KR20060107897A - 이식용 연골 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 사람의 연골세포를, 세균·바이러스에 의한 감염의 우려가 없으며, 게다가, 정상적인 연골세포 또는 그 세포 덩어리를 함유하는 이식용 연골 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은, 연골세포의 세포배양에 의해 형성되는 연골세포 조직 그 자체를 함유하는 이식용 연골 조성물이며, 또한, 연골세포의 세포배양에 의해 형성되는 연골세포 조직을 또한 조직배양하여 얻어지는 연골 블록을 함유하는 이식용 연골 조성물이다.
연골세포, 세포배양, 이식용 연골 조성물
Description
도 1은 배양하의 연골세포가 증식해서, 밀집적으로 되어, 연골세포 조직을 형성한 상태를 나타낸다.
도 2는 배양 후의 연골세포 조직에 대하여 헤마톡실린 에오신(hematoxylin-eosin)(H.E) 염색을 행한 결과를 나타낸다. 세포가 중층화(重層化)해서 세포끼리가 기질을 통하여 결합하고 있는 것이 나타나 있다.
도 3은 배양 후의 연골세포 조직의 분자마커인 II형 콜라겐에 대하여 면역 염색을 행한 결과를 나타낸다. 세포외 기질에 염색을 나타내며, 당해 세포외 기질이 연골에 특이적인 매트릭스를 형성하고 있는 것이 나타나 있다.
도 4는 배지 중의 콘드로카르신(chondrocalcin) 및 알칼리포스파타아제를 측정한 결과, 이들이 생성되고 있는 것을 경시적으로 나타낸다.
도 5는 이식 6개월 후의 이식 부위에서 채취한 연골세포 조직의 분자마커인 II형 콜라겐에 대하여 면역 염색을 행한 결과를 나타낸다.
도 6은 이식 6개월 후의 이식 부위에서 채취한 연골세포 조직에 대하여 톨루이딘·블루(toluidine blue) 염색을 행한 결과를 나타낸다.
도 7은 본 방법을 사용해서, 복부 피하에 이식 후 약 6개월 후, 어른의 귓바퀴가 제작 가능한 큰 연골이 얻어진 것을 나타낸다.
도 8a는 형성된 연골의 크기를 메저(measure)와 함께 제시하며, 귓바퀴의 모양을 형성시키는 데 충분한 것임을 나타낸다.
도 8b는 형성된 연골을 구부리면 탄력성이 있는 것을 나타낸다.
도 9는 배양 연골에 의해 형성된 이식용 연골 조성물에 의해 귓바퀴형의 프레임을 제작할 수 있었던 것을 나타낸다.
본 발명은 외상, 선천기형, 이물 제거부, 나이듬에 따른 변성 등에 의해 발생한 연골이나 뼈의 결손부의 수복(修復)에 사용하기에 적합한 이식용 연골 조성물에 관한 것이다.
연골세포 단독이 아니라 연골 조직이 다른 조직과 다른 것은 풍부한 섬유나 기질을 형성하고 있는 것이다. In vitro에서의 연골세포의 배양에 있어서도, 배양 과정에서는 연골세포 자신이 콜라겐, 아그레칸(aggrecan), 프로테오글리칸(proteoglycan), 히알루론산, 콘드로이틴황산 등을 생성하여, 소위, 연골 조직을 형성하는 것이 알려져 있다(코야노 야스히코, 뼈와 연골의 바이올로지:기초에서 임상에의 전개, 143-149페이지, 카네하라 출판·도쿄(2002), Mok SS, Masuda K, Hauselmann HJ, et al:Aggrecan synthesized by mature bovine chondrocytes suspended in alginate. Indentification of two distinct metabolic matrix pools, J Biol Chem 269:33021-33027(1994)). 종래, 배양 연골세포를 이식하는 섬 유나 기질에서 단리(單離)된 연골세포 그 자체를 이식에 사용하고 있었다(M. Brittberg, New England Journal of Medicine, Vol.331, No.14, p.889-895(1994), 특히 890페이지, 도 1 참조). 그러나, 이 방법에서는 상술한 연골세포를 포함하는 조직을 분해하게 되며, 단리되는 연골세포는 수로 해서 기껏해야 2.6∼5×106개, 용량으로 해서 50∼100μl정도의 양밖에 얻어지지 않아, 이식에는 불충분하다(상기 인용문헌 참조).
또한, 이식 전의 세포 계대배양에 있어서 트립신(trypsin) 등의 효소 처리를 행하여 세포를 단리하는 조작을 반복하면, 이식 후의 연골은 섬유아세포로 탈분화(脫分化)가 촉진되어, 목적으로 하는 연골의 형성이 저해된다(코야노 야스히코·뼈와 연골의 바이올로지:기초에서 임상에의 전개, 143-149·카네하라 출판·도쿄(2002)).
종래법으로서, 트립신 처리해서 단리한 배양 연골세포를, 폴리글리콜이나 폴리젖산, 아르긴산 등의 인공 또는 천연의 ＋흡수성 폴리머의 주형 scaffold(발판)에 파종함으로써 다시 연골세포에 세포외 매트릭스를 생성시키고, 그 후, 생체(동물)에 이식하여, 연골을 형성시킨다고 하는 방법도 행해져 왔다(Vacanti CA, Langer R, Schloo B, Sythetic biodegradable polymers seeded with chondrocytes provide a template for new cartilage formation. Plast. Reconstr. Surg. 88:753-759(1991), Cao YL, Vacanti JP, Paige KT, Upton J, Vacanti CA, Transplantation of chondrocytes utilizing a polymer-cell construct to produce tissue-engineered cartilage in he shape of a human ear. Plast. Reconstr. Surg. 100:297-302(1997)). 그러나, 이 방법은, 사용된 인공의 폴리머가 생체에 이식 후에 흡수될 때에 염증이 발생하고, 그로 인해 연골세포 자체가 손상되어 흡수된다고 하는 사태가 일어난다. 이 때문에, 이식 후에 환부에 있어서 충분한 연골을 형성시킬 수 없었다.
또한, 종래법에서는, 연골세포의 세포배양에 즈음해서, FBS(소 태아 혈청)를 사용하거나, 혹은, 소 유래의 콜라겐을 발판에 사용하는 등, 자기 이외의 다양한 생체 유래의 성분을 사용하고 있다(아다치 노부오 et al, 의학의 발자취, Vol.200, No.3, 258-259(2002), 아텔로콜라겐(atelocollagen) 겔을 사용, 코야노 야스히코·뼈와 연골의 바이올로지:기초에서 임상에의 전개, 143-149·카네하라 출판·도쿄(2002)/콜라겐 겔, 아가로스(agarose), 알기네이트 비즈 사용/Vacanti CA, Langer R, Schloo B, Sythetic biodegradable polymers seeded with chondrocytes provide a template for new cartilage formation. Plast. Reconstr. Surg, 88:753-759(1991), Cao YL, Vacanti JP, Paige KT, Upton J, Vacanti CA(1997), Transplantation of chondrocytes utilizing a polymer-cell construct to produce tissue-engineered cartilage in he shape of a human ear. Plast. Reconstr. Surg. 100:297-302). 이러한 외래물의 사용은 다양한 병원 바이러스나 감염성 프리온(prion) 등이 이식 연골에 혼입하여, 환자에게 감염될 가능성을 갖는다는 결점이 있다.
[비특허문헌 1] Mok SS, Masuda K, Hauselmann HJ, et al:Aggrecan synthesized by mature bovine chondrocytes suspended in alginate. Indentification of two distinct metabolic matrix pools, J Biol Chem 269:33021-33027(1994)
[비특허문헌 2] 코야노 야스히코·뼈와 연골의 바이올로지:기초에서 임상에의 전개, 143-149·카네하라 출판·도쿄(2002)
[비특허문헌 3] Vacanti CA, Langer R, Schloo B, Sythetic biodegradable polymers seeded with chondrocytes provide a template for new cartilage formation. Plast. Reconstr. Surg. 88:753-759(1991)
[비특허문헌 4] Cao YL, Vacanti JP, Paige KT, Upton J, Vacanti CA, Transplantation of chondrocytes utilizing a polymer-cell construct to produce tissue-engineered cartilage in he shape of a human ear, Plast. Reconstr. Surg. 100:297-302(1997)
[비특허문헌 5] 아다치 노부오 et al, 의학의 발자취, Vol.200, No.3, 258-259(2002)
본 발명은, 상기한 종래법의 결함을 해결한 이식용 연골 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
즉, 본 발명자는, 종래법의 결함을 해결하기 위한 이식용 연골에 대해서 많은 연구를 행하여, 연골세포를 in vitro에서 세포배양해서 얻어지는 연골세포를 포 함하는 조직을 그대로 이식할 수 있는 것을 발견하고, 본 발명을 이루기에 이르렀다.
이렇게 해서, 본 발명은, (1)연골세포의 세포배양에 의해 형성되는 연골세포 조직 그 자체를 함유하는 이식용 연골 조성물이며, (2)연골세포의 세포배양에 의해 얻어지는 연골세포 조직을 또한 조직배양하여 얻어지는 연골 블록을 함유하는 이식용 연골 조성물이다.
또한, 본 발명은, (3)조직배양을 in vitro에서 행함으로써 얻어지는 연골 블록을 함유하는 이식용 연골 조성물이며, 혹은 (4)조직배양을 in vivo에서 행함으로써 얻어지는 연골 블록을 함유하는 이식용 연골 조성물이다.
본 발명에 관한 이식용 연골 조성물은, 두개안면, 귓바퀴, 코, 관절 등의 외상, 선천기형, 이물 제거부, 나이듬에 따른 변성 등에 의해 발생한 연골이나 뼈의 결손부의 수복에 적용할 수 있다.
연골세포는, in vitro에 있어서의 세포배양에 있어서, 예를 들면, 섬유세포, 콜라겐 섬유, 아그레칸, 프로테오글리칸, 히알루론산, 콘드로이틴황산, 그 외의 기질로 둘러싸인 연골세포 조직을 형성하기 때문에, 효소 처리를 행하지 않고 배양기로부터 물리적으로 벗겨내어 채취하는 것이 가능하다. 이렇게 해서 얻어지는 연골세포 및 연골세포 자신이 생성한 연골 기질로 이루어지는 연골세포 조직 그 자체를 이식용 연골 조성물로서 사용할 수 있다. 연골세포 조직 그 자체를 포함하는 이식용 연골 조성물을 이식함으로써 이식 후에 일반적으로 일어나는 연골세포로부터 섬유아세포로의 탈분화가 일어나지 않고, 이식 후에 조기에 연골 형성이 보여지며, 또한 간세포를 포함하기 때문에 종래에 없는 장기의 이식된 연골 조직의 유지를 기대할 수 있는 것이 판명되었다. 본 발명에 따르면, 환자로부터 채취되고, 트립신 처리 등을 거쳐서 단리된 연골세포의 약 1∼5×103∼104개를 세포배양하고, 연골세포와 연골세포가 생성하는 기질을 합쳐서 채취함으로써, 약 2∼6×107개의 세포수를 포함하는 연골세포 조직이 약 5∼10ml의 겔형상의 용액으로서 얻어지며, 종래의 이식량의 문제가 해결되어, 이식에 필요한 양이 얻어진다.
또한, 연골세포 조직에 세포의 발판 또는 담체(scaffold)로서 피브린(fibrin)을 첨가하여, 생체에 이식하면, 종래 얻어지지 않았던 크기의 연골의 블록이 형성되는 것이 판명되었다. 이 경우에 있어서, 자가 피브린을 사용하는 것이 예측할 수 없는 부작용을 회피하는 의미에서 바람직하다.
또한, 지금까지, 배양 연골세포 이식방법은, 목적으로 하는 이식부(환부)에 연골세포를 직접 이식하는 방법이 행해져 왔었다. 이 방법에서는 연골세포가 이식 후에 1∼3개월 이상 경과한 후 성숙한 연골을 형성하기 때문에, 희망하는 모양이나 크기의 연골이 얻어지지 않았다. 그래서, 미리, 세포배양에서 얻어진 연골세포 조직을 또한 조직배양하여, 연골 블록을 형성시키고, 연골의 모양, 크기를 정형한 후, 목적 부위(환부)에 이식하면, 지금까지 불가능하였던 이식 후의 모양을 제어할 수 있으며, 예를 들면, 귓바퀴의 모양을 원하는 크기 및 모양으로 형성시키는 것이 가능하게 되었다.
세포배양에서 얻어진 연골세포 조직의 조직배양은, 상기 조직의 증식에 적합 한 조직배양액에서 in vitro 배양하거나, 혹은, 생체의 다른 부위(상처가 눈에 띄지 않는 복부 등)에 연골세포 조직을 이식해서 연골 블록을 형성(in vivo배양)시킴으로써 행할 수 있다.
안전한 이식용 연골 조성물은, 사람 유래이며 또한 자가 조직으로 이루어지는 것이 바람직하다. 또한, 사람에게 이식하는 것을 목적으로 한 연골세포의 제법에 있어서는 동물 유래의 이종단백이나 인공물을 사용하지 않는 것이 바람직하다. 그 이유는 이식된 동물 유래의 이종단백이나 인공물이 생체측의 면역반응 등을 자극해서 염증반응을 야기시켜, 그 결과 이식된 세포까지가 거절반응에 의해 생체로부터 제거되어 버리는 일이 일어나기 때문이다. 또한, 외래물에 의한 다양한 병원 바이러스나 사람으로의 전염성이 있는 프리온 등에 감염될 가능성이 따라다닌다.
그래서, 본 발명에서는, 거절반응을 회피함과 아울러, 다양한 생체 유래의 외래물에 의한 병원 바이러스나 사람으로의 전염성이 있는 프리온 등에 감염될 가능성을 없애기 위해서, 자가 연골세포, 자가 세포외 매트릭스, 자가 혈청, 자가 피브린(자가의 세포의 발판:scaffold)을 사용하는 것이 추장(推奬)된다. 한편, 자가 피브린을 채취할 수 없는 경우는 의료용으로서 승인되어 시판되고 있는 피브린 제제의 사용도 가능하다. 이후, 피브린 이외에 그 외의 생체 재료, 인공물의 안전성이 확인된 것이라면 담체로서 사용하는 것이 가능하다.
<발명의 실시형태>
1.세포배양의 개요
연골세포의 세포배양에 있어서는, 배지에 FCS(소 태아 혈청)를 사용하지 않 고, 사람 혈청, 바람직하게는 사람 자가 혈청을 사용한다. 사람 혈청은 자가 혈액을 연골 조직 채취와 동시에 채혈하고, 원심분리해서 혈구 성분을 제거하며, 혈청(자가의 증식 인자 함유)과 자가 피브린으로 분리한다. 자가 혈청과 자가 피브린은 각각 동결시키고, 적시에 해동해서 사용하면 된다. 연골세포 배양 배지에는 DME배지에 10%의 사람 혈청, 바람직하게는 사람 자가 혈청을 더해서 배양을 행한다. 사람 피브린, 바람직하게는 사람 자가 피브린을 보존하는 경우는, 바람직하게는, －20℃∼196℃ 동결 보존한다. 연골세포를 배양기에서 배양하고, 초대배양 개시 후, 1-2 계대배양하며, 얻어지는 약 5×107∼1×108/1ml의 양의 연골세포 조직을 이식에 제공한다.
또한, 상술의 동결해 둔 피브린 덩어리를 해동하고, 그 안에, 바람직하게는, 약 5×107∼1×108/1ml의 양의 연골세포 조직을 더하여, 이식에 제공하는 것이 바람직하다. 연골세포는 피브린 안에서 안정되며, 덩어리로서 집합한다. 세균, 마이코플라스마(mycoplasma) 등의 감염에 대해서는 1주간마다 배지의 세균·마이코플라스마 배양을 행하고, 음성인 것을 확인한다. 이 세포배양에 있어서, 일련의 배양 과정에서 자가 조직을 사용하면, 자가 외로부터의 병원 세균 및 예측할 수 없는 바이러스·프리온 감염을 방지할 수 있다.
본 발명에 의해 얻어지는 이식용 연골 조성물은 귓바퀴 연골, 비중격 연골 늑연골, 관절 연골, 추간 연골, 기관 연골, 후두개를 포함하는 사람의 모든 연골 조직의 이식·형성에 사용할 수 있다.
2.연골세포의 단리
약 1×1㎝의 귓바퀴 연골편, 늑연골편 또는 관절 연골편을 채취하고, 연골편을 페니실린(penicillin) G(800u/ml) 및 카나마이신(kanamycin)(1㎎/ml) 및 반 기슨(van Gieson)(2.5ug/ml)으로 제균(除菌)하며, 다음으로 메스로 잘게 썬 후, 바람직하게는 0.3%의 농도의 콜라게나아제(collagenase) typeII(Worthington Biochemical)를 포함하는 F-12배지 중에서, 4℃에서 하룻밤 정치(靜置)하였다. 다음날 37℃에서 2-4시간 진탕한 후, 나일론 메쉬로 여과하고, 원심해서 연골세포를 단리하였다.
3.연골세포의 세포배양용 배지
사람 연골세포의 세포배양은, 연골세포의 배양에 적합한 공지의 배지를 사용할 수 있다. 또한, 배지에는 히드로코르티손(hydrocortisone)(HC), 사람 bFGF, 사람 IGF-1 등의 증식 인자를 적절히 첨가한다(Cuevas et al, Biochem. Biophy. Res. Commun. Vol.156, p.611-618(1988);Froger-Gaillard et al, Endocrinol. Vol.124, p.2365-2372(1989)). 그와 같은 배지의 예로서, DME(H) 배지에, 자가 혈청(바람직하게는 10%정도)을 첨가하고, 사람·재조합(recombinant) bFGF(바람직하게는 100ng/ml이하:카켄세이야쿠), Hydrocortisone(바람직하게는 100ng/ml이하), 사람·재조합 IGF-1(바람직하게는 50ng/ml이하:GIBCO)을 첨가한 배지를 예시할 수 있다.
4.초대배양
상기 세포 분획을 상기 배지를 사용해서 바닥 면적 75㎠의 플라스크에 세포 를, 바람직하게는 1×104∼5개의 밀도로 파종하였다. 이 플라스크를 CO2 Incubator 안에서 CO2 농도를 10%로 설정하여 배양하였다. 배지는 주 2회 교환하였다. 그 결과, 연골세포는 약 10∼14일간의 배양에 의해 단층으로 밀집적으로 되었다. 얻어진 세포를 다음의 계대배양에 사용하였다.
5.계대배양
계대배양은, 초대배양에 의해 얻어진 세포를, 바람직하게는 약 1×106개의 밀도로 바닥 면적 175㎠ 플라스크에 파종해서, 초대배양과 동일한 조건으로 행하였다. 7일간의 배양에 의해 단층으로 밀집적으로 되고(도 1), 얻어진 세포를 다음의 계대배양에 사용하였다. 그 결과, 4계대로 세포수가 초대의 1000배 정도 증가하였다. 계대배양에 있어서 얻어진 연골세포를 바람직하게는 약 1×106개/㎠의 밀도로, 세포배양을 더 실시하였다. 바람직하게는 약 3∼4주간 배양 후, 연골세포 조직이 형성되었다.
6.세포배양에 있어서의 연골세포 조직의 형성의 확인
연골세포 조직이 형성된 것은, (1)이 연골세포 덩어리에 대해서 헤마톡실린 에오신(hematoxylin-eosin)(H.E) 염색한 바, 세포가 중층화(重層化)해서 세포끼리가 기질을 통하여 결합하고 있는 것(도 2), 또한, (2)연골세포 조직의 분자마커인 II형 콜라겐에 대하여 면역 염색을 행한 바, 세포외 기질에 염색을 나타내고, 당해 세포외 기질이 연골에 특이적인 콜라겐을 형성하고 있는 것(도 3), (3)배지 중의 콘드로카르신(chondrocalcin)(II형 콜라겐으로부터 절단·유리(遊離)된 C말단 펩티드)을 측정한 결과, 콘드로카르신이 생성되어 있었던(도 4) 것 등에 의해 확인되었다. 이들 사실은 배지 중에 연골세포가 생성한 II형 콜라겐이 분해·방출되어, 연골세포 조직이 형성되어 있는 것을 나타낸다. 또한, 배지 중의 알칼리포스파타아제(ALP)를 측정한 결과, 알칼리포스파타아제가 생성되어 있었다(도 4). 이것은 연골이 분화한 것을 나타내고 있다.
7.연골세포 조직의 이식
우선 계대배양 후 밀집적으로 응집한 연골세포를 포함하는 조직을, 플라스크에서 배지를 제거한 후, 주사통 안 등에 흡인해서 채취하였다. 다음으로 연골세포 조직과 피브린, 바람직하게는 자가 피브린을 혼합한 것을 피하 및 생체의 연골 결손 부위에 이식하였다.
8.연골세포 조직의 조직배양
상기의 세포배양에서 얻어진 연골세포 조직을, 이식 전에, 조직배양하여 더욱 증식시켜서 연골 블록으로 할 수 있다. 조직배양은, in vitro 및 in vivo 중 어떠한 것에 의해서도 행하는 것이 가능하다.
in vitro 조직배양은, 세포배양에 의해 얻어진 연골세포 조직을 인공체액 등 생태환경에 가까운 조건하에서 배양을 행하는 방법이며, 예를 들면, 시판되고 있는, Dulbecco's minimal essential medium(Biological Industries, Beit-Haemek, Israel), 혹은 Dulbecco's modified Eagle's medium에 아스코르빈산(50㎍/ml), 항생물질로서 페니실린, 스트렙토마이신(streptomycin)(100U/ml) 및 혈청, 바람직하 게는 자가 혈청(5%)을 더한 것을 사용할 수 있다. 6구멍 플레이트에 연골세포 조직을 넣고, 5% CO2의 존재하에 37℃에서 배양한다. 통상, 배양액은 2일마다 교환한다. 배양기간은 통상은 3주간이 바람직하지만, 필요에 따라서 연장, 단축해도 된다.
in vivo 배양은, 세포배양에서 얻어진 연골세포 조직에 피브린, 바람직하게는 자가 피브린을 더하고, 생체의 적당한 부위(복부 등 눈에 띄지 않는 곳이 바람직하다)에, 일단 이식하여, 연골 블록을 형성시키는 방법이다. 그 후 한번 체외로 꺼내어 연골의 모양을 정형해서 목적으로 하는 부위에 이식할 수 있다. 이것은 귓바퀴 등의 세밀한 모양을 형성시키는 경우에 우수한 방법이다. 이 이식 6개월 후에, 이식 부위로부터 일부 채취하여 조직학적으로 검토하였다. 이 결과, 헤마톡실린 에오신(hematoxylin-eosin)(H.E) 염색한 바, 세포가 중층화해서 세포끼리가 기질을 통하여 결합하고 있는 것이 나타났다. 또한, 연골 조직의 분자마커인 II형 콜라겐에 대하여 면역 염색을 행한 바, 세포외 기질에 염색을 나타내며, 당해 세포외 기질이 연골에 특이적인 기질인 것이 나타났다(도 5). 또한, 톨루이딘·블루(toluidine blue) 염색으로 메타크로마시아(metachromasia)가 나타나며, 연골의 마커인 아그레칸의 존재가 시사된다(도 6). 이상으로부터, 이식한 연골세포 조직은 정상적인 연골 조직을 형성하고 있는 것이 나타났다.
8.실제의 이식 예
소이증(선천적으로 귀가 없는 소아)의 남아 있는 연골(약 1㎝의 크기)을 채취하여, 상술한 방법으로 연골세포를 세포배양하였다. 얻어진 자가 연골세포 조직 과 자가 피브린을 혼합한 것을 복부 피하에 이식 후 약 6개월 후, 어른의 귓바퀴가 제작 가능한 큰 연골(약 8×4㎝이며 두께 1㎝)이 얻어졌다(도 7), (도 8a, 8b). 형성된 연골의 크기는 귓바퀴의 형체를 형성하기에 충분한 것이었다. 이것을 귓바퀴형으로 정형해서 귓바퀴 결손부에 이식하였다(도 9).
종래 소이증 수술에서는 8∼10세의 소아의 늑연골을 3∼4개 채취할 필요가 있어, 이 때문에, 연골부의 채취부(흉곽)의 변형이나 반흔도 발생하는 등, 기증자의 희생이 컸었다. 본 발명에 따르면, 이러한 희생을 최소한도로 억제할 수 있으며, 또한, 환자의 희망에 따르도록 정형하거나, 혹은 형성시키는 것을 기대할 수 있다.
본 발명의 이식용 연골 조성물을 사용함으로써, 이식 후에 일반적으로 일어나는 연골세포로부터 섬유아세포로의 탈분화(脫分化)가 일어나지 않고, 이식 후에 조기에 연골 형성이 보여진다.
본 발명의 이식용 연골 조성물은, 용이하게 이식에 필요한 양이 얻어지기 때문에, 이식량의 문제가 해결된다.
연골세포의 세포배양에서 얻어진 연골세포 조직을 또한 조직배양하여 형성시킨 연골 블록을, 연골의 모양, 크기를 정형한 후, 목적 부위(환부)에 이식하는 방법에 의해, 이식에 앞서 연골의 정형이 가능하게 되고, 예를 들면, 지금까지 불가능하였던 귓바퀴의 모양을 형성시키는 것이 가능하게 되었다. 또한, 이식에 필요한 양이 보다 용이하게 얻어진다.
본 발명의 이식용 연골 조성물을 사용함으로써, 거절반응을 회피할 수 있음과 아울러, 외래 생체물에 의한 다양한 병원 바이러스나 사람으로의 전염성이 있는 프리온(prion) 등에 의한 감염의 문제를 회피할 수 있다.
Claims (8)
- 연골세포의 세포배양에 의해 형성되는 연골세포 조직 그 자체를 함유하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
- 연골세포의 세포배양에 의해 형성되는 연골세포 조직을 또한 조직배양하여 얻어지는 연골 블록을 함유하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
- 제 2 항에 있어서, 상기 조직배양을 in vitro에 있어서 행하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
- 제 2 항에 있어서, 상기 조직배양을 in vivo에 있어서 행하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포배양에 있어서 혈청을 첨가하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포배양에 있어서 자가 혈청을 첨가하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 피브린(fibrin)을 함유하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 자가 피브린을 함유하는 것을 특징으로 하는 이식용 연골 조성물.
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