KR20060129229A - 표면에 위치한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 빈창자캄필로박터의 세포 표면에 위치한 폴리펩티드 및 캄필로박터에 대한 면역화의 용도에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 표면 위치 폴리펩티드를 발현하는 폴리뉴클레오티드, 발현 벡터, 재조합 바이러스 또는 재조합 세포의 면역화 용도에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 항캄필로박터 치료를 위하여 표면 위치 푤리펩티드에 대한 항체의 용도에 관한 것이다. 마지막으로, 표면에 위치한 폴리펩티드를 통하여 항캄필로박터제를 동정하기 위한 방법 및 캄필로박터의 검출 방법이 개시되어 있다.
캄필로박터, 모이어티, 펠릿
Description
이 출원은 2003년 11월 25일자로 출원된 미국 임시 특허 출원 제60/524,617호의 비(非)임시 출원으로서, 상기 임시 출원 전부를 본 명세서에 참조로 포함한다. 본 출원에서 언급한 모든 특허 및 비(非)특허 참조 문헌 전부를 본 명세서에 참조로 포함한다.
본 발명은 빈창자캄필로박터의 세포 표면에 위치한 폴리펩티드 및 감염에 대한 면역화, 항캄필로박터 활성을 갖는 화합물의 동정 및 진단에 대한 이들의 용도에 관한 것이다.
캄필로박터
감염의 발생
1973년에 인간 병원균으로서 그람 음성(Gram-negative) 미산소균인 캄필로박터의 감염 발발이 맨 처음 확인되었다. 전통적으로 시겔라 종(Shigella species spp). 및 살모넬라 (Salmonella) spp .가 결합 된 식품 매개 병원균으로 인지되는 것보다 더 질병을 일으키며, 선진국에서 설사병의 가장 흔한 박테리아 원인이 되고 있다. 상이한 질환을 야기하는 균주인 C. 제주니 (jejuni)는 캄필로박터증의 99%를 일으키는 가장 중요한 원인이 되고 있다. 세계적인 규모에서, 상기 유기체가 맨 처 음 병원균으로 인식된 이래, 관찰 결과 계속 발병한다는 다수의 보고가 있다. 실제로, 현재 세계 보건 기구 (World Health Organisation)는 세계적으로 캄필로박터증을 일으키는 박테리아를 장염의 가장 중요한 인자로 인지하고 있다. 국제 공공 건강 담당자들 (International public health officials)은 C. 제주니 단독으로 매년 전세계의 설사병의 400 내지 500만 건을 일으키고 있고, 2000년도 U. S. 최근 데이터 (U. S. Recent data)에서 식품 매개 질환의 더 잘 알려진 다른 원인에 비추어 그 중요성을 설명하며 가장 주요한 식품 매개 병원균이라고 하였다. 캄필로박터는 살모넬라 또는 이. 콜라이 (E. coli) 식품 매개 질환보다 더 많은 경우에 입원 및 사망률이 높다. 데이터 수치로는, 캄필로박터는 55% 이상의 예(cases)와 33% 이상의 입원율을 나타낸다
캄필로박터
감염시 증상
설사는 캄필로박터증과 가장 일치되고 두드러진 징후에 해당한다. 때때로 출혈을 하기도 한다. 또한, 주제니 감염의 통상적인 증상으로는 열, 메스꺼움, 구토, 복통, 두통 및 근육통이 있다. 대부분의 경우 가벼운 증상을 나타내어 입원하지 않고, 자가 치유될 수 있다. 그러나, C. 제주니 감염은 심각하고 치명적일 수 있다. 다른 질환 (예컨대, 암, 간질환 및 면역 결핍 연관 질환)의 경우보다 사망률이 더 높다. 5세 이하의 아이들과 15-29세의 청소년은 가장 빈번하게 영향을 받는 연령 집단이다. 잠복기 (노출되고 맨 처음 증상이 발병하는 사이의 기간)는 통상적으로 섭취 후 2 내지 5일이지만, 겨우 2일뿐이거나 10일이 지난 후 발병할 수도 있다. 질병은 보통 1주일 정도 지속 되지만, 심한 경우 3주까지 지속 될 수 있다 (CDC Guidelines for confirmation of food-borne disease outbreaks. MMWR, 1996; 45:59).
캄필로박터의
장기 예후(豫後)
캄필로박터 감염은 때때로 장기 예후 (long-term consequences)일 수 있다. 몇몇 환자들은 길레인 바레 (Guillain-Barre') 증후군이라 불리는 질환으로 발전되는데, 이는 캄필로박터증에 이어서 신체의 신경에 영향을 준다. 드물게라도, 서방에서는 급성 일반 마비 (acute generalised paralysis)를 일으키는 가장 일반적인 원인이 된다. 캄필로박터 환자들 중에서 소수는 설사병 후에 몇 주가 지난 후에 발병된다. 환자의 면역계가 캄필로박터 성분들에 대항하여 항체를 만들고, 상기 항체는 몸통의 신경 세포의 성분이 박테리아의 성분과 화학적으로 유사하기 때문에 몸통의 신경 세포 성분을 공격하여 발병하는 것이다. 길레인 바레 증후군은 발에서 시작하여 몸통으로 번진다. 쑤시는 감각이 약해져서 마비를 일으킬 수 있다. 몇 주 내지 몇 달간 지속 되고, 종종 집중 치료를 필요로 한다. 흔히들 완치되고 있으나, 심각한 신경 손상을 입는 환자도 있다. 환자들 중 약 15%가 1년 후에 누워만 있거나 휠체어에 의지하게 된다. 약 1000건 중 1건 (0.1%)은 캄필로박터증이 길레인 바레 증후군을 일으키는 것으로 보고되었다. 영국에서 길레인 바레 증후군의 40%는 캄필로박터증 이후에 발생한다.
밀러 피서 증후군 (Miller Fisher Syndrome)은 또 다른 신경 증후군을 수반할 수 있고, 또한 면역 의태에 의하여 야기된다. 밀러 피서 증후군에서, 몸통 신경보다 머리의 신경에 더 영향을 준다.
캄필로박터 감염과 연관될 수 있는 또 다른 만성 조건은 라이터 증후군이라고 칭하는 관절염이다. 이것은 무릎과 허리 등의 체중 부하가 많은 관절에 가장 흔한 반응성 관절염이다. 이는 특정 유전적 구성체와 강하게 결합 된 합병증으로서, 인간 림프구 항원 B27 (HLA-B27)을 가진 사람들이 가장 민감하다.
또한, 캄필로박터는 충수염을 일으키거나, 복강 (복막염), 심장 (심근염), 중추 신경계 (수막염), 쓸개 (쓸개염), 요로 및 혈류를 감염시킬 수 있다.
참조:
1. Ang CW 등. (2001) Infect Immun. 69 (4): 2462-2469.
2. Rees 등. (1995) N Engl J Med 333: 1374-1379.
캄필로박터증의
치료
캄필로박터증을 앓는 환자들은 탈수가 지속시키기 위하여 설사가 일어나는 동안 다량의 수분을 섭취한다. 로페라미드 등의 지사제를 투약하여 일부 증상을 완하시킬 수 있다. 보통 캄필로박터는 자가 치유 질환이나, 확인된 경우 항생제로 특정 치유하여 병의 경과를 단축시킬 수 있다. 더 심각한 위창자염의 경우, 보통 배양 결과가 알려지기 전에 항생제를 투약한다. 마이크로라이드 항생제 (에리트로마이신, 클라리트로마이신 또는 아지트로마이신)는 C. 제주니에 가장 효과적인 약제이다. 플루오로퀴놀론 항생제 (시프로프록사신, 레보프록사신, 가티프록사신 또는 목시프록사신) 또한 사용될 수 있다.
그러나, 항균 물질에 대한 캄필로박터의 내성은 다수의 국가에서 보고되었고, 증가하고 있다 (Pedungton and Kaneene (2003) J. Vet. Med. Sci. 65 (2): 161-170). 퀴놀론 내성은 유럽, 아시아 및 미국에서 증가사고 있다 내성의 중가는 적어도 부분적으로는 가금 사료에 항생제를 사용하는 것과 관련 있다 (Smith 등. (1999) N Engl J Med 340: 1525-1532).
캄필로박터를
치료, 예방 및 진단하기 위한 새로운 방법
발병률의 증가와 광범위한 내성의 존재 때문에, 캄필로박터 감염을 치료 및 예방을 위한 새롭고 효과적인 물질의 개발이 절실히 요청된다. 한편으로는, 내성의 발생 때문에, 신규한 항 캄필로박터 화합물이 필요하다. 또 다른 한편으로는, 관찰 연구와 실험 연구가 백신 개발의 개념을 뒷받침하면서, 인간, 특히 위험 집단 중에서 발달된 획득 면역성의 증거를 제시하고 있다 (Scott and Tribble (2000) In : Campylobacter,2nd ed. Ed. by Nachamkin and Blaser, American Society for Microbiology, pp. 303-319). 또한, 신규하면서도 빠르고 믿을만한 캄필로박터 감염의 진단 방법이 필요하다.
상기 목적은 면역계 및/또는 항체에 대한 표적, 독성 세포 억제제에 대한 표적, 또는 진단시 지시 모이어티에 대한 표적으로서 작용할 수 있는 적합한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드의 용도 및 동정을 통하여 달성할 수 있다.
발명의 요약
본원은 빈창자캄필로박터의 표면에 위치한 폴리펩티드류에 관한 것이다. 본 출원의 문맥에서, '표면에 위치한' 폴리펩티드란 적어도 부분적으로 (즉, 폴리펩티드 분자 집단의 폴리펩티드의 사슬 부분) 빈창자캄필로박터 세포의 외막의 바깥에 위치한 폴리펩티드를 가리킨다. 따라서, 표면에 위치한 폴리펩티드는 외막의 바깥 공간에 완전하게 또는 부분적으로 노출된 폴리펩티드이다. 또한, 표면에 위치한 폴리펩티드류는 본 명세서에서 설명되는 바와 같이 pH가 낮은 표면 단백질 추출에 의하여 생성되는 부분에서 확인될 수 있는 모든 폴리펩티드류 또는 폴리펩티드 절편을 포함한다.
공간에 표면에 위치한 폴리펩티드류를 노출시키는 것이 상기 폴리펩티드류와 상호 반응하는 화합물 (예컨대, 박테리아 감염을 예방, 치료 또는 진단하는데 사용되는 화합물)은 종종 효과적으로 외막을 통과하거나 진입할 필요가 없다는 것을 의미하기 때문에, 표면에 위치한 폴리펩티드류는 박테리아 감염의 항균 요법 진단시 매력적인 표적이 된다.
빈창자캄필로박터 폴리펩티드의 세포 표면 위치는 현재 오직 실험적으로만 결정할 수 있으며, 이러한 위치에 대하여 어떠한 공통된 분류 신호 또는 모티프도 알려져 있지 않기 때문에 생물 정보학에 의하여는 결정할 수 없다. 폴리펩티드류가 원형질막 주위 공간에 진입했는지 여부는 어느 정도의 정확성으로 예측할 수 있으나, 폴리펩티드류의 표면 정위(定位)를 확인하는 일반적인 모티프가 없으므로, 주어진 원형질막 주위 (또는 비원형질막 주위) 폴리펩티드를 표면으로 운송할 것인지는 서열만으로는 예측할 수가 없다. 확인된 표면 폴리펩티드류의 수는 빈창자캄필로박터에서 비교적 낮고, 대부분이 편모 구조 단백질이며, 소수가 PEB1-4와 같이 편모가 없는 종류의 표면 단백질이다.
본 발명자들은 빈창자캄필로박터의 세포 표면 부분에서 51개의 서로 다른 폴리펩티드류를 동정하였다. 사용된 방법은 상대적으로 높은 수준으로 발현되는 폴리펩티드류를 동정한다. 비교적 많은 양으로 존재하는 것과 표면에 노출된 것의 결합은 상기 폴리펩티드류를 항체에 대한 표적으로 매우 적합하게 하고, 따라서 수동 또는 능동 면역화/예방 접종에의 사용하게 한다.
따라서, 첫 번째 측면에서, 본 발명은
- SEQ ID NO : 1-51의 표면에 위치한 캄필로박터 폴리펩티드류로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드, 또는
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 또는
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포, 또는
- 상기 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체
를 포함하는 약제로서 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다.
또 다른 주요한 측면에서, 본 발명은
- SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 캄필로박터, 바람직하게는 빈창자캄필로박터 감염에 대하여 동물 또는 인간의 면역화을 위한 약제를 제조하기 위한 용도에 관한 것이다.
나아가, 주요한 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 결합할 수 있는 항체의, 동물 또는 인간에게서 캄필로박터, 바람직하게는 빈창자캄필로박터를 예방 또는 치료하기 위한 약제를 제조하는 용도에 관한 것이다.
51개의 표면에 위치한 폴리펩티드류 중 확인된 15개 (SEQ ID NO : 37- 51)는 다른 박테리아의 필수 유전자를 이용한 상동성 조사에서 드러난 36,000 이상의 다른 위치 중에서 이미 설명된 바 있다 (WO 02/077183 참조). WO 02/077183는 동정된 폴리펩티드류의 세포하(細胞下) 위치 선정 또는 그들의 발현 수준을 결정하는 것에 대하여 전혀 기재되어 있지 않다.
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 결합할 수 있는 항체에 관한 것이다.
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 결합할 수 있고, 무손상 빈창자캄필로박터 세포와 결합할 수 있는 항체에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 상기 항체들을 개선하는 방법에 관한 것이다
또한, 비교적 많은 양으로 존재하는 것과 표면에 노출된 것의 결합은 본 발명자들에 의하여 동정 된 51종의 폴리펩티드류를 무손상 세포를 고감도로 검출함으로써 캄필로박터증을 진단하기 위한 표적으로서 매우 적합하게 한다. 따라서, 또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 세포 표면 위치한 폴리펩티드류을 인지할 수 있는 지시 모이어티를 이용하여 빈창자캄필로박터 또는 이들의 부분을 검출하는 방법에 관한 것이다.
또한, 51종의 폴리펩티드류의 표면 위치 선정은 이들을 억제제에 대한 표적으로서 적합하게 한다. 상기 억제제는 살균 또는 정균할 수 있고, 또는 숙주 유기체 (발병력)와 빈창자캄필로박터의 상호 반응을 차단할 수 있다. 따라서, 또 다른 주요한 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 세포 표면 위치한 폴리펩티드류의 억제제를 동정하는 방법에 관한 것이다.
정의
- "백신"은 인간 또는 동물의 미생물에 대항하여 방어 면역 반응을 유발할 수 있는 조성물을 가리키는데 사용된다.
- "방어 면역 반응"이란 유기체에서 기억(memory)을 유도하여, 결과적으로 감염원, 본 명세서에서는 제주니를 1차 반응보다는 2차 반응에 의하여 대처하며, 따라서 숙주 생물에서의 그 영향을 감소시키는 면역 반응 (체액성/항체 및/또는 세포성)을 나타내기 위하여 사용된다.
- "폴리펩티드"는 다르게 특정하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 경우 폴리펩티드란 용어는 폴리펩티드의 변이체 또한 가리킬 수 있다. 폴리펩티드류는 항원성 폴리펩티드류인 것이 좋다.
- "절편"은 폴리펩티드의 비 전장 부분을 가리키는데 사용된다. 따라서, 절편 그 자체 또한 폴리펩티드이다.
- "변이체"란 주어진 참고 폴리펩티드의 '변이체'가 상기 참고 폴리펩티드와 일정 부분의 서열이 동일한 것이나, 상기 참고 폴리펩티드와 일치하는 것은 아닌 폴리펩티드를 가리킨다.
- "항원/항원성의/항원성/면역원/면역원성의/면역원성"은 모두 면역 반응을 유발할 수 있는 능력을 나타낸다.
- "면역원성 담체"란 직접 또는 간접적으로 면역 반응을 돕거나 강화시키는 화합물을 나타낸다.
- "발현 벡터"란 폴리뉴클레오티드 서열로부터 폴리펩티드를 제조하는데 사용되는 바람직하게는 재조합, 플라스미드 또는 파지 또는 바이러스를 말한다. 발현 벡터는 (1) 예컨대, 프로모터 또는 인핸서와 같은 유전자 발현을 조절하는 역할을 하는 유전 인자 또는 인자들, (2) 단백질로 전사하고 번역하며 (1)의 인자에 실시가능하게 연결된 구조 서열 또는 코딩 서열, 및 (3) 적절한 전사 개시 서열 및 종결 서열의 집합으로 이루어진 발현 구성을 포함한다.
- 폴리펩티드의 "결합 파트너"란 상기 폴리펩티드에 결합 될 수 있는 분자를 말한다. 그러한 결합은 또 다른 분자를 통하여 간접적일 수 있으나, 직접 결합하는 것이 좋다. 결합 파트너는 예를 들어 작은 소수성 분자 또는 예를 들어, 단백질, 탄수화물 또는 핵산 등의 세포 또는 세포외 고분자 등 모든 형태의 분자일 수 있다. 결합 파트너의 바람직한 유형으로는 항체, 리간드 또는 억제제가 있다.
- "복수성"이라는 용어는 1개 이상, 바람직하게는 10개 이상을 가리킨다.
- "지시 모이어티"라는 용어는 주어진 폴리펩티드 및/또는 세포에 특정적으로 결합할 수 있고, 검출 신호를 생성할 수 있는 분자 또는 분자의 복합체를 포함한다. 좋기로는, 지시 모이어티는 항체이거나, 항체 분자를 포함한다. 따라서, 바람직한 지시 모이어티는 검출 물질과 복합되어 있는 항체, 또는 검출 물질에 결합되어 있는 항체이다.
- "숙주 유도 분자 또는 숙주 분자"는 C. 제주니로 감염될 수 있는 숙주 생물에서 보통 발견되는 문자를 말한다. 숙주 유도 분자는 좋기로는 숙주 폴리펩티드이고, 좋기로는 인간 폴리펩티드이다.
- 본 명세서에서 사용되는 "항체"라는 용어는 항체들 및 이들과 기능적으로 등가물을 포함하는 것을 가리킨다. 따라서, 이는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 (mAbs), 인간화, 인간 또는 키메라 항체, 단쇄 항체, 및 Fab 절편, F(ab')2 절편, Fab 발현 라이브러리에 의하여 제조되는 절편, 항개체 특이형(個體特異型抗體), 항체 절편을 포함하는 하이브리드와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 항체의 결합 절편, 및 이들 중 어느 것과 에피토프 결합한 절편을 포함한다. 또한, 상기 용어는 다가 항체, 양특이성 항체와 같은 다 특이성 항체 및 모노클로날 항체의 혼합물을 포함한다.
- "해리 정수, Kd"는 예를 들어 항체와 그 항원 사이의 결합력 (또는 친화력 또는 항원항체결합력)을 기술하기 위한 척도이다. Kd가 작을수록 결합력은 강한 것이다.
- 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 항체와 연관하여 사용하는, 본 명세서에 개시된 "격리된"은 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 항체의 자연적, 통상적으로 세포 환경의 성분으로부터 동정 되고 분리되며, 분리되거나 회복된 것을 말한다. 자연 환경의 오염 성분은 폴리펩티드를 진단 또는 치료용으로 사용하는데 으레 방해하는 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비 단백질성 용질을 포함할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 항체는 격리된 것이 좋고, 본 발명의 백신 및 다른 조성물은 격리된 폴리펩티드 또는 격리된 폴리뉴클레오티드 또는 격리된 항체를 포함하는 것이 좋다.
발명의 상세한 설명
표 1은 13종의 무작위 선별된 빈창자캄필로박터 및 1종의 캄필로박터 콜라이 균쥬의 8종의 항원 발생. 목록의 14종의 균주로부터 전체 세포 박테리아 세포 용해질을 웨스턴 블라팅하고, 모든 항원에 대한 혈청으로 탐침하였다.
2003년 11월 21일 출원된 덴마크 우선권 출원 PA2003 01726 및 2003년 11월 25일 출원된 미국 가 출원 제60/524,617호의 List 1이 본 발명에 참조 통합되었다.
약제용 조성물
가장 주요한 측면에서, 본 발명은
- SEQ ID NO : 1-51의 표면에 위치한 캄필로박터 폴리펩티드류로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포, 또는
- 상기 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체
를 포함하는 약제로서 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다.
주요한 구체예에서, 조성물은
- SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함한다.
상기 조성물은 그것의 필요에 따라 개체의 능동 면역화용 백신으로서 사용될 수 있다. 이는 "본 발명의 백신 조성물 및 백신화 방법" 단락에 기재되어 있다.
본 발명의 양호한 실시 상태에 있어서, 조성물은 SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 조성물은 SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
또 다른 중요한 실시 상태에 있어서, 조성물은 SEQ ID NO : 1-51의 표면에 위치한 캄필로박터 폴리펩티드류로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드를 결합할 수 있는 항체를 포함한다.
상기 조성물은 예를 들어, 그것의 필요에 따라 개체를 수동 면역화하는데 사용될 수 있다. 이는 "본 발명의 항체 및 항체를 배양하는 방법"에 기재되어 있다.
본 발명의 백신 조성물 및
백신화
방법
백신화의 또는 능동 면역화의 목표는 항원성 조성물 또는 면역성 조성물을 이용하여 감염 미생물에 기억 대응을 유도하는 것에 의하여 방어 면역을 제공하는 것이다. 따라서, 백신은 인간 또는 동물의 미생물에 대한 방어 면역 반응을 유도할 수 있는 조성물이다. 면역 반응은 예를 들어, 특정 T 세포 반응 또는 항체 반응과 같은 세포성 반응 및/또는 체액성 반응일 수 있다.
따라서, 주요 실시 상태에 있어서, 상기 조성물은 백신 조성물이다. 즉, 본 발명은 다음을 포함하는 조성물의 백신으로서의 용도에 관한 것이다.
- SEQ ID NO : 1-51의 표면에 위치한 캄필로박터 폴리펩티드류로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포.
본 명세서의 변이체는 상기 서열에 대하여 적어도 95%의 서열 상동성, 이를 테면 적어도 96%, 예를 들면 적어도 97%, 이를 테면 적어도 98%, 예를 들면 적어도 99%의 서열 상동성을 가지는 것이 좋다.
상기 조성물의 일 구체예에서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 1, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 2, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 3, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 4, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 5, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 6, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 7, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 8, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 9, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 10, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 11, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 12, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 13, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 14, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 15, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 16, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 17, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 18, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 19, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 20, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 21, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 22, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 23, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 24, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 25, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 26, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 27, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 28, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 29, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 30, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 31, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 32, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 33, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 34, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 35, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 36, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 37, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 38, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 39, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 40, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 41, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 42, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 43, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다. 양호한 일 실시 상태에 있어서, SEQ ID NO : 43의 X1은 V이고 X2는 A이며 X3은 T이다. 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, SEQ ID NO : 43의 X1은 A이고 X2는 T이며 X3은 A이다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 44, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 45, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 46, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 47, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 48, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 49, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 50, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 51, 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체를 포함한다.
상기 조성물의 일부 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열로 구성된다. 또 다른 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드는 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열 또는 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체뿐만 아니라 his-태그, 즉 폴리히스티딘, 태그와 같은 태그를 포함한다.
상기 조성물은 SEQ ID NO : 1-51 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종의 폴리펩티드만을 포함할 수 있다. 그러나, 다른 실시 상태에 있어서, 상기 조성물은 SEQ ID NO : 1-51의 군의 1종 이상의 폴리펩티드 및/또는 SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 절편을 포함한다. 따라서, 본 발명에 의한 조성물은 이를테면 2, 예를 들어 3, 이를테면, 예를 들어 5, 이를테면 6, 예를 들어 7, 이를테면 8, 예를 들어 9, 이를테면 10, 이를테면 5 내지 10 범위의 다수의 폴리펩티드 및/또는 절편과 같이 1종 이상이거나, 또는 예를 들어 10 내지 20 범위와 같이 10종 이상인, SEQ ID NO : 1-51 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는 서로 다른 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
유사하게, 상기 조성물은 본 발명의 1종의 폴리뉴클레오티드, 1종의 발현 벡터 또는 1종의 재조합 바이러스 또는 재조합 세포만을 포함할 수 있다. 그러나, 다른 실시 상태에 있어서, 상기 조성물은 1종 이상의 폴리뉴클레오티드, 1종 이상의 발현 벡터 또는 1종 이상의 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함한다. 따라서, 본 발명에 의한 조성물은 이를테면 2, 예를 들어 3, 이를테면, 예를 들어 5, 이를테면 6, 예를 들어 7, 이를테면 8, 예를 들어 9, 이를테면 10과 같이 1종 이상이거나, 또는 예를 들어 10 내지 20 범위와 같이 10종 이상인, 본 명세서에 기재된 본 발명의 서로 다른 폴리뉴클레오티드, 발현 벡터 또는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포일 수 있다.
나아가, 일부 실시 상태에 있어서, 본 발명의 재조합 세포는 SEQ ID NO : 1-51의 군 중 1종 이상이 폴리펩티드 및/또는 1종 이상의 항원성 절편 또는 SEQ ID NO : 1-51로부터 선택되는 폴리펩티드의 변이체를 발현할 수 있다. 따라서, 본 발명에 의한 조성물은 이를테면 2, 예를 들어 3, 이를테면, 예를 들어 5, 이를테면 6, 예를 들어 7, 이를테면 8, 예를 들어 9, 이를테면 10, 이를테면 5 내지 10 범위의 다수의 폴리펩티드 및/또는 항원성 절편 또는 변이체와 같이 1종 이상이거나, 또는 예를 들어 10 내지 20 범위와 같이 10종 이상인, SEQ ID NO : 1-51 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는 서로 다른 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 또 다른 실시 상태에 있어서, 본 발명의 사용을 위한 조성물은 본 명세서에 기재된 다수의 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함한다.
폴리펩티드를 포함하는 백신
양호한 실시 상태에 있어서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36 중 어느 하나 또는 SEQ ID NO : 37-51 중 어느 하나, 또는 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 바람직한 절편 및 변이체는 본 명세서의 절편 및 변이체 관련한 단락에 기재되어 있다.
따라서, 상기 실시 상태에 있어서, 항원성 또는 면역원성은 빈창자캄필로박터 세포의 표면상에 보통 위치하는 폴리펩티드를 직접 투여하는 것에 의하여 제공된다. 특정한 일 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드류는 백신 조성물이 서로 다른 MHC 제I류 분자와 같이 서로 다른 MHC 분자와 결합할 수 있는 다발성 폴리펩티드를 포함하도록 선택된다. 좋기로는, 백신으로서 사용하기 위한 조성물은 가장 빈번하게 발생하는 MHC 제I류 분자와 결합할 수 있는 절편 및/또는 폴리펩티드를 포함한다. 본 발명의 특정한 일 실시 상태에 있어서, 조성물은 1종 이상의 MHC 제I류 분자와 결합할 수 있는 절편 및/또는 폴리펩티드 및 1종 이상의 MHC 제II류 분자와 결합할 수 있는 절편 및/또는 폴리펩티드를 포함한다. 그러므로, 일부 구체예에서, 백신 조성물은 특정 세포 독성 T-세포 반응 및/또는 특정 헬퍼 T-세포 반응을 일으킬 수 있다. MHC 분자에 대한 결합은 예를 들어 An- dersen 등. (1999) Tissue Antigens 54: 185; 또는 by Tan 등. (1997) J. Immunol. Methods 209: 25.에 기재된 바와 같이 결정된다.
어드쥬번트
및 면역성
담체
좋기로는, 본 발명의 백신으로서 사용하기 위한 조성물, 즉 백신 조성물은 본 명세서의 "본 발명에서 사용하기 위한 조성물" 단락에 기재된 바와 같이 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.
상기 조성물은 어드쥬번트를 더 포함할 수 있다. 어드쥬번트는 백신 조성물과 혼합하여 폴리펩티드 또는 다른 항원에 대한 면역 반응을 증가시키거나 변형시키는 물질이다. 어드쥬번트는 예를 들어 AlK(SO4)2, AlNa(SO4)2, AlNH4(SO4), 실리카, 백반, Al(OH)3, Ca3(PO4)2, 카올린, 탄소, 수산화 알루미늄, 인산 알루미늄, 무라밀 디펩티드, N-아세틸-무라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민 (thr-DMP), N-아세틸-노르누르아밀-L-알라닐-D-이소-글루타민 (CGP 11687, nor-MDP로서도 언급되어 있다), N-아세틸무르아미울-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록스포스포릴옥시)-에틸아민 (CGP 19835A, MTP-PE로서도 언급되어 있다), 2% 스쿠알렌/트윈-80. RTM. 에멀젼 중의 RIBI (MPL+TDM+CWS), 리피드 A를 포함하는 리포폴리사카라이드 및 유도체, 프로인드 완전 어드쥬번트 (FCA), 프로인드 불완전 어드쥬번트, 머크 어드쥬번트 65, 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 폴리 IC 및 폴리 AU 산류), 결핵균의 왁스 D, 코리네박테리움 파르붐에서 발견되는 물질, 백일해 및 리포좀 속의 구성원 또는 다른 리피드 에멀젼, 티터막스(Titermax), 이스콤스(ISCOMS), 퀼 A(Quil A), 알룬(ALUN) (US 58767 및 5,554, 372 참조), 리피드 A 유도체, 콜레라톡신 유도체, HSP 유도체, LPS 유도체, 합성 펩티드 기질 또는 GMDP, 인터류킨 1, 인터류킨 2, 몬타니드 ISA-51 및 QS-21 중 어느 하나일 수 있다.
몬타니드 ISA-51 (Seppic, Inc.)은 불완전 프로인드 어드쥬번트와 유사한 미네랄 오일 기초 어드쥬번트이고, 보통 에멀젼 상태로 투여된다 QS-21 (Antigenics; Aquila Biopharmaceuticals, Fram- ingham, MA)은 매우 순수하고, 수용액으로 다루는 수용성 사포닌이다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 어드쥬번트의 바람직한 기능성은 다음의 표에 기재되어 있다.
[표 1. 어드쥬번트 활성 모드]
| 활성 | 어드쥬번트 타입 | 장점 |
| 1. 면역조절 | 일반적으로 시토킨 네트워크를 변형하는 작은 분자 또는 단백질 | 면역 반응의 상향 조절. Th1 또는 Th2의 선택 |
| 2. 제시 | 일반적으로 자연 형태 중에서 면역원과 반응하는 양친매성 분자 또는 복합체 | 증가된 항체 반응의 중화. 더 길어진 반응 |
| 3. CLT 유도 | - 면역원을 둘러싸거나 결합할 수 있고 세포막을 분해하거나 세포막과 융합할 수 있는 입자 - 세포 표면 MHC-1에 페티드의 직접 부착을 위한 w/o 에멀젼 | 정확한 클래스 1 제한 펩티드를 산출하는 단백질의 세포질 가공 공지된 뒤섞인 펩티드의 간단한 처리 |
| 4. 표적화 | -면역원에 결합하는 특정 어드쥬번트, Kupffer 세포로 포화된 어드쥬번트 - 마크로파지 및 DCs 상의 렉틴 보고자를 표적화하는 탄수화물 어드쥬번트 | 어드쥬번트 및 면역운의 효율적인 이용 |
| 5. 데포 생성 | - 단기간용 w/o 에멀젼 - 장기간용 나노스피어 또는 마이크로스피어 | 상동. 또한, 선별하여 표적화하는 경우 반응의 유형을 결정할 수 있다. 효율 단일 용량 백신의 효능 |
Source: JohnC. Cox andAlan R. Coulter Vaccine 1997 Feb; 15 (3): 248-56
본 발명에 의한 백신 조성물은 1종 이상의 다른 어드쥬번트를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 캄필로박터 폴리펩티드 또는 1종 이상의 이들의 절편 및 어드쥬번트가 적합한 순서에 따라 각각 투여되는 것 또한 고려될 수 있다.
종종, 선택되는 어드쥬번트는 프로인드 완전 어드쥬번트 또는 프로인드 불완전 어드쥬번트, 또는 예를 들어 백반 침전 항원과 결합하여 사용되는 사멸 B. 백일해 유기체이다. 어드쥬번트의 일반적인 논의는 Goding, Monoclonal Antibodies: Principles & Practice (2nd edition, 1986) at pages 61-63에서 제공된다. 그러나, Goding은 관심 항원의 분자량이 낮거나 면역원성이 작은 경우, 면역원성 담체와 커플링하는 것을 추천한다 (아래 참조).
또한, 다양한 사포닌 추출물 및 시토킨은 면역원성 조성물에서 어드쥬번트로서 유용하다고 제안되어 있다. 최근, 어드쥬번트로서 잘 알려진 시토킨인 그라눌로사이트-마크로파지 콜로니 자극 인자 (GM-CSF)가 제안되었다 (WO 97/28816).
또한, 본 발명의 백신 조성물은 예를 들어 단백질 또는 다당류의 스캐폴드 구조와 같은 면역원성 담체를 포함할 수 있고, 캄필로박터 폴리펩티드 또는 이들의 절편과 결합할 수 있다. 백신 조성물에 존재하는 캄필로박터 폴리펩티드 또는 항원성 절편 또는 이들의 변이체는 예컨대 단백질과 같은 면역원성 담체와 결합할 수있다. 담체 단백질에 폴리펩티드가 결합하거나 합체하는 것은 공유 또는 비공유일 수 있다. 면역원성 담체 단백질은 어드쥬번트로서 독립적으로 존재할 수 있다. 담체 단백질은 예를 들어 특정 절편의 활성 또는 면역원성을 증가시키거나, 안정화시키거나, 생물학적 활성을 증가시키거나, 혈청 반감기를 증가시키기 위하여 특정 절편의 분자량을 증가시키는 작용을 할 수 있다. 또한, 면역원성 담체 단백질은 캄필로박터 폴리펩티드 또는 이들의 절편을 T-세포에 보조적으로 전달할 수 있다. 담체 단백질은 열쇠구멍삿갓조개헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin), 트랜스페린, 소혈청 알부민, 인간 혈청 알부민, 티로글로빈 또는 난(卵)알부민, 이뮤노글로빈 등의 혈청 단백질, 또는 인슐린 등의 호르몬일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 파상풍 톡소이드 및/또는 디프테리아 톡소이드는 본 발명의 일 실시 상태에 있어서 적당한 담체에 해당한다. 별도의 방법으로 또는 추가적으로, 예를 들어 세파로스와 같은 덱스트란을 첨가할 수 있다. 그러나 또 다른 실시 상태에 있어서, T 세포에 예컨대 폴리펩티드 또는 이들의 절편을 주입할 수 있는 가지 세포 등의 항원 존재 세포는 담체 단백질로서 같은 효과를 얻을 수 있도록 첨가할 수 있다.
백신 조성물을 제조하는 방법은 US 5,470, 958 및 거기의 참조 문헌에 기재되어 있다. 본 발명의 백신 조성물의 폴리펩티드 성분의 유효량은, 주사하는 경우, 인간을 대상으로 하여 통상적으로 약 0.1 내지 약 1000 ㎍이고, 이를테면 예컨대 약 1 내지 900 ㎍이며, 예를 들어 약 5 내지 약 500 ㎍이며, 일반적으로 대상 동물의 체중을 기준으로 약 0.01 내지 10.0 ㎍/Kg이다. 상기의 범위는 단지 암시적인 것ㅇ로서 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
본 발명의 항원성 폴리펩티드의 유효량은 면역 조절 물질이 없는 상태에서 탐지 가능한 체액성 면역 반응을 유발시킬 수 있는 양일 수 있다. 많은 면역원에서, 이것은 인간 대상을 기준으로 약 5-100 ㎍이다. 사용되는 면역원의 적정량은 유발하고자 하는 면역 반응에 따라 다르다. 또한, 정확한 필요 유효량은 피실험체의 종, 연령 및 일반적인 조건, 처리 조건의 엄격함, 투여 방식 등에 따라, 피실험체마다 다양할 것이다. 그러므로, 정확한 유효량을 특정하는 것이 항상 가능한 것은 아니다. 그러나, 적절한 유효량은 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 당해 기술 분야의 선행 지식 또는 통상적인 실험법만을 이용하여 결정할 수 있다.
DNA
백신 조성물 및 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함하는 백신 조성물
DNA 또는 RNA 백신은 관심 폴리펩티드, 본 명세서에서 SEQ I D NO : 1-51의 모든 폴리펩티드 또는 항원성 절편 또는 이의 변이체를 코딩하는 서열에 조작상 연결된 발현 조절 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 구조를 환장의 세포 중에서 과발현시킴으로써, 환자에게 예를 들어 항원성 폴리펩티드 결정 인자를 환자에 도입할 수 있다. 상기 절편이 메티오닌 개시 코돈을 함유하지 않기 때문에, 상기 코돈은 선택적으로 발현 조절 서열의 일부를 포함한다. 폴리뉴클레오티드 구조는 비복제 폴리뉴클레오티드 및 선형 폴리뉴클레오티드, 환상 발현 벡터 또는 자동 복제 플라스미드 또는 바이러스 발현 벡터일 수 있다. 상기 구조는 숙주 게놈에 통합될 수 있다. 포유 동물 세포를 전달할 수 있는 발현 벡터는 본 발명에 따라 개별적으로 면역시키는 방법에 이용될 수 있다. 발현 벡터의 제조 방법은 당해 기술 분야에서 잘 알려져 있다 (예를 들어, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook 등., eds., Cold Spring Harbor Laboratory, 2nd Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989 참조). SEQ ID NO : 1-51로부터 선택되는 다수의 폴리펩티드 및/또는 본 발명의 다수의 항원성 절편을 발현하는 복수의 유전자를 포함하고, 그로 인하여 다양하게 미리 선택한 표적에 대하여 동시에 면역화하게 하는 것이 바람직하다.
또한, 백신은 관심 있는 특이적 항원 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 생벡터이나 무해한 벡터, 즉 독성이 약화되거나 감소 된 이. 콜라이 또는 살모넬라 세포와 같은 세포 또는 바이러스 등에 결합함으로써 제조될 수 있다. 무해 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 목적하는 수령자에 주사한다. 상기 재조합 세포는 죽었거나 살아있을 수 있다. 만일 살아 있다면, 재조합 유기체는 숙주의 면역계에 항원성 폴리펩티드가 존재하거나 생산하는 동안에 숙주에서 복제될 수 있다. 이러한 유형의 백신은 복제되지 않는 유형의 백신보다 더 효과적일 수 있다고 사료된다. 상기 백신이 성공적이기 위하여, 벡터 유기체는 생육 가능해야 하고, 또한 자연적으로 비병원성 또는 독성이 약화 되거나 감소 된 표현형이어야 한다.
거기에 이용하기 위하여 독성약화 박테리아 및 적절한 박테리아 균주를 이용하는 백신화 전략은 예컨대, Makino 등. (2001) Microb. Pathog. 31: 1-8; Gentschev 등. (2002) Int. J. Med. 291: 577-582; Turner 등. (2001) Infect. Immun. 69: 4969-4979; WO 99/49026; 및 WO 03/022307에 기재되어 있다.
이용 가능한 벡터의 예로는 WO 90/07936, WO 91/02805, WO 93/25234, WO 93/25698 및 WO 94/03622에 개시된 레트로바이러스, Berkner, Biotechniques 6: 616-627,1988 ; Li et Hum. Gene Ther. 4: 403-409,1993 ; Vincent et Nat. Genet. 5: 130-134,1993 ; and Kolls et Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 215-219, 1994)에 개시된 아데노바이러스, 미국 특허 제4,769,330호, 미국 특허 제5,017,487호 및 WO 89/01973에 개시된 폭스 바이러스, WO 90/11092에 개시된 네이키드 DNA, WO 93/03709에 개시된 폴리양이온성 분자에 복합된 폴리뉴클레오티드 분자, 및 Wang et Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 7851,1987에 개시된 리포좀과 연결된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 있다. 일 실시 상태에 있어서, DNA는 Curiel et Hum. Gene Ther. 3: 147-154,1992; Cotton et Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 6094,1992에 개시된 바와 같이, 사멸 아데노바이러스 또는 불활성 아데노바이러스일 수 있다. 다른 적절한 조성물은 Wu et J. Chem. 264: 16985-16987, 1989)에 개시된 바와 같이 DNA-리간드와 Felgner 등., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 7413-7417,1989에 개시된 리피드-DNA 조합을 포함한다. 또한, 세포가 네이키드 DNA를 취하는 효율은 생분해성 라텍스 비드 상에 DNA를 코팅함으로써 증가 될 수 있다.
백신 벡터는 면역원성 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 조작상 연결되는 적절한 프로모터를 포함하는 것이 좋다. 표적 세포 중에서 높은 수준으로 전사를 개시할 수 있는 모든 프로모터는 본 발명에서 사용 가능하다. 사이토메갈로바이러스 (DeBernardi et Proc Natl Acad Sci USA : 9257-9261 [1991] 및 거기의 참조 문헌), 마우스 메탈로티오닌 I (Hammer et J Mol Appl Gen 1: 273-288 [1982]), HSV 티미딘 키나아제 (McKnight, Cell 31:355-365 [1982]) 및 SV40 초기 프로모터 (Benoist 등., Nature 290:304-310 [1981])과 같이 조직 특이적이지 않는 프로모터들 또한 사용할 수 있다.
백신화
방법
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 빈창자캄필로박터 감염시 동물 또는 인간의 면역화를 위한 약물 제제를 위한,
- SEQ ID NO : 1-51, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36 또는 SEQ ID NO : 37-51으로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 세포 또는 재조합 바이러스의 1 이상의 용도에 관한 것이다. 면역화는 방어 면역 반응을 유도하는 것이 좋다.
유사하게, 본 발명은
- SEQ ID NO : 1-51, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36 또는 SEQ ID NO : 37-51으로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 세포 또는 재조합 바이러스를 1 이상 포함하는,
빈창자캄필로박터 감염에 대한 동물 또는 인간의 면역화 방법에 관한 것이다.
동물은 모든 새 또는 포유류, 예컨대 오리, 칠면조, 소 또는 돼지일 수 있다. 특히, 인간의 표적 집단은 4세까지의 어린이 집단, 산업 국가의 인구 집단 또는 개발 도상국의 나이브 또는 부분 면역 여행자들 집단과 같이 위험에 노출된 집단의 개개인일 수 있다.
본 발명에 의한 조성물의 투여 모드는 정맥 내 투여 또는 피하 투여, 진피 내 투여, 근육 내 투여, 비강 내 투여, 경구 투여 및 일반적으로 점막 투여의 모든 형태 등의 체계적 투여 방법을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명에 따른 면역 효과는 예를 들어 RIA에 의하는 것과 같이, 혈청 시료 중의 항체를 분석하는 것에 의하여 측정할 수 있다. 또한, 예를 들어, T 세포 의존 항원성 폴리펩티드에 대한 증가 된 T 세포 반응성을 측정하는 것에 의하여 생체 내에서의 효과를 측정할 수 있고, 상기 증가 된 반응성은 상기 항원성 폴리펩티드에 대한 정상 면역 반응이 증진된 것을 특징으로 한다. 면역 자극 효과 또한 특히 IL-2, IL-3, IFN-γ 및/또는 GM-CSF의 증가 된 T 세포 생산량으로 측정할 수 있다. 증진된 면역 반응을 유도할 수 있는 폴리펩티드 또는 이의 절편은 예컨대, 본 발명에서 참조된 미국 특허 제07/779,499호에 기재된 바와 같이 T 세포에 의하여 증가 된 IL-2, IL-3, IFN-γ 및/또는 GM-CSF 생산을 스크리닝함으로써 미리 확인할 수 있다. 또한, Young 등. (2000) In : ed. Ed. by Nachamkin and Blaser, American Society for Microbiology, pp. 287-301에는 치료 및 예방 기술 및 조성물의 효과를 평가하는데 이용될 수 있는 적절한 동물 모델을 기재하고 있다. 잠재적인 표적 집단, 동물 모델 및 면역화 기술을 포함하여, 캄필로박터에 대한 면역화화 관련된 많은 측면이 Scott and Tribble In : 캄필로박터, ed. Ed. by Nachamkin and Blaser, American Society for Microbiology, pp. 303-319)에 기재되어 있다.
본 명세서에는 기재된 폴리뉴클레오티드 및 발현 벡터는 예를 들어 ISCOMS에 통합된 네이키드 DNA (Donnelly 등., Annu Rev Immunol 15:617-648 [1997]), 리포좀 또는 적혈구 허깨비와 같은 표준적인 방법에 의하여, 또는 입자총 전달, 칼슘 침전 또는 전기 천공에 의하여 생체 내 또는 생체 외의 표적 세포에 도입될 수 있다. 별도의 방법으로서, 동물 또는 인간 세포에 관심 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 도입하기 위한 수단으로서, 바이러스 기재 벡터를 이용할 수 있다. 바람직한 벡터는 복제 결핍 헤파티티스 바이러스 (예컨대, HBV 및 HCV), 레트로바이러스 (예를 들어, WO 89/07136 및 Rosenberg et N Eng J Med 323 (9): 570-578 [1990] 참조), 아데노바이러스 (예를 들어, Morsey 등., J Cell Biochem, Supp. 17E [1993]), 아데노 결합 바이러스 (Kotin 등., Proc Natl Acad Sci USA 87:2211-2215 [1990]), 복제 결핍 단순 헤르페스 바이러스 (HSV; Lu et Abstract, page 66, Abstracts of the Meeting on Gene Therapy, Sep. 22-26,1992, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.), 카나리아 발진병 바이러스을 포함하고, 상기 벡터의 변형된 모든 버젼을 포함한다. 생체 외에서 감염된 세포는 필요하다면 환자에게 도입하기 전에 배양하고 클로닝할 수 있다.
직접적인 생체 내 과정 외에, 세포를 동물에게서 제거하고, 변형하며, 동일 또는 다른 동물에 위치시키는데 생체 밖 과정이 이용될 수 있다. 생체 밖 상황에서 조직 세포에 본 발명에 의한 것을 코딩하는 항원성 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 도입하기 위하여 전술한 조성물을 모두 이용할 수 있다는 것은 자명하다. 섭취하기 위한 바이러스성, 물리적, 화학적 방법에 대한 프로토콜은 해당 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 따라서, 본 발명에 의한 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 환자에게서 직접 발현시킬 수 있는 벡터를 주입하기 위한 별도의 방법으로서, 환자로부터 헬퍼 T 세포를 제거하고, 동일한 항원성 폴리펩티드 또는 벡터를 이용하여 생체 밖에서 상기 T 세포를 유발하며, 동일한 환자에게 유발된 헬퍼 T 세포를 도입할 수 있다.
항체 및 본 발명의 항체를 배양하는 방법
또 다른 주요 실시 상태에 있어서, 약제용 조성물은 SEQ ID NO : 1-51의 표면에 위치한 캄필로박터 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 상기 약제는 개별적으로 필요한 경우 수동 면역화 등의 항체 요법에 이용될 수 있다.
따라서, 또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-36 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 1의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 2의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 3의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 4의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 5의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 6의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 7의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 8의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 9의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 10의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 11의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 12의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 13의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 14의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 15의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 16의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 17의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 18의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 19의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 20의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 21의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 22의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 23의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 24의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 25의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 26의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 27의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 28의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 29의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 30의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 31의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 32의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 33의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 34의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 35의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 36의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 결합할 수 있는, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있는 항체에 관한 것이다. 본 명세서에서, 특이적으로 결합한다는 것은 절대 특이성을 의미하는 것은 아니다. 또한, 일부 실시 상태에 있어서, 항체는 빈창자캄필로박터의 폴리펩티드와 서열 상동성이 높은, 예컨대 빈창자캄필로박터의 폴리펩티드와 90% 이상, 이를테면 95% 이상 또는 98% 이상의 서열 상동성을 가지는 폴리펩티드를 함유하는, 예컨대 다른 캄필로박터종의 폴리펩티드와 특이적으로 결합할 수 있다.
양호한 실시 상태에 있어서, 항체는 SEQ ID NO : 1-36, 이를테면 SEQ ID NO : 1의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 2의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 3의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 4의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 5의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 6의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 7의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 8의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 9의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 10의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 11의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 12의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 13의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 14의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 15의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 16의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 17의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 18의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 19의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 20의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 21의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 22의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 23의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 24의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 25의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 26의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 27의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 28의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 29의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 30의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 31의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 32의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 33의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 34의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 35의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 36의 폴리펩티드로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 결합할 수 있고, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있다.
또한, 양호한 실시 상태에 있어서, 본 발명의 항체는 무손상 빈창자캄필로박터 세포, 즉, 그 구조적 완전성을 유지하는 살아 있는 캄필로박터 세포 또는 죽어 있는 캄필로박터 세포, 바람직하게는 외막의 완전성을 유지하는 (즉, 외막의 투과성이 있는) 세포에 결합할 수 있다. 무손상 세포에 항체를 결합하는 것은 예컨대, Rioux 등. (2001) Infect. Immun. 69: 5162-5165 또는 Singh 등. (2003) Infect. Immun. 71: 3937- 3946에 기재된 바와 같이, 흐름 세포 측정법에 의하여 측정될 수 있다.
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 무손상 빈창자캄필로박터 세포에 결합할 수 있는, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 SEQ ID NO : 37-51 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 37의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 38의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 39의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 40의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 41의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 42의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 43의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 44의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 45의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 46의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 47의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 48의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 49의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 예를 들어 SEQ ID NO : 50의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체, 이를테면 SEQ ID NO: 51의 폴리펩티드 및/또는 절편 및/또는 이의 변이체로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 결합할 수 있는, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있는 항체에 관한 것이다.
양호한 실시 상태에 있어서, 항체는 무손상 빈창자캄필로박터 세포에 결합할 수 있고, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있으며, SEQ ID NO : 37-51, 이를테면 SEQ ID NO : 37의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 38의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 39의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 40의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 41의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 42의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 43의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 44의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 45의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 46의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 47의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 48의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 49의 폴리펩티드, 예를 들어 SEQ ID NO : 50의 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 51의 폴리펩티드로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 결합할 수 있고, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있다.
바람직한 항체는 해리 정수 또는 Kd 값이 5 X 10-6 M 이하, 이를테면 10-6 M 이하, 예를 들어 5 X 10-7 M 이하, 이를테면 10-7 M 이하, 예를 들어 5 X 10-8 M 이하, 이를테면 10-8 M 이하, 예를 들어 5 X 10-9 M 이하, 이를테면 10-9 M 이하, 예를 들어 5 X 10-10 M 이하, 이를테면 10-10 M 이하, 예를 들어 5 X 10-11 M 이하, 이를테면 10-11 M 이하, 예를 들어 5 X 10-12 M 이하, 이를테면 10-12 M 이하, 예를 들어 5 X 10-13 M 이하, 이를테면 10-13 M 이하, 예를 들어 5 X 10-14 M 이하, 이를테면 10-14 M 이하, 예를 들어 5 X 10-15 M 이하, 이를테면 10-15 M 이하로 결합한다. 결합 상수는 ELISA (예컨대, Orosz and Ovadi (2002) J. Immunol. Methods 270: 155- 162에 기재되어 있다) 또는 표면 플라즈몬 공명법과 같이 해당 기술 분야에서 공지된 방법을 이용하여 측정할 수 있다.
항체는 포유류, 바람직하게는 인간, 더욱 바람직하게는 면역 손상 환자의 수동 면역화에 사용될 수 있다. 항체를 처리하여 빈창자캄필로박터 감염을 치유하거나 예방할 수 있다.
본 발명의 항체는 다음의 바람직한 기계적 그룹을 포함한다.
1. 항바이러스로 작용하는 (박테리아의 생활력에 영향을 주는) 기능 억제 항체. 상기 항체는 완자가 면역 상태인지와 관계없이 효과적이다. 바람직하게는, 상기 항체는 생체 밖에서 빈창자캄필로박터의 성장을 항체를 첨가하지 않은 대조군에 비하여 50% 이하, 이를테면 25% 이하, 예를 들어 10% 이하, 이를테면 5% 이하로 감소시킬 수 있다.
2. 포식성 사멸을 증진시키도록 설계된 옵소닌화 항체. 상기 항체의 효율성은 환자의 면역 상태에 따라 다르나, 면역 손상 환자에게도 포식성 사멸을 매우증진시킬 수 있다.
3. 리신 또는 방사성 동위원소와 같은 독소제 또는 살균제 등의 치료 성분에 결합 된 항체. 항체에 치료 성분을 결합하는 기술은 잘 알려져 있다 (예컨대, Thorpe 등. (1982) Immunol. Rev. 62, 119-158 참조). 또한, 이러한 항체들은 환자의 면역 상태에 관계없이 효과적이다.
항체에 결합 된 치료 성분을 함유하는 항체 또는 함유하지 않은 항체는 치료용으로서 단독으로 또는 화학 요법약이나 다른 치료제와 결합하여 투여되도록 하여 사용할 수 있다.
일 실시 상태에 있어서, 본 발명의 항체는 기능 억제뿐만 아니라, 옵소닌화된다. 또 다른 실시 상태에 있어서, 본 발명의 항체는 옵소닌화하거나, 기능을 억제하지는 않는다. 후자의 항체는 예컨대, 캄필로박터의 생활력에 필수적이지 않은 표적 폴리펩티드에 대한 항체일 수 있다.
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 비-인간 동물 중에서 SEQ ID NO : 1-36로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 대한 항체를 배양하는 방법에 관한 것으로서,
a. - SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열, 또는 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 제공하는 단계,
b. 상기 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함하는 조성물을 상기 동물에 도입하는 단계,
c. 상기 동물 중에서 항체를 배양하는 단계, 및
d. 항체를 분리하고, 필요한 경우 항체를 정제하는 단계를 포함한다.
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 비-인간 동물 중에서 SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 대한 항체를 배양하는 방법에 관한 것으로서,
a. - SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열, 또는 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 제공하는 단계,
b. 상기 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함하는 조성물을 상기 동물에 도입하는 단계,
c. 상기 동물 중에서 항체를 배양하는 단계,
d. 항체를 분리하고, 필요한 경우 항체를 정제하는 단계, 및
e. 무손상 빈창자캄필로박터 세포에 결합할 수 있는 항체를 선별하는 단계를 포함하며, 이때 상기 항체는 무손상 캄필로박터에 결합할 수 있다.
상기의 방법은 인간 항체를 생산할 수 있는 형질 전환 동물 (transgenic animal)에서 행하는 것이 좋다. 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 방법은 비치료적이다.
모노클로날
/
폴리클로날
항체
본 발명의 항체는 폴리클로날 항체 또는 모노클로날 항체 또는 모노클로날 항체의 혼합물일 수 있다. 양호한 실시 상태에 있어서, 항체는 모노클로날 항체 또는 이의 절편이다. 모노클로날 항체 (Mab's)는 모든 항체 분자가 유사하고, 따라서 동일한 에피토프를 인지하는 항체이다. 항체는 모든 종류의 항체일 수 있고, 바람직하게는 IgG 또는 IgA 항체이다.
모노클로날 항체는 일반적으로 하이브리도마 세포주에 의하여 생산된다. 모노클로날 항체 및 항체 합성 하이브리도마 세포를 제조하는 방법은 당해 기술 분야에서 숙련된 자에게 잘 알려져 있다. 항체 생산 하이브리도마는 예컨대, 무한 증식 세포주와 항체 생산 B 림프구를 융합함으로써 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 다음의 단계에 의하여 제조될 수 있다. 동물을 전장 폴리펩티드 또는 이의 절편 등의 항체로 면역화한다. 상기 면역화는 통상적으로 항원을 면역 적격 포유류에 면역 유효량, 즉, 면역 반응을 일으키기에 충분한 양으로 주사하여 이루어진다. 상기 포유류는 토끼, 래트 또는 마우스와 같은 설치류가 좋다. 그 다음, 포유류는 상기 포유류가 높은 항체 분자 친화성을 나타내기에 충분한 기간 동안 추가 계획표를 유지한다. 목적하는 항체를 분비하는 면역화된 포유류 각각에서 항체 생산 세포의 부유액을 제거하였다. 항체 친화성이 높게 발현되기에 충분한 시간이 흐른 후, 동물 (예컨대, 마우스)을 희생시키고, 항체 생산 림프구를 1종 이상의 림프절, 지라 및 말초 혈액으로부터 얻었다. 지라 세포가 바람직하며, 지라 세포는 당해 기술 분야에서 숙련된 자에게 공지된 방법을 이용하여 생리 배지 중에서 세포 각각으로 기계적으로 분리할 수 있다. 항체 생산 세포는 마우스 골수종 세포주와 융합하여 무한 증식한다. 마우스 림프구는 마우스 동종 골수종과 높은 비율로 안정적으로 융합하며, 래트, 토끼 및 개구리 체세포 또한 이용할 수 있다. 목적하는 항체 생산 동물의 지라 세포는 일반적으로 폴리에틸렌 글리콜과 같은 융합제의 존재 하에, 골수종 세포와 융합함으로써 무한 증식한다. 융합 파트너로서 적절한 골수종 세포주의 다수는 예를 들어 American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Md에서 입수 가능한 P3-NS1/1-Ag4-1, P3-x63-Ag8.653 또는 골수종 라인일 수 있다.
또한, 모노클로날 항체는 재조합 DNA 기술 분야에서 숙련된 자에게 잘 알려진 다른 방법에 의하여 생성될 수 있다. 별도의 방법으로서, "복합 항체 표시 (combinatorial antibody display)" 이라 불리는 방법이 특정한 특이성을 가진 항체 절편을 동정하고 분리하기 위해 개발되었고, 이는 모노클로날 항체의 생산에 이용할 수 있다.
폴리클로날 항체는 폴리클로날 항체가 예컨대, 폴리펩티드 내에서 서로 다른 에피토프를 인지할 수 있기 때문에, 주어진 항원을 특이적으로 인지하는 항체 분자의 혼합물이다. 일반적으로, 폴리클로날 항체는 이전에 항체에 면역화된 포유류의 혈청으로부터 정제한다. 폴리클로날 항체는 예컨대, Antibodies: A Laboratory Manual, By Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988에 기재된 모든 방법에 의하여 제조될 수 있다. 폴리클로날 항체는 적절한 포유류 종, 예컨대 마우스, 래트, 토끼, 당나귀, 염소 및 양으로부터 얻을 수 있다.
특이성
본 발명의 항체는 SEQ ID NO : 1-51의 모든 폴리펩티드에 단특이적 (單特異的)일 수 있다. 또 다른 실시 상태에 있어서, 항체는 SEQ ID NO : 1-51의 모든 폴리펩티드에 적어도 1개의 특정한 부위를 가지면서, 이중 특이적 또는 다발 특이적이다.
단특이적 항체는 일가, 즉 오직 한 개의 결합 도메인을 가진다. 일가 항체에서, 면역글로불린 상존 도메인 아미노산 서열은 당해 기술 분야에서 CH1, CH2, CH3 및 CH4로 알려진 항체 분자의 구조적 부분을 포함하는 것이 좋다. 더욱 바람직하게는 당해 기술 분야에서 CL로 알려진 부분이다. 또한, 상존 도메인이 중쇄 (heavy chain) 또는 경쇄 (light chain) 상존 도메인 (각각, CH 또는 CL)일 수 있는 한, 가변성 일가 항체 조성물이 본 발명에 포함된다. 예를 들어, 경쇄 상존 도메인은 또 다른 경쇄 상존 도메인에 또는 중쇄 상존 도메인에 이황화 가교될 수 있다. 대조적으로, 중쇄 상존 도메인은 또 다른 중쇄 및 경쇄 양쪽에 가교하여 두 개의 독립된 이황화 다리를 형성하거나, 중쇄의 폴리머를 형성할 수 있다. 따라서, 또 다른 실시 상태에 있어서, 본 발명은 적어도 1개의 이황화 다리를 형성할 수 있는 시스테인 잔기를 포함하는 상존 사슬 도메인을 가지는 일가 폴리펩티드를 함유하는 조성물을 포함하고, 상기 조성물은 상기 이황화 다리에 공유 결합 된 적어도 2개의 일가 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시 상태에 있어서, 항체는 적어도 2개의 결합 도메인을 포함하는 다가 항체이다. 결합 도메인은 동일한 리간드 또는 다른 리간드에 특이성을 가질 수 있다.
이중 특이성을 포함하는 다발 특이성
양호한 실시 상태에 있어서, 본 발명은 적어도 2종의 서로 다른 단위 (entity)에 특이적으로 결합할 수 있고, 적어도 2종의 서로 다른 단위에 친화력을 가지는 다발 특이적 항체에 관한 것이다.
일 실시 상태에 있어서, 다발 특이적 항체는 적어도 1종은 항체 기원인 적어도 2종의 서로 다른 결합 도메인을 함유하는 이중 특이적 항체이다. 또한, 본 발명의 이중 특이적 분자는 단일 사슬 이중 특이적 분자일 수 있다. 다발 특이적 분자 또한 단일 사슬 분자일 수 있고, 또는 적어도 2종의 단일 사슬 분자를 포함할 수 있다. 이중 특이적 항체를 포함하여 다발 특이적 항체는 당해 기술 분야에서 숙련된 자에게 공지된 적절한 방법에 의하여 생산될 수 있다. WO 94/09131; WO 94/13804; WO 94/13806 또는 미국 특허 제5,260,203호; 제5,455,030호; 제4,881,175호; 제5,132,405호; 제5,091,513호; 제5,476,786호; 제5,013,653호; 제5,258,498호; 및 제5,482,858호에 기재된 바와 같이 수많은 방법이 시도되었다.
본 발명에 의한 이중 특이적 또는 다발 특이적 항체를 이용하여, 본 발명은 단특이적/일가 항체와 비교하여 여러 가지 이점을 제공한다. 이중 특이적/다발 특이적 항체는 먼저 SEQ NO : 1-51의 모든 빈창자캄필로박터 폴리펩티드를 결합하고, 특이적으로 인지할 수 있는 결합 도메인을 가지는 반면에, 다른 결합 도메인은 다른 목적으로 이용될 수 있다. 일 실시 상태에 있어서, 적어도 1종의 다른 결합 도메인은 제1 결합 도메인으로서 동일한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드 상에서 또 다른 에피토르에 결합하는 것과 같이, 빈창자캄필로박터 폴리펩티드에 결합하기 위하여 이용된다. 따라서 빈창자캄필로박터에 대한 특이성은 항체의 항원항체결합력의 증가시킬 수 있다. 또 다른 실시 상태에 있어서, 적어도 1종의 다른 결합 도메인은 인간 세포 등의 포유 동물 세포에 특이적으로 결합하는데 사용될 수 있다. 적어도 다른 결합 도메인은 치료 요법에서 항체의 효과를 증가시키기 위하여 백혈구, 포식세포, 림프구, 호염기세포 및/또는 호산세포 등의 면역활성 세포에 결합할 수 있는 것이 좋다. 이는 적어도 1종의 다른 결합 도메인이 이를테면 클러스터 분화 단백질 (CD)로 이루어진 군 중에서 선택되는 단백질, 특히 CD64 및/또는 CD89 등의 인간 단백질과 같은 포유 동물 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 것에 의하여 수행될 수 있다.
인간화 항체
비-인간 "외래" 에피토프가 치료받는 개체에 면역 반응을 유발시킬 수 있기 때문에, 인간 치료에서 비-인간 항체를 이용하는 것이 항상 바람직한 것은 아니다. 비-인간 항체에 관한 문제를 제거하거나 최소화하기 위하여, 키메라 항체 유도체, 인간 상존 영역 (Fc)에 결정 인자를 결합하는 , 즉 "인간화 " 항체 분자를 설계하는 것이 바람직하다. 상기 항체는 전술한 모노클로날 및 폴리클로날 항체의 항원 특이성과 친화력을 동일하게 가지고 있고, 인간에 주입하는 경우 면역원성이 덜하므로, 처리되는 개체가 더 내성이 생길 수 있다.
따라서, 일 실시 상태에 있어서, 본 발명의 항체는 인간화 항체이다. 인간화 kdcp는 일반적으로 인간 항체에서 유래된 영역 및 설치류 항체와 같이 비-인간 항체로부터 유래된 영역을 포함하는 키메라 항체이다. 인간화 (또한 재구성(Reshaping) 또는 CDR-이식이라 칭함)는 이종 발생원 (흔히 설치류)의 모노클로날 항체 (mAbs)의 면역원성을 감소시키고, 인간 면역글로불린의 동종성을 증가시키며, 인간 면역계의 활성을 향상시키기 위한 잘 적립된 기술이다. 따라서, 인간화 항체는 통상적으로 일부의 CDR 잔기 및 일부의 구조 잔기는 설치류 항체의 유사 부위의 잔기에 의하여 치환될 수 있는 인간 항체이다.
인간화 항체가 항원 및 다른 유리한 생물학적 특성 및 항원에 대한 높은 친화성을 보유한다는 것은 중요하다. 이러한 성과를 얻기 위하여, 바람직한 방법에 따라, 인간화 항체는 부모의 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 이용하여 부모의 서열 및 다양한 컨셉의 인간화 산물을 분석하는 방법에 의하여 제조된다. 컴퓨터 프로그램으로 후보 면역글로불린 서열을 선택하는 예상 3차원 입체 형태 구조를 디스플레이하고 도해할 수 있다. 이러한 디스플레이의 조사로 인하여 후보 면역글로불린 서열의 작용 중에서 일정한 잔기의 역할의 분석, 즉, 상기 항원에 결합하는 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기를 분석할 수 있다. 이러한 방법으로, 비록 CDR 잔기가 항원 결합에 직접적이고 가장 실질적으로 영향을 준다 하더라도, FR 잔기는 표적 항원에 대한 친화성을 증가시키는 것과 같이, 목적하는 항원의 특성을 최대화하기 위하여 수용 서열 및 내수송 서열로부터 선택되고 조합될 수 있다.
인간화 MAbs를 위한 한 가지 방법은 어느 항체의 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위가 2차 항체, 바람직하게는 인간 항체에서 유래되는 상존 도메인과 혼합된 키메라 항체를 생산하는 것에 관련된다. 상기 키메라화 과정을 수행하는 방법은 예를 들어 EP-A-0 120 694 (Celltech Limited), EP-A-0 125 023 (Genentech Inc.), EP-A-0 171 496 (Res. Dev. Corp. Japan), EP-A-0173494 (Stanford University) 및 EP-A-0 194 276 (Celltech Limited)에 기재되어 있다.
본 발명의 인간화 항체는 적어도 인간 항체의 적어도 CDR 부위를 비-인간 항체에서 유래된 CDR로 치환할 수 있는 모든 방법에 의하여 제조될 수 있다. 윈터(Winter)는 본 발명의 인간화 항체를 생산하는데 이용할 수 있는 방법을 기술하였고 (영국 특허 출원 GB 2188638A), 이는 본 명세서에 참조로서 통합되어 있다.
예를 들어, 본 발명의 인간화 항체는 다음의 공정에 의하여 제조될 수 있다.
(a) 통상적인 기술에 의하여, 항체 결합 특이성을 보유하기 위하여 필요한 가변 도메인 구조 영역의 최소 부위 및 CDRs가 비-인간 면역글로불린에서 유래되고, 항체의 잔여 부분은 인간 면역글로불린에서 유래된 것인 항체 중쇄를 코딩하는 DNA 서열을 가진 오페론을 함유하는 발현 벡터를 제작하는 단계;
(b) 통상적인 기술에 의하여, 도너 항체 결합 특이성을 보유하는 가변 도메인 구조 영역의 최소 부위 및 CDRs가 비-인간 면역글로불린에서 유래되고, 항체의 잔여 부분은 인간 면역글로불린에서 유래된 것인 상보적인 항체 경쇄를 코딩하는 DNA 서열을 가진 오페론을 함유하는 발현 벡터를 제작하는 단계;
(c) 통상적인 기술에 의하여, 숙주 세포에 발현 벡터를 핵내 주입하는 단계; 및
(d) 통상적인 기술에 의하여, 주입된 세포를 배양하여 인간화 항체를 생산하는 단계.
숙주 세포는 본 발명의 두 가지 벡터, 폴리펩티드에서 유래된 경쇄를 코딩하는 오페론을 함유하는 제1 벡터 및 폴리펩티드에서 유래된 중쇄를 코딩하는 오페론을 함유하는 제2 벡터로 동시 감염될 수 있다. 두 가지 벡터는 서로 다른 선택적 마커를 함유하고 있으나, 한편으로는 항체와는 별도로, 가능한 한 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드를 동일하게 발현시키기 위하여 중쇄 및 경쇄 코딩 서열이 동일한 것이 좋다. 별도의 방법으로, 사용될 수 있는 단일 벡터는 경쇄 및 중쇄 폴리펩티드 모두를 코딩하는 서열이다. 경쇄 및 중쇄용 코딩 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA 또는 양쪽 모두일 수 있다.
본 발명의 변경된 항체를 발현시키는데 사용되는 숙주 세포는 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli)와 같은 박테리아 세포거나, 진핵 세포일 수 있다. 특히, 이러한 목적을 위한 잘 설계된 유형의 포유 동물 세포, 이를테면 골수종세포 또는 중국비단털쥐난소세포가 이용될 수 있다.
본 발명의 벡터는 일반적인 방법에 의하여 제작되는데, 본 발명의 숙주 세포를 생산하기 위하여 요구되는 감염 방법과 상기 숙주 세포로부터 본 발명의 항체를 생산하기 위하여 요구되는 배양 방법은 모두 통상적인 기술이다. 마찬가지로, 본 발명의 인간화 항체를 생산하는 경우, 이를 표준 공정에 의하여 정제할 수 있다.
인간 항체
더욱 양호한 실시 상태에 있어서, 본 발명은 결합 도메인이 인간 항체에 의하여 운반되는 항체, 즉 항체가 인간화 항체보다 더 높은 정도로 인간 펩티드 서열을 포함하는 항체에 관한 것이다.
인간 단백질에 대한 인간 mAb 항체는 마우스 시스템보다 인간 면역계를 더 포함하는 유전자 이전 (transgenic) 마우스를 이용하여 얻을 수 있다. 이러한 형질 전환 마우스의 비 세포 (Splenocyte)는 인간 단백질의 에피토프에 특이적인 친화성을 가지는 인간 mAbs를 분비하는 하이브리도마를 생산하는데 이용된다 (예를 들어 Wood 등. 국제 출원 WO 91/00906, Kucherlapati 등. PCT 공개 공보 WO 91/10741; Lonberg 등. 국제 출원 WO 92/03918; Kay 등. 국제 출원 92/03917; Lonberg, N. 등. 1994 Nature 368: 856-859; Green, L. L. 등. 1994 Na- ture Genet. 7: 13-21; Morrison, S. L. 등. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855; Bruggeman 등. 1993 Year Immunol 7: 33-40; Tuaillon 등. 1993 PNAS 90: 3720-3724; Bruggeman 등. 1991 Eur J Immunol 21: 1323-1326 참조). 상기 형질 전환 마우스는 Abgenix Inc. Fremont, Calif. 및 Medarex, Inc. Annandale, N. J.사로부터 입수할 수 있다. 키메라 돌연변이 마우스 및 배자 계열 돌연변이 마우스 중에서 항체 중쇄 결합 영역 (IH) 유전자의 동종 접합 결손은 내인 항체 생산을 완벽하게 억제한다는 것이 기재되어 있다. 상기 배자 계열 돌연변이 마우스 중에서 인간 배자 계열 면역글로불린 유전자 배열의 이전은 항원 접종시 인간 항체의 생산을 야기시킨다. 예컨대, Jakobovits 등., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits 등., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann 등., Year in Immunol. 7: 33 (1993); 및 Duchosal 등., Nature 355: 258 (1992) 참조. 또한, 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리로부터 유래될 수 있다 (Hoogenboom 등., J. Mol. Biol. 227: 381 (1992); Marks 등., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1991); Vaughan, 등., Nature Biotech 14: 309 (1996)).
인간 모노클로날 항체를 생산하는 적절한 방법이 WO 03/017935, WO 02/100348, US 2003 091561 및 US 2003 194403에 더 기재되어 있다.
항체 절편의 결합
본 발명의 일 실시 상태에 있어서, 항체는 항체의 절편이고, 바람직하게는 항체 결합 절편 또는 가변 부위이다. 본 발명에서 유용한 항체 절편의 예에는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 절편이 있다. 항체를 파파인 분해하여, Fab 절편이라 불리고 각각 단일 항원 결합 부위를 가지는 두 개의 동일한 항원 결합 절편, 및 소위 충분히 결정화할 수 있는 잔여 "Fc" 절편을 얻는다. 펩신으로 처리하여 항원에 가교 결합할 수 있는 절편에 결합하는 2종의 항원을 함유하는 F(ab')2 절편과, 다른 잔여 절편 (이는 pFc'라 칭한다)을 얻는다. 추가적인 절편으로는 항체 절편으로부터 생성된 다발 특이적 항체, 및 단일 사슬 항체 분자, 선형 항체, 다이아바디가 있다.
항체 절편 Fab, Fv 및 scFv는 항체 절편이 단일 항체 결합 부위만을 포함한다는 점에서 전체 항체와는 상이하다. 2개의 결합 부위를 가지는 재조합 절편은 여러 가지 방법, 예를 들어 Fv의 VH의 C 말단에서(Cumber 등., 1992), 또는 scFv의 VL의 C 말단에서(Pack 및 Pluckthun, 1992), 또는 Fab's의 (Carter 등., 1992) 경첩 시스테인 잔기를 통하여 도입된 시스테인 잔기의 화학적 가교 결합에 의하여 제조될 수 있다.
항체 절편은 그 항원에 선택적으로 결합하기 위하여 항체의 능력을 일부 또는 필수적인 모든 능력을 보유하는 것이 좋다. 일부 바람직한 절편은 다음과 같이 정의된다.
(1) Fab는 항체 분자의 일가 항원 결합 절편을 함유하는 절편이다. Fab 절편은 효소 파파인으로 전체 항원을 분해함으로써 생산되며, 무손상 경쇄 및 중쇄 한 개의 일부분을 얻는다.
(2) Fab'는 펩신으로 전체 항체를 처리하고, 이어서 환원하는 것에 의하여 생성되며, 무손상 경쇄 및 중쇄의 일부분을 얻는다. 항체 분자당 2종의 Fab' 절편을 얻는다. Fab' 절편은 항체 경첩부로부터 1종 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복실 말단에서 조금의 잔기를 추가하는 것에 의하여 Fab 절편과는 상이하다.
(3) (Fab')2는 후속적으로 환원하는 과정 없이, 효소 펩신으로 전체 항체를 처리하여 얻을 수 있는 항체의 절편이다. F(ab')2는 2개의 이황화 결합에 의하여 2개의 Fab' 절편이 함께 이량화 된 것이다.
(4) Fv는 완전 항원 인지 및 결합 부위를 함유하는 최소의 항체 절편이다. 이 영역은 치밀, 비공유 결합 중에서 한 개의 중쇄 및 한 개의 경쇄 가변 도메인의 이량체 (VH-VL 이량체)로 구성된다. 이러한 형상 중에서 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR은 이량체의 표면상에서 상호 반응하여 항원 결합 부위를 규정한다. 집합적으로, 6개의 CDR이 항체에 항원 결합 특이성을 제공한다. 그러나, 전체 결합 부위보다 친화력이 낮다 하더라도, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 오직 3개의 CDR을 포함하는 Fv의 절반)만으로도 항원을 인지하고 결합할 수 있다.
본 발명의 일 실시 상태에 있어서, 항체는 경쇄의 가변 부위, 중쇄의 가변 부위를 함유하도록 유전적으로 설계된 분자로 정의되는 단일 사슬 항체, 유전적으로 융합된 단일 사슬 분자로서 적절한 폴리펩티드 링커에 의하여 연결된 단일 사슬 항체이다. 상기 단일 사슬 항체는 또한 "단일 사슬 Fv" 또는 "sFv" 항체 절편으로 불리운다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 sFv가 항원과 결합하도록 목적하는 구조를 형성하기 위하여 VH 및 VL 도메인 사이에서 폴리펩티드 링커를 더 포함한다.
본 발명에 의한 항체 절편은 당해 기술 분야에서 숙련된 자에게 공지된 적절한 모든 방법에 의하여 제조될 수 있다. 여러 가지 미생물 발현계가 활성 항체 절편 생산을 위하여, 예컨대, 이. 콜라이 또는 기재된 효모와 같이 다양한 숙주에서 Fab를 생산하기 위하여 이미 개발되어 있다. 상기 절편은 Fab의 절편 또는 Fv의 절편으로 제조될 수 있으나, 추가적으로 가변 폴리펩티드 링커에 의하여 VH 및 VL이 유전적으로 연결될 수 있으며, 이 조합은 scFv로 알려져 있다.
본 발명의 조성물의 용도
약제로서 이용하기 위한 조성물의 양호한 일 실시 상태에 있어서, 상기 조성물은 활성 성분 외에 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.
본 명세서에서, 조성물 또는 담체와 관련하여 사용되는 "약학적으로 허용 가능한"이란 용어는 메스꺼움, 현기증, 급성위연동이상항진 등과 같은 생리학적 부작용을 발생시키지 않고, 인간 또는 동물에게 주입할 수 있는 물질을 나타내는 것이다.
용해되거나 분산된 활성 성분을 함유하고 있는 조성물 제제는 당해 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 종종 상기 조성물은 액상 용액 또는 현탁액으로, 수성 또는 비수성의 그러나, 용액에 적절한 고체 형태의 멸균 주사제로서 제조된다. 또한, 제제는 에멀젼화할 수 있다. 활성 성분은 약학적으로 허용 가능하고 활성 성분과 양립 가능한 담체와, 본 명세서에 기재된 방법 중에서 용도에 적잘한 양으로 혼합할 수 있다. 적절한 담체로는 예컨대, 물, 식염수, 포도당, 글리세롤, 에탄올 등 및 이들의 조합이 있다. 또한, 필요하다면, 조성물은 활성 성분의 효과를 증진시키는, 습윤제 또는 에멀젼화제, pH 완충제 등의 보조 물질을 소량 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 그 성분으로 약학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어, 염산 또는 인산 등의 무기산, 또는 아세트산 타르타르산 등의 유기산과 형성되는 산 첨가 염 (폴리펩티드의 자유 아미노기와 형성됨)이 있다. 또한, 자유 카르복실기와 형성되는 염은 예를 들어, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 수산화칼슘 또는 수산화철 등의 무기 염기, 및 이소프로필아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로케인 등의 유기 염기 등으로부터 유래될 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 담체는 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다. 액상 담체의 예는 활성 성분과 물 외에 어떠한 물질도 함유하지 않거나, 생리 pH 값, 생리 식염수 또는 인산 버퍼 식염수와 같이 양쪽에서, 인산나트륨 등의 버퍼를 함유하는 멸균 수성 용액이 있다. 나아가, 수성 담체는 1종 이상의 버퍼 염과 염화 나트륨, 염화칼슘, 포도당, 플로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 다른 용질 등의 염을 함유할 수 있다. 또한, 액상 조성물은 물의 배추 외에 액체상을 함유할 수 있다. 그러한 추가 액체상의 예에는 글리세린, 면실유와 같은 식물성 기름, 올레이트산 에틸과 같은 유기 에스테르 및 물이 오일에 분산된 에멀젼이 있다.
본 발명의 항체 또는 폴리펩티드를 함유하는 조성물은 약학 조성물의 총 중양에 대하여 적어도 0.1 중량%의 폴리펩티드 또는 항체를 함유하는 것이 좋다. 중량%는 총 종성물에 대한 폴리펩티드 또는 항체의 중량비이다. 따라서, 예를 들어, 0.1 중량%는 총 조성물 100g 당 폴리펩티드 또는 항체 0.1g을 의미한다.
또한, 조성물은 β-락탐, 세팔로스포린, 페니실린, 아미노글리코시드, 마크롤리드 항생제 (에리트로마이신, 클라리트로마이신, 또는 아지트로마이신) 및 플루오로퀴논 항생제 (시프로프록사신, 레보프록사신, 가티프록사신 또는 목시플로사신)를 더 포함하고, 포함하거나 시토키닌, 인터페론, 예를 들어 GCSF 또는 GM-CSF의 성장 인자 등의 면역자극제를 더 포함하는 부분적 키트 (kit-in-part)일 수 있다. 부분적 키트는 동시 주사, 순차적 주사 또는 분리 주사용으로 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 본 명세서에 기재된 방법을 활용하기에 유용한 약학 조성물에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 약학적으로 허용 가능한 담체 및
- SEQ ID NO : 1-36의 모든 서열을 포함하거나, 상기 모든 서열의 변이체 또는 절편을 포함하는 분리된 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 본 명세서에서 정의되는 본 발명의 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 폴리펩티드
본 발명의 절편
또 다른 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-51의 모든 폴리펩티드의 절편, 좋기로는 항원성 절편, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36의 모든 절편 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 절편에 관한 것이다. 상기 절편의 길이는 폴리펩티드의 2 연속 아미노산에서 전장 폴리펩티드에서 하나의 아미노산 잔기를 제거한 것까지 다양할 수 있다. 절편은 100 연속 아미노산 이하, 이를테면 70 또는 50 연속 아미노산 이하, 예를 들어 연속된 40 아미노산 이하, 이를테면 30 연속 아미노산 이하, 예를 들어 25 연속 아미노산 이하, 이를테면 연속하여 20 아미노산 이하의 길이가 좋다. 따라서, 예를 들어 절편은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 연속 아미노산의 길이일 수 있다. 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 절편은 전장 서열에 대응하여 6종 이상, 이를테면 7종 이상, 예를 들어 8종 이상, 이를테면 9종 이상, 예를 들어 10종 이상의 연속 아미노산이 좋다. 절편의 길이에 대한 범위는 5 내지 50 연속 아미노산, 이를테면 5 내지 25 연속 아미노산, 예를 들어 5 내지 20 연속 아미노산이 좋다. 또 다른 방법으로 발현된 절편은 전장 폴리펩티드에 비하여 아미노산 서열 길이가 100% 이하로 이루어진다. 절편의 길이는 전장 폴리펩티드의 99% 이하, 이를테면 75% 이하, 예를 들어 50% 이하, 이를테면 25% 이하, 예를 들어 20% 이하, 이를테면 15% 이하, 예를 들어 10% 이하인 것이 좋다. 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 절편은 전장 폴리펩티드의 길이의 1% 이상 100% 이하, 이를테면 5% 이상 100% 이하, 예를 들어 10% 이상 100% 이하, 이를테면 20% 이상 100% 이하, 예를 들어 25% 이상 100% 이하, 이를테면 50% 이상 100% 이하의 아미노산 서열의 부분으로 이루어진다.
폴리펩티드 특이적 절편은 SEQ ID NO : 52-119로 이루어진 군 중에서 선택되는 절편의 1종 이상의 잔기, 예를 들어 SEQ ID NO : 52-119로 이루어진 군 중에서 선택되는 절편의 2종 이상의 연속 잔기, 이를테면 3종 이상의 연속 잔기, 예를 들어 4종 이상의 연속 잔기, 이를테면 5종 이상의 연속 잔기, 예를 들어 6종 이상의 연속 잔기를 포함하는 절편이다. 특이적 절편은 EQ ID NO : 52-119로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열로 이루어지거나, 필수적으로 이루어진 절편을 포함하는 것이 더 좋다.
다른 바람직한 절편에는 본 명세서에 참조로 포함되는 2003년 11월 21일 출원된 덴마크 우선권 출원인 PA 2003 01726의 리스트 1의 절편 및 2003년 11월 25일 출원된 미국 가출원 60/524,617의 절편이 있다.
본 발명의 절편은 거기에서 발현되는 경우 무손상 빈창자캄필로박터 세포 또는 다른 세포 중에서 표면 노출된 것이다. 표면 노출은 예를 들어, Singh 등. (2003) Infect. Immun. 71: 3973-3946에 기재된 바와 같이, 상기 절편에 특이적인 모노클로날 항체를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 무손상 빈창자캄필로박터 세포에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 유도할 수 있는 절편이 더욱 좋다. 이는 예를 들어, Singh 등. (2003) Infect. Immun. 71: 3973-3946에 기재된 바와 같이, 무손상 세포에 각 항체를 결합하는 연속적인 특성 및 상기 절편을 이용하는 모노클로날 항체를 생성하는 것에 의하여 측정될 수 있다.
본 발명의 SEQ ID NO : 1-51의 전장 폴리펩티드와 절편은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 의하여 제조될 수 있다. 적절한 숙주 세포는 포유 동물 세포, 예를 들어, CHO, COS 또는 HEK293 세포일 수 있다. 별도의 방법으로, 곤충 세포, 박테리아 세포 또는 곰팡이 세포가 사용될 수 있다. 전술한 세포 유형에서 폴리뉴클레오티드 서열의 이종 발현 및 예를 들어 정제 후에 제거되는 히스티딘 태그와 같은 태그 서열을 이용하여 생산된 폴리펩티드의 후속적인 정제를 위한 방법은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 별도의 방법으로, 본 발명의 절편은 합성할 수 있다.
본 발명의
변이체
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-51의 폴리펩티드, 이를테면 EQ ID NO : 1-36의 모든 폴리펩티드 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 폴리펩티드의 변이체, 또는 SEQ ID NO : 1-51의 모든 폴리펩티드의 절편의 변이체의 약제로서 사용하기 위한 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 명세서에서 사용시, "SEQ ID NO: X와 적어도 95%의 서열 상동성을 갖는 폴리펩티드"라는 용어는 "변이체가 상기 서열과 적어도 95%의 서열 상동성을 갖는, SEQ ID NO: X의 폴리펩티드 및 이의 절편"이라는 용어와 동일하게 사용되고, 서로 상호 교환하여 사용된다.
변이체는 주어진 폴리펩티드 또는 절편과 적어도 75%의 서열 상동성, 예를 들어 적어도 80%의 서열 상동성, 이를테면 적어도 85%의 서열 상동성, 예를 들어 적어도 90%의 서열 상동성, 이를테면 적어도 91%의 서열 상동성, 이를테면 적어도 92%의 서열 상동성, 예를 들어 적어도 93%의 서열 상동성, 이를테면 적어도 94%의 서열 상동성, 예를 들어 적어도 95%의 서열 상동성, 이를테면 적어도 96%의 서열 상동성, 예를 들어 적어도 97%의 서열 상동성, 이를테면 적어도 98%의 서열 상동성, 예를 들어 적어도 99%의 서열 상동성을 갖는 것이 좋다. 서열 상동성은 Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0에서 디폴트 갭 중량 (default gap weights)을 이용하여 알고리즘 GAP, BESTFIT 또는 FASTA로 측정하였다.
생성된 폴리펩티드 또는 절편의 변이체는 변이체와 주어진 참조 폴리펩티드 또는 절편 사이의 모든 아미노산 치환이 연속 치환인 변이체가 더 좋다.연속 아미노산 치환은 유사한 측쇄를 가지는 잔기의 상호교환성에 관한 것이다. 예컨대, 지방족 측쇄를 가지는 아미노산 군에는 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신이 있고, 지방족-히드록실 측쇄를 가지는 아미노산 군에는 세린 및 트레오닌이 있으며, 아미드를 함유하는 측쇄를 가지는 아미노산 군에는 아스파라긴 및 글루타민이 있고, 방향족 측쇄를 가지는 아미노산 군에는 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판이 있고, 염기 측쇄를 가지는 아미노산 군에는 리신, 아르기닌 및 히스티딘이 있으며, 황을 함유하는 측쇄를 가지는 아미노산 군에는 시스테인 및 메티오닌이 있다.
또한, 폴리펩티드의 변이체 또는 이의 절편의 변이체는 폴리펩티드 또는 절편의 형태이고, 이중 1종 이상의 아미노산은 결실되거나 삽입되어 있다. 좋기로는, 5 이하, 이를테면 4 이하, 예컨대 3 이하, 이를테면 2 이하, 예컨대 오직 1개의 아미노산이 삽입되거나 결실되어 있다. 폴리펩티드의 또는 이의 절편의 "변이체"는 아미노산 서열의 번역 후 변형에 의하여 변형된 폴리펩티드 또는 절편의 형태일 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 발현 벡터
또 다른 측면에서, 본 발명은 SEQ NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 코딩하는 서열, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 코딩하는 서열 또는 SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 좋기로는 분리된 폴리뉴클레오티드 및/또는 재조합 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 SEQ NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하는, 또는 상기 모든 서열의 변이체 또는 절편을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 함유한 발현 벡터에 관한 것이다. 발현 벡터는 DNA 예방 접종 (예방 접종)에 적합한 것이 좋다. 다른 바람직한 벡터에는 본 발명의 폴리뉴클레오티드가 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli) 또는 살모넬라 (Salmonella)에서 서열을 발현시키는 프로모터의 조절하에 있는 벡터가 있다. 후자의 발현 벡터는 본 명세서에서 기재한 바와 같이 본 발명의 재조합 바이러스 또는 재조합 세포의 생산에 유용하다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 발현 벡터는 당해 기술 분야에서 숙련된 자에게 잘 알려진 표준 재조합 DNA 기술에 의하여 제조될 수 있다.
본 발명의 재
조합
세포
또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 함유한 폴리뉴클레오티드로 감염되거나 형질 전환된 재조합 세포에 관한 것으로서, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함한다. 좋기로는, 상기 재조합 세포는 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli) 또는 살모넬라 (Salmonella) 세포이고, 더욱 좋기로는 독성이 약화되거나 발병력이 감소 된 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli) 또는 살모넬라 (Salmonella)이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 재조합된 독성 약화 또는 발병력이 감소 된 미생물 세포, 바람직하게는 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드로 감염되거나 형질 전환된 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli) 또는 살모넬라 (Salmonella)에 관한 것으로서, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 적절한 박테리아 균주는 예컨대, Makino 등. (2001) Microb. Pathog. 31: 1-8; Gentschev 등. (2002) Int. J. Med. Microbiol. 291: 577-582; Turner 등. (2001) Infect. Immun. 69: 4969-4979; WO 99/49026 및 WO 03/022307에 기재되어 있고, 본 명세서에 참조 되어 있다. 적절한 살모넬라 균주의 예에는 CvD908-T7pol (Santiago-Machuca 등. (2002) Plasmid 47: 108-119), ATCC 39183, ATCC 53647 및 ATCC 53648이 있다. 적절한 이. 콜라이 균주의 예에는 YT106 및 E1392/75-2A가 있다.
본 발명의 방법 및 용도
앞서 정의한 조성물 및 다른 생성물은 필요한 경우 빈창자캄필로박터 감염 및/또는 동물 또는 인간 중에서 상기 감염으로 야기되는 질병을 예방하거나 치료하는데 사용될 수 있다. 동물은 닭, 오리, 칠면조, 소 또는 돼지가 좋다. 인간 집단은 4세까지의 어린이 집단, 산업 국가의 인구 집단 또는 개발 도상국의 나이브 또는 부분 면역 여행자 집단 등의 위험 집단이 좋다.
본 명세서에서 치료 및 예방은 빈창자캄필로박터를 제거하기 위한 모든 유형의 치료 및 예방 및 다른 치료법을 포함하고, 예방 접종, 예방, 능동 면역화, 수동 면역화, 항체 투여, 근치적 치료(根治的 治療), 개량 치료를 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 특히, 본 발명의 항체를 이용한 수동 면역화는 면역 손상 개체를 치료하는데 적합하다.
따라서, 또 다른 측면에서, 본 발명은 동물 또는 인간 중에서 빈창자캄필로박터 감염을 예방하거나 치유하기 위한 방법에 관한 것으로서, 다음의
- SEQ ID NO : 1-51의 모든 서열, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36의 모든 서열 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 서열을 포함하고, 또는 상기 모든 서열의 변이체 또는 절편을 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터,
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포, 또는
- 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 중 어느 하나를 주사하는 단계를 포함하는 것으로서, 이로 인하여 상기 동물 또는 인간 중에서 빈창자캄필로박터 감염을 치료하거나 예방한다.
상기 주사는 정맥 내 주사, 근육 내 주사, 피하 주사, 경구 주사 또는 비강 내 주사가 좋다.
상기 약제는 정맥 내 주사, 근육 내 주사, 피하 주사, 경구 주사 또는 비강 내 주사에 적합한 약제인 것이 좋다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 빈창자캄필로박터 감염에 대한 동물 또는 인간의 면역화 방법에 관한 것으로서, 다음의
- SEQ ID NO : 1-51의 모든 서열, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36의 모든 서열 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 서열을 포함하고, 또는 상기 모든 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,
- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터,
- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 주사하는 단계를 포함한다.
상기 주사는 정맥 내 주사, 근육 내 주사, 피하 주사, 경구 주사 또는 비강 내 주사가 좋다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에서 정의된 바와 같이 동물 또는 인간 중에서 빈창자캄필로박터 감염을 치료하거나 예방하기 위한 약제를 제조하기 위한, 본 발명의 항체의 용도에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 도한 본 명세서에 기재된 바와 같이 항체를 주사하는 단계를 포함하는 빈창자캄필로박터 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 관한 것으로서, 이로 인하여 빈창자캄필로박터 감염을 치료하거나 예방한다. 상기 주사는 정맥 내 주사, 근육 내 주사, 피하 주사, 경구 주사 또는 비강 내 주사가 좋다.
본 발명의 진단 방법
또한, 세포 중에서 비교적 높은 복제 수를 가지고 있고, 표면 노출된 배합은 본 발명자들에 의하여 동정된 51종의 폴리펩티드가 빈창자캄필로박터 검출용 표적으로서 매우 적합하게 하며, 이는 상기 유기체를 매우 민감하게 검출하게 한다.
따라서, 또 다른 주요 측면에서, 본 발명은 시료 중의 빈창자캄필로박터 또는 이의 부분을 검출하는 방법에 관한 것으로서,
a. SEQ : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 특이적으로 결합할 수 있는 지시 모이어티를 상기 시료에 접촉시키는 단계,
b. 상기 지시 모이어티에 의하여 신호가 생성되는지 여부를 측정하고, 이로 인하여 상기 시료가 빈창자캄필로박터 또는 이의 부분을 함유하는지 측정하는 단계를 포함한다.
상기 지시 모이어티는 무손상 빈창자캄필로박터 세포에 결합하는 것이 좋고, 특이적으로 결합하는 것은 더욱 좋다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 빈창자캄필로박터를 검출하는 방법에 관한 것이다.
a. SEQ : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 특이적으로 결합할 수 있는, 또한, 무손상 빈창자캄필로박터에 결합할 수 있는, 좋기로는 특이적으로 결합할 수 있는 지시 모이어티를 상기 시료에 접촉시키는 단계,
b. 상기 지시 모이어티에 의하여 신호가 생성되는지 여부를 측정하고, 이로 인하여 상기 시료가 빈창자캄필로박터 또는 이의 부분을 함유하는지 검출하는 단계.
상기의 진단 방법의 양호한 실시 상태에 있어서, 세척 단계는 검출의 특이성을 개선하기 위하여 접촉 단계 및 측정 단계 사이에 수행된다.
시료는 예컨대, 대변, 소변, 조직, 조직 추출물, 수액 시료 또는 혈액, 혈장 또는 혈청 등의 체액 시료일 수 있다. 시료의 또 다른 예에는 고기 시료 등의 식품 시료가 있다.
상기의 방법은 예컨대, 개별적으로 빈창자캄필로박터 감염 또는 캄필로박터증을 진단하기 위하여 이용할 수 있다. 상기 방법의 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 지시 모이어티는 빈창자캄필로박터 세포의 외막을 통과하지 않는다. 상기 지시 모이어티의 바람직한 유형은 항체, 이를테면 본 명세서에 정의된 본 발명의 항체를 포함하거나, 함유하고 있다.
당해 기술 분야에서 숙련된 자는 다수의 공지된 임상 진단 화학 공정에서 리간드의 양, 본 명세서에서는 지시 모이어티가 빈창자캄필로박터 또는 이의 부분의 양과 연관된 결합 반응 생성물을 생성하는데 이용될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 본 명세서에 기재된 분석 방법은 예시적이며, 본 발명을 제한하지 않는다.
또한, 본 발명은 생물학적 시료 중에서, 빈창자캄필로박터의 존재 및 바람직하게는 빈창자캄필로박터의 양을 분석하기 위한, 진단 시스템, 바람직하게는 키트 형태에 관한 것이다. 진단 키트를 제조하는 방법은 예컨대, US 5,470,958에 기재되어 있고 본 명세서에 참조 되어 있다.
진단 시스템은 본 발명의 지시 모이어티를 적어도 1회 분석할 수 있는 충분량으로, 바람직하게는 분리하여 포장된 시약으로, 더욱 바람직하게는 사용 설명서를 포함한다. 포장은 본 발명의 지시 모이어티를 고정된 양으로 고정할 수 있는 유리, 플라스티 (예컨대, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌 또는 폴리카보네이트), 종이, 호일 등의 물질 또는 고체 기질을 이용한다. 따라서, 예컨대, 포장은 계획된 표지 지시 모이어티 제제를 밀리그램 양으로 함유하기 위하여 사용되는 유리병일 수 있고, 계획된 지시 모이어티를 마이크로그램의 양으로 조작상 첨부하는, 즉, 리간드에 결합할 수 있도록 연결한 마이크로티터 플레이트 웰일 수 있다.
"사용 설명서 (Instructions for use)"는 통상적으로 시약 농도 또는 혼합되는 시약과 시료의 상대량 등의 적어도 한 가지의 분석 방법 파라미터, 시약/시료 혼합물의 유지 기간, 온도, 버퍼 컨디션 등을 기재하여 명확하게 표현되어 있다.
대부분의 실시 상태에 있어서, 본 발명의 진단 방법 및 진단 시스템은 지시 모이어티의 일부로서, 미리 선택된 리간드 (즉, SEQ ID NO 1-51의 모든 서열 및/또는 이의 절편을 포함하는 폴리펩티드)로 복합화한 지시 모이어티를 함유하는 블라인딩 반응 복합체 (binding reaction complex)의 형성을 나타낼 수 있는 지시 방법 또는 표지를 포함한다. 상기 표지는 임상 진단 화학 분야에서 잘 알려져 있다.
표지 방법은 화학적으로 항체 또는 항원과 화학적으로 결합하여, 그들을 분해하지 않고, 면역형광 추적자로 이용되는 플루오로크롬 (염료)을 형성하는 형광 표지제일 수 있다. 적절한 형광 표지제는 플루오레세인 이소시아네이트 (FIC), 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC), 5-디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드 (DANSC), 테트라메틸로다민 이소티오시아네이트 (TRITC), 리싸민, 로다민 8200 설포닐 클로라이드 (RB 200 SC) 등의 플루오로크롬이다. 적절한 형광 물질의 다른 예에는 움벨리페론, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 댄실 클로라이드 또는 피코에리트린 등이 있다. 면역 형광 분석 기법은 DeLuca, "Immunofluororescence Analysis", in Antibody As a Tool, Marchalonis 등, eds., John Wiley & Sons, Ltd., pp. 189-231 (1982)에 기재되어 있다.
방사성 원소는 표지제로서 유용할 수 있다. 방사성 표지제의 예에는 감마선을 방출하는 방사선 원소가 있다. 124I, 125I, 128I, 132I 및 51Cr 등의 감마선을 스스로 방출하는 원소는 감마선 방출-생산 방사성 원소 표시 그룹 중 한 분류를 대표한다. 특히 125I가 좋다. 표지 수단으로 유용한 또 다른 그룹에는 3H의 111인듐과 같은 베타 방출기 또는 스스로 양전자를 방출하는 11C, 13F, 150 및 13N 등의 원소가 있다. 다른 적절한 방사성 물질에는 131I 및 35S가 있다.
또 다른 실시 상태에 있어서, 항체를 이용한 검출법은 효소, 배합군, 발광 물질 또는 생물 발광 물질 등의 또 다른 검출 물질에 항체를 커플링함으로써 이용될 수 있다. 적절한 효소의 예에는 홍당무 과산화효소, 알칼리성 인산분해효소, 베타갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스테라제가 있고, 적절한 배합군 복합체의 예에는 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴이 있으며, 발광 물질의 예에는 루미놀이 있고, 생물 발광 물질의 예로는 루시퍼라제, 루시페린 및 애큐오린이 있다.
양호한 실시 상태에 있어서, 표시 그룹은 홍당무 과산화효소 (HRP) 또는 포도당 산화효소 등이 있다. 주요 표시 그룹이 HRP 또는 포도당 산화효소 등의 효소인 경우에, 지표-모이어티/리간드 복합체 (면역 반응체)가 형성된 것을 가시화하기 위하여 추가 시약이 필요하다. 상기 HRP의 추가 시약은 디아미노벤티딘 등의 산화 염료 전구체와 과산화수소를 포함한다. 포도당 산화효소로서 사용되는 추가 시약은 2,2'-아미노-디-(3-에틸-벤지티아졸린-G-술폰산)이다.
표지의 연결, 즉 항체와 같은 폴리펩티드에 표지하는 것은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 예컨대, 단백질은 배양 배지 중에서 성분으로서 제공되는 아미노산을 함유하는 방사성 동위원소를 대사 통합함으로써 표지될 수 있다. 예컨대, Galfre etal., Meth.Enzymol., 73: 3-46 (1981) 참조. 활성화된 작용기를 통한 단백질 커플링 또는 단백질 접합 기술이 주로 적용될 수 있다. 예컨대, Aurameas, et al., Scand. J. Immunol., Vol. 8 Suppl. 7:7-23 (1978), Rodwell et al. (1984) Biotech. 3: 889-894, 및 미국 특허 제4,493,795호 참조.
상기 지시 모이어티를 적용하는 다양한 진단 분석법은 빈창자캄필로박터용 시료를 시험하기 위하여 적용될 수 있다. 대표적인 분석법은 Antibodies: A Laboratory Manual,Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988에 자세히 기재되어 있다. 상기 분석법의 대표적인 예에는 역류 면역 전기 이동 (CIEP), 방사성 면역 분석, 방사성 면역 침전, 효소 관련 면역 흡수 분석 (ELISA), 점 블롯 분석, 억제 또는 경쟁 분석, 및 샌드위치 분석, 면역 막대(immunostick; 계량봉) 분석, 동시 면역 분석, 면역크로마토그래피 분석, 면역 여과 분석, 라텍스 구슬 응집 분석, 면역 형광 분석, 생체 센서 분석 및 저광 (low-light) 검출 분석 (예컨대, U. S. 4,376,110 및 4,486,530 참조)이 있다.
일 실시 상태에 있어서, 본 발명의 진단 키트는 수액 시료 중에서 미리 선택된 리간드의 양을 측정하기 위하여 "ELISA" 포맷으로 사용될 수 있다. "ELISA"는 시료 중에 존재하는 항원의 양을 측정하고 정량화하기 위하여, 효소-항원 접합체 또는 효소-항체 접합체 및 고체상에 결합 되어 있는 항체 또는 항원을 적용하는 효소 관련 면역 흡수 분석법으로서, 이미 본 발명의 방법으로 적용되어 있다. 따라서, 일부 실시 상태에 있어서, 본 발명의 지시 모이어티는 대상 진단 시스템 중에서 포장을 포함한 고체 지지체를 형성하기 위하여 고체 기질에 첨부할 수 있다. 시약은 비록 항체와 같은 폴리펩티드에 적용할 수 있는 다른 첨가 유형이 당해 기술 분야에서 숙련된 자에게 공지되어 이용된다 하더라도, 통상적으로 수성 배지에서 흡착에 의하여 고체 기질에 첨부된다. 유용한 고체 기질 또한 당해 기술 분야에서 숙련된 자에게 공지되어 있다. 상기 물질은 불용성이고, Pharmacia Fine Chemicals (Pis-cataway, N. J. )에서 입수할 수 있는 SEPHADEX의 상표의 가교 결합된 덱스트란, 아가로스, Abbott Laboratories of North Chicago,III.에서 입수할 수 있는 직경 약 1 마이크론 내지 약 5 밀리미터의 폴리스티렌 구슬의 구슬, 폴리스티렌, 가교 결합된 폴리아크릴아미드, 천, 띠 또는 패들 등의 니트로셀룰로스 기재 또는 나일론 기재 막양 구조 (webs) 또는 튜브, 폴리스티렌 또는 폴리비닐클로라이드로부터 제조된 마이크로티터 플레이트 등의 웰 또는 플레이트를 포함한다.
또 다른 진단 방법은 본 발명의 일 구체예의 다가 항체 조성물을 리간드에 가교 결합하여, 군집을 형성하는 다발 리간드 및 폴리펩티드의 군집을 형성하는데 이용할 수 있다. 상기 구체예는 공지된 면역 침전법과 유사하다. 상기 구체예는 본 발명의 항체를 포함하는 조성물과 시료를 혼합하여 결합 조건 하에서 결합 혼합물을 형성하는 혼합 단계와, 이어서 생성된 결합 복합체를 분리하기 위한 분리 단계로 이루어진다. 통상적으로, 분리는 혼합물로부터 군집을 제거하기 위하여 원심 분리 또는 여과법에 의하여 수행된다. 결합 복합체의 존재는 검출되는 미리 선택된 리간드의 존재를 나타낸다.
본 발명의 폴리펩티드의 억제제 및 결합 파트너
본 발명에 연관된 51종의 표면에 위치한 폴리펩티드는 억제제와 같은 결합 파트너의 표적으로서 매우 적합하다. 표면에 위치한 병원 미생물의 폴리펩티드는 종종 숙주 유기체와 상호 반응한다. 따라서, 표면에 위치한 폴리펩티드의 모든 유형의 결합 파트너는 숙주-병원체 상호 반응을 방해할 수 있다. 따라서, 결합 파트너는 종종 미생물의 병원성 (발병력)을 상쇄한다. 결합 파트너는 또한, 결합 파트너에 결합하는 폴리펩티드의 억제제일 수 있다.
따라서, 또 다른 주요 측면에 있어서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-51의 표면에 위치한 폴리펩티드의 결합 파트너를 동정하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 생물화학적 방법 또는 세포를 이용한 방법일 수 있다.
생물화학적 방법
주요 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드 또는 이의 절편의 결합 파트너를 동정하기 위한 방법으로서, 이는
a. SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드 또는 이의 절편을 제공하는 단계,
b. 상기 폴리펩티드 또는 절편이 잠정 결합 파트너에 접촉하는 단계, 및
c. 상기 잠정 결합 파트너가 상기 폴리펩티드 또는 절편에 결합할 수 있는지를 측정하는 단계로 이루어진다.
양호한 실시 상태에 있어서, 상기 잠정 결합 파트너는 숙주 유래 분자이다.
본 방법의 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 폴리펩티드 또는 이의 절편은 예컨대, 컬럼 또는 마이크로티터 플레이트 등의 고체 지지체 상에 고정되고, 접촉 단계 후에, 잠정 결합 파트너가 상기 고체 지지체에 결합 되어 있는지 여부를 측정한다. 폴리펩티드 또는 이의 절편의 고정화는 고체 지지체에 직접 결합하거나, 예컨대 특이적 항체를 이용하여 간접적으로 결합하는 것에 의하여 이루어질 수 있다. 양호한 실시 상태에 있어서, 세척 단계는 측정의 특이성을 향상시키기 위하여 접촉 단계와 측정 단계 사이에 수행된다. 잠정 파트너는 접촉이 일어나기 전에 표지될 수 있다. 별도의 방법으로, 표지는 접촉 단계 후에 또한 수행될 수 있다. 나아가, 상기 방법의 몇몇 실시 상태에 있어서, 고정화는 폴리펩티드 또는 이의 절편이 결합 파트너에 결합 된 후에 수행될 수 있다. 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 방법은 스크리닝 방법이며, 잠정 결합 파트너를 다수로 하기 이를 반복한다. 결합을 측정하는 적절한 방법은 당해 기술 분야에서 잘 알려져 있고, 이들 중 여러 개가 본 명세서에 참조 되어 있다.
또 다른 측면에서, SEQ ID NO : 1-51, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36 모두 또는 SEQ ID NO : 37-51 모두로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 숙주 유래 결합 파트너는 다음과 같이 동정될 수 있다. 정제된 숙주 막을 전기 영동으로 분리하고, 막을 제거한 후, 관심 폴리펩티드 또는 이의 절편과 함께 배양한다. 그 다음 결합은 관심 폴리펩티드 또는 이의 절편에 특이적인 항체를 이용하여 검출할 수 있다. 폴리펩티드 또는 이의 절편에 결합 된 숙주 결합 파트너는 후속적으로 블롯으로부터 세척 분리하고, 질량 분석법 또는 당해 기술 분야에 공지된 다른 기술에 의하여 후속적으로 분석함으로써 동정할 수 있다.
병원균의 표면에 위치한 폴리펩티드의 결합 파트너가 숙주 유래 분자라면, 이어서 표면에 위치한 폴리펩티드와 숙주 사이의 상호 반응은 박테리아의 발병력에 중요할 수 있다. 따라서, 표면에 위치한 폴리펩티드와 숙주 유래된 결합 파트너의 상호 반응을 방해하는 조성물은 빈창자캄필로박터 감염을 치료하거나 예방하는데 적합할 수 있다. 따라서, 본 발명의 또 다른 방법은 SEQ ID NO : 1-51의 모든 표면에 위치한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36의 모든 표면에 위치한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 표면에 위치한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드와 숙주 유래 된 결합 파트너의 상호 반응의 억제제를 동정하는 방법에 관한 것으로서,
a. SEQ ID NO : 1-51의 모든 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36의 모든 폴리펩티드 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 폴리펩티드, 또는 이의 절편을 제공하는 단계,
b. 상기 폴리펩티드의 숙주 유래 결합 파트너를 제공하는 단계 (전술한 방법 또는 그 밖의 모든 방법에 의하여 동정 된다),
c. 상기 상호 반응의 잠정 억제제가 없는 상태에서, 상기 숙주 유래 결합 파트너와 상기 폴리펩티드 접촉하는 단계,
d. 상기 잠정 억제제의 존재 하에, 상기 숙주 유래 결합 파트너와 상기 폴리펩티드 접촉하는 단계, 및
e. 단계 d의 결과로 상기 숙주 유래 된 결합 파트너에 결합한 상기 폴리펩티드의 결합력은 단계 c의 결과와 비교하여 감소 되었는지 여부를 측정하는 단계를 포함한다.
몇몇 실시 상태에 있어서, 단계 c 및 d는 2개의 서로 다른 시료 분획에서 수행될 수 있다. 다른 실시 상태에 있어서, 단계 d는 단계 c의 혼합물에 잠정 억제제를 첨가함으로써 수행될 수 있다. 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 방법은 다수의 잠정 억제제를 위하여 반복된다.
특히 관심 있는 결합 파트너는 표면에 위치한 폴리펩티드의 활성을 억제한다. 상기 활성은 효소 작용, 운반 작용, 또는 모든 유형의 다른 박테리아 또는 세포 활성, 바람직하게는 효소 활성일 수 있다.
숙주 유래 결합 파트너는 숙주 폴리펩티드와 숙주 리피드가 좋다. 결합은 예컨대, Szymanski and Armstrong (1996) Infect. Immun. 64: 3467-3474에 기재된 바와 같이 측정될 수 있다.
전술한 생화학적 방법의 양호한 실시 상태에 있어서, 결합 파트너와 표면에 위치한 폴리펩티드 또는 이의 절편 사이의 결합은 해리 정수 또는 Kd 값이 5 X 10-6 M 이하, 이를테면 10-6 M 이하, 예를 들어 5 X 10-7 M 이하, 이를테면 10-7 M 이하, 예를 들어 5 X 10-8 M 이하, 이를테면 10-8 M 이하, 예를 들어 5 X 10-9 M 이하, 이를테면 10-9 M 이하, 예를 들어 5 X 10-10 M 이하, 이를테면 10-10 M 이하, 예를 들어 5 X 10-11 M 이하, 이를테면 10-11 M 이하, 예를 들어 5 X 10-12 M 이하, 이를테면 10-12 M 이하이다. 해리 정수는 표면 플라즈몬 공명법에 의하여 측정될 수 있다.
세포를 이용한 방법
표면에 위치한 폴리펩티드를 위한 구조 유전자의 결실 또는 분열에 의하여, 또는 하향 조절 유전자 발현 (아래 참조)에 의하여 표면에 위치한 폴리펩티드의 농도를 감소시키는 것은 박테리아 세포에 영향을 줄 수 있다. 세포는 세포 독성 화합물에 더 민감할 수 있다. 특히 표면에 위치한 폴리펩티드에서, 그들의 농도 감소는 외막 또는 세포벽 등의 세포 외부 부분의 기능, 세포를 진입하는 화합물을 방해하여에 영향을 줄 수 있다. 따라서, 표면에 위치한 폴리펩티드의 농도의 감소는 다양한 화합물에 대하여 세포를 좀 더 "투과적"이 되게 한다.
따라서, 본 발명의 한 측면은 빈창자캄필로박터의 항박테리아 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법에 관한 것으로서,
a. SEQ ID NO : 1-36의 모든 폴리펩티드의 수준을 감소시키는 민감성 세포를 제공하는 단계, 및
b. 예컨대 증식 분석법에 의하여, 잠정 항박테리아 화합물에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계로 이루어진다.
상기 방법은 스크리닝 방법이며, 잠정 항박테리아 화합물을 복수로 하기 위하여 상기 공정을 반복하는 것이 좋다. 잠정 항박테리아 화합물은 야생형 빈창자캄필로박터 세포의 외막을 통하여 통과되지 않는 것이 좋다.
또한, 본 발명은 빈창자캄필로박터에 대한 항박테리아 활성을 갖는 화합물을 동정하기 위한 방법으로서,
a. SEQ ID NO : 37-51의 모든 폴리펩티드의 수준을 감소시키는 민감성 세포를 제공하는 단계, 및
b. 예컨대 증식 분석법에 의하여, 야생형 빈창자캄필로박터 세포의 외막을 통과할 수 없는 잠정 항박테리아 화합물에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계로 이루어진다.
상기 방법은 스크리닝 방법이며, 잠정 항박테리아 화합물을 복수로 하기 위하여 상기 공정을 반복하는 것이 좋다.
이에 대한 이론적 근거는 낮은 농도의 표면 위치 폴리펩티드를 갖는 세포는 세포 독성 화합물에 대한 민감성이 증가하고, 이로 인하여 분석용으로 야생형 세포를 사용하는 경우 놓치게 되는 효능이 낮은 항박테리아 화합물을 동정하게 된다. 상기 방법에 의하여 동정된 화합물은 종종 효능을 향상시키기 위하여 변형될 필요가 있을 것이다. 이는 화학적 변형에 의하여 이루어질 수 있다.
표면에 위치한 폴리펩티드의 활성 억제는 박테리아의 생활력 (즉, 생존, 성장 및/또는 증식)에 영향을 줄 수 있다. 특히, 빈창자캄필로박터의 생활력에 필수적인 표면 위치 폴리펩티드의 억제가 흥미롭다. 빈창자캄필로박터 유전자의 본질은 예를 들어, WO 02/077183에 기재되어 있는 바와 같이 연구될 수 있다. 필수적인 표면 위치 폴리펩티드의 억제제는 박테리아 세포의 생활력에 영향을 미치기 위하여 박테리아 세포에 진입할 필요가 없을 수 있다. 따라서, 일반적으로 항박테리아제로서 효과적이기 위해서, 세포내의 억제제보다 필수적인 표면에 위치한 표적 폴리펩티드의 억제제의 구조상에 위치하는 것이 덜 요구된다.
따라서, 본 발명은 SEQ NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 억제제를 동정하기 위한 방법으로서,
a. SEQ NO : 1-36의 모든 폴리펩티드 중에서 농도가 다른 두 개의 세포를 제공하는 단계,
b. 예를 들어 증식 분석법에 의하여, 잠정 억제제에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계, 및
c. 상기 잠정 억제제의 존재에 의하여 두 개의 세포가 다르게 영향을 받는지 여부를 측정하는 단계로 이루어진다.
상기 방법은 잠정 억제제를 다수 확보하기 위하여 반복하는 것이 좋다. 억제제는 빈창자캄필로박터의 외막을 통과하지 않는 것이 좋다.
또한, 본 발명은 SEQ ID NO : 37-51의 폴리펩티드로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 억제제를 동정하는 방법에 관한 것으로서,
a. SEQ NO : 37-51의 모든 폴리펩티드 중에서 농도가 다른 두 개의 세포를 제공하는 단계,
b. 예를 들어 증식 분석법에 의하여, 빈창자캄필로박터 세포의 외막을 통과할 수 없는 잠정 억제제에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계, 및
c. 상기 잠정 억제제의 존재에 의하여 두 개의 세포가 다르게 영향을 받는지 여부를 측정하는 단계로 이루어진다.
상기 방법은 잠정 억제제를 다수 확보하기 위하여 반복하는 것이 좋다.
이론적으로 접근하면 필수 폴리펩티드의 활성이 낮은 세포의 생활력이 활성이 높은 세포의 생활력보다 폴리펩티드의 억제제에 의하여 더 영향을 받을 것이다. 만일 두 세포가 다르게 영향받는다면, 이는 억제제가 표적상에 작용하거나, 적어도 동일한 생물화학적 경로 중에서 작용한다는 것을 나타내는 것이다.
본 방법의 몇몇 실시 상태에 있어서, 관심 폴리펩티드의 활성이 다른 두 가지 세포는 야생형 세포 (또는 관심 유전자의 야생형 활성을 가지는 다른 세포)와 관심 폴리펩티드의 활성이 감소 된 민감성 세포이다. 몇몇 실시 상태에 있어서, 민감성 세포 중의 상이한 농도 또는 감소 된 농도는 관심 유전자의 발현 수준을 상이하게 하거나 감소시킬 수 있다 (폴리펩티드의 복제 수를 상이하게 하거나 감소시킨다). 이는 유전자를 조절 프로모터의 조절하에 두거나, 필수 폴리펩티드를 코딩하는 mRNA의 번역을 억제하는 안티센스 RNA의 발현을 조절함으로써 이루어질 수 있다. 다른 실시 상태에 있어서, 상이한 활성 또는 감소 된 활성은 예를 들어 온도 민감 돌연변이와 같은 돌연변이 때문에 관심 폴리펩티드의 활성을 상이하게 하거나 감소시킬 수 있다.
억제제를 스크리닝하는 경우, 민감성 세포를 생산하는 적절한 방법 및 이를 이용하는 적절한 방법이 WO 02/077183에 기재되어 있다. 만감성 세포는 유발 인자 또는 억제 인자 또는 그 기능의 존재 또는 부존재가 생활력의 속도 결정 단계가 되는 박테리아 생활력에 필수적인 일정 수준의 유전자 산물을 제공하는 다른 조건 하에 조건 발현 빈창자캄필로박터 돌연변이 균주를 성장시킴으로써 얻을 수 있다. 빈창자캄필로박터의 조절 프로모터는 예를 들어 Kelana 등 (2003) J Food Prot 66: 1190-1197 및 Dedieu 등. (2002) Appl Environ. Microbiol. 68: 4209-4215에 기재되어 있다. 표적 유전자의 치사량에 가깝게 발현하는 경우, 증식 억제는 적어도 약 10%, 이를테면 적어도 약 25%, 예를 들어 적어도 약 50%, 이를테면 적어도 약 75%, 예를 들어 적어도 약 90%, 이를테면 적어도 약 95%일 수 있다.
본 발명의 세포를 이용한 분석법의 또 다른 실시 상태에 있어서, 민감성 세포는 폴리펩티드 중에서 온도 민감 돌연변이와 같은 돌연변이를 이용하여 박테리아 생활력에 필수적인 폴리펩티드의 농도 활성을 감소시킴으로써 얻는다. 증식 허용 온도 및 증식 제한 온도 사이의 중간 온도에서 상기 세포를 성장시켜, 유전자 산물의 활성이 감소 된 세포를 얻는다. 상기 방법은 박테리아 생활력에 필수적인 유전자 산물의 활성 또는 농도를 감소시키나, 완전히 없애는 것은 아닌 모든 돌연변이에 의하여 수행될 수 있다. 또한, 상기 접근은 조건 발현 방법과 조합될 수 있다. 조합된 방법에서, 세포는 관심 유전자 중에서 온도 민감 돌연변이 하도록, 그리고 상기 유전자 또한 조건적으로 발현하도록 제조된다.
필수 폴리펩티드의 억제제를 스크리닝하는 경우, 증식 억제는 실험 시료와 대조군 시료 중에서, 증식량을 직접 비교하여 측정하거나, 접종하지 않은 성장 배지에서 배양의 가시 농도에 의하여 측정할 수 있다. 세포 증식을 분석하기 위한 별도의 방법에는 그린 형광 단백질 (GFT) 보고자 구조 방출, 다양한 효소 활성 분석 및 당해 기술 분야에서 잘 알려진 다른 방법이 있다. 생활력을 측정하는데 사용되는 다른 파라미터에는 예를 들어 단위를 이루는 콜로니가 있다. 상기 방법은 고체상, 액체상, 상기 배지의 조합, 또는 생체 내에서 수행될 수 있다. 다발 화합물은 아가 플레이트에 이전하고, 자동 장비 및 반자동 장비를 이용하여 동시에 시험할 수 있다.
본 발명의 세포를 이용한 분석으로 관심 표적 분자에 대하여 효능이 낮거나 적절한 화합물을 검출할 수 있는데, 이는 상기 화합물이 실질적으로 민감하지 않은 세포보다 민감성 세포에 더 효능이 있기 때문이다. 민감하지 않은 세포와 비교하여 민감성 세포를 시험하는 경우, 시험 화합물은 2 내지 수배, 예를 들어 적어도 10배, 이를테면 적어도 20배, 예를 들어 적어도 50배, 이를테면 적어도 100배, 예를 들어 적어도 1000배, 또는 심지어 1000배 이상으로 효능이 있다.
또한, 표면 위치 폴리펩티드를 과발현하는 돌연변이 빈창자캄필로박터 균주는 상기 폴리펩티드를 억제하는 화합물을 동정하기 위하여 이용될 수 있다. 화합물이 세포 독성이라면, 표적 폴리펩티드의 과발현은 세포를 더욱 내성적으로 만들 수 있다. 따라서, 본 발명은 SEQ ID NO : 1-51의 모든 표면에 위치한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36의 모든 폴리펩티드 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 폴리펩티드의 억제제를 발견하기 위한 방법에 관한 것으로서,
a. SEQ ID NO : 1-51의 모든 표면에 위치한 빈창자캄필로박터 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36 또는 SEQ ID NO : 37-51의 모든 폴리펩티드의 활성이 다른 두 개의 세포를 제공하는 단계로서, 이중 하나의 세포는 실질적으로 상기 폴리펩티드의 야생형 복제수를 함유하고 다른 세포는 상기 폴리펩티드의 야생형 복제수보다 더 많이 함유하고 있는 단계 ,
b. 예를 들어 증식 분석법에 의하여, 잠정 억제제에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계, 및
c. 상기 잠정 억제제의 존재에 의하여 두 개의 세포가 다르게 영향을 받는지 여부를 측정하는 단계로 이루어진다.
과발현은 강한 프로모토를 이용하거나, 표면 위치 폴리펩티드의 구조 유전자의 다수의 복제를 도입함으로써 이루어질 수 있다. 강한 빈창자캄필로박터 프로모터는 Wosten 등. (1998) J. Bacteriol. 180: 594-599에 기재되어 있다. 또한, 억제제이 세포 표적이 아닌 폴리펩티드의 과발현이 억제제에 대한 세포 내성을 만들 수 있기 때문에, 잠정 억제제에 의한 관심 표적 폴리펩티드의 억제는 다른 방법, 예를 들어 생물화학적 분석법에 의하여 확인할 필요가 있다.
표면 위치 폴리펩티드의 생물화학적 활성 또는 다른 세포 활성의 억제제 외에, 전술한 세포 방법은 표적의 발현 수준을 감소시켜, 예를 들어 유전자 조절을 방해함으로써 그 복제 수를 감소시킨 화합물을 동정하는데 이용할 수 있다.
결합 파트너 또는 억제제를 발견하기 위한 모든 세포 이용 방법 또는 생물화학적 방법의 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 방법은 후보 화합물을 복수로 확보하기 위하여 반복한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 세포를 이용하는 방법 중에서 사용되는 돌연변이 빈창자캄필로박터 균주, 즉 표면 위치 폴리펩티드를 코딩하는 유전자가 이종 조절 프로모터의 조절하에 놓인 균주, 표면 위치 폴리펩티드의 온도 민감 대립 유전자를 포함하는 균주 및 표면 위치 폴리펩티드를 과발현하는 균주에 관한 것이다.
표면 위치 폴리펩티드, 이를테면 SEQ ID NO : 1-36의 모든 폴리펩티드를 표적화함으로써 박테리아 성장을 방해하는 다른 방법에는 특정 안티센스 분자, 즉 안티센스 RNA 또는 DNA를 이용하여, 그리고 필수 표면 위치 폴리펩티드를 코딩하는 mRNA에 특이적인 리보자임 분자를 이용하여 유전자 발현을 억제하는 방법이 있다.
도 1. 실험 ACE003b 및 ACE003c으로부터 항원 당 4종의 무작위 선택된 마우스의 혈청을 1:2000으로 희석하고, 전체 세포 캄필로박터 용해질 (B, D) 또는 100 ng의 재조합 단백질 (A, C)에 대하여 웨스턴 블롯 시험한 혈청. 분자량 마커 단백질 MW, 97, 64, 51, 39, 28, 19, 14 (kD)
도 2. 항체의 역가 측정 실험. 21일째에 취해진 (1일 및 14일째에 미리 면역 화시킴) 실험 ACE003b 및 ACE003c으로부터 무작위로 선택된 마우스 (항원당 1개)의 혈청을 연속적으로 희석하고, 대응하는 재조합 단백질 (100ng/스팟) 상에서 웨스턴 블롯하였다.
도 3-1 내지 3-8. 마우스 경구 챌린지의 결과. 다른 조합의 항원과 대조군을 포함하는 5개의 실험을 수행하고 아래와 같이 일람표를 만들었다.
ACE017을 제외하고, 스퀘어의 (in squares) 백반 음성 대조군, 트라이앵글의 (in triangles) 항원, 또한 항원은 트라이앵글이지만, 양성 대조군은 글리신 용출액 (Rombus)이고, 음성 대조군은 CBP (아래 참보)이며 스퀘어로 공통된다.
실험명
사용된 항원
ACE003b Cl0092,Cj0143c,Cl0420,Cj0772c, 백반
ACE003c Cj0715,Cj1018c, Cj1380, Cj1643, 백반
ACE011a Cj0092, Cj0143c, Cj0420, Cj0772c, 백반
ACE011b Cj0715, Cj1018c, Cj1380, Cj1643, 백반
ACE017 Cl0092,Cj0143c,Cl0420,Cj0772c,Cj1018c,Cj1380,Cj1643, 클로스트리디움 셀룰로보란스 (Clostridium cellulovorans)의 셀룰로스 결합 도메인 (CBP, Sigma Aldrich C8581), 본 명세서에서 언급한 C.j. 균주의 글리신 용출물.
도 4는 본원의 서열 목록을 나타낸다.
전략
계획된 실험 단계는 다음과 같다. 표면 단백질은 낮은 pH 용리에 의하여 분리한다. 2-D 젤 및 질량 분석법에 의하여 분석한다. 이 콜라이 발현 벡터로 클로닝한다. 재조합 단백질, 면역화된 마우스를 생산하고, 면역화된 마우스에 빈창자캄필로박터를 도입하며, 질병을 보호하고 창자 콜로니화를 관찰한다. 이 콜라이 및 살모넬라 표면 위치 또한 평가한다 (양성이라면, 독성 약화 벡터 균주 중에서 사용할 수 있다).
박테리아 배양
임상적으로 인간 대변에서 분리한 빈창자캄필로박터 균주 ML53 (항원형 0:19)이 Karen Krogfeld(SSI)에 의하여 제공되었다. 혈액 아가 플레이트 상에서 37℃에서, 10% CO2, 5% 02의 대기 하에 일정하게 성장하였다.
표면 단백질 추출
박테리아를 밤새 혈액 아가 플레이트 상에서 성장시키고, 50 mM Tris pH7.8로 수집하며, 5분 동안 원심 분리하여 펠릿팅하였다. 펠릿은 0.2 M 글리신 pH 2.2에서 재현탁하고, 박테리아 현탁액은 상온에서 10분 동안 가볍게 혼합하였다. 박테리아는 5분 동안 6000g로 원심 분리함으로써 다시 펠릿팅하고, 표면 단백질을 함유하는 상청액을 수집한 후 NaOH로 중화시키고, -80℃에서 냉각하였다. 상기 시료는 Amersham Hi- Trap 탈염 컬럼 상에서 탈염하고, 2-D 젤 전기 이동하였다.
2-D 젤 전기 이동
2차원 젤 전기 이동은 젤 시스템에서 제공된 메뉴얼에 따라 에탄 돌트 (Ettan Dalt) 2 시스템 (아머삼 바이오사이언시즈, Amersham Biosciences) 또는 노벡스 누바게 (Novex NuPage) 시스템 (인비트로겐, Invitrogen)상에서 수행하였다.
요약하면, 1차 이동은 제조자의 지침에 따라 Ettan IPGphor 등전압 초점 맞추기 시스템 (아머삼 바이오사이언시즈)를 이용하여 7 cm 또는 24 cm의 미리 만든 IPG 띠 (pH 범위 3-10 또는 6-11) 상에서 이루어졌다. 아이소포커싱은 7 cm pH 3-10 띠: 8000 Vh, 7 cm pH 6-11 띠: 16000Vh, 24 cm pH 3-10 띠: 52000Vh의 조건하에서 수행하였다. 2차 이동은 미리 만든 12.5% 젤 (아머삼 바이오사이언시즈)을 이용하여 젤당 5W에서 15분 동안 수행하고, 이어서 총 170W로 4-6시간 동안 24 cm 띠로 수행하였다. 7 cm 띠는 미리 만든 4-12% 젤 (인비트로겐)을 이용하여 200 볼트에서 40분 동안 노벡스 누나파게 시스템 상에서 실행하였다. 젤을 Mortz 등. (2001) Proteomics 1(11), 1359-1363에 최초로 기재된 변형 방법에 따라 은색으로 염색하고, 질량 분석을 위한 점을 아머삼의 에탄 스팟 피커 (Ettan Spot Picker) 를 제조자의 지침에 따라 이용하여 골라냈다.
질량 분석
특정 단백질 스팟 (spots)을 스팟-선별하여 Milli-Q 워터에 넣었다. 이들 젤 플러그들을 50 mM NH4HCO3/50% 에탄올로 세정한 다음 96% 에탄올 중에서 인큐베이션시켜 탈수시켰다. 암실에서, 56℃에서 환원 용액 (10 mM DTT, 50 mM NH4HCO3) 중에 인큐베이션시킨 다음 알칼리화 용액 (55 mM 요오도아세트아미드, 50 mM NH4HC03) 중에서 인큐베이션시킴으로써 환원과 알칼리화를 수행하였다. 5 ul의 트립신 용액 (50 mM NH4HC03, 10% 아세토니트릴 중 12.5 ng/ul Promega 트립신)을 첨가하기 전에 세척 및 탈수 사이클을 2회 실시하였다. 이어서 중탄산나트륨 용액을 더 첨가하고 절단물을 37℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. 이 밤새 인큐베이션시킨 절단물에 트리플루오로아세트산을 첨가한 다음 진탕시키면서 인큐베이션시켰다.
추출물의 일부를 MALDI-TOF 펩타이드 질량 지문 분석 (Reflex IV, BrukerDaltonics, 독일)에 사용하고 특정 빈창자캄필로박터(Campylobacter jejuni) 데이터베이스에 대한 데이터베이스 조사에 이 피크 리스트를 이용하였다. 이러한 데이터베이스 조사에는 Mascot 조사 프로그램과 평점 알고리즘 (Matrix Science, 영국)을 이용하였다. 펩타이드 질량 관용성(tolerance)을 각각 60 ppm 및 0.5 Da로 세팅하였다. Met의 산화, 카르바미도메틸기의 Cys로의 부가를 포함하도록 조사 변수를 조절한 다음, 펩타이드 1개당 트립신의 1회 절단이 생략되도록 하였다.
2003년 11월 21일 출원된 덴마크 우선권 출원 PA2003 01726의 List 1 및 2003년 11월 25일 출원된 미국 가 출원 제60/524,617호 (본 발명에 참조 통합됨)의 List 1에 이들 단편들을 동정하였다. 총 51종의 상이한 빈창자캄필로박터(Campylobacter jejuni) 단백질들을 이 공정을 이용하여 동정하였다. 이들 단백질의 전장 서열을 SEQ ID NO : 1-51에 나타내었다 (도 4 참조). 이 서열 목록 중의 단백질들을 Sanger Institute의 분류법에 따라 기능적으로 분류한다. 게놈 서열로부터는 예상되었으나 이전에 특징화된 바 없었고 이미 특징화된 단백질들과 어떠한 상동성도 갖지 않는 모든 단백질들을 Sanger Institute에 의한 가설에 의해 분류하 였다. 공지 단백질과 상동성을 갖는 것들은 대응하는 공지 단백질 앞에 상동성 정도에 따라 "가능한(probable)" 또는 "잠정적인(putative)"이라는 표현을 붙여 명명하였다. 일부 단백질들은 정확한 생화학적/대사적 기능을 평가하기에는 부족하나 이들이 뉴클레오타이드 결합 모티프, 막부착 부위 등과 같은 특정 기능을 갖는다는 사실을 말해주는 소형 모티프를 가졌다. 잠정적인 원형질막 단백질들을 유사한 기준에 따라 분류하였다 - 이들은 원형질내로의 수송을 매개해 줄 수 있는, 짧은 (4-6개 아미노산) N-말단 모티프를 지녔다.
바이오인포매틱
연구:
DNAStar사 (Burland, TG (2000) Methods Mol. Biol. 132: 71-91)로부터 구득한 Lasergene 서열 분석법을 이용하여 결정된 디폴트 변수들을 이용하여 항원성 인덱스 연구를 수행하였다. SEQ ID NO : 52-119에 제시된 서열들은 이들의 대응하는 전장 폴리펩타이드에 대해 특히 항원성이 강한 단편들일 것으로 추정된다 (도 4 참조).
대장균 (E.
coli
)에서의
클로닝
및 발현
목적하는 단백질에 대응하는 유전자들을 PCR 증폭시켜, his-tag (pET101,Invitrogen)을 함유하는 대장균 발현 벡터에 클로닝시켰다. 얻어진 플라스미드를 대장균 (E. coli) BL21 (DE3) 균주 내로 형질전환시킨 다음 0.5 mM IPTG를 이용하여 4시간에 걸쳐 단백질 발현을 유도하였다. 글리신 용출액을 전술한 바와 같이 준비한 다음 3가지 독립적인 방법; 즉, 쿠마씨 염색, 항his 태그 항체를 이용한 웨스턴 블라팅, 및 질량 분광광도 분석을 이용하여 빈창자캄필로박터 (Campylobacter jejuni) 단백질의 존재 여부를 분석하였다. 8종의 플라스미드 Cl0092, CjO143c, Cj0420, Cj0715, Cj0772c, Cj1018c, Cj1380 및 Cj1643을 발현하는 것들)에 대해 표면 위치 검색을 실시하였다. 8종의 단백질 모두가 대장균 (E. coli)의 세포 표면에서 발견되었다.
제조업자의 지침에 따라 NTA-Ni 아가로스 (Qiagen)를 이용하여 전술한 바와 같이 재조합 단백질을 배양체로부터 정제하였다. 정제된 단백질을 PBS에 대하여 투석하여 -80°에서 냉동보관하였다.
마우스 면역화
항원 투여량 결정
각각의 단백질에 대한 최적 면역화 투여량 및 면역화시간 스케쥴을 결정하기 위하여, 각 단백질 1, 5, 10 및 25 마이크로그램으로 마우스를 면역화시켰다. PBS에 용해시킨 적량의 단백질을 100 ㎍의 명반 (Alhydrogen, Brenntag Biosector)/마우스와 함께 혼합한 다음 실온에서 30분간 회전시켰다. PBS를 이용하여 부피를 0.5 ml로 조절하였다. 마우스들을 3차례 (제0일, 제14일, 제28일) 피하 면역화시켰다. 제0일 및 각각의 면역화로부터 7일 후 (제7일, 제21일, 제35일) 채혈하였다. 제7일에 레트로 오비탈 망상조직 (retro orbital pluxus)로부터 혈액 시료 200 μl 혈액 ml를 취하여, 1시간 방치시켜 응고시킨 다음 3500 g에서 10분간 원심분리하여 혈청을 수집하였다.
혈액 분석
혈액 중 항체 역가를 측정하기 위하여 항체 반응을 모니터링하였다. 이것은 웨스턴 블라팅에 의해 수행하였다. PBS/0.1% Tween 중에서 혈청을 1:100 내지 1:256000배로 계대 희석하였다. 막 상의 단백질 밴드 1.5 mm가 단백질 100 ng에 상응하도록 재조합 단백질을 예비 (2-D) 웰 젤 (Invitrogen)을 이용하여 시험에 이용하였다. 1.5mm 폭의 슬롯이 구비된 Surf-Blot 장치(Idea Scientific, Minneapolis, MN)을 이용하여 웨스턴 블라팅을 수행하였다. 혈청 희석물을 일차 항체로 사용하고 알칼라인 포스파타제 컨쥬게이션된 항마우스 항체 (Sigma)를 이차 항체로서 사용하였다. FastTab 타블렛 (Sigma)를 이용하여 블롯을 전개시켰다. 5, 10 및 25 마이크로그램/동물의 양으로 적용하자, 12800 내지 25600의 항혈청 희석 배수에서 모든 항원들이 검출되었다.
챌린지용
면역화
전술한 바와 같이 제조된 재조합 단백질 25 마이크로그램을 이용하여 제0일, 제14일 및 제28일에 마우스들을 면역화시켰다. 제7일, 제21일 및 제35일에 채혈하여 상기와 같이 시험하였다. 최종 부스트로부터 2주일 이내에 챌린지 실험에 이용되지 않은 마우스들을, 챌린지하기 1주일 전 재조합 단백질 10 마이크로그램으로 재차 부스트시켰다.
마우스 경구
챌린지
빈창자캄필로박터 (Campylobacter jejuni) 균주 ML1 및 ML53 (Karen Krogfeld, SSI가 제공한 임상 분리물)을 42°에서 혈액 한천 플레이스 상에서 o/n 배양하였다. 챌린지 전날, 1% 효모 추출물이 함유된 뇌심장 침출 배지로 세균을 수 확하고 OD600 0.05로 희석하여 스타터 배양물을 얻었다. BHI 한천 20 ml를 함유하는 75cm2 플라스크에 상기 스타터 배양체 25 ml를 접종하고 42°에서 밤새 인큐베이션시켰다. 챌린지 당일, 세균을 6000 g에서 5분간 원심분리에 의해 수확하고 신선한 BHI/YE 브로쓰 중에 OD600 1이 되도록 재현탁하였다 (5x108 내지 109 콜로니 형성 유닛 (cfu)/ml; BHI 한천 플레이트에 계대 희석물을 도말함으로써 각각의 뱃치에 대해 실제 cfu를 측정하였다). 마우스에 투여될 때까지 현탁액을 얼음 보관하였다 (대개 조제로부터 3시간 이내).
항원 1종당 6-8마리의 면역화된 마우스들을 2.5-5x108 cfu의 빈창자캄필로박터(Campylobacter jejuni)로 경구적으로 챌린지시켰다 (전술한 바와 같이 제조된 현탁액 0.5 ml). 매일 대변 펠렛 5개 (또는 ACE017 실험에서는 모든 대변 펠렛)를 수집하여, 10% 글리세롤이 보강된 BHI/YE 브로쓰 0.5 ml (또는 5 ml)dp sjgrh -80°로 냉동시켰다.
캄필로박터(Campylobacter)에 대한 선택 배지에 도말함으로써 콜로니화를 모니터링하였다. 대변 펠렛을 균질화시켜 부피를 2 (또는 12) ml로 조정하고 이 균질물 250 ul를 혈액 한천 플레이트 상의 BHI/YE 브로쓰 1.5 ml에 넣었다. 플레이트들을 42°에서 2-3시간 동안 인큐베이션시키고 150 -250 ul의 액체를 Karmali 한천 플레이트 상에 도포한 다음 42°에서 48시간 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트의 점수는 다음과 같이 매겼다: 배지가 완전히 콜로니로 덮인 경우 (confluent lawn) 는 1000점, 별개의 콜로니들이 플레이트 상에 서로 구별되게 형성된 경우는 500점, 그리고 콜로니 수가 100개 미만이면 0-100점 (이 경우 콜로니를 계수하였다). 매일 각각의 항원에 대한 모든 마우스의 점수를 매일 평균 내었다.
균주 염색
13종의 빈창자캄필로박터 균주와 1종이 캄필로박터 콜라이 균주를 마우스 유발 실험을 이용하여 8종의 항원의 존재를 스크리닝하였다. 용해된 모든 세포를 SDS 젤상에 이동시키고, 면역화된 마우스의 항혈청으로 웨스턴 블라팅하였다.
결과
다른 조합의 항원과 대조군을 포함하는 5개의 실험을 수행하고 아래와 같이 일람표를 만들었다.
실험명
사용된 항원
ACE003b Cl0092,Cj0143c,Cl0420,Cj0772c, 백반
ACE003c Cj0715,Cj1018c, Cj1380, Cj1643, 백반
ACE011a Cj0092, Cj0143c, Cj0420, Cj0772c, 백반
ACE011b Cj0715, Cj1018c, Cj1380, Cj1643, 백반
ACE017 Cl0092,Cj0143c,Cl0420,Cj0772c,Cj1018c,Cj1380,Cj1643, 클로스트리디움 셀룰로보란스 (Clostridium cellulovorans)의 셀룰로스 결합 도메인 (CBP, Sigma Aldrich C8581), C.j. 균주 ML1 및 ML53의 글리신 용출물.
실험 ACE003b 및 ACE003c의 마우스의 출혈 상에서 수행한 출혈 분석 실시는 도 1 및 2에 나타내었다.
유발 결과는 도 3-1 내지 3-8에 나타내었다.
서로 다른 캄필로박터 균주에서 항원의 존재를 스크리닝한 결과는 표 1에 나타내었다.
ML53(항원형 0:19) 균주의 ACE 393의 DNA 서열
ML53의 ACE 393 (SEQ ID NO : 120)의 DNA 서열은 단백질 서열로 번역한 후에 아미노산 수준에서 NCBI에서 공개된 서열과 비교할 때 3가지 차이점이 있다.
상기 차이점은 다음과 같다.
아미노산 서열의 위치 70: V (공개 서열) 대 A (ML53 균주)
아미노산 서열의 위치 136: A (공개 서열) 대 T (ML53 균주)
아미노산 서열의 위치 168: T (공개 서열) 대 A (ML53 균주)
초기 동물의 효능 연구용으로 사용된 균주 ML53 (0:19)의 재조합 ACE 393의 단백질 서열을 실험적으로 입증하였다. 상기 분석은 MALDI-TOF에 의한 완전 질량 측정, 1D 젤 분석, 2D 젤 분석 및 2D 젤 웨스턴 블롯을 포함한다. 데이터 (나타내지 않음)는 초기 구조, 즉 C 말단 6 His-태그 및 V5-링커 영역을 포함하는 서열을 기초로 한다. 모든 측정 및 분석은 표준 프로토콜에 따라 Ni-His 정제 후에 얻은 ACE 393으로 수행하였다.
ACE 393의 완전 분석으로부터, 2종의 단백질을 발견하였다. 상기 두 개의 질량은 21 아미노산의 N 말단 절단 형태와 19 아미노산의 C 말단 절단이 추가된 유사 N 말단 절단 형태의 예측 질량과 완벽하게 일치한다. 1D SDS PAGE는 한 개는 크고 한 개는 작은 두 가지 스팟을 보여준다. 상기 두 개의 스팟의 펩티드 지도 제작 데 이터는 과부하 때문에 가능한 모든 차이점을 나타내지 않았다. 2D 젤 분석 상에서 스팟의 수는 혼합물이 2개 이상의 성분을 함유할 수 있다는 것을 가리킨다. 데이터는 SDS 분자의 수 때문에 일어나는 차이에 의한 변화라는 것을 나타냈다. 마우스 항체를 이용한 웨스턴 블롯 데이터는 동일한 패턴을 나타내고, 은색 균주 데이터와도 매우 일치하였다.
나이브
ACE
393 및 재조합
ACE
393의
MALDI
-
TOF
펩티드 지문 분석
나이브
형태
ACE 393의 나이브 형태는 모든 캄필로박터 세포 용해물을 함유하는 4 가지의 서로 다른 2D 젤 중에서 발견되었다. 동정은 서열을 40 내지 55% 커버하는 MALDI-TOF 펩티드 지문 분석에 기초하여 이루어졌다.
MALDI-TOF 펩티드 지문 데이터를 공개 서열 및 ACE-393 인-하우스 발견 서열 (ML53, 0 :19) 양쪽애 대하여 검색하였다. 인-하우스 서열은 두 가지의 추가 펩티드를 가진다.
131-143 DIVLDTEIGGVAK (SEQ ID NO : 121)
166-190 FAASTSTITLSDDINLNIEVEANEK (SEQ ID NO : 122)
(볼드체의 아미노산은 두 가지 서열 사이의 차이점을 나타낸다)
공개 서열과 비교하여 나중의 변형을 함유하는 펩티드 (68- 73; LDATIK (SEQ ID NO : 123))는 너무 작아서 MALDI-TOF 펩티드 지문 분석에 의하여 발견되지 않는다.
재조합 형태
재조합 단백질의 MALDI-TOF 펩티드 지문 분석은 나이브 단백질의 분석 중에서 발견되는 두 가지의 동일한 변형을 나타내고 있다. 추가 펩티드는 링커-His 서열로부터 동정 되었다.
고변이 부위
표적 서열은 "The genome sequence of the food-borne pathogen Campylobacter jejuni reveals hypervariable sequences. Nature. 2000 Feb 10; 403 (6770): 665- 8. "에 기재된 바와 같이, 잠재적인 고변이 부위 및 동질 폴리머 부위를 체크하였다. 본 명세서에 기재되어 있는 표적은 상기 변이 부위에서 발견되지 않으며, 따라서 그들은 백신 후보자로서 특히 적합하다.
<110> ACE Biosciences A/S
<120> Campylobacter polypeptides
<130> KP-CH-066816
<160> 123
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 445
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:1 - Cj0092)
<400> 1
Met Lys Lys Ile Leu Phe Ile Gly Ser Leu Val Met Ala Ser Leu Leu
1 5 10 15
Tyr Ala Gln Gly Ser Gln Pro Val Glu Ile Thr Gln Gln Asp Ile Asn
20 25 30
Thr Gln Asn Glu Met Ser Asp Ala Ser Thr Lys Asp Ile Thr Pro Lys
35 40 45
Ser Ile Glu Asp Phe Phe Glu Glu Phe Ala Asp Asn Phe Gly Ile Glu
50 55 60
Tyr Gly Ile Thr Lys Asp Gly Lys Thr Phe Tyr Thr Gly Lys Ser Thr
65 70 75 80
Val Ala Val Asn Asp Thr Asp Pro Gln Phe Ala Gln Ala Leu Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Gln Lys Ala Met Leu Asn Leu Gln Ser Glu Phe Ile Arg Asp
100 105 110
Ala Phe Gly Arg Ile Ala Thr Ser Lys Ile Gln Asn Tyr Glu Ala Asp
115 120 125
Asn Ser Thr Asn Ala Lys Glu Phe Asp Glu Leu Pro Lys Gly Asp Lys
130 135 140
Val Asp Gln Ile Leu Asn Lys Leu Thr Gln Leu Ala Gly Ala Gln Leu
145 150 155 160
Asp Lys Ala Leu Lys Asp Leu Gly Ile Asp Thr Asn Ser Leu Ser Glu
165 170 175
Asp Arg Lys Lys Thr Leu Leu Lys Gln Glu Phe Leu Asn Lys Thr Met
180 185 190
Thr Asn Ala Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Val Pro Val Gln Thr Ile
195 200 205
Val Thr Gln Arg Arg Gly Glu Tyr Asp Val Gly Val Val Ala Val Ile
210 215 220
Ser Asn Lys Thr Arg Gln Leu Ala Lys Asp Met Ala Leu Ala Arg Gln
225 230 235 240
Ser Ala Ile Lys Gly Lys Gly Lys Ala Ile Ser Glu Tyr Leu Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Lys Gly Phe Leu Asn Glu Tyr Gly Ile Arg Leu Val Tyr Asp
260 265 270
Glu Asn Gly Ala Pro Ile Ile Leu Ser Tyr Gly Asn Trp Gly Tyr Val
275 280 285
Ala Asp Pro Ser Asn Ala Lys Lys Thr Asn Ile Leu Glu Asp Arg Ala
290 295 300
Lys Glu Thr Ala Leu Thr Met Ala Asp Ala Ala Ile Ile Glu Phe Ile
305 310 315 320
Asn Thr Asn Leu Ser Leu Lys Asp Glu Arg Thr Thr Gly Asp Thr Tyr
325 330 335
Glu Glu Ile Ile Lys Gln Ser Ile Asn Val Asn Asp Ser Ser Thr Gln
340 345 350
Glu Gln Thr Gln Asn Ile Thr Asn Ile Ile Asp Lys Val Asn Ser Lys
355 360 365
Ile Lys Ala Ser Ala Ser Gly Lys Ile Arg Gly Ile Arg Thr Leu Lys
370 375 380
Lys Trp Ser Tyr Thr Ser Glu Asn Gly Ile Glu His Val Gly Ala Val
385 390 395 400
Arg Phe Tyr Ser Tyr Glu Asn Leu Ala Asn Thr Asn Glu Ala Leu Asn
405 410 415
Ser Lys Ser Asn Ala Thr Lys Asn Glu Ala Lys Lys Ser Ser Ser Ile
420 425 430
Gln Arg Ser Ser Asn Val Val Asn Ser Met Asp Asp Phe
435 440 445
<210> 2
<211> 412
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:2 - Cj0005)
<400> 2
Met Lys Gln Asn Asp Gln Lys Glu Asn Arg Arg Asp Phe Leu Lys Asn
1 5 10 15
Ile Gly Leu Gly Leu Phe Gly Ile Ser Val Leu Ser Asn Phe Ser Phe
20 25 30
Glu Asn Phe Leu Gly Ser Lys Ala Leu Ala Lys Glu Leu Pro Asp Phe
35 40 45
Lys Ile Glu Gly Lys Lys Asp Leu Ile Tyr His Gly Glu Lys Pro Leu
50 55 60
Thr Ala Glu Thr Glu Ile Tyr Ala Leu Asp Ser Asp Phe Thr Lys Pro
65 70 75 80
Glu Asn Phe Phe Val Arg Asn Asn Gly Leu Pro Pro Ser Leu Glu Thr
85 90 95
Ile Lys Glu Arg Leu His Lys Gly Trp Thr Leu Glu Ile Asp Gly Glu
100 105 110
Ser Ile Ile Asn Lys Lys Ser Tyr Thr Ile Glu Asp Leu Lys Lys Lys
115 120 125
Phe Lys Thr Tyr Thr Tyr Ala Leu Thr Val Glu Cys Gly Gly Asn Gly
130 135 140
Arg Ser Glu Val Ile Pro Ser Thr Lys Gly Thr Gln Trp Gly Tyr Gly
145 150 155 160
Ala Val Ala Cys Gly Arg Trp Thr Gly Val Arg Leu Lys Asp Ile Leu
165 170 175
Lys Asp Cys Gly Ile Lys Asn Asp Ala Val Tyr Ile Gly Tyr Tyr Gly
180 185 190
Ile Asp Thr Lys Leu Asn Gly Glu Glu Thr Ser Pro Ile Ser Arg Gly
195 200 205
Val Pro Ile Ser Lys Ala Leu Gln Asp Glu Thr Leu Ile Ala Trp Ala
210 215 220
Tyr Glu Gly Lys Asp Ile Pro Leu Val Asn Gly Tyr Pro Leu Arg Leu
225 230 235 240
Val Cys Gly Gly Tyr Pro Ala Ser Thr Ser Gly Lys Trp Leu Tyr Lys
245 250 255
Ile Ser Val Arg Asn Lys Ile His Asp Gly Glu Lys Met Glu Gly Ser
260 265 270
Tyr Lys Val Pro Val Asn Pro Val Lys Pro Gly Asp Phe Asn Tyr Lys
275 280 285
Gly Glu Met Lys Ile Ile Glu Ser Met Pro Ile Arg Ser Val Ile Thr
290 295 300
Asn Ile Lys Asn Gly Ser Glu Ile Lys Ala Asn Lys Lys Phe Glu Val
305 310 315 320
Arg Gly Lys Ala Trp Ala Gly Glu Leu Glu Val Ser Glu Val Tyr Val
325 330 335
Ser Asn Asp Tyr Gly Val Thr Trp Thr Lys Ala Lys Val Glu Lys Pro
340 345 350
Leu Asn Arg Leu Ala Trp Gln Lys Trp Ser Ala Gln Ile Ser Ile Pro
355 360 365
Thr Lys Gly Tyr Tyr Glu Ile Trp Ala Arg Ala Ile Asp Ser Gln Gly
370 375 380
Asn Ser Gln Pro Met Val Leu Ala Gln Trp Asn Pro Gly Gly Tyr Ile
385 390 395 400
Asn Asn Ala Cys His Arg Val Asn Val Tyr Gly Val
405 410
<210> 3
<211> 331
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:3 - Cj0029)
<400> 3
Met Lys Lys Ala Lys Ser Arg Ile Ala Ile Leu Gly Thr Gly Gly Thr
1 5 10 15
Ile Ala Gly Phe Ile Asp Ser Thr Ile Ala Thr Thr Gly Tyr Ala Ala
20 25 30
Gly Ala Ile Asp Ile Asp Val Leu Ile Lys Ala Val Pro Gln Ile Arg
35 40 45
Asp Leu Ala Asp Ile Ser Trp Glu Gln Ile Ala Asn Ile Asp Ser Ser
50 55 60
Asn Met Cys Asp Glu Ile Trp Leu Arg Leu Ala Lys Lys Ile Ala Lys
65 70 75 80
Leu Phe Ala Glu Gly Ile Asp Gly Val Val Ile Thr His Gly Thr Asp
85 90 95
Thr Met Glu Glu Thr Ala Tyr Phe Leu Asn Leu Thr Ile Lys Ser Asp
100 105 110
Lys Pro Val Val Leu Val Gly Ala Met Arg Pro Ser Thr Ala Ile Ser
115 120 125
Ala Asp Gly Pro Lys Asn Leu Tyr Asn Ala Val Ala Leu Val Val Asn
130 135 140
Lys Glu Ala Lys Asn Lys Gly Val Met Val Ala Ile Asn Asp Lys Ile
145 150 155 160
Leu Ser Ala Arg Gly Val Val Lys Thr His Ser Leu Asn Val Asp Ala
165 170 175
Phe Ser Ser Pro Asp Phe Gly Asp Leu Gly Tyr Ile Val Asp Gly Lys
180 185 190
Val Phe Phe Tyr Asn Asn Val Ile Lys Ala His Thr Lys Asn Ala Pro
195 200 205
Phe Asp Val Ser Lys Leu Thr Ser Leu Pro Lys Val Asp Ile Leu Tyr
210 215 220
Ser Tyr Ser Asn Asp Gly Ser Gly Val Ala Ala Lys Ala Leu Phe Glu
225 230 235 240
His Gly Thr Lys Gly Ile Val Val Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ser Ile
245 250 255
His Lys Asn Gln Lys Asp Val Leu Lys Glu Leu Leu Lys Lys Gly Leu
260 265 270
Lys Val Val Val Ser Ser Arg Val Val Ala Gly Cys Val Ala Val Ser
275 280 285
Asp Ser Asp Glu Lys Leu Gly Phe Ile Ser Ala Glu Asp Leu Asn Pro
290 295 300
Gln Lys Ala Arg Val Leu Leu Met Leu Ala Leu Thr Lys Thr Ser Asp
305 310 315 320
Pro Lys Lys Ile Gln Glu Tyr Phe Leu Lys Tyr
325 330
<210> 4
<211> 347
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:4 - Cj0037)
<400> 4
Met Lys Lys His Ile Leu Leu Leu Gly Leu Cys Leu Ser Leu Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ala Lys Ser Val Ser Asp Tyr Lys Val Gly Glu Glu Leu Ser Asp
20 25 30
Lys Glu Gly Val Glu Tyr Phe Lys Glu Leu Ser Lys Arg Pro Val Gln
35 40 45
Glu Trp Pro Asn Lys Asn Leu Ser Ile Asn Asp Val Pro Lys Gly Lys
50 55 60
Gln Gly Asp Leu Ile Arg Tyr Gly Ile Glu Leu Leu Ser Lys Thr Glu
65 70 75 80
Ser Thr Leu Gly Pro Tyr Ser Lys Leu Lys Lys Thr Ser Asn Glu Val
85 90 95
Asn Cys Ile Ser Cys His Met Asp Asn Asp Gly Asn Gly Leu Pro Gly
100 105 110
Thr Lys Lys Tyr Val Ile Pro Phe Leu Asn Ile Leu Asn Asn Tyr Pro
115 120 125
Arg Leu Asp Ile Glu Thr Met Lys Ile Ile Ser Val Glu Asp Arg Ile
130 135 140
Arg Gly Met Gly Gly Thr Asp Ser His Arg Phe Pro Asn Asp Ser Lys
145 150 155 160
Glu Met Lys Ala Ile Leu Ala Tyr Phe Lys Trp Leu Lys Glu Ala Tyr
165 170 175
Gly Ile Lys Asp Gly Val Lys Leu Glu Gly Asp Phe Phe Ala Lys Met
180 185 190
Asn Phe Pro Asn Arg Pro Ala Asp Pro Val Arg Gly Lys Lys Leu Phe
195 200 205
Glu Glu Asn Cys Val Ala Cys His Gly Glu Arg Gly Leu Gly Val Lys
210 215 220
Asn Asp Asn Tyr Glu Gln Gly Ser Gly His Leu Tyr Pro Ser Leu Leu
225 230 235 240
Ile Tyr Pro Asp Gly Gly His Met Ala Met Ile Pro Phe Leu Ala Arg
245 250 255
Phe Leu Lys Ser Ala Met Pro Phe Gly Ala Ser Ala Asp Asn Pro Ile
260 265 270
Leu Ser Asp Glu Asp Ala Leu Asp Ile Ala Ala Tyr Val Asn Thr Gly
275 280 285
Phe Val Arg Met Pro Ile Thr Thr Thr Glu Asn Arg Ala Gly Leu Asp
290 295 300
Thr Ala Tyr Ser Lys Ser Pro Ser Leu Lys Pro Glu Tyr Phe Ala Ser
305 310 315 320
Pro Gln Gln Asn Leu Asp Pro Lys Glu Tyr Ile Lys Val Lys Tyr Gly
325 330 335
Pro Trp Lys Asn Pro Asn His Phe Pro Gly Glu
340 345
<210> 5
<211> 400
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:5 - Cj0093)
<400> 5
Met Lys Ile Ile Lys Ile Leu Phe Leu Gly Leu Phe Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ala Lys Val Ile Thr Thr Thr Ser Thr Lys Ser Ser Thr Gly
20 25 30
Glu Gly Thr Gly Leu Thr Arg Glu Asp Ala Ile Asn Asn Ala Ile Ile
35 40 45
Glu Ala Ile Gly Lys Met Ser Gly Val Ser Ile Asn Ser Leu Lys Lys
50 55 60
Ser Asn Thr Ser Val Ser Thr Asp Asn Ser Gly Ser Asn Ile Gln Asp
65 70 75 80
Asn Tyr Ser Glu Gln Ile Ser Lys Ala Thr Lys Gly Arg Ala Asp Thr
85 90 95
Tyr Glu Ile Asn Ser Val Glu Gln Asp Ala Asn Gly Lys Tyr Thr Ala
100 105 110
Asn Val Thr Ile Phe Lys Thr Thr Thr Thr Lys Lys Tyr Gln Ala Pro
115 120 125
Gly Leu Ser Ala Asp Asn Arg Arg Ser Ile Thr Val Phe Asp Ser Thr
130 135 140
Pro Asp Ala Ala Lys Arg Gly Ile Gly Ser Ala Leu Gln Gln Lys Ile
145 150 155 160
Ile Ser Asp Leu Leu Gln Ser Arg Lys Phe Asn Val Leu Asp Arg Asp
165 170 175
Ser Ser Gly Tyr Tyr Glu Met Glu Lys Ala Leu Ile Lys Ser Gly Asp
180 185 190
Ala Ala Ser Asp Glu Val Tyr Lys Leu Lys Asn Met Leu Ala Thr Asp
195 200 205
Tyr Ile Leu Leu Phe Ser Ile Ser Gly Leu Glu Gly Lys Gln Lys Thr
210 215 220
Ser Asn Leu Thr Gly Lys Ser Lys Thr Glu Ile Glu Val Ile Val Asp
225 230 235 240
Tyr Arg Val Leu Leu Phe Ala Thr Arg Gln Ile Lys Phe Ser Asn Thr
245 250 255
Leu Ser Met Lys Val Asn Leu Lys Asp Asn Ser Leu Ser Ala Asn Glu
260 265 270
Thr Ala Leu Lys Gln Ile Ala Asn Arg Ile Ala Gly Asp Ile Leu Asn
275 280 285
Ala Ile Tyr Pro Leu Lys Val Ala Ser Val Glu Asn Asn Glu Val Ile
290 295 300
Phe Ser Gln Ser Leu Asn Gln Gly Asp Val Tyr Glu Cys Phe Ala Leu
305 310 315 320
Gly Lys Val Ile Lys Asp Thr Tyr Thr Lys Glu Asn Thr Gly Arg Val
325 330 335
Glu Ser Lys Thr Gly Ser Ile Glu Ile Thr Arg Thr Ser Pro Lys Phe
340 345 350
Ser Tyr Ala Lys Ile Thr Glu Gly Ser Val Lys Val Gly Asp Ile Cys
355 360 365
Arg Pro Leu Ser Asn Thr Gly Ser Gly Asn Gly Tyr Thr Ile Gly Arg
370 375 380
Asp Ala Asn Tyr Gln Thr Gln Glu Gly Gly Gly Val Asn Leu Gly Phe
385 390 395 400
<210> 6
<211> 465
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:6 - Cj0107)
<400> 6
Met Gln Gly Phe Ile Ser Gln Val Leu Gly Pro Val Val Asp Val Asp
1 5 10 15
Phe Asn Asp Tyr Leu Pro Gln Ile Asn Glu Ala Ile Val Val Asn Phe
20 25 30
Glu Ser Glu Gly Lys Lys His Lys Leu Val Leu Glu Val Ala Ala His
35 40 45
Leu Gly Asp Asn Arg Val Arg Thr Ile Ala Met Asp Met Thr Asp Gly
50 55 60
Leu Val Arg Gly Leu Lys Ala Glu Ala Leu Gly Ala Pro Ile Ser Val
65 70 75 80
Pro Val Gly Glu Lys Val Leu Gly Arg Ile Phe Asn Val Thr Gly Asp
85 90 95
Leu Ile Asp Glu Gly Glu Glu Ile Ser Phe Asp Lys Lys Trp Ala Ile
100 105 110
His Arg Asp Pro Pro Ala Phe Glu Asp Gln Ser Thr Lys Ser Glu Ile
115 120 125
Phe Glu Thr Gly Ile Lys Val Val Asp Leu Leu Ala Pro Tyr Ala Lys
130 135 140
Gly Gly Lys Val Gly Leu Phe Gly Gly Ala Gly Val Gly Lys Thr Val
145 150 155 160
Ile Ile Met Glu Leu Ile His Asn Val Ala Phe Lys His Ser Gly Tyr
165 170 175
Ser Val Phe Ala Gly Val Gly Glu Arg Thr Arg Glu Gly Asn Asp Leu
180 185 190
Tyr Asn Glu Met Lys Glu Ser Asn Val Leu Asp Lys Val Ala Leu Cys
195 200 205
Tyr Gly Gln Met Asn Glu Pro Pro Gly Ala Arg Asn Arg Ile Ala Leu
210 215 220
Thr Gly Leu Thr Met Ala Glu Tyr Phe Arg Asp Glu Met Gly Leu Asp
225 230 235 240
Val Leu Met Phe Ile Asp Asn Ile Phe Arg Phe Ser Gln Ser Gly Ser
245 250 255
Glu Met Ser Ala Leu Leu Gly Arg Ile Pro Ser Ala Val Gly Tyr Gln
260 265 270
Pro Thr Leu Ala Ser Glu Met Gly Lys Phe Gln Glu Arg Ile Thr Ser
275 280 285
Thr Lys Lys Gly Ser Ile Thr Ser Val Gln Ala Val Tyr Val Pro Ala
290 295 300
Asp Asp Leu Thr Asp Pro Ala Pro Ala Thr Val Phe Ala His Leu Asp
305 310 315 320
Ala Thr Thr Val Leu Asn Arg Ala Ile Ala Glu Lys Gly Ile Tyr Pro
325 330 335
Ala Val Asp Pro Leu Asp Ser Thr Ser Arg Met Leu Asp Pro Asn Ile
340 345 350
Ile Gly Glu Glu His Tyr Lys Val Ala Arg Gly Val Gln Ser Val Leu
355 360 365
Gln Lys Tyr Lys Asp Leu Gln Asp Ile Ile Ala Ile Leu Gly Met Asp
370 375 380
Glu Leu Ser Glu Glu Asp Lys Leu Val Val Glu Arg Ala Arg Lys Ile
385 390 395 400
Glu Lys Phe Leu Ser Gln Pro Phe Phe Val Ala Glu Val Phe Thr Gly
405 410 415
Ser Pro Gly Lys Tyr Ile Ser Leu Glu Asp Thr Ile Ala Gly Phe Lys
420 425 430
Gly Ile Leu Glu Gly Lys Tyr Asp His Leu Pro Glu Asn Ala Phe Tyr
435 440 445
Met Val Gly Asn Ile Asp Glu Ala Ile Ala Lys Ala Asp Lys Leu Lys
450 455 460
Gly
465
<210> 7
<211> 402
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:7 - Cj0112)
<400> 7
Met Lys Lys Ile Val Ala Ile Phe Leu Val Phe Leu Gly Ser Leu Trp
1 5 10 15
Ala Glu Asp Pro Val Ile Asp Val Val Asn Ser Gly Val Val Leu Pro
20 25 30
Lys Ile Ile Val Lys Asp Asn Ser Asn Leu Ser Asp Glu Asn Leu Lys
35 40 45
Lys Ser Phe Tyr Asn Ile Ile Val Asn Asp Leu Lys Val Ser Ser Asn
50 55 60
Phe Glu Val Val Ala Asn Ala Thr Glu Thr Ser Asn Tyr Ile Phe Glu
65 70 75 80
Tyr Thr Leu Asn Lys Asn Gly Asn Thr Leu Ser Leu Asn Val Lys Ile
85 90 95
Lys Ala Gly Gly Ser Asp Lys Ser Glu Gln Thr Tyr Thr Leu Asn Gly
100 105 110
Leu Glu Gln Tyr Pro Phe Leu Ala His Lys Ser Val Lys Ala Ser Val
115 120 125
Asn Ala Leu Gly Leu Ala Pro Val Asp Trp Met Asp His Lys Ile Leu
130 135 140
Ile Ala Arg Asn Ser Ser Ser Lys Lys Ser Gln Ile Ile Met Ala Asp
145 150 155 160
Tyr Thr Leu Thr Tyr Gln Lys Val Ile Val Asp Gly Gly Leu Asn Leu
165 170 175
Phe Pro Lys Trp Gly Asn Lys Glu Gln Thr Leu Phe Tyr Tyr Thr Ala
180 185 190
Tyr Asp His Asp Lys Pro Thr Leu Tyr Arg Tyr Asp Leu Asn Thr Asn
195 200 205
Lys Ala Ser Lys Ile Leu Ser Ser Gly Gly Met Val Val Ala Ser Asp
210 215 220
Val Asn Val Asp Gly Ser Lys Leu Leu Val Thr Met Ala Pro Lys Asp
225 230 235 240
Gln Pro Asp Val Tyr Leu Tyr Asp Leu Asn Thr Lys Asn Leu Thr Gln
245 250 255
Leu Thr Asn Tyr Ser Gly Ile Asp Val Asn Gly Asn Phe Ile Gly Ser
260 265 270
Asp Asp Ser Lys Val Val Phe Val Ser Asp Arg Leu Gly Tyr Pro Asn
275 280 285
Ile Phe Met Gln Asp Leu Asn Ser Asn Ser Ala Glu Gln Val Val Phe
290 295 300
His Gly Arg Asn Asn Ser Ala Val Ser Thr Tyr Lys Asp Phe Leu Val
305 310 315 320
Tyr Ser Ser Arg Glu Pro Asn Gln Ala Gly Val Phe Asn Ile Tyr Leu
325 330 335
Met Ser Ile Asn Ser Asp Tyr Ile Arg Gln Leu Thr Ala Asn Gly Lys
340 345 350
Asn Leu Phe Pro Arg Phe Ser Ser Asp Gly Gly Ser Ile Val Phe Ile
355 360 365
Lys Tyr Leu Gly Ala Gln Ser Ala Leu Gly Val Ile Arg Val Asn Ala
370 375 380
Asn Lys Thr Phe Tyr Phe Pro Leu Arg Val Gly Lys Ile Gln Ser Ile
385 390 395 400
Asp Trp
<210> 8
<211> 280
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:8 - Cj0143)
<400> 8
Phe Thr Gln Ala Lys Asn Leu Glu Gln Glu Gln Asn Thr Ser Ser Asn
1 5 10 15
Leu Val Ser Val Ser Ile Ala Pro Gln Ala Phe Phe Val Lys Lys Ile
20 25 30
Ala Ala Asn Thr Leu Asp Val Asn Val Ile Leu Pro Pro Asn Ser Asn
35 40 45
Glu His Asn Phe Glu Phe Lys Pro Ser Thr Met Lys Lys Leu Glu Lys
50 55 60
Ser Asp Ile Tyr Phe Thr Ile Gly Leu Glu Phe Glu Lys Val Phe Thr
65 70 75 80
Asp Lys Phe Lys Gln Asn Phe Pro Lys Leu Gln Val Ile Asn Met Gln
85 90 95
Lys Asn Ile Ala Leu Ile Gln Thr His Asp Thr His Glu His Ser His
100 105 110
Glu His Glu His His Glu His Gly His Phe Asp Pro His Thr Trp Leu
115 120 125
Asp Pro Ile Leu Val Gln Thr Met Ala Leu Asn Ile Tyr Asp Thr Leu
130 135 140
Ile Gln Lys Tyr Pro Gln Asn Glu Asn Leu Tyr Lys Glu Asn Leu Asp
145 150 155 160
Lys Phe Leu Ala Glu Leu Asp Ser Leu Asn Leu Gln Ile Ala Ser Lys
165 170 175
Leu Glu Lys Leu Lys Asn Arg Glu Phe Val Val Tyr His Pro Ser Trp
180 185 190
Thr Tyr Phe Ala Lys Arg Tyr Asn Leu Thr Gln Ile Pro Val Glu Ile
195 200 205
Leu Gly Lys Glu Pro Lys Ser Lys Asp Leu Gln Lys Leu Ile Thr Leu
210 215 220
Met Lys Asp Lys Asn Leu Lys Val Ile Phe Val Gln Asn Gly Phe Pro
225 230 235 240
Glu Asn Ala Ala Lys Thr Leu Ala Lys Glu Cys Asp Ala Lys Ile Tyr
245 250 255
Lys Ile Asp His Leu Ser Tyr Asp Trp Glu Asn Glu Leu Leu Lys Thr
260 265 270
Ala Asp Ala Phe Ser His Asn Leu
275 280
<210> 9
<211> 220
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:9 - Cj0169)
<400> 9
Met Phe Glu Leu Arg Lys Leu Pro Tyr Asp Thr Asn Ala Phe Gly Asp
1 5 10 15
Phe Leu Ser Ala Glu Thr Phe Ser Tyr His His Gly Lys His His Asn
20 25 30
Thr Tyr Val Thr Asn Leu Asn Asn Leu Ile Lys Asp Thr Glu Phe Ala
35 40 45
Gly Lys Asp Leu Val Ser Ile Ile Lys Thr Ser Asn Gly Gly Val Phe
50 55 60
Asn Asn Ala Ala Gln Val Tyr Asn His Asp Phe Tyr Phe Asp Cys Ile
65 70 75 80
Lys Pro Ser Thr Gly Cys Gly Cys Gly Gly Ser Cys Gln Ser Ile Asp
85 90 95
Ala Asn Leu Gln Ala Ala Leu Glu Lys Glu Phe Gly Ser Leu Glu Asn
100 105 110
Phe Lys Ala Glu Phe Ile Lys Gly Ala Thr Gly Val Phe Gly Ser Gly
115 120 125
Trp Phe Trp Leu Val Tyr Asn Thr Lys Asn Gln Lys Leu Glu Phe Val
130 135 140
Gly Thr Ser Asn Ala Ala Thr Pro Ile Thr Glu Asp Lys Val Pro Leu
145 150 155 160
Leu Val Val Asp Val Trp Glu His Ala Tyr Tyr Val Asp His Arg Asn
165 170 175
Ala Arg Pro Ala Tyr Leu Glu Lys Phe Tyr Ala His Ile Asn Trp Glu
180 185 190
Phe Val Ala Lys Ala Tyr Glu Trp Ala Leu Lys Glu Gly Met Gly Ser
195 200 205
Val Ser Phe Tyr Ala Asn Glu Leu His Pro Val Lys
210 215 220
<210> 10
<211> 444
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:10 - Cj0193c)
<400> 10
Met Glu Val Lys Ala Lys Gln Leu Asp Ser Val Asn Ala Thr Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Ile Pro Ser Gly Met Ile Lys Ser Glu Val Glu Asn Leu Ala
20 25 30
Lys Lys Ala Ser Lys Ser Val Lys Met Asp Gly Phe Arg Pro Gly Lys
35 40 45
Val Pro Val Ser Ala Val Leu Lys Arg Tyr Glu Arg Glu Leu Thr Gln
50 55 60
Asp Ala Glu Gln Asn Leu Phe Lys Ser Ala Val Asn Ser Ala Leu Gln
65 70 75 80
Glu Leu Lys Lys Glu Asn Lys Glu Leu Val Gly Glu Pro Tyr Phe Glu
85 90 95
Lys Phe Asp Arg Lys Asp Gly Glu Ile Ile Ala Glu Leu Ile Leu Ser
100 105 110
Phe Lys Pro Glu Ile Lys Leu Glu Gly Tyr Glu Lys Leu Ile Pro Glu
115 120 125
Tyr Gln Thr Pro Lys Val Ser Lys Lys Glu Ile Asp Glu Lys Lys Asp
130 135 140
Glu Leu Leu Lys Arg Phe Ala Thr Pro Glu Ala Ile Lys Thr Lys Arg
145 150 155 160
Ala Leu Lys Glu Gly Asp Phe Ala Lys Phe Asp Phe Glu Gly Phe Val
165 170 175
Asp Asp Lys Ala Phe Glu Gly Gly Lys Ala Glu Asn Tyr Val Leu Glu
180 185 190
Ile Gly Ser Lys Gln Phe Ile Pro Gly Phe Glu Asp Gly Met Val Gly
195 200 205
Met Lys Ile Gly Glu Glu Lys Asp Ile Lys Val Thr Phe Pro Lys Glu
210 215 220
Tyr Gly Ala Ala His Leu Ala Gly Lys Asp Ala Val Phe Lys Val Lys
225 230 235 240
Leu His Glu Ile Gln Glu Leu Lys Ile Pro Glu Leu Asp Asp Glu Met
245 250 255
Leu Lys Lys Leu Leu Pro Gly Glu Glu Lys Ala Ser Val Glu Val Leu
260 265 270
Asp Glu Lys Leu Lys Glu Gln Ile Lys Asn Glu Lys Leu Phe Lys Leu
275 280 285
Val Asn Asp Glu Leu Lys Gly Lys Phe Ala Asp Ala Leu Ile Glu Lys
290 295 300
Tyr Asn Phe Asp Leu Pro Lys Gly Ile Val Glu Gln Glu Thr Asp Met
305 310 315 320
Gln Met Arg Ala Ala Phe Asn Thr Phe Ser Glu Lys Glu Ile Glu Glu
325 330 335
Leu Lys Ala Ser Lys Glu Lys Tyr Gln Glu Lys Arg Asp Ser Phe Lys
340 345 350
Glu Glu Ala Gln Lys Ser Val Lys Leu Thr Phe Ile Ile Asp Glu Leu
355 360 365
Ala Lys Leu Arg Lys Ile Glu Val Asn Asp Gln Glu Leu Ile Gln Ala
370 375 380
Ile Tyr Phe Glu Ala Tyr Arg Tyr Gly Met Asn Pro Lys Glu His Leu
385 390 395 400
Glu Asn Tyr Lys Lys Gln Gly Ala Leu Pro Ala Val Lys Met Ala Leu
405 410 415
Ile Glu Glu Lys Leu Phe Asn Asp Ile Phe Ile Pro Lys Thr Glu Lys
420 425 430
Ser Glu Lys Val Ser Lys Lys Glu Lys Glu Asp Lys
435 440
<210> 11
<211> 318
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:11 - Cj0285c)
<400> 11
Met Phe Asp Glu Asn Ile Val Lys Thr Gly Ser Asn Glu Met Glu Leu
1 5 10 15
Val Asp Phe Arg Ile Phe Lys Gln Gly His Asp Lys Val Tyr Glu Gly
20 25 30
Ile Tyr Gly Val Asn Val Ser Lys Val Arg Glu Ile Ile Lys Ile Pro
35 40 45
Ser Leu Thr Glu Leu Pro Gly Val Pro Asp Tyr Ile Glu Gly Ile Phe
50 55 60
Asp Leu Arg Gly Val Val Ile Pro Val Val Asn Leu Ala Lys Trp Met
65 70 75 80
Gln Ile Thr Glu Pro Glu Ser Thr Met Leu Lys Pro Arg Val Ile Ile
85 90 95
Thr Glu Phe Ser Asn Ile Leu Ile Gly Phe Ile Val His Glu Ala Lys
100 105 110
Arg Ile Arg Arg Ile Asn Trp Lys Asp Ile Glu Pro Ala Thr Phe Ser
115 120 125
Thr Gly Ser Gly Ala Leu Asp Lys Gly Lys Ile Thr Gly Val Thr Arg
130 135 140
Ile Glu Asn Asp Glu Val Leu Leu Ile Leu Asp Leu Glu Ser Val Val
145 150 155 160
Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Ala Pro Lys Thr Asp Ile Asp Phe Gly Lys
165 170 175
Ile Glu Lys Phe Thr Gly Thr Ala Leu Ile Leu Asp Asp Ser Met Thr
180 185 190
Ala Arg Lys Arg Val Lys Glu Met Met Gln Gln Met Gly Phe Gln Val
195 200 205
Val Glu Ala Lys Asp Gly Val Glu Gly Ile Asn Lys Leu Glu Glu Leu
210 215 220
Ser Gln Ile Tyr Gly Glu Ser Leu Asn Asp Thr Leu Lys Ile Ile Val
225 230 235 240
Ser Asp Val Glu Met Pro Gln Met Asp Gly Phe His Phe Ala Ala Arg
245 250 255
Ile Lys Glu Asp Pro Arg Phe Lys Asp Ile Pro Ile Val Phe Asn Ser
260 265 270
Ser Leu Ser Asn Glu Phe Met Asn Glu Lys Gly Val Gln Glu Ala Gly
275 280 285
Gly Glu Gly Tyr Leu Val Lys Phe Asn Ala Ser Asp Phe Phe Asn Glu
290 295 300
Ile Ala Lys Val Ile Lys Lys His Gln Ser Gln Glu Gln Gly
305 310 315
<210> 12
<211> 341
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:12 - Cj0358)
<400> 12
Met Lys Val Lys Ser Leu Leu Ile Ala Ser Leu Val Ala Phe Ser Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ala Ala Ser Leu Ile Asp Glu Ala Lys Asn Ser Gly Leu Val
20 25 30
Ala Leu Pro Lys Asp Gln Lys Gly Val Asp Glu Ile Leu Lys Gln Asn
35 40 45
Gly Val Lys Ala Ser Glu Phe Thr Leu Glu Lys Ala Glu Leu Gly Lys
50 55 60
Lys Leu Tyr Phe Glu Pro Arg Leu Ser Lys Ser Gly Ile Ile Ser Cys
65 70 75 80
Asn Thr Cys His Asn Val Gly Leu Gly Gly Thr Asp Gly Ile Ser Thr
85 90 95
Ala Ile Gly His Lys Trp Thr Ala Asn Pro His His Leu Asn Ser Pro
100 105 110
Thr Val Tyr Asn Ala Val Leu Asn Asn Thr Gln Phe Trp Asp Gly Arg
115 120 125
Ala Gly Thr Leu Ala Asp Gln Ala Lys Gly Pro Ile Gln Ala Asp Pro
130 135 140
Glu Met Ala Thr Pro Ala Lys Leu Ala Val Glu Lys Ile Ser Ser Leu
145 150 155 160
Pro Glu Tyr Val Ser Glu Phe Lys Lys Ile Tyr Gly Lys Ser Gly Val
165 170 175
Asn Phe Asp Asn Ile Ala Asp Ala Ile Ala Asn Phe Glu Arg Thr Leu
180 185 190
Ile Thr Pro Ser Arg Phe Asp Lys Phe Leu Glu Gly Asp Glu Lys Ala
195 200 205
Leu Thr Lys Glu Glu Gln Lys Gly Leu Lys Leu Phe Ile Asp Lys Gly
210 215 220
Cys Val Ala Cys His Asn Gly Val Asn Leu Gly Gly Asn Met Gln Ala
225 230 235 240
Phe Glu Val Ala Gly Lys Tyr Lys Phe Ala Asn Leu Gly Asp Phe Lys
245 250 255
Gly Asp Ala Asn Gly Met Val Lys Thr Pro Thr Leu Arg Asn Val Ala
260 265 270
Glu Thr Ala Pro Tyr Phe His Asn Gly Ala Ile Trp Asn Leu Lys Asp
275 280 285
Ala Ile Lys Glu Met Gly Ser Val Gln Leu Gly Ile Lys Ile Ser Asp
290 295 300
Lys Glu Ala Lys Ser Ile Glu Thr Phe Leu Lys Ser Leu Thr Gly Thr
305 310 315 320
Lys Pro Ala Ile Val Tyr Pro Gln Leu Pro Ile Ser Thr Glu Lys Thr
325 330 335
Pro Lys Pro Glu Leu
340
<210> 13
<211> 365
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:13 - Cj0448c)
<400> 13
Met Phe Gly Ser Lys Ile Asn His Ser Asp Leu Gln Lys Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Asn Lys Asn Leu Thr His Lys Ile Glu Lys Phe Gln Ser Glu Asn
20 25 30
Leu Glu Leu Lys Asn Lys Ile Thr Ser Leu Glu Gln Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Lys Leu Lys Thr Asp Leu Leu Asn Val Leu Leu Thr Gly Val Leu
50 55 60
Lys Asn Ile Thr Ile Ile Gln Gly Asp Met Leu Glu Asn Val Asn Lys
65 70 75 80
Ala Glu Val Ile Ser Ser Tyr Ser Lys Thr Ser Leu Ala Glu Met Asp
85 90 95
Glu Leu Asn His Ile Ala Asn Ser Ile Asn Ala Ser Leu Gly Asn Ile
100 105 110
Thr Glu Ser Ala Asn Lys Thr Arg Asp Val Ala Gly Thr Leu His Arg
115 120 125
Ser Val Asp Glu Ile Thr Asn Val Ile Asn Leu Ile Lys Asp Val Ser
130 135 140
Asp Gln Thr Asn Leu Leu Ala Leu Asn Ala Ala Ile Glu Ala Ala Arg
145 150 155 160
Ala Gly Glu His Gly Arg Gly Phe Ala Val Val Ala Asp Glu Val Arg
165 170 175
Lys Leu Ala Glu Lys Thr Gln Lys Ala Thr Thr Glu Val Glu Met Asn
180 185 190
Ile Asn Leu Leu Lys Gln Asn Ala Asn Glu Met Tyr Thr Gln Ser Glu
195 200 205
Gln Val Glu Lys Ile Ser Ile Asp Ser Asn Ala His Ile Met Ser Phe
210 215 220
Ser Glu Lys Phe Thr His Leu Val Asn Glu Ala His Ser Thr Asn Ser
225 230 235 240
Asn Ala Val Gly Ile Ala Ser Glu Ala Phe Val Ser Leu Ala Lys Leu
245 250 255
Asp His Ile Ala Phe Lys Leu Asn Gly Tyr Lys Glu Ile Phe Ser Lys
260 265 270
Ser Gly Lys Gln Leu Ala Asp His Thr Ser Cys Arg Leu Gly Lys Trp
275 280 285
Leu Ala Ser Thr Gly Lys Glu Arg Phe Gly Gln Asn Lys Ser Phe Leu
290 295 300
Lys Ile Asn Glu Pro His Glu Lys Val His Glu Asn Met Asn Asn Ala
305 310 315 320
Ile Thr Ile Ala Asn Thr Glu Asp Ile Ser Lys Asp Ile Thr Gln His
325 330 335
Ser Ile Ile Asn Lys Cys Glu Val Ala Glu Asn Ala Ser Leu Asp Leu
340 345 350
Phe Asn Val Phe Lys Glu Met Leu Asp Glu Ser Asp His
355 360 365
<210> 14
<211> 71
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:14 - Cj0449c)
<400> 14
Met Leu His Glu Tyr Arg Glu Leu Met Ser Glu Leu Lys Gly Lys Asp
1 5 10 15
Ala His Phe Asp Lys Leu Phe Asp Arg His Asn Glu Leu Asp Asp Met
20 25 30
Ile Lys Asp Ala Glu Glu Gly Arg Thr Ser Leu Ser Ser Met Glu Ile
35 40 45
Ser Thr Leu Lys Lys Glu Lys Leu His Val Lys Asp Glu Leu Ser Gln
50 55 60
Tyr Leu Ala Asn Tyr Lys Lys
65 70
<210> 15
<211> 444
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:15 - Cj0511)
<400> 15
Met Met Glu Leu Ile Leu Lys Thr Lys Arg Phe Phe Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Gly Phe Ala Thr Thr Phe Ile Leu Cys Leu Phe Leu Thr Ser His Leu
20 25 30
Gln Ala Lys Val Asp Gln Lys Glu Glu Gln Val Gln Lys Arg Leu Glu
35 40 45
Ala Leu Asp Lys Leu Thr Lys Thr Leu Ala Ile Val Glu Gln Tyr Tyr
50 55 60
Val Asp Asp Gln Asn Ile Ser Asp Leu Val Asp Lys Ser Leu Ser Gly
65 70 75 80
Leu Leu Ser Asn Leu Asp Ala His Ser Ser Phe Leu Asn Glu Lys Asp
85 90 95
Phe Asn Asp Met Lys Ile Gln Thr Asn Gly Glu Phe Gly Gly Leu Gly
100 105 110
Ile Thr Val Gly Met Lys Asp Gly Ala Leu Thr Val Val Ser Pro Ile
115 120 125
Glu Gly Thr Pro Ala Asp Lys Ala Gly Ile Lys Ser Gly Asp Ile Ile
130 135 140
Leu Lys Ile Asn Asp Glu Ala Thr Leu Gly Ile Asn Leu Asn Asp Ala
145 150 155 160
Val Asp Lys Met Arg Gly Lys Pro Lys Thr Gln Ile Thr Leu Thr Ile
165 170 175
Phe Arg Lys Gly Ala Thr Lys Pro Phe Asp Val Thr Leu Thr Arg Glu
180 185 190
Ile Ile Lys Ile Glu Ser Val Tyr Ala Lys Met Ile Glu Asn Glu Asn
195 200 205
Ile Leu Tyr Leu Arg Val Thr Asn Phe Asp Lys Asn Val Val Asp Val
210 215 220
Ala Ser Lys Glu Leu Lys Lys Tyr Pro Asn Val Lys Gly Val Ile Leu
225 230 235 240
Asp Leu Arg Asn Asn Pro Gly Gly Leu Leu Asn Gln Ala Ile Gly Leu
245 250 255
Val Asn Leu Phe Val Asp Lys Gly Val Ile Val Ser Gln Lys Gly Arg
260 265 270
Ile Ala Ser Glu Asn Gln Glu Tyr Lys Ala Asp Pro Lys Asn Lys Ile
275 280 285
Ser Asn Ala Ser Leu Val Val Leu Val Asn Gly Gly Ser Ala Ser Ala
290 295 300
Ser Glu Ile Val Ser Gly Ala Leu Gln Asp Leu Lys Arg Gly Val Ile
305 310 315 320
Val Gly Glu Asn Thr Phe Gly Lys Gly Ser Val Gln Gln Ile Ile Pro
325 330 335
Ile Asn Lys Thr Glu Ala Leu Arg Leu Thr Ile Ala Arg Tyr Tyr Leu
340 345 350
Pro Ser Gly Arg Thr Ile Gln Ala Val Gly Val Lys Pro Asp Ile Glu
355 360 365
Val Phe Pro Gly Lys Val Asn Thr Gln Glu Asp Gly Phe Ser Ile Lys
370 375 380
Glu Ser Asp Leu Lys Gln His Leu Glu Ser Glu Leu Glu Lys Ile Asp
385 390 395 400
Lys Asn Lys Lys Glu Asp Lys Gln Glu Asn Lys Asp Asn Lys Asn Leu
405 410 415
Ile Ser Gln Lys Gln Ile Asn Asp Asp Ala Gln Leu Lys Ser Ala Ile
420 425 430
Asp Thr Ile Lys Ile Leu Asn Ile Lys Gln Gly Gln
435 440
<210> 16
<211> 311
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:16 - Cj0559)
<400> 16
Met Lys Lys Ile Asp Leu Ile Val Val Gly Ala Gly Pro Thr Gly Ile
1 5 10 15
Gly Cys Ala Val Glu Ala Lys Leu Lys Asn Lys Glu Val Leu Ile Leu
20 25 30
Glu Lys Ser Asn Asn Ile Cys Gln Thr Leu Met Gln Phe Tyr Lys Asp
35 40 45
Gly Lys Arg Val Asp Lys Ala Tyr Lys Gly Cys Glu Gly Thr Asn His
50 55 60
Gly His Val Pro Phe Glu Asp Gly Thr Lys Glu Ser Thr Ile Glu Thr
65 70 75 80
Phe Gln Asn Ala Leu Lys Glu His Asn Ile Glu Val Glu Phe Gly Ser
85 90 95
Glu Val Glu Ser Val Lys Asn Glu Asn Gly Val Phe Leu Val Ser Thr
100 105 110
Ala Lys Gly Val Tyr Glu Cys Lys Asn Ile Ile Val Ala Ile Gly Arg
115 120 125
Met Gly Lys Pro Asn Lys Pro Asp Tyr Lys Leu Pro Met Thr Leu Thr
130 135 140
Lys Ile Ile Asn Phe Asn Ala Asn Ser Val Leu Gly Asn Glu Lys Ile
145 150 155 160
Leu Val Val Gly Gly Gly Asn Ser Ala Ala Glu Tyr Ala Val Asp Leu
165 170 175
Ala Asn Ser Asn Gln Val Ser Leu Cys Tyr Arg Lys Lys Glu Phe Thr
180 185 190
Arg Leu Asn Asp Ile Asn Leu Lys Asp Ile His Glu Ala Gly Asn Ser
195 200 205
Gly Lys Val Glu Leu Lys Leu Gly Ile Asp Ile Asn Glu Val Glu Asp
210 215 220
Asp Asn Gly Lys Ala Lys Val Asn Phe Thr Asp Gly Thr Ser Asp Ile
225 230 235 240
Tyr Asp Arg Ile Ile Tyr Ala Ile Gly Gly Ser Thr Pro Leu Asp Phe
245 250 255
Leu Gln Lys Cys Gly Ile Asn Val Asp Asp Lys Gly Val Pro Leu Met
260 265 270
Asp Glu Asn Lys Gln Ser Asn Val Lys Gly Ile Phe Val Ala Gly Asp
275 280 285
Ile Ala Thr Lys Asn Gly Ala Ser Ile Val Thr Gly Leu Asn Asp Ala
290 295 300
Val Lys Ile Leu Ser Val Leu
305 310
<210> 17
<211> 331
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:17 - Cj0613)
<400> 17
Met Lys Lys Ile Leu Ser Leu Ser Val Thr Ser Leu Ala Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Leu Asn Ala Val Asp Leu Lys Ile Ala Gly Ser Ser Thr Val Tyr
20 25 30
Pro Phe Thr Ser Phe Val Ala Glu Glu Tyr Ala Ser Ile Lys Asn Thr
35 40 45
Lys Thr Pro Ile Val Glu Ser Leu Gly Thr Gly Gly Gly Phe Lys Val
50 55 60
Phe Cys Glu Gly Thr Thr Asp Ile Ser Asn Ala Ser Arg Pro Met Lys
65 70 75 80
Leu Ser Glu Phe Glu Thr Cys Lys Lys Ala Gly Val Thr Asp Ile Val
85 90 95
Gly Met Met Ile Gly Tyr Asp Gly Ile Val Leu Ala Gln Asn Lys Thr
100 105 110
Asn Ala Pro Leu Asn Ile Thr Lys Lys Glu Leu Phe Leu Ala Leu Ala
115 120 125
Lys Glu Ile Pro Gln Asn Gly Lys Leu Ile Pro Asn Pro Tyr Thr Asn
130 135 140
Trp Asn Gln Ile Asn Lys Asn Leu Pro Asn Arg Lys Ile Ser Val Tyr
145 150 155 160
Gly Pro Pro Ser Ser Ser Gly Thr Arg Asp Thr Ile Glu Glu Leu Val
165 170 175
Met Ser Asp Val Ser Lys Lys Ile Pro Glu Tyr Lys Gly Glu Tyr Lys
180 185 190
Thr Ile Arg Gln Asp Gly Ala Tyr Ile Pro Ser Gly Glu Asn Asp Asn
195 200 205
Leu Ile Val Ser Lys Leu Thr Ile Asp Lys Asp Ala Phe Gly Ile Phe
210 215 220
Gly Tyr Ser Phe Leu Val Ser Asn Ser Asp Lys Ile Asn Ala Ala Asn
225 230 235 240
Ile Asp Gly Val Thr Pro Ser Glu Glu Ser Ile Ala Asp Glu Lys Tyr
245 250 255
Glu Leu Ala Arg Ser Leu Phe Ile Tyr Ile Asn Ala Lys Lys Asn Pro
260 265 270
Lys Glu Ala Phe Asp Phe Ala Lys Ile Tyr Met Ser Asp Asp Leu Ala
275 280 285
Lys Ser Gly Gly Glu Leu Glu Lys Ile Gly Leu Val Pro Leu Ser Asp
290 295 300
Asp Lys Leu Lys Ala Ser Gln Lys His Val Glu Asp Arg Lys Ile Leu
305 310 315 320
Asn Asp Glu Leu Val Lys Ala Gly Lys Val Phe
325 330
<210> 18
<211> 279
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:18 - Cj0636)
<400> 18
Met Gln Asn Ile Leu Ser Ser Phe Ala Gln Glu Lys Asn Val Cys Val
1 5 10 15
Phe Ala Asn Thr Leu Lys Thr Ser Ile Glu Glu Leu Glu Lys Glu Phe
20 25 30
Leu Lys Gln Asn Leu Lys Phe Lys Lys Ile Asn Val Tyr Cys Tyr Leu
35 40 45
Phe Asp Ala Lys Asp Lys Ala Ile Leu Ser Ser Met Lys Ala Phe Asn
50 55 60
Glu Ala His Phe Tyr Ile Gln Asn Tyr Ser Ser Tyr Leu Cys Ala Leu
65 70 75 80
Asn Leu Glu Val Lys Ala Gly Gln Ser Val Leu Asp Met Cys Ala Ala
85 90 95
Pro Gly Gly Lys Ser Ile Asn Leu Ala Asn Phe Met Gln Asn Thr Gly
100 105 110
Tyr Leu Ala Cys Asn Glu Met Ser Arg Asp Arg Phe Phe Ile Leu Gln
115 120 125
Lys Asn Leu Lys Asn Tyr Gly Val Asn Ala Lys Val Phe Met Lys Asp
130 135 140
Gly Lys Asn Ile Gly Asn Leu Cys Pro Leu Lys Phe Asp Lys Ile Leu
145 150 155 160
Leu Asp Ala Pro Cys Ser Thr Phe Ala Lys Ile Gly Phe Asp Leu Glu
165 170 175
Lys Ser Tyr Lys Glu Ile Lys Asn Ile Ala Lys Thr Gln Lys Lys Leu
180 185 190
Leu His Ser Ala Leu Lys Ala Leu Lys Ile Gly Gly Glu Leu Val Tyr
195 200 205
Ser Thr Cys Thr Phe Thr Lys Glu Glu Asn Glu Glu Val Ile Glu Asn
210 215 220
Ala Leu Lys Ser Glu Phe Lys Leu Glu Leu Leu Asp Ile Asp Leu Glu
225 230 235 240
Asn Val Glu Ala Lys Ala Gly Gln Ser Glu Glu Phe Ala Glu Ile Ser
245 250 255
Lys Cys Arg Arg Ile Leu Pro Ser Leu Asp Tyr Asp Gly Phe Phe Ile
260 265 270
Ala Lys Leu Arg Lys Leu Cys
275
<210> 19
<211> 238
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:19 - Cj0706)
<400> 19
Met Asn Lys Tyr Leu Glu Gln Leu Val Leu Leu Ser Lys Ile Asp Gln
1 5 10 15
Glu Ile Asp Ser Tyr Glu Pro Lys Ile Asp Ser Ile Asn Lys Thr Leu
20 25 30
Lys Asp Ala Glu Leu Lys Ile Glu Lys Ile Asn Ala Asp Leu Glu Lys
35 40 45
Ile Asp Glu Glu Ile Lys Asp Ile Glu Asn Gln Lys Ile Gln Asn Asn
50 55 60
Ala His Ile Ser Glu Phe Ser Ala Lys Ile Lys Asp Leu Ser Lys Lys
65 70 75 80
Ser Gly Val Val Lys Thr Glu Lys Glu Ala Asn Ala Leu Lys Ile Glu
85 90 95
Glu Asp Ile Ala Lys Glu Gln Leu Asp Ala Ala Asn Asp Glu Ile Val
100 105 110
Arg Leu Asp Lys Ile Leu Glu Asn Lys Glu Thr Tyr Lys Lys Glu Leu
115 120 125
Glu Glu Glu Lys Ile Lys Gln Glu Gln Asn Ile Asn Glu Ile Arg Val
130 135 140
Ser Ile Lys Ser Glu Met Glu Val Leu Glu Lys Asp Arg Met Ser Val
145 150 155 160
Tyr Asp Lys Lys Thr Lys Leu Val Ser Glu Met Asn Gln Lys Val Leu
165 170 175
Ser Phe Tyr Glu Lys Ile Arg Lys Trp Ala Lys Asn Thr Ala Val Val
180 185 190
Pro Val Lys Lys Gln Ala Cys Tyr Gly Cys Phe Met Lys Ile Tyr Asp
195 200 205
Lys Thr Tyr Leu Ser Val Val Lys Gly Glu Glu Ile Val Thr Cys Pro
210 215 220
His Cys Gly Arg Ile Leu Tyr Lys Glu Gln Glu Glu Gln Asn
225 230 235
<210> 20
<211> 137
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:20 - Cj0715)
<400> 20
Met Phe Ser Ile Lys Lys Thr Leu Leu Ile Leu Ala Ser Val Pro Met
1 5 10 15
Phe Leu Ser Ala Thr Glu Tyr Gln Leu Ser Thr His Val Leu Asp Ile
20 25 30
Thr Ser Gly Gln Pro Ala Pro Lys Val Lys Val Glu Leu Tyr Lys Leu
35 40 45
Glu Ala Asn Gln Gln Trp Lys Lys Val Ser Glu Glu Phe Thr Glu Glu
50 55 60
Asn Gly Arg Ile Gly Asp Leu Leu Pro Tyr Glu Lys Ala Glu Asn Arg
65 70 75 80
Ala Phe Gly Ile Tyr Lys Leu Lys Phe Phe Thr Lys Asp Tyr Tyr Thr
85 90 95
Ser His Lys Ile Asn Thr Phe Tyr Pro Phe Val Glu Val Ser Phe Glu
100 105 110
Leu Ser Lys Asp Gln Lys His Tyr His Val Pro Ile Thr Leu Ser Pro
115 120 125
Phe Gly Tyr Ser Thr Tyr Arg Gly Ser
130 135
<210> 21
<211> 175
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:21 - Cj0779)
<400> 21
Met Ser Ile Val Asn Phe Lys Gly Asn Pro Val Lys Leu Lys Gly Asn
1 5 10 15
Ser Val Glu Val Gly Ala Asp Ala Pro Lys Val Asn Leu Lys Ala Lys
20 25 30
Asp Leu Ser Val Ile Glu Ile Gly Ala Ala Gly Lys Thr Gln Ile Ile
35 40 45
Leu Ser Val Pro Ser Leu Asp Thr Pro Val Cys Ala Thr Glu Ala Arg
50 55 60
Glu Phe Asn Lys Lys Val Ala Ser Tyr Asn Gly Ala Glu Val Ile Val
65 70 75 80
Val Ser Met Asp Leu Pro Phe Ala Met Gly Arg Phe Cys Ser Thr Glu
85 90 95
Gly Ile Glu Asn Leu Ser Val Ala Ser Asp Phe Val Ala Lys Glu Phe
100 105 110
Gly Glu Lys Tyr Gly Val Leu Ile Asn Glu Gly Ala Leu Glu Gly Leu
115 120 125
Leu Ala Arg Ala Val Phe Val Ile Lys Glu Gly Lys Val Ala Tyr Lys
130 135 140
Glu Leu Val Asn Glu Ile Thr Glu Met Pro Asp Ile Ala Lys Leu Asp
145 150 155 160
Ala Phe Phe Gly Gly Ser Ser Cys Cys Gly Gly Cys Gly Cys His
165 170 175
<210> 22
<211> 139
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:22 - Cj0909)
<400> 22
Met Lys Lys Ile Leu Leu Leu Gly Ala Leu Phe Ala Val Asn Leu Trp
1 5 10 15
Ala Val Asn Asp Ile Glu Val Lys Asn Ala Phe Val Lys Gln Thr Pro
20 25 30
Pro His Ala Gln Asn Ser Ala Ile Phe Leu Thr Ile Phe Asn Asn Thr
35 40 45
Asn Lys Asp Ile Ala Leu Ile Ser Ala Lys Ser Asp Ile Ser Glu Val
50 55 60
Ser Glu Leu His Thr His Ile His Lys Asp Gly Lys Met Met Met Gln
65 70 75 80
Lys Ile Pro Glu Ile Ile Ile Lys Ala His Ser Ser Thr Glu Leu Lys
85 90 95
Ser Gly Gly Tyr His Ile Met Leu Leu Lys Leu Lys Lys Pro Ile Ile
100 105 110
Lys Asp Thr Lys Val Asn Leu Asp Leu Lys Phe Asn Asn His Lys Thr
115 120 125
Ile Glu Leu Lys Asn Ile Asp Ser Lys Glu Phe
130 135
<210> 23
<211> 306
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:23 - Cj0994c)
<400> 23
Met Lys His Phe Leu Thr Leu Arg Asp Phe Ser Lys Glu Glu Ile Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Asn His Ala Ser Glu Leu Lys Lys Glu Pro Lys Lys Leu
20 25 30
Leu Gln Asp Lys Thr Leu Ala Met Ile Phe Glu Lys Asn Ser Thr Arg
35 40 45
Thr Arg Met Ala Phe Glu Leu Ala Ile Thr Glu Leu Gly Gly Lys Ala
50 55 60
Leu Phe Leu Ser Ser Asn Asp Leu Gln Leu Ser Arg Gly Glu Pro Val
65 70 75 80
Lys Asp Thr Ala Arg Val Ile Gly Ala Met Val Asp Phe Val Met Met
85 90 95
Arg Val Asn Lys His Glu Thr Leu Leu Glu Phe Ala Arg Tyr Ser Lys
100 105 110
Ala Pro Val Ile Asn Ala Leu Ser Glu Leu Tyr His Pro Thr Gln Val
115 120 125
Leu Gly Asp Leu Phe Thr Ile Lys Glu Trp Asn Lys Met Gln Asn Gly
130 135 140
Ile Ala Lys Val Ala Phe Ile Gly Asp Ser Asn Asn Met Cys Asn Ser
145 150 155 160
Trp Leu Ile Thr Ala Ala Ile Leu Gly Phe Glu Ile Ser Ile Ala Met
165 170 175
Pro Lys Asn Tyr Lys Ile Ser Pro Glu Ile Trp Glu Phe Ala Met Lys
180 185 190
Gln Ala Leu Ile Ser Gly Ala Lys Ile Ser Leu Gly Tyr Asp Lys Phe
195 200 205
Glu Ala Leu Lys Asp Lys Asp Val Val Ile Thr Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Met Gly Glu Glu Asn Glu Lys Glu Arg Lys Ile Lys Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Phe Met Ile Asp Glu Lys Ala Met Ser Val Ala Asn Lys Asp Ala Ile
245 250 255
Leu Leu His Cys Leu Pro Ala Tyr Arg Gly Tyr Glu Val Ser Glu Glu
260 265 270
Ile Phe Glu Lys His Ala Asp Val Ile Phe Glu Glu Ala Arg Asn Arg
275 280 285
Leu Tyr Val Val Lys Ala Leu Leu Cys Phe Leu Asp Asn Gln Arg Gly
290 295 300
Arg Glu
305
<210> 24
<211> 190
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:24 - Cj0998c)
<400> 24
Met Lys Lys Ile Leu Val Ser Val Leu Ser Ser Cys Leu Leu Ala Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ser Ala Val Ser Phe Lys Glu Asp Ser Leu Lys Ile Ser Phe
20 25 30
Glu Gly Tyr Lys Thr Lys Asp Met Ile Gly Thr Lys Gly Glu Phe Lys
35 40 45
Asn Val Glu Tyr Lys Phe Ser Lys Asn Ile Lys Asp Leu Ala Ser Tyr
50 55 60
Leu Lys Gly Ala Lys Ala Thr Ile Lys Pro Ser Asn Ala Phe Met Gly
65 70 75 80
Glu Gly Asn Asp Ile Ile Thr Asn Asn Ile Thr Lys Val Phe Phe Pro
85 90 95
Ala Leu Leu Gly Asp Thr Asp Ile Lys Val Val Phe Gln Asp Val Ile
100 105 110
Ala Gly Glu Asn Lys Gly Val Ile Ser Ala Lys Ile Thr Met Asp Lys
115 120 125
Lys Ser Thr Ile Val Pro Leu Thr Tyr Thr Ile Lys Asp Asn Lys Phe
130 135 140
Glu Ala Lys Gly Gln Leu Asp Leu His Thr Phe Lys Asn Gly Ser Lys
145 150 155 160
Ala Leu Lys Ala Leu Ser Asp Val Ala Ala Gly His Gly Gly Ile Ser
165 170 175
Trp Pro Leu Val Asp Ile Ser Phe Asn Ala Asp Leu Ala Glu
180 185 190
<210> 25
<211> 369
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:25 - Cj1018c)
<400> 25
Met Lys Lys Ser Leu Ile Leu Ala Ser Ile Leu Ser Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Ala Ala Glu Val Lys Ile Gly Val Val Leu Pro Leu Ser Gly Ala Thr
20 25 30
Ala Ala Tyr Gly Gln Ser Ala Leu Glu Gly Ile Lys Leu Ala Asn Ser
35 40 45
Met Gln Ser Ala Leu Ser Asn Gly Asp Lys Val Ser Leu Ala Ile Ile
50 55 60
Asp Thr Lys Gly Asp Lys Leu Glu Ser Ser Ser Gly Ala Asn Arg Leu
65 70 75 80
Val Ser Gln Asp Lys Val Ile Gly Leu Ile Gly Glu Met Val Thr Ala
85 90 95
Asn Thr Leu Gln Val Met Arg Val Ala Glu Asp Asn Lys Ile Pro Leu
100 105 110
Ile Ala Pro Ala Ala Thr Gly Asp Arg Leu Leu Asp Lys Lys Ile Tyr
115 120 125
Ser Ser Arg Val Cys Phe Met Asp Ser Phe Gln Gly Ser Ser Leu Ala
130 135 140
Lys Tyr Val Phe Ser Lys Leu Asn Tyr Lys Ser Ala Val Ile Val Val
145 150 155 160
Asp Gln Ser Thr Asp Tyr Ser Leu Gly Leu Ala Lys Ala Phe Glu Lys
165 170 175
Gln Tyr Lys Ser Asn Gly Gly Gln Ile Leu Arg Ile Leu Arg Val Asn
180 185 190
Ser Gly Asp Lys Asp Phe Arg Ala Ile Val Ala Gln Val Lys Ser Leu
195 200 205
Asn Pro Glu Phe Ile Phe Leu Pro Leu Tyr Tyr Ser Glu Ala Ser Leu
210 215 220
Phe Ala Arg Gln Ser Lys Leu Ala Gly Leu Asn Ile Pro Met Gly Ser
225 230 235 240
Ala Asp Gly Val Ala Asp Gln Thr Phe Ile Ser Leu Ala Gly Asp Ala
245 250 255
Ser Glu Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Ser Phe Asp Ala Asn Asn Pro Thr
260 265 270
Thr Lys Leu Ser Lys Glu Phe Ile Ser Val Tyr Glu Lys Ala Lys Gly
275 280 285
Thr Lys Glu Val Pro Asn Phe Ser Ala Met Gly Ala Asp Ala Tyr Phe
290 295 300
Val Met Leu Asn Ala Met Asn Ala Cys Val Glu Asn Leu Thr Ser Lys
305 310 315 320
Cys Val Asn Glu Lys Ile His Gln Thr Lys Asn Tyr Gln Gly Val Ser
325 330 335
Gly Val Ile Ser Ile Asp Gln Thr Gly Asn Ala Thr Arg Ser Val Val
340 345 350
Val Lys Glu Ile Lys Asn Gln Lys Gln Asn Tyr Lys Asp Ile Ile Asn
355 360 365
Pro
<210> 26
<211> 371
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:26 - Cj1019c)
<400> 26
Met Lys Lys Leu Thr Leu Thr Leu Ser Val Leu Thr Met Val Asn Cys
1 5 10 15
Leu Tyr Ala Lys Asp Ile Asn Ile Gly Val Val Leu Pro Leu Thr Gly
20 25 30
Thr Val Ala Ala Tyr Gly Gln Asp Val Phe Asn Gly Ile Glu Leu Ala
35 40 45
Asn Lys Leu Gln Pro Lys Leu Ser Asn Gly Asp Val Ile Lys Leu Ile
50 55 60
Thr Ile Asp Thr Lys Gly Asp Lys Leu Glu Thr Ser Asn Gly Val Asn
65 70 75 80
Arg Leu Ile Ala Thr Asp Lys Val Leu Gly Ile Ile Gly Glu Ala Thr
85 90 95
Thr Pro Asn Thr Ile Gln Ala Ile Ser Ile Ala Glu Glu Lys Lys Ile
100 105 110
Pro Leu Ile Ala Pro Val Ala Ser Gly Asp Lys Leu Leu Asp Lys Lys
115 120 125
Lys Tyr Ala Ser Arg Val Cys Phe Lys Asp Ser Phe Gln Gly Asp Lys
130 135 140
Phe Ala Thr Tyr Val Ser Lys Asp Leu Gly Leu Lys Asn Ala Val Ile
145 150 155 160
Ile Ile Asp Gln Ser Asn Val Tyr Ser Leu Gly Leu Ala Arg Ala Phe
165 170 175
Glu Asn Ser Phe Lys Asn Asn Gly Gly Lys Ile Ile Lys Lys Leu Val
180 185 190
Ile Asn Ser Gly Asp Lys Asp Phe Arg Ala Val Val Ser Gln Leu Lys
195 200 205
Ser Leu Asn Pro Asp Phe Val Tyr Met Pro Ile Tyr His Pro Glu Ala
210 215 220
Ala Leu Ile Ala Arg Gln Ala Arg Gln Ile Gly Phe Asp Lys Leu Leu
225 230 235 240
Val Ala Gly Asp Gly Val Asn Asn Gln Thr Phe Ile Asp Leu Gly Gly
245 250 255
Ser Ala Val Asn Gly Val Ile Phe Thr Asp Ser Phe Asp Tyr Asn Ser
260 265 270
Pro Ser Thr Gln Leu Gly Lys Asp Phe Val Ala Ala Tyr Glu Lys Val
275 280 285
Lys Gly Thr Lys Glu Leu Pro Ala Phe Ser Ala Met Gly Ala Asp Ala
290 295 300
Tyr Phe Val Met Leu Asn Ala Met Asn Ala Cys Val Asp Asn Leu Ser
305 310 315 320
Ser Glu Cys Ile Asn Ser Lys Ile His Gln Thr Lys Asp Phe Gln Ala
325 330 335
Val Gly Gly Val Ile Ser Ile Asp Glu Ser Gly Asn Ala Ile Arg Ser
340 345 350
Val Val Ile Lys Glu Ile Gln Asn Gln Lys Gln Asn Tyr Lys Thr Ile
355 360 365
Ile Asn Pro
370
<210> 27
<211> 283
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:27 - Cj1041c)
<400> 27
Met Lys Lys Tyr Val Leu Ser Leu Ala Leu Leu Gly Ser Leu Leu Gly
1 5 10 15
Ala Ser Glu Leu Lys Tyr Gln Glu Phe Asp Gly Phe Lys Ser Pro Glu
20 25 30
Ser Ile Phe Val Asp Lys Asn Tyr Val Tyr Val Ser Asn Val Gly Glu
35 40 45
Lys Leu Glu Pro Leu Ala Lys Asp Asn Asp Gly Phe Ile Ser Lys Leu
50 55 60
Asp Lys Asn Gly Lys Val Leu Glu Tyr Lys Phe Leu Thr His Leu Asn
65 70 75 80
Ala Pro Lys Gly Met Met Glu Ile Gly Lys Thr Leu Tyr Val Val Asp
85 90 95
Ile Asp Val Leu Arg Gly Phe Asp Leu Lys Thr Lys Lys Glu Ile Phe
100 105 110
Asn Leu Pro Ile Lys Gly Ala Ile Phe Leu Asn Asp Ile Glu Lys Leu
115 120 125
Asp Asp Asn Thr Leu Leu Val Ser Asp Thr Gly Thr Gly Leu Ile Leu
130 135 140
Lys Val Asp Leu Lys Thr Lys Gln Tyr Asp Glu Leu Leu Lys Leu Asp
145 150 155 160
Leu Ala Lys Phe Gly Gly Pro Asn Gly Leu Tyr Leu Asp Arg Lys Lys
165 170 175
His Lys Leu Phe Ile Ala Gly Tyr His Pro Asp Gly Val Ser Gly Gly
180 185 190
Val Val Met Ala Tyr Asp Leu Asn Thr Lys Glu Leu Ser Ile Ile Lys
195 200 205
Asn Glu Lys Glu Ser Tyr Asp Gly Ile Val Pro Tyr Lys Asp Gly Leu
210 215 220
Leu Val Ser Ser Trp Gly Asn Asn Leu Asn Gly Tyr Ile Tyr Asn Leu
225 230 235 240
Asp Asn Val Lys Ser Val Lys Leu Glu Leu Pro Leu Met Lys Gly Pro
245 250 255
Ala Asp Ile Phe Ile Glu Gly Asn Ile Leu Trp Ile Pro Lys Met Val
260 265 270
Glu Gly Lys Ile Phe Lys Val Glu Leu Asn Lys
275 280
<210> 28
<211> 100
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:28 - Cj1153)
<400> 28
Met Lys Lys Leu Leu Val Val Ser Ala Leu Ala Cys Leu Gly Val Ser
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ala Asp Gly Ala Thr Leu Phe Lys Lys Cys Ala Val Cys
20 25 30
His Gly Ala Asn Ala Asp Lys Val Tyr Leu Asn Lys Val Pro Ala Leu
35 40 45
Lys Thr Leu Ser Ser Ala Glu Arg Leu Gln Tyr Met Lys Glu Tyr Ser
50 55 60
Glu Gly Lys Arg Asn Ala Tyr Gly Gln Gly Ala Ile Met Lys Leu Asn
65 70 75 80
Leu Lys Gly Leu Thr Glu Glu Asp Phe Lys Ala Ile Glu Ala His Ile
85 90 95
Glu Thr Leu Lys
100
<210> 29
<211> 241
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:29 - Cj1214c)
<400> 29
Met Phe Lys Thr Ile Val Cys Phe Leu Ala Leu Asn Leu Ser Leu Phe
1 5 10 15
Ala Val Gly Phe Asp Leu Lys Pro Ile Lys Ser Glu Leu Val Lys Val
20 25 30
Asp Asp Ile Tyr Gly Tyr Ile Lys Asp Ser Asp Asp Ile Lys Leu Tyr
35 40 45
Ser Ser Gly Val Val Val Gln His Phe Ser Asn Ser Gln Ser Ile Ile
50 55 60
Ala Arg Ala Ser Val Ile Asp Lys Lys Asn Gly Leu Ala Lys Leu Glu
65 70 75 80
Phe Ser Val Phe Ser Ala Leu Lys Gln Asp Ala Leu Pro Leu Pro Asn
85 90 95
Val Leu Pro Lys Val Gly Asp Glu Val Val Leu Asn Phe Leu Tyr Asp
100 105 110
Arg Gly Leu Val Ile Ala Pro Asp Glu Gln Thr Tyr Asn Glu Leu Val
115 120 125
Arg Glu Phe Pro Gln Ile Tyr Phe Thr His Ile Asp Ile Phe Gly Ala
130 135 140
Gln Leu Ile Arg Thr Ala Thr Leu Ser Pro Lys Arg Ser Asp Phe Arg
145 150 155 160
Gln Phe Cys Asp Asp Asn Ala Val Gly Ile Leu Val Val Ala Leu Glu
165 170 175
Asn His Ala Glu Val Val Asp Cys Gln Asp Phe Asn Lys Leu Tyr Glu
180 185 190
Val Pro Ile Ser Lys Pro Thr Ser Val Gln Val Pro Phe Tyr Ser Arg
195 200 205
Ile Gly Gly Tyr Lys Ser Asn Phe Phe Asp Phe Asn Ser Gln Glu Ile
210 215 220
Gly Asn Tyr Tyr Arg Tyr Tyr Asp Ala Leu Ile Asn Leu Pro Lys Val
225 230 235 240
Gln
<210> 30
<211> 411
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:30 - Cj1287c)
<400> 30
Met Asn Leu Lys Glu Glu Ala Leu Lys Tyr His Leu Gly Gly Lys Ile
1 5 10 15
Asp Ile Val Pro Ser Lys Pro Met Ala Thr Ser Tyr Asp Leu Ser Leu
20 25 30
Ala Tyr Ser Pro Gly Val Ala Glu Pro Cys Leu Glu Ile Ala Lys Asp
35 40 45
Asn Glu Leu Ala Tyr Thr Tyr Thr Asn Lys Ala Asn Leu Val Ala Ile
50 55 60
Val Ser Asp Gly Ser Ala Val Leu Gly Leu Gly Asn Ile Gly Ala Gln
65 70 75 80
Ala Ser Lys Pro Val Met Glu Gly Lys Ala Cys Leu Phe Lys Lys Phe
85 90 95
Ala Asn Val Asn Ala Tyr Asp Ile Glu Ile Asn Val His Ser Ile Glu
100 105 110
Glu Ile Val Asn Phe Cys Lys Ala Leu Ala Pro Thr Val Gly Gly Ile
115 120 125
Asn Leu Glu Asp Ile Ala Ala Pro Lys Cys Phe Glu Ile Glu Ala Ala
130 135 140
Leu Gln Asp Leu Gly Ile Pro Val Met His Asp Asp Gln His Gly Thr
145 150 155 160
Ala Ile Ile Ser Thr Ala Gly Leu Met Asn Ala Met Glu Ile Ser Gly
165 170 175
Lys Lys Phe Lys Asp Ile Lys Val Val Val Ser Gly Ala Gly Ala Ala
180 185 190
Gly Ile Ala Ser Ala Lys Met Tyr Arg Asn Leu Gly Val Glu Asn Ile
195 200 205
Ile Leu Val Asp Ser Lys Gly Val Ile Ser Lys Asp Arg Asn Asp Leu
210 215 220
Thr Pro Gln Lys Leu Glu Phe Ala Val Asp Ser Lys Glu Lys Thr Leu
225 230 235 240
Lys Glu Val Leu Lys Gly Ala Asp Val Phe Leu Gly Leu Ser Ala Pro
245 250 255
Lys Ile Leu Asp Asp Glu Met Val Leu Ser Met Ala Lys Asp Pro Val
260 265 270
Ile Phe Ala Leu Ala Asn Pro Ile Pro Glu Val Met Pro Glu Asp Val
275 280 285
Ala Arg Leu Arg Lys Asp Ala Ile Val Gly Thr Gly Arg Ser Asp Tyr
290 295 300
Pro Asn Gln Ile Asn Asn Val Leu Gly Phe Pro Phe Ile Phe Arg Gly
305 310 315 320
Ala Leu Asp Val Arg Ala Ser Lys Ile Thr Glu Asn Met Lys Val Ala
325 330 335
Ala Ala Lys Ala Leu Ala Asp Leu Ala Lys Leu Pro Val Ser Asp Ala
340 345 350
Val Lys Lys Ala Tyr Asn Leu Ser Thr Leu Glu Phe Gly Arg Asp Tyr
355 360 365
Val Ile Pro Lys Pro Phe Asp Glu Arg Val Lys Ala Ala Val Ser Thr
370 375 380
Ala Val Ala Ala Ala Ala Val Lys Asp Gly Val Ala Lys Val Lys Asn
385 390 395 400
Phe Asp Glu Lys Ala Tyr Phe Glu Ser Leu Lys
405 410
<210> 31
<211> 236
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:31 - Cj1380)
<400> 31
Met Lys Lys Leu Ser Leu Ile Leu Val Cys Ser Ala Ser Leu Phe Ala
1 5 10 15
Ala Ser Asn Ser Glu Ile Ser Asp Phe Tyr Ser Lys Ser Ile Lys Ala
20 25 30
Gln Phe Pro Asn Ala Thr Val Ser Val Ser Asn Arg Gln Lys Val Gly
35 40 45
Asn Thr Gly Phe Glu Ser Val Ile Val Ser Val Glu Leu Asn Gly Gln
50 55 60
Lys Gln Glu Asn Ile Leu Phe Thr Lys Asp Ser Leu Ile Thr Pro Asp
65 70 75 80
Leu Ile Asp Leu Lys Thr Gly Ile Ser Tyr Ala Gln Glu Tyr Glu Met
85 90 95
Lys Lys Phe Gln Glu Ala Arg Glu Asn Phe Thr Lys Asn Ala Lys Ala
100 105 110
Val Ala Gln Lys Glu Thr Met Val Ile Ala Leu Gly Asp Lys Asn Lys
115 120 125
Pro Ala Ile Tyr Val Phe Ser Asp Pro Glu Cys Pro Tyr Cys Arg Glu
130 135 140
His Leu Ala Gln Ile Asp Asp Glu Leu Lys Asn Tyr Gln Val Asn Tyr
145 150 155 160
Ile Leu Thr Pro Val His Gly Lys Ser Ala Phe Glu Lys Ser Ala Leu
165 170 175
Ile Tyr Lys Glu Ala Lys Lys Ala Lys Asn Asp Lys Glu Lys Ile Ala
180 185 190
Ile Leu Asn Lys Tyr Tyr Asp Ala Asn Ile Lys Asn Tyr Pro Lys Val
195 200 205
Ser Asp Ala Glu Leu Lys Glu Val Phe Ser Leu Tyr Glu Lys Tyr Arg
210 215 220
Ser Leu Gly Leu Ser Ala Thr Pro Thr Ile Ile Lys
225 230 235
<210> 32
<211> 172
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:32 - Cj1496c)
<400> 32
Met Ile Lys Lys Phe Ile Leu Leu Val Phe Ile Ser Ser Val Val Phe
1 5 10 15
Gly Ala Glu Gln Asp Cys Glu Gln Tyr Phe Glu Ala Arg Lys Ala Gln
20 25 30
Ile Glu Leu Gln Thr Arg Glu Phe Asp Glu Ala Arg Gln Ser Leu Glu
35 40 45
Ala Tyr Lys Ala Ser Phe Glu Ala Leu Gln Lys Glu Arg Leu Glu Asn
50 55 60
Leu Glu Lys Lys Glu Ala Glu Val Asn Ala Thr Leu Ala Lys Ile Glu
65 70 75 80
Glu Leu Lys Leu Glu Asn Ala Arg Leu Val Glu Glu Gln Gln Lys Ile
85 90 95
Leu Asn Ser Ile Asn Asp Lys Thr Gln Gly Arg Val Lys Glu Ile Tyr
100 105 110
Ser Gln Met Lys Asp Ala Ala Ile Ala Asp Val Leu Ser Gln Met Asp
115 120 125
Ala Glu Asp Ala Ser Lys Ile Met Leu Ser Leu Glu Ser Arg Lys Ile
130 135 140
Ser Gly Val Leu Ser Lys Met Asp Pro Lys Lys Ala Ser Glu Leu Thr
145 150 155 160
Leu Leu Leu Lys Asn Leu Asp Asn Asn Ala Ser Asn
165 170
<210> 33
<211> 513
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:33 - Cj1516)
<400> 33
Met Asn Arg Arg Asn Phe Leu Lys Phe Asn Ala Leu Thr Leu Ala Ser
1 5 10 15
Met Gly Val Ala Tyr Ala Asn Pro Met His Asp Met His Ser Met His
20 25 30
Lys Asn His Ser Ile Asn His Asp Leu Asp Thr Ser Phe Ile Asn Phe
35 40 45
Ala Pro Lys Asn Leu Lys Leu Leu Asp Pro Lys Gln Phe Pro Gln Gly
50 55 60
Glu Ile Leu Lys Ala Leu Pro Leu Leu Lys Asn Glu Ser Lys Glu Lys
65 70 75 80
Asn Ile Phe Arg Ala Thr Leu Glu Ile Lys Glu Asn His Ile Glu Leu
85 90 95
Ile Lys Gly Lys Lys Thr Leu Phe Tyr Thr Tyr Asn Gly Leu Val Pro
100 105 110
Ala Pro Lys Ile Glu Val Phe Glu Gly Asp Lys Leu Glu Ile Leu Val
115 120 125
Lys Asn Lys Leu Lys Glu Ala Thr Thr Ile His Trp His Gly Val Pro
130 135 140
Val Pro Pro Asp Gln Asp Gly Ser Pro His Asp Pro Ile Leu Ala Gly
145 150 155 160
Glu Glu Arg Ile Tyr Arg Phe Glu Ile Pro Gln Asp Ser Ala Gly Thr
165 170 175
Tyr Trp Tyr His Pro His Pro His Tyr Thr Ala Ser Lys Gln Val Phe
180 185 190
Met Gly Leu Ala Gly Ala Phe Val Ile Lys Ala Lys Lys Asp Ala Leu
195 200 205
Ser His Leu Lys Glu Lys Asp Leu Met Ile Ser Asp Leu Arg Leu Asp
210 215 220
Glu Asn Ala Gln Ile Pro Asn Asn Asn Leu Asn Asp Trp Leu Asn Gly
225 230 235 240
Arg Glu Gly Glu Phe Val Leu Ile Asn Gly Gln Phe Lys Pro Lys Ile
245 250 255
Lys Leu Ala Thr Asn Glu Arg Ile Arg Ile Tyr Asn Ala Thr Ala Ala
260 265 270
Arg Tyr Leu Asn Leu Arg Ile Gln Gly Ala Lys Phe Ile Leu Val Gly
275 280 285
Thr Asp Gly Gly Leu Ile Glu Lys Ala Ile Tyr Lys Glu Glu Leu Phe
290 295 300
Leu Ser Pro Ala Ser Arg Val Glu Val Leu Ile Asp Ala Pro Lys Asp
305 310 315 320
Gly Asn Phe Lys Leu Glu Ser Ala Tyr Tyr Asp Arg Asp Lys Met Met
325 330 335
Val Lys Glu Glu Ser Asn Thr Leu Phe Leu Ala Asn Ile Asn Leu Lys
340 345 350
Lys Glu Lys Leu Glu Leu Pro Lys Asn Leu Lys Ile Phe Lys Pro Leu
355 360 365
Glu Glu Pro Lys Glu Phe Lys Glu Ile Ile Met Ser Glu Asp His Met
370 375 380
Gln Met His Gly Met Met Gly Lys Ser Glu Asn Glu Leu Lys Ile Ala
385 390 395 400
Leu Ala Ser Met Phe Leu Ile Asn Gly Lys Ser Tyr Asp Leu Lys Arg
405 410 415
Ile Asp Leu Ser Ser Lys Leu Gly Val Val Glu Asp Trp Ile Val Ile
420 425 430
Asn Lys Ser His Met Asp His Pro Phe His Ile His Gly Thr Gln Phe
435 440 445
Glu Leu Ile Ser Ser Lys Leu Asn Gly Lys Val Gln Lys Ala Glu Phe
450 455 460
Arg Ala Phe Arg Asp Thr Ile Asn Val Arg Pro Asn Glu Glu Leu Arg
465 470 475 480
Leu Lys Met Lys Gln Asp Phe Lys Gly Leu Arg Met Tyr His Cys His
485 490 495
Ile Leu Glu His Glu Asp Leu Gly Met Met Gly Asn Leu Glu Val Lys
500 505 510
Glu
<210> 34
<211> 269
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:34 - Cj1540)
<400> 34
Met Lys Lys Ile Ile Ser Leu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Ala Ala Glu Leu Lys Met Ala Thr Thr Thr Ser Thr Asp Asn Thr Gly
20 25 30
Leu Leu Asp Ala Leu Lys Pro Leu Tyr Glu Lys Glu Ser Gly Asn Thr
35 40 45
Leu Lys Trp Val Ala Val Gly Thr Gly Ala Ala Leu Lys Met Gly Glu
50 55 60
Asp Cys Asn Ala Asp Val Leu Phe Val His Ser Pro Lys Ala Glu Lys
65 70 75 80
Glu Phe Met Lys Lys Gly Phe Gly Val Asp Arg Thr Pro Val Met Tyr
85 90 95
Asn Asp Phe Ile Ile Ile Ala Asp Lys Ser Leu Ala Ser Lys Phe Lys
100 105 110
Gly Lys Asn Leu Lys Glu Ser Leu Glu Leu Ile Lys Asn Glu Lys Leu
115 120 125
Thr Phe Ile Ser Arg Gly Asp Lys Ser Gly Thr Asp Asn Lys Glu Lys
130 135 140
Ser Leu Trp Lys Asn Leu Gly Gly Val Pro Glu Lys Gln Ser Trp Tyr
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Gln Gly Met Leu Ala Ser Ile Lys Ile Ala Glu Glu
165 170 175
Lys Lys Gly Val Ile Leu Thr Asp Arg Gly Thr Tyr Ile Lys Tyr Glu
180 185 190
Ala Asn Glu Lys Gly Lys Pro Asn Leu Val Ile Val Asn Glu Gly Asp
195 200 205
Asp Ser Leu Lys Asn Phe Tyr Ser Val Ile Ala Thr Asn Pro Lys His
210 215 220
Cys Lys Asn Val Asn Tyr Thr Glu Ala Ser Lys Phe Ile Lys Trp Val
225 230 235 240
Thr Ser Asp Lys Thr Leu Asn Phe Ile Ala Asp Phe Lys Leu Leu Asn
245 250 255
Lys Pro Leu Phe Val Ile Asp Ala Lys Thr Arg Lys Asp
260 265
<210> 35
<211> 179
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:35 - Cj1659)
<400> 35
Met Ile Lys Lys Val Leu Ser Val Val Ala Ala Ala Ala Val Ile Ser
1 5 10 15
Thr Asn Leu Phe Ala Gly Glu Val Pro Ile Gly Asp Pro Lys Glu Leu
20 25 30
Asn Gly Met Glu Ile Ala Ala Val Tyr Leu Gln Pro Ile Glu Met Glu
35 40 45
Pro Arg Gly Ile Asp Leu Ala Ala Ser Leu Ala Asp Ile His Leu Glu
50 55 60
Ala Asp Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Pro Asn Gly Phe Pro Glu Gly
65 70 75 80
Phe Trp Met Pro Tyr Leu Thr Ile Ala Tyr Glu Leu Lys Asn Thr Asp
85 90 95
Thr Gly Ala Ile Lys Arg Gly Thr Leu Met Pro Met Val Ala Asp Asp
100 105 110
Gly Pro His Tyr Gly Ala Asn Ile Ala Met Glu Lys Asp Lys Lys Gly
115 120 125
Gly Phe Gly Val Gly Asn Tyr Glu Leu Thr Phe Tyr Ile Ser Asn Pro
130 135 140
Glu Lys Gln Gly Phe Gly Arg His Val Asp Glu Glu Thr Gly Val Gly
145 150 155 160
Lys Trp Phe Glu Pro Phe Lys Val Asp Tyr Lys Phe Lys Tyr Thr Gly
165 170 175
Thr Pro Lys
<210> 36
<211> 364
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:36 - Cj1643)
<400> 36
Met Lys Lys Ile Leu Ile Ile Cys Met Leu Phe Thr Leu Ser Phe Gly
1 5 10 15
Ile Glu Arg Pro Lys Phe Glu Asp Phe Leu Ala Gly Tyr Glu Arg Asn
20 25 30
Lys Ala Ser Met Leu Asn Tyr Glu Gly Met Pro Ala Phe Ala Leu Ser
35 40 45
Glu Asn Leu Leu Ala Val Leu Lys Gln Pro Asn Ala Lys Leu Asn Lys
50 55 60
Tyr Val Lys Tyr Asp Pro Phe Leu Asn Leu Tyr Leu Val Arg Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Leu Ile Pro Thr Pro Met Gly Asp Glu Glu Lys Leu Thr Arg
85 90 95
Asn Asp Trp Val Gly Ile Trp Asp Pro Asn Lys Pro Tyr Ile Gly His
100 105 110
Ile Lys Tyr Leu Ala Gln Asn Ile Asp Glu Lys Asp Gln Leu Asp Phe
115 120 125
Asn Ser Lys Ile Gly Leu Leu Gly Thr Pro Cys Cys Glu Met Met Gly
130 135 140
Ile Ala Leu Asn Asn Ser Ser Phe Ile Gly Asn Arg Tyr Leu Lys His
145 150 155 160
Phe Met Lys Tyr Asn Asp Val Tyr Trp Gly Asp Ile Gly Val Asp Phe
165 170 175
Val Val Arg Glu Asn Lys Ile Tyr Val Asn Asn Val Arg Lys Asn Pro
180 185 190
Gln Phe Leu Ile Asn Asp Gln Val Ile Ser Val Asp Gly Leu Pro Ala
195 200 205
Asn Asp Leu Arg Lys Leu Asn Glu Lys Ile Leu Phe Ala Asp Arg Gly
210 215 220
Ser Thr Leu Tyr Phe Gln Val Leu Arg Asp Asn Met Asp Leu Asn Ile
225 230 235 240
Ser Thr Glu Val Phe Ala Lys Asp Leu Ser Lys Phe Asn Leu Pro Asp
245 250 255
Ser Lys Pro Lys Pro Lys Ile Thr Asn Phe Thr Ser Asn Leu Gly Leu
260 265 270
Thr Val Asn Ala Ser Leu Val Val Thr Lys Ile Asp Pro Lys Ser Lys
275 280 285
Val Ser Asn Ala Gly Phe Met Val Gly Asp Lys Ile Leu Arg Val Asn
290 295 300
Asn Ile Ile Leu Asn Asn Phe Lys Glu Leu Gln Asn Ile Leu Ser Ala
305 310 315 320
Gly Asn Asp Phe Ser Ile Leu Ile Glu Arg Lys Ser Thr Lys Leu Pro
325 330 335
Leu Ser Asn Phe Asn Asn Glu Leu Gly Gly Asn Ala Asn Ser Gly Gly
340 345 350
Asp Gly Lys Phe Gln Phe Phe Ile Arg Leu Thr Lys
355 360
<210> 37
<211> 501
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:37 - Cj0105)
<400> 37
Met Lys Phe Lys Ala Asp Glu Ile Ser Ser Ile Ile Lys Glu Arg Ile
1 5 10 15
Glu Asn Phe Asp Leu Asn Leu Glu Ile Glu Glu Thr Gly Lys Ile Ile
20 25 30
Ser Val Ala Asp Gly Val Ala Lys Val Tyr Gly Leu Lys Asn Ile Met
35 40 45
Ala Gly Glu Met Val Glu Phe Glu Asn Gly Asp Lys Gly Met Ala Leu
50 55 60
Asn Leu Glu Glu Ser Ser Val Gly Ile Val Ile Leu Gly Lys Gly Glu
65 70 75 80
Gly Leu Lys Glu Gly Ala Ser Val Lys Arg Leu Lys Lys Leu Leu Lys
85 90 95
Val Pro Val Gly Glu Ala Leu Ile Gly Arg Val Val Asn Ala Leu Gly
100 105 110
Glu Pro Ile Asp Ala Lys Gly Val Ile Asn Ala Asn Glu Tyr Arg Phe
115 120 125
Val Glu Glu Lys Ala Lys Gly Ile Met Ala Arg Lys Ser Val His Glu
130 135 140
Pro Leu His Thr Gly Ile Lys Ala Ile Asp Ala Leu Val Pro Ile Gly
145 150 155 160
Arg Gly Gln Arg Glu Leu Ile Ile Gly Asp Arg Gln Thr Gly Lys Thr
165 170 175
Thr Val Ala Val Asp Thr Ile Ile Ser Gln Arg Gly Gln Gly Val Ile
180 185 190
Cys Ile Tyr Val Ala Ile Gly Gln Lys Gln Ser Thr Val Ala Gln Val
195 200 205
Val Lys Arg Leu Glu Glu His Gly Ala Met Glu Tyr Thr Ile Val Val
210 215 220
Asn Ala Gly Ala Ser Asp Pro Ala Ala Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Tyr
225 230 235 240
Thr Gly Val Thr Met Gly Glu Phe Phe Arg Asp Asn Ala Lys His Ala
245 250 255
Leu Ile Val Tyr Asp Asp Leu Ser Lys His Ala Val Ala Tyr Arg Glu
260 265 270
Met Ser Leu Ile Leu Arg Arg Pro Pro Gly Arg Glu Ala Tyr Pro Gly
275 280 285
Asp Val Phe Tyr Leu His Ser Arg Leu Leu Glu Arg Ala Ser Lys Leu
290 295 300
Asn Asp Glu Leu Gly Ala Gly Ser Leu Thr Ala Leu Pro Ile Ile Glu
305 310 315 320
Thr Gln Ala Gly Asp Val Ser Ala Tyr Ile Pro Thr Asn Val Ile Ser
325 330 335
Ile Thr Asp Gly Gln Ile Phe Leu Glu Thr Asp Leu Phe Asn Ser Gly
340 345 350
Ile Arg Pro Ala Ile Asn Val Gly Leu Ser Val Ser Arg Val Gly Gly
355 360 365
Ala Ala Gln Ile Lys Ala Thr Lys Gln Val Ser Gly Thr Leu Arg Leu
370 375 380
Asp Leu Ala Gln Tyr Arg Glu Leu Gln Ala Phe Ala Gln Phe Ala Ser
385 390 395 400
Asp Leu Asp Glu Ala Ser Arg Lys Gln Leu Glu Arg Gly Gln Arg Met
405 410 415
Val Glu Leu Leu Lys Gln Pro Pro Tyr Ser Pro Leu Ser Val Glu Lys
420 425 430
Gln Val Val Leu Ile Phe Ala Gly Thr Lys Gly Phe Leu Asp Asp Ile
435 440 445
Ala Val Ser Arg Ile Lys Glu Phe Glu Asp Gly Ile Tyr Pro Phe Ile
450 455 460
Glu Ala Lys His Pro Asp Ile Phe Glu Gln Ile Arg Ser Lys Lys Ala
465 470 475 480
Leu Asp Ser Asp Leu Glu Glu Lys Leu Ala Lys Ala Ile Asn Glu Phe
485 490 495
Lys Ala Asn His Leu
500
<210> 38
<211> 334
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:38 - Cj0175)
<400> 38
Met Lys Lys Ile Phe Phe Met Phe Leu Thr Ala Val Ser Phe Leu Gly
1 5 10 15
Ala Ser Glu Leu Asn Ile Tyr Ser Ala Arg His Tyr Asn Ala Asp Phe
20 25 30
Glu Ile Ile Lys Lys Phe Glu Glu Lys Thr Gly Ile Lys Val Asn His
35 40 45
Thr Gln Ala Lys Ala Ser Glu Leu Ile Lys Arg Leu Ser Leu Glu Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Pro Ala Asp Ile Phe Ile Thr Ala Asp Ile Ser Asn Leu
65 70 75 80
Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Leu Leu Ser Pro Val Ser Ser Lys Tyr
85 90 95
Leu Glu Glu Phe Ile Pro Ala His Leu Arg Asp Lys Asp Lys Glu Trp
100 105 110
Phe Ala Ile Thr Lys Arg Ala Arg Ile Ile Ala Tyr Asn Lys Asn Thr
115 120 125
Asn Ile Asp Ile Ser Lys Met Lys Asn Tyr Glu Asp Leu Ala Lys Ala
130 135 140
Glu Phe Lys Gly Glu Ile Val Met Arg Ser Ala Thr Ala Pro Tyr Ser
145 150 155 160
Lys Thr Leu Leu Ala Ser Ile Ile Ala Asn Asp Gly Asn Lys Glu Ala
165 170 175
Lys Ala Trp Ala Lys Gly Val Leu Glu Asn Leu Ala Thr Asn Pro Lys
180 185 190
Gly Gly Asp Arg Asp Gln Ala Arg Gln Val Phe Ala Gly Glu Ala Lys
195 200 205
Phe Ala Val Met Asn Thr Tyr Tyr Ile Gly Leu Leu Lys Asn Ser Lys
210 215 220
Asn Pro Lys Asp Val Glu Val Gly Asn Ser Leu Gly Ile Ile Phe Pro
225 230 235 240
Asn Gln Asp Asn Arg Gly Thr His Ile Asn Ile Ser Gly Ile Ala Met
245 250 255
Thr Lys Ser Ser Lys Asn Gln Asp Ala Ala Lys Lys Phe Met Glu Phe
260 265 270
Met Leu Ser Pro Glu Ile Gln Lys Ile Leu Thr Asp Ser Asn Tyr Glu
275 280 285
Phe Pro Ile Arg Asn Asp Val Glu Leu Ser Gln Thr Val Lys Asp Phe
290 295 300
Gly Thr Phe Lys Glu Asp Gln Ile Pro Val Ser Lys Ile Ala Glu Asn
305 310 315 320
Ile Lys Glu Ala Val Lys Ile Tyr Asp Glu Val Gly Phe Arg
325 330
<210> 39
<211> 173
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:39 - Cj0283c)
<400> 39
Met Ser Asn Glu Lys Leu Glu Gln Ile Leu Gln Lys Gln Gln Thr Gln
1 5 10 15
Met Ala Gly Pro Asp Val Asp Gln Arg Glu Asp Asp Ile Ile Gln Leu
20 25 30
Val Gly Phe Val Val Gly Asp Glu Glu Tyr Ala Ile Pro Ile Leu Asn
35 40 45
Ile Gln Glu Ile Ile Lys Pro Ile Glu Tyr Thr Arg Val Pro Ser Val
50 55 60
Pro Asp Tyr Val Leu Gly Val Phe Asn Met Arg Gly Asn Val Met Pro
65 70 75 80
Leu Ile Asp Leu Ala Gln Arg Phe His Leu Gly Ser Ser Lys Met Thr
85 90 95
Pro Gln Thr Arg Tyr Ile Val Leu Arg Gly Glu Thr Asn Gly Thr Gly
100 105 110
Val Gly Gly Asn Ala Gly Phe Val Ile Asp Arg Leu Thr Glu Ala Ile
115 120 125
Lys Ile His Arg Asn Arg Ile Asp Pro Pro Pro Glu Thr Leu Val Lys
130 135 140
Asp Lys Gly Met Ile Tyr Gly Ile Gly Lys Arg Asp Glu Asn Ile Leu
145 150 155 160
Thr Ile Leu Lys Val Glu Ala Leu Leu Lys Arg Glu Phe
165 170
<210> 40
<211> 249
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:40 - Cj0303c)
<400> 40
Met Lys Lys Phe Val Val Phe Phe Gly Ile Leu Leu Phe Val Ser Cys
1 5 10 15
Leu Asn Ala Gln Asn Leu Ser Ile Phe Val Ala Ser Ser Ala Ser Lys
20 25 30
Ala Met Ser Glu Val Lys Asp Glu Phe Leu Lys Thr His Pro Glu Asp
35 40 45
Lys Ile Glu Leu Val Phe Gly Ala Ser Gly Lys Tyr Tyr Glu Leu Leu
50 55 60
Lys Gln Gly Arg Glu Phe Asp Leu Phe Phe Ser Ala Asp Thr Lys Tyr
65 70 75 80
Ala Lys Ala Ile Tyr Asp Asp Lys Asn Ala Leu Ile Lys Pro Lys Val
85 90 95
Tyr Val Leu Gly Val Leu Ala Leu Tyr Ser Leu Asp Glu Asn Leu Leu
100 105 110
Gln Gly Gly Val Glu Asn Leu Lys Glu Lys Ala Asn Lys Ile Thr His
115 120 125
Leu Ser Ile Ala Asn Pro Lys Val Ala Pro Tyr Gly Val Ala Ala Lys
130 135 140
Glu Val Leu Glu Asn Leu Gly Leu Asn Glu Leu Leu Lys Asp Lys Ile
145 150 155 160
Val Leu Gly Glu Asn Ile Ser Val Pro Val Leu His Val Asp Ser Lys
165 170 175
Asn Ser Asp Ile Ala Ile Val Ala Tyr Ser Leu Val Ser Ser Ile Asn
180 185 190
His Pro Lys Gly Lys Ala Val Ile Ile Asp Ala Lys Tyr Phe Ser Pro
195 200 205
Leu Glu Gln Ser Tyr Val Ile Thr Lys Tyr Ala Lys Asp Lys Lys Leu
210 215 220
Ala Phe Glu Phe Asn Glu Phe Ile Gly Ser Ser Lys Ala Lys Glu Ile
225 230 235 240
Phe Lys Lys Tyr Gly Phe Ser Thr Pro
245
<210> 41
<211> 198
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:41 - Cj0334)
<400> 41
Met Ile Val Thr Lys Lys Ala Leu Asp Phe Thr Ala Pro Ala Val Leu
1 5 10 15
Gly Asn Asn Glu Ile Val Gln Asp Phe Asn Leu Tyr Lys Asn Ile Gly
20 25 30
Pro Lys Gly Ala Val Val Phe Phe Tyr Pro Lys Asp Phe Thr Phe Val
35 40 45
Cys Pro Ser Glu Ile Ile Ala Phe Asp Lys Arg Tyr Gln Glu Phe Lys
50 55 60
Asn Arg Gly Ile Glu Val Ile Gly Ile Ser Gly Asp Asn Glu Phe Ser
65 70 75 80
His Phe Ala Trp Lys Asn Thr Pro Val Asn Gln Gly Gly Ile Gly Gln
85 90 95
Val Lys Phe Pro Leu Val Ala Asp Leu Thr Lys Gln Ile Ala Arg Asn
100 105 110
Phe Asp Val Leu Tyr Ala Glu Ala Val Ala Leu Arg Gly Ser Phe Leu
115 120 125
Leu Asp Ala Asp Gly Thr Val Arg His Ala Val Val Asn Asp Leu Pro
130 135 140
Leu Gly Arg Asn Ile Asp Glu Met Leu Arg Met Val Asp Thr Met Leu
145 150 155 160
Phe Thr Asn Glu His Gly Glu Val Cys Pro Ala Gly Trp Asn Lys Gly
165 170 175
Asp Glu Gly Met Lys Ala Asn Pro Lys Gly Val Ala Glu Tyr Leu Gly
180 185 190
Lys Asn Glu Ala Lys Leu
195
<210> 42
<211> 573
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:42 - Cj0415)
<400> 42
Met Ala Glu Val Leu Lys Lys Val Asp Val Val Thr Val Gly Ala Gly
1 5 10 15
Trp Thr Gly Gly Ile Val Ala Ala Glu Leu Thr Lys Ala Gly Leu Asn
20 25 30
Val Leu Ser Leu Glu Arg Gly His Met Gln Ser Thr Glu Asn Phe Asn
35 40 45
Tyr Ile His Asp Glu Trp Arg Tyr Gly Ile Asn Tyr Gly Leu Met Gln
50 55 60
Asp Cys Ser Lys Asp Thr Val Thr Phe Arg His Asp Pro Ser Gly Leu
65 70 75 80
Ala Leu Pro Tyr Arg Lys Met Gly Ser Phe Leu Leu Gly Asn Asn Val
85 90 95
Gly Gly Ala Gly Val His Trp Asn Gly Trp Thr Phe Arg Phe Met Pro
100 105 110
Tyr Asp Phe Glu Ile Gln Thr Leu Ser Lys Gln Arg Tyr Gly Asn Lys
115 120 125
Leu Gly Asn Asp Tyr Thr Leu Gln Asp Trp Gly Val Thr Tyr Lys Asp
130 135 140
Met Glu Pro Tyr Tyr Asp Arg Phe Glu Lys Thr Cys Gly Val Ser Gly
145 150 155 160
Glu Pro Asn Pro Leu Ala Glu Lys Met Gly Ala Phe Arg Ser Ser Pro
165 170 175
Tyr Pro Gln Glu Pro Leu Glu Asn Thr Lys Met Leu Lys Arg Phe Glu
180 185 190
Ser Ala Ala Lys Ser Ser Asn Leu His Thr Tyr Arg Leu Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Ser Lys Gly Gly Tyr Thr Asn Pro Asp Gly Gln Asp Leu Ala Pro
210 215 220
Cys Gln Tyr Cys Ala Tyr Cys Glu Arg Phe Gly Cys Glu Tyr Gly Ala
225 230 235 240
Lys Ala Ser Pro Leu Asn Thr Val Ile Pro Lys Ala Met Ser Thr Gly
245 250 255
Lys Tyr Thr Ile Arg Thr Tyr Ser Asn Val Thr Gln Ile Leu Lys Lys
260 265 270
Asp Gly Lys Val Thr Gly Val Lys Phe Val Asp Thr Arg Thr Met Lys
275 280 285
Glu Tyr Ile Gln Pro Ala Asp Ile Val Val Leu Thr Ser Tyr Met Phe
290 295 300
Asn Asn Ala Lys Leu Leu Met Val Ser Asn Ile Gly Glu Gln Tyr Asp
305 310 315 320
Pro Lys Thr Gly Lys Gly Thr Leu Gly Arg Asn Tyr Cys Tyr Gln Met
325 330 335
Asn Met Gly Thr Thr Ala Phe Phe Asp Glu Gln Phe Asn Thr Phe Met
340 345 350
Gly Ser Gly Ala Leu Gly Thr Thr Ser Asp Asp Phe Asn Gly Asp Asn
355 360 365
Phe Asp His Ser Lys Glu Lys Phe Leu His Gly Ala Met Ile Tyr Ser
370 375 380
Val Gln Leu Gly Thr Arg Pro Ile Gln Ser Ala Pro Leu Pro Ala Gly
385 390 395 400
Ala Pro Thr Trp Gly Ala Glu Phe Lys Lys Ala Leu Asn Tyr Asn Phe
405 410 415
Thr Arg Ala Ile Thr Val Gly Gly Gln Gly Ala Ser Leu Pro His Lys
420 425 430
Asn Asn Tyr Leu Ser Leu Asp Pro Thr Tyr Lys Asp Ala Phe Gly Met
435 440 445
Pro Leu Leu Arg Leu Thr Tyr Asn Phe Thr Asp Gln Asp Arg Ala Leu
450 455 460
His Lys Phe Ile Thr Asp Lys Thr Ala Glu Val Ala Lys Arg Met Gln
465 470 475 480
Gly Val Lys Ser Ile Lys Lys Gly Ala Tyr Leu Lys Asp Tyr Ser Val
485 490 495
Val Pro Tyr Gln Ser Thr His Asn Thr Gly Gly Thr Thr Met Gly Ala
500 505 510
Asp Arg Glu Thr Ser Val Val Asn Thr Tyr Leu Gln His Trp Asp Ala
515 520 525
Asp Asn Leu Phe Val Val Gly Ala Gly Asn Phe Gln His Asn Ser Gly
530 535 540
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545 550 555 560
Gly Ile Leu Lys Tyr His Lys Ser Gly Lys Ser Leu Ala
565 570
<210> 43
<211> 190
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:43 - Cj0420)
<400> 43
Met Lys Lys Val Leu Leu Ser Ser Leu Val Ala Val Ser Leu Leu Ser
1 5 10 15
Thr Gly Leu Phe Ala Lys Glu Tyr Thr Leu Asp Lys Ala His Thr Asp
20 25 30
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35 40 45
Phe Lys Asp Tyr Ser Ala Val Ile Asp Phe Asp Pro Ala Ser Ala Glu
50 55 60
Phe Lys Lys Leu Asp Xaa Thr Ile Lys Ile Ala Ser Val Asn Thr Glu
65 70 75 80
Asn Gln Thr Arg Asp Asn His Leu Gln Gln Asp Asp Phe Phe Lys Ala
85 90 95
Lys Lys Tyr Pro Asp Met Thr Phe Thr Met Lys Lys Tyr Glu Lys Ile
100 105 110
Asp Asn Glu Lys Gly Lys Met Thr Gly Thr Leu Thr Ile Ala Gly Val
115 120 125
Ser Lys Asp Ile Val Leu Asp Xaa Glu Ile Gly Gly Val Ala Lys Gly
130 135 140
Lys Asp Gly Lys Glu Lys Ile Gly Phe Ser Leu Asn Gly Lys Ile Lys
145 150 155 160
Arg Ser Asp Phe Lys Phe Ala Xaa Ser Thr Ser Thr Ile Thr Leu Ser
165 170 175
Asp Asp Ile Asn Leu Asn Ile Glu Val Glu Ala Asn Glu Lys
180 185 190
<210> 44
<211> 623
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:44 - Cj0759)
<400> 44
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1 5 10 15
Ala Val Tyr Glu Arg Gly Glu Ser Lys Val Ile Pro Asn Lys Glu Gly
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Ala Ala Lys Glu Ala Lys Asn Arg Leu Pro Tyr His Ile Thr Glu Arg
85 90 95
Asn Gly Ala Cys Ala Ile Glu Ile Ala Gly Lys Ile Tyr Thr Pro Gln
100 105 110
Glu Ile Ser Ala Lys Val Leu Met Lys Leu Lys Glu Asp Ala Glu Ala
115 120 125
Phe Leu Gly Glu Ser Val Thr Asp Ala Val Ile Thr Val Pro Ala Tyr
130 135 140
Phe Asn Asp Ala Gln Arg Lys Ala Thr Lys Glu Ala Gly Thr Ile Ala
145 150 155 160
Gly Leu Asn Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ser Ala Ala Leu
165 170 175
Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Lys Asp Ser Glu Lys Ile Val Val Tyr Asp
180 185 190
Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Thr Val Leu Glu Thr Gly Asp Asn
195 200 205
Val Val Glu Val Leu Ala Thr Gly Gly Asn Ala Phe Leu Gly Gly Asp
210 215 220
Asp Phe Asp Asn Lys Leu Ile Asp Phe Leu Ala Asn Glu Phe Lys Asp
225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Thr Glu Ile Asn Leu Pro Phe Ile Thr Ala Asp Ala Ser Gly Pro Lys
275 280 285
His Leu Val Lys Lys Leu Thr Arg Ala Lys Phe Glu Gly Met Ile Asp
290 295 300
Ser Leu Val Ala Glu Thr Ile Thr Lys Ile Asn Glu Val Val Ser Asp
305 310 315 320
Ala Gly Leu Lys Lys Asp Glu Ile Lys Glu Ile Val Met Val Gly Gly
325 330 335
Ser Thr Arg Val Pro Leu Val Gln Glu Glu Val Lys Lys Ala Phe Asn
340 345 350
Lys Asp Leu Asn Lys Ser Val Asn Pro Asp Glu Val Val Ala Ile Gly
355 360 365
Ala Ala Ile Gln Gly Ala Val Ile Lys Gly Asp Val Lys Asp Val Leu
370 375 380
Leu Leu Asp Val Thr Pro Leu Ser Leu Gly Ile Glu Thr Leu Gly Gly
385 390 395 400
Val Met Thr Lys Ile Ile Glu Lys Gly Thr Thr Ile Pro Thr Lys Lys
405 410 415
Glu Gln Val Phe Ser Thr Ala Glu Asp Asn Gln Ser Ala Val Thr Ile
420 425 430
Asn Val Leu Gln Gly Glu Arg Glu Phe Ser Arg Asp Asn Lys Ser Leu
435 440 445
Gly Asn Phe Asn Leu Glu Gly Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly Met Pro
450 455 460
Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile Leu Thr Val
465 470 475 480
Ser Ala Lys Asp Lys Ala Thr Gly Lys Ala Gln Glu Ile Lys Ile Thr
485 490 495
Gly Ser Ser Gly Leu Ser Glu Glu Glu Ile Asn Asn Met Val Lys Asp
500 505 510
Ala Glu Leu His Lys Glu Glu Asp Lys Lys Arg Lys Glu Ala Val Asp
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Ala Arg Asn Ala Ala Asp Ser Leu Ala His Gln Val Glu Lys Ser Leu
530 535 540
Ser Glu Leu Gly Glu Lys Val Ala Ala Ala Asp Lys Glu Asn Ile Gln
545 550 555 560
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Lys Glu Glu Ile Glu Ser Lys Met Lys Ala Leu Ser Glu Val Ser His
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Lys Leu Ala Glu Asn Met Tyr Lys Lys Asp Glu Pro Asn Thr Ala Asn
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Asp Lys Lys Lys Lys Asp Asp Asp Val Ile Asp Ala Glu Val Glu
610 615 620
<210> 45
<211> 256
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:45 - Cj0771c)
<400> 45
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1 5 10 15
Ser Leu Phe Ala Gln Asn Ile Thr Ile Gly Ala Thr Pro Asn Pro Phe
20 25 30
Gly Ser Leu Leu Glu Leu Met Lys Asp Asp Phe Lys Asn Lys Gly Tyr
35 40 45
Glu Leu Lys Ile Val Glu Phe Ser Asp Tyr Ile Leu Pro Asn Arg Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Glu Glu Tyr Asn Leu Lys Lys Gly Ser Asn Leu Ile Ala Thr Thr
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100 105 110
Leu Glu Asn Leu Lys Glu Gly Ala Arg Val Ala Ile Pro Asn Asp Ala
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130 135 140
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145 150 155 160
Pro Lys Lys Leu Lys Phe Ile Glu Leu Lys Ala Ala Gln Leu Pro Arg
165 170 175
Ala Leu Asp Asp Val Asp Ile Ala Ile Ile Asn Ser Asn Phe Ala Leu
180 185 190
Gly Ala Gly Leu Asn Pro Ser Lys Asp Thr Ile Phe Arg Glu Asp Lys
195 200 205
Asn Ser Pro Tyr Val Asn Tyr Val Val Val Arg Ser Glu Gly Lys Asn
210 215 220
Ser Glu Lys Thr Lys Val Ile Asp Glu Ile Leu Arg Ser Asp Lys Phe
225 230 235 240
Lys Ala Ile Ile Asn Glu His Tyr Lys Asp Ile Leu Ile Pro Ala Phe
245 250 255
<210> 46
<211> 257
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:46 - Cj0772c)
<400> 46
Met Lys Ile Lys Ser Leu Phe Ile Ala Ser Ile Leu Thr Leu Ser Leu
1 5 10 15
Asn Ala Asn Ala Leu Glu Thr Ile Thr Val Ala Ala Thr Pro Val Pro
20 25 30
His Ala Glu Ile Leu Glu Gln Val Lys Pro Asp Leu Glu Lys Gln Gly
35 40 45
Tyr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Phe Thr Asp Tyr Val Leu Pro Asn Leu
50 55 60
Ala Val Asp Asn Gly Glu Ala Asp Ala Asn Phe Phe Gln His Thr Pro
65 70 75 80
Tyr Leu Glu Glu Phe Asn Lys Asn Lys Gly Thr Lys Leu Ile Lys Val
85 90 95
Ala Ala Ile His Ile Glu Pro Met Ala Val Tyr Ser Lys Lys Tyr Lys
100 105 110
Ser Leu Asp Asp Ile Lys Glu Gly Val Lys Ile Ala Ile Pro Asn Asp
115 120 125
Pro Thr Asn Glu Ser Arg Ala Leu Asp Ile Ile Ala Lys Lys Gly Leu
130 135 140
Val Lys Phe Lys Asp Lys Ala Leu Lys Thr Pro Leu Asp Ile Ile Asp
145 150 155 160
Asn Pro Lys Lys Ile Lys Phe Val Glu Leu Lys Pro Ala Gln Leu Pro
165 170 175
Arg Ala Leu Asn Asp Val Asp Phe Ala Val Ile Asn Ser Asn Tyr Ala
180 185 190
Leu Ser Ala Asn Leu Asn Pro Ala Lys Asp Ser Val Phe Ile Glu Asp
195 200 205
Lys Glu Ser Pro Tyr Ala Asn Ile Leu Val Val Arg Val Gly His Glu
210 215 220
Asn Asp Pro Lys Ile Lys Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gln Ser Asp Lys
225 230 235 240
Ile Lys Gln Phe Ile Ile Glu Lys Tyr Asn Gly Ser Val Leu Pro Ala
245 250 255
Phe
<210> 47
<211> 213
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:47 - Cj0872)
<400> 47
Met Arg Asn Phe Phe Cys Lys Phe Val Leu Ala Leu Val Phe Tyr Ser
1 5 10 15
Ser Phe Ala Leu Ala Asn Asn Ser Phe Ile Thr Leu Asn Pro Ser Leu
20 25 30
Pro Ser Ser Glu Asn Ser Val Ile Glu Ala Phe Ser Tyr Lys Cys Ile
35 40 45
His Cys Tyr Asn His His Lys Phe Gly Thr Leu Glu Lys Leu Arg Glu
50 55 60
Ala Phe Pro Asn Leu His Phe Lys Leu Tyr Pro Val Ser Leu Met Asn
65 70 75 80
Gly Glu Phe Ser Lys Glu Met Asn Glu Leu Phe Thr Phe Ala Gln Tyr
85 90 95
Lys Asp Glu Gln Asn Gly Lys Asp Ala Ser Tyr Ser Asp Ser Leu Ser
100 105 110
His Lys Leu Ala Asp Val Tyr Phe Val Ser Tyr Phe Leu Asn Lys Gln
115 120 125
Arg Asn Phe Ser Asn Leu Asp Glu Phe Tyr Asp Ile Gly Leu Lys Ala
130 135 140
Met Asn Val Asn Lys Asn Glu Val Leu Asn Phe Leu Asn Thr Pro Lys
145 150 155 160
Ala Lys Glu Ile Leu Ser Glu Phe Gln Arg Ala Asn Asp Ile Ala Lys
165 170 175
Thr Tyr Gly Thr Pro Ala Phe Val Val Asn Gly Lys Tyr Gln Ile Asn
180 185 190
Pro Ser Ala Ile Asn Ser Met Gln Asp Leu Glu Asp Leu Val Lys Lys
195 200 205
Leu Ser Asn Met Lys
210
<210> 48
<211> 130
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:48 - Cj1118c)
<400> 48
Met Lys Leu Leu Val Val Asp Asp Ser Ser Thr Met Arg Arg Ile Ile
1 5 10 15
Lys Asn Thr Leu Thr Arg Leu Gly His Asp Asp Val Leu Glu Ala Glu
20 25 30
His Gly Val Glu Ala Trp Asp Leu Leu Thr Lys Asn Glu Asp Val Lys
35 40 45
Val Leu Ile Thr Asp Trp Asn Met Pro Glu Met Asn Gly Leu Glu Leu
50 55 60
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65 70 75 80
Met Val Thr Thr Glu Gly Gly Lys Ala Glu Val Ile Thr Ala Leu Lys
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100 105 110
Lys Glu Lys Leu Glu Asp Val Leu Gly Thr Gly Ser Gly Glu Gly Ala
115 120 125
Ala Glu
130
<210> 49
<211> 472
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:49 - Cj1228c)
<400> 49
Met Lys Lys Ile Phe Leu Ser Leu Ser Leu Ala Ser Ala Leu Phe Ala
1 5 10 15
Ala Ser Ile Asn Phe Asn Glu Ser Thr Ala Thr Ala Asn Arg Val Asn
20 25 30
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35 40 45
Ala Lys Lys Ser Val Val Asn Ile Ser Thr Ser Lys Thr Ile Thr Arg
50 55 60
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65 70 75 80
Lys Gln Phe Phe Asp Phe Asp Phe Ser Gln Arg Lys Gly Lys Asn Asp
85 90 95
Lys Glu Val Val Ser Ser Leu Gly Ser Gly Val Ile Ile Ser Lys Asp
100 105 110
Gly Tyr Ile Val Thr Asn Asn His Val Val Asp Asp Ala Asp Thr Ile
115 120 125
Thr Val Asn Leu Pro Gly Ser Asp Ile Glu Tyr Lys Ala Lys Leu Ile
130 135 140
Gly Lys Asp Pro Lys Thr Asp Leu Ala Val Ile Lys Ile Glu Ala Asn
145 150 155 160
Asn Leu Ser Ala Ile Thr Phe Thr Asn Ser Asp Asp Leu Met Glu Gly
165 170 175
Asp Val Val Phe Ala Leu Gly Asn Pro Phe Gly Val Gly Phe Ser Val
180 185 190
Thr Ser Gly Ile Ile Ser Ala Leu Asn Lys Asp Asn Ile Gly Leu Asn
195 200 205
Gln Tyr Glu Asn Phe Ile Gln Thr Asp Ala Ser Ile Asn Pro Gly Asn
210 215 220
Ser Gly Gly Ala Leu Val Asp Ser Arg Gly Tyr Leu Val Gly Ile Asn
225 230 235 240
Ser Ala Ile Leu Ser Arg Gly Gly Gly Asn Asn Gly Ile Gly Phe Ala
245 250 255
Ile Pro Ser Asn Met Val Lys Asp Ile Ala Lys Lys Leu Ile Glu Lys
260 265 270
Gly Lys Ile Asp Arg Gly Phe Leu Gly Val Thr Ile Leu Ala Leu Gln
275 280 285
Gly Asp Thr Lys Lys Ala Tyr Lys Asn Gln Glu Gly Ala Leu Ile Thr
290 295 300
Asp Val Gln Lys Gly Ser Ser Ala Asp Glu Ala Gly Leu Lys Arg Gly
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Asp Leu Val Thr Lys Val Asn Asp Lys Val Ile Lys Ser Pro Ile Asp
325 330 335
Leu Lys Asn Tyr Ile Gly Thr Leu Glu Ile Gly Gln Lys Ile Ser Leu
340 345 350
Ser Tyr Glu Arg Asp Gly Glu Asn Lys Gln Ala Ser Phe Ile Leu Lys
355 360 365
Gly Glu Lys Glu Asn Pro Lys Gly Val Gln Ser Asp Leu Ile Asp Gly
370 375 380
Leu Ser Leu Arg Asn Leu Asp Pro Arg Leu Lys Asp Arg Leu Gln Ile
385 390 395 400
Pro Lys Asp Val Asn Gly Val Leu Val Asp Ser Val Lys Glu Lys Ser
405 410 415
Lys Gly Lys Asn Ser Gly Phe Gln Glu Gly Asp Ile Ile Ile Gly Val
420 425 430
Gly Gln Ser Glu Ile Lys Asn Leu Lys Asp Leu Glu Gln Ala Leu Lys
435 440 445
Gln Val Asn Lys Lys Glu Phe Thr Lys Val Trp Val Tyr Arg Asn Gly
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Phe Ala Thr Leu Leu Val Leu Lys
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<210> 50
<211> 511
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:50 - Cj1584c)
<400> 50
Met Leu Arg Trp Phe Val Leu Leu Phe Leu Leu Phe Leu Asn Leu Glu
1 5 10 15
Ala Lys Ile Pro Lys Asp Thr Leu Ile Ile Ala Val Glu Asn Glu Ile
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35 40 45
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50 55 60
Pro Asp Leu Ala Lys Ser Trp Asp Ile Ser Lys Asp Gly Leu Val Tyr
65 70 75 80
Asp Ile Phe Leu Arg Asp Asp Val Leu Trp His Asp Gly Val Lys Phe
85 90 95
Ser Ala Asp Asp Val Lys Phe Ser Ile Glu Ala Phe Lys Asn Pro Lys
100 105 110
Asn Asn Ser Ser Ile Tyr Val Asn Phe Glu Asp Ile Lys Ser Val Glu
115 120 125
Ile Leu Asn Pro Ser His Val Lys Ile Thr Leu Phe Lys Pro Tyr Pro
130 135 140
Ala Phe Leu Asp Ala Leu Ser Ile Gly Met Leu Pro Lys His Leu Leu
145 150 155 160
Glu Asn Glu Asn Leu Asn Thr Ser Ser Phe Asn Gln Asn Pro Ile Gly
165 170 175
Thr Gly Pro Tyr Lys Phe Val Lys Trp Lys Lys Gly Glu Tyr Val Glu
180 185 190
Phe Lys Ala Asn Glu His Phe Tyr Leu Asp Lys Val Lys Thr Pro Arg
195 200 205
Leu Ile Ile Lys His Ile Phe Asp Pro Ser Ile Ala Ser Ala Glu Leu
210 215 220
Lys Asn Gly Lys Ile Asp Ala Ala Leu Ile Asp Val Ser Leu Leu Asn
225 230 235 240
Ile Phe Lys Asn Asp Glu Asn Phe Gly Ile Leu Arg Glu Lys Ser Ala
245 250 255
Asp Tyr Arg Ala Leu Met Phe Asn Leu Asp Asn Glu Phe Leu Lys Asp
260 265 270
Leu Lys Val Arg Gln Ala Leu Asn Tyr Ala Val Asp Lys Glu Ser Ile
275 280 285
Val Lys Asn Leu Leu His Asp Tyr Ala Phe Val Ala Asn His Pro Leu
290 295 300
Glu Arg Ser Trp Ala Asn Ser Lys Asn Phe Lys Ile Tyr Lys Tyr Asp
305 310 315 320
Pro Lys Lys Ala Glu Asp Leu Leu Val Ser Ala Gly Phe Lys Lys Asn
325 330 335
Lys Asp Gly Asn Phe Glu Lys Asp Gly Lys Ile Leu Glu Phe Glu Ile
340 345 350
Trp Ala Met Ser Asn Asp Pro Leu Arg Val Ser Leu Ala Gly Ile Leu
355 360 365
Gln Ser Glu Phe Arg Lys Ile Gly Val Val Ser Lys Val Val Ala Lys
370 375 380
Pro Ala Gly Ser Phe Asp Tyr Ser Lys Val Asp Ser Phe Leu Ile Gly
385 390 395 400
Trp Gly Ser Pro Leu Asp Pro Asp Phe His Thr Phe Arg Val Phe Glu
405 410 415
Ser Ser Gln Asp Ser Ala Leu Asn Asp Glu Gly Trp Asn Phe Gly His
420 425 430
Tyr His Asp Lys Lys Val Asp Ile Ala Leu Gln Lys Ala Arg Asn Thr
435 440 445
Ser Asn Leu Glu Glu Arg Lys Lys Tyr Tyr Lys Asp Phe Ile Asp Ala
450 455 460
Leu Tyr Glu Asn Pro Pro Phe Ile Phe Leu Ala Tyr Leu Asp Phe Ala
465 470 475 480
Leu Val Tyr Asn Lys Asp Leu Lys Gly Ile Lys Thr Arg Thr Leu Gly
485 490 495
His His Gly Val Gly Phe Thr Trp Asn Val Tyr Glu Trp Ser Lys
500 505 510
<210> 51
<211> 268
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:51 - Cj1617)
<400> 51
Met Lys Lys Ile Leu Ile Ile Met Ser Leu Phe Leu Ile Ala Leu Asn
1 5 10 15
Ala Lys Glu Arg Leu Val Val Leu Asp Pro Ala Ser Ile Glu Thr Leu
20 25 30
Phe Met Leu Lys Ala Glu Asp Gln Ile Val Gly Ile Ala Thr Leu Gln
35 40 45
His Ser Asn Ile Tyr Pro Lys Asp Gln Thr Ser Lys Leu Thr Ser Val
50 55 60
Gly Thr Phe Ser Asn Pro Ser Leu Glu Lys Ile Val Ala Leu Lys Pro
65 70 75 80
Ser Leu Val Ile Leu Ser Ser Tyr Ser Leu Asn Leu Glu Glu Gly Leu
85 90 95
Lys Asn Phe Gly Ile Lys Ser Ile Asn Leu Lys Ala Glu Arg Leu Glu
100 105 110
Asp Ile Thr Lys Asn Ile Thr Thr Leu Gly Gln Ile Thr Lys Lys Glu
115 120 125
Lys Glu Ala Glu Leu Leu Lys Gln Glu Phe Asn Gln Lys Phe Lys Lys
130 135 140
Leu Ser Asp Lys Pro Leu Asn Lys Ser Ala Ile Tyr Leu Tyr Ser Ser
145 150 155 160
Asn Pro Leu Met Ala Phe Asn Asp Asn Ser Leu Ile Ala Asp Ile Leu
165 170 175
Arg Leu Ile Gly Ile Lys Asn Leu Ser Pro Gln Ser Gln Ile Ser Arg
180 185 190
Pro Val Ile Ser Ala Glu Tyr Ile Leu Lys Gln Asn Pro Asp Ile Leu
195 200 205
Ile Leu Gly Ile Asn Ala Lys Asn Asn Leu Leu Asp Thr Asn Ala Leu
210 215 220
Leu Lys Asn Thr Lys Ala Val Lys Thr Gly Ser Ile Tyr Phe Asn Lys
225 230 235 240
Asp Thr Pro Ile Leu Leu Arg Leu Ser Pro Lys Ile Ile Asp Arg Ile
245 250 255
Gln Glu Phe Lys Thr Lys Leu Glu Asn Asn Asn Phe
260 265
<210> 52
<211> 33
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:52 - fragment of Cj0092)
<400> 52
Thr Gln Gln Asp Ile Asn Thr Gln Asn Glu Met Ser Asp Ala Ser Thr
1 5 10 15
Lys Asp Ile Thr Pro Lys Ser Ile Glu Asp Phe Phe Glu Glu Phe Ala
20 25 30
Asp
<210> 53
<211> 25
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:53 - fragment of Cj0092)
<400> 53
Gly Ile Thr Lys Asp Gly Lys Thr Phe Tyr Thr Gly Lys Ser Thr Val
1 5 10 15
Ala Val Asn Asp Thr Asp Pro Gln Phe
20 25
<210> 54
<211> 36
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:54 - fragment of Cj0092)
<400> 54
Arg Ile Ala Thr Ser Lys Ile Gln Asn Tyr Glu Ala Asp Asn Ser Thr
1 5 10 15
Asn Ala Lys Glu Phe Asp Glu Leu Pro Lys Gly Asp Lys Val Asp Gln
20 25 30
Ile Leu Asn Lys
35
<210> 55
<211> 36
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:55 - fragment of Cj0092)
<400> 55
Gln Leu Asp Lys Ala Leu Lys Asp Leu Gly Ile Asp Thr Asn Ser Leu
1 5 10 15
Ser Glu Asp Arg Lys Lys Thr Leu Leu Lys Gln Glu Phe Leu Asn Lys
20 25 30
Thr Met Thr Asn
35
<210> 56
<211> 28
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:56 - fragment of Cj0092)
<400> 56
Thr Ile Val Thr Gln Arg Arg Gly Glu Tyr Asp Val Gly Val Val Ala
1 5 10 15
Val Ile Ser Asn Lys Thr Arg Gln Leu Ala Lys Asp
20 25
<210> 57
<211> 26
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:57 - fragment of Cj0092)
<400> 57
Ala Ile Ser Glu Tyr Leu Pro Lys Asp Thr Lys Gly Phe Leu Asn Glu
1 5 10 15
Tyr Gly Ile Arg Leu Val Tyr Asp Glu Asn
20 25
<210> 58
<211> 18
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:58 - fragment of Cj0092)
<400> 58
Asp Pro Ser Asn Ala Lys Lys Thr Asn Ile Leu Glu Asp Arg Ala Lys
1 5 10 15
Glu Thr
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:59 - fragment of Cj0092)
<400> 59
Leu Ser Leu Lys Asp Glu Arg Thr Thr Gly Asp Thr Tyr Glu Glu Ile
1 5 10 15
Ile
<210> 60
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:60 - fragment of Cj0092)
<400> 60
Val Asn Asp Ser Ser Thr Gln Glu Gln Thr Gln Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:61 - fragment of Cj0092)
<400> 61
Thr Leu Lys Lys Trp Ser Tyr Thr Ser Glu Asn Gly
1 5 10
<210> 62
<211> 33
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:62 - fragment of Cj0092)
<400> 62
Tyr Ser Tyr Glu Asn Leu Ala Asn Thr Asn Glu Ala Leu Asn Ser Lys
1 5 10 15
Ser Asn Ala Thr Lys Asn Glu Ala Lys Lys Ser Ser Ser Ile Gln Arg
20 25 30
Ser
<210> 63
<211> 25
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:63 - fragment of Cj0143c)
<400> 63
Ile Phe Tyr Thr Phe Thr Gln Ala Lys Asn Leu Glu Gln Glu Gln Asn
1 5 10 15
Thr Ser Ser Asn Leu Val Ser Val Ser
20 25
<210> 64
<211> 27
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:64 - fragment of Cj0143c)
<400> 64
Leu Pro Pro Asn Ser Asn Glu His Asn Phe Glu Phe Lys Pro Ser Thr
1 5 10 15
Met Lys Lys Leu Glu Lys Ser Asp Ile Tyr Phe
20 25
<210> 65
<211> 24
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:65 - fragment of Cj0143c)
<400> 65
Leu Glu Phe Glu Lys Val Phe Thr Asp Lys Phe Lys Gln Asn Phe Pro
1 5 10 15
Lys Leu Gln Val Ile Asn Met Gln
20
<210> 66
<211> 27
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:66 - fragment of Cj0143c)
<400> 66
Ile Gln Thr His Asp Thr His Glu His Ser His Glu His Glu His His
1 5 10 15
Glu His Gly His Phe Asp Pro His Thr Trp Leu
20 25
<210> 67
<211> 20
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:67 - fragment of Cj0143c)
<400> 67
Asp Thr Leu Ile Gln Lys Tyr Pro Gln Asn Glu Asn Leu Tyr Lys Glu
1 5 10 15
Asn Leu Asp Lys
20
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:68 - fragment of Cj0143c)
<400> 68
Ser Lys Leu Glu Lys Leu Lys Asn Arg Glu
1 5 10
<210> 69
<211> 8
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:69 - fragment of Cj0143c)
<400> 69
Tyr Phe Ala Lys Arg Tyr Asn Leu
1 5
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:70 - fragment of Cj0143c)
<400> 70
Gly Lys Glu Pro Lys Ser Lys Asp Leu Gln Lys
1 5 10
<210> 71
<211> 8
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:71 - fragment of Cj0143c)
<400> 71
Leu Met Lys Asp Lys Asn Leu Lys
1 5
<210> 72
<211> 22
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:72 - fragment of Cj0143c)
<400> 72
Gln Asn Gly Phe Pro Glu Asn Ala Ala Lys Thr Leu Ala Lys Glu Cys
1 5 10 15
Asp Ala Lys Ile Tyr Lys
20
<210> 73
<211> 18
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:73 - fragment of Cj0143c)
<400> 73
Asp His Leu Ser Tyr Asp Trp Glu Asn Glu Leu Leu Lys Thr Ala Asp
1 5 10 15
Ala Phe
<210> 74
<211> 23
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:74 - fragment of Cj0420)
<400> 74
Phe Ala Lys Glu Tyr Thr Leu Asp Lys Ala His Thr Asp Val Gly Phe
1 5 10 15
Lys Ile Lys His Leu Gln Ile
20
<210> 75
<211> 28
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:75 - fragment of Cj0420)
<400> 75
Val Lys Gly Asn Phe Lys Asp Tyr Ser Ala Val Ile Asp Phe Asp Pro
1 5 10 15
Ala Ser Ala Glu Phe Lys Lys Leu Asp Val Thr Ile
20 25
<210> 76
<211> 19
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:76 - fragment of Cj0420)
<400> 76
Ser Val Asn Thr Glu Asn Gln Thr Arg Asp Asn His Leu Gln Gln Asp
1 5 10 15
Asp Phe Phe
<210> 77
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:77 - fragment of Cj0420)
<400> 77
Asp Phe Phe Lys Ala Lys Lys Tyr Pro Asp Met Thr Phe Thr Met
1 5 10 15
<210> 78
<211> 18
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:78 - fragment of Cj0420)
<400> 78
Thr Phe Thr Met Lys Lys Tyr Glu Lys Ile Asp Asn Glu Lys Gly Lys
1 5 10 15
Met Thr
<210> 79
<211> 14
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:79 - fragment of Cj0420)
<400> 79
Gly Val Ala Lys Gly Lys Asp Gly Lys Glu Lys Ile Gly Phe
1 5 10
<210> 80
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:80 - fragment of Cj0420)
<400> 80
Leu Asn Gly Lys Ile Lys Arg Ser Asp Phe Lys Phe Ala Thr Ser
1 5 10 15
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:81 - fragment of Cj0420)
<400> 81
Glu Val Glu Ala Asn Glu Lys
1 5
<210> 82
<211> 12
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:82 - fragment of Cj0715)
<400> 82
Leu Ser Ala Thr Glu Tyr Gln Leu Ser Thr His Val
1 5 10
<210> 83
<211> 16
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:83 - fragment of Cj0715)
<400> 83
Ile Thr Ser Gly Gln Pro Ala Pro Lys Val Lys Val Glu Leu Tyr Lys
1 5 10 15
<210> 84
<211> 22
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:84 - fragment of Cj0715)
<400> 84
Leu Glu Ala Asn Gln Gln Trp Lys Lys Val Ser Glu Glu Phe Thr Glu
1 5 10 15
Glu Asn Gly Arg Ile Gly
20
<210> 85
<211> 13
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:85 - fragment of Cj0715)
<400> 85
Leu Leu Pro Tyr Glu Lys Ala Glu Asn Arg Ala Phe Gly
1 5 10
<210> 86
<211> 16
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:86- fragment of Cj0715)
<400> 86
Lys Phe Phe Thr Lys Asp Tyr Tyr Thr Ser His Lys Ile Asn Thr Phe
1 5 10 15
<210> 87
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:87 - fragment of Cj0715)
<400> 87
Ser Phe Glu Leu Ser Lys Asp Gln Lys His Tyr His Val Pro Ile
1 5 10 15
<210> 88
<211> 9
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:88 - fragment of Cj0715)
<400> 88
Phe Gly Tyr Ser Thr Tyr Arg Gly Ser
1 5
<210> 89
<211> 24
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:89 - fragment of Cj0772c)
<400> 89
Ile Leu Glu Gln Val Lys Pro Asp Leu Glu Lys Gln Gly Tyr Lys Leu
1 5 10 15
Glu Ile Lys Glu Phe Thr Asp Tyr
20
<210> 90
<211> 23
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:90 - fragment of Cj0772c)
<400> 90
Gly Glu Ala Asp Ala Asn Phe Phe Gln His Thr Pro Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Phe Asn Lys Asn Lys Gly Thr
20
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:91 - fragment of Cj0772c)
<400> 91
Ala Val Tyr Ser Lys Lys Tyr Lys Ser Leu Asp Asp Ile Lys Glu
1 5 10 15
<210> 92
<211> 12
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:92 - fragment of Cj0772c)
<400> 92
Ile Pro Asn Asp Pro Thr Asn Glu Ser Arg Ala Leu
1 5 10
<210> 93
<211> 39
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:93 - fragment of Cj0772c)
<400> 93
Lys Gly Leu Val Lys Phe Lys Asp Lys Ala Leu Lys Thr Pro Leu Asp
1 5 10 15
Ile Ile Asp Asn Pro Lys Lys Ile Lys Phe Val Glu Leu Lys Pro Ala
20 25 30
Gln Leu Pro Arg Ala Leu Asn
35
<210> 94
<211> 21
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:94 - fragment of Cj0772c)
<400> 94
Ala Asn Leu Asn Pro Ala Lys Asp Ser Val Phe Ile Glu Asp Lys Glu
1 5 10 15
Ser Pro Tyr Ala Asn
20
<210> 95
<211> 29
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:95 - fragment of Cj0772c)
<400> 95
Gly His Glu Asn Asp Pro Lys Ile Lys Ala Leu Ile Gln Ala Leu Gln
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ile Lys Gln Phe Ile Ile Glu Lys Tyr Asn
20 25
<210> 96
<211> 31
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:96 - fragment of Cj1018c)
<400> 96
Asn Gly Asp Lys Val Ser Leu Ala Ile Ile Asp Thr Lys Gly Asp Lys
1 5 10 15
Leu Glu Ser Ser Ser Gly Ala Asn Arg Leu Val Ser Gln Asp Lys
20 25 30
<210> 97
<211> 30
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:97 - fragment of Cj1018c)
<400> 97
Val Ala Glu Asp Asn Lys Ile Pro Leu Ile Ala Pro Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Asp Arg Leu Leu Asp Lys Lys Ile Tyr Ser Ser Arg Val Cys
20 25 30
<210> 98
<211> 39
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:98 - fragment of Cj1018c)
<400> 98
Tyr Val Phe Ser Lys Leu Asn Tyr Lys Ser Ala Val Ile Val Val Asp
1 5 10 15
Gln Ser Thr Asp Tyr Ser Leu Gly Leu Ala Lys Ala Phe Glu Lys Gln
20 25 30
Tyr Lys Ser Asn Gly Gly Gln
35
<210> 99
<211> 41
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:99 - fragment of Cj1018c)
<400> 99
Asn Ser Gly Asp Lys Asp Phe Arg Ala Ile Val Ala Gln Val Lys Ser
1 5 10 15
Leu Asn Pro Glu Phe Ile Phe Leu Pro Leu Tyr Tyr Ser Glu Ala Ser
20 25 30
Leu Phe Ala Arg Gln Ser Lys Leu Ala
35 40
<210> 100
<211> 41
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:100 - fragment of Cj1018c)
<400> 100
Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Ser Phe Asp Ala Asn Asn Pro Thr Thr Lys
1 5 10 15
Leu Ser Lys Glu Phe Ile Ser Val Tyr Glu Lys Ala Lys Gly Thr Lys
20 25 30
Glu Val Pro Asn Phe Ser Ala Met Gly
35 40
<210> 101
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:101 - fragment of Cj1018c)
<400> 101
Val Asn Glu Lys Ile His Gln Thr Lys Asn Tyr Gln Gly Val Ser
1 5 10 15
<210> 102
<211> 26
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:102 - fragment of Cj1018c)
<400> 102
Gln Thr Gly Asn Ala Thr Arg Ser Val Val Val Lys Glu Ile Lys Asn
1 5 10 15
Gln Lys Gln Asn Tyr Lys Asp Ile Ile Asn
20 25
<210> 103
<211> 14
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:103 - fragment of Cj1380)
<400> 103
Glu Leu Asn Gly Gln Lys Gln Glu Asn Ile Leu Phe Thr Lys
1 5 10
<210> 104
<211> 31
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:104 - fragment of Cj1380)
<400> 104
Ser Tyr Ala Gln Glu Tyr Glu Met Lys Lys Phe Gln Glu Ala Arg Glu
1 5 10 15
Asn Phe Thr Lys Asn Ala Lys Ala Val Ala Gln Lys Glu Thr Met
20 25 30
<210> 105
<211> 12
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:105 - fragment of Cj1380)
<400> 105
Val Ile Ala Leu Gly Asp Lys Asn Lys Pro Ala Ile
1 5 10
<210> 106
<211> 14
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:106 - fragment of Cj1380)
<400> 106
His Leu Ala Gln Ile Asp Asp Glu Leu Lys Asn Tyr Gln Val
1 5 10
<210> 107
<211> 16
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:107 - fragment of Cj1380)
<400> 107
Tyr Lys Glu Ala Lys Lys Ala Lys Asn Asp Lys Glu Lys Ile Ala Ile
1 5 10 15
<210> 108
<211> 33
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:108 - fragment of Cj1380)
<400> 108
Leu Asn Lys Tyr Tyr Asp Ala Asn Ile Lys Asn Tyr Pro Lys Val Ser
1 5 10 15
Asp Ala Glu Leu Lys Glu Val Phe Ser Leu Tyr Glu Lys Tyr Arg Ser
20 25 30
Leu
<210> 109
<211> 23
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:109 - fragment of Cj1643)
<400> 109
Gly Ile Glu Arg Pro Lys Phe Glu Asp Phe Leu Ala Gly Tyr Glu Arg
1 5 10 15
Asn Lys Ala Ser Met Leu Asn
20
<210> 110
<211> 18
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:110 - fragment of Cj1643)
<400> 110
Leu Lys Gln Pro Asn Ala Lys Leu Asn Lys Tyr Val Lys Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Phe Leu
<210> 111
<211> 26
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:111 - fragment of Cj1643)
<400> 111
Pro Thr Pro Met Gly Asp Glu Glu Lys Leu Thr Arg Asn Asp Trp Val
1 5 10 15
Gly Ile Trp Asp Pro Asn Lys Pro Tyr Ile
20 25
<210> 112
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:112 - fragment of Cj1643)
<400> 112
Ala Gln Asn Ile Asp Glu Lys Asp Gln Leu Asp Phe Asn Ser Lys
1 5 10 15
<210> 113
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:113 - fragment of Cj1643)
<400> 113
Gly Asn Arg Tyr Leu Lys His Phe Met Lys Tyr Asn Asp Val Tyr
1 5 10 15
<210> 114
<211> 19
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:114 - fragment of Cj1643)
<400> 114
Val Val Arg Glu Asn Lys Ile Tyr Val Asn Asn Val Arg Lys Asn Pro
1 5 10 15
Gln Phe Leu
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:115 - fragment of Cj1643)
<400> 115
Pro Ala Asn Asp Leu Arg Lys Leu Asn Glu Lys
1 5 10
<210> 116
<211> 18
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:116 - fragment of Cj1643)
<400> 116
Asp Arg Gly Ser Thr Leu Tyr Phe Gln Val Leu Arg Asp Asn Met Asp
1 5 10 15
Leu Asn
<210> 117
<211> 18
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:117 - fragment of Cj1643)
<400> 117
Ala Lys Asp Leu Ser Lys Phe Asn Leu Pro Asp Ser Lys Pro Lys Pro
1 5 10 15
Lys Ile
<210> 118
<211> 13
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:118 - fragment of Cj1643)
<400> 118
Thr Lys Ile Asp Pro Lys Ser Lys Val Ser Asn Ala Gly
1 5 10
<210> 119
<211> 15
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:119 - fragment of Cj1643)
<400> 119
Leu Ile Glu Arg Lys Ser Thr Lys Leu Pro Leu Ser Asn Phe Asn
1 5 10 15
<210> 120
<211> 570
<212> DNA
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:120 - ACE393, ML53 (0:19))
<400> 120
atgaaaaaag ttttattgag ttcattggtt gcggtgtctt tgttaagcac aggtttgttt 60
gctaaagaat atactttaga taaagcacat acagatgtag gttttaaaat caaacattta 120
caaattagca atgtaaaagg aaatttcaaa gattattctg cggtgattga ttttgaccct 180
gcgagtgctg aatttaaaaa gcttgatgca actataaaaa tcgcatctgt aaatacagaa 240
aatcaaacaa gagataatca cttacagcaa gatgattttt tcaaagcaaa aaaatatcct 300
gatatgactt ttacaatgaa aaaatatgaa aaaatcgata atgaaaaagg taaaatgaca 360
ggaactttaa ctatagctgg agtttctaaa gatatcgttt tagatactga aatcggcggt 420
gtagctaaag gcaaagatgg aaaagaaaaa ataggctttt ctttaaatgg aaaaatcaaa 480
cgctctgatt ttaaatttgc agcaagtact tcaactatta ctttaagtga tgatattaat 540
ttaaatatcg aagttgaagc gaacgaaaaa 570
<210> 121
<211> 13
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:121)
<400> 121
Asp Ile Val Leu Asp Thr Glu Ile Gly Gly Val Ala Lys
1 5 10
<210> 122
<211> 25
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:122)
<400> 122
Phe Ala Ala Ser Thr Ser Thr Ile Thr Leu Ser Asp Asp Ile Asn Leu
1 5 10 15
Asn Ile Glu Val Glu Ala Asn Glu Lys
20 25
<210> 123
<211> 6
<212> PRT
<213> Campylobacter jejuni (SEQ ID NO:123)
<400> 123
Leu Asp Ala Thr Ile Lys
1 5
Claims (53)
- - SEQ ID NO : 1-51의 표면에 위치한 캄필로박터 폴리펩티드류로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터,- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포, 또는- 상기 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체를 포함하는 약제용 조성물.
- 제1항에 있어서,- SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 항원성 절편 또는 상기 서열의 변이체를 포함하는 폴리펩티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함하는 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 변이체는 상기 서열에 대하여 적어도 95%, 이를 테면 적어도 96%, 예를 들면 적어도 97%, 이를 테면 적어도 98%, 예를 들면 적어도 99%의 서열 상동성을 가지는 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 항원성 절편은 상기 서열의 총 길이의 99% 이하, 이를테면 75% 이하, 예를 들어 50% 이하, 이를테면 25% 이하, 예를 들어 20% 이하, 이를테면 15% 이하, 또는 예를 들어 10% 이하로 이루어진 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 항원성 절편은 상기 서열의 잔기 중 70 이하의 연속 아미노산 잔기, 예를 들어 50 이하, 이를테면 40 이하, 예를 들어 30 이하, 이를테면 20 이하의 연속 잔기를 포함하는 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 항원성 절편은 상기 서열 중 6종 이상, 이를테면 7종 이상, 예를 들어 8종 이상, 이를테면 9종 이상, 예를 들어 10종 이상의 연속 아미노산을 포함하는 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 항원성 절편은 SEQ ID NO : 52-119로 이루어진 군 중에서 선택되는 절편의 1종 이상의 잔기, 예를 들어 SEQ ID NO : 52-119로 이루어진 군 중에서 선택되는 절편의 2종 이상의 연속 잔기, 이를테면 3종 이상의 연속 잔기, 예를 들어 4종 이상의 연속 잔기, 이를테면 5종 이상의 연속 잔기, 예를 들어 6종 이상의 연속 잔기를 포함하는 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드는 히스티딘 태그와 같은 태그를 포함하는 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 세포는 독성이 약화되거나 발병력이 감소 된 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli) 또는 살모넬라 (Salmonella) 세포인 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 세포는 살아 있는 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 세포는 사멸한 것인 조성물.
- 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제는 백신인 것인 조성물.
- 제12항에 있어서, 상기 조성물은 담체 단백질과 같은 면역원성 담체, 바람직하게는 상기 폴리펩티드에 결합하는 면역원성 담체를 포함하는 것인 조성물.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 조성물은 어드쥬번트를 포함하는 것인 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 SEQ ID NO: 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체를 포함하는 것인 조성물.
- 제15항에 있어서, 상기 항체는 또한 무손상 빈창자캄필로박터에 결합할 수 있는 것인 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 결합할 수 있고, 무손상 빈창자캄필로박터 세포와 결합할 수 있는 항체를 포함하는 것인 조성물.
- 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 폴리클로날인 것인 조성물.
- 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 모노클로날인 것인 조성물.
- 제15항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체인 것인 조성물.
- 제15항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 항체의 절편에 결합하는 것인 조성물.
- 제15항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 해리 정수 또는 Kd 값이 5 X 10-6 M 이하, 이를테면 10-6 M 이하, 예를 들어 5 X 10-7 M 이하, 이를테면 10-7 M 이하, 예를 들어 5 X 10-8 M 이하, 이를테면 10-8 M 이하, 예를 들어 5 X 10-9 M 이하, 이를테면 10-9 M 이하, 예를 들어 5 X 10-10 M 이하, 이를테면 10-10 M 이하, 예를 들어 5 X 10-11 M 이하, 이를테면 10-11 M 이하, 예를 들어 5 X 10-12 M 이하, 이를테면 10-12 M 이하, 예를 들어 5 X 10-13 M 이하, 이를테면 10-13 M 이하, 예를 들어 5 X 10-14 M 이하, 이를테면 10-14 M 이하, 예를 들어 5 X 10-15 M 이하, 또는 이를테면 10-15 M 이하인 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 전신 투여 (systemic administration)에 적합한 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 정맥 내, 근육 내 또는 피하 투여에 적합한 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 경구 투여에 적합한 것인 조성물.
- 전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 비강 내 투여에 적합한 것인 조성물.
- SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 결합할 수 있는 항체.
- 제28항에 있어서, 상기 항체는 또한 무손상 빈창자캄필로박터 세포와 결합할 수 있는 것인 항체.
- SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 결합할 수 있고, 무손상 빈창자캄필로박터 세포와 결합할 수 있는 항체
- 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제18항 내지 제22항 중 어느 한 항의 특성을 포함하는 것인 항체.
- SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 함유한 폴리뉴클레오티드로 감염되거나 형질 전환된 재조합 세포.
- 제32항에 있어서, 상기 재조합 세포는 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli) 또는 살모넬라 (Salmonella) 세포인 것인 재조합 세포.
- 제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 재조합 세포는 독성이 약화되거나 발병력이 감소 된 세포인 것인 재조합 세포.
- SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드로 감염되거나 형질 전환된, 독성 약화 또는 발병력이 감소 된 재조합 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli) 세포 또는 독성 약화 또는 발병력이 감소 된 재조합 살모넬라 (Salmonella) 세포.
- - SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터,- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포의 캄필로박터 감염, 바람직하게는 빈창자캄필로박터 감염에 대한 동물 또는 인간의 면역화를 위한 약물 제제로서의 용도.
- 제36항에 있어서, 면역화는 방어 면역 반응을 유도하는 것인 용도.
- 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 약제는 정맥 내 주사, 근육 내 주사, 피하 주사, 경구 주사 또는 비강 내 주사에 적합한 약제인 것인 용도.
- SEQ ID NO : 1-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체, 바람직하게는 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에서 정의된 항체의, 동물 또는 인간 중에서 캄필로박터 감염, 바람직하게는 빈창자캄필로박터 감염을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조용 용도.
- a. - SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 제공하는 단계,b. 상기 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함하는 조성물을 상기 동물에 도입하는 단계,c. 상기 동물 중에서 항체를 배양하는 단계, 및d. 상기 항체를 분리하고, 필요한 경우 항체를 정제하는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물 중에서 SEQ ID NO : 1-36로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 대한 항체를 배양하는 방법.
- a. - SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 서열을 포함하거나, 상기 서열의 변이체 또는 항원성 절편을 포함하는 폴리펩티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드,- 상기 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 발현 벡터, 또는- 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 제공하는 단계,b. 상기 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 바이러스 또는 재조합 세포를 포함하는 조성물을 상기 동물에 도입하는 단계,c. 상기 동물 중에서 항체를 배양하는 단계,d. 상기 항체를 분리하고, 필요한 경우 항체를 정제하는 단계, 및e. 무손상 빈창자캄필로박터 세포에 결합할 수 있는 항체를 선별하는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 동물 중에서 SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드에 대한 항체, 또한 무손상 캄필로박터에 결합할 수 있는 항체를 배양하는 방법.
- 제40항 또는 제41항에 있어서, 상기 동물은 인간 항체를 생산할 수 있는 형질 전환 동물인 것인 방법.
- a. SEQ : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 특이적으로 결합할 수 있는 지시 모이어티를 시료에 접촉시키는 단계,b. 상기 지시 모이어티에 의하여 신호가 생성되는지 여부를 측정하고, 이로 인하여 상기 시료가 빈창자캄필로박터 또는 이의 부분을 함유하는지 측정하는 단계로 이루어진, 시료 중의 빈창자캄필로박터 또는 이의 부분을 검출하는 방법.
- 제43항에 있어서, 상기 지시 모이어티는 또한 무손상 빈창자캄필로박터 세포에 결합할 수 있는 것인 방법.
- a. SEQ : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드와 특이적으로 결합할 수 있는, 또한, 무손상 빈창자캄필로박터에 특이적으로 결합할 수 있는 지시 모이어티를 상기 시료에 접촉시키는 단계,b. 상기 지시 모이어티에 의하여 신호가 생성되는지 여부를 측정하고, 이로 인하여 상기 시료가 빈창자캄필로박터를 함유하는지 여부를 검출하는 단계로 이루어진 빈창자캄필로박터를 검출하는 방법.
- 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지시 모이어티는 빈창자캄필로박터 세포의 외막을 통과하지 않는 것인 방법.
- 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지시 모이어티는 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에서 정의된 항체와 같은 항체를 포함하거나, 함유하는 것인 방법.
- a. SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드 또는 이의 절편을 제공하는 단계,b. 상기 폴리펩티드 또는 절편이 잠정 결합 파트너에 접촉하는 단계, 및c. 상기 잠정 결합 파트너가 상기 폴리펩티드 또는 절편에 결합할 수 있는지를 측정하는 단계를 포함하는, SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드 또는 이의 절편의 결합 파트너를 동정하기 위한 방법.
- a. SEQ ID NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 수준을 감소시키는 민감성 세포를 제공하는 단계, 및b. 예컨대 증식 분석법에 의하여, 잠정 항박테리아 화합물에 대한 상기 세포 의 민감성을 측정하는 단계로 이루어진, 빈창자캄필로박터의 항박테리아 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법.
- a. SEQ ID NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 수준을 감소시키는 민감성 세포를 제공하는 단계, 및b. 예컨대 증식 분석법에 의하여, 야생형 빈창자캄필로박터 세포의 외막을 통과할 수 없는 잠정 항박테리아 화합물에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계로 이루어진, 빈창자캄필로박터에 대한 항박테리아 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법.
- a. SEQ NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 농도가 다른 두 개의 세포를 제공하는 단계,b. 예를 들어 증식 분석법에 의하여, 잠정 억제제에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계, 및c. 상기 잠정 억제제의 존재에 의하여 두 개의 세포가 다르게 영향을 받는지 여부를 측정하는 단계로 이루어진, SEQ NO : 1-36으로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 억제제를 동정하는 방법.
- 제51항에 있어서, 상기 잠정 억제제는 빈창자캄필로박터의 외막을 통과하지 않는 것인 방법.
- a. SEQ NO : 37-51로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 농도가 다른 두 개의 세포를 제공하는 단계,b. 예를 들어 증식 분석법에 의하여, 빈창자캄필로박터 세포의 외막을 통과할 수 없는 잠정 억제제에 대한 상기 세포의 민감성을 측정하는 단계, 및c. 상기 잠정 억제제의 존재에 의하여 두 개의 세포가 다르게 영향을 받는지 여부를 측정하는 단계로 이루어진, SEQ ID NO : 37-51의 폴리펩티드로 이루어진 군 중에서 선택되는 폴리펩티드의 억제제를 동정하는 방법.
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