KR20070017340A - 전사인자 ｋｌｆ5의 활성화 억제작용을 가지는 의약 - Google Patents

전사인자 ｋｌｆ5의 활성화 억제작용을 가지는 의약 Download PDF

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Abstract

비환식 폴리프레닐계 화합물(예를 들면, 3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산 등)을 유효성분으로 포함하며, 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하고, 혈관 리모델링 및 동맥경화를 억제하는 작용을 가지는 의약.
전사인자 KLF5, 혈관 리모델링, 동맥경화

Description

전사인자 ＫＬＦ5의 활성화 억제작용을 가지는 의약{Medicine Capable of Inhibiting Activation of Transcription Factor KLF5}
본 발명은 비환식(acyclic) 폴리프레닐계 화합물(polypreneyl compound)을 유효성분으로 포함하고, 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하는 작용을 가지는 의약에 관한 것이다.
최근 동맥경화를 비롯한 혈관질환이 급증하고 있고, 고령화 사회를 맞이한 일본에서 혈관질환의 예방 또는 치료를 위한 의약의 개발은 상당히 중요한 과제이다. 혈관평활근의 증식은 동맥경화나 허혈성 심질환의 치료로서 수행되는 관동맥 혈행재건술(vascular reconstructive surgery) 후의 재협착 발증에 깊이 관계하고 있다. 그러나, 손상된 혈관평활근의 성질이나 개체발생의 과정에 있는 혈관의 특징·성질에 대하여는 아직 충분히 해명되고 있지 않다. 평활근의 분화와 발생을 담당하는 분자구조의 해명은, 동맥경화로 대표되는 혈관평활근이 관여하고 있는 혈관질환의 예방약·치료약의 개발의 계기가 될 가능성이 있다. 또한, 평활근세포는 형질의 가소성(plasticity)을 나타낸다는 특징이 있다. 정상혈관에서는 분화한 수 축형 형질세포가 관찰되는 반면, 혈관병변(vascular lesion)에서는 증식능을 가지는 탈분화한 평활근세포로의 형질변환(conversion)이 관찰된다. 평활근세포의 탈분화 구조를 이해하는 것은, 혈관질환의 병태를 해명하고, 보다 새로운 치료법을 개발하기 위한 계기가 된다.
본 발명의 발명자들은 탈분화한 평활근에 특이적으로 발현하는 평활근 미오신 중쇄유전자 발현조절의 연구를 통하여, 동 유전자의 발현조절을 담당하는 전사조절인자 KLF5(Kruppel-like factors 5)/BTEB2/IKLF(이하, 본 명세서에서는 "KLF5"라 함)를 단리하는데 성공하였다(참조: Circulation Research, 85, pp.182-191, 1999). KLF5는 태아 및 신생아기에 혈관에 발현하고 성체에서는 발현이 저하되나, 동맥경화 등의 혈관병변에서는 발현이 유도된다. KLF5의 발현을 억제하는 안티센스 실험에서는, 평활근 특이적으로 증식이 억제되는 것에서 KLF5는 평활근의 증식을 담당하는 중요한 인자라고 여겨진다. 따라서, KLF5의 활성을 억제하는 작용을 가지는 의약을 개발한다면, 혈관질환의 예방 및 치료를 위한 새로운 의약으로서의 유용성이 기대될 것이다.
본 발명의 발명자들은 KLF5가 동맥경화를 악화시키는 단백질의 프로모터에 결합하여 높은 발현활성이 유도되는 특성을 이용하여, 평활근세포의 형질전환을 억제하는 물질의 평가방법 및 이러한 평가방법에 이용하는 숙주세포를 제공하는 방법을 발견하였다(참조: 특개평 11-318450호 공보). 또한, 본 발명의 발명자들은 KLF5의 넉아웃·마우스의 작제에도 성공하였다(참조: Nature Medicine, 8, pp.856-863, 2002). 이 넉아웃·마우스로는, 호모 접합체는 태생치사성(embryonic lethality)이고, 헤테로 접합체의 성자(heterozygous live birth)는 언뜻 보기에 정상이나, 혈관장해에 대한 내막 과형성(intimal hyperplasia) 반응의 저하, 안지오텐신Ⅱ에 의한 심비대(cardiac hypertrophy)와 선유화(fibrosis)의 저하 등이 현저하였다. 또한, 헤테로 접합체로는, 혈소판 유래 증식인자(PDGF)가 야생형의 절반 정도까지 저하하고 있고, PDGF가 KLF5의 전사제어의 표적유전자인 것이 판명되었다. 또한, 레티노인산 유도체(레티노인산 작용물질(agonist): Am 80)는 세포를 이용한 리포터 분석으로 KLF5에 의한 PDGF-A의 전사를 억제하고, 야생형 마우스에 투여하여 장해혈관의 신생내막형성을 억제하였다. 한편, 레티노인산 PDGF-A의 전사를 촉진시키고, 야생형 마우스에 투여하였는 바, 장해혈관의 신생내막형성을 촉진시켰다(참조: Nature Medicine, 8, pp.856-863, 2002).
한편, 비환식 폴리프레닐계 화합물 중 하나인 (2E, 4E, 6E, 10E)-3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산(이하, 본 명세서에서는 이 물질을 "NIK-333"이라 함)은, 레티노인산 결합단백질 및 레티노인산 수용체에 대하여 친화성을 나타내고, 간세포암에 대하여 분화유도작용 및 세포자살(apoptosis) 유도작용을 가지는 것이 알려져 있다. 임상적으로는, NIK-333은 1년간의 장기투여에 의하여 간암의 근치치료(radical treatment) 후의 재발을 유의적으로 억제하고, 간암재발 억제작용을 가지는 것이 시사되어 있다. 또한, NIK-333은 간기능 장해 및 다른 레티노이드로 인정되는 부작용을 거의 가지고 있지 않고, 안전성이 높은 의약으로 유용하다(참조: N. Eng. J. Med., 334, pp.1561-1567, 1996). 그러나, 지금까지 비환식 폴리프레닐 화합물이 전사인자인 KLF5의 활성화를 억제하는 것은 전혀 알려져 있지 않고, 이 물질이 혈관 리모델링 억제작용 및 동맥경화 억제작용을 가지는 것도 알려져 있지 않다.
발명이 해결하고자 하는 과제
본 발명은 전사조절인자 KLF5의 활성화 억제작용을 가지는 의약을 제공하는 것을 과제로 하고 있다. 또한, 전사조절인자 KLF5의 활성화 억제작용을 가지고, 혈관 리모델링 및 동맥경화를 억제하는 작용을 가지는 의약을 제공하는 것도 본 발명의 과제이다.
과제를 해결하기 위한 수단
본 발명의 발명자들은 상기의 과제를 해결해야 하고, 전사조절인자 KLF5의 활성화 억제작용을 가지는 화합물을 예의 탐색하였다. 그 결과, NIK-333 등의 비환식 폴리프레닐계 화합물이 전사조절인자 KLF5의 활성화를 억제하는 것 및 전기 비환식 폴리프레닐계 화합물이 혈관 리모델링 및 동맥경화를 억제하는 작용을 가지는 것을 발견하였다. 본 발명은 상술한 지견을 기초로 완성된 것이다.
즉, 본 발명에 의하여 비환식 폴리프레닐계 화합물을 유효성분으로 포함하며, 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하는 작용을 가지는 의약이 제공된다. 또한, 본 발명에 의하여 비환식 폴리프레닐계 화합물을 유효성분으로 포함하며, 혈관 리모델링 억제작용을 가지는 의약 및 비환식 폴리프레닐계 화합물을 유효성분으로 포함하며, 동맥경화 억제작용을 가지는 의약이 제공된다.
본 발명의 바람직한 태양에 의하면, 비환식 폴리스레닐계 화합물이 폴리프레닐 카르본산인 상기의 의약; 비환식 폴리프레닐계 화합물이 3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산인 상기의 의약; 및, 비환식 폴리프레닐계 화합물이 (2E, 4E, 6E, 10E)-3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산인 상기의 의약이 제공된다. 본 발명의 보다 바람직한 태양에 의하면, 유효성분인 비환식 폴리프레닐계 화합물과 함께 약학적으로 허용되는 제제용 첨가물을 포함하는 의약조성물의 형태인 상기의 의약; 및, 경구투여용 의약조성물의 형태인 상기의 의약이 제공된다.
본 발명의 다른 관점에 의하면, 상기 의약의 제조를 위한 비환식 폴리프레닐계 화합물의 용도; 및, 비환식 폴리프레닐계 화합물의 유효량을 사람을 포함한 포유류 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 사람을 포함한 포유류 동물의 생체내에서 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하는 방법; 비환식 폴리프레닐계 화합물의 유효량을 사람을 포함한 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 혈관 리모델링을 억제하는 방법; 및, 비환식 폴리프레닐계 화합물의 유효량을 사람을 포함한 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 동맥경화를 예방하는 방법이 제공된다.
발명의 효과
본 발명의 의약은 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하는 작용을 가지고, 혈관 리모델링의 억제 및 동맥경화의 억제 등에 유용하다.
발명을 실시하기 위한 최량의 형태
본 발명의 의약의 유효성분으로 이용된 비환식 폴리프레닐계 화합물은, 여러개의 직쇄 이소프렌 단위를 포함하는 화합물이다. 비환식 폴리프레닐계 화합물 말단의 관능기 종류는, 특별히 이에 한정되는 것은 아니나, 말단에 제 1급 아릴수산기를 가지는 폴리프레닐 알콜(폴리프레놀), 폴리프레놀의 말단수산기가 유기산과 에스테르를 형성한 화합물, 말단에 카르복실기를 가지는 폴리프레닐 카르본산 등을 예로 들 수 있으며, 바람직하게는, 폴리프레닐 카르본산을 이용할 수 있다. 비환식 폴리프레닐계 화합물로는 순수한 형태의 임의의 기하이성체 또는 기하이성체의 임의의 혼합물을 이용할 수 있다. 본 발명에 바람직하게 이용된 비환식 폴리프레닐 화합물은 3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산이고, 특히 바람직하게는 (2E, 4E, 6E, 10E)-3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산을 이용할 수 있다. 이 화합물은 특공소 63-32058호 공보 및 J. Chem. Soc. (c), 2154, 1966에 개시되어 있는 공지물질이고, 상기 간행물에 개시된 방법에 의하여 용이하게 제조할 수 있다. 또한, 그 외의 비환식 폴리프레닐 화합물도 상기 간행물에 기재된 방법을 참조하여 당업자가 용이하게 제조할 수 있다.
본 발명의 의약으로는 비환식 폴리프레닐계 화합물을 그대로 투여하여도 무방하나, 통상은 1 또는 2종류 이상의 제제용 첨가물과 함께 의약조성물을 조제하여 투여하는 것이 바람직하다. 본 발명의 의약 투여경로는, 특별히 이에 한정되는 것은 아니나, 경구투여 또는 비경구투여 중 어느 투여경로를 선택하는 것도 가능하다. 경구투여에 적합한 의약조성물의 예로는, 정제(소정(uncoated tablet) 또는 당의정 등), 과립제, 세립제, 산제, 시럽제, 용액제, 캡슐제(경캡슐제 또는 연캡슐제 등) 또는 현탁제 등을 들 수 있다. 비경구투여에 적합한 제제의 예로는, 주사제, 점적제, 흡입제, 분무제, 좌제(suppository), 경피흡수제(percutaneous absorption agent), 경점막흡수제(tranamucosal absorption agent) 등을 들 수 있다.
제제용 첨가물의 예로는, 안정화제, 계면활성제, 가소제, 활택제, 가용화제, 완충제, 감미제, 기제, 흡착제, 교미제, 결합제, 현탁화제, 광택화제, 코팅제, 착향제·향료, 습윤제, 습윤조절제(moisture controlling agent), 충전제, 소포제, 저작제(masticatory), 청량화제(refrigerant), 착색제, 당의제, 등장화제, pH조절제, 연화제, 유화제, 점착제, 점착증강제, 점조제(thickener), 점조화제(thickening agent), 발포제, 부형제, 분산제, 분사제, 붕괴제, 붕괴보조제, 방향제, 방습제, 방부제, 보존제, 무통화제(soothing agent), 용제, 용해제, 용해보조제, 유동화제(fludizing agent) 등을 들 수 있고, 이들을 2종류 이상 조합하여 사용해도 무방하다. 이들 제제용 첨가물의 구체적인 예로는, 의약품 첨가물 사전(일본의약품첨가제협회 편집, 약사일보사 발행)에 설명되어 있으므로, 당업자는 의약조성물의 형태에 따라 적절한 제제용 첨가물을 선택하고, 당업계에서 널리 사용되는 방법에 따라 원하는 형태의 의약조성물을 제조할 수 있다. 예를 들면, 제제용 첨가물로 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 식물유, 폴리에틸렌글리콜 또는 생물학적으로 혼화하는 용매 등을 이용할 수 있다. 또한, PCT/JP03/10440호의 명세서에는 3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산을 함유하는 연캡슐제가 개시되어 있고, 이 연캡슐제는 본 발명의 의약으로서 바람직하게 이용가능하다.
본 발명의 의약은 사람을 포함한 포유류 동물에 있어서 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하는 작용을 가진다. 본 발명의 의약의 상기 작용은, 본 명세서의 실시예에 구체적으로 설명한 방법에 의하여 당업자가 용이하게 확인할 수 있다. 또한, 본 발명의 의약은 상기의 전사인자 KLF5의 활성화 억제작용에 기초하여, 혈관 리모델링 및/또는 동맥경화를 억제하는 작용을 가지고 있다. 동맥경화의 진전에 관련된 고혈압 등의 병태로는, 혈관에 관계된 여러가지 부하에 반응하여 혈관벽의 세포구축이 변화되고 혈관의 리모델링이 일어나는 것이 알려져 있다. 혈관 리모델링이란, 혈류량 변화나 혈관벽의 장력의 변화 등 혈행동태 변화에 대하여 야기되는 혈관의 구조상의 변화이다. 혈관 리모델링 및/또는 동맥경화에 대한 본 발명의 의약의 억제작용에 대하여도, 본 명세서의 실시예에 구체적으로 나타낸 방법(예를 들면, 선유아세포의 세포증식에 대한 억제작용 및 커프장해 모델을 이용한 평가 등)에 의하여 당업자가 용이하게 확인할 수 있다.
본 발명의 의약 투여량 및 투여회수는 특별히 한정되지 않으나, 통상은 유효성분중량으로서 1일 투여량을 0.001mg 내지 1,200mg 정도로 선택할 수 있고, 통상적으로는 성인 1일당 100mg 내지 1,000mg 정도이다. 상기의 투여량은 환자의 연령이나 체중 등의 조건, 질환의 종류 등에 대하여 적절히 증감하는 것이 바람직하다. 또한, 상기의 1일 투여량을 수회로 나누어 투여할 수도 있다.
도 1은 COS1 세포에 KLF5와 RARα를 동시에 형질전이시켜 NIK-333을 부하하고, 루시퍼라제 분석을 한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 COS1 세포에 KLF5와 RARα를 동시에 형질전이시켜 NIK-333 및 ATRA를 부하(loading)하고, 루시퍼라제 분석을 한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 COS1 세포에 KLF5와 RARβ, ｒ를 동시에 형질전이시켜 NIK-333 및 ATRA를 부하하고, 루시퍼라제 분석을 한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 3T3세포에 NIK-333 및 ATRA를 부하하고, 24, 36 및 48시간 후의 생세포수를 계측한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 3T3세포 및 대조세포에 NIK-333 및 ATRA를 부하하고, 생세포수를 계측한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하에서는 본 발명을 실시예에 의하여 보다 구체적으로 설명하였으나, 본 발명의 범위는 하기의 실시예에 한정되지 않는다.
실시예 1-1: 전사인자 KLF5의 활성화에 대한 효과
COS1세포를 24웰 플레이트에 5×104개/웰의 비율로 담아, 37℃의 5% CO2 배양기에서 12시간 동안 배양하였다. 형질전이(transfection)는 TransFast(등록상표, 프로메가사제) 형질전이 시약을 이용하고, 그의 프로토콜에 따라 수행하였다. 즉, pCAG/KLF5 또는 그의 빈(empty) 벡터(pCAG), pCMX/RARα 또는 그의 빈 벡터(pCMX) 및 PDGF-A 프로모터(-900)- 루시퍼라제를 가하고, 37℃의 5% CO2 배양기에서 48시간 동안 배양하였다. NIK-333은 디메틸설폭시드(DMSO)에 용해시켜, 10-7 내지 10-5M이 되도록 가하였다. 그런 다음, Dual Luciferase Reporter Assay System(프로메가사제)를 이용하여 루시퍼라제 분석을 하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다. KLF5의 빈 벡터와 RARα의 빈 벡터(제 1레인), KLF5만의 유전자 도입(제 2레인) 및 RARα만의 유전자 도입(제 3레인)에 비교하여 KLF5와 RARα의 유전자 도입(제 4레인)에 의하여 PDGF-A 프로모터 활성화가 확인되었다. 이러한 RARα 강발현하에서의 KLF5에 의존하는 PDGF-A 프로모터 활성화 작용은 NIK-333에 의하여 억제되었다(제 5,6,7레인, NIK-333의 작용에는 10-7M으로부터 농도의존성이 확인되었다. 따라서, NIK-333은 전사인자 KLF5의 활성화 억제작용을 가지는 것을 알 수 있었다.
실시예 1-2: 전사인자 KLF5의 활성화에 대한 효과
COS1세포를 24웰 플레이트에 5×104개/의 비율로 담아, 37℃의 5% CO2 배양기에서 하룻밤 동안 배양하였다. 형질전이는 TransFast(등록상표, 프로메가사제) 형질전이 시약을 이용하고, 그의 프로토콜에 따라 수행하였다. 즉, pCAG/KLF5 또는 그의 빈 벡터(pCAG), pRSh/RARα, β, ｒ 또는 그의 빈 벡터(pRS-RSV) 및 PDGF-A 프로모터(-900)- 루시퍼라제를 가하고, 37℃의 5% CO2 배양기에서 48시간 동안 배양하였다. NIK-333은 디메틸설폭시드(DMSO)에 용해시켜, 10-12 내지 10-5M이 되도록 가하였다. 그런 다음, Dual Luciferase Reporter Assay System(프로메가사제)를 이용하여 루시퍼라제 분석을 하였다. 그 결과를 도 2 및 3에 나타내었다. KLF5의 빈 벡터와 RARα의 빈 벡터(제 1레인), RARα만의 유전자 도입(제 2레인) 및 KLF5만의 유전자 도입(제 3레인)에 비교하여 KLF5와 RARα의 유전자 도입(제 4레인)에 의하여 PDGF-A 프로모터 활성화가 확인되었다. 이러한 RARα 강발현하에서의 KLF5에 의존하는 PDGF-A 프로모터 활성화 작용은 NIK-333에 의하여 억제되었다(제 5 내지 12레인). 이 작용은 10-10M으로부터 유의하게 농도의존적으로 억제하여 올-트랜스-레티노인산(ATRA)보다도 강력함이 확인되었다. 마찬가지로 RARｒ 강발현하에서의 KLF5 의존의 PDGF-A 프로모터 활성화 작용은 NIK-333에 의하여 억제되어, ATRA보다도 강력함이 확인되었다. 한편, RARβ 강발현하에서의 KLF5 의존의 PDGF-A 프로모터 활성화 작용은 NIK-333에 의하여 영향을 받지 않음이 확인되었다. NIK-333은 RAR(α, ｒ) 강발현하에서의 KLF5의 PDGF-A 프로모터 활성화 작용을 억제하여, 이 작용은 ATRA보다도 강력함이 확인되었다. 따라서, NIK-333은 전사인자 KLF5의 활성화 억제작용을 가지는 것을 알 수 있었다.
실시예 2: 선유아세포(fibroblast) 3T3의 세포증식에 대한 효과
선유아세포 유래인 3T3세포를 24웰 플레이트에 1×106개/웰의 비율로 담아, 12시간 동안 방치하였다. 그런 다음, NIK-333 및 ATRA를 10-7 내지 10-4M이 되도록 가하여 24, 36 및 48시간 후에 생세포수를 계측하였다. NIK-333과 ATRA는 DMSO에 용해시켰다. 그 결과, NIK-333은 10-7M으로부터 농도의존성으로 세포증식을 억제하고, 이 작용은 ATRA보다도 강함이 확인되었다(참조: 도 4). 따라서, NIK-333은 동맥경화의 원인인 선유아세포의 증식을 억제하여 동맥경화를 억제하는 작용을 가지는 것으로 여겨졌다.
실시예 3-1: 마우스의 커프장해 모델에 대한 효과
커프장해(cuff-induced injury) 모델을 이용하여 혈관 리모델링 해석을 행하였다. 혈관 리모델링과 관련된 이 모델의 유용성이 보고되어 있다(참조: Physiol. Genomics, 2, pp.13-30, 2000; Circulation, 104, pp.2716-2721, 2001; Circulation, 106, pp.847-853, 2002). 실험에는 수컷 C57BL6/N마우스 8주령(10마 리/군)을 사용하였다. 대두유에 용해시킨 NIK-333 50mg/kg을 커프처리(placement of a cuff, 폴리에틸렌 튜브를 혈관 외측에 씌우는 처리)로 7일전부터 도살전일까지 1일 1회 연일 경구투여하였다. 대조군으로서는, 대두유만을 상술한 바와 같이 투여하였다. 전(前)투약 7일 후 우대퇴동맥(right femoral artery)에 커프로 PE50(폴리에틸렌 튜브 50)을 씌웠다. 5주 후 도살하여 채혈, 좌심실천자(puncture of the left ventricle) 관류고정(perfusion fixation)으로 커프를 들어올렸다. 병리평가는 헤마톡실린·에오신(HE) 염색을 수행하였다. 그 결과, 커프에 의한 혈관상해로 일어난 혈관내막의 비후는, NIK-333 투여군으로 대조군과 비교하여 I/M(내막(intima)/중막(media))비의 감소가 확인되었다.
처치 I/M비
용매(대두유) 0.93±0.35
NIK-333 50mg/kg 0.87±0.29
NIK-333 100mg/kg 0.75±0.31
실시예 3-2: 마우스의 커프장해 모델에 대한 효과
커프장해 모델을 이용하여 혈관 리모델링 해석을 행하였다. 혈관 리모델링과 관련된 이 모델의 유용성이 보고되어 있다(참조: Physiol. Genomics, 2, pp.13-30, 2000; Circulation, 104, pp.2716-2721, 2001; Circulation, 106, pp.847-853, 2002). 실험에는 수컷 C57BL6/N마우스 8주령(10마리/군)을 사용하였다. 대두유에 현탁한 NIK-333 100, 200mg/kg 또는 ATRA 5, 10mg/kg을 커프처리(폴리에틸렌 튜브를 혈관 외측에 씌우는 처리)로 7일전부터 도살전일까지 1일 1회 연일 경구투여하였다. 대조군으로서는, 대두유만을 상술한 바와 같이 투여하였다. 전(前)투약 7일 후 우대퇴동맥에 커프로 PE50(폴리에틸렌 튜브 50, 외경 0.965mm, 길이 약 1.5mm)을 씌웠다. 5주 후 도살하여 채혈, 좌심실천자 관류고정으로 커프를 들어올렸다. 병리평가는 엘라스티카·반기손(Elastica van Gieson, EVG) 염색을 수행하였다. 그 결과, 커프에 의한 혈관상해로 일어난 혈관내막의 비후는, NIK-333 투여군으로 대조군과 비교하여 I/M(중막/내막)비의 감소가 확인되었다. 한편, ATRA으로는 대조군과 차이가 확인되지 않았다.
처치 I/M비(Mean±S.D.)
용매(대두유) 0.62±0.2
NIK-333 100mg/kg 0.38±0.2 P < 0.05
NIK-333 200mg/kg 0.09±0.1 P < 0.01
ATRA 5mg/kg 0.64±0.3 유의차 없음
ATRA 10mg/kg 0.63±0.2 유의차 없음
실시예 4: 마우스의 정소(testes)중량에 끼치는 영향
수컷 C57BL6/N마우스 8주령(10마리/군)을 사용하였다. 대두유에 용해한 NIK-333 50mg/kg 및 100mg/kg을 5주동안 1일 1회 연일 경구투여하였다. 대조군으로서는, 대두유만을 상술한 바와 같이 투여하였다. 5주 후 체중을 측정하고, 도살 후에 정소의 육안적 관찰과 정소중량을 측정하였다. 그 결과, NIK-333의 5주투여군(50 및 100mg/kg)으로 대조군과 비교하여 체중 및 정소중량에 변화는 확인되지 않았다. 또한, 육안적 관찰로도 정소에 대한 이상소견은 확인되지 않았다.
처치 체충(g) 양측 정소중량(g)
용매 21.1±0.3 0.1437±0.0036
NIK-333 50mg/kg 20.8±0.3 0.1465±0.0043
NIK-333 100mg/kg 21.2±0.3 0.1360±0.0026
실시예 5: KLF5 안정세포증식에 대한 영향
KLF5를 안정하게 발현시킨 세포("3T3-KLF5세포")(KLF5의 cDNA를 3×FLAG 발현벡터에 서브클로닝하여 3×FLAG-KLF5의 재조합체(construct)를 작제하고, 이 재조합체를 3T3세포에 형질전이시킨 후, 2주동안 G418의 존재하에서 배양하여, G418저항성의 세포를 클론화한 것, KLF5를 함유하지 않은 상술한 바와 같이 작제한 대조군의 세포를 "3T3-mock세포"라 함)를 10% FBS, 페니실린 G/스트렙토마이신 함유 DMEM 배지에 1×105개/웰(6웰 플레이트)에 접종하고, 하룻밤 동안 37℃의 5% CO2 배양기에서 배양한 후, 페니실린 G/스트렙토마이신 함유 DMEM 배지(혈청불포함)로 교환하고, 2시간 후에 DMSO에 용해시킨 NIK-333을 가하고, 24시간 동안 배양한 후에 세포수를 계측하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다. 3T3-mock세포 및 3T3-KLF5세포에 있어서 DMSO에 용해시킨 NIK-333, ATRA를 10-8 내지 10-5M의 농도가 되도록 가하면, 양 세포와 함께 NIK-333 및 ATRA의 첨가에 의하여 농도의존적으로 생세포수의 감소가 확인되었다. 3T3-mock세포, 3T3-KLF5세포에 대한 작용은 NIK-333이 ATRA보다도 강력하였다. NIK-333을 가한 3T3-mock세포와 3T3-KLF5세포를 비교하면, 3T3-KLF5세포가 세포의 생존율이 높았다. 따라서, NIK-333 존재하 KLF5의 유무에 의하여 세포생존율에 차이가 생긴 것으로부터, NIK-333의 작용은 KLF5의 작용에 관여하고 있다는 것이 시사되었다.
본 발명의 의약은 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하는 작용을 가지고, 혈관 리모델링의 억제 및 동맥경화의 억제 등에 유용한 것이다.

Claims (8)

  1. 비환식 폴리프레닐계 화합물을 유효성분으로 포함하며, 전사인자 KLF5의 활성화를 억제하는 작용을 가지는 의약.
  2. 비환식 폴리프레닐계 화합물을 유효성분으로 포함하며, 혈관 리모델링 억제작용을 가지는 의약.
  3. 비환식 폴리프레닐계 화합물을 유효성분으로 포함하며, 동맥경화 억제작용을 가지는 의약.
  4. 제 1항 내지 제 3항의 어느 한 항에 있어서,
    비환식 폴리프레닐계 화합물이 폴리프레닐 카르본산인 것을 특징으로
    하는
    의약.
  5. 제 1항 내지 제 3항의 어느 한 항에 있어서,
    비환식 폴리프레닐계 화합물이 3, 7, 11, 15-테트라메틸-2, 4, 6, 10,
    14-헥사데카펜타엔산인 것을 특징으로 하는
    의약.
  6. 제 1항 내지 제 3항의 어느 한 항에 있어서,
    비환식 폴리프레닐계 화합물이 (2E, 4E, 6E, 10E)-3, 7, 11, 15-테트
    라메틸-2, 4, 6, 10, 14-헥사데카펜타엔산인 것을 특징으로 하는
    의약.
  7. 제 1항 내지 제 6항의 어느 한 항에 있어서,
    유효성분인 비환식 폴리프레닐계 화합물과 함께 약학적으로 허용되는
    제제용 첨가물을 포함하는 의약조성물의 형태인 것을 특징으로 하는
    의약.
  8. 제 1항 내지 제 7항의 어느 한 항에 있어서,
    경구투여용 의약조성물의 형태인 것을 특징으로 하는
    의약.
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