 투여되는 경우 AD 마우스 모델에 있어서 유리한 효과를 갖는 것으로 나타났지만(Bard et al 2000: "Peripherally administered antibodies against amyloid β-peptide enter the central nervous system and reduce pathology in a mouse model of Alzheimer disease" Nature Med 6: 916), 이들 항체를 AD 백신 화합물을 분리하기 위한 미모토프 조사 도구로서 사용하는 것은 결코 제안된 바 없다.

선행 기술에서, 모든 노력은 천연 Aβ 펩티드에 집중되었다. 상기 언급된 바와 같이, Aβ 펩티드 백신 임상 실험은 뇌의 염증반응으로 인해 중단되었다. 실제로, T 세포 에피토프 예측 프로그램(MHC 클래스 I-제한 에피토프에 있어서는 BIMAS 및 MHC 클래스 II-제한 에피토프에 있어서는 TEPITOPE)은 서열내 높은 등급 (자가) 에피토프를 제안한다. 이는, 뇌의 염증반응이 자가면역 반응으로 인한 것임을 내포할 수 있으며, 자가면역 반응은 이러한 백신을 일반적인 적용에 대해 부적합하게 한다.

선행 기술에서 제안된 이러한 Aβ 백신과 대조적으로, 본 발명에 따른 미모토프 확인에 사용된 (모노클로날) 항체는 APP를 인지하지 못하고, 미모토프 서열은 지금까지 실험에 사용되어 왔던, 또는 앞으로의 실험에 사용될 Aβ42 유래된 자가 서열과 상이하기 때문에, 본 발명에 따른 미모토프를 함유하는 백신으로 처리하는 동안에 어떠한 자가 면역 반응도 일어나지 않을 것으로 예상된다.

본 발명에 따른 미모토프 확인에 사용되는 항체는 유리 아미노 말단 아스파르트산을 지닌 Aβ-유래된 아미노산 서열 DAEFRH(= 원래의 에피토프)를 검출하고, 이에 따라 천연 APP를 인식하지 않는다. 이러한 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 제제이거나 임의의 항체 일부 또는 이의 유도체일 수 있으며, 유일한 전제 조건은 항체 분자가 DAEFRH 에피토프를 특이적으로 인식하는 것이다. 즉, 아밀로이드 전구 단백질의 천연 N 말단 연장된 형태에 결합하지 않으며, 이는 DAEFRH 에피토프에 대한 결합 능력이 APP 분자에 대한 것 보다 100배 이상, 보다 바람직하게는 1000배 이상, 더욱 더 바람직하게는 10⁵ 배 이상 높다. 항체는 상기 문헌 (Johnson-Wood et al., 1997)에서 기술된 항체로서 DAEFRF 서열과 동일하거나 보다 높은 결합 능력을 보여주는 항체일 수 있다. 물론, 보다 높은 결합 능력이 더욱 바람직하기는 하지만 보다 낮은 결합 능력을 지닌 항체도 사용될 수 있다(상기 존슨-우드 등의 항체의 결합 능력의 10% 초과, 50% 초과 또는 80% 초과).

본 발명에 따른 화합물은 DAEFRH 서열에 필적하는 특이성을 지닌 이러한 항체에 결합한다.

본 발명에 따라 사용된 미모토프는 바람직한 5 내지 15개의 아미노산 길이를 지닌다. 이러한 화합물은 분리된 (펩티드) 형태로 백신에 제공되거나, 약제학적 담체 물질 또는 폴리펩티드, 지질 또는 탄수화물 구조물과 같이 다른 분자에 결합되거나 착화될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 미모토프는 (최소) 5 내지 15개, 6 내지 12개의 아미노산 잔기, 특히 9 내지 11개의 아미노산 잔기 길이를 갖는다. 그러나, 이러한 미모토프는 비특이적 링커 또는 담체, 특히 펩티드 링커 또는 단백질 담체에 (공유적으로 또는 비공유적으로) 결합될 수 있다. 또한, 상기 펩티드 링커 또는 단백질 담체는 T 세포 헬퍼 에피토프로 구성되거나 이를 함유할 수 있다.

바람직하게는, 약제학적으로 허용되는 담체는 KLH, 파상풍 독소, 알부민-결합 단백질, 우태아 혈청, 덴드리머(MAP; Biol. Chem. 358:581) 뿐만 아니라 문헌(Singh et al., Nat. Biotech. 17(1999), 1075-1081(특히 상기 문헌의 표 1에 기재된 것들), 및 O'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2(9)(2003), 727-735(특히, 내인성 면역증강 화합물 및 여기서 개시된 분배 시스템))에 개시된 애주 번트 물질, 및 이들의 혼합물이다. 추가로, 백신 조성물은 수산화알루미늄을 함유할 수 있다.

본 화합물 (미모토프) 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 백신은 임의의 적합한 투여 형태, 예를 들어, 정맥내, 복강내, 근육내, 비강내, 경구, 피하 등에 의해, 그리고 임의의 적합한 전달 기구로 투여될 수 있다[참조: O'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2(9)(2003), 727-735]. 일반적으로, 백신은 본 발명에 따른 화합물을 0.1ng 내지 10mg, 바람직하게는 10ng 내지 1mg, 특히 100ng 내지 100㎍, 또는 다르게는 예를 들어 100fMol 내지 10μMol, 바람직하게는 10pMol 내지 1μMol, 특히 100pMol 내지 100nMol의 양으로 함유한다. 또한, 백신은 일반적인 애주번트, 예를 들어, 완충제, 안정화제 등을 포함할 수 있다.

본 발명에 따르면, 복합 치료 과정의 개시 후 Aβ 유출물을 유지시키기 위한 분리반출 장치가 제공되며, 여기서 상기 장치는 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있으며 아밀로이드-β-전구 단백질 (APP)-결합 수용체를 포함하는 고체 담체를 포함한다. 본 분리반출 장치로, AD 환자 및 AD에 걸릴 위험이 있는 사람에서 분리반출에 의해 APP 또는 APP 분해 생성물 특히, Aβ40 또는 Aβ42를 특정하게 제거할 수 있으며, Aβ 격리 효과가 제 1 단계에서 유지될 수 있다. 중추신경계 (CNS)와 혈장은 Aβ42의 동적인 균형관계에 있음은 공지되어 있다. 상기 언급된 바와 같이, 항-Aβ 항체의 말초 적용이 CNS 및 혈장 Aβ42 제거에 영향을 끼치며, 혈액/뇌 배리어를 통과하는 항-Aβ 항체 없이 뇌에서 Aβ42의 부하를 감소시킨다는 것이 마우스 모델 (DeMattos PNAS 2001, 상기 참조)에서 입증될 수 있다. 마츠수오카 등 (Matsuoka et al. Journal of neuro-science 2003:29-33)은 기타 Aβ42-결합 분자 (겔솔린 및 GM1)를 말초적으로 적용시킴으로써 상기 결과를 확인하였다. 이렇게 해서, 플라크 발달 과정이 뇌의 매우 우수하게 접근가능한 부위 소위, 혈액에서 방지될 수 있으며, 즉 각각 이러한 단백질 및 분해 펩티드는 뇌로 더이상 유입될 수 없으며, 여기서 응집될 수 없다. 뇌에서 플라크 발달 과정이 또한 혈액중의 Aβ42를 포획함으로써 예방될 수 있다. 이런 방법에 있어서, 환자의 혈액 또는 혈장과 접촉하는 분리반출 장치의 수용체가 Aβ42 또는 또 다른 APP의 분해 형태에 대해 특이적인지는 중요하지 않으며, 단지 중요한 것은 APP 및 이의 (단백질분해) 분해 생성물 특히, Aβ42가 상기 특이적 흡착에 의해 혈액으로부터 제거되며, "나쁜" 단백질 (즉, Aβ42로의) 분해가 발생하지 않고, 플라크가 발달되지 않는다는 것이 중요하다. 결론적으로, 본 발명은 US 6,551,266과 비교하여 완전하게 상이한 분리반출 적용 방법에 기초하고 있으며, 즉 플라크 자체가 아니라 잠재적인 구조적 플라크 요소를 미리 삭제하는 것에 기초하고 있다. 게다가, 분리반출에 의한 플라크 제거는 분리반출에 의해 AD 치료에 효과적이지 않은 것으로서 미리 배제될 수 있는데, 혈액 분리반출은 플라크가 발단되는 뇌 영역에 도달할 수 있기 때문이다.

다른 한편으로, 몸체 자체에서 Aβ의 고갈을 유도하며 (예컨대, 문헌 [DeMattos et al., PNAS 98(15) (2001), 8850-8855 with peripheral anti-Aβ antibodies]) 장기간에 걸쳐 수행되는 기타 방법과 비교하여, 본 발명의 복합 치료법은 어떠한 자가면역 반응도 촉발되지 않는다는 결정적인 이점을 포함한다. 또한, 본 발명에 있어서, 몸체에서만 (가능하게는, 특정 부위로 이송된 후에만) 작용 할 수 있는 어떠한 물질도 환자에 공급되어서는 안되며, 병원성 제제는 선택적으로 제거될 수 있으며 즉, 질환의 원인이 체외 방식으로 특이적으로 제거되며, 몸체의 반응 생성물이 반드시 제거될 필요는 없다.

본 발명에 있어서, 모든 구체예에서 이미 존재하고 공지된 분리반출 장치는 본 발명에 용이하게 적용될 수 있다. 특히, 고체 담체 (및 분리반출 장치)를 선택하는데 있어서, 이의 의학적 적합성이 고려되어야 한다. 이러한 담체, 방법 또는 장치는 US 5,476,715, US 6,036,614, US 5,817,528 또는 US 6,551,266에 기술되어 있다. 상응하는 통상적인 분리반출 장치는 예를 들어, 시스템 LDL-테라소르브®(LDL-Therasorb®), 이뮤노소르바®(Immunsorba®), 프로소르바®(Prosorba®), 글로바핀®(Globafin®), Ig-테라소르브®, 이뮤소르바®(Immusorba®), Li-포소르바®(Li-posorba®), HELP®, DALI®, 빌리루빈-빌-애시드-압소버 BR-350(Bilirubin-Bile-Acid-Absorber BR-350), 프로메테우스®(Prometheus®) 탈독소화, MARS®, 메디캅(Medicap) 또는 플라즈마 FLO(Plasm FLO)의 ADA소브(ADAsorb)를 제공하는 프레제니우스(Fresenius), 플라즈마셀렉트(Plasmaselect), ASAHI, 카네카(Kaneka), 브라운(Braun) 등에 의해 배급된다. 시중에서 구입가능한 모든 이러한 시스템이 단일 단백질의 특이적 제거에 항상 주요하게 관련된 것은 아니지만, 분리반출 분야의 당업자는 이를 예를 들어, 면역 분리반출과 같이 및/또는 본 발명의 고체 담체 (예를 들어, 칼럼으로서)를 분리반출 장치에 장착시킴으로써 본 발명에 용이하게 적용시킬 수 있다.

따라서, 본 발명에 있어서, "APP-결합 수용체"는 리간드 APP 및 이의 생물학 적 부산물에 대한 친화성을 띠며, AD 환자 또는 AD에 걸릴 위험성이 있는 사람의 혈액 또는 혈장으로부터 상기 폴리펩티드를 제거할 수 있는 모든 물질을 나타내는 것으로 이해된다. 상기 APP 및 Aβ42 수용체 각각은 바람직하게는, (폴리 또는 모노클로날) 항체, 단백질, 펩티드, 갱글리오사이드 또는 핵산이다.

항-APP 항체, 항-Aβ40 항체 또는 항-Aβ42 항체, APP-결합 단백질 특히, 겔솔린, apoJ 또는 apoE, APP-결합 펩티드, APP-결합 갱글리오사이드, 특히 GM1 또는 APP-결합 핵산 특히, 압타머 또는 이러한 수용체의 혼합물이 특히 바람직하다.

이러한 항체의 예로는 3D6 (Aβ1-5), 2H3 (Aβ1-12), 2G3 (Aβ33-40), 21F12 (Aβ33-42), 12H7 (Aβ33-42) (Johnson-Wood et al., PNAS 1997:1550-1555), 10D5, 16C11 (Bard et al., Nature Medicine 2000:916-919), 문헌 [DeMattos et al. (2001)]에 기술된 항체 (m266, m243) 및 동일한 특이성을 갖는 항체가 있다. 이러한 항체는 예를 들어, APP, Aβ42 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하는 백신 제형으로 포유동물을 면역화시킨 후, 선택적으로 세포 융합 및 클론 선택 프로토콜 (모노클로날 항체를 이용)에 의해 수득된다.

APP-결합 단백질 수용체에 대한 추가의 예로는 겔솔린 (Matsuoka et al. 2003, 상기 참조), apoJ 및 apoE (DeMattos et al., 2001, 상기 참조)이 있다. GM1은 APP-결합 갱글리오사이드 수용체의 예이다 (Matsuoka et al., 2003, 상기 참조).

이와 관련하여, APP-결합 수용체로서 작용하는 펩티드는 D 또는 L 아미노산 또는 D와 L 아미노산의 조합물로 이루어질 수 있으며, 선택적으로 추가의 변형, 고 리 형성 또는 유도체화에 의해 선택적으로 개질될 수 있다. 예를 들어, Aβ42에 대한 적합한 펩티드 수용체는 시중에서 이용가능한 펩티드 라이브러리로부터 제공될 수 있다. 이러한 펩티드는 바람직하게는 5개 이상, 바람직하게는 6개 이상 특히, 8개 이상의 아미노산 길이를 가지며, 여기서 바람직한 길이는 10개 이하, 바람직하게는 14 또는 20개 이하의 아미노산 길이일 수 있다. 그러나, 본 발명에 있어서, 또한 더욱 긴 펩티드가 어떠한 문제 없이 APP-결합 수용체로서 사용될 수 있다. 게다가, 올리고머 (예컨대, 폴리에틸렌이민 및 폴리리신)는 적합한 수용체이다.

물론, 파아지 라이브러리, 펩티드 라이브러리 (상기 참조) 또는 구조 라이브러리 (예를 들어, 상이한 구조에 대한 복합적 화학 또는 고성능 스크리닝 기법에 의해 수득된)가 또한 이러한 APP-결합 수용체를 생성시키는데 적합하다.

게다가, 핵산 ("압타머"; 또한, "데코이(decoy)" 올리고데옥시누클레오타이드 (이들 서열에 있어서 전사 인자에 대한 결합 부위를 구성하는 ds 올리고누클레오타이드))을 기재로 하는 APP-결합 수용체가 사용될 수 있으며, 여기서 상기 핵산은 다양한 (올리고누클레오타이드) 라이브러리에 의해 검출될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Burgstaller et al., Curr.Opin.Drug Discov.Dev. 5(5) (2002), 690-700; Famulok et al., Acc. Chem. Res. 33 (2000), 591-599; Mayer et al.; PNAS 98 (2001), 4961-4965] 등). 핵산의 백본은 예를 들어, 천연 포스포르 디에스테르 화합물에 의해 그리고, 또한 포스포로티오에이트 또는 복합물 또는 화학적 변형물 (예를 들어, PNA)에 의해 검출될 수 있으며, 본 발명에 있어서, 주로 U, T, A, C, G, H 및 mC가 염기로서 사용될 수 있다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 누클레오타이드의 2' 잔기는 바람직하게는, H, OH 또는 기타 보호기이며, 2' 위치에서의 변이부이며, 여기서 핵산은 예를 들어, 올리고누클레오타이드 합성에 일반적으로 사용되는 보호기가 제공된다면 변형될 수 있다. "보호기"는 산소 원자의 에테르화로 이해되며, 반면 -OH-기는 2'-변이부에서 상이한 것으로 대체된다. 상기 두 버젼에 대한 많은 상이한 가능성이 종래에 기술되어 있다; 메틸, 알릴, 프로필 등의 보호기 (예를 들어, 2'-OCH₃, 2'-O-CH=CH₃, 등)가 특히 바람직하며, 특히 바람직한 변이부는 2'-데옥시, 2'-아미노, 2'-플루오로, 2'-브로모, 2'-아지도, 또한 금속 예컨대, 셀레늄 등이 있다. 또한, 본 발명에 있어서, 안티센스 기법 (리보자임, RNAi, 등)에 있어서 개발된 핵산을 제공하는데 사용될 수 있는 올리고누클레오타이드 안정화 방법이 사용될 수 있다 (예를 들어, 당해분야 특히, 특허 문헌 및 홈페이지에서 도입된 컴패니 ISIS 및 리보자임 파마슈티컬스 (Ribozyme Pharmaceuticals) 비교).

이는 APP-결합 압타머 (본 발명에 있어서 상기 정의된 바와 같이, Aβ42-결합 압타머를 포함)가 또한 본 발명의 범위에서 바람직한 APP-결합 수용체가 되는 이유이다.

따라서, 바람직하게는, 펩티드, 항체 또는 핵산으로 이루어진 APP-결합 수용체는 알츠하이머 환자 및 알츠하이머에 걸릴 위험성이 있는 사람에서 APP 및 이의 단백질 분해 생성물을 체외 제거하기 위한 담체 물질로서 사용된다.

의약적 정기 실시에서 본 발명을 사용할 경우, 담체는 멸균되고 발열물질이 제거되어야 하며, 따라서 본 발명에 있어서, 이들 특성을 만족시키는 모든 담체 물질 및 모든 수용체/담체 복합물 각각이 바람직하다 (예를 들어, US 6,030,614 또는 US 5,476,715 참조). 적합한 예로는 비닐 (예를 들어, 아크릴산 예컨대, TSK 토요펄(Toyopearl), 프락토겔 TSK (Fractogel TSK))을 함유하는 다공성 동종중합체, 공중합체 또는 삼중합체, 옥시란을 함유하는 화합물를 갖는 개질된 (활성화된) 담체 (예를 들어, 에피클로로히드린), 및 EP 110,409A 및 DE 36,17,672A에 기술된 바와 같은 NH₃, 아미노 또는 카르복실, 또는 CNBr 또는 CNCL 흡착제를 함유하는 화합물과의 추가 반응물이 있다. 치료학적 목적에 특히 바람직한 흡착 물질은 혈액 세포의 손실을 회피하는데 적합하며, 보완 시스템을 활성화시키지 않거나 거의 활성화시키지 않으며, 가능한 멀리까지 체외 순환에서 응집물 형성을 지연시킨다. 또한, 사용된 담체 물질은 바람직하게는, 특히 에틸렌 옥사이드 포화, 글루타르알데히드 포화, 감마 방사선, 증기, UV, 용매 및/또는 세제 등으로의 처리에 대한 수용체-결합된 형태로 멸균 측정에 대해 충분히 안정적이다. 세파로오스, 아가로오스, 아크릴산, 비닐 및 덱스트란 등을 기재로하는 생성물이 또한 사용될 수 있으며, 바람직하게는 APP-결합 수용체에 결합하는데 적합한 이의 작용기는 이미 시중에서 구입가능하다. 추가의 적합한 담체는 또한, 모노리스(가교된 글리시딜메타크릴레이트-코-에틸렌글리콜디메타크릴레이트 중합체를 기재로 하는 담체)를 포함한다.

당업자에게 공지된 화학 작용이 수용체를 적합한 담체로 결합시키는데 사용 될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bioconjugate Techniques, Greg T Hermanson, Ed., Academic Press, Inc. San Diego, CA, 1995, 785 pp]).

추가의 양태에 있어서, 본 발명은 본 발명의 복합 치료 범위내의 알츠하이머 질환을 치료하기 위한 본 발명의 장치 또는 알츠하이머 질환의 치료 장치, 또는 이러한 질환을 예방하기 위한 장치를 각각의 환자의 치료에 적합하게 하도록 적용시키는, 상기 장치의 사용에 관한 것이다. 치료를 수행할 경우, 환자는 APP 폴리펩티드를 효과적으로 제거하기 위한 분리반출 장치와 효과적으로 장기간 연결되며, 여기서 환자의 혈액 또는 혈장 흐름은 APP-결합 수용체를 포함하는 고체 담체와 접촉하며, APP 및/또는 APP의 단백질분해 생성물 특히, Aβ42가 결합된다. 분리반출 치료 과정에서, 반드시 말초 또는 중앙 정맥 엑서스, 동맥정루 및 충분한 항응고효과가 보장되어야 하며, 요구되는 정량화 및 측정 데이타가 기록되어야 한다. 게다가, 대부분의 분리반출 방법은 적당한 혈장 처리 전에 혈장 및 혈액 세포가 우선 분리되어야 한다. 이러한 예방적 측정이 요구되는 특정한 사람은 가족 인자를 갖는 사람, 나이든 사람 (>50, >60 또는 >70세) 또는 AD에 대한 또 다른 위험 인자 특히, 유전자 인자를 갖는 사람이다.

추가의 양태에 있어서, 본 발명은

- 아밀로이드 β (Aβ)의 혈장으로의 격리를 유도하는 제제를 사람에게 투여하고, 이러함 사람을 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있으며, 아밀로이드-β-전구-단백질(APP)-결합 수용체를 갖는 고체 담체를 포함하는 분리반출 장치로 처리하고, 여기서 APP를 분리반출 장치에 의해 사람의 혈액으로부터 제거시키는, 알츠하 이머 질환 (AD)을 예방하거나 치료하는 방법에 관한 것이다.

상기 방법은 바람직하게는, 본 발명의 키트로 수행된다.

따라서, 본 발명은 또한, AD의 예방 또는 치료를 위한 본 발명의 복합 처리에 사용되는 제제를 생성하기 위한 상기 정의된 바와 같은 Aβ 미모토프의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 더욱 상세히 설명될 것이나, 이러한 실시예에 의해 특정하게 제한되는 것은 아니다.

1. APP 수용체를 수반하는 담체의 생성

1.1. 모노리틱 칼럼 (monolithic column)

CIM® 에폭시 모노리틱 칼럼 (BIA Separations, SI)을 제조업자의 지시에 따라 8.0의 pH에서 0.5M Na-인산염 완충제로 균질화시키고, Aβ 펩티드에 대한 모노클로날 항체를 또한 제조업자의 지시에 따라 활성화시키고, CIM 칼럼에 결합시켰다. 칼럼을 인산염 완충액 (+ 1M NaCl)으로 여러번 세척하고, 선택적으로 과잉의 에폭시기로 차단하였다.

세척 및 균질화 용출을 조정함으로써 퀄러티를 보장하고, 용출물중에 누출된 항체가 없는 칼럼 및 활성 에폭시기가 없는 칼럼만을 추가 공정에 사용하고, 분리반출 장치에 설치하였다.

1.2. 세파로오스 칼럼

한천 완충 물질 (세파로오스 CL4B)을 멸균된 발열물질 비함유 컨테이너에 무 균 상태로 충전시키고, 이러한 물질을 무균 상태로 세척하고, 여기서 겔 물질을 매 세척 단계사이에 진공하에 완전히 건조시켰다. 그 후, 세파로오스를 30분 동안 115℃에서 오토클래이브에서 진공하에 멸균시켰다.

멸균 후, 세파오로스를 멸균 컨테이너중의 60% 아세톤/물중에 취하고, CNBr 및 트리에틸아민 (96ml 아세톤 당 14g CNBr; 66.2ml 87%-아세톤중의 30ml 트리에틸아민)으로 활성화시켰다. 그 후, 아세톤/HCl 용액 (392ml 발열물질 비함유 멸균수; 16.3ml 5N HCl, 408ml 아세톤)을 첨가하였다. 활성화된 세파로오스를 세척하고, 2h내에 결합 반응에 공급하여 활성화된 기의 가수분해를 방지하였다.

멸균 여과된 항체 용액 (각각 m266 또는 m243)을 반응 용기에 도입시키고, 90분 이상 동안 교반하였다. 최종적으로, 반응 용액을 반응 생성물이 용출물중에 검출되지 않을 때까지 (등장성 인산염 완충제로) 완전하게 세척하고, 항체 결합된 세파로오스를 유리 소결물이 구비된 멸균의 발열물질 제거된 유리 칼럼에 충전시키고, 최종적으로 퀄러티를 보장하였다 (반응 생성물, 중금속 등에 있어서 용출물 검정; 실질적인 검정, 발열성; 멸균성).

2. 알츠하이머 환자의 분리반출 처리(apheresis treatment)를 위한 동물 모델

지난 1년 동안, 자유롭게 이동가능한 작은 동물에서 실험용 분리반출을 위한 특정한 체외순환계를 당뇨병 연구소 ("Gerhard Katsch" in Karlsburg, Germany)에서 개발하였다. 이러한 분리반출 처리는 하나의 동일한 동물에서 반복적으로 수행될 수 있다. 게다가, 사용된 동물은 또한 분리반출 처리의 장기간 평가를 위한 후 속 연구에 포함될 수 있다. 상기 실험용 분리반출 시스템의 사용은 여러 래트 종에서 성공적으로 입증되었다. 반복된 분리반출 처리는 래트의 체중이 250g 초과인 경우, 타입 I 당뇨병 및 콜라겐 타입 II 유도된 관절염에 걸린 래트에서 양호한 내성을 띠었다.

실험적 분리반출 치료를 시작하기 전에, 관절염 및 정맥 카테터를 갖는 동물을 제공하였다. 분리반출 치료의 제 1 단계에서, 혈액 세포 및 혈장을 혈장 필터에 의해 분리하였다. 혈액 세포를 동물에 직접적으로 (정맥 카테터를 통해) 재주입하면서, 분리된 혈장은 동물에 재공급하기 전에 실시예 1에서 생성된 흡착제를 통과하도록 유도시켰다 (여기서, 리간드는 고정화된 수용체에 결합하여 혈장으로부터 분리된다).

대안적으로, 예를 들어, 이와 유사한 LDL에 대한 DALI 분리반출로 수행되는 전혈 분리반출법 또한, 수행될 수 있다.

3. 동물 모델에서 본 발명의 복합 치료법:

동물 모델에서 복합 치료는 분리반출 전, 동안 또는 후에 Aβ 유출이 발생하도록 기본적으로 수행될 수 있다. 게다가, 서로 관련된 두 치료법의 적용 빈번도는 다양할 수 있다.

SEQUENCE LISTING <110> Mattner, Frank Schmidt, Walter <120> Combination therapy <130> r45798 <140> PCT/EP2005/053224 <141> 2005-07-06 <160> 50 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 1 Asp Ala Glu Phe Arg His 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 2 Glu Ile Asp Tyr His Arg 1 5 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 3 Glu Leu Asp Tyr His Arg 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 4 Glu Val Asp Tyr His Arg 1 5 <210> 5 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 5 Asp Ile Asp Tyr His Arg 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 6 Asp Leu Asp Tyr His Arg 1 5 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 7 Asp Val Asp Tyr His Arg 1 5 <210> 8 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 8 Asp Ile Asp Tyr Arg Arg 1 5 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 9 Asp Leu Asp Tyr Arg Arg 1 5 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 10 Asp Val Asp Tyr Arg Arg 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 11 Asp Lys Glu Leu Arg Ile 1 5 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 12 Asp Trp Glu Leu Arg Ile 1 5 <210> 13 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 13 Tyr Arg Glu Phe Phe Ile 1 5 <210> 14 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 14 Tyr Arg Glu Phe Arg Ile 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 15 Tyr Ala Glu Phe Arg Gly 1 5 <210> 16 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 16 Glu Ala Glu Phe Arg Gly 1 5 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 17 Asp Tyr Glu Phe Arg Gly 1 5 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 18 Glu Leu Glu Phe Arg Gly 1 5 <210> 19 <211> 6 <212> 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<211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 29 Asp Asn Glu Phe Arg Ser Pro 1 5 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 30 Gly Ser Glu Phe Arg Asp Tyr 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 31 Gly Ala Glu Phe Arg Phe Thr 1 5 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 32 Ser Ala Glu Phe Arg Thr Gln 1 5 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 33 Ser Ala Glu Phe Arg Ala Thr 1 5 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 34 Ser Trp Glu Phe Arg Asn Pro 1 5 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 35 Ser Trp Glu Phe Arg Leu Tyr 1 5 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 36 Ser Trp Glu Leu Arg Gln Ala 1 5 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 37 Ser Val Glu Phe Arg Tyr His 1 5 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 38 Ser Tyr Glu Phe Arg His His 1 5 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 39 Ser Gln Glu Phe Arg Thr Pro 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 40 Ser Ser Glu Phe Arg Val Ser 1 5 <210> 41 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 41 Asp Trp Glu Phe Arg Asp 1 5 <210> 42 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 42 Asp Ala Glu Leu Arg Tyr 1 5 <210> 43 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 43 Asp Trp Glu Leu Arg Gln 1 5 <210> 44 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 44 Ser Leu Glu Phe Arg Phe 1 5 <210> 45 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 45 Gly Pro Glu Phe Arg Trp 1 5 <210> 46 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 46 Gly Lys Glu Phe Arg Thr 1 5 <210> 47 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <400> 47 Ala Tyr Glu Phe Arg His 1 5 <210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <220> <221> Nle <222> (4)..(4) <400> 48 Asp Lys Glu Xaa Arg 1 5 <210> 49 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <220> <221> Nva <222> (4)..(4) <400> 49 Asp Lys Glu Xaa Arg 1 5 <210> 50 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Epitope <220> <221> Cha <222> (4)..(4) <400> 50 Asp Lys Glu Xaa Arg 1 5

Claims

- 혈장에서 아밀로이드 β (Aβ)의 격리를 유도하는 제제, 및

- 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있으며, 아밀로이드-β-전구 단백질 (APP)에 결합하는 수용체를 갖는 고체 담체를 포함하는 분리반출 장치를 포함하는, 알츠하이머 질환 (AD) 예방용 또는 치료용 키트.
제 1항에 있어서, APP-결합 수용체가 항-APP 항체, Aβ-결합 수용체 특히, 항-Aβ40 항체 또는 항-Aβ42 항체, APP-결합 단백질 특히, 겔솔린(gelsolin), apoJ 또는 apoE, APP-결합 펩티드, APP-결합 글리코리피드, 바람직하게는, 갱글리오사이드, 특히 GM1, 또는 APP-결합 핵산 특히, 압타머(aptamer), 또는 이러한 수용체의 혼합물로부터 선택됨을 특징으로 하는 키트.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 담체가 발열물질 비함유 멸균 칼럼임을 특징으로 하는 키트.
제 1항 내지 제 3항중의 어느 한 항에 있어서, 혈장중의 아밀로이드 β(Aβ)의 격리를 유도하는 제제가 Aβ에 대한 높은 친화도를 갖는 제제 특히, 겔솔린 또는 GM1, Aβ-특이적 항체, 펩티드 또는 핵산, Aβ-특이적 활성 또는 수동 백신으로부터 선택됨을 특징으로 하는 키트.
제 1항 내지 제 4항중의 어느 한 항에 있어서, Aβ-특이적 활성 백신이 Aβ-유도체 또는 Aβ-미모토프임을 특징으로 하는 키트.
제 5항에 있어서, Aβ-유도체가, 일부 또는 전부가 D-아미노산 및/또는 비천연 아미노산으로 이루어진 펩티드로부터 선택됨을 특징으로 하는 키트.
제 5항에 있어서, Aβ-미모토프가 하기 식의 펩티드로 이루어지거나 이러한 펩티드를 포함하며, 상기 펩티드는 천연 N-말단 Aβ42 서열 DAEFRH에 대해 특이적인 항체에 대해 결합 능력을 가지며, 상기 펩티드의 5량체는 천연 N-말단 Aβ42 서열 DAEFRH에 대해 특이적인 항체에 대한 결합 능력을 가짐을 특징으로 하는 키트:

X1X2X3X4X5X6

상기 서열에서, X1은 C를 제외한 아미노산이고,

X2는 C를 제외한 아미노산이고,

X3는 C를 제외한 아미노산이고,

X4는 C를 제외한 아미노산이고,

X5는 C를 제외한 아미노산이고,

X6은 C를 제외한 아미노산이며,

단, X1X2X3X4X5X6은 DAEFRH가 아니다.
제 7항에 있어서,

X1은 G 이거나, 히드록시기를 지닌 아미노산 또는 음 하전된 아미노산, 바람직하게는, E, Y, S 또는 D이고,

X2는 소수성 아미노산 또는 양 하전된 아미노산, 바람직하게는, I, L, V, K, W, R, Y, F 또는 A이고,

X3은 음 하전된 아미노산, 바람직하게는, D 또는 E이고,

X4는 방향족 아미노산 또는 L, 바람직하게는, Y, F 또는 L이고,

X5는 H, K, Y, F 또는 R, 바람직하게는, H, F 또는 R이고,

X6은 S, T, N, Q, D, E, R, I, K, Y 또는 G 이거나, 바람직하게는, T, N, D, R, I 또는 G인 X1X2X3X4X5X6, 특히, EIDYHR, ELDYHR, EVDYHR, DIDYHR, DLDYHR, DVDYHR, DIDYRR, DLDYRR, DVDYRR, DKELRI, DWELRI, YREFFI, YREFRI, YAEFRG, EAEFRG, DYEFRG, ELEFRG, DRELRI, DKELKI, DRELKI, GREFRN, EYEFRG, DWEFRDA, SWEFRT, DKELR, DAEFRWP, DNEFRSP, SAEFRTQ, SAEFRAT, SWEFRNP, SWEFRLY, SWELRQA, SVEFRYH, SYEFRHH, SQEFRTP, SSEFRVS, DWEFRD, DAELRY, DWELRQ, SLEFRF, GPEFRW, GKEFRT 또는 SFEFRG임을 특징으로 하는 키트.
- 아밀로이드 β (Aβ)의 혈장으로의 격리를 유도하는 제제를 사람에게 투여하고, 이러한 사람을, 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있으며 아밀로이드-β-전구-단백질(APP)-결합 수용체를 갖는 고체 담체를 포함하는 분리반출 장치로 처리하고, 여기서 APP를 분리반출 장치에 의해 사람의 혈액으로부터 제거시키는, 알츠하 이머 질환 (AD)을 예방하거나 치료하는 방법.
제 9항에 있어서, 제 1항 내지 제 8항중의 어느 한 항에 따른 키트가 사용되는 방법.
AD의 예방 또는 치료를 위한 제 1항에 정의된 바와 같은 복합 치료법에 사용되는 제제를 생성시키는데 있어서, 제 7항 또는 제 8항에 정의된 바와 같은 Aβ-미모토프의 용도.