KR20060104265A - 인간 암 억제 유전자, 이에 의해 코딩되는 단백질 - Google Patents
인간 암 억제 유전자, 이에 의해 코딩되는 단백질 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 인간 암 억제 유전자, 이에 의해 코딩되는 단백질, 이를 포함하는 발현 벡터 및 이 벡터로 형질전환된 미생물에 관한 것으로, 본 발명의 유전자는 인간 암의 진단, 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
도 1은 서열번호: 3의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP33(a); 서열번호: 7의 H-AP10(b) ; 서열번호: 11의 H-AP5(c); 서열번호: 15의 H-AP2(d); 서열번호: 19의 H-AP8(e); 서열번호: 23의 H-AP7(f); 서열번호: 27의 H-AP11(g); 서열번호: 31의 H-AP3(h); 서열번호: 35의 H-AP4(i); 서열번호: 39의 H-AP8(j); 서열번호: 43의 H-AP33(k); 서열번호: 47의 H-AP35(l); 서열번호: 51의 H-AP3(m); 서열번호: 55의 H-AP12(n); 서열번호: 59의 H-AP12(o); 서열번호: 63의 H-AP7(p); 서열번호: 67의 H-AP8(q); 서열번호: 71의 H-AP10(r); 서열번호: 75의 H-AP16(s); 서열번호: 79의 H-AP2(t);서열번호: 83의 H-AP9(u); 서열번호: 87의 H-AP9(v); 서열번호: 91의; H-AP32(w); 서열번호: 95의 H-AP10(x); 서열번호: 99의 H-AP22(y); 서열번호: 103의 H-AP12(z); 서열번호: 107의 H-AP10(α); 서열번호: 111의 H-AP12(β) 또는 서열번호: 115의 H-AP4(γ)와 서열번호: 4;서열번호 8;서열번호 12; 서열번호 16; 서열번호 20; 서열번호 24 ;서열번호 28;서열번호 32; 서열번호 36; 서열번호 40; 서열번호: 44;서열번호 48;서열번호 52; 서열번호 56; 서열번호 60; 서열번호: 64;서열번호 68;서열번호 72; 서열번호 76; 서열번호 80; 서열번호: 84;서열번호 88;서열번호 92; 서열번호 96; 서열번호 100; 서열번호: 104;서열번호 108; 서열번호 112 또 는 서열번호 116의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과를 보여주는 겔 사진이다.
도 2는 본 발명의 GIG8 유전자 산물(a); GIG10 유전자 산물(b); GIG13 유전자 산물(c); GIG 15 유전자 산물(d); GIG 16 유전자 산물(e); GIG24 유전자 산물(f); GIG26 유전자 산물(g); GIG29 유전자 산물(h); GIG30 유전자 산물(i); GIG32 유전자 산물(j); GIG33 유전자 산물(k); GIG 34 유전자 산물(l); GIG 35 유전자 산물(m); GIG38 유전자 산물(n); GIG39 유전자 산물(o); GIG40 유전자 산물(p); GIG42 유전자 산물(q); GIG43 유전자 산물(r); GIG46 유전자 산물(s); PIG33 유전자 산물(t); PIG 35 유전자 산물(u); PIG 36 유전자 산물(v); MIG20 유전자 산물(w); PIG49 유전자 산물(x); PIG51 유전자 산물(y); MIG12 유전자 산물(z);PIG37(α);GIG44(β);GIG31(γ)의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다.
도 3은 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG8 유전자(a); GIG 10 유전자(b); GIG 13 유전자(c); GIG30 유전자(i); GIG 32 유전자(j); GIG 33 유전자(k); GIG34 유전자(l); GIG 35 유전자(m); GIG 38 유전자(n); GIG 39 유전자(o); PIG 49 유전자(x); PIG51 유전자 (y);GIG44 유전자(β);GIG31 유전자(γ)의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고,
도 3(d)는 정상 골수 조직, 백혈병환자 골수조직, 및 K562 백혈병 세포주에서 본 발명의 GIG15 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고;
정상 간 조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 GIG16 유전자 유전자(e); GIG24 유전자(f); GIG26 유전자(g); GIG29 유전자(h); GIG40 유전자(p); GIG42 유전자(q); PIG33 유전자(t); PIG35 유전자(u); PIG36 유전자(v); PIG37 유전자(α)의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고,
정상 자궁경부 조직, 원발성 자궁암 조직 및 자궁암 세포주에서 GIG46 유전자(s); MIG20 유전자(w)차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며,
(z)는 정상 폐 조직, 원발성 폐암 조직, 폐암 전이조직 및 폐암 세포주에서 MIG12유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3의 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다.
도 4는 여러 정상 조직에서 GIG 8 유전자(a); GIG 10 유전자(b); GIG 13 유전자(c); GIG 15 유전자(d); GIG16 유전자(e); GIG24 유전자(f); GIG26 유전자(g); GIG 29 유전자(h); GIG 30 유전자(i); GIG 32 유전자(j); GIG 33 유전자(k); GIG34 유전자(l); GIG35 유전자(m); GIG38 유전자(n); GIG 39 유전자(o); GIG 40 유전자(p); GIG 42 유전자(q); GIG 43 유전자(r); GIG46유전자(s); PIG33 유전자(t); PIG35 유전자(u); PIG 36 유전자(v); MIG20 유전자 (w); PIG49 유전자(x); PIG 51 유전자(y); MIG12 유전자 (z); PIG37 유전자(α);GIG44 유전자(β);GIG31 유전자(γ)의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며, 도 4 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다.
도 5는 여러 암세포주들에서 GIG8 유전자(a); GIG 10 유전자(b); GIG 13 유전자(c); GIG 15 유전자(d); GIG16 (e); GIG 24 유전자(f); GIG 26 유전자(g); GIG 29 유전자(h); GIG 30 유전자(i); GIG 32 유전자(j); GIG 33 유전자(k); GIG34 (l); GIG 35 유전자(m); GIG 38 유전자(n); GIG 39 유전자(o) ; GIG 40 유전자(p); GIG 42 유전자(q); GIG 43 유전자(r); GIG46 유전자(s); PIG33 유전자(t); PIG34 유전자(u); MIG20 유전자 (w); PIG49 유전자(x); PIG 51 유전자(y); MIG12 유전자 (z); PIG37 유전자(α);GIG44 유전자(β);GIG31 유전자(γ)의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다.
도6은 야생형 MCF-7 세포, GIG8 유전자(a); GIG 10 유전자(b); GIG 13 유전자(c); GIG30 유전자(i); GIG 32 유전자(j); GIG 33 유전자(k); GIG34 유전자(l); GIG 35 유전자(m); GIG 38 유전자(n);GIG 39 유전자(o); PIG 49 유전자(x);PIG 33 유전자(y);GIG44 유전자(β);GIG31 유전자(γ)로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 MCF-7 세포의 성장 곡선이며,
(d)는 야생형 K562세포주 세포, GIG 15 유전자 형질감염된 K562 백혈병 세포 및 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 K562 세포의 성장 곡선이고,
야생형 HepG2 간암세포주, GIG 16 유전자(e); GIG 24 유전자(f); GIG 26 유전자(g); GIG 29 유전자(h); GIG 40 유전자(p); GIG 42 유전자(q); GIG 43 유전자(r); PIG33 유전자(t); PIG35 유전자(u); PIG36 유전자(v); PIG37 유전자(α)로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 HepG2 세포의 성장 곡선이며
야생형 HeLa 세포, GIG46 유전자(s); MIG20 유전자 (w)로 형질감염된 HeLa 자궁암 세포 및 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 HeLa 세포의 성장 곡선이고,
(z)는 야생형 A549 폐암세포주, MIG12 유전자로 형질감염된 A549 폐암 세포 및 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 A549 세포의 성장 곡선이다.
본 발명은 인간 암 억제 유전자, 이에 의해 코딩되는 단백질, 이를 포함하는 발현 벡터 및 이 벡터로 형질전환된 세포에 관한 것이다.
암 억제 유전자(tumor suppressor gene) 산물은 정상 세포로부터 암 세포로의 형질전환을 억제하며, 이 기능이 상실되면 세포는 악성 형질전환에 이르게 된다(Klein, G., FASEB J., 7, 821-825 (1993)). 암세포가 암을 형성하기 위해서는 암 억제 유전자의 정상 카피수 기능이 상실되어야 한다. p53 암 억제 유전자의 코딩 서열내 변형이 인간 암에서 가장 일반적인 유전적 변화로 밝혀졌다(Bishop, J.M., Cell, 64, 235-248 (1991); 및 Weinberg, R.A., Science, 254, 1138-1146 (1991)).
그러나 유방암에서 보고된 p53 변이는 30%의 범위에 불과하여(Keen, J.C. & Davidson, N. E., Cancer, 97, 825-833 (2003)) 및 Borresen-Dale, A-L., Human Mutation, 21, 292-300 (2003)) 유방암 조직의 일부만이 이러한 p53 변이를 보이는 것으로 생각된다. 또 백혈병에서 보고된 p53 변이는 20% 이하의 범위에 불과하여(Boyapati, A., et al., Acta Haematol., 111(1-2), 100-106 (2004)) 백혈병조직의 일부만이 마찬가지로 이러한 p53 변이를 보이는 것으로 생각된다.
또 간암의 경우에서 특히 아플라톡신 B1 (Aflatoxin B1)에 노출되거나 B 형 간염에 감염되는 빈도가 높은 지역에서 p53 변이는 무려 50% 이상에 이르며 주로 변이는 codon 249 에서 오인변이 (missense mutation)가 특징이다 (Montesano, R. et al., J. Natl. Cancer Inst., 89, 1844-1851 (1997); Szymanska, K. & Hainaut, P. Acta Biochimica Polonica, 50, 231-238 (2003)). 그러나 미국이나 서부 유럽에서의 간암에서 p53 변이는 30% 정도에 불과하며 변이가 자주 일어나는 핫 스폿 (hot spot)도 없다 (Szymanska, K. & Hainaut, P. Acta Biochimica Polonica, 50, 231-238 (2003)).
한편 자궁경부암에서 보고된 p53 변이는 2 % 내지 11 %의 범위에 불과하여(Crook, T. et al., Lancet, 339, 1070-1073 (1992); 및 Busby-Earle, R.M.C. et al., Br. j. Cancer, 69, 732-737 (1994)), 자궁경부암 조직의 일부만이 이러한 p53 변이를 보이는 것으로 생각된다.
또한 폐암에서 비소세포성 폐암 (non-small-cell lung cancer)의 경우 약 50%에서 소세포성 폐암 (small-cell lung cancer)의 경우 70%까지 p53 종양억제 유전자의 변이가 보고되고 있다 (Takahashi, T. et al., Science, 246, 491-494 1989; Bodner, S.M. et al., Oncogene, 7, 743-749 (1992); Mao, L. Lung Cancer, 34, S27-S34 (2001)). 폐암의 발생과 병의 진행에는 흡연이 가장 중요하게 작용하며 p53외에도 여러가지 다른 종양억제 유전자들과 암유전자들이 동시에 관계하고 있다 (Osada, H. & Takahashi, T. Oncogene, 21, 7421-7434 (2002)).
이에 본 발명자들은, 정상 유방 조직과 유방암 사이, 정상 간 조직과 간암 사이, 정상 골수 조직과 백혈병환자 골수조직, 정상 자궁경부 조직과 자궁경부암 ,정상 폐 조직과 폐암 사이에 차별적으로 발현되는 유전자를 보다 효율적으로 나타 내는 mRNA 감별 전개법(mRNA differential display(DD) method) (Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 (1992); 및 Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 (1993))을 사용하여, 정상 유방조직, 정상 간 조직, 정상 자궁경부 조직,정상 폐 조직 등에서 새로운 암 억제 유전자를 분리하고자 예의 연구하였다.
본 발명의 목적은 신규한 인간 암 억제 유전자를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 유전자에 의해 코딩되는 암 억제 단백질을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 유전자를 포함하는 발현 벡터를 제공하는 데 있다.
상기 목적에 따라, 본 발명에서는 서열번호: 1; 서열번호: 5; 서열번호: 9; 서열번호: 13; 서열번호: 17; 서열번호: 21; 서열번호: 25; 서열번호: 29; 서열번호: 33; 서열번호: 37; 서열번호: 41; 서열번호: 45; 서열번호: 49; 서열번호: 53; 서열번호: 57; 서열번호: 61; 서열번호: 65; 서열번호: 69; 서열번호: 73; 서열번호: 77; 서열번호: 81; 서열번호: 85; 서열번호: 89; 서열번호: 93; 서열번호: 97; 서열번호: 101; 서열번호: 105; 서열번호: 109 또는 서열번호: 113의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자를 제공한다.
상기 다른 목적에 따라, 본 발명에서는 서열번호: 2; 서열번호: 6; 서열번 호: 10; 서열번호: 14; 서열번호: 18; 서열번호: 22; 서열번호: 26; 서열번호: 30; 서열번호: 34; 서열번호: 38; 서열번호: 42; 서열번호: 46; 서열번호: 50; 서열번호: 54; 서열번호: 58; 서열번호: 62; 서열번호: 66; 서열번호: 70; 서열번호: 74; 서열번호: 78; 서열번호: 82; 서열번호: 86; 서열번호: 90; 서열번호: 94; 서열번호: 98; 서열번호: 102; 서열번호: 106; 서열번호: 110 또는 서열번호: 114의 아미노산 서열을 갖는 인간 암 억제 단백질을 제공한다.
상기 또 다른 목적에 따라, 본 발명에서는 상기 유전자를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
상기 또 다른 목적에 따라, 본 발명에서는 상기 벡터로 형질전환된 세포를 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
1.GIG 8
본 발명의 유전자는 서열번호: 1의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 8(GIG8)으로서, 서열번호: 1의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY634687 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_002166 호인 Homo sapiens DNA 결합 2 저해제, 도미넌트 네가티브 헬릭스-루프-헬릭스 단백질 (ID2) 유전자와 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG8 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가 된 GIG8 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 1의 염기서열에는 염기번호 120 내지 524(염기번호 522-524는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 134 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 2의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 15 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상 동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 1의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 3의 임의 프라이머 H-AP33 (5’-AAGCTTGCTGCTC-3’)및 서열번호: 4의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 163 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 및 폐조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.3 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
2. GIG 10
본 발명의 유전자는 서열번호: 5의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 10(GIG10)으로서, 서열번호: 5의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY542305 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 AF230904호인 Homo sapiens c-Cbl-상호작용 단백질 (CIN85)유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다.
그러나 GIG10 유전자는 인간의 각종 암화 과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG10 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 5의 염기서열에는 염기번호 52 내지 2049(염기번호 2047-2049는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으 로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 665 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 6의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 73 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 5의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 7의 임의 프라이머 H-AP10 (5’-AAGCTTCCACGTA-3’)및 서열번호: 8의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포 주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 321 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 뇌, 심장, 근육, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 및 폐조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 3.5 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
3.GIG 13
본 발명의 유전자는 서열번호: 9의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 13(GIG13)으로서, 서열번호: 9의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY493418 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_016831호인 Homo sapiens 피리어드 호모로그 3 (Drosophila) (PER3)유전자 등과 유전자서열이 유사한 유전자이다.
그러나 GIG13 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG13 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다. 서열번호: 9의 염기서열에는 염기번호 72 내지 3677(염기번호 3675-3677은 종료 코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 1201 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 10의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 132 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 1의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 11의 임의 프라이머 H-AP5 (5’-AAGCTTAGTAGGC-3’)및 서열번호: 12의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 347 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방과 간조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.3 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다. 특히, 본 발명의 유전자는 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는데, 예를 들어 유방암 조직 및 유방암 세포주 MCF-7 등의 암 조직 및 세포에서는 발현이 약하거나 없는 반면 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된다.
4. GIG 15
본 발명의 유전자는 서열번호: 13의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 15(GIG15)로서, 서열번호: 13의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY927233 호로 등록되었으며(공개예정일: 2006년 10월 1일) 이 데이터베이스에 등록된 제 AC116533 호인 Homo sapiens 염색체 11, 클론 RP11-466H18 등과 유전자 서열이 유사하다. 그러나 GIG15 유전자는 인간의 각종 암화 과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 백혈병을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약한 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG15 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 13의 염기서열에는 염기번호 18 내지 338(염기번호 336-338은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질 의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 106 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 14의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 12 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 13의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 15의 임의 프라이머 H-AP2 (5’-AAGCTTCGACTGT-3’)및 서열번호: 16의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현이 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 133 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 K562 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 및 폐조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 0.5 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다. 특히, 본 발명의 유전자는 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는데, 예를 들어 백혈병 조직 및 백혈병 세포주 K562등의 암 조직 및 세포에서는 발현이 약한 반면 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된다.
5. GIG 16
본 발명의 유전자는 서열번호: 17의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 16(GIG16)로서, 서열번호: 17의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY513277 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_016527호인 Homo sapiens hydroxyacid oxidase 2 (long chain) (HAO2) 유전자 서열과 일부 유전자 서열이 다른 유전자로 HAO2 유전자는 2-hydroxyacid oxidase 활성을 갖는 3가지 유전자 중 하나로만 알려져 있다 ((Jones, J.M., et al., J. Biol. Chem. 275(17), 12590-12597 (2000)). 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 전무하고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG16 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 17의 염기서열에는 염기번호 41 내지 1096(염기번호 1094-1096은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 351 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 18의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 39 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 17의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 19의 임의 프라이머 H-AP8 (5’-AAGCTTTTACCGC-3’) 및 서열번호: 20의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 213 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화 시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 GIG16 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 신장조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 2.0 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다. 특히, 본 발명의 유전자는 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는데, 예를 들어 간암 조직 및 간암 세포주 HepG2 등의 암 조직 및 세포에서는 발현되지 않으며 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된다.
6. GIG 24
본 발명의 유전자는 서열번호: 21의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 24(GIG24)로서, 서열번호: 21의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY513275 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 AK093049호인 Homo sapiens cDNA FLJ35730 fis, ALPHA-1-ANTICHYMOTRYPSIN PRECURSOR 유전자 매우 유사성을 갖는 클론 TESTI200313 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 전무하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 GIG24 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 21의 염기서열에는 염기번호 34내지 1305(염기번호 1303-1305는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 423 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 22의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 47 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범 위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 1의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 23의 임의 프라이머 H-AP7 (5’-AAGCTTAACGAGG-3’) 및 서열번호: 24의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 221 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 GIG24 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 심장 및 근육조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 2.4 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
7.GIG 26
본 발명의 유전자는 서열번호: 25의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 26(GIG26)으로서, 서열번호: 25의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY544126 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_153696호인 Homo sapiens 전립선-특이적 막 항원 유사 (PSMAL)유전자와 제 AF261715호인 Homo sapiens 전립선-특이적 막 항원 유사 단백질 (PSMAL/GCP III) mRNA 유전자와 유전자 서열이 유사한 유전자로 전립선-특이적 막 항원(PSMA) 유전자는 전립선 상피에서 주로 발현되는 marker 단백질로 알려져있다 ((Lee,S.J., et al., J. Mol. Biol. 330(4), 749-760 (2003)). 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 전무하고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG26 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 25의 염기서열에는 염기번호 26 내지 1354(염기번호 1352-1354는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 442 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 26의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 50 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 25의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 27의 임의 프라이머 H-AP11 (5’-AAGCTTCGGGTAA-3’) 및 서열번호: 28의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 204 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 GIG26 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 신장, 뇌 및 심장조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 약 2.0 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
8.GIG 29
본 발명의 유전자는 서열번호: 29의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 29(GIG29)로서, 서열번호: 29의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY544127 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_003049호인 Homo sapiens 솔루트 캐리어 계 10 (sodium/bile acid 코트랜스포터 계열) 등과 유전자서열이 유사한 것으로 나타났다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 전무하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 GIG29 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 29의 염기서열에는 염기번호 62내지 1111(염기번호 1109-1111은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단 백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 349 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 30의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 38 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 29의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 31의 임의 프라이머 H-AP3 (5’-AAGCTTTGGTCAG-3’) 및 서열번호: 32의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 277 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 GIG29 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.4 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
9.GIG 30
본 발명의 유전자는 서열번호: 33의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 30(GIG30)으로서, 서열번호: 33의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY524045 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 AY358814 호인 Homo sapiens clone DNA43305 RIPK2 (UNQ277)유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG30 유전자는 인간의 각종 암화 과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG30 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 33의 염기서열에는 염기번호 88 내지 1710(염기번호 1708-1710은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 540 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 34의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 61 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 33의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 35의 임의 프라이머 H-AP4 (5’-AAGCTTCTCAACG-3’)및 서열번호: 36의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 278 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하 이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 심장, 근육, 및 간조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.9 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
10.GIG 32
본 발명의 유전자는 서열번호: 37의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 32(GIG32)으로서, 서열번호: 37의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY762103 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_001753호인 Homo sapiens caveolin 1, caveolae 단백질, 22kDa (CAV1) 유전자와 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG32 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있으며 대다수 인간 암의 발생을 억제하는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG32 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 37의 염기서열에는 염기번호 43 내지 579(염기번호 577-579는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 178 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 38의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 20 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 37의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 39의 임의 프라이머 H-AP8 (5’-AAGCTTTTACCGC-3’)및 서열번호: 40의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 172 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 및 폐조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 4.0 kb의 mRNA 전 사물로 과발현된다.
11;GIG 33
본 발명의 유전자는 서열번호: 41의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 33(GIG33)으로서, 서열번호: 41의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY871273 호로 등록되었으며(공개예정일: 2006년 10월 1일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_000996 호인 Homo sapiens 리보좀 단백질 L35a (RPL35A) 유전자와 서열이 유사한 유전자이다. 이 리보좀 유전자는 단백질 합성을 촉매화하는 세포내 소기관으로서 작은 40S 소단위와 큰 60S 소단위로 구성되어 있다. 그러나 아직 이유전자의 기능은 규명되어 있지 않다 ((Herzog,H., et al., Nucleic Acids Res., 18(15), 4600 (1990) ; Kenmochi, N., et al., Genome Res., 8(5), 509-523 (1998) ; Lopez,C.D., et al., Cancer Lett. 180(2), 195-202 (2002)). 그러나 GIG33 유전자는 인간의 각종 암화 과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG33 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 41의 염기서열에는 염기번호 74 내지 406(염기번호 404-406은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루 어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 110 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 42의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 12 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 41의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 43의 임의 프라이머 H-AP33 (5’-AAGCTTGCTGCTC-3’)및 서열번호: 44의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 182 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액 백혈구조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 0.6 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
12;GIG 34
본 발명의 유전자는 서열번호: 45의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 34(GIG34)으로서, 서열번호: 45의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY871274 호로 등록되었으며(공개예정일: 2006년 10월 1일) 이 데이터베이스에 등록된 제 BC018970호인 Homo sapiens ribosomal 단백질 L11 유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG34 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG34 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 45의 염기서열에는 염기번호 5 내지 538(염기번호 536-538은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 177 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 46의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 20 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범 위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 45의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 47의 임의 프라이머 H-AP35 (5’-AAGCTTCAGGGCA-3’)및 서열번호: 48의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 205 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하 거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액 백혈구조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 0.6 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
13.GIG 35
본 발명의 유전자는 서열번호: 49의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 35(GIG35)으로서, 서열번호: 49의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY542307 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_001404호인 Homo sapiens 진핵 번역 연장 인자 1 감마(EEF1G)유전자와 서열이 유사한 유전자이다. 이 유전자는 아미노아실 tRNAs를 리보좀에 전달하는데 중요한 역할을 하는 연장 인자-1의 소단위 이다 ((Kumabe, T., et al., Nucleic Acids Res., 20(10), 2598 (1992)). 그러나 GIG35 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약한 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG35 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 49의 염기서열에는 염기번호 19 내지 1332(염기번호 1330-1332는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 437 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 50의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 50 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 49의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 51의 임의 프라이머 H-AP3 (5’-AAGCTTTGGTCAG-3’)및 서열번호: 52의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 212 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 및 폐조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.3 kb의 mRNA 전 사물로 과발현된다.
14.
GIG38
본 발명의 유전자는 서열번호: 53의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 38(GIG38)으로서, 서열번호: 53의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY550970 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_005870호인 Homo sapiens sin3-관련 폴리펩타이드, 18kDa (SAP18)유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG38 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG38 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 53의 염기서열에는 염기번호 17 내지 478(염기번호 476-478은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 153 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 54의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 17 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 53의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 55의 임의 프라이머 H-AP12 (5’-AAGCTTGAGTGCT-3’)및 서열번호: 56의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 172 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 심장, 근육, 콩팥, 간, 및 태반조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 0.7 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
15.
GIG39
본 발명의 유전자는 서열번호: 57의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 39(GIG39)로서, 서열번호: 57의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY550972 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 BC030531호인 Homo sapiens 염색체 1 오픈 리딩 프레임 24 유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG39 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 일부 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG39 종양억제 유전자 를 발굴하게 되었다.
서열번호: 57의 염기서열에는 염기번호 70 내지 2856(염기번호 2854-2856은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 928 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 58의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 103 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상 동성을 갖는 것들을 의미한다. 본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 57의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 59의 임의 프라이머 H-AP12 (5’-AAGCTTGAGTGCT-3’)및 서열번호: 60의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 327 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방과 간조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 2.4 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
16.
GIG40
본 발명의 유전자는 서열번호: 61의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 40(GIG40)으로서, 서열번호: 61의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY550966 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_005228호인 Homo sapiens 상피 세포 성장 인자 수용체(erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian) (EGFR) 등과 유전자서열이 유사한 것으로 밝혀졌다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 매우 약하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 GIG40 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 61의 염기서열에는 염기번호 47내지 3679(염기번호 3677-3679는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 1210 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 62의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 134 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 61의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 63의 임의 프라이머 H-AP7 (5’-AAGCTTAACGAGG-3’) 및 서열번호: 64의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 275 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화 시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 GIG40 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 심장 및 근육조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.5 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
17.
GIG42
본 발명의 유전자는 서열번호: 65의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 42(GIG42)로서, 서열번호: 65의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY550967 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 BC034023호인 Homo sapiens 알부민 유전자 등과 유전자서열이 유사한 것으로 나타났다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 전무하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 GIG42 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 65의 염기서열에는 염기번호 8내지 1837(염기번호 1835-1837은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 609 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 66의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 69 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 65의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 67의 임의 프라이머 H-AP8 (5’-AAGCTTTTACCGC-3’) 및 서열번호: 68의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 327 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 GIG42 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 2.5 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
18.
GIG43
본 발명의 유전자는 서열번호: 69의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 43(GIG43)으로서, 서열번호: 69의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY550971 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 BC028354호인 Homo sapiens 인지질 scramblase 4유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG43 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG43 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 69의 염기서열에는 염기번호 96 내지 1085(염기번호 1083-1085는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈 의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 329 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 70의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 37 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 69의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 71의 임의 프라이머 H-AP10 (5’-AAGCTTCCACGTA-3’)및 서열번호: 72의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 273 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 심장, 콩팥, 간, 태반, 및 폐조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 3.5 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
19.
GIG46
본 발명의 유전자는 서열번호: 73의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 1(GIG46)으로서, 서열번호: 73의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY692464 호로 등록되었으며(공개예정일: 2006년 5월 1일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_001613호인 Homo sapiens 액틴, 알파 2, 평활근, 대동맥(ACTA2) 유전자와 유전자 서열이 유사함이 밝혀졌다. 그러나 기 보고된 바와 같은 기능과는 달리 GIG46 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 자궁암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 아주 약하고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG46 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 73의 염기서열에는 염기번호 393 내지 1526(염기번호 1524-1526은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 377 개 아미노산 잔기로 이루어 져 있고 서열번호: 74의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 42 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 73의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 75의 임의 프라이머 H-AP16 (5’-AAGCTTTAGAGCG-3’)및 서열번호: 76의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 255 bp cDNA 단편을 얻고 (1323bp-1577bp 에 해당), 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡 터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HeLa 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 자궁, 뇌, 심장, 골격근, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액 백혈구들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.5 kb의 mRNA 전사물로 과발현되며 이외에도 약 2.0kb 의 전사물로도 발현된다.
20.
PIG33
본 발명의 유전자는 서열번호: 77의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 (PIG33)로서, 서열번호: 77의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY513278 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 BC033721호인 Homo sapiens SPARC-유사 1 (mast9, hevin) 유전자 등과 유전자 서열이 유사하다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 PIG35 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 77의 염기서열에는 염기번호 81내지 2075(염기번호 2073-2075는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에 서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 664 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 78의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 75 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 77의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝 하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 79의 임의 프라이머 H-AP2 (5’-AAGCTTCGACTGT-3’) 및 서열번호: 80의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 256 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 PIG33 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장,콩팥, 소장, 태반 및 폐조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발 생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 3.0 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
21.
PIG35
본 발명의 유전자는 서열번호: 81의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 (PIG35)로서, 서열번호: 81의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY513280 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_002615호인 Homo sapiens 세린(또는 시스테인) 프로테이네이즈 저해제 등과 유전자서열이 유사하다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 PIG35 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 81의 염기서열에는 염기번호 50내지 1306(염기번호 1304-1306은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함 한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 418 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 82의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 46 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 81의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 83의 임의 프라이머 H-AP9 (5’-AAGCTTCATTCCG-3’) 및 서열번호: 84의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 312 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 PIG35 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 심장, 근육, 뇌, 소장, 폐 및 태반조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.7 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
22.
PIG36
본 발명의 유전자는 서열번호: 85의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 (PIG36)로서, 서열번호: 85의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY544129 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_001685호인 Homo sapiens ATP 신쎄테이즈, H+ 트랜스포팅, 미토콘드리아 F0 복합체 소단위 F6 (ATP5J) 등과 유전자 서열이 유사하다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 PIG36 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 85의 염기서열에는 염기번호 102내지 428(염기번호 426-428은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 108 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 86의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 13 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단 백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 1의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 87의 임의 프라이머 H-AP9 (5’-AAGCTTCATTCCG-3’) 및 서열번호: 88의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 162 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 PIG36 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/PIG36/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 심장, 근육, 콩팥, 및 태반조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.0 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
23.
MIG20
서열번호: 89의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY871271 호로 등록되었으며(공개예정일: 2006년 10월 1일) 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 BX537651호인 Homo sapiens mRNA; cDNA DKFZp686C0390 유전자 등과 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 자궁암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 전혀 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 높은 MIG20 종양억제유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 89의 염기서열에는 염기번호 8 내지 202(염기번호 200-202는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 동시에 염기번호 233 내지 442(염기번호 440-442는 종료코돈임)에 해당하는 또다른 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 64 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 90의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 7 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 89의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 91의 임의 프라이머 H-AP32 (5’-AAGCTTCCTGCAA-3’)및 서열번호: 92의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않으면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 311 bp cDNA 단편을 얻고 (2067bp-2377bp 에 해당), 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HeLa 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 자궁, 심장, 골격근, 콩팥, 및 간조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 4.4 kb의 mRNA 전사물로 과발현되며 이외에도 약 2.4 및 1.5 kb 의 전사물로도 발현된다.
24.
PIG49
본 발명의 유전자는 서열번호: 93의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 (PIG49)으로서, 서열번호: 93의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY524047 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_005749호인 Homo sapiens 트랜스듀서인 ERBB2, 1 (TOB1) 유전자와 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 PIG49 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG49 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 93의 염기서열에는 염기번호 11 내지 1048(염기번호 1046-1048은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함 한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 345 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 94의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 38 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 93의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 95의 임의 프라이머 H-AP10 (5’-AAGCTTCCACGTA-3’)및 서열번호: 96의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 272 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 근육, 심장, 콩팥, 간, 및 태반조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 2.4 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다. 또한, 약 1.5 kb의 mRNA 전사물로도 발현된다.
25.
PIG51
본 발명의 유전자는 서열번호: 97의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 (PIG51)으로서, 서열번호: 97의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY542308 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 BC007054 호인 Homo sapiens TBC1 도메인 계열 멤버 7 유전자와 유전자서열이 유사한 유전자이다. 이유전자의 특이적 기능은 아직 규명이 되지 않고 있다. 그러나 PIG51 유전자는 인간의 각종 암화 과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 PIG51 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 97의 염기서열에는 염기번호 59 내지 802(염기번호 800-802는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 247 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 98의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 28 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩 티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 97의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 99의 임의 프라이머 H-AP22 (5’-AAGCTTTTGATCC-3’)및 서열번호: 100의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 211 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 심장, 근육, 흉선, 비 장, 콩팥, 간, 태반 및 백혈구조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.0 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
26.
MIG12
본 발명의 유전자는 서열번호: 101의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 (MIG12)로서, 서열번호: 101의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY453400 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 3월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 BC016731호인 Homo sapiens thymosin, beta 10 유전자 등과 유전자서열이 유사하다. 그러나 금번 연구 결과 폐암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 발현이 낮고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 MIG12 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 101의 염기서열에는 염기번호 29내지 163(염기번호 161-163은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 44 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 102의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 5 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 101의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 103의 임의 프라이머 H-AP12 (5’-AAGCTTGAGTGCT-3’)및 서열번호: 104의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTC-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현이 매우 약하고 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 강한 161 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 A549 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 폐, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 및 말초혈액조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 0.5 kb의 mRNA 전사물로 과발현되며 이외에도 약 1.0 및 0.8 kb 의 전사물로도 발현된다.
27.
PIG37
본 발명의 유전자는 서열번호: 105의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 (PIG37)로서, 서열번호: 105의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY513281 호로 등록되었으며(공개예정일: 2005년 12월 31일) 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_002221호인 Homo sapiens 이노시톨 1,4,5-삼인산 3-카이네이즈 B (ITPKB)유전자와 유전자 서열이 유사하다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하고 반면에 간 정상조직에서는 발현이 매우 증가된 PIG37 종양억제 유전자를 발굴하 게 되었다.
서열번호: 105의 염기서열에는 염기번호 4 내지 1422(염기번호 1420-1422는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 472 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 106의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 53 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상 동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 105의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 107의 임의 프라이머 H-AP10 (5’-AAGCTTCCACGTA-3’) 및 서열번호: 108의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는 263 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 HepG2 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다. 본 발명자들은 PIG33 전장 cDNA를 발현 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α /PIG37/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 간, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장,콩팥, 소장, 태반 및 폐조직에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 또한, 백혈병, 자궁암, 대장암, 폐암 및 피부암에서도 발현이 억제되어 암발생을 유도하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 7.0 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
28.GIG44
본 발명의 유전자는 서열번호: 109의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 44(GIG44)으로서, 서열번호: 109의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY971350 호로 등록되었으며(공개예정일: 2006년 5월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 BC042127호인 Homo sapiens 추정 인슐린-유사 성장 인자 II 관련 단백질 유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG44 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG44 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 109의 염기서열에는 염기번호 59 내지 400(염기번호 398-400은 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질 의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 113 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 110의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 12 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 109의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출 한 총 RNA에 대해 서열번호: 111의 임의 프라이머 H-AP12 (5’-AAGCTTGAGTGCT-3’)및 서열번호: 112의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTG-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 221 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 심장, 콩팥, 간, 태반, 및 폐조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.0 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
29.GIG31
본 발명의 유전자는 서열번호: 113의 염기서열을 갖는 인간 암 억제 유전자 31(GIG31)으로서, 서열번호: 113의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY971351 호로 등록되었으며(공개예정일: 2006년 5월 31일) 이 데이터베이스에 등록된 제 NM_002923호인 Homo sapiens G-단백질 시그널링 2 유전자의 조절자 등과 서열이 유사한 유전자이다. 그러나 GIG31 유전자는 인간의 각종 암화과정에 깊숙히 관련되어 있는 것으로 금번 연구결과 밝혀졌다. 연구 결과 유방암을 포함한 여러 인간 종양들에서는 오히려 발현이 약하거나 없고 반면에 여러 정상조직들에서는 발현이 매우 증가된 GIG31 종양억제 유전자를 발굴하게 되었다.
서열번호: 113의 염기서열에는 염기번호 14 내지 649(염기번호 647-649는 종료코돈임)에 해당하는 하나의 오픈 리딩 프레임이 포함되어 있다. 그러나, 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 유전자를 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩 영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위내에서 코딩 영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩 영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자와 실질적으로 동일한 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 상기 유전자의 단편을 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 211 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 114의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 24 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범 위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 유전자 및 단백질은 인간 조직으로부터 분리하거나, 공지의 DNA 또는 펩티드 합성 방법에 따라 합성할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자는 서열번호: 113의 염기서열 정보를 토대로 통상적인 방법에 따라 스크리닝 및 클로닝하여 얻을 수 있다. 다른 예로는 정상 조직과, 암 조직 또는 세포주로부터 추출한 총 RNA에 대해 서열번호: 115의 임의 프라이머 H-AP4 (5’-AAGCTTCTCAACG-3’)및 서열번호: 116의 고정 올리고-dT 프라이머(anchored oligo-dT primer) (5’-AAGCTTTTTTTTTTTA-3’)를 사용하여 역전사 중합효소 연쇄 반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)을 수행하여 암 조직 또는 세포주에서는 발현되지 않거나 약하면서 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 되는 223 bp cDNA 단편을 얻고, 이 단편을 프로브로 사용하여 cDNA 라이브러리와 플라크 하이브리드화시켜 전장(full length) cDNA 클론을 얻을 수 있다.
이렇게 제조된 유전자를 당 분야에 공지된 미생물 또는 동물 세포 발현용 벡터에 삽입하여 발현 벡터를 제조한 후 이를 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 대장균 또는 MCF-7 세포주 등에 도입시킴으로써 상기 유전자의 DNA를 대량으로 복제하거나 단백질을 대량 생산할 수 있다. 벡터의 제작시에는, 상기 유전자 또는 단백질을 생산하고자 하는 숙주 세포의 종류에 따라 프로모터, 터미네이터 등과 같은 발현 조절서열, 자가복제서열 및 분비 시그날 등을 적절히 선택하고 조합할 수 있다.
본 발명의 유전자는 정상 조직, 바람직하게는 유방, 심장, 대장, 비장, 소장, 태반, 폐 및 백혈구조직들에서 과발현되어 발암을 억제하는 것으로 보인다. 이 조직들에서 본 발명의 유전자는 대부분이 약 1.4 kb의 mRNA 전사물로 과발현된다.
특히, 본 발명의 유전자는 정상 조직에서만 차별적으로 발현되는데, 예를 들어 유방암 조직 및 유방암 세포주 MCF-7, 백혈병 조직 및 백혈병 세포주 K562, 간암 조직 및 간암 세포주 HepG2 , 자궁경부암 조직 및 자궁경부암 세포주, 폐암 조직, 폐암전이조직 및 폐암 세포주 (A549 및 NCI-H358)등의 암 조직 및 세포에서는 발현이 약하거나 없는 반면 정상 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된다.
본 발명의 유전자가 도입된 암 세포주는 높은 사멸률을 보이므로, 본 발명의 유전자는 암의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
이하 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
참조예: 총 RNA의 분리
신선한 조직 또는 배양된 세포로부터 총 RNA 분리 키트(RNeasy total RNA kit, Qiagen Inc., 독일)를 사용하여 총 RNA를 분리한 후, 메시지 클린 키트 (message clean kit, GenHunter Corp., MA, 미국)를 사용하여 RNA에 오염된 DNA를 제거하였다.
실시예 1: 총 RNA의 분리 및 mRNA 감별 전개
정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 유전자 발현의 차별 패턴을 다음과 같이 조사하였다.
유방암 환자로부터 유방적출술(mastectomy) 중에 정상 유방 조직 시료를 얻었으며, 수술적 처치 전에 방사선 또는 항암 치료를 받지 않은 환자의 근치 유방절제술(radical mastectomy) 중에 원발성 유방 암조직 시료를 얻었다. 인간 유방암 세포주로는 MCF-7 (American Type Culture Collection; ATCC Number HTB-22) 유방암세포주를 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조 예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
또 GIG 15의 경우에는 mRNA의 감별 전개를 위하여, 정상인의 골수 (bone marrow) 조직, 그리고 이전에 항암요법과 방사선치료를 받지 않은 백혈병환자로부터 골수조직생검사 (bone marrow biopsy)에 원발성 백혈병 골수조직을 취하였다. 감별 전개법에는 인간 만성 골수성 백혈병 세포주로 K-562 (Americal Type Cell Collection; ATCC Number CCL-243)를 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조 예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
한편 간암 관련 유전자의 경우에는 정상 간 조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 유전자 발현의 차별 패턴을 다음과 같이 조사하였다.
간암 환자로부터 조직 생검(biopsy) 중에 정상 간 및 간암 조직 시료를 얻었 으며, 인간 간암 세포주로는 HepG2 (American Type Culture Collection; ATCC Number HB-8065) 간암세포주를 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
또한 정상 자궁경부 조직, 원발성 자궁경부암 조직 및 자궁경부암 세포주에서 유전자 발현의 차별 패턴을 다음과 같이 조사하였다. 자궁 근종 환자로부터 자궁적출술(hysterectomy) 중에 정상 자궁경부(exocervical) 조직 시료를 얻었으며, 수술적 처치전에 방사선 또는 항암 치료를 받지 않은 환자의 근치 자궁절제술(radical hysterectomy) 중에 원발성 자궁경부암 조직 및 전이성 장골 림프절 조직 시료를 얻었다. 인간 자궁경부암 세포주로는 CUMC-6(Kim, J.W. et al., Gynecol. Oncol., 62, 230-240 (1996))을 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
또 정상 폐 조직, 원발성 폐암 조직, 폐암 전이 조직 및 폐암 세포주에서 유전자 발현의 차별 패턴을 다음과 같이 조사하였다. 폐암 환자로부터 수술 중에 정상 폐조직, 폐암 조직 및 폐암 전이조직 시료를 얻었으며, 인간 폐암 세포주로는 A549 (American Type Culture Collection; ATCC Number CCL-185) 와 NCI-H358 (American Type Culture Collection; ATCC Number CRL-5807) 폐암 세포주를 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
각 조직 및 세포의 총 RNA 시료를 사용하여 문헌(Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 (1992); 및 Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966- 6968 (1993))의 방법을 일부 변형하여 다음과 같이 RT-PCR을 수행하였다.
1-1;GIG 8
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 4의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 3의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP33(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1a는 서열번호: 3의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP33과 서열번호: 4의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1a에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 163 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG8 전장 유전자서열의 317bp에서부터 479bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC33으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC33 단편인 163 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭 시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC33 을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-2;GIG 10
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 8의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 7의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP10(RNAimage primer set 2, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1b는 서열번호: 7의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP10과 서열번호: 8의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1b에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1b에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 321 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG10 전장 유전자서열의 1716bp에서부터 2036bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC42로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC42 단편인 321 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC42를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-3;GIG 13
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 12의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 11의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP5(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1c는 서열번호: 11의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP5와 서열번호: 12의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1c에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1c에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하 고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 347 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG13 전장 유전자서열의 3253bp에서부터 3599bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC59로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC59 단편인 347 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC59를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-4; GIG 15
mRNA의 감별 전개를 위하여, 정상인의 골수 (bone marrow) 조직, 그리고 이전에 항암요법과 방사선치료를 받지 않은 백혈병환자로부터 골수조직생검사 (bone marrow biopsy)에 원발성 백혈병 골수조직을 취하였다. 감별 전개법에는 인간 만성 골수성 백혈병 세포주로 K-562 (Americal Type Cell Collection; ATCC Number CCL-243)를 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조 예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
각 조직 및 세포의 총 RNA 시료를 사용하여 문헌(Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 (1992); 및 Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 (1993))의 방법을 일부 변형하여 다음과 같이 RT-PCR을 수행하였다. 0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 16의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 15의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP2(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)를 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1d는 서열번호: 15의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP2와 서열번호: 16의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 나타낸 바와 같이, 정상 골수 조직, 백혈병 조직 및 K-562 세포에서 DD에 의한 유전자 발현이 상이한 것으로 확인되었다. 도 1d에서 알 수 있는 바와 같이, 133 bp cDNA 단편인 GV2(GIG15 전장 유전자서열의 212bp에서부터 344bp 까지 임)는 백혈병 조직 및 K-562 세포에서는 발현이 약하였으나, 정상 골수조직에서는 발현이 매우 강하였다. 이 cDNA 단편을 GV2로 명명하였다. 건조된 겔로부터 GV2 단편인 133 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 GV2를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-5;GIG 16
정상 간 조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 유전자 발현의 차별 패턴을 다음과 같이 조사하였다.
간암 환자로부터 조직 생검(biopsy) 중에 정상 간 및 간암 조직 시료를 얻었으며, 인간 간암 세포주로는 HepG2 (American Type Culture Collection; ATCC Number HB-8065) 간암세포주를 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
각 조직 및 세포의 총 RNA 시료를 사용하여 문헌(Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 (1992); 및 Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 (1993))의 방법을 일부 변형하여 다음과 같이 RT-PCR을 수행하였다. 0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 20의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 19의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP8(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1e는 서열번호: 19의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP8과 서열번호: 20의 고 정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1e에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 213 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG16 전장 유전자서열의 867bp에서부터 1079bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP8로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP8 단편인 213 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP8을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-6;GIG 24
정상 간 조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 유전자 발현의 차별 패턴을 다음과 같이 조사하였다.
간암 환자로부터 조직 생검(biopsy) 중에 정상 간 및 간암 조직 시료를 얻었으며, 인간 간암 세포주로는 HepG2 (American Type Culture Collection; ATCC Number HB-8065) 간암세포주를 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
각 조직 및 세포의 총 RNA 시료를 사용하여 문헌(Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 (1992); 및 Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 (1993))의 방법을 일부 변형하여 다음과 같이 RT-PCR을 수행하였다. 0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 24의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 23의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP7(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1f는 서열번호: 23의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP7과 서열번호: 24의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1f에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 221 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG42 전장 유전자서열의 1057bp에서부터 1277bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP71로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP71 단편인 221 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP71을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-7;GIG 26
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 28의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 27의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP11(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1g는 서열번호: 27의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP11과 서열번호: 28의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1g에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 204 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG26 전장 유전자서열의 1036bp에서부터 1239bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP115로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP115 단편인 204 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태 에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP115를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-8;GIG 29
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 32의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 31의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP3(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1h는 서열번호: 31의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP3과 서열번호: 32의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1h에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 277 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG29 전장 유전자서열의 823bp에서부터 1099bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP3으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP3 단편인 277 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP3을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-9;GIG 30
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 36의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 35의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP4(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)를 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1i는 서열번호: 35의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP4와 서열번호: 36의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1i에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하 고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 278 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG30 전장 유전자서열의 1462bp에서부터 1739bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC48으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC48 단편인 278 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC48 을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-10;GIG 32
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 40의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 39의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP8(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1j는 서열번호: 39의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP8과 서열번호: 40의 고 정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1j에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 172 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG32 전장 유전자서열의 428bp에서부터 599bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC82로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC82 단편인 172 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC82를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-11;GIG 33
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 44의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 43의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP33(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동 안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1k는 서열번호: 43의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP33과 서열번호: 44의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1k에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 182 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG33 전장 유전자서열의 216bp에서부터 397bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC86으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC86 단편인 182 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC86을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-12;GIG 34
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 48의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 47의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP35(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1(l)은 서열번호: 47의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP35와 서열번호: 48의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1(l)에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 205 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG34 전장 유전자서열의 343bp에서부터 547bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC35로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC42 단편인 205 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC35를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-13;GIG 35
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 52의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 51의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP3(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1m은 서열번호: 51의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP3과 서열번호: 52의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1m에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 212 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG35 전장 유전자서열의 1108bp에서부터 1319bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC38로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC38 단편인 212 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC38 을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트 (Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-14;
GIG38
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 56의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 55의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP12(RNAimage primer set 2, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1n은 서열번호: 55의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP12와 서열번호: 56의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1n에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 172 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG38 전장 유전자서열의 328bp에서부터 499bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC122로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC122 단편인 172 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태 에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC122를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-15;
GIG39
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 60의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 59의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP12(RNAimage primer set 2, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1(o)는 서열번호: 59의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP12와 서열번호: 60의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1(o)에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 327 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG39 전장 유전자서열의 2533bp에서부터 2859bp 까지 임). 이 cDNA 단 편을 FC126으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC126 단편인 327 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC126 을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-16;
GIG40
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 64의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 63의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP7(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1p는 서열번호: 63의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP7과 서열번호: 64의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1p에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 약하고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 275 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG40 전장 유전자서열의 3112bp에서부터 3386bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP79로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP79 단편인 275 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP79를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-17;
GIG42
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 68의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 67의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP8(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1q는 서열번호: 67의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP8과 서열번호: 68의 고 정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1q에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 327 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG42 전장 유전자서열의 1473bp에서부터 1799bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP85로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP85 단편인 327 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP85를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-18;
GIG43
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 72의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 71의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP10(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시 킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1r은 서열번호: 71의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP10과 서열번호: 72의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1r에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 273 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG43 전장 유전자서열의 727bp에서부터 999bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC102로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC102 단편인 273 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC102를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-19;
GIG46
정상 자궁경부 조직, 원발성 자궁경부암 조직 및 자궁경부암 세포주에서 유전자 발현의 차별 패턴을 다음과 같이 조사하였다. 자궁 근종 환자로부터 자궁적출술(hysterectomy) 중에 정상 자궁경부(exocervical) 조직 시료를 얻었으며, 수술적 처치전에 방사선 또는 항암 치료를 받지 않은 환자의 근치 자궁절제술(radical hysterectomy) 중에 원발성 자궁경부암 조직 및 전이성 장골 림프절 조직 시료를 얻었다. 인간 자궁경부암 세포주로는 CUMC-6(Kim, J.W. et al., Gynecol. Oncol., 62, 230-240 (1996))을 사용하였다. 이들 조직 및 세포로부터 각각 참조예의 방법과 동일하게 실시하여 총 RNA를 분리하였다.
각 조직 및 세포의 총 RNA 시료를 사용하여 문헌(Liang, P. and Pardee, A. B., Science, 257, 967-971 (1992); 및 Liang, P. et al., Cancer Res., 52, 6966-6968 (1993))의 방법을 일부 변형하여 다음과 같이 RT-PCR을 수행하였다. 0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 76의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 75의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP16(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)를 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1s는 서열번호: 75의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP16과 서열번호: 76의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1열은 정상 자궁경부 조직이며, 제2열은 자궁경부암 조직이고, 제3열은 전이성 장골 림프절 조직이며, 제4열은 자궁경부암 세포주 CUMC-6이다. 도 1s에서 보듯이, 자궁경부암 조직, 전이성 장골 림프절 조직 및 자궁경부암 세포주 CUMC-6에서는 발현되지 않고 정상 자 궁경부 조직에서만 차별적으로 발현된 255 bp cDNA 단편이 확인되었다. 이 cDNA 단편을 CA161로 명명하였다.
건조된 겔로부터 CA161 단편인 255 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 CA161을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-20;
PIG33
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 80의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 79의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP2(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1t는 서열번호: 79의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP2와 서열번호: 80의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1t에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않거나 약하고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 256 bp cDNA 단편이 확인되었다 (PIG33 전장 유전자서열의 1623bp에서부터 1878bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP29으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP29 단편인 256 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP29를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-21;
PIG35
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 84의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 83의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP9(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시 킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1u는 서열번호: 83의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP9와 서열번호: 84의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1u에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않거나 약하고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 312 bp cDNA 단편이 확인되었다 (PIG35 전장 유전자서열의 966bp에서부터 1277bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP95으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP95 단편인 312 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP95를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-22;
PIG36
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 88의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 87의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP9(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1v는 서열번호: 87의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP9와 서열번호: 88의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1v에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않거나 약하고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 162 bp cDNA 단편이 확인되었다 (PIG36 전장 유전자서열의 238bp에서부터 399bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP96으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP96 단편인 162 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP96을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-23;
MIG20
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 92의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트 (RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 91의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP32(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)를 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1w는 서열번호: 91의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP32와 서열번호: 92의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1열은 정상 자궁경부 조직이며, 제2열은 자궁경부암 조직이고, 제3열은 전이성 장골 림프절 조직이며, 제4열은 자궁경부암 세포주 CUMC-6이다. 도 1w에서 보듯이, 자궁경부암 조직, 전이성 장골 림프절 조직 및 자궁경부암 세포주 CUMC-6에서는 발현되지 않고 정상 자궁경부 조직에서만 차별적으로 발현된 311 bp cDNA 단편이 확인되었다. 이 cDNA 단편을 CA324로 명명하였다.
건조된 겔로부터 CA324 단편인 311 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 CA324를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-24;
PIG49
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 96의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 95의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP10(RNAimage primer set 2, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1x는 서열번호: 95의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP10과 서열번호: 96의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1x에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 272 bp cDNA 단편이 확인되었다 (PIG49 전장 유전자서열의 767bp에서부터 1038bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC101로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC101 단편인 272 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재 증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC101을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-25;
PIG51
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 100의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 99의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP22(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1y는 서열번호: 99의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP22와 서열번호: 100의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1y에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 211 bp cDNA 단편이 확인되었다 (PIG51 전장 유전자서열의 519bp에서부터 729bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC22로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC22 단편인 211 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC22를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-26;
MIG12
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 104의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 103의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP12(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)를 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1z는 서열번호: 103의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP12와 서열번호: 104의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1열은 정상 폐 조직이며, 제 2열은 폐암 조직이고, 제 3열은 폐암 전이조직이고 제 4열은 폐암 세포주 A549이다. 도 1z에서 보듯이, 폐암 조직, 폐암 전이조직 및 폐암 세포주 에서는 발 현이 약하고 정상 폐 조직에서만 차별적으로 발현된 161 bp cDNA 단편이 확인되었다 (MIG12 전장 유전자서열의 35bp에서부터 195bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 L927 로 명명하였다.
건조된 겔로부터 L927 단편인 161 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 L927을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-27;
PIG37
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 108의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 107의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP10(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)을 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1a1는 서열번호: 107의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP10과 서열번호: 108 의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 간 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 간암 조직이고, 제7열은 간암 세포주 HepG2이다. 도 1a1에서 보듯이, 간암 조직과 간암 세포주 에서는 발현이 되지 않거나 약하고 정상 간 조직에서만 차별적으로 발현된 263 bp cDNA 단편이 확인되었다 (PIG37 전장 유전자서열의 1217bp에서부터 1479bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 HP102로 명명하였다.
건조된 겔로부터 HP102 단편인 263 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 HP102를 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-28;GIG44
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 112의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 111의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP12(RNAimage primer set 5, GenHunter Corporation, 미국)를 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동 안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1b1는 서열번호: 111의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP12와 서열번호: 112의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1b1에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 221 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG44 전장 유전자서열의 179bp에서부터 399bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC123으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC123 단편인 221 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC123을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
1-29;GIG31
0.2 ㎍의 총 RNA를 서열번호: 116의 고정 올리고-dT 프라이머와 함께 키트(RNAimage kit, GenHunter)를 사용하여 역전사한 후, 동일한 고정 올리고-dT 프라이머 및, 서열번호: 115의 5‘13mer 임의 프라이머인 H-AP4(RNAimage primer set 1, GenHunter Corporation, 미국)를 사용하여 0.5mM [α-35S]-표지된 dATP(1,200 Ci/mmol)의 존재하에서 PCR을 수행하였다. PCR은 95 ℃에서 40 초, 40 ℃에서 2 분, 72 ℃에서 40 초로 이루어진 반응을 모두 40 회 반복한 후 72 ℃에서 5 분 동안 반응시켰다. 증폭된 단편을 6 % 폴리아크릴아미드 염기서열 겔에서 전기영동시킨 후 오토래디오 그래피하였다.
도 1c1는 서열번호: 115의 5’13mer 임의 프라이머 H-AP4와 서열번호: 116의 고정 올리고-dT 프라이머를 사용한 PCR 결과이다. 도 1에서 제1, 제2, 제3열은 정상 유방 조직이며, 제 4, 제5, 제6열은 유방암 조직이고, 제7열은 유방암 세포주 MCF-7이다. 도 1c1에서 보듯이, 유방암 조직 및 유방암 세포주 에서는 발현이 매우 약하고 정상 유방 조직에서만 차별적으로 발현이 증가된 223 bp cDNA 단편이 확인되었다 (GIG31 전장 유전자서열의 445bp에서부터 667bp 까지 임). 이 cDNA 단편을 FC47으로 명명하였다.
건조된 겔로부터 FC47 단편인 223 bp 밴드를 잘라내고 15 분 동안 끓여 cDNA를 용출시킨 후, [α-35S]-표지된 dATP 및 20 μM dNTP를 사용하지 않는 상태에서 상기와 동일한 프라이머 쌍을 사용하여 동일한 조건하에서 PCR을 수행하여 재증폭시켰다. 재증폭된 cDNA 단편 FC47 을 클로닝 시스템(TA cloning system, Promega)을 사용하여 발현 벡터 pGEM-T Easy에 클로닝하였으며, 염기서열 결정 키트(Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing System, United States Biochemical Co.)를 사용하여 염기서열을 결정하였다.
실시예 2: cDNA 라이브러리 스크리닝
실시예 1에서 얻은 cDNA 단편 FC33; FC42;FC59;GV2;H-AP8;HP71;HP115;HP3;FC48;FC82;FC86;FC35;FC38;FC122;FC126;HP79;HP85;FC102;CA161 ;HP29;HP95;HP96;CA324;FC101;FC22;L927;HP102;FC123 또는 FC47을 문헌(Feinberg, A.P. and Vogelstein, B., Anal. Biochem., 132, 6-13 (1983))의 방법에 따라 표지하여 32P-표지된 FC33; FC42;FC59;GV2;H-AP8;HP71;HP115;HP3 ;FC48;FC82 ;FC86 ;FC35;FC38 ;FC122;FC126;HP79;HP85;FC102;CA161;HP29;HP95;HP96;CA324;FC101;FC22;L927; P102 ;FC123 또는 FC47 cDNA 프로브를 얻고, 이를 박테리오파지 λgt11 인간 폐 배 섬유아세포(human lung embryonic fibroblast) cDNA 라이브러리(Miki, T. et al., Gene, 83, 137-146 (1989))와 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 플라크 하이브리드화시켜, 인간 암 억제 유전자 GIG의 전장 cDNA 클론을 얻었다.
이 전장 cDNA의 염기서열을 결정하였으며, 그 GIG8의 결과는 서열번호: 1과 같았다. 이 염기서열은 134 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 2와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 15 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG8 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2a는 GIG8 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG8 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2a에서 보듯이, 발현된 GIG8 단백질의 크기는 약 15 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG10의 결과는 서열번호: 5와 같았다. 이 염기서열은 665 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 6과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 73 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG10 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2b는 GIG10 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG10 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2b에서 보듯이, 발현된 GIG10 단백질의 크기는 약 73 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG13 유전자의 결과는 서열번호: 9와 같았다. 이 염기서열은 1201 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서 열은 서열번호: 10과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 132 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG13 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2c는 GIG13 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG13 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2c에서 보듯이, 발현된 GIG13 단백질의 크기는 약 132 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG15 유전자의 결과는 서열번호: 13과 같았다. 이 염기서열은 106 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 14와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 12 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG15 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2d는 GIG15 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2d에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG15 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2d에서 보듯이, 발현된 GIG15 단백질의 크기는 약 12 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG16 유전자의결과는 서열번호: 17과 같았다. 이 염기서열은 351 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 18과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 39 kDa이었다. 얻어진 GIG16 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG16 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2e는 GIG16 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2e에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG16 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2e에서 보듯이, 발현된 GIG16 단백질의 크기는 약 39 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG24 유전자의 결과는 서열번호: 21과 같았다. 이 염기서열은 423 개 아 미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 22와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 47 kDa이었다. 얻어진 GIG24 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG24 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2f는 GIG24 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2f에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG24 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2f에서 보듯이, 발현된 GIG24 단백질의 크기는 약 47 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG26 유전자의 결과는 서열번호: 25와 같았다. 이 염기서열은 442 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 26과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 50 kDa이었다. 얻어진 GIG26 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG26 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2g는 GIG26 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2g에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG26 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2g에서 보듯이, 발현된 GIG26 단백질의 크기는 약 50 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG29 유전자의 결과는 서열번호: 29와 같았다. 이 염기서열은 349 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 30과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 38 kDa이었다. 얻어진 GIG29 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG29 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2h는 GIG29 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2h에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG29 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2h에서 보듯이, 발현된 GIG29 단백질의 크기는 약 38 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG30 유전자의 결과는 서열번호: 33과 같았다. 이 염기서열은 540 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 34와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 61 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG30 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2i는 GIG30 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2i에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG30 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2i에서 보듯이, 발현된 GIG30 단백질의 크기는 약 61 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG32 유전자의 결과는 서열번호: 37과 같았다. 이 염기서열은 178 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 38과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 20 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG32 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2j는 GIG32 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2j에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG32 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2j에서 보듯이, 발현된 GIG32 단백질의 크기는 약 20 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG33 유전자의 결과는 서열번호: 41과 같았다. 이 염기서열은 110 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 42와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 12 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG34 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2k는 GIG33 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2k에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG33 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2k에서 보듯이, 발현된 GIG33 단백질의 크기는 약 12 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG34 유전자의 결과는 서열번호: 45와 같았다. 이 염기서열은 177 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 46과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 20 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG34 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2(l)은 GIG34 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2(l)에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG34 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2(l)에서 보듯이, 발현된 GIG34 단백질의 크기는 약 20 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG35 유전자의 결과는 서열번호: 49와 같았다. 이 염기서열은 437 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 50과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 50 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG35 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2m은 GIG35 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2m에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG35 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2m에서 보듯이, 발현된 GIG35 단백질의 크기는 약 50 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG38 유전자의 결과는 서열번호: 53과 같았다. 이 염기서열은 153 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 54와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 17 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG38 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2n은 GIG38 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2n에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG38 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2n에서 보듯이, 발현된 GIG38 단백질의 크기는 약 17 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG39 유전자의 결과는 서열번호: 57과 같았다. 이 염기서열은 928 개 아 미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 58과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 103 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG39 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2(o)는 GIG39 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2(o)에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG39 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2(o)에서 보듯이, 발현된 GIG39 단백질의 크기는 약 103 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG40 유전자의 결과는 서열번호: 61과 같았다. 이 염기서열은 1210 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 62와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 134 kDa이었다. 얻어진 GIG40 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으 로써 GIG40 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2p는 GIG40 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2p에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG40 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2p에서 보듯이, 발현된 GIG40 단백질의 크기는 약 134 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG42 유전자의 결과는 서열번호: 65와 같았다. 이 염기서열은 609 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 66과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 69 kDa이었다. 얻어진 GIG42 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG42 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2q는 GIG42 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2q에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG42 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2q에서 보듯이, 발현된 GIG42 단백질의 크기는 약 69 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG43 유전자의 결과는 서열번호: 69와 같았다. 이 염기서열은 329 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 70과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 37 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG43 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2r은 GIG43 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2r에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG43 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2r에서 보듯이, 발현된 GIG43 단백질의 크기는 약 37 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG46 유전자의 결과는 서열번호: 73과 같았다. 이 염기서열은 377 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 74와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 42 kDa이었다.
얻어진 GIG46전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/thio-Topo 벡터 (Invitrogen, USA)의 다중-클로닝 부위 내에 삽입한 후, 생성된 pBAD/thio-Topo/GIG46 벡터를 대장균 Top10 (Invitrogen, USA)에 형질감염시켰다. pBAD/thio-Topo 벡터의 다중-클로닝 부위의 앞부위에는 발현 단백질들인 HT-Thioredoxin 이 삽입되어 있다. 형질감염된 대장균을 LB 브로쓰에서 진탕 배양한 후, 이를 1/100로 희석시켜 다시 3시간 동안 배양하였다. 여기에 0.5 mM의 엘 아라비노즈 (L-Arabinose, Sigma)를 첨가하여 단백질 생산을 유도하였다. 엘 아라비노즈 유도 전후의 배양액 중의 대장균 세포를 초음파 분쇄한 후, 12% 나트륨 도데실설페이트-폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동하였다 (SDS-PAGE). 도 2s는 pBAD/thio-Topo/GIG46 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 57 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 57 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/GIG46 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 42 kDa의 GIG46 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 2s는 GIG46 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 엘아라비노즈 에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 엘 아라비노즈에 의해 GIG46 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.
PIG33 유전자의 결과는 서열번호: 77과 같았다. 이 염기서열은 664 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 78과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 75 kDa이었다. 얻어진 PIG33 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG33 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2t는 PIG33 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2t에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG33 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2t에서 보듯이, 발현된 PIG33 단백질의 크기는 약 75 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
PIG35 유전자의 결과는 서열번호: 81과 같았다. 이 염기서열은 418 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 82와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 46 kDa이었다. 얻어진 PIG35 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG35 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2u는 PIG35 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG35 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2u에서 보듯이, 발현된 PIG35 단백질의 크기는 약 46 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
PIG36 유전자의 결과는 서열번호: 85와 같았다. 이 염기서열은 108 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 86과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 13 kDa이었다. 얻어진 PIG36 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/PIG36/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG36 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2v는 PIG36 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG36 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2v에서 보듯이, 발현된 PIG36 단백질의 크기는 약 13 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
MIG20 유전자의 결과는 서열번호: 89와 같았다. 이 염기서열은 64 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 90과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 7 kDa이었다.
얻어진 MIG20전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/thio-Topo 벡터 (Invitrogen, USA)의 다중-클로닝 부위 내에 삽입한 후, 생성된 pBAD/thio-Topo/MIG20 벡터를 대장균 Top10 (Invitrogen, USA)에 형질감염시켰다. pBAD/thio-Topo 벡터의 다중-클로닝 부위의 앞부위에는 발현 단백질들인 HT-Thioredoxin 이 삽입되어 있다. 형질감염된 대장균을 LB 브로쓰에서 진탕 배양한 후, 이를 1/100로 희석시켜 다시 3시간 동안 배양하였다. 여기에 0.5 mM의 엘 아라비노즈 (L-Arabinose, Sigma)를 첨가하여 단백질 생산을 유도하였다. 엘 아라비노즈 유도 전후의 배양액 중의 대장균 세포를 초음파 분쇄한 후, 12% 나트륨 도데실설페이트-폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동하였다 (SDS-PAGE). 도 2w는 pBAD/thio-Topo/MIG20 벡터로 형질감염된 대장균 Top10 균주의 단백질의 발현 양상을 SDS-PAGE로 확인한 결과로서, 엘 아라비노즈 유도 후에 약 22 kDa의 융합 단백질 밴드가 뚜렷하게 관찰되었다. 이 22 kDa 융합단백질은 pBAD/thio-Topo/MIG20 벡터에 삽입되어 있는 약 15 kDa 크기의 HT-thioredoxin 단백질과 약 7 kDa의 MIG20 단백질을 함유하고 있는 것이다.
도 2w는 MIG20 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에 서 제1열은 엘아라비노즈 에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 엘 아라비노즈에 의해 MIG20 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다
PIG49 유전자의 결과는 서열번호: 93과 같았다. 이 염기서열은 345 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 94와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 38 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG49 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2x는 PIG49 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG49 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2x에서 보듯이, 발현된 PIG49 단백질의 크기는 약 38 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
PIG51 유전자의 결과는 서열번호: 97과 같았다. 이 염기서열은 247 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 98과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 28 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오 갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG51 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2y는 PIG51 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG51 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2y에서 보듯이, 발현된 PIG51 단백질의 크기는 약 28 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
MIG12 유전자의 결과는 서열번호: 101과 같았다. 이 염기서열은 44 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 102와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 5 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 MIG12 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2z는 MIG12 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 MIG12 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2z에서 보듯이, 발현된 MIG12 단백질의 크기는 약 5 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
PIG37의 결과는 서열번호: 105과 같았다. 이 염기서열은 472 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 106과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 53 kDa이었다. 얻어진 PIG37 전장 cDNA 클론을 원핵생물 발현용 벡터 pBAD/Thio-Topo (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 얻어진 형질전환체를 대장균 DH5α/PIG37/pBAD/Thio-Topo로 명명하였다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG37 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2a1는 PIG37 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG37 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2a1에서 보듯이, 발현된 PIG37 단백질의 크기는 약 53 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG 44 결과는 서열번호: 109와 같았다. 이 염기서열은 113 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서 열번호: 110과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 12 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG44 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2b1는 GIG44 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG44 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2b1에서 보듯이, 발현된 GIG44 단백질의 크기는 약 12 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
GIG31의 결과는 서열번호: 113과 같았다. 이 염기서열은 211 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 114와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 24 kDa이었다.
형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 1mM의 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG31 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.
도 2c1는 GIG31 단백질의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2에 서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG31 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다. 도 2c1에서 보듯이, 발현된 GIG31 단백질의 크기는 약 24 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.
실시예 3: GIG 유전자의 노던 블랏
3-1;
GIG8
,
GIG10
,
GIG13
,
GIG30
,
GIG32
,
GIG33
,
GIG34
,
GIG35
,
GIG38
,
GIG39
,
GIG43
,
PIG49
,
PIG51,GIG44,GIG31
GIG 유전자의 발현 수준을 조사하기 위해, 노던 블랏을 다음과 같이 실시하였다.
실시예 1에서 얻은 정상 유방 조직 시료 3개, 원발성 유방암 조직 시료 3개 및 유방암 세포주 MCF-7의 총 RNA 20 ㎍씩을 각각 변성시킨 후 1% 포름알데히드 아가로스 겔에 전기영동한 다음 나일론 막(Boehringer-Mannheim, Germany)에 전이시켰다. 이어서 나일론 막을, 레디프라임 II(Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템(Amersham, 영국)을 사용하여 GIG 전장 cDNA의 부분서열인 FC33; FC42 ;FC59; ;FC48;FC82 ;FC86;FC35;FC38;FC122;FC126;FC 102;FC101; FC22; FC123 또는 FC47 cDNA로부터 제조한 32P-표지 무작위 프라임 프로브와 42℃에서 하룻밤 동안 하이브리드화시켰다. 노던 블랏 과정을 동일하게 2회 반복하여 하나는 덴시토미터로 정량하였으며, 다른 하나는 β-액틴 프로브와 하이브리드화시켜 mRNA 총량을 확인하였다.
도 3a는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG8 유 전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3a 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3a 및 3a 하단에서 보듯이, GIG8 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4a는 여러 정상 조직에서 GIG8 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4a 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4a에서 보듯이 뇌, 심장, 근육,대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액조직들에서 약 1.3 kb의 우점(dominant) GIG8 mRNA 전사물이 과발현되었다. 동시에 약 2.5 kb의 GIG8 mRNA 전사물도 정상간 및 말초혈액에서 발현이 확인되었다. 도 5a는 여러 암세포주들에서 GIG8 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5a 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5a에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG8 유전자의 발현수준이 없었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG8 유전자는 정상 유방, 뇌, 심장, 근육,흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐, 대장 및 말초혈액들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3b는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG10 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3b 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3b에서 보듯이, GIG10 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4b는 여러 정상 조직에서 GIG10 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4b 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4b에서 보듯이 뇌, 심장, 근육, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액조직들에서 약 3.5 kb의 우점(dominant) GIG10 mRNA 전사물이 과발현되었다. 그러나 정상 대장에서는 발현이 확인되지 않았다. 동시에 약 2.2 kb의 GIG10 mRNA 전사물도 정상 심장 및 태반에서 발현이 확인되었다. 도 5b는 여러 암세포주들에서 GIG10 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5b 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5b에서 보듯이, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG8 유전자의 발현수준이 없었으나 전 골수성 백혈병 HL-60, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, 및 SW480 결장암 세포주에서는 GIG8 유전자의 발현이 확인되었다.
이러한 결과로부터 본 발명의 GIG10 유전자는 정상 유방, 뇌, 심장, 근육,흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐, 및 말초혈액들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3c는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG13 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3c 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3c에서 보듯이, GIG13 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었 고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4c는 여러 정상 조직에서 GIG13 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4c 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4c에서 보듯이 정상 간조직에서만 약 1.3 kb의 우점(dominant) GIG13 mRNA 전사물이 과발현되었다. 도 5c는 여러 암세포주들에서 GIG13 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5c 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5c에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG13 유전자의 발현수준이 없었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG13 유전자는 정상 유방과 간조직들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3i는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG30 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3i하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3i에서 보듯이, GIG30 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4i는 여러 정상 조직에서 GIG30 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4i하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4i에서 보듯이 심장, 근육, 및 간조직들에서 약 1.9 kb의 우점(dominant) GIG30 mRNA 전사물이 과발현되었다. 동시에 약 1.0 kb의 GIG30 mRNA 전사물도 정상간 및 말초혈액에서 발현이 확인되었다. 도 5i는 여러 암세포주들에서 GIG30 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5i하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5i에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG30 유전자의 발현수준이 없었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG30 유전자는 정상 유방, 심장, 근육, 및 간들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3j는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG32 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3j하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3j에서 보듯이, GIG32 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4j는 여러 정상 조직에서 GIG32 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4j하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4j에서 보듯이 근육,대장, 흉선, 비장, 콩팥, 태반, 폐 및 말초혈액조직들에서 약 4.0 kb의 우점(dominant) GIG32 mRNA 전사물이 과발현되었다. 동시에 약 1.0 kb의 GIG32 mRNA 전사물도 정상 근육 및 대장에서 발현이 확인되었다. 도 5j는 여러 암세포주들에서 GIG32 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5j 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5j에서 보듯이, HeLa 자궁경부암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG32 유전자의 발현수준이 확인되었으나 전 골수성 백혈병 HL-60, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, 및 SW480 결장암 세포주에서는 GIG32 유전자의 발현수준이 없었다.
이러한 결과로부터 본 발명의 GIG32 유전자는 정상 유방, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 태반, 및 말초혈액들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3(l)은 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG34 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3(l) 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3(l)에서 보듯이, GIG34 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4(l)은 여러 정상 조직에서 GIG34 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4(l) 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4(l)에서 보듯이 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액조직들에서 약 0.6 kb의 우점(dominant) GIG34 mRNA 전사물이 과발현되었다. 도 5(l)은 여러 암세포주들에서 GIG34 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5(l) 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5(l)에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포주, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG34 유전자의 발현수준이 약하였다.
이러한 결과로부터 본 발명의 GIG34 유전자는 정상 유방, 뇌, 심장, 근육,대장,흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐, 및 말초혈액들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3m은 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG35 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3m하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3m에서 보듯이, GIG35 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 낮았고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4m은 여러 정상 조직에서 GIG35 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4m 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4m에서 보듯이 뇌, 심장, 근육,대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액조직들에서 약 1.3 kb의 우점(dominant) GIG35 mRNA 전사물이 과발현되었다. 도 5m은 여러 암세포주들에서 GIG35 유전자의 차별 발현 수 준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5m 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5m에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG35 유전자의 발현수준이 낮았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG35 유전자는 정상 유방, 뇌, 심장, 근육,흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐, 대장 및 말초혈액들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3n은 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG38 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3n 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3n에서 보듯이, GIG38 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테 크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4n은 여러 정상 조직에서 GIG38 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4n 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4n에서 보듯이 심장, 근육,콩팥, 간, 및 태반조직들에서 약 0.7 kb의 우점(dominant) GIG38 mRNA 전사물이 과발현되었다. 동시에 약 1.5 kb 및 약 2.0 kb의 GIG38 mRNA 전사물도 정상심장 및 근육에서 발현이 확인되었다. 도 5n은 여러 암세포주들에서 GIG38 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5n 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5n에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG38 유전자의 발현수준이 매우 약하거나 거의 없었다. 정상조직들에서 확인된 약 1.5 kb 및 약 2.0 kb의 GIG38 mRNA 전사물은 암세포주들에서는 모두 발현이 확인되지 않았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG38 유전자는 정상 유방, 심장, 근육, 콩팥, 간, 및 태반들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3(o)는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG39 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3(o) 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3(o)에서 보듯이, GIG39 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4(o)는 여러 정상 조직에서 GIG39 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4(o) 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4(o)에서 보듯이 간조직에서만 약 2.4 kb의 우점(dominant) GIG39 mRNA 전사물이 과발현되었다. 도 5(o)는 여러 암세포주들에서 GIG39 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5(o) 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5(o)에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG39 유전자의 발현수준이 없었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG39 유전자는 정상 유방과 간에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3r은 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG43 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3r 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3r에서 보듯이, GIG43 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4r은 여러 정상 조직에서 GIG43 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4r 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4r에서 보듯이 심장, 콩팥, 간, 태반, 및 폐 조직들에서 약 3.5 kb의 우점(dominant) GIG43 mRNA 전사물이 과발현되었다. 도 5r은 여러 암세포주들에서 GIG43 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5r 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5r에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG8 유전자의 발현수준이 없었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG8 유전자는 정상 유방, 심장, 콩팥, 간, 태반, 및 폐들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3x는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 PIG49 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3x 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3x에서 보듯이, PIG49 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 대장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4x는 여러 정상 조직에서 PIG49 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4x 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4x에서 보듯이 심장, 근육, 콩팥, 간, 및, 태반조직들에서 약 2.4 kb의 우점(dominant) PIG49 mRNA 전사물이 과발현되었다. 동시에 약 1.5 kb의 PIG49 mRNA 전사물도 정상 근육에서 발현이 확인되었다. 도 5x는 여러 암세포주들에서 PIG49 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5x 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5x에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포주. A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 PIG49 유전자의 발현수준이 없거나 매우 약하였다.
이러한 결과로부터 본 발명의 PIG49 유전자는 정상 유방, 심장, 근육,콩팥, 간, 및 태반들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3y는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 PIG51 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3y 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3y에서 보듯이, PIG51 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블 랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4y는 여러 정상 조직에서 PIG51 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4y 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4y에서 보듯이 정상 심장, 근육, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 태반 및 백혈구조직에서 약 1.0 kb의 우점(dominant) PIG51 mRNA 전사물이 과발현되었다. 도 5y는 여러 암세포주들에서 PIG51 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5y 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5y에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 PIG51 유전자의 발현수준이 없었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 PIG51 유전자는 정상 유방과 심장, 근육, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 태반 및 백혈구조직들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3b1는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG44 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3b1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3b1에서 보듯이, GIG44 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4b1는 여러 정상 조직에서 GIG44 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4b1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4b1에서 보듯이 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 백혈구 조직들에서 약 1.0 kb의 우점(dominant) GIG44 mRNA 전사물이 과발현되었다. 또한 정상조직들에서는 약 0.5 kb의 GIG44 mRNA 전사물도 과발현되었다.
도 5b1는 여러 암세포주들에서 GIG44 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5b1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5b1에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG44 유전자의 발현수준이 매우 약하였다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG44 유전자는 정상 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 백혈구 조직들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3c1는 정상 유방 조직, 원발성 유방암 조직 및 유방암 세포주에서 GIG31 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3c1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3c1에서 보듯이, GIG31 유전자의 발현 수준은 정상 유방 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 유방암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮거나 없었고, 유방암 세포주 시료 1개에서도 발현이 매우 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테 크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4c1는 여러 정상 조직에서 GIG31 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4c1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4c1에서 보듯이 유방, 심장, 대장, 비장, 소장, 태반, 폐 및 백혈구조직들에서 약 1.4 kb의 우점(dominant) GIG31 mRNA 전사물이 과발현되었다. 도 5c1는 여러 암세포주들에서 GIG31 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5c1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5c1에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG31 유전자의 발현수준이 없었으며 HeLa 자궁경부암 세포와 A549 폐암 세포주에서는 GIG31 유전자의 발현수준이 매우 약하였다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG31 유전자는 정상 유방, 심장, 대장, 비장, 소장, 태반, 폐 및 백혈구조직들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
3-2;GIG 15
GIG15 유전자의 발현 수준을 조사하기 위해, 노던 블랏을 다음과 같이 실시하였다. 실시예 1에서와 같이, 정상 골수 조직, 백혈병 골수조직 및 K-562 세포로 부터 총 RNA를 추출하였다. 총 RNA 20 ㎍씩을 각각 변성시킨 후 1% 포름알데히드 아가로스 겔에 전기영동한 다음 나일론 막(Boehringer-Mannheim, Germany)에 전이 시켰다. 이어서 나일론 막을, 레디프라임 II(Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템(Amersham, 영국)을 사용하여 GIG15 전장 cDNA의 부분서열인 GV2 cDNA로부터 제조한 32P-표지 무작위 프라임 프로브와 42℃에서 하룻밤 동안 하이브리드화시켰다. 노던 블랏 과정을 동일하게 2회 반복하여 하나는 덴시토미터로 정량하였으며, 다른 하나는 β-액틴 프로브와 하이브리드화시켜 mRNA 총량을 확인하였다.
도 3d는 정상 골수 조직, 백혈병 골수조직 및 K-562 세포로부터 GIG15 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3d 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3d에서 보듯이, GIG15 유전자의 발현 수준은 정상 골수 조직 시료 모두에서 높게 나타났으며, 백혈병 골수 조직 시료에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 낮았고, 백혈병 세포주 시료 1개에서도 발현이 낮았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4d는 여러 정상 조직에서 GIG15 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노 던 블랏 결과이며 도 4d 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4d에서 보듯이 뇌, 심장, 근육,대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액조직들에서 약 0.5 kb의 우점(dominant) GIG15 mRNA 전사물이 과발현되었다. 동시에 약 1.0 kb의 GIG15 mRNA 전사물도 정상간 및 신장에서 발현이 확인되었다. 도 5d는 여러 암세포주들에서 GIG15 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5d 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5d에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG15 유전자의 발현수준이 낮았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG15 유전자는 정상 골수, 뇌, 심장, 근육,흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐, 대장 및 말초혈액들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
3-3; GIG 16, GIG 24, GIG 26,GIG 29,GIG 40,
GIG42
,
PIG33
,
PIG35
,
PIG36
,
PIG37
GIG 또는 PIG 유전자의 발현 수준을 조사하기 위해, 노던 블랏을 다음과 같이 실시하였다.
실시예 1에서 얻은 정상 간 조직 시료 3개, 원발성 간암 조직 시료 3개 및 간암 세포주 HepG2의 총 RNA 20 ㎍씩을 각각 변성시킨 후 1% 포름알데히드 아가로스 겔에 전기영동한 다음 나일론 막(Boehringer-Mannheim, Germany)에 전이시켰다. 이어서 나일론 막을, 레디프라임 II(Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템 (Amersham, 영국)을 사용하여 GIG 또는 PIG 전장 cDNA로부터 제조한 32P-표지 무작위 프라임 프로브와 42℃에서 하룻밤 동안 하이브리드화시켰다. 노던 블랏 과정을 동일하게 2회 반복하여 하나는 덴시토미터로 정량하였으며, 다른 하나는 β-액틴 프로브와 하이브리드화시켜 mRNA 총량을 확인하였다.
도 3e는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 GIG16 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3e 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3e에서 보듯이, GIG16 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4e는 여러 정상 조직에서 GIG16 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4e 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노 던 블랏 결과이다. 도 4e에서 보듯이 간, 및 신장조직에서 약 2.0 kb의 우점(dominant) GIG16 mRNA 전사물이 과발현되었다.
도 5e는 여러 암세포주들에서 GIG16 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5e 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5e에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG16 유전자가 전혀 발현되지 않았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG16 유전자는 정상 간, 신장조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3f는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 GIG24 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3f 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3f에서 보듯이, GIG24 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비 장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4f는 여러 정상 조직에서 GIG24 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4f 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4f에서 보듯이 간, 심장 및 근육 조직에서 약 2.4 kb의 우점(dominant) GIG24 mRNA 전사물이 과발현되었다.
도 5f는 여러 암세포주들에서 GIG24 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5f 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5f에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG24 유전자가 전혀 발현되지 않았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG24 유전자는 정상 간, 심장 및 근육조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3g는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 GIG26 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3g 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3g에서 보듯이, GIG26 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4g는 여러 정상 조직에서 GIG26 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4g 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4g에서 보듯이 간조직에서 약 2.0 kb의 우점(dominant) GIG26 mRNA 전사물이 과발현되었으며 동시에 약 2.5 kb와 1.5 kb의 GIG26 mRNA 전사물도 신장, 뇌 및 심장조직에서 발현되었다. 도 5g는 여러 암세포주들에서 GIG26 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5g 하단은 동일 블랏 을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5g에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG26 유전자가 전혀 발현되지 않았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG26 유전자는 정상 간, 신장, 뇌 및 심장조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3h는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 GIG29 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3h 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3h에서 보듯이, GIG29 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테 크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4h는 여러 정상 조직에서 GIG29 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4h 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4h에서 보듯이 간 조직에서 약 1.4 kb의 우점(dominant) GIG29 mRNA 전사물이 과발현되었다.
도 5h는 여러 암세포주들에서 GIG29 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5h 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5h에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG29 유전자가 전혀 발현되지 않았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG29 유전자는 정상 간조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3p는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 GIG40 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3p 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3p에서 보듯이, GIG40 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4p는 여러 정상 조직에서 GIG40 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4p 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4p에서 보듯이 간, 심장 및 근육 조직에서 약 1.5 kb의 우점(dominant) GIG40 mRNA 전사물이 과발현되었다. 또한 약 5.0 kb의 GIG40 mRNA 전사물도 발현되었다
도 5p는 여러 암세포주들에서 GIG40 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5p 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5p에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG40 유 전자가 매우 약하게 발현되었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG40 유전자는 정상 간, 심장 및 근육조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3q는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 GIG42 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3q 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3q에서 보듯이, GIG42 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4q는 여러 정상 조직에서 GIG42 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노 던 블랏 결과이며 도 4q 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4q에서 보듯이 간 조직에서 약 2.5 kb의 우점(dominant) GIG42 mRNA 전사물이 과발현되었다.
도 5q는 여러 암세포주들에서 GIG42 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5q 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5q에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG42 유전자가 전혀 발현되지 않았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 GIG42 유전자는 정상 간조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3t는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 PIG33 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3t 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3t에서 보듯이, PIG33 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블 랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4t는 여러 정상 조직에서 PIG33 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4t 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4t에서 보듯이 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 및 폐 조직에서 약 3.0 kb의 우점(dominant) PIG33 mRNA 전사물이 과발현되었다.
도 5t는 여러 암세포주들에서 PIG33 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5t 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5t에서 보듯이, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 PIG33 유전자가 전혀 발현이 되지 않았으며 전 골수성 백혈병 HL-60, 및 버킷 림프종 라지에서는 발현이 약하였다. 이러한 결과로부터 본 발명의 PIG33 유전자는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 및 폐 조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있 다. 동시에 백혈병, 자궁암, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3u는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 PIG35 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3u 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3u에서 보듯이, PIG35 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4u는 여러 정상 조직에서 PIG35 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4u 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노 던 블랏 결과이다. 도 4u에서 보듯이 정상 뇌, 심장, 골격근, 간, 소장, 태반, 및 폐 조직에서 약 1.7 kb의 우점(dominant) PIG35 mRNA 전사물이 과발현되었다.
도 5u는 여러 암세포주들에서 PIG35 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5u 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5u에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 PIG35 유전자가 전혀 발현이 되지 않았으나 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562에서는 발현이 약하게 나타났다. 이러한 결과로부터 본 발명의 PIG35 유전자는 정상 정상 뇌, 심장, 골격근, 간, 소장, 태반, 및 폐 조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3v는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 PIG36 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3v 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3v에서 보듯이, PIG36 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블 랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4v는 여러 정상 조직에서 PIG36 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4v 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4v에서 보듯이 간 조직에서 약 1.0 kb의 우점(dominant) PIG36 mRNA 전사물이 과발현되었다.
도 5v는 여러 암세포주들에서 PIG36 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5v 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5v에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 PIG36 유전자가 전혀 발현이 되지 않거나 약하였다. 이러한 결과로부터 본 발명의 PIG36 유전자는 정상 간, 심장, 근육, 콩팥, 및 태반 조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 악성림프종, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3a1는 정상 간조직, 원발성 간암 조직 및 간암 세포주에서 PIG37 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3a1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3a1에서 보듯이, PIG37 유전자의 발현 수준은 정상 간 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 간암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 간암 세포주 시료 1개에서는 나타나지 않았다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4a1는 여러 정상 조직에서 PIG37 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4a1하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4a1에서 보듯이 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 및 폐 조직에서 약 7.0 kb의 우점(dominant) PIG33 mRNA 전사물이 과발현되었다. 동시에 약 2.0 및 1.0 kb의 PIG37 mRNA 전사물이 정상조직들 에서 과발현되었다.
도 5a1는 여러 암세포주들에서 PIG37 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5a1 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5a1에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, SW480 결장암 세포, 및 A549 폐암 세포 및 에서는 PIG37 유전자가 거의 발현이 되지 않았으며 HeLa 자궁경부암 세포, 버킷 림프종 라지 및 G361 흑색종 세포주에서는 발현이 약하였다. 이러한 결과로부터 본 발명의 PIG37 유전자는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 및 폐 조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다. 동시에 백혈병, 자궁암, 대장암, 폐암 및 피부암등에서도 발현이 억제되어 종양 형성을 유도하는 것으로 보아 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
3-4;
GIG46
,
MIG20
GIG 또는 MIG 유전자의 발현 수준을 조사하기 위해, 노던 블랏을 다음과 같이 실시하였다.
실시예 1에서 얻은 정상 자궁경부 조직 시료 3개, 원발성 자궁경부암 조직 시료 3개 및 자궁경부암 세포주 시료 2개의 총 RNA 20 ㎍을 각각 변성시킨 후 1% 포름알데히드 아가로스 겔에 전기영동한 다음 나일론 막(Boehringer-Mannheim, Germany)에 전이시켰다. 이어서 나일론 막을, 실시예 1에서 얻은 GIG46, MIG 20 전장 cDNA를 사용한 32P-표지 무작위 프라임 프로브와 42 ℃에서 하룻밤 동안 하이 브리드화시켰다. 노던 블랏 과정을 동일하게 2회 반복하여 하나는 덴시토미터로 정량하였으며, 다른 하나는 β-액틴 프로브와 하이브리드화시켜 mRNA 총량을 확인하였다.
도 3s는 정상 자궁경부 조직, 원발성 자궁경부암 조직 및 자궁경부암 세포주에서 GIG46 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3s 하단은 β-액틴의 발현을 보여주는 노던 블랏 결과이다. 도 3s에서, 제1열 내지 제3열은 정상 자궁경부 조직 시료이며, 제4열 내지 제6열은 자궁경부암 조직 시료이고, 제7열은 자궁경부암 세포주 HeLa 시료이며, 제8열은 자궁경부암 세포주 CUMC-6 시료이다. 도 3s에서 보듯이, GIG46 유전자의 발현 수준은 정상 자궁경부 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 자궁경부암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 자궁경부암 세포주 시료 2개에서는 나타나지 않았다.
도 4s는 여러 정상 조직에서 GIG46 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4s 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4s에서 보듯이 자궁, 뇌, 심장, 골격근, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액 백혈구들에서 약 1.5 kb의 우점(dominant) GIG46 mRNA 전사물이 과발현되었으며, 이외에 2.0 kb의 전사물도 나타났다.
도 5s는 여러 암세포주들에서 GIG46 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5s 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5s에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 GIG46 유전자의 발현은 약하게 나타났다. 그러나 정상에서 발현이 확인되었던 2.0 kb의 전사물은 암세포주들에서는 발현이 되지 않았다.
이러한 결과로부터 본 발명의 GIG46 유전자는 정상 자궁, 뇌, 심장, 골격근, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초혈액 백혈구들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
도 3w는 정상 자궁경부 조직, 원발성 자궁경부암 조직 및 자궁경부암 세포주에서 MIG20 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3w 하단은 β-액틴의 발현을 보여주는 노던 블랏 결과이다. 도 3w에서, 제1열 내지 제3열은 정상 자궁경부 조직 시료이며, 제4열 내지 제6열은 자궁경부암 조직 시료이고, 제7열은 자궁경부암 세포주 HeLa 시료이며, 제8열은 자궁경부암 세포주 CUMC-6 시료이다. 도 3w에서 보듯이, MIG20 유전자의 발현 수준은 정상 자궁경부 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 자궁경부암 조직 시료 3개에서는 그 발현 정도가 정상 조직에 비하여 매우 낮았고, 자궁경부암 세포주 시료 2개에서는 나타나지 않았다.
도 4w는 여러 정상 조직에서 MIG20 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4w 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4w에서 보듯이 심장, 골격근, 및 간조직들에서 약 4.4 kb의 우점(dominant) MIG20 mRNA 전사물이 과발현되었으며, 이외에 2.4 및 1.5 kb의 전 사물도 나타났다.
도 5w는 여러 암세포주들에서 MIG20 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5w 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5w에서 보듯이, 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 라지, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포주에서는 MIG20 유전자의 발현은 나타나지 않았다. 이러한 결과로부터 본 발명의 MIG2 유전자는 정상 자궁경부, 심장, 골격근, 간조직들에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
3-5;
MIG12
MIG12 유전자의 발현 수준을 조사하기 위해, 노던 블랏을 다음과 같이 실시하였다.
실시예 1에서 얻은 정상 폐 조직 시료 3개, 원발성 폐암 조직 시료 2개, 폐암전이조직 시료 2개 및 폐암 세포주 (A549 및 NCI-H358)의 총 RNA 20 ㎍씩을 각각 변성시킨 후 1% 포름알데히드 아가로스 겔에 전기영동한 다음 나일론 막(Boehringer-Mannheim, Germany)에 전이시켰다. 이어서 나일론 막을, 레디프라임 II(Rediprime II) 무작위 프라임 표지 시스템(Amersham, 영국)을 사용하여 MIG12 전장 cDNA로부터 제조한 32P-표지 무작위 프라임 프로브와 42℃에서 하룻밤 동안 하이브리드화시켰다. 노던 블랏 과정을 동일하게 2회 반복하여 하나는 덴시토미터로 정량하였으며, 다른 하나는 β-액틴 프로브와 하이브리드화시켜 mRNA 총량을 확 인하였다.
도 3z는 정상 폐조직, 원발성 폐암 조직, 폐암전이조직 및 폐암 세포주에서 MIG12 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 3z 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 3z에서 보듯이, MIG9 유전자의 발현 수준은 정상 폐 조직 시료 3개 모두에서 높게 나타났으며, 폐암 조직 시료 2개, 폐암전이조직 시료 2개 및 폐암 세포주 시료 2개에서는 발현이 약하였다.
정상 인간 다중 조직(Clontech)과 인간 암 세포주(Clontech)에 대해 노던 블랏을 수행하였다. 즉, 정상 조직으로는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직과, 암 세포주로서는 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들로부터 추출된 총 RNA 시료가 전이된 블랏(blot)들을 클론테크사(Clontech, 미국)로부터 구입하여 동일한 방법으로 하이브리드화하여 노던 블랏을 실시하였다.
도 4z는 여러 정상 조직에서 MIG12 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이며 도 4z 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 4z에서 보듯이 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 약 0.5 kb의 우점(dominant) MIG12 mRNA 전사물이 높게 과발현되었다. 이외에도 심장, 근육, 간 및 콩팥에서 약 1.0과 0.8 kb 의 전사물로도 발현된다.
도 5z는 여러 암세포주들에서 MIG12 유전자의 차별 발현 수준을 나타내는 노던 블랏 결과이고, 도 5z 하단은 동일 블랏을 β-액틴 프로브로 하이브리드화한 노던 블랏 결과이다. 도 5z에서 보듯이, 정상조직들에서 나타나는 약 0.5 kb의 우점(dominant) MIG12 mRNA 전사물은 전 골수성 백혈병 HL-60, HeLa 자궁경부암 세포, 만성 골수성 백혈병 세포주 K-562, 림프아세포 백혈병 MOLT-4, 버킷 림프종 Raji, SW480 결장암 세포, A549 폐암 세포 및 G361 흑색종 세포들에서는 발현이 약하였다. 이러한 결과로부터 본 발명의 MIG12 유전자는 정상 뇌, 심장, 골격근, 결장, 흉선, 비장, 신장, 간, 소장, 태반, 폐 및 말초 혈액 백혈구 조직에서 종양 억제자(tumor suppresser) 기능을 가짐을 알 수 있다.
실시예 4: 발현 벡터의 제작 및 형질 감염
4-1;
GIG8
,
GIG10
,
GIG13
,
GIG30
,
GIG32
,
GIG33
,
GIG34
,
GIG35
,
GIG38
,
GIG39
,
GIG43
,
PIG49
,
PIG51,GIG44,GIG31
GIG 유전자의 코딩 영역을 포함하는 발현 벡터를 다음과 같이 제작하였다. 먼저 실시예 2에서 얻은 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, 미국) 부위에 삽입하여 발현 벡터 pcDNA3.1/GIG8; pcDNA3.1/GIG10; pcDNA3.1/GIG13; pcDNA3.1/GIG30; pcDNA3.1/GIG32; pcDNA3.1/GIG33; pcDNA3.1/GIG34;pcDNA3.1/GIG35;pcDNA3.1/GIG38;pcDNA3.1/GIG39;pcDNA3.1/GIG43;pcDNA3.1/PIG49 ;pcDNA3.1/PIG51; pcDNA3.1/GIG44 또는 pcDNA3.1/GIG31을 얻었다. 이 발현 벡터를 리포펙타민(lipofectamine, Gibco BRL)을 사용하여 MCF-7 유방암 세포주에 형질감염시킨 후 0.6 ㎎/㎖의 G418(Gibco)이 포함된 DMEM 배지 중에서 배양하여 형질감염된 세포를 선별하였다. 이때 대조군으로는 GIG cDNA가 포함되지 않은 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 MCF-7 세포를 사용하였다.
4-2;GIG 15
GIG 15유전자의 코딩 영역을 포함하는 발현 벡터를 다음과 같이 제작하였다. 먼저 실시예 2에서 얻은 GIG15 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, 미국) 부위에 삽입하여 발현 벡터 pcDNA3.1/GIG15를 얻었다. 이 발현 벡터를 리포펙타민(lipofectamine, Gibco BRL)을 사용하여 K562 백혈병 세포주에 형질감염시킨 후 0.6 ㎎/㎖의 G418(Gibco)이 포함된 DMEM 배지 중에서 배양하여 형질감염된 세포를 선별하였다. 이때 대조군으로는 GIG cDNA가 포함되지 않은 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 K562 세포를 사용하였다.
4-3;GIG 16, GIG 24, GIG 26, GIG 29,
GIG40
,
GIG42
,
PIG33
,
PIG35
,
PIG36,PIG37
GIG 유전자의 코딩 영역을 포함하는 발현 벡터를 다음과 같이 제작하였다. 먼저 실시예 2에서 얻은 GIG16, GIG 24, GIG 26, GIG 29,GIG40,GIG42,PIG33, PIG35,PIG36,또는 PIG37 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, 미국) 부위에 삽입하여 발현 벡터 pcDNA3.1/GIG16 ; pcDNA3.1/GIG 24;pcDNA3.1/GIG26 ;pcDNA3.1/GIG29; ;pcDNA3.1/GIG40 ;pcDNA3.1/GIG42;pcDNA3.1/PIG33 ;pcDNA3.1/PIG35 ;pcDNA3.1/PIG36; 또는 pcDNA3.1/PIG37을 얻었다. 이 발현 벡터를 리포펙타민(lipofectamine, Gibco BRL) 을 사용하여 HepG2 간암 세포주에 형질감염시킨 후 0.6 ㎎/㎖의 G418(Gibco)이 포함된 DMEM 배지 중에서 배양하여 형질감염된 세포를 선별하였다. 이때 대조군으로는 GIG cDNA가 포함되지 않은 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 HepG2 세포를 사용하였다.
4-4;
GIG46
,
MIG20
GIG 또는 MIG 유전자의 코딩 영역을 포함하는 발현 벡터를 다음과 같이 제작하였다. 먼저 실시예 2에서 얻은 GIG46 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, 미국) 부위에 삽입하여 발현 벡터 pcDNA3.1/GIG46;또는 pcDNA3.1/MIG20을 얻었다. 이 발현 벡터를 리포펙타민(lipofectamine, Gibco BRL)을 사용하여 HeLa 자궁경부암 세포주(ATCC CCL-2)에 형질감염시킨 후 0.6 ㎎/㎖의 G418(Gibco)이 포함된 DMEM 배지 중에서 배양하여 형질감염된 세포를 선별하였다. 이때 대조군으로는 GIG46 또는 MIG20 cDNA가 포함되지 않은 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 HeLa 세포를 사용하였다.
4-5;
MIG12
MIG12 유전자의 코딩 영역을 포함하는 발현 벡터를 다음과 같이 제작하였다. 먼저 실시예 2에서 얻은 MIG12 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, 미국) 부위에 삽입하여 발현 벡터 pcDNA3.1/MIG12를 얻었다. 이 발현 벡터를 리포펙타민(lipofectamine, Gibco BRL)을 사용하여 A549 폐암 세포주에 형질감염시킨 후 0.6 ㎎/㎖의 G418(Gibco)이 포함된 DMEM 배지 중에서 배양하여 형질감염된 세포를 선별하였다. 이때 대조군으로는 MIG12 cDNA가 포함되지 않은 발현 벡터 pcDNA3.1로 형질감염된 A549 세포를 사용하였다.
실시예 5: GIG 유전자로 형질감염된 유방암 세포의 성장 곡선
5-1; GIG8 , GIG 10, GIG 13,GIG 30,GIG 32, GIG 33, GIG34 , GIG35 , GIG38 , GIG39 , GIG43 , PIG49 , PIG51,GIG44,GIG31
GIG 유전자가 유방암 세포의 성장에 미치는 영향을 조사하기 위해, 1 x 105개의 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG8; pcDNA3.1/GIG10; pcDNA3.1/GIG13; pcDNA3.1/GIG30; pcDNA3.1/GIG32; pcDNA3.1/GIG33;pcDNA3.1/GIG34;pcDNA3.1/GIG35;pcDNA3.1/GIG38;pcDNA3.1/GIG39;pcDNA3.1/GIG43;pcDNA3.1/PIG49 ;pcDNA3.1/PIG51;pcDNA3.1/GIG44 또는 pcDNA3.1/GIG31로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포를 각각 DMEM 배지에서 9일 동안 배양하였다. 각 배양액에서 플라스크에 부착된 세포를 트립신(Sigma) 처리하여 유리시킨 후 생존한 세포를 트립판 블루 염색 배제법(trypan blue dye exclusion, Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))에 따라 1일, 3일, 5일, 7일 및 9일째에 계수하였다.
도 6a는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG8로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6a에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG8로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경 우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG8로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 30%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG8 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6b는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG10으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6b에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG10으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG10으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 40%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG10 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6c는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG13으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6c에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG13으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG13으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 30%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG13 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6i는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG30으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성 장 곡선이다. 도 6i에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG30으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG30으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 30%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG30 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6j는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG32로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6j에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG32로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG32로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 50%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG32 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6k는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG33으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6k에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG33으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG33으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG33 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6(l)은 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG34으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6(l)에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG34으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG34으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 80%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG34 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6m은 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG35로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6m에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG35로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG35로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG35 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6n은 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG38로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6n에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG38로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG38로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG38 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6(o)는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG39로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6(o)에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG39로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG39로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 40%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG39 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6r은 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG43으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6r에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG43으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG43으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG43 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6x는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/PIG49로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6x에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/PIG49로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포 의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/PIG49로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, PIG49 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6y는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/PIG51으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6y에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/PIG51으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/PIG51으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 40%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, PIG51 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6b1는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG44으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6b1에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG44으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG44으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG44 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6c1는 야생형 MCF-7 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG31으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 MCF-7 세포의 성장 곡선이다. 도 6c1에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG31으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 MCF-7 세포 및 야생형 MCF-7 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 MCF-7 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG31으로 형질감염된 MCF-7 유방암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG31 유전자는 유방암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
5-2;GIG 15,
GIG 유전자가 백혈병 세포의 성장에 미치는 영향을 조사하기 위해, 1 x 105개의 야생형 K562 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG15로 형질감염된 K562 백혈병 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 K562 세포를 각각 DMEM 배지에서 9일 동안 배양하였다. 각 배양액에서 플라스크에 부착된 세포를 트립신(Sigma) 처리하여 유리시킨 후 생존한 세포를 트립판 블루 염색 배제법(trypan blue dye exclusion, Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))에 따라 1일, 3일, 5일, 7일 및 9일째에 계수하였다.
도 6d는 야생형 K562 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG15로 형질감염된 K562 백혈병세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 K562 세포의 성장 곡선이다. 도 6d에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG15로 형질감염된 K562 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 K562 세포 및 야생형 K562 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 K562 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG15로 형질감염된 K562 세포의 약 80%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG15 유전자는 백혈병 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
5-3;GIG 16, GIG 24, GIG 26,
GIG29
,
GIG40
,
GIG42
,
PIG33
,
PIG35
,
PIG36
,
PIG37
GIG 또는 PIG 유전자가 간암 세포의 성장에 미치는 영향을 조사하기 위해, 1 x 105개의 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG16; pcDNA3.1/GIG24 ; pcDNA3.1/GIG26; pcDNA3.1/GIG29; pcDNA3.1/GIG40 ; pcDNA3.1/GIG42; pcDNA3.1/PIG33 ;pcDNA3.1/PIG35 ;pcDNA3.1/PIG36 또는 pcDNA3.1/PIG37로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포를 각각 DMEM 배지에서 9일 동안 배양하였다. 각 배양액에서 플라스크에 부착된 세포를 트립신(Sigma) 처리하여 유리시킨 후 생존한 세포를 트립판 블루 염색 배제법(trypan blue dye exclusion, Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))에 따라 1일, 3일, 5일, 7일 및 9일째에 계수하였다.
도 6e는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG16으로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6e에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG16으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG16으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG16 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6f는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG24로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6f에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG24로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG24로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG24 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6g는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG26으로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6g에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG26으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG26으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 50%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG26 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6h는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG29로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6h에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG29로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우 보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG29로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG29 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6p는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG40으로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6p에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG40으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG40으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 80%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG40 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6q는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/GIG42로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6q에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/GIG42로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/GIG42로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG42 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6t는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/PIG33으로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6t에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/PIG33으로 형질감염된 HepG2 간암 세 포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/PIG33으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, PIG33 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6u는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/PIG35로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6u에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/PIG35로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/PIG35로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, PIG35 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6v는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/PIG36으로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성장 곡선이다. 도 6v에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/PIG36으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/PIG36으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, PIG36 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6a1는 야생형 HepG2 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/PIG37으로 형질감염된 HepG2 간암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 HepG2 세포의 성 장 곡선이다. 도 6a1에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/PIG37으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 HepG2 세포 및 야생형 HepG2 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 HepG2 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/PIG37으로 형질감염된 HepG2 간암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, PIG37 유전자는 간암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
5-4;
GIG46
,
MIG20
GIG 유전자가 자궁경부암 세포의 성장에 미치는 영향을 조사하기 위해, 1 x 105개의 정상 HeLa 세포, 실시예 4에서 얻은 GIG46 유전자로 형질감염된 HeLa 자궁경부암 세포 및 pCDNA3.1(Invitrogen)으로 형질감염된 HeLa 세포를 각각 RPMI 배지에서 9일 동안 배양하였다. 각 배양액에서 플라스크에 부착된 세포를 트립신(Sigma) 처리하여 유리시킨 후 생존한 세포를 트립판 블루 염색 배제법(trypan blue dye exclustion, Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))에 따라 1일, 3일, 5일, 7일 및 9일째에 계수하였다.
도 6s는 정상 HeLa 세포, 실시예 4에서 얻은 GIG46 유전자로 형질감염된 HeLa 자궁경부암 세포 및 pCDNA3.1으로 형질감염된 HeLa 세포의 성장 곡선이다. 도 6s에서 보듯이, GIG46 유전자로 형질감염된 HeLa 자궁경부암 세포의 사멸률은 pCDNA3.1으로 형질감염된 HeLa 세포 및 정상 HeLa 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 정상 HeLa 세포와 비교할 때 GIG46으로 형질감염된 HeLa 자궁경 부암 세포의 80%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, GIG46 유전자는 자궁경부암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
도 6w는 정상 HeLa 세포, 실시예 4에서 얻은 MIG20 유전자로 형질감염된 HeLa 자궁경부암 세포 및 pCDNA3.1으로 형질감염된 HeLa 세포의 성장 곡선이다. 도 6w에서 보듯이, MIG20 유전자로 형질감염된 HeLa 자궁경부암 세포의 사멸률은 pCDNA3.1으로 형질감염된 HeLa 세포 및 정상 HeLa 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 정상 HeLa 세포와 비교할 때 MIG20으로 형질감염된 HeLa 자궁경부암 세포의 약 60%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, MIG20 유전자는 자궁경부암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
5-5;
MIG12
MIG12 유전자가 폐암 세포의 성장에 미치는 영향을 조사하기 위해, 1 x 105개의 야생형 A549 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/MIG12로 형질감염된 A549 폐암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 A549 세포를 각각 DMEM 배지에서 9일 동안 배양하였다. 각 배양액에서 플라스크에 부착된 세포를 트립신(Sigma) 처리하여 유리시킨 후 생존한 세포를 트립판 블루 염색 배제법(trypan blue dye exclusion, Freshney, I.R., Culture of Animal Cells, 2nd Ed. A.R. Liss, New York (1987))에 따라 1일, 3일, 5일, 7일 및 9일째에 계수하였다.
도 6z은 야생형 A549 세포, 실시예 4에서 얻은 벡터 pcDNA3.1/MIG12로 형질 감염된 A549 폐암 세포 및 벡터 pcDNA3.1로만 형질감염시킨 A549 세포의 성장 곡선이다. 도 6z에서 보듯이, 벡터 pcDNA3.1/MIG12로 형질감염된 A549 폐암 세포의 사멸률은 벡터 pcDNA3.1으로 형질감염된 A549 세포 및 야생형 A549 세포의 경우보다 높게 나타났다. 배양 후 9일째에는 야생형 A549 세포와 비교할 때 벡터 pcDNA3.1/MIG12로 형질감염된 A549 폐암 세포의 약 70%만이 생존하였다. 이러한 결과로부터, MIG12 유전자는 폐암 세포의 성장을 억제함을 알 수 있다.
본 발명의 GIG, PIG 또는 MIG 유전자는 인간 암의 진단, 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
<110> KIM, HYUN-KEE
<120> HUMAN CANCER SUPPRESSOR GENE, PROTEIN ENCODED THEREIN
<160> 116
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 531
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
tcgggcttca ttctgagccg agcccggtgc caagcgcagc tagctcagca ggcggcagcg 60
gcggcctgag cttcagggca gccagctccc tcccggtctc gccttccctc gcggtcagca 120
tgaaagcctt cagtcccgtg aggtccgtta ggaaaaacag cctgtcggac cacagcctgg 180
gcatctcccg gagcaaaacc cctgtggacg acccgatgag cctgctatac aacatgaacg 240
actgctactc caagctcaag gagctggtgc ccagcatccc ccagaacaag aaggtgagca 300
agatggaaat cctgcagcac gtcatcgact acatcttgga cctgcagatc gccctggact 360
cgcatcccac tattgtcagc ctgcatcacc agagacccgg gcagaaccag gcgtccagga 420
cgccgctgac caccctcaac acggatatca gcatcctgtc cttgcaggct tctgaattcc 480
cttctgagtt aatgtcaaat gacagcaaag cactgtgtgg ctgaataagc g 531
<210> 2
<211> 134
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Lys Ala Phe Ser Pro Val Arg Ser Val Arg Lys Asn Ser Leu Ser
1 5 10 15
Asp His Ser Leu Gly Ile Ser Arg Ser Lys Thr Pro Val Asp Asp Pro
20 25 30
Met Ser Leu Leu Tyr Asn Met Asn Asp Cys Tyr Ser Lys Leu Lys Glu
35 40 45
Leu Val Pro Ser Ile Pro Gln Asn Lys Lys Val Ser Lys Met Glu Ile
50 55 60
Leu Gln His Val Ile Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Ile Ala Leu Asp
65 70 75 80
Ser His Pro Thr Ile Val Ser Leu His His Gln Arg Pro Gly Gln Asn
85 90 95
Gln Ala Ser Arg Thr Pro Leu Thr Thr Leu Asn Thr Asp Ile Ser Ile
100 105 110
Leu Ser Leu Gln Ala Ser Glu Phe Pro Ser Glu Leu Met Ser Asn Asp
115 120 125
Ser Lys Ala Leu Cys Gly
130
<210> 3
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP33 primer for GIG8
<400> 3
aagcttgctg ctc 13
<210> 4
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG8
<400> 4
aagctttttt ttttta 16
<210> 5
<211> 2090
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
gcctccgcca actttcacgc tgcctcggcg gcccggcccg gctcgacgcc aatggtggag 60
gccatagtgg agtttgacta ccaggcccag cacgatgatg agctgacgat cagcgtgggt 120
gaaatcatca ccaacatcag gaaggaggat ggaggctggt gggagggaca gatcaacggc 180
aggagaggtt tgttccctga caactttgta agagaaataa agaaagagat gaagaaagac 240
cctctcacca acaaagctcc agaaaagccc ctgcacgaag tgcccagtgg aaactctttg 300
ctgtcttctg aaacgatttt aagaaccaat aagagaggcg agcgacggag gcgccggtgc 360
caggtggcat tcagctacct gccccagaat gacgatgaac ttgagctgaa agttggcgac 420
atcatagagg tggtaggaga ggtagaggaa ggatggtggg aaggtgttct caacgggaag 480
actggaatgt ttccttccaa cttcatcaag gagctgtcag gggagtcgga tgagcttggc 540
atttcccagg atgagcagct atccaagtca agtttaaggg aaaccacagg ctccgagagt 600
gatgggggtg actcaagcag caccaagtct gaaggtgcca acgggacagt ggcaactgca 660
gcaatccagc ccaagaaagt taagggagtg ggctttggag acattttcaa agacaagcca 720
atcaaactaa gaccaaggtc aattgaagta gaaaatgact ttctgccggt agaaaagact 780
attgggaaga agttacctgc aactacagca actccagact catcaaaaac agaaatggac 840
agcaggacaa agagcaagga ttactgcaaa gtaatatttc catatgaggc acagaatgat 900
gatgaattga caatcaaaga aggagatata gtcactctca tcaataagga ctgcatcgac 960
gtaggctggt gggaaggaga gctgaacggc agacgaggcg tgttccccga taacttcgtg 1020
aagttacttc caccggactt tgaaaaggaa gggaatagac ccaagaagcc accgcctcca 1080
tccgctcctg tcatcaaaca aggggcaggc accactgaga gaaaacatga aattaaaaag 1140
atacctcctg aaagaccaga aatgcttcca aacagaacag aagaaaaaga aagaccagag 1200
agagagccaa aactggattt acagaagccc tccgttcctg ccataccgcc aaaaaagcct 1260
cggccaccta agaccaattc tctcagcaga cctggcgcac tgcccccgag aaggccggag 1320
agaccggtgg gtccgctgac acacaccagg ggtgacagtc caaagattga cttggccggc 1380
agttcgctat ctggcatcct ggacaaagat ctctcggacc gcagcaatga cattgactta 1440
gaaggttttg actccgtggt atcatctact gagaaactca gtcatccgac cacaagcaga 1500
ccaaaagcta cagggaggcg gcctccgtcc cagtccctca catcttcatc cctttcaagc 1560
cctgatatct tcgactcccc aagtcccgaa gaggataagg aggaacacat ttcacttgcg 1620
cacagaggag tggacgcgtc aaagaaaact tccaagactg ttaccatatc ccaagtgtct 1680
gacaacaaag catccctgcc gcccaagccg gggaccatgg cagcaggtgg cggtgggcca 1740
gcccctctgt cctcagcggc gccctccccc ctgtcatcct ctttgggaac agctggacac 1800
agagccaact ccccgtctct gttcggcacg gaaggaaaac caaagatgga gcctgcggcc 1860
agcagccagg cggccgtgga ggagctaagg acacaggtcc gcgagctgag gagcatcatc 1920
gagaccatga aggaccagca gaaacgagag attaaacagt tattgtctga gttggatgaa 1980
gagaagaaaa tccggcttcg gttgcagatg gaagtgaacg acataaagaa agctctacaa 2040
tcaaaatgaa tacttgatca atgaaatgtc acattattca tcctgagtcc 2090
<210> 6
<211> 665
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
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Glu Leu Thr Ile Ser Val Gly Glu Ile Ile Thr Asn Ile Arg Lys Glu
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Asp Gly Gly Trp Trp Glu Gly Gln Ile Asn Gly Arg Arg Gly Leu Phe
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Pro Asp Asn Phe Val Arg Glu Ile Lys Lys Glu Met Lys Lys Asp Pro
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Leu Thr Asn Lys Ala Pro Glu Lys Pro Leu His Glu Val Pro Ser Gly
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Asn Ser Leu Leu Ser Ser Glu Thr Ile Leu Arg Thr Asn Lys Arg Gly
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100 105 110
Asn Asp Asp Glu Leu Glu Leu Lys Val Gly Asp Ile Ile Glu Val Val
115 120 125
Gly Glu Val Glu Glu Gly Trp Trp Glu Gly Val Leu Asn Gly Lys Thr
130 135 140
Gly Met Phe Pro Ser Asn Phe Ile Lys Glu Leu Ser Gly Glu Ser Asp
145 150 155 160
Glu Leu Gly Ile Ser Gln Asp Glu Gln Leu Ser Lys Ser Ser Leu Arg
165 170 175
Glu Thr Thr Gly Ser Glu Ser Asp Gly Gly Asp Ser Ser Ser Thr Lys
180 185 190
Ser Glu Gly Ala Asn Gly Thr Val Ala Thr Ala Ala Ile Gln Pro Lys
195 200 205
Lys Val Lys Gly Val Gly Phe Gly Asp Ile Phe Lys Asp Lys Pro Ile
210 215 220
Lys Leu Arg Pro Arg Ser Ile Glu Val Glu Asn Asp Phe Leu Pro Val
225 230 235 240
Glu Lys Thr Ile Gly Lys Lys Leu Pro Ala Thr Thr Ala Thr Pro Asp
245 250 255
Ser Ser Lys Thr Glu Met Asp Ser Arg Thr Lys Ser Lys Asp Tyr Cys
260 265 270
Lys Val Ile Phe Pro Tyr Glu Ala Gln Asn Asp Asp Glu Leu Thr Ile
275 280 285
Lys Glu Gly Asp Ile Val Thr Leu Ile Asn Lys Asp Cys Ile Asp Val
290 295 300
Gly Trp Trp Glu Gly Glu Leu Asn Gly Arg Arg Gly Val Phe Pro Asp
305 310 315 320
Asn Phe Val Lys Leu Leu Pro Pro Asp Phe Glu Lys Glu Gly Asn Arg
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Pro Lys Lys Pro Pro Pro Pro Ser Ala Pro Val Ile Lys Gln Gly Ala
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<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP10 primer for GIG10
<400> 7
aagcttccac gta 13
<210> 8
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG10
<400> 8
aagctttttt tttttc 16
<210> 9
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<212> DNA
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<400> 9
gactgcaaag tgagcgagaa gcaggctgcg ggccgtccca gcacgacgtg gagccccgcg 60
gagacctcga gatgccccgc ggggaagctc ctggccccgg gagacggggg gctaaggacg 120
aggccctggg cgaagaatcg ggggagcggt ggagccccga gttccatctg cagaggaaat 180
tggcggacag cagccacagt gaacagcaag atcgaaacag agtttctgaa gaacttatca 240
tggttgtcca agaaatgaaa aaatacttcc cctcggagag acgcaataaa ccaagcactc 300
tagatgccct caactatgct ctccgctgtg tccacagcgt tcaagcaaac agtgagtttt 360
tccagattct cagtcagaat ggagcacctc aggcagatgt gagcatgtac agtcttgagg 420
agctggccac tatcgcttca gaacacactt ccaaaaacac agataccttt gtggcagtat 480
tttcatttct gtctggaagg ttagtgcaca tttctgaaca ggctgctttg atcctgaatc 540
gtaagaaaga tgtcctggcg tcttctcact ttgttgacct gcttgcacct caagacatga 600
gggtattcta cgcgcacact gccagagctc agcttccttt ctggaacaac tggacccaaa 660
gagctgcacg gtatgaatgt gctccggtga aacctttttt ctgcaggatc cgtggaggtg 720
aagacagaaa gcaagagaag tgtcactccc cattccggat catcccctat ctgattcatg 780
tacatcaccc tgcccagcca gaattggaat cggaaccttg ctgtctcact gtggttgaaa 840
agattcactc tggttatgaa gctcctcgga tcccagtgaa taaaagaatc ttcaccacca 900
cacacacccc agggtgtgtt tttcttgaag tagatgaaaa agcagtgcct ttgctgggtt 960
acctacctca ggacctgatt ggaacatcga tcctaagcta cctgcaccct gaagatcgtt 1020
ctctgatggt tgccatacac caaaaagttt tgaagtatgc agggcatcct ccctttgaac 1080
attctcccat tcgattttgt actcaaaacg gagactacat catactggat tccagttggt 1140
ccagctttgt gaatccctgg agccggaaga tttctttcat cattggtcgg cataaagttc 1200
gaacgagccc actaaatgag gatgtttttg ctaccaaaat taaaaagatg aacgataatg 1260
acaaagacat aacagaatta caagaacaaa tttacaaact tctcttacag ccagttcacg 1320
tgagcgtgtc cagcggctac gggagcctgg ggagcagcgg gtcgcaggag cagcttgtca 1380
gcatcgcctc ctccagtgag gccagtgggc accgtgtgga ggagacgaag gcggagcaga 1440
tgaccttgca gcaggtctat gccagtgtga acaaaattaa aaatctgggt cagcagctct 1500
acattgagtc aatgaccaaa tcatcattca agccagtgac ggggacacgc acagaaccga 1560
atggtggtgg tgaatgtaag acctttactt ccttccacca aacactgaaa aacaatagtg 1620
tgtacactga gccctgtgag gatttgagga acgatgagca cagcccatcc tatcaacaga 1680
tcaactgtat cgacagtgtc atcagatacc tgaagagcta caacattcca gctttgaaaa 1740
gaaagtgtat ctcctgtaca aatacaactt cttcctcctc agaagaagac aaacagaacc 1800
acaaggcaga tgatgtccaa gccttacaag ctggtttgca aatcccagcc atacctaaat 1860
cagaaatgcc aacaaatgga cggtccatag acacaggagg aggagctcca cagatcctgt 1920
ccacggcgat gctgagcttg gggtcgggca taagccaatg cggttacagc agcaccattg 1980
tccatgtccc acccccagag acagccaggg atgctaccct cttctgtgag ccctggaccc 2040
tgaacatgca gccagcccct ttgacctcgg aagaatttaa acacgtgggg ctcacagcgg 2100
ctgttctgtc agcgcacacc cagaaggaag agcagaatta tgttgataaa ttccgagaaa 2160
agatcctgtc atcaccctac agctcctatc ttcagcaaga aagcaggagc aaagctaaat 2220
attcatattt tcaaggagat tctacttcca agcagacgcg gtcggccggc tgcaggaaag 2280
ggaagcacaa gcggaagaag ctgccggagc cgccagacag cagcagctcg aacaccggct 2340
ctggtccccg caggggagcg catcagaacg cacagccctg ctgcccctcc gcggcctcct 2400
ctccgcacac ctcgagcccg accttcccac ctgccgccat ggtgcccagc caggcccctt 2460
acctcgtccc agcttttccc ctcccagccg cgacctcacc cggaagagaa tacgcagccc 2520
ccggaactgc accggaaggc ctgcatgggc tgcccttgtc cgagggcttg cagccttacc 2580
cagctttccc ttttccttac ttggatactt ttatgaccgt tttcctgcct gacccccctg 2640
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ctgcgatatc accctcaatg tcgtcagcaa tgagtccaac tctggaccca cccccttcag 2760
tcaccagcca aaggagagag gaggaaaagt gggaggcaca aagcgagggg cacccgttca 2820
ttacttcgag aagcagctca cccttgcagt taaacttact tcaggaagag atgcccagac 2880
cctctgaatc tccagatcag atgagaagga acacgtgccc acaaactgag tattgtgtta 2940
caggcaacaa tggcagtgag agcagtcctg ctactaccgg tgcactgtcc acggggtcac 3000
ctcccaggga gaatccatcc catcctactg ccagcgctct gtccacagga tcgcctccca 3060
tgaagaatcc atcccatcct actgccagcg ctctgtccac aggatcgcct cccatgaaga 3120
atccatccca tcctactgcc agcacactgt ccatgggatt gcctcccagc aggactccat 3180
cccatcctac tgccactgtt ctgtccacgg ggtcacctcc cagcgaatcc ccatccagaa 3240
ctggttcagc agcatcagga agcagcgaca gcagtatata ccttactagt agtgtttatt 3300
cttctaaaat ctcccaaaat gggcagcaat ctcaggacgt acagaaaaaa gaaacatttc 3360
ctaatgtcgc cgaagagccc atctggagaa tgatacggca gacacctgag cgcattctca 3420
tgacatacca ggtacctgag agggttaaag aagttgtact aaaagaagac ctggaaaagc 3480
tagaaagtat gaggcagcag cagccccagt tttctcatgg gcaaaaggag gagctggcta 3540
aggtgtataa ttggattcaa agccagactg tcactcaaga aatcgacatt caagcctgtg 3600
tcacttgtga aaatgaagat tcagctgatg gtgcggccac atcctgtggt caggttctgg 3660
tagaagacag ctgttgagtg actgtgagga tgaaccttca taccctttcc aagacgtg 3718
<210> 10
<211> 1201
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Met Pro Arg Gly Glu Ala Pro Gly Pro Gly Arg Arg Gly Ala Lys Asp
1 5 10 15
Glu Ala Leu Gly Glu Glu Ser Gly Glu Arg Trp Ser Pro Glu Phe His
20 25 30
Leu Gln Arg Lys Leu Ala Asp Ser Ser His Ser Glu Gln Gln Asp Arg
35 40 45
Asn Arg Val Ser Glu Glu Leu Ile Met Val Val Gln Glu Met Lys Lys
50 55 60
Tyr Phe Pro Ser Glu Arg Arg Asn Lys Pro Ser Thr Leu Asp Ala Leu
65 70 75 80
Asn Tyr Ala Leu Arg Cys Val His Ser Val Gln Ala Asn Ser Glu Phe
85 90 95
Phe Gln Ile Leu Ser Gln Asn Gly Ala Pro Gln Ala Asp Val Ser Met
100 105 110
Tyr Ser Leu Glu Glu Leu Ala Thr Ile Ala Ser Glu His Thr Ser Lys
115 120 125
Asn Thr Asp Thr Phe Val Ala Val Phe Ser Phe Leu Ser Gly Arg Leu
130 135 140
Val His Ile Ser Glu Gln Ala Ala Leu Ile Leu Asn Arg Lys Lys Asp
145 150 155 160
Val Leu Ala Ser Ser His Phe Val Asp Leu Leu Ala Pro Gln Asp Met
165 170 175
Arg Val Phe Tyr Ala His Thr Ala Arg Ala Gln Leu Pro Phe Trp Asn
180 185 190
Asn Trp Thr Gln Arg Ala Ala Arg Tyr Glu Cys Ala Pro Val Lys Pro
195 200 205
Phe Phe Cys Arg Ile Arg Gly Gly Glu Asp Arg Lys Gln Glu Lys Cys
210 215 220
His Ser Pro Phe Arg Ile Ile Pro Tyr Leu Ile His Val His His Pro
225 230 235 240
Ala Gln Pro Glu Leu Glu Ser Glu Pro Cys Cys Leu Thr Val Val Glu
245 250 255
Lys Ile His Ser Gly Tyr Glu Ala Pro Arg Ile Pro Val Asn Lys Arg
260 265 270
Ile Phe Thr Thr Thr His Thr Pro Gly Cys Val Phe Leu Glu Val Asp
275 280 285
Glu Lys Ala Val Pro Leu Leu Gly Tyr Leu Pro Gln Asp Leu Ile Gly
290 295 300
Thr Ser Ile Leu Ser Tyr Leu His Pro Glu Asp Arg Ser Leu Met Val
305 310 315 320
Ala Ile His Gln Lys Val Leu Lys Tyr Ala Gly His Pro Pro Phe Glu
325 330 335
His Ser Pro Ile Arg Phe Cys Thr Gln Asn Gly Asp Tyr Ile Ile Leu
340 345 350
Asp Ser Ser Trp Ser Ser Phe Val Asn Pro Trp Ser Arg Lys Ile Ser
355 360 365
Phe Ile Ile Gly Arg His Lys Val Arg Thr Ser Pro Leu Asn Glu Asp
370 375 380
Val Phe Ala Thr Lys Ile Lys Lys Met Asn Asp Asn Asp Lys Asp Ile
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Thr Glu Leu Gln Glu Gln Ile Tyr Lys Leu Leu Leu Gln Pro Val His
405 410 415
Val Ser Val Ser Ser Gly Tyr Gly Ser Leu Gly Ser Ser Gly Ser Gln
420 425 430
Glu Gln Leu Val Ser Ile Ala Ser Ser Ser Glu Ala Ser Gly His Arg
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Val Glu Glu Thr Lys Ala Glu Gln Met Thr Leu Gln Gln Val Tyr Ala
450 455 460
Ser Val Asn Lys Ile Lys Asn Leu Gly Gln Gln Leu Tyr Ile Glu Ser
465 470 475 480
Met Thr Lys Ser Ser Phe Lys Pro Val Thr Gly Thr Arg Thr Glu Pro
485 490 495
Asn Gly Gly Gly Glu Cys Lys Thr Phe Thr Ser Phe His Gln Thr Leu
500 505 510
Lys Asn Asn Ser Val Tyr Thr Glu Pro Cys Glu Asp Leu Arg Asn Asp
515 520 525
Glu His Ser Pro Ser Tyr Gln Gln Ile Asn Cys Ile Asp Ser Val Ile
530 535 540
Arg Tyr Leu Lys Ser Tyr Asn Ile Pro Ala Leu Lys Arg Lys Cys Ile
545 550 555 560
Ser Cys Thr Asn Thr Thr Ser Ser Ser Ser Glu Glu Asp Lys Gln Asn
565 570 575
His Lys Ala Asp Asp Val Gln Ala Leu Gln Ala Gly Leu Gln Ile Pro
580 585 590
Ala Ile Pro Lys Ser Glu Met Pro Thr Asn Gly Arg Ser Ile Asp Thr
595 600 605
Gly Gly Gly Ala Pro Gln Ile Leu Ser Thr Ala Met Leu Ser Leu Gly
610 615 620
Ser Gly Ile Ser Gln Cys Gly Tyr Ser Ser Thr Ile Val His Val Pro
625 630 635 640
Pro Pro Glu Thr Ala Arg Asp Ala Thr Leu Phe Cys Glu Pro Trp Thr
645 650 655
Leu Asn Met Gln Pro Ala Pro Leu Thr Ser Glu Glu Phe Lys His Val
660 665 670
Gly Leu Thr Ala Ala Val Leu Ser Ala His Thr Gln Lys Glu Glu Gln
675 680 685
Asn Tyr Val Asp Lys Phe Arg Glu Lys Ile Leu Ser Ser Pro Tyr Ser
690 695 700
Ser Tyr Leu Gln Gln Glu Ser Arg Ser Lys Ala Lys Tyr Ser Tyr Phe
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Gln Gly Asp Ser Thr Ser Lys Gln Thr Arg Ser Ala Gly Cys Arg Lys
725 730 735
Gly Lys His Lys Arg Lys Lys Leu Pro Glu Pro Pro Asp Ser Ser Ser
740 745 750
Ser Asn Thr Gly Ser Gly Pro Arg Arg Gly Ala His Gln Asn Ala Gln
755 760 765
Pro Cys Cys Pro Ser Ala Ala Ser Ser Pro His Thr Ser Ser Pro Thr
770 775 780
Phe Pro Pro Ala Ala Met Val Pro Ser Gln Ala Pro Tyr Leu Val Pro
785 790 795 800
Ala Phe Pro Leu Pro Ala Ala Thr Ser Pro Gly Arg Glu Tyr Ala Ala
805 810 815
Pro Gly Thr Ala Pro Glu Gly Leu His Gly Leu Pro Leu Ser Glu Gly
820 825 830
Leu Gln Pro Tyr Pro Ala Phe Pro Phe Pro Tyr Leu Asp Thr Phe Met
835 840 845
Thr Val Phe Leu Pro Asp Pro Pro Val Cys Pro Leu Leu Ser Pro Ser
850 855 860
Phe Leu Pro Cys Pro Phe Leu Gly Ala Thr Ala Ser Ser Ala Ile Ser
865 870 875 880
Pro Ser Met Ser Ser Ala Met Ser Pro Thr Leu Asp Pro Pro Pro Ser
885 890 895
Val Thr Ser Gln Arg Arg Glu Glu Glu Lys Trp Glu Ala Gln Ser Glu
900 905 910
Gly His Pro Phe Ile Thr Ser Arg Ser Ser Ser Pro Leu Gln Leu Asn
915 920 925
Leu Leu Gln Glu Glu Met Pro Arg Pro Ser Glu Ser Pro Asp Gln Met
930 935 940
Arg Arg Asn Thr Cys Pro Gln Thr Glu Tyr Cys Val Thr Gly Asn Asn
945 950 955 960
Gly Ser Glu Ser Ser Pro Ala Thr Thr Gly Ala Leu Ser Thr Gly Ser
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Gly Ser Pro Pro Met Lys Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser Ala Leu
995 1000 1005
Ser Thr Gly Ser Pro Pro Met Lys Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser
1010 1015 1020
Thr Leu Ser Met Gly Leu Pro Pro Ser Arg Thr Pro Ser His Pro Thr
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Ala Thr Val Leu Ser Thr Gly Ser Pro Pro Ser Glu Ser Pro Ser Arg
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Thr Gly Ser Ala Ala Ser Gly Ser Ser Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Thr
1060 1065 1070
Ser Ser Val Tyr Ser Ser Lys Ile Ser Gln Asn Gly Gln Gln Ser Gln
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Asp Val Gln Lys Lys Glu Thr Phe Pro Asn Val Ala Glu Glu Pro Ile
1090 1095 1100
Trp Arg Met Ile Arg Gln Thr Pro Glu Arg Ile Leu Met Thr Tyr Gln
1105 1110 1115 1120
Val Pro Glu Arg Val Lys Glu Val Val Leu Lys Glu Asp Leu Glu Lys
1125 1130 1135
Leu Glu Ser Met Arg Gln Gln Gln Pro Gln Phe Ser His Gly Gln Lys
1140 1145 1150
Glu Glu Leu Ala Lys Val Tyr Asn Trp Ile Gln Ser Gln Thr Val Thr
1155 1160 1165
Gln Glu Ile Asp Ile Gln Ala Cys Val Thr Cys Glu Asn Glu Asp Ser
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Ala Asp Gly Ala Ala Thr Ser Cys Gly Gln Val Leu Val Glu Asp Ser
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Cys
<210> 11
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP5 primer for GIG13
<400> 11
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<210> 12
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG13
<400> 12
aagctttttt tttttc 16
<210> 13
<211> 351
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
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gtggcaagca ccaaccccat aaagtgacac agtacaagaa gggcaaggat tctctgtacg 120
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ttttccggaa aaaggctaaa actacaaaga agattgtgct aaggcttgag tgcgttgagc 240
ccaactgcag atctaagaga atgctggcta ttaaaagatg caagcatttt gaactgggag 300
gagataagaa gagaaagggc caagtgatcc agttctaagt gtcatctttt a 351
<210> 14
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Met Val Asn Val Pro Lys Thr Arg Arg Thr Phe Cys Lys Lys Cys Gly
1 5 10 15
Lys His Gln Pro His Lys Val Thr Gln Tyr Lys Lys Gly Lys Asp Ser
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Leu Tyr Ala Gln Gly Lys Arg Arg Tyr Asp Arg Lys Gln Ser Gly Tyr
35 40 45
Gly Gly Gln Thr Lys Pro Ile Phe Arg Lys Lys Ala Lys Thr Thr Lys
50 55 60
Lys Ile Val Leu Arg Leu Glu Cys Val Glu Pro Asn Cys Arg Ser Lys
65 70 75 80
Arg Met Leu Ala Ile Lys Arg Cys Lys His Phe Glu Leu Gly Gly Asp
85 90 95
Lys Lys Arg Lys Gly Gln Val Ile Gln Phe
100 105
<210> 15
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP2 primer for GIG15
<400> 15
aagcttcgac tgt 13
<210> 16
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG15
<400> 16
aagctttttt tttttc 16
<210> 17
<211> 1131
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 17
tttccctgag gactggaaga cattagaata aggtccagaa atgtccttgg tgtgtctgac 60
agactttcag gcccatgcgc gagagcagct gtctaagtca actcgggatt ttattgaagg 120
tggagcagat gacagcatca cgcgggatga caacattgca gcgtttaaaa gaattcgcct 180
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ccaactctat gtgcatccag acctgcagct gaacaaacag ttgatccaga gggtagaatc 480
cctaggtttc aaagctttgg taataacttt ggatacacct gtatgtggca acaggcgaca 540
tgacattcga aaccagttga ggaggaactt aacactaaca gatcttcaat cacctaaaaa 600
gggaaatgca ataccttatt tccagatgac tcctatcagc acttctctct gctggaatga 660
tctctcctgg tttcagagca taactcgatt gcccatcatc ctgaaaggga ttttgacaaa 720
agaggatgca gagttagctg tgaagcacaa tgtccagggt atcattgttt ccaaccatgg 780
tgggaggcag cttgatgagg ttcttgcttc aattgatgct ttgacagaag tggtggctgc 840
tgtaaagggg aaaattgaag tctacctgga tggcggggtc cgaactggca atgatgtgct 900
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<211> 351
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Met Ser Leu Val Cys Leu Thr Asp Phe Gln Ala His Ala Arg Glu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Lys Ser Thr Arg Asp Phe Ile Glu Gly Gly Ala Asp Asp Ser
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Ile Thr Arg Asp Asp Asn Ile Ala Ala Phe Lys Arg Ile Arg Leu Arg
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Pro Arg Tyr Leu Arg Asp Val Ser Glu Val Asp Thr Arg Thr Thr Ile
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65 70 75 80
His Cys Leu Val Trp Pro Asp Gly Glu Met Ser Thr Ala Arg Ala Ala
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Gln Ala Ala Gly Ile Cys Tyr Ile Thr Ser Thr Phe Ala Ser Cys Ser
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Leu Glu Asp Ile Val Ile Ala Ala Pro Glu Gly Leu Arg Trp Phe Gln
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Leu Tyr Val His Pro Asp Leu Gln Leu Asn Lys Gln Leu Ile Gln Arg
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Val Glu Ser Leu Gly Phe Lys Ala Leu Val Ile Thr Leu Asp Thr Pro
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Val Cys Gly Asn Arg Arg His Asp Ile Arg Asn Gln Leu Arg Arg Asn
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Leu Thr Leu Thr Asp Leu Gln Ser Pro Lys Lys Gly Asn Ala Ile Pro
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Ser Trp Phe Gln Ser Ile Thr Arg Leu Pro Ile Ile Leu Lys Gly Ile
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Leu Thr Lys Glu Asp Ala Glu Leu Ala Val Lys His Asn Val Gln Gly
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Ile Ile Val Ser Asn His Gly Gly Arg Gln Leu Asp Glu Val Leu Ala
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Glu Val Tyr Leu Asp Gly Gly Val Arg Thr Gly Asn Asp Val Leu Lys
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP8 primer for GIG16
<400> 19
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 20
aagctttttt tttttc 16
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<211> 1336
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 21
agctacatcc agctccctga ggcagagttg agaatggaga gaatgttacc tctcctgact 60
ctggggctct tagcggctgg gttctgccct gctgtcctct gccaccctaa cagcccactt 120
gacgaggaga atctgaccca ggagaaccaa gaccgaggga cacacgtgga cctcggatta 180
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ctggacaggt tcacggagga tgccaagagg ctgtatggct ccgaggcctt tgccactgac 540
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gggaaaatca cagatctgat caaggacctt gactcgcaga caatgatggt cctggtgaat 660
tacatcttct ttaaagccaa atgggagatg ccctttgacc cccaagatac tcatcagtca 720
aggttctact tgagcaagaa aaagtgggta atggtgccta tgatgagttt gcatcacctg 780
actatacctt acttccggga cgaggagctg tcctgcaccg tggtggagct gaagtacaca 840
ggcaatgcca gcgcactctt catcctccct gatcaagaca agatggagga agtggaagcc 900
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<211> 423
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
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1 5 10 15
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Ser Ser Asp Glu Leu Gln Leu Ser Met Gly Asn Ala Met Phe Val Lys
130 135 140
Glu Gln Leu Ser Leu Leu Asp Arg Phe Thr Glu Asp Ala Lys Arg Leu
145 150 155 160
Tyr Gly Ser Glu Ala Phe Ala Thr Asp Phe Gln Asp Ser Ala Ala Ala
165 170 175
Lys Lys Leu Ile Asn Asp Tyr Val Lys Asn Gly Thr Arg Gly Lys Ile
180 185 190
Thr Asp Leu Ile Lys Asp Leu Asp Ser Gln Thr Met Met Val Leu Val
195 200 205
Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Ala Lys Trp Glu Met Pro Phe Asp Pro Gln
210 215 220
Asp Thr His Gln Ser Arg Phe Tyr Leu Ser Lys Lys Lys Trp Val Met
225 230 235 240
Val Pro Met Met Ser Leu His His Leu Thr Ile Pro Tyr Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Glu Leu Ser Cys Thr Val Val Glu Leu Lys Tyr Thr Gly Asn Ala
260 265 270
Ser Ala Leu Phe Ile Leu Pro Asp Gln Asp Lys Met Glu Glu Val Glu
275 280 285
Ala Met Leu Leu Pro Glu Thr Leu Lys Arg Trp Arg Asp Ser Leu Glu
290 295 300
Phe Arg Glu Ile Gly Glu Leu Tyr Leu Pro Lys Phe Ser Ile Ser Arg
305 310 315 320
Asp Tyr Asn Leu Asn Asp Ile Leu Leu Gln Leu Gly Ile Glu Glu Ala
325 330 335
Phe Thr Gly Lys Ala Asp Leu Ser Gly Ser Thr Gly Ala Arg Asn Leu
340 345 350
Ala Val Ser Gln Val Val His Lys Ala Val Leu Asp Val Phe Glu Glu
355 360 365
Gly Thr Glu Ala Ser Ala Ala Thr Ala Val Lys Ile Thr Leu Leu Ser
370 375 380
Ala Leu Val Glu Thr Arg Thr Ile Val Arg Phe Asn Arg Pro Phe Leu
385 390 395 400
Met Ile Ile Val Pro Thr Asp Thr Gln Asn Ile Phe Phe Met Ser Lys
405 410 415
Val Thr Asn Pro Lys Gln Ala
420
<210> 23
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP7 primer for GIG24
<400> 23
aagcttaacg agg 13
<210> 24
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG24
<400> 24
aagctttttt tttttc 16
<210> 25
<211> 1402
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 25
tgatgcacag aagctcctag aaaaaatggg tggctcagca ccaccagata gcagctggag 60
aggaagtctc aaagtgtcct acaatgttgg acctggcttt actggaaact tttctacaca 120
aaaagtcaag atgcacatcc actctaccaa tgaagtgacg agaatttaca atgtgatagg 180
tactctcaga ggagcagtgg aaccagacag atatgtcatt ctgggaggtc accgggactc 240
atgggtgttt ggtggtattg accctcagag tggagcagct gttgttcatg aaactgtgag 300
gagctttgga acactgaaaa aggaagggtg gagacctaga agaacaattt tgtttgcaag 360
ctgggatgca gaagaatttg gtcttcttgg ttctactgag tgggcagagg ataattcaag 420
actccttcaa gagcgtggcg tggcttatat taatgctgac tcatctatag aaggaaacta 480
cactctgaga gttgattgta caccactgat gtacagcttg gtatacaacc taacaaaaga 540
gctgaaaagc cctgatgaag gctttgaagg caaatctctt tatgaaagtt ggactaaaaa 600
aagtccttcc ccagagttca gtggcatgcc caggataagc aaattgggat ctggaaatga 660
ttttgaggtg ttcttccaac gacttggaat tgcttcaggc agagcacggt atactaaaaa 720
ttgggaaaca aacaaattca gcggctatcc actgtatcac agtgtctatg aaacatatga 780
gttggtggaa aagttttatg atccaatgtt taaatatcac ctcactgtgg cccaggttcg 840
aggagggatg gtgtttgagc tagccaattc catagtgctc ccttttgatt gtcgagatta 900
tgctgtagtt ttaagaaagt atgctgacaa aatctacaat atttctatga aacatccaca 960
ggaaatgaag acatacagtt tatcatttga ttcacttttt tctgcagtaa aaaattttac 1020
agaaattgct tccaagttca gcgagagact ccaggacttt gacaaaagca acccaatatt 1080
gttaagaatg atgaatgatc aactcatgtt tctggaaaga gcatttattg atccattagg 1140
gttaccagac agaccttttt ataggcatgt catctatgct ccaagcagcc acaacaagta 1200
tgcaggggag tcattcccag gaatttatga tgctctgttt gatattgaaa gcaaagtgga 1260
cccttccaag gcctggggag atgtgaagag acagatttct gttgcagcct tcacagtgca 1320
ggcagctgca gagactttga gtgaagtagc ctaagaggat tctttagaga ctctgtattg 1380
aatttgtgtg gtatgtcact ca 1402
<210> 26
<211> 442
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 26
Met Gly Gly Ser Ala Pro Pro Asp Ser Ser Trp Arg Gly Ser Leu Lys
1 5 10 15
Val Ser Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Thr Gly Asn Phe Ser Thr Gln
20 25 30
Lys Val Lys Met His Ile His Ser Thr Asn Glu Val Thr Arg Ile Tyr
35 40 45
Asn Val Ile Gly Thr Leu Arg Gly Ala Val Glu Pro Asp Arg Tyr Val
50 55 60
Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ser Trp Val Phe Gly Gly Ile Asp Pro
65 70 75 80
Gln Ser Gly Ala Ala Val Val His Glu Thr Val Arg Ser Phe Gly Thr
85 90 95
Leu Lys Lys Glu Gly Trp Arg Pro Arg Arg Thr Ile Leu Phe Ala Ser
100 105 110
Trp Asp Ala Glu Glu Phe Gly Leu Leu Gly Ser Thr Glu Trp Ala Glu
115 120 125
Asp Asn Ser Arg Leu Leu Gln Glu Arg Gly Val Ala Tyr Ile Asn Ala
130 135 140
Asp Ser Ser Ile Glu Gly Asn Tyr Thr Leu Arg Val Asp Cys Thr Pro
145 150 155 160
Leu Met Tyr Ser Leu Val Tyr Asn Leu Thr Lys Glu Leu Lys Ser Pro
165 170 175
Asp Glu Gly Phe Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Glu Ser Trp Thr Lys Lys
180 185 190
Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ser Gly Met Pro Arg Ile Ser Lys Leu Gly
195 200 205
Ser Gly Asn Asp Phe Glu Val Phe Phe Gln Arg Leu Gly Ile Ala Ser
210 215 220
Gly Arg Ala Arg Tyr Thr Lys Asn Trp Glu Thr Asn Lys Phe Ser Gly
225 230 235 240
Tyr Pro Leu Tyr His Ser Val Tyr Glu Thr Tyr Glu Leu Val Glu Lys
245 250 255
Phe Tyr Asp Pro Met Phe Lys Tyr His Leu Thr Val Ala Gln Val Arg
260 265 270
Gly Gly Met Val Phe Glu Leu Ala Asn Ser Ile Val Leu Pro Phe Asp
275 280 285
Cys Arg Asp Tyr Ala Val Val Leu Arg Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Tyr
290 295 300
Asn Ile Ser Met Lys His Pro Gln Glu Met Lys Thr Tyr Ser Leu Ser
305 310 315 320
Phe Asp Ser Leu Phe Ser Ala Val Lys Asn Phe Thr Glu Ile Ala Ser
325 330 335
Lys Phe Ser Glu Arg Leu Gln Asp Phe Asp Lys Ser Asn Pro Ile Leu
340 345 350
Leu Arg Met Met Asn Asp Gln Leu Met Phe Leu Glu Arg Ala Phe Ile
355 360 365
Asp Pro Leu Gly Leu Pro Asp Arg Pro Phe Tyr Arg His Val Ile Tyr
370 375 380
Ala Pro Ser Ser His Asn Lys Tyr Ala Gly Glu Ser Phe Pro Gly Ile
385 390 395 400
Tyr Asp Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val Asp Pro Ser Lys Ala
405 410 415
Trp Gly Asp Val Lys Arg Gln Ile Ser Val Ala Ala Phe Thr Val Gln
420 425 430
Ala Ala Ala Glu Thr Leu Ser Glu Val Ala
435 440
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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aagcttcggg taa 13
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG26
<400> 28
aagctttttt tttttg 16
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<211> 1160
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 29
ctgcacaaga aacggagtca gccggagaac aaggagtggt cttccactgc ctcacaggag 60
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ctcgctgggc tgcaccatgg agttcagcaa gatcaaggct cacttatgga agcctaaagg 240
gctggccatc gccctggtgg cacagtatgg catcatgccc ctcacggcct ttgtgctggg 300
caaggtcttc cggctgaaga acattgaggc actggccatc ttggtctgtg gctgctcacc 360
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tgtgatgacc acctgctcca ccttctgtgc ccttggcatg atgcctctcc tcctgtacat 480
ctactccagg gggatctatg atggggacct gaaggacaag gtgccctata aaggcatcgt 540
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gccacaatac atgcgctatg tcatcaaggg agggatgatc atcattctct tgtgcagtgt 660
ggccgtcaca gttctctctg ccatcaatgt ggggaagagc atcatgtttg ccatgacacc 720
actcttgatt gccacctcct ccctgatgcc ttttattggc tttctgctgg gttatgttct 780
ctctgctctc ttctgcctca atggacggtg cagacgcact gtcagcatgg agactggatg 840
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accacttttc ttctttcccc tcctctacat gattttccag cttggagaag ggcttctcct 960
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ccaaagcaat tctgaaagcc 1160
<210> 30
<211> 349
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 30
Met Glu Ala His Asn Ala Ser Ala Pro Phe Asn Phe Thr Leu Pro Pro
1 5 10 15
Asn Phe Gly Lys Arg Pro Thr Asp Leu Ala Leu Ser Val Ile Leu Val
20 25 30
Phe Met Leu Phe Phe Ile Met Leu Ser Leu Gly Cys Thr Met Glu Phe
35 40 45
Ser Lys Ile Lys Ala His Leu Trp Lys Pro Lys Gly Leu Ala Ile Ala
50 55 60
Leu Val Ala Gln Tyr Gly Ile Met Pro Leu Thr Ala Phe Val Leu Gly
65 70 75 80
Lys Val Phe Arg Leu Lys Asn Ile Glu Ala Leu Ala Ile Leu Val Cys
85 90 95
Gly Cys Ser Pro Gly Gly Asn Leu Ser Asn Val Phe Ser Leu Ala Met
100 105 110
Lys Gly Asp Met Asn Leu Ser Ile Val Met Thr Thr Cys Ser Thr Phe
115 120 125
Cys Ala Leu Gly Met Met Pro Leu Leu Leu Tyr Ile Tyr Ser Arg Gly
130 135 140
Ile Tyr Asp Gly Asp Leu Lys Asp Lys Val Pro Tyr Lys Gly Ile Val
145 150 155 160
Ile Ser Leu Val Leu Val Leu Ile Pro Cys Thr Ile Gly Ile Val Leu
165 170 175
Lys Ser Lys Arg Pro Gln Tyr Met Arg Tyr Val Ile Lys Gly Gly Met
180 185 190
Ile Ile Ile Leu Leu Cys Ser Val Ala Val Thr Val Leu Ser Ala Ile
195 200 205
Asn Val Gly Lys Ser Ile Met Phe Ala Met Thr Pro Leu Leu Ile Ala
210 215 220
Thr Ser Ser Leu Met Pro Phe Ile Gly Phe Leu Leu Gly Tyr Val Leu
225 230 235 240
Ser Ala Leu Phe Cys Leu Asn Gly Arg Cys Arg Arg Thr Val Ser Met
245 250 255
Glu Thr Gly Cys Gln Asn Val Gln Leu Cys Ser Thr Ile Leu Asn Val
260 265 270
Ala Phe Pro Pro Glu Val Ile Gly Pro Leu Phe Phe Phe Pro Leu Leu
275 280 285
Tyr Met Ile Phe Gln Leu Gly Glu Gly Leu Leu Leu Ile Ala Ile Phe
290 295 300
Trp Cys Tyr Glu Lys Phe Lys Thr Pro Lys Asp Lys Thr Lys Met Ile
305 310 315 320
Tyr Thr Ala Ala Thr Thr Glu Glu Thr Ile Pro Gly Ala Leu Gly Asn
325 330 335
Gly Thr Tyr Lys Gly Glu Asp Cys Ser Pro Cys Thr Ala
340 345
<210> 31
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP3 primer for GIG29
<400> 31
aagctttggt cag 13
<210> 32
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG29
<400> 32
aagctttttt ttttta 16
<210> 33
<211> 1825
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 33
gtatctgggc gcctgagcgc ggcgtgggag ccttgggagc cgccgcagca gggggcacac 60
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accattccct accacaaact cgccgacctg cgctacctga gccgcggcgc ctctggcact 180
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cacactccgc tgctcggcag tgaaagaaag gatgtcttaa gagaagctga aattttacac 300
aaagctagat ttagttacat tcttccaatt ttgggaattt gcaatgagcc tgaatttttg 360
ggaatagtta ctgaatacat gccaaatgga tcattaaatg aactcctaca taggaaaact 420
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gtaaattacc tgcacaatat gactcctcct ttacttcatc atgacttgaa gactcagaat 540
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atgatgtccc tctcacagtc acgaagtagc aaatctgcac cagaaggagg gacaattatc 660
tatatgccac ctgaaaacta tgaacctgga caaaaatcaa gggccagtat caagcacgat 720
atatatagct atgcagttat cacatgggaa gtgttatcca gaaaacagcc ttttgaagat 780
gtcaccaatc ctttgcagat aatgtatagt gtgtcacaag gacatcgacc tgttattaat 840
gaagaaagtt tgccatatga tatacctcac cgagcacgta tgatctctct aatagaaagt 900
ggatgggcac aaaatccaga tgaaagacca tctttcttaa aatgtttaat agaacttgaa 960
ccagttttga gaacatttga agagataact tttcttgaag ctgttattca gctaaagaaa 1020
acaaagttac agagtgtttc aagtgccatt cacctatgtg acaagaagaa aatggaatta 1080
tctctgaaca tacctgtaaa tcatggtcca caagaggaat catgtggatc ctctcagctc 1140
catgaaaata gtggttctcc tgaaacttca aggtccctgc cagctcctca agacaatgat 1200
tttttatcta gaaaagctca agactgttat tttatgaagc tgcatcactg tcctggaaat 1260
cacagttggg atagcaccat ttctggatct caaagggctg cattctgtga tcacaagacc 1320
actccatgct cttcagcaat aataaatcca ctctcaactg caggaaactc agaacgtctg 1380
cagcctggta tagcccagca gtggatccag agcaaaaggg aagacattgt gaaccaaatg 1440
acagaagcct gccttaacca gtcgctagat gcccttctgt ccagggactt gatcatgaaa 1500
gaggactatg aacttgttag taccaagcct acaaggacct caaaagtcag acaattacta 1560
gacactactg acatccaagg agaagaattt gccaaagtta tagtacaaaa attgaaagat 1620
aacaaacaaa tgggtcttca gccttacccg gaaatacttg tggtttctag atcaccatct 1680
ttaaatttac ttcaaaataa aagcatgtaa gtgactgttt ttcaagaaga aatgtgtttc 1740
ataaaaggat atttatatct ctgttgcttt gacttttttt atataaaatc cgtgagtatt 1800
aaagctttat tgaaggttct ttggg 1825
<210> 34
<211> 540
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 34
Met Asn Gly Glu Ala Ile Cys Ser Ala Leu Pro Thr Ile Pro Tyr His
1 5 10 15
Lys Leu Ala Asp Leu Arg Tyr Leu Ser Arg Gly Ala Ser Gly Thr Val
20 25 30
Ser Ser Ala Arg His Ala Asp Trp Arg Val Gln Val Ala Val Lys His
35 40 45
Leu His Ile His Thr Pro Leu Leu Gly Ser Glu Arg Lys Asp Val Leu
50 55 60
Arg Glu Ala Glu Ile Leu His Lys Ala Arg Phe Ser Tyr Ile Leu Pro
65 70 75 80
Ile Leu Gly Ile Cys Asn Glu Pro Glu Phe Leu Gly Ile Val Thr Glu
85 90 95
Tyr Met Pro Asn Gly Ser Leu Asn Glu Leu Leu His Arg Lys Thr Glu
100 105 110
Tyr Pro Asp Val Ala Trp Pro Leu Arg Phe Arg Ile Leu His Glu Ile
115 120 125
Ala Leu Gly Val Asn Tyr Leu His Asn Met Thr Pro Pro Leu Leu His
130 135 140
His Asp Leu Lys Thr Gln Asn Ile Leu Leu Asp Asn Glu Phe His Val
145 150 155 160
Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Lys Trp Arg Met Met Ser Leu Ser
165 170 175
Gln Ser Arg Ser Ser Lys Ser Ala Pro Glu Gly Gly Thr Ile Ile Tyr
180 185 190
Met Pro Pro Glu Asn Tyr Glu Pro Gly Gln Lys Ser Arg Ala Ser Ile
195 200 205
Lys His Asp Ile Tyr Ser Tyr Ala Val Ile Thr Trp Glu Val Leu Ser
210 215 220
Arg Lys Gln Pro Phe Glu Asp Val Thr Asn Pro Leu Gln Ile Met Tyr
225 230 235 240
Ser Val Ser Gln Gly His Arg Pro Val Ile Asn Glu Glu Ser Leu Pro
245 250 255
Tyr Asp Ile Pro His Arg Ala Arg Met Ile Ser Leu Ile Glu Ser Gly
260 265 270
Trp Ala Gln Asn Pro Asp Glu Arg Pro Ser Phe Leu Lys Cys Leu Ile
275 280 285
Glu Leu Glu Pro Val Leu Arg Thr Phe Glu Glu Ile Thr Phe Leu Glu
290 295 300
Ala Val Ile Gln Leu Lys Lys Thr Lys Leu Gln Ser Val Ser Ser Ala
305 310 315 320
Ile His Leu Cys Asp Lys Lys Lys Met Glu Leu Ser Leu Asn Ile Pro
325 330 335
Val Asn His Gly Pro Gln Glu Glu Ser Cys Gly Ser Ser Gln Leu His
340 345 350
Glu Asn Ser Gly Ser Pro Glu Thr Ser Arg Ser Leu Pro Ala Pro Gln
355 360 365
Asp Asn Asp Phe Leu Ser Arg Lys Ala Gln Asp Cys Tyr Phe Met Lys
370 375 380
Leu His His Cys Pro Gly Asn His Ser Trp Asp Ser Thr Ile Ser Gly
385 390 395 400
Ser Gln Arg Ala Ala Phe Cys Asp His Lys Thr Thr Pro Cys Ser Ser
405 410 415
Ala Ile Ile Asn Pro Leu Ser Thr Ala Gly Asn Ser Glu Arg Leu Gln
420 425 430
Pro Gly Ile Ala Gln Gln Trp Ile Gln Ser Lys Arg Glu Asp Ile Val
435 440 445
Asn Gln Met Thr Glu Ala Cys Leu Asn Gln Ser Leu Asp Ala Leu Leu
450 455 460
Ser Arg Asp Leu Ile Met Lys Glu Asp Tyr Glu Leu Val Ser Thr Lys
465 470 475 480
Pro Thr Arg Thr Ser Lys Val Arg Gln Leu Leu Asp Thr Thr Asp Ile
485 490 495
Gln Gly Glu Glu Phe Ala Lys Val Ile Val Gln Lys Leu Lys Asp Asn
500 505 510
Lys Gln Met Gly Leu Gln Pro Tyr Pro Glu Ile Leu Val Val Ser Arg
515 520 525
Ser Pro Ser Leu Asn Leu Leu Gln Asn Lys Ser Met
530 535 540
<210> 35
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP4 primer for GIG30
<400> 35
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<210> 36
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer primer for GIG30
<400> 36
aagctttttt tttttg 16
<210> 37
<211> 648
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 37
cagggaaacc tcctcacagt tttcatccag ccacgggcca gcatgtctgg gggcaaatac 60
gtagactcgg agggacatct ctacaccgtt cccatccggg aacagggcaa catctacaag 120
cccaacaaca aggccatggc agacgagctg agcgagaagc aagtgtacga cgcgcacacc 180
aaggagatcg acctggtcaa ccgcgaccct aaacacctca acgatgacgt ggtcaagatt 240
gactttgaag atgtgattgc agaaccagaa gggacacaca gttttgacgg catttggaag 300
gccagcttca ccaccttcac tgtgacgaaa tactggtttt accgcttgct gtctgccctc 360
tttggcatcc cgatggcact catctggggc atttacttcg ccattctctc tttcctgcac 420
atctgggcag ttgtaccatg cattaagagc ttcctgattg agattcagtg catcagccgt 480
gtctattcca tctacgtcca caccgtctgt gacccactct ttgaagctgt tgggaaaata 540
ttcagcaatg tccgcatcaa cttgcagaaa gaaatataaa tgacatttca aggatagaag 600
tatacctgat tttttttcct tttaattttc ctggtgccaa tttcaagt 648
<210> 38
<211> 178
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 38
Met Ser Gly Gly Lys Tyr Val Asp Ser Glu Gly His Leu Tyr Thr Val
1 5 10 15
Pro Ile Arg Glu Gln Gly Asn Ile Tyr Lys Pro Asn Asn Lys Ala Met
20 25 30
Ala Asp Glu Leu Ser Glu Lys Gln Val Tyr Asp Ala His Thr Lys Glu
35 40 45
Ile Asp Leu Val Asn Arg Asp Pro Lys His Leu Asn Asp Asp Val Val
50 55 60
Lys Ile Asp Phe Glu Asp Val Ile Ala Glu Pro Glu Gly Thr His Ser
65 70 75 80
Phe Asp Gly Ile Trp Lys Ala Ser Phe Thr Thr Phe Thr Val Thr Lys
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Tyr Trp Phe Tyr Arg Leu Leu Ser Ala Leu Phe Gly Ile Pro Met Ala
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Leu Ile Trp Gly Ile Tyr Phe Ala Ile Leu Ser Phe Leu His Ile Trp
115 120 125
Ala Val Val Pro Cys Ile Lys Ser Phe Leu Ile Glu Ile Gln Cys Ile
130 135 140
Ser Arg Val Tyr Ser Ile Tyr Val His Thr Val Cys Asp Pro Leu Phe
145 150 155 160
Glu Ala Val Gly Lys Ile Phe Ser Asn Val Arg Ile Asn Leu Gln Lys
165 170 175
Glu Ile
<210> 39
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP8 primer for GIG32
<400> 39
aagcttttac cgc 13
<210> 40
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG32
<400> 40
aagctttttt tttttg 16
<210> 41
<211> 406
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 41
ggcctcgtcc ttctcttacc gccatcttgg ctcctgtgga ggcctgctgg gaacgggact 60
tctaaaagga actatgtctg gaaggctgtg gtccaaggcc atttttgctg gctataagcg 120
gggtctccgg aaccaaaggg agcacacagc tcttcttaaa attgaaggtg tttacgcccg 180
agatgaaaca gaattctatt tgggcaagag atgcgcttat gtatataaag caaagaacaa 240
cacagtcact cctggcggca aaccaaacaa aaccagagtc atctggggaa aagtaactcg 300
ggcccatgga aacagtggca tggttcgtgc caaattccga agcaatcttc ctgccaaggc 360
cattggacac agaatccgag tgatgctgta cccctcaagg atttaa 406
<210> 42
<211> 110
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 42
Met Ser Gly Arg Leu Trp Ser Lys Ala Ile Phe Ala Gly Tyr Lys Arg
1 5 10 15
Gly Leu Arg Asn Gln Arg Glu His Thr Ala Leu Leu Lys Ile Glu Gly
20 25 30
Val Tyr Ala Arg Asp Glu Thr Glu Phe Tyr Leu Gly Lys Arg Cys Ala
35 40 45
Tyr Val Tyr Lys Ala Lys Asn Asn Thr Val Thr Pro Gly Gly Lys Pro
50 55 60
Asn Lys Thr Arg Val Ile Trp Gly Lys Val Thr Arg Ala His Gly Asn
65 70 75 80
Ser Gly Met Val Arg Ala Lys Phe Arg Ser Asn Leu Pro Ala Lys Ala
85 90 95
Ile Gly His Arg Ile Arg Val Met Leu Tyr Pro Ser Arg Ile
100 105 110
<210> 43
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP33 primer for GIG33
<400> 43
aagcttgctg ctc 13
<210> 44
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG33
<400> 44
aagctttttt tttttg 16
<210> 45
<211> 560
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 45
catcatggcg gatcaaggtg aaaaggagaa ccccatgcgg gaacttcgca tccgcaaact 60
ctgtctcaac atctgtgttg gggagagtgg agacagactg gcgcgagcag ccaaggtgtt 120
ggagcagctc acagggcaga cccctgtgtt ttccaaagct agatacactg tcagatcctt 180
tggcatccgg agaaatgaaa agattgctgt ccactgcaca gttcgagggg ccaaggcaga 240
agaaatcttg gagaagggtc taaaggtgcg ggagtatgag ttaagaaaaa acaacttctc 300
agatactgga aactttggtt ttgggatcca ggaacacatc gatctgggta tcaaatatga 360
cccaagcatt ggtatctacg gcctggactt ctatgtggtg ctgggtaggc caggtttcag 420
catcgcagac aagaagcgca ggacaggctg cattggggcc aaacacagaa tcagcaaaga 480
ggaggccatg cgctggttcc agcagaagta tgatgggatc atccttcctg gcaaataaat 540
tcccgtttct atccaaaaga 560
<210> 46
<211> 177
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 46
Met Ala Asp Gln Gly Glu Lys Glu Asn Pro Met Arg Glu Leu Arg Ile
1 5 10 15
Arg Lys Leu Cys Leu Asn Ile Cys Val Gly Glu Ser Gly Asp Arg Leu
20 25 30
Ala Arg Ala Ala Lys Val Leu Glu Gln Leu Thr Gly Gln Thr Pro Val
35 40 45
Phe Ser Lys Ala Arg Tyr Thr Val Arg Ser Phe Gly Ile Arg Arg Asn
50 55 60
Glu Lys Ile Ala Val His Cys Thr Val Arg Gly Ala Lys Ala Glu Glu
65 70 75 80
Ile Leu Glu Lys Gly Leu Lys Val Arg Glu Tyr Glu Leu Arg Lys Asn
85 90 95
Asn Phe Ser Asp Thr Gly Asn Phe Gly Phe Gly Ile Gln Glu His Ile
100 105 110
Asp Leu Gly Ile Lys Tyr Asp Pro Ser Ile Gly Ile Tyr Gly Leu Asp
115 120 125
Phe Tyr Val Val Leu Gly Arg Pro Gly Phe Ser Ile Ala Asp Lys Lys
130 135 140
Arg Arg Thr Gly Cys Ile Gly Ala Lys His Arg Ile Ser Lys Glu Glu
145 150 155 160
Ala Met Arg Trp Phe Gln Gln Lys Tyr Asp Gly Ile Ile Leu Pro Gly
165 170 175
Lys
<210> 47
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP35 primer for GIG34
<400> 47
aagcttcagg gca 13
<210> 48
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG34
<400> 48
aagctttttt tttttc 16
<210> 49
<211> 1398
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 49
tttctttgcg gaatcaccat ggcggctggg accctgtaca cgtatcctga aaactggagg 60
gccttcaagg ctctcatcgc tgctcagtac agcggggctc aggtccgcgt gctctccgca 120
ccaccccact tccattttgg ccaaaccaac cgcacccctg aatttctccg caaatttcct 180
gccggcaagg tcccagcatt tgagggtgat gatggattct gtgtgtttga gagcaacgcc 240
attgcctact atgtgagcaa tgaggagctg cggggaagta ctccagaggc agcagcccag 300
gtggtgcagt gggtgagctt tgctgattcc gatatagtgc ccccagccag tacctgggtg 360
ttccccacct tgggcatcat gcaccacaac aaacaggcca ctgagaatgc aaaggaggaa 420
gtgaggcgaa ttctggggct gctggatgct tacttgaaga cgaggacttt tctggtgggc 480
gaacgagtga cattggctga catcacagtt gtctgcaccc tgttgtggct ctataagcag 540
gttctagagc cttctttccg ccaggccttt cccaatacca accgctggtt cctcacctgc 600
attaaccagc cccagttccg ggctgtcttg ggcgaagtga aactgtgtga gaagatggcc 660
cagtttgatg ctaaaaagtt tgcagagacc caacctaaaa aggacacacc acggaaagag 720
aagggttcac gggaagagaa gcagaagccc caggctgagc ggaaggagga gaaaaaggcg 780
gctgcccctg ctcctgagga ggagatggat gaatgtgagc aggcgctggc tgctgagccc 840
aaggccaagg accccttcgc tcacctgccc aagagtacct ttgtgttgga tgaatttaag 900
cgcaagtact ccaatgagga cacactctct gtggcactgc catatttctg ggagcacttt 960
gataaggacg gctggtccct gtggtactca gagtatcgct tccctgaaga actcactcag 1020
accttcatga gctgcaatct catcactgga atgttccagc gactggacaa gctgaggaag 1080
aatgccttcg ccagtgtcat cctttttgga accaacaata gcagctccat ttctggagtc 1140
tgggtcttcc gaggccagga gcttgccttt ccgctgagtc cagattggca ggtggactac 1200
gagtcataca catggcggaa actggatcct ggcagcgagg agacccagac gctggttcga 1260
gagtactttt cctgggaggg ggccttccag catgtgggca aagccttcaa tcagggcaag 1320
atcttcaagt gaacatctct tgccatcacc tagctgcctg cacctgccct tcagggagat 1380
gggggtcatt aaaggaaa 1398
<210> 50
<211> 437
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 50
Met Ala Ala Gly Thr Leu Tyr Thr Tyr Pro Glu Asn Trp Arg Ala Phe
1 5 10 15
Lys Ala Leu Ile Ala Ala Gln Tyr Ser Gly Ala Gln Val Arg Val Leu
20 25 30
Ser Ala Pro Pro His Phe His Phe Gly Gln Thr Asn Arg Thr Pro Glu
35 40 45
Phe Leu Arg Lys Phe Pro Ala Gly Lys Val Pro Ala Phe Glu Gly Asp
50 55 60
Asp Gly Phe Cys Val Phe Glu Ser Asn Ala Ile Ala Tyr Tyr Val Ser
65 70 75 80
Asn Glu Glu Leu Arg Gly Ser Thr Pro Glu Ala Ala Ala Gln Val Val
85 90 95
Gln Trp Val Ser Phe Ala Asp Ser Asp Ile Val Pro Pro Ala Ser Thr
100 105 110
Trp Val Phe Pro Thr Leu Gly Ile Met His His Asn Lys Gln Ala Thr
115 120 125
Glu Asn Ala Lys Glu Glu Val Arg Arg Ile Leu Gly Leu Leu Asp Ala
130 135 140
Tyr Leu Lys Thr Arg Thr Phe Leu Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ala
145 150 155 160
Asp Ile Thr Val Val Cys Thr Leu Leu Trp Leu Tyr Lys Gln Val Leu
165 170 175
Glu Pro Ser Phe Arg Gln Ala Phe Pro Asn Thr Asn Arg Trp Phe Leu
180 185 190
Thr Cys Ile Asn Gln Pro Gln Phe Arg Ala Val Leu Gly Glu Val Lys
195 200 205
Leu Cys Glu Lys Met Ala Gln Phe Asp Ala Lys Lys Phe Ala Glu Thr
210 215 220
Gln Pro Lys Lys Asp Thr Pro Arg Lys Glu Lys Gly Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Lys Gln Lys Pro Gln Ala Glu Arg Lys Glu Glu Lys Lys Ala Ala Ala
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Glu Glu Met Asp Glu Cys Glu Gln Ala Leu Ala Ala
260 265 270
Glu Pro Lys Ala Lys Asp Pro Phe Ala His Leu Pro Lys Ser Thr Phe
275 280 285
Val Leu Asp Glu Phe Lys Arg Lys Tyr Ser Asn Glu Asp Thr Leu Ser
290 295 300
Val Ala Leu Pro Tyr Phe Trp Glu His Phe Asp Lys Asp Gly Trp Ser
305 310 315 320
Leu Trp Tyr Ser Glu Tyr Arg Phe Pro Glu Glu Leu Thr Gln Thr Phe
325 330 335
Met Ser Cys Asn Leu Ile Thr Gly Met Phe Gln Arg Leu Asp Lys Leu
340 345 350
Arg Lys Asn Ala Phe Ala Ser Val Ile Leu Phe Gly Thr Asn Asn Ser
355 360 365
Ser Ser Ile Ser Gly Val Trp Val Phe Arg Gly Gln Glu Leu Ala Phe
370 375 380
Pro Leu Ser Pro Asp Trp Gln Val Asp Tyr Glu Ser Tyr Thr Trp Arg
385 390 395 400
Lys Leu Asp Pro Gly Ser Glu Glu Thr Gln Thr Leu Val Arg Glu Tyr
405 410 415
Phe Ser Trp Glu Gly Ala Phe Gln His Val Gly Lys Ala Phe Asn Gln
420 425 430
Gly Lys Ile Phe Lys
435
<210> 51
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP3 primer for GIG35
<400> 51
aagctttggt cag 13
<210> 52
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG35
<400> 52
aagctttttt tttttc 16
<210> 53
<211> 560
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 53
aggccgtagg aggaagatgg cggtggagtc gcgcgttacc caggaggaaa ttaagaagga 60
gccagagaaa ccgatcgacc gcgagaagac atgcccactg ttgctacggg tcttcaccac 120
caataacggc cgccaccacc gaatggacga gttctcccgg ggaaatgtac cgtccagcga 180
gttgcagatc tacacttgga tggatgcaac tttgaaagaa ctgacaagct tagtaaaaga 240
agtctaccca gaagctagaa agaagggcac tcacttcaat tttgcaatcg tttttacaga 300
tgttaaaaga cctggctatc gagttaagga gattggcagc accatgtctg gcagaaaggg 360
gactgatgat tccatgaccc tgcagtcgca gaagttccag ataggagatt acttggacat 420
agcaattacc cctccaaatc gggcaccacc tccttcaggg cgcatgagac catattaaat 480
tctatttact atttgttgaa tttatttttc cgtcagttat gtaaaataaa catactcttc 540
ttcctcccct gattattgcc 560
<210> 54
<211> 153
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 54
Met Ala Val Glu Ser Arg Val Thr Gln Glu Glu Ile Lys Lys Glu Pro
1 5 10 15
Glu Lys Pro Ile Asp Arg Glu Lys Thr Cys Pro Leu Leu Leu Arg Val
20 25 30
Phe Thr Thr Asn Asn Gly Arg His His Arg Met Asp Glu Phe Ser Arg
35 40 45
Gly Asn Val Pro Ser Ser Glu Leu Gln Ile Tyr Thr Trp Met Asp Ala
50 55 60
Thr Leu Lys Glu Leu Thr Ser Leu Val Lys Glu Val Tyr Pro Glu Ala
65 70 75 80
Arg Lys Lys Gly Thr His Phe Asn Phe Ala Ile Val Phe Thr Asp Val
85 90 95
Lys Arg Pro Gly Tyr Arg Val Lys Glu Ile Gly Ser Thr Met Ser Gly
100 105 110
Arg Lys Gly Thr Asp Asp Ser Met Thr Leu Gln Ser Gln Lys Phe Gln
115 120 125
Ile Gly Asp Tyr Leu Asp Ile Ala Ile Thr Pro Pro Asn Arg Ala Pro
130 135 140
Pro Pro Ser Gly Arg Met Arg Pro Tyr
145 150
<210> 55
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP12 primer for GIG38
<400> 55
aagcttgagt gct 13
<210> 56
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG38
<400> 56
aagctttttt tttttc 16
<210> 57
<211> 2874
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 57
caacctccag gagctagcag cgggcgcgga ccgggcagtt tccgcgctca gcacaggcag 60
ctcgcggtca tgggcggctc agcctccagc cagctggacg agggcaagtg cgcttacatc 120
cgagggaaaa ctgaggctgc catcaaagac ttcagtccct actacagtcg tcagtactct 180
gtggctttct gcaatcacgt gcgcactgaa gtagaacagc aaagagattt aacgtcacag 240
tttttgaaga ccaagccacc attggcgcct ggaactattt tgtatgaagc agagctatca 300
caattttctg aagacataaa gaagtggaag gagagatacg ttgtagttaa aaatgattat 360
gctgtggaga gctatgagaa taaagaggcc tatcagagag gagctgctcc taaatgtcga 420
attcttccag ccggtggcaa ggtgttaacc tcagaagatg aatataatct gttgtctgac 480
aggcatttcc cagaccctct tgcctccagt gagaaggaga acactcagcc ctttgtggtc 540
ctgcccaagg aattcccagt gtacctgtgg cagcccttct tcagacacgg ctacttctgc 600
ttccacgagg ctgctgacca gaagaggttt agtgccctcc tgagtgactg cgtcaggcat 660
ctcaatcatg attacatgaa gcagatgaca tttgaagccc aagccttttt agaagctgtg 720
caattcttcc gacaggagaa gggtcactat ggttcctggg aaatgatcac tggggatgaa 780
atccagatcc tgagtaacct ggtgatggag gagctcctgc ccactcttca gacagacctg 840
ctgcctaaga tgaaggggaa gaagaatgac agaaagagga cgtggcttgg tctcctcgag 900
gaggcctaca ccctggttca gcatcaagtt tcagaaggat taagtgcctt gaaggaggaa 960
tgcagagctc tgacaaaggg cctggaagga acgatccgtt ctgacatgga tcagattgtg 1020
aactcaaaga actatttaat tggaaagatc aaagcgatgg tggcccagcc ggcggagaaa 1080
agctgcttgg agagtgtgca gccattcctg gcatccatcc tggaggagct catgggacca 1140
gtgagctcgg gattcagtga agtacgtgta ctctttgaga aagaggtgaa tgaagtcagc 1200
cagaacttcc agaccaccaa agacagtgtc cagctaaagg agcatctaga ccggcttatg 1260
aatcttccgc tgcattccgt gaagatggaa ccttgttata ctaaagtcaa cctgcttcac 1320
gagcgcctgc aggatctcaa gagccgcttc agattccccc acattgatct ggtggttcag 1380
aggacacaga actacatgca ggagctaatg gagaatgcag tgttcacttt tgagcagttg 1440
ctttccccac atctccaagg agaggcctcc aaaactgcag ttgccattga gaaggttaaa 1500
ctccgagtct taaagcaata tgattatgac agcagcacca tccgaaagaa gatatttcaa 1560
gaggcactag ttcaaatcac acttcccact gtgcagaagg cactggcgtc cacatgcaaa 1620
ccagagcttc agaaatacga gcagttcatc tttgcagatc ataccaatat gattcacgtt 1680
gaaaatgtct atgaggagat tttacatcag atcctgcttg atgaaactct gaaagtgata 1740
aaggaagctg ctatcttgaa gaaacacaac ttatttgaag ataacatggc cttgcccagt 1800
gaaagtgtgt ccagcttaac agatctaaag ccccccacag ggtcaaacca ggccagccct 1860
gccaggagag cttctgccat tctgccagga gttctgggta gtgagaccct cagtaacgaa 1920
gtattccagg agtcagagga agagaagcag cctgaggtcc ctagctcgtt ggccaaagga 1980
gaaagccttt ctctccctgg gccaagccca cccccagatg ggactgagca ggtgattatt 2040
tcaagagtgg atgaccccgt ggtgaatcct gtggcaacag aggacacagc aggactcccg 2100
ggcacatgct catcagagct ggagtttgga gggacccttg aggatgaaga acccgcccag 2160
gaagagccag aacccatcac tgcctcgggt tctttgaagg cgctcagaaa gttgctgaca 2220
gcgtccgtgg aagtaccagt ggactctgct ccagtgatgg aagaagatac gaatggggag 2280
agccacgttc cccaagaaaa tgaagaagaa gaggaaaaag agcccagtca ggcagctgcc 2340
atccaccccg acaactgtga agaaagtgaa gtcagcgaga gggaggccca acctccctgt 2400
cccgaggccc atggggagga gttgggggga tttccagagg taggcagccc agcctctccg 2460
ccagccagtg gagggctcac cgaggagccc ctggggccca tggaggggga gctcccagga 2520
gaggcctgca cactcactgc ccatgaagga agagggggca agtgtaccga ggaaggggat 2580
gcctcacagc aagagggctg caccttaggt tctgacccca tctgcctcag tgagagccag 2640
gtttctgagg aacaagaaga gatgggaggg caaagcagcg cggcccaggc cacggccagt 2700
gtgaatgcag aggagatcaa ggtagcccgt attcatgagt gtcagtgggt ggtggaggat 2760
gctccaaacc cggatgtcct gctgtcacac aaagatgacg tgaaggaggg agaaggtggt 2820
caggagagtt tcccagagct gccctcagag gagtgaaagg gacaatttgg ctga 2874
<210> 58
<211> 928
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 58
Met Gly Gly Ser Ala Ser Ser Gln Leu Asp Glu Gly Lys Cys Ala Tyr
1 5 10 15
Ile Arg Gly Lys Thr Glu Ala Ala Ile Lys Asp Phe Ser Pro Tyr Tyr
20 25 30
Ser Arg Gln Tyr Ser Val Ala Phe Cys Asn His Val Arg Thr Glu Val
35 40 45
Glu Gln Gln Arg Asp Leu Thr Ser Gln Phe Leu Lys Thr Lys Pro Pro
50 55 60
Leu Ala Pro Gly Thr Ile Leu Tyr Glu Ala Glu Leu Ser Gln Phe Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Lys Lys Trp Lys Glu Arg Tyr Val Val Val Lys Asn Asp
85 90 95
Tyr Ala Val Glu Ser Tyr Glu Asn Lys Glu Ala Tyr Gln Arg Gly Ala
100 105 110
Ala Pro Lys Cys Arg Ile Leu Pro Ala Gly Gly Lys Val Leu Thr Ser
115 120 125
Glu Asp Glu Tyr Asn Leu Leu Ser Asp Arg His Phe Pro Asp Pro Leu
130 135 140
Ala Ser Ser Glu Lys Glu Asn Thr Gln Pro Phe Val Val Leu Pro Lys
145 150 155 160
Glu Phe Pro Val Tyr Leu Trp Gln Pro Phe Phe Arg His Gly Tyr Phe
165 170 175
Cys Phe His Glu Ala Ala Asp Gln Lys Arg Phe Ser Ala Leu Leu Ser
180 185 190
Asp Cys Val Arg His Leu Asn His Asp Tyr Met Lys Gln Met Thr Phe
195 200 205
Glu Ala Gln Ala Phe Leu Glu Ala Val Gln Phe Phe Arg Gln Glu Lys
210 215 220
Gly His Tyr Gly Ser Trp Glu Met Ile Thr Gly Asp Glu Ile Gln Ile
225 230 235 240
Leu Ser Asn Leu Val Met Glu Glu Leu Leu Pro Thr Leu Gln Thr Asp
245 250 255
Leu Leu Pro Lys Met Lys Gly Lys Lys Asn Asp Arg Lys Arg Thr Trp
260 265 270
Leu Gly Leu Leu Glu Glu Ala Tyr Thr Leu Val Gln His Gln Val Ser
275 280 285
Glu Gly Leu Ser Ala Leu Lys Glu Glu Cys Arg Ala Leu Thr Lys Gly
290 295 300
Leu Glu Gly Thr Ile Arg Ser Asp Met Asp Gln Ile Val Asn Ser Lys
305 310 315 320
Asn Tyr Leu Ile Gly Lys Ile Lys Ala Met Val Ala Gln Pro Ala Glu
325 330 335
Lys Ser Cys Leu Glu Ser Val Gln Pro Phe Leu Ala Ser Ile Leu Glu
340 345 350
Glu Leu Met Gly Pro Val Ser Ser Gly Phe Ser Glu Val Arg Val Leu
355 360 365
Phe Glu Lys Glu Val Asn Glu Val Ser Gln Asn Phe Gln Thr Thr Lys
370 375 380
Asp Ser Val Gln Leu Lys Glu His Leu Asp Arg Leu Met Asn Leu Pro
385 390 395 400
Leu His Ser Val Lys Met Glu Pro Cys Tyr Thr Lys Val Asn Leu Leu
405 410 415
His Glu Arg Leu Gln Asp Leu Lys Ser Arg Phe Arg Phe Pro His Ile
420 425 430
Asp Leu Val Val Gln Arg Thr Gln Asn Tyr Met Gln Glu Leu Met Glu
435 440 445
Asn Ala Val Phe Thr Phe Glu Gln Leu Leu Ser Pro His Leu Gln Gly
450 455 460
Glu Ala Ser Lys Thr Ala Val Ala Ile Glu Lys Val Lys Leu Arg Val
465 470 475 480
Leu Lys Gln Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Thr Ile Arg Lys Lys Ile Phe
485 490 495
Gln Glu Ala Leu Val Gln Ile Thr Leu Pro Thr Val Gln Lys Ala Leu
500 505 510
Ala Ser Thr Cys Lys Pro Glu Leu Gln Lys Tyr Glu Gln Phe Ile Phe
515 520 525
Ala Asp His Thr Asn Met Ile His Val Glu Asn Val Tyr Glu Glu Ile
530 535 540
Leu His Gln Ile Leu Leu Asp Glu Thr Leu Lys Val Ile Lys Glu Ala
545 550 555 560
Ala Ile Leu Lys Lys His Asn Leu Phe Glu Asp Asn Met Ala Leu Pro
565 570 575
Ser Glu Ser Val Ser Ser Leu Thr Asp Leu Lys Pro Pro Thr Gly Ser
580 585 590
Asn Gln Ala Ser Pro Ala Arg Arg Ala Ser Ala Ile Leu Pro Gly Val
595 600 605
Leu Gly Ser Glu Thr Leu Ser Asn Glu Val Phe Gln Glu Ser Glu Glu
610 615 620
Glu Lys Gln Pro Glu Val Pro Ser Ser Leu Ala Lys Gly Glu Ser Leu
625 630 635 640
Ser Leu Pro Gly Pro Ser Pro Pro Pro Asp Gly Thr Glu Gln Val Ile
645 650 655
Ile Ser Arg Val Asp Asp Pro Val Val Asn Pro Val Ala Thr Glu Asp
660 665 670
Thr Ala Gly Leu Pro Gly Thr Cys Ser Ser Glu Leu Glu Phe Gly Gly
675 680 685
Thr Leu Glu Asp Glu Glu Pro Ala Gln Glu Glu Pro Glu Pro Ile Thr
690 695 700
Ala Ser Gly Ser Leu Lys Ala Leu Arg Lys Leu Leu Thr Ala Ser Val
705 710 715 720
Glu Val Pro Val Asp Ser Ala Pro Val Met Glu Glu Asp Thr Asn Gly
725 730 735
Glu Ser His Val Pro Gln Glu Asn Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Pro
740 745 750
Ser Gln Ala Ala Ala Ile His Pro Asp Asn Cys Glu Glu Ser Glu Val
755 760 765
Ser Glu Arg Glu Ala Gln Pro Pro Cys Pro Glu Ala His Gly Glu Glu
770 775 780
Leu Gly Gly Phe Pro Glu Val Gly Ser Pro Ala Ser Pro Pro Ala Ser
785 790 795 800
Gly Gly Leu Thr Glu Glu Pro Leu Gly Pro Met Glu Gly Glu Leu Pro
805 810 815
Gly Glu Ala Cys Thr Leu Thr Ala His Glu Gly Arg Gly Gly Lys Cys
820 825 830
Thr Glu Glu Gly Asp Ala Ser Gln Gln Glu Gly Cys Thr Leu Gly Ser
835 840 845
Asp Pro Ile Cys Leu Ser Glu Ser Gln Val Ser Glu Glu Gln Glu Glu
850 855 860
Met Gly Gly Gln Ser Ser Ala Ala Gln Ala Thr Ala Ser Val Asn Ala
865 870 875 880
Glu Glu Ile Lys Val Ala Arg Ile His Glu Cys Gln Trp Val Val Glu
885 890 895
Asp Ala Pro Asn Pro Asp Val Leu Leu Ser His Lys Asp Asp Val Lys
900 905 910
Glu Gly Glu Gly Gly Gln Glu Ser Phe Pro Glu Leu Pro Ser Glu Glu
915 920 925
<210> 59
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP12 primer for GIG39
<400> 59
aagcttgagt gct 13
<210> 60
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG39
<400> 60
aagctttttt ttttta 16
<210> 61
<211> 3693
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 61
ccagtattga tcgggagagc cggagcgagc tcttcgggga gcagcgatgc gaccctccgg 60
gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgct ggctgcgctc tgcccggcga gtcgggctct 120
ggaggaaaag aaagtttgcc aatgcacgag taacaagctc acgcagttgg gcacttttga 180
agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt caataactgt gaggtggtcc ttgggaattt 240
ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga tctttccttc ttaaagacca tccaggaggt 300
ggctggttat gtcctcattg ccctcaacac agtggagcga attcctttgg aaaacctgca 360
gatcatcaga ggaaatatgt actacgaaaa ttcctatgcc ttagcagtct tatctaacta 420
tgatgcaaat aaaaccggac tgaaggagct gcccatgaga aatttacagg aaatcctgca 480
tggcgccgtg cggttcagca acaaccctgc cctgtgcaac gtggagagca tccagtggcg 540
ggacatagtc agcagtgact ttctcagcaa catgtcgatg gacttccaga accacctggg 600
cagctgccaa aagtgtgatc caagctgtcc caatgggagc tgctggggtg caggagagga 660
gaactgccag aaactgacca aaatcatctg tgcccagcag tgctccgggc gctgccgtgg 720
caagtccccc agtgactgct gccacaacca gtgtgctgca ggctgcacag gcccccggga 780
gagcgactgc ctggtctgcc gcaaattccg agacgaagcc acgtgcaagg acacctgccc 840
cccactcatg ctctacaacc ccaccacgta ccagatggat gtgaaccccg agggcaaata 900
cagctttggt gccacctgcg tgaagaagtg tccccgtaat tatgtggtga cagatcacgg 960
ctcgtgcgtc cgagcctgtg gggccgacag ctatgagatg gaggaagacg gcgtccgcaa 1020
gtgtaagaag tgcgaagggc cttgccgcaa agtgtgtaac ggaataggta ttggtgaatt 1080
taaagactca ctctccataa atgctacgaa tattaaacac ttcaaaaact gcacctccat 1140
cagtggcgat ctccacatcc tgccggtggc atttaggggt gactccttca cacatactcc 1200
tcctctggat ccacaggaac tggatattct gaaaaccgta aaggaaatca cagggttttt 1260
gctgattcag gcttggcctg aaaacaggac ggacctccat gcctttgaga acctagaaat 1320
catacgcggc aggaccaagc aacatggtca gttttctctt gcagtcgtca gcctgaacat 1380
aacatccttg ggattacgct ccctcaagga gataagtgat ggagatgtga taatttcagg 1440
aaacaaaaat ttgtgctatg caaatacaat aaactggaaa aaactgtttg ggacctccgg 1500
tcagaaaacc aaaattataa gcaacagagg tgaaaacagc tgcaaggcca caggccaggt 1560
ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg gagcccaggg actgcgtctc 1620
ttgccggaat gtcagccgag gcagggaatg cgtggacaag tgcaaccttc tggagggtga 1680
gccaagggag tttgtggaga actctgagtg catacagtgc cacccagagt gcctgcctca 1740
ggccatgaac atcacctgca caggacgggg accagacaac tgtatccagt gtgcccacta 1800
cattgacggc ccccactgcg tcaagacctg cccggcagga gtcatgggag aaaacaacac 1860
cctggtctgg aagtacgcag acgccggcca tgtgtgccac ctgtgccatc caaactgcac 1920
ctacggatgc actgggccag gtcttgaagg ctgtccaacg aatgggccta agatcccgtc 1980
catcgccact gggatggtgg gggccctcct cttgctgctg gtggtggccc tggggatcgg 2040
cctcttcatg cgaaggcgcc acatcgttcg gaagcgcacg ctgcggaggc tgctgcagga 2100
gagggagctt gtggagcctc ttacacccag tggagaagct cccaaccaag ctctcttgag 2160
gatcttgaag gaaactgaat tcaaaaagat caaagtgctg ggctccggtg cgttcggcac 2220
ggtgtataag ggactctgga tcccagaagg tgagaaagtt aaaattcccg tcgctatcaa 2280
ggaattaaga gaagcaacat ctccgaaagc caacaaggaa atcctcgatg aagcctacgt 2340
gatggccagc gtggacaacc cccacgtgtg ccgcctgctg ggcatctgcc tcacctccac 2400
cgtgcagctc atcacgcagc tcatgccctt cggctgcctc ctggactatg tccgggaaca 2460
caaagacaat attggctccc agtacctgct caactggtgt gtgcagatcg caaagggcat 2520
gaactacttg gaggaccgtc gcttggtgca ccgcgacctg gcagccagga acgtactggt 2580
gaaaacaccg cagcatgtca agatcacaga ttttgggctg gccaaactgc tgggtgcgga 2640
agagaaagaa taccatgcag aaggaggcaa agtgcctatc aagtggatgg cattggaatc 2700
aattttacac agaatctata cccaccagag tgatgtctgg agctacgggg tgaccgtttg 2760
ggagttgatg acctttggat ccaagccata tgacggaatc cctgccagcg agatctcctc 2820
catcctggag aaaggagaac gcctccctca gccacccata tgtaccatcg atgtctacat 2880
gatcatggtc aagtgctgga tgatagacgc agatagtcgc ccaaagttcc gtgagttgat 2940
catcgaattc tccaaaatgg cccgagaccc ccagcgctac cttgtcattc agggggatga 3000
aagaatgcat ttgccaagtc ctacagactc caacttctac cgtgccctga tggatgaaga 3060
agacatggac gacgtggtgg atgccgacga gtacctcatc ccacagcagg gcttcttcag 3120
cagcccctcc acgtcacgga ctcccctcct gagctctctg agtgcaacca gcaacaattc 3180
caccgtggct tgcattgata gaaatgggct gcaaagctgt cccatcaagg aagacagctt 3240
cttgcagcga tacagctcag accccacagg cgccttgact gaggacagca tagacgacac 3300
cttcctccca gtgcctgaat acataaacca gtccgttccc aaaaggcccg ctggctctgt 3360
gcagaatcct gtctatcaca atcagcctct gaaccccgcg cccagcagag acccacacta 3420
ccaggacccc cacagcactg cagtgggcaa ccccgagtat ctcaacactg tccagcccac 3480
ctgtgtcaac agcacattcg acagccctgc ccactgggcc cagaaaggca gccaccaaat 3540
tagcctggac aaccctgact accagcagga cttctttccc aaggaagcca agccaaatgg 3600
catctttaag ggctccacag ctgaaaatgc agaataccta agggtcgcgc cacaaagcag 3660
tgaatttatt ggagcatgac cacggaggat agt 3693
<210> 62
<211> 1210
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 62
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln
20 25 30
Cys Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe
35 40 45
Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn
50 55 60
Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys
65 70 75 80
Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val
85 90 95
Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr
100 105 110
Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn
115 120 125
Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu
130 135 140
His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu
145 150 155 160
Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met
165 170 175
Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro
180 185 190
Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln
195 200 205
Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg
210 215 220
Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys
225 230 235 240
Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro
260 265 270
Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly
275 280 285
Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His
290 295 300
Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu
305 310 315 320
Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val
325 330 335
Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn
340 345 350
Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp
355 360 365
Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr
370 375 380
Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu
385 390 395 400
Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp
405 410 415
Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln
420 425 430
His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu
435 440 445
Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser
450 455 460
Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu
465 470 475 480
Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu
485 490 495
Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro
500 505 510
Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn
515 520 525
Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly
530 535 540
Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro
545 550 555 560
Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro
565 570 575
Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val
580 585 590
Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp
595 600 605
Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys
610 615 620
Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly
625 630 635 640
Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu
645 650 655
Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His
660 665 670
Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu
675 680 685
Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu
690 695 700
Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser
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Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu
725 730 735
Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser
740 745 750
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser
755 760 765
Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser
770 775 780
Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp
785 790 795 800
Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn
805 810 815
Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg
820 825 830
Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro
835 840 845
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850 855 860
Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp
865 870 875 880
Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp
885 890 895
Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser
900 905 910
Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu
915 920 925
Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr
930 935 940
Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys
945 950 955 960
Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln
965 970 975
Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro
980 985 990
Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp
995 1000 1005
Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe
1010 1015 1020
Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala
1025 1030 1035 1040
Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln
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Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Tyr Ser Ser Asp
1060 1065 1070
Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro
1075 1080 1085
Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser
1090 1095 1100
Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser
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Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro
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Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp
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Ser Pro Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp
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Asn Pro Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn
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Gly Ile Phe Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val
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Ala Pro Gln Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala
1205 1210
<210> 63
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP7 primer for GIG40
<400> 63
aagcttaacg agg 13
<210> 64
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG40
<400> 64
aagctttttt tttttg 16
<210> 65
<211> 1939
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 65
tggcacaatg aagtgggtaa cctttatttc ccttcttttt ctctttagct cggcttattc 60
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tccatttgaa gatcatgtaa aattagtgaa tgaagtaact gaatttgcaa aaacatgtgt 240
tgctgatgag tcagctgaaa attgtgacaa atcacttcat accctttttg gagacaaatt 300
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tttgaaaaaa tacttatatg aaattgccag aagacatcct tacttttatg ccccggaact 540
ccttttcttt gctaaaaggt ataaagctgc ttttacagaa tgttgccaag ctgctgataa 600
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caaacagaga ctcaagtgtg ccagtctcca aaaatttgga gaaagagctt tcaaagcatg 720
ggcagtagct cgcctgagcc agagatttcc caaagctgag tttgcagaag tttccaagtt 780
agtgacagat cttaccaaag tccacacgga atgctgccat ggagatctgc ttgaatgtgc 840
tgatgacagg gcggaccttg ccaagtatat ctgtgaaaat caagattcga tctccagtaa 900
actgaaggaa tgctgtgaaa aacctctgtt ggaaaaatcc cactgcattg ccgaagtgga 960
aaatgatgag atgcctgctg acttgccttc attagctgct gattttgttg aaagtaagga 1020
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aaccactcta gagaagtgct gtgccgctgc agatcctcat gaatgctatg ccaaagtgtt 1200
cgatgaattt aaacctcttg tggaagagcc tcagaattta atcaaacaaa attgtgagct 1260
ttttgagcag cttggagagt acaaattcca gaatgcgcta ttagttcgtt acaccaagaa 1320
agtaccccaa gtgtcaactc caactcttgt agaggtctca agaaacctag gaaaagtggg 1380
cagcaaatgt tgtaaacatc ctgaagcaaa aagaatgccc tgtgcagaag actatctatc 1440
cgtggtcctg aaccagttat gtgtgttgca tgagaaaacg ccagtaagtg acagagtcac 1500
caaatgctgc acagaatcct tggtgaacag gcgaccatgc ttttcagctc tggaagtcga 1560
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cacactttct gagaaggaga gacaaatcaa gaaacaaact gcacttgttg agcttgtgaa 1680
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tttcgttggt gtaaagcca 1939
<210> 66
<211> 609
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 66
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala
20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
35 40 45
Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
50 55 60
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95
Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala
100 105 110
Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
115 120 125
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val
130 135 140
Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys
145 150 155 160
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175
Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys
180 185 190
Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys
210 215 220
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val
225 230 235 240
Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser
245 250 255
Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly
260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
275 280 285
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu
290 295 300
Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp
305 310 315 320
Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser
325 330 335
Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
340 345 350
Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val
355 360 365
Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys
370 375 380
Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu
385 390 395 400
Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys
405 410 415
Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu
420 425 430
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445
Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His
450 455 460
Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
465 470 475 480
Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg
485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510
Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu
530 535 540
Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys
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Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala
565 570 575
Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe
580 585 590
Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly
595 600 605
Leu
<210> 67
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP8 primer for GIG42
<400> 67
aagcttttac cgc 13
<210> 68
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG42
<400> 68
aagctttttt tttttg 16
<210> 69
<211> 1106
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 69
ttccctttcc tctgccagta caactagacc cggcgtctgg cgtccccggt gcccagcatt 60
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ctcctcctga atacaattct cattttttac caggaccccc tggaacagct gtccctccac 240
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tggaggtgca gtgtcctcct ggtgtcacca ttggctttgt tgcggaacat tggaacctgt 780
gcagggcggt gtacagcatc caaaatgaga agaaagaaaa tgtgatgaga gttcgtgggc 840
catgctcaac ctatggctgt ggttcagatt ctgtttttga ggtcaaatcc cttgatggca 900
tatccaacat cggcagtatt atccggaagt ggaatggttt gttatcagca atggcagatg 960
ctgaccattt tgacattcac ttcccactag acctggatgt gaagatgaaa gccatgattt 1020
ttggagcttg cttcctcatt gacttcatgt attttgaaag atctccacca caacgttcaa 1080
gatagagaga cacagcaagc catcaa 1106
<210> 70
<211> 329
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 70
Met Ser Gly Val Val Pro Thr Ala Pro Glu Gln Pro Ala Gly Glu Met
1 5 10 15
Glu Asn Gln Thr Lys Pro Pro Asp Pro Arg Pro Asp Ala Pro Pro Glu
20 25 30
Tyr Asn Ser His Phe Leu Pro Gly Pro Pro Gly Thr Ala Val Pro Pro
35 40 45
Pro Thr Gly Tyr Pro Gly Gly Leu Pro Met Gly Tyr Tyr Ser Pro Gln
50 55 60
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65 70 75 80
Val Arg Tyr Gln Pro Gly Lys Tyr Pro Met Pro Asn Gln Ser Val Pro
85 90 95
Ile Thr Trp Met Pro Gly Pro Thr Pro Met Ala Asn Cys Pro Pro Gly
100 105 110
Leu Glu Tyr Leu Val Gln Leu Asp Asn Ile His Val Leu Gln His Phe
115 120 125
Glu Pro Leu Glu Met Met Thr Cys Phe Glu Thr Asn Asn Arg Tyr Asp
130 135 140
Ile Lys Asn Asn Ser Asp Gln Met Val Tyr Ile Val Thr Glu Asp Thr
145 150 155 160
Asp Asp Phe Thr Arg Asn Ala Tyr Arg Thr Leu Arg Pro Phe Val Leu
165 170 175
Arg Val Thr Asp Cys Met Gly Arg Glu Ile Met Thr Met Gln Arg Pro
180 185 190
Phe Arg Cys Thr Cys Cys Cys Phe Cys Cys Pro Ser Ala Arg Gln Glu
195 200 205
Leu Glu Val Gln Cys Pro Pro Gly Val Thr Ile Gly Phe Val Ala Glu
210 215 220
His Trp Asn Leu Cys Arg Ala Val Tyr Ser Ile Gln Asn Glu Lys Lys
225 230 235 240
Glu Asn Val Met Arg Val Arg Gly Pro Cys Ser Thr Tyr Gly Cys Gly
245 250 255
Ser Asp Ser Val Phe Glu Val Lys Ser Leu Asp Gly Ile Ser Asn Ile
260 265 270
Gly Ser Ile Ile Arg Lys Trp Asn Gly Leu Leu Ser Ala Met Ala Asp
275 280 285
Ala Asp His Phe Asp Ile His Phe Pro Leu Asp Leu Asp Val Lys Met
290 295 300
Lys Ala Met Ile Phe Gly Ala Cys Phe Leu Ile Asp Phe Met Tyr Phe
305 310 315 320
Glu Arg Ser Pro Pro Gln Arg Ser Arg
325
<210> 71
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP10 primer for GIG43
<400> 71
aagcttccac gta 13
<210> 72
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG43
<400> 72
aagctttttt tttttg 16
<210> 73
<211> 1715
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 73
ggagttccgc tcctctctcc aaccggggtc cccctccagc gaccctaaag cttcccagac 60
ttccgcttca attcctgtcc gccccccacg cccacctcaa cgtggagcgc agtggtctcc 120
gaggagcgcc ggagctgccc cgcctgccca gcgggatcag cacttcgcat caaggcccaa 180
gaaaagcaag tcctccagcg ttctgagcac ccgggcctga gggaaggtcc taacagcccc 240
cgggagccag tctccaacgc ctcccgcagc agcccgccgc tcccaggtgc ccgcgtgcgc 300
cgctgccgcc gcaatcccgc acgcgtcccg cgcccgcccc actttgccta tccccgggac 360
taagacggga atcctgtgaa gcagctccag ctatgtgtga agaagaggac agcactgcct 420
tggtgtgtga caatggctct gggctctgta aggccggctt tgctggggac gatgctccca 480
gggctgtttt cccatccatt gtgggacgtc ccagacatca gggggtgatg gtgggaatgg 540
gacaaaaaga cagctacgtg ggtgacgaag cacagagcaa aagaggaatc ctgaccctga 600
agtacccgat agaacatggc atcatcacca actgggacga catggaaaag atctggcacc 660
actctttcta caatgagctt cgtgttgccc ctgaagagca tcccaccctg ctcacggagg 720
cacccctgaa ccccaaggcc aaccgggaga aaatgactca aattatgttt gagactttca 780
atgtcccagc catgtatgtg gctatccagg cggtgctgtc tctctatgcc tctggacgca 840
caactggcat cgtgctggac tctggagatg gtgtcaccca caatgtcccc atctatgagg 900
gctatgcctt gccccatgcc atcatgcgtc tggatctggc tggccgagat ctcactgact 960
acctcatgaa gatcctgact gagcgtggct attccttcgt tactactgct gagcgtgaga 1020
ttgtccggga catcaaggag aaactgtgtt atgtagctct ggactttgaa aatgagatgg 1080
ccactgccgc atcctcatcc tcccttgaga agagttacga gttgcctgat gggcaagtga 1140
tcaccatcgg aaatgaacgt ttccgctgcc cagagaccct gttccagcca tccttcatcg 1200
ggatggagtc tgctggcatc catgaaacca cctacaacag catcatgaag tgtgatattg 1260
acatcaggaa ggacctctat gctaacaatg tcctatcagg gggcaccact atgtaccctg 1320
gcattgccga ccgaatgcag aaggagatca cggccctagc acccagcacc atgaagatca 1380
agatcattgc ccctccggag cgcaaatact ctgtctggat cggtggctcc atcctggcct 1440
ctctgtccac cttccagcag atgtggatca gcaaacagga atacgatgaa gccgggcctt 1500
ccattgtcca ccgcaaatgc ttctaaaaca ctttcctgct cctctctgtc tctagcacac 1560
aactgtgaat gtcctgtgga attatgcctt cagttctttt ccaaatcatt cctagccaaa 1620
gctctgactc gttacctatg tgttttttaa taaatctgaa ataggctact ggtaaaaaaa 1680
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1715
<210> 74
<211> 377
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 74
Met Cys Glu Glu Glu Asp Ser Thr Ala Leu Val Cys Asp Asn Gly Ser
1 5 10 15
Gly Leu Cys Lys Ala Gly Phe Ala Gly Asp Asp Ala Pro Arg Ala Val
20 25 30
Phe Pro Ser Ile Val Gly Arg Pro Arg His Gln Gly Val Met Val Gly
35 40 45
Met Gly Gln Lys Asp Ser Tyr Val Gly Asp Glu Ala Gln Ser Lys Arg
50 55 60
Gly Ile Leu Thr Leu Lys Tyr Pro Ile Glu His Gly Ile Ile Thr Asn
65 70 75 80
Trp Asp Asp Met Glu Lys Ile Trp His His Ser Phe Tyr Asn Glu Leu
85 90 95
Arg Val Ala Pro Glu Glu His Pro Thr Leu Leu Thr Glu Ala Pro Leu
100 105 110
Asn Pro Lys Ala Asn Arg Glu Lys Met Thr Gln Ile Met Phe Glu Thr
115 120 125
Phe Asn Val Pro Ala Met Tyr Val Ala Ile Gln Ala Val Leu Ser Leu
130 135 140
Tyr Ala Ser Gly Arg Thr Thr Gly Ile Val Leu Asp Ser Gly Asp Gly
145 150 155 160
Val Thr His Asn Val Pro Ile Tyr Glu Gly Tyr Ala Leu Pro His Ala
165 170 175
Ile Met Arg Leu Asp Leu Ala Gly Arg Asp Leu Thr Asp Tyr Leu Met
180 185 190
Lys Ile Leu Thr Glu Arg Gly Tyr Ser Phe Val Thr Thr Ala Glu Arg
195 200 205
Glu Ile Val Arg Asp Ile Lys Glu Lys Leu Cys Tyr Val Ala Leu Asp
210 215 220
Phe Glu Asn Glu Met Ala Thr Ala Ala Ser Ser Ser Ser Leu Glu Lys
225 230 235 240
Ser Tyr Glu Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Thr Ile Gly Asn Glu Arg
245 250 255
Phe Arg Cys Pro Glu Thr Leu Phe Gln Pro Ser Phe Ile Gly Met Glu
260 265 270
Ser Ala Gly Ile His Glu Thr Thr Tyr Asn Ser Ile Met Lys Cys Asp
275 280 285
Ile Asp Ile Arg Lys Asp Leu Tyr Ala Asn Asn Val Leu Ser Gly Gly
290 295 300
Thr Thr Met Tyr Pro Gly Ile Ala Asp Arg Met Gln Lys Glu Ile Thr
305 310 315 320
Ala Leu Ala Pro Ser Thr Met Lys Ile Lys Ile Ile Ala Pro Pro Glu
325 330 335
Arg Lys Tyr Ser Val Trp Ile Gly Gly Ser Ile Leu Ala Ser Leu Ser
340 345 350
Thr Phe Gln Gln Met Trp Ile Ser Lys Gln Glu Tyr Asp Glu Ala Gly
355 360 365
Pro Ser Ile Val His Arg Lys Cys Phe
370 375
<210> 75
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP16 primer for GIG46
<400> 75
aagctttaga gcg 13
<210> 76
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG46
<400> 76
aagctttttt ttttta 16
<210> 77
<211> 2117
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 77
gtctgtgtgc agaggggatt caacttcaat ttttctgcag tggctctgag tccagcccct 60
tacttaaaga tctggaaagc atgaagactg ggcttttttt cctatgtctc ttgggaactg 120
cagctgcaat cccgacaaat gcaagattat tatctgatca ttccaaacca actgctgaaa 180
cggtagcacc cgacaacact gcaatcccca gtttaagggc tgaagatgaa gaaaatgaaa 240
aagaaacagc agtatccaca gaagacgatt cccaccataa ggctgaaaaa tcatcagtac 300
taaagtcaaa agaggaaagc catgaacagt cagcagaaca gggcaagagt tctagccaag 360
agctgggatt gaaggatcaa gaggacagtg atggtgactt aagtgtgaat ttggagtatg 420
caccaactga aggtacattg gacataaaag aagatatgag tgagcctcag gagaaaaaac 480
tctcagagaa cactgatttt ttggctcctg gtgttagttc cttcacagat tctaaccaac 540
aagaaagtat cacaaagaga gaggaaaacc aagaacaacc tagaaattat tcacatcatc 600
agttgaacag gagcagtaaa catagccaag gcctaaggga tcaaggaaac caagagcagg 660
atccaaatat ttccaatgga gaagaggaag aagaaaaaga gccaggtgaa gttggtaccc 720
acaatgataa ccaagaaaga aagacagaat tgcccaggga gcatgctaac agcaagcagg 780
aggaagacaa tacccaatct gatgatattt tggaagagtc tgatcaacca actcaagtaa 840
gcaagatgca ggaggatgaa tttgatcagg gtaaccaaga acaagaagat aactccaatg 900
cagaaatgga agaggaaaat gcatcgaacg tcaataagca cattcaagaa actgaatggc 960
agagtcaaga gggtaaaact ggcctagaag ctatcagcaa ccacaaagag acagaagaaa 1020
agactgtttc tgaggctctg ctcatggaac ctactgatga tggtaatacc acgcccagaa 1080
atcatggagt tgatgatgat ggcgatgatg atggcgatga tggcggcact gatggcccca 1140
ggcacagtgc aagtgatgac tacttcatcc caagccaggc ctttctggag gccgagagag 1200
ctcaatccat tgcctatcac ctcaaaattg aggagcaaag agaaaaagta catgaaaatg 1260
aaaatatagg taccactgag cctggagagc accaagaggc caagaaagca gagaactcat 1320
caaatgagga ggaaacgtca agtgaaggca acatgagggt gcatgctgtg gattcttgca 1380
tgagcttcca gtgtaaaaga ggccacatct gtaaggcaga ccaacaggga aaacctcact 1440
gtgtctgcca ggatccagtg acttgtcctc caacaaaacc ccttgatcaa gtttgtggca 1500
ctgacaatca gacctatgct agttcctgtc atctattcgc tactaaatgc agactggagg 1560
ggaccaaaaa ggggcatcaa ctccagctgg attattttgg agcctgcaaa tctattccta 1620
cttgtacgga ctttgaagtg attcagtttc ctctacggat gagagactgg ctcaagaata 1680
tcctcatgca gctttatgaa gccaactctg aacacgctgg ttatctaaat gagaagcaga 1740
gaaataaagt caagaaaatt tacctggatg aaaagaggct tttggctggg gaccatccca 1800
ttgaccttct cttaagggac tttaagaaaa actaccacat gtatgtgtat cctgtgcact 1860
ggcagtttag tgaacttgac caacacccta tggatagagt cttgacacat tctgaacttg 1920
ctcctctgcg agcatctctg gtgcccatgg aacactgcat aacccgtttc tttgaggagt 1980
gtgaccccaa caaggataag cacatcaccc tgaaggagtg gggccactgc tttggaatta 2040
aagaagagga catagatgaa aatctcttgt tttgaacgaa gattttaaag aactcaactt 2100
tccagcatcc tcctctg 2117
<210> 78
<211> 664
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 78
Met Lys Thr Gly Leu Phe Phe Leu Cys Leu Leu Gly Thr Ala Ala Ala
1 5 10 15
Ile Pro Thr Asn Ala Arg Leu Leu Ser Asp His Ser Lys Pro Thr Ala
20 25 30
Glu Thr Val Ala Pro Asp Asn Thr Ala Ile Pro Ser Leu Arg Ala Glu
35 40 45
Asp Glu Glu Asn Glu Lys Glu Thr Ala Val Ser Thr Glu Asp Asp Ser
50 55 60
His His Lys Ala Glu Lys Ser Ser Val Leu Lys Ser Lys Glu Glu Ser
65 70 75 80
His Glu Gln Ser Ala Glu Gln Gly Lys Ser Ser Ser Gln Glu Leu Gly
85 90 95
Leu Lys Asp Gln Glu Asp Ser Asp Gly Asp Leu Ser Val Asn Leu Glu
100 105 110
Tyr Ala Pro Thr Glu Gly Thr Leu Asp Ile Lys Glu Asp Met Ser Glu
115 120 125
Pro Gln Glu Lys Lys Leu Ser Glu Asn Thr Asp Phe Leu Ala Pro Gly
130 135 140
Val Ser Ser Phe Thr Asp Ser Asn Gln Gln Glu Ser Ile Thr Lys Arg
145 150 155 160
Glu Glu Asn Gln Glu Gln Pro Arg Asn Tyr Ser His His Gln Leu Asn
165 170 175
Arg Ser Ser Lys His Ser Gln Gly Leu Arg Asp Gln Gly Asn Gln Glu
180 185 190
Gln Asp Pro Asn Ile Ser Asn Gly Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Pro
195 200 205
Gly Glu Val Gly Thr His Asn Asp Asn Gln Glu Arg Lys Thr Glu Leu
210 215 220
Pro Arg Glu His Ala Asn Ser Lys Gln Glu Glu Asp Asn Thr Gln Ser
225 230 235 240
Asp Asp Ile Leu Glu Glu Ser Asp Gln Pro Thr Gln Val Ser Lys Met
245 250 255
Gln Glu Asp Glu Phe Asp Gln Gly Asn Gln Glu Gln Glu Asp Asn Ser
260 265 270
Asn Ala Glu Met Glu Glu Glu Asn Ala Ser Asn Val Asn Lys His Ile
275 280 285
Gln Glu Thr Glu Trp Gln Ser Gln Glu Gly Lys Thr Gly Leu Glu Ala
290 295 300
Ile Ser Asn His Lys Glu Thr Glu Glu Lys Thr Val Ser Glu Ala Leu
305 310 315 320
Leu Met Glu Pro Thr Asp Asp Gly Asn Thr Thr Pro Arg Asn His Gly
325 330 335
Val Asp Asp Asp Gly Asp Asp Asp Gly Asp Asp Gly Gly Thr Asp Gly
340 345 350
Pro Arg His Ser Ala Ser Asp Asp Tyr Phe Ile Pro Ser Gln Ala Phe
355 360 365
Leu Glu Ala Glu Arg Ala Gln Ser Ile Ala Tyr His Leu Lys Ile Glu
370 375 380
Glu Gln Arg Glu Lys Val His Glu Asn Glu Asn Ile Gly Thr Thr Glu
385 390 395 400
Pro Gly Glu His Gln Glu Ala Lys Lys Ala Glu Asn Ser Ser Asn Glu
405 410 415
Glu Glu Thr Ser Ser Glu Gly Asn Met Arg Val His Ala Val Asp Ser
420 425 430
Cys Met Ser Phe Gln Cys Lys Arg Gly His Ile Cys Lys Ala Asp Gln
435 440 445
Gln Gly Lys Pro His Cys Val Cys Gln Asp Pro Val Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Thr Lys Pro Leu Asp Gln Val Cys Gly Thr Asp Asn Gln Thr Tyr Ala
465 470 475 480
Ser Ser Cys His Leu Phe Ala Thr Lys Cys Arg Leu Glu Gly Thr Lys
485 490 495
Lys Gly His Gln Leu Gln Leu Asp Tyr Phe Gly Ala Cys Lys Ser Ile
500 505 510
Pro Thr Cys Thr Asp Phe Glu Val Ile Gln Phe Pro Leu Arg Met Arg
515 520 525
Asp Trp Leu Lys Asn Ile Leu Met Gln Leu Tyr Glu Ala Asn Ser Glu
530 535 540
His Ala Gly Tyr Leu Asn Glu Lys Gln Arg Asn Lys Val Lys Lys Ile
545 550 555 560
Tyr Leu Asp Glu Lys Arg Leu Leu Ala Gly Asp His Pro Ile Asp Leu
565 570 575
Leu Leu Arg Asp Phe Lys Lys Asn Tyr His Met Tyr Val Tyr Pro Val
580 585 590
His Trp Gln Phe Ser Glu Leu Asp Gln His Pro Met Asp Arg Val Leu
595 600 605
Thr His Ser Glu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Ser Leu Val Pro Met Glu
610 615 620
His Cys Ile Thr Arg Phe Phe Glu Glu Cys Asp Pro Asn Lys Asp Lys
625 630 635 640
His Ile Thr Leu Lys Glu Trp Gly His Cys Phe Gly Ile Lys Glu Glu
645 650 655
Asp Ile Asp Glu Asn Leu Leu Phe
660
<210> 79
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP2 primer for PIG33
<400> 79
aagcttcgac tgt 13
<210> 80
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for PIG33
<400> 80
aagctttttt ttttta 16
<210> 81
<211> 1349
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 81
agagggacta ggctgggtgt ggagctgcag cgtatccaca ggccccagga tgcaggccct 60
ggtgctactc ctctgcattg gagccctcct cgggcacagc agctgccaga accctgccag 120
ccccccggag gagggctccc ctgaccccga cagcacaggg gcgctggtgg aggaggagga 180
tcctttcttc aaagtccccg tgaacaagct ggcagcggct gtctccaact tcggctatga 240
cctgtaccgg gtgcgatcca gcatgagccc cacgaccaac gtgctcctgt ctcctctcag 300
tgtggccacg gccctctcgg ccctctcgct gggagcggag cagcgaacag aatccatcat 360
tcaccgggct ctctactatg acttgattag cagcccagac atccatggta cctataagga 420
gctccttgac acggtcactg ccccccagaa gaacctcaag agtgcctccc ggatcgtctt 480
tgagaagaag ctgcgcataa aatccagctt tgtggcacct ctggaaaagt catatgggac 540
caggcccaga gtcctgacgg gcaaccctcg cttggacctg caagagatca acaactgggt 600
gcaggcgcag atgaaaggga agctcgccag gtccacaaag gaaattcccg atgagatcag 660
cattctcctt ctcggtgtgg cgcacttcaa ggggcagtgg gtaacaaagt ttgactccag 720
aaagacttcc ctcgaggatt tctacttgga tgaagagagg accgtgaggg tccccatgat 780
gtcggaccct aaggctgttt tacgctatgg cttggattca gatctcagct gcaagattgc 840
ccagctgccc ttgaccggaa gcatgagtat catcttcttc ctgcccctga aagtgaccca 900
gaatttgacc ttgatagagg agagcctcac ctccgagttc attcatgaca tagaccgaga 960
actgaagacc gtgcaggcgg tcctcactgt ccccaagctg aagctgagtt atgaaggcga 1020
agtcaccaag tccctgcagg agatgaagct gcaatccttg tttgattcac cagactttag 1080
caagatcaca ggcaaaccca tcaagctgac tcaggtggaa caccgggctg gctttgagtg 1140
gaacgaggat ggggcgggaa ccacccccag cccagggctg cagcctgccc acctcacctt 1200
cccgctggac tatcacctta accagccttt catcttcgta ctgagggaca cagacacagg 1260
ggcccttctc ttcattggca agattctgga ccccaggggc ccctaatatc ccagtttaat 1320
attccaatac cctagaagaa aacccgagg 1349
<210> 82
<211> 418
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 82
Met Gln Ala Leu Val Leu Leu Leu Cys Ile Gly Ala Leu Leu Gly His
1 5 10 15
Ser Ser Cys Gln Asn Pro Ala Ser Pro Pro Glu Glu Gly Ser Pro Asp
20 25 30
Pro Asp Ser Thr Gly Ala Leu Val Glu Glu Glu Asp Pro Phe Phe Lys
35 40 45
Val Pro Val Asn Lys Leu Ala Ala Ala Val Ser Asn Phe Gly Tyr Asp
50 55 60
Leu Tyr Arg Val Arg Ser Ser Met Ser Pro Thr Thr Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Ser Pro Leu Ser Val Ala Thr Ala Leu Ser Ala Leu Ser Leu Gly Ala
85 90 95
Glu Gln Arg Thr Glu Ser Ile Ile His Arg Ala Leu Tyr Tyr Asp Leu
100 105 110
Ile Ser Ser Pro Asp Ile His Gly Thr Tyr Lys Glu Leu Leu Asp Thr
115 120 125
Val Thr Ala Pro Gln Lys Asn Leu Lys Ser Ala Ser Arg Ile Val Phe
130 135 140
Glu Lys Lys Leu Arg Ile Lys Ser Ser Phe Val Ala Pro Leu Glu Lys
145 150 155 160
Ser Tyr Gly Thr Arg Pro Arg Val Leu Thr Gly Asn Pro Arg Leu Asp
165 170 175
Leu Gln Glu Ile Asn Asn Trp Val Gln Ala Gln Met Lys Gly Lys Leu
180 185 190
Ala Arg Ser Thr Lys Glu Ile Pro Asp Glu Ile Ser Ile Leu Leu Leu
195 200 205
Gly Val Ala His Phe Lys Gly Gln Trp Val Thr Lys Phe Asp Ser Arg
210 215 220
Lys Thr Ser Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Asp Glu Glu Arg Thr Val Arg
225 230 235 240
Val Pro Met Met Ser Asp Pro Lys Ala Val Leu Arg Tyr Gly Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Leu Ser Cys Lys Ile Ala Gln Leu Pro Leu Thr Gly Ser Met
260 265 270
Ser Ile Ile Phe Phe Leu Pro Leu Lys Val Thr Gln Asn Leu Thr Leu
275 280 285
Ile Glu Glu Ser Leu Thr Ser Glu Phe Ile His Asp Ile Asp Arg Glu
290 295 300
Leu Lys Thr Val Gln Ala Val Leu Thr Val Pro Lys Leu Lys Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Glu Gly Glu Val Thr Lys Ser Leu Gln Glu Met Lys Leu Gln Ser
325 330 335
Leu Phe Asp Ser Pro Asp Phe Ser Lys Ile Thr Gly Lys Pro Ile Lys
340 345 350
Leu Thr Gln Val Glu His Arg Ala Gly Phe Glu Trp Asn Glu Asp Gly
355 360 365
Ala Gly Thr Thr Pro Ser Pro Gly Leu Gln Pro Ala His Leu Thr Phe
370 375 380
Pro Leu Asp Tyr His Leu Asn Gln Pro Phe Ile Phe Val Leu Arg Asp
385 390 395 400
Thr Asp Thr Gly Ala Leu Leu Phe Ile Gly Lys Ile Leu Asp Pro Arg
405 410 415
Gly Pro
<210> 83
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP9 primer for PIG35
<400> 83
aagcttcatt ccg 13
<210> 84
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for PIG35
<400> 84
aagctttttt tttttc 16
<210> 85
<211> 430
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 85
ggaagcactt accctccact tcctcctcct gtttggcttc tgtctcacct agacccgtcc 60
ggtcgcagac tgtctccgag acgcttcctg tccgaatcag catgattctt cagaggctct 120
tcaggttctc ctctgtcatt cggtcagccg tctcagtcca tttgcggagg aacattggtg 180
ttacagcagt ggcatttaat aaggaacttg atcctataca gaaactcttt gtggacaaga 240
ttagagaata caaatctaag cgacagacat ctggaggacc tgttgatgct agttcagagt 300
atcagcaaga gctggagagg gagcttttta agctcaagca aatgtttggt aatgcagaca 360
tgaatacatt tcccaccttc aaatttgaag atcccaaatt tgaagtcatc gaaaaacccc 420
aggcctgaag 430
<210> 86
<211> 108
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 86
Met Ile Leu Gln Arg Leu Phe Arg Phe Ser Ser Val Ile Arg Ser Ala
1 5 10 15
Val Ser Val His Leu Arg Arg Asn Ile Gly Val Thr Ala Val Ala Phe
20 25 30
Asn Lys Glu Leu Asp Pro Ile Gln Lys Leu Phe Val Asp Lys Ile Arg
35 40 45
Glu Tyr Lys Ser Lys Arg Gln Thr Ser Gly Gly Pro Val Asp Ala Ser
50 55 60
Ser Glu Tyr Gln Gln Glu Leu Glu Arg Glu Leu Phe Lys Leu Lys Gln
65 70 75 80
Met Phe Gly Asn Ala Asp Met Asn Thr Phe Pro Thr Phe Lys Phe Glu
85 90 95
Asp Pro Lys Phe Glu Val Ile Glu Lys Pro Gln Ala
100 105
<210> 87
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP9 primer for PIG36
<400> 87
aagcttcatt ccg 13
<210> 88
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for PIG36
<400> 88
aagctttttt tttttg 16
<210> 89
<211> 2289
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 89
gcaatacatg gctactaagt ctttgatcat aagtcgaatt tatagacctg gaatttgcca 60
tcctagtctt tcctttttag taagacttct gtcctctggc agtgcatatg gtaggtctct 120
aatgtttctg catctccagg aagatgcaga tccttatttt tgctgggaaa tccttctaaa 180
tagaaatgta acatttttat aaaaacagat taatgtgttt ttcacttagt aaatgttttc 240
aagagctgaa ttgagaagga aagagactgg agtggttaat ggtgatttga tttctggcat 300
tctgagtttt ctgctacaat tagctgcatt acttggtgcc aaagagcagt ggggaattgt 360
tgagttgctg tatcctttaa aaaaaaacaa aaaacttgtt attttgaaag aacttaaggc 420
tcacaagatg ttacaaaaat agtagagtgg ccttacccta gatccagttt tccccattta 480
taacatttca cttagtccat tttcggaacc agaaaattaa cattggcata atgctattaa 540
ctaaactaca gacctttttt caatttcgcc agtttttcca cacatattca tttagttgct 600
ggatactttt aattcttgct gatttgtaaa ctggccttgc ttggatacaa caggaaagat 660
actatctgga taaagttcta cagttttaga gagactatta acacattaat gtgttccttt 720
gtcatgagca ataccctgcc tacactgctt ctaaattttc tgatttgttt ggctgtttgg 780
catctgaaac aatccaagac aaacttagaa agattaggca acacaaaaca cagtaagacc 840
tgttcatagc ttgttgccta gaaaaccagg tagcaggata ttctagatgc ttcctgctgc 900
ttctacgtga gtaggattag cactggggac aaaataagga gtttagagta aaccagtatt 960
tcagtcaaga gttagttggc acttagttaa tggcactgga aatagcttgt ggagagaata 1020
gaatacaatg gtatagactc ctaatgtttg ataaaatact attttcagag tggtagagag 1080
gttttatttg cctaaatagc cgttattaaa tggaataaca accacattag accaaattaa 1140
ttgcaaacac agcggcaacc tggggagaag ttgaaactcc agttttgtgg attacagttt 1200
tgagttttat gattgacatt tttaagtccc ctatttaagg ggtcaagatt ataacaatgt 1260
gtgtcttact aagtttctag gtcattgtga gcacttgata aatatttgct gaatgttgtt 1320
tttttgaatg aacataagat agaaacaaaa acttctcatc cagttaacta gagtgaatgt 1380
agggagaatt gttttgcttg taacatggag agtttatttt caagtgagga aagagaaaaa 1440
aattactcag acttgttcct ggtgaagtgc attctctgtt tgtatacttt ttgatggaga 1500
aattgatcta tagaactgct taattttttg aggcatttag acagcaatga aaggtagttc 1560
tccacaggac accgaatcaa aaggagagac cagactctgg cctcataccc agcctatttg 1620
aaacaagcta tctagtttct cctgcagaca ccttgtcaac aacatgcaac agtgtcaggt 1680
gccttgcagg aaaataatct gagtcccaag ctagcctgtg ctcatccaca atctcaatga 1740
acatgtcaag gaagaatttg cagagactca agggaagcac aatgggataa ggtaatcact 1800
ttcagtgaaa aactgttttc ctgaaaacag gcttggacac aattgaaagc tggcttcctg 1860
caaacacacc aagagtctgt aatctagcct atccattata tgtcctttat tattcatgat 1920
atcctattct tctaccttgt tgcctggtaa ctttttctga ggactgagtt tctgcagcga 1980
tgcggtgcac tcttcctgtg atgaggaaac atctgggccc ccttctgcag gctttggaag 2040
atgatgtgtc ttgtcaaggg gtaaagggca aatggattta atttctgctt aaaactatca 2100
tagacgttcc aaatagaata tgtaaaattt ctctgtatta gaaaaagaaa cgtgatacca 2160
attgtatatt ttcttttctt tatttattct ctgtaagtct gtcagatgat aaattgtaaa 2220
taacaatgat taaagagtca tgcttctgaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2280
aaaaaaaaa 2289
<210> 90
<211> 69
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 90
Met Phe Ser Arg Ala Glu Leu Arg Arg Lys Glu Thr Gly Val Val Asn
1 5 10 15
Gly Asp Leu Ile Ser Gly Ile Leu Ser Phe Leu Leu Gln Leu Ala Ala
20 25 30
Leu Leu Gly Ala Lys Glu Gln Trp Gly Ile Val Glu Leu Leu Tyr Pro
35 40 45
Leu Lys Lys Asn Lys Lys Leu Val Ile Leu Lys Glu Leu Lys Ala His
50 55 60
Lys Met Leu Gln Lys
65
<210> 91
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP32 primer for MIG20
<400> 91
aagcttcctg caa 13
<210> 92
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for MIG20
<400> 92
aagctttttt ttttta 16
<210> 93
<211> 1087
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 93
cgtagcagct atgcagcttg aaatccaagt agcactaaat tttattattt cgtatttgta 60
caataagctt cccaggagac gtgtcaacat ttttggtgaa gaacttgaaa gacttcttaa 120
gaagaaatat gaagggcact ggtatcctga aaagccatac aaaggatcgg ggtttagatg 180
tatacacata ggggagaaag tggacccagt gattgaacaa gcatccaaag agagtggttt 240
ggacattgat gatgttcgtg gcaatctgcc acaggatctt agtgtttggg tcgacccatt 300
tgaggtttct taccaaattg gtgaaaaggg accagtgaag gtgctttacg tggatgataa 360
taatgaaaat ggatgtgagt tggataagga gatcaaaaac agctttaacc cagaggccca 420
ggtttttatg cccataagtg acccagcctc atcagtgtcc agctctccat cgcctccttt 480
tggtcactct gctgctgtaa gccctacctt catgccccgg tccactcagc ctttaacctt 540
taccactgcc acttttgctg ccaccaagtt cggctctacc aaaatgaaga atagtggccg 600
tagcaacaag gttgcacgta cttctcccat caacctcggc ttgaatgtga atgacctctt 660
gaagcagaaa gccatctctt cctcaatgca ctctctgtat gggcttggct tgggtagcca 720
gcagcagcca cagcaacagc agcagccagc ccagccgcca ccgccaccac caccaccaca 780
gcagcaacaa cagcagaaaa cctctgctct ttctcctaat gccaaggaat ttatttttcc 840
taatatgcag ggtcaaggta gtagtaccaa tggaatgttc ccaggtgaca gcccccttaa 900
cctcagtcct ctccagtaca gtaatgcctt tgatgtgttt gcagcctatg gaggcctcaa 960
tgagaagtct tttgtagatg gcttgaattt tagcttaaat aacatgcagt attctaacca 1020
gcaattccag cctgttatgg ctaactaaaa aaaagaaaat gtatcgtaca agttaaaatg 1080
cacgggc 1087
<210> 94
<211> 345
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 94
Met Gln Leu Glu Ile Gln Val Ala Leu Asn Phe Ile Ile Ser Tyr Leu
1 5 10 15
Tyr Asn Lys Leu Pro Arg Arg Arg Val Asn Ile Phe Gly Glu Glu Leu
20 25 30
Glu Arg Leu Leu Lys Lys Lys Tyr Glu Gly His Trp Tyr Pro Glu Lys
35 40 45
Pro Tyr Lys Gly Ser Gly Phe Arg Cys Ile His Ile Gly Glu Lys Val
50 55 60
Asp Pro Val Ile Glu Gln Ala Ser Lys Glu Ser Gly Leu Asp Ile Asp
65 70 75 80
Asp Val Arg Gly Asn Leu Pro Gln Asp Leu Ser Val Trp Val Asp Pro
85 90 95
Phe Glu Val Ser Tyr Gln Ile Gly Glu Lys Gly Pro Val Lys Val Leu
100 105 110
Tyr Val Asp Asp Asn Asn Glu Asn Gly Cys Glu Leu Asp Lys Glu Ile
115 120 125
Lys Asn Ser Phe Asn Pro Glu Ala Gln Val Phe Met Pro Ile Ser Asp
130 135 140
Pro Ala Ser Ser Val Ser Ser Ser Pro Ser Pro Pro Phe Gly His Ser
145 150 155 160
Ala Ala Val Ser Pro Thr Phe Met Pro Arg Ser Thr Gln Pro Leu Thr
165 170 175
Phe Thr Thr Ala Thr Phe Ala Ala Thr Lys Phe Gly Ser Thr Lys Met
180 185 190
Lys Asn Ser Gly Arg Ser Asn Lys Val Ala Arg Thr Ser Pro Ile Asn
195 200 205
Leu Gly Leu Asn Val Asn Asp Leu Leu Lys Gln Lys Ala Ile Ser Ser
210 215 220
Ser Met His Ser Leu Tyr Gly Leu Gly Leu Gly Ser Gln Gln Gln Pro
225 230 235 240
Gln Gln Gln Gln Gln Pro Ala Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro
245 250 255
Gln Gln Gln Gln Gln Gln Lys Thr Ser Ala Leu Ser Pro Asn Ala Lys
260 265 270
Glu Phe Ile Phe Pro Asn Met Gln Gly Gln Gly Ser Ser Thr Asn Gly
275 280 285
Met Phe Pro Gly Asp Ser Pro Leu Asn Leu Ser Pro Leu Gln Tyr Ser
290 295 300
Asn Ala Phe Asp Val Phe Ala Ala Tyr Gly Gly Leu Asn Glu Lys Ser
305 310 315 320
Phe Val Asp Gly Leu Asn Phe Ser Leu Asn Asn Met Gln Tyr Ser Asn
325 330 335
Gln Gln Phe Gln Pro Val Met Ala Asn
340 345
<210> 95
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP10 primer for PIG49
<400> 95
aagcttccac gta 13
<210> 96
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for PIG49
<400> 96
aagctttttt ttttta 16
<210> 97
<211> 826
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 97
ggcgctgagt tttgtctccc cggccgtctg ggcgcgcgcg ggtgtcccag aatgaaatat 60
gactgaggac tctcagagaa actttcgttc agtatattat gagaaagtgg ggtttcgtgg 120
agttgaagaa aagaaatcat tagaaattct cctaaaagat gaccgtctgg atactgagaa 180
actttgtact tttagtcaga ggttccctct cccgtccatg taccgtgcat tggtatggaa 240
ggtgcttcta ggaatcttgc ctccacacca cgagtcccat gccaaggtga tgatgtatcg 300
taaggagcag tacttggatg tccttcatgc cctgaaagtc gttcgctttg ttagtgatgc 360
cacacctcag gctgaagtct atctccgcat gtatcagctg gagtctggga agttacctcg 420
aagtccctct tttccactgc caaaagcgtt tgaacaatac ttgaatctgg aagatggcag 480
actgctgact catctgagga tgtgttccgc ggcgcccaaa cttccttatg atctctggtt 540
caagaggtgc tttgcgggat gtttgcctga atccagttta cagagggttt gggataaagt 600
tgtgagtgga tcctgtaaga tcctagtttt tgtagctgtc gaaattttat taacctttaa 660
aataaaagtt atggcactga acagtgcaga gaagataaca aagtttctgg aaaatattcc 720
ccaggacagc tcagacgcga tcgtgagcaa ggccattgac ttgtggcaca aacactgtgg 780
gaccccggtc cattcaagct gaacgcaccc gctggttgtg gaccgt 826
<210> 98
<211> 247
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 98
Met Thr Glu Asp Ser Gln Arg Asn Phe Arg Ser Val Tyr Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Val Gly Phe Arg Gly Val Glu Glu Lys Lys Ser Leu Glu Ile Leu Leu
20 25 30
Lys Asp Asp Arg Leu Asp Thr Glu Lys Leu Cys Thr Phe Ser Gln Arg
35 40 45
Phe Pro Leu Pro Ser Met Tyr Arg Ala Leu Val Trp Lys Val Leu Leu
50 55 60
Gly Ile Leu Pro Pro His His Glu Ser His Ala Lys Val Met Met Tyr
65 70 75 80
Arg Lys Glu Gln Tyr Leu Asp Val Leu His Ala Leu Lys Val Val Arg
85 90 95
Phe Val Ser Asp Ala Thr Pro Gln Ala Glu Val Tyr Leu Arg Met Tyr
100 105 110
Gln Leu Glu Ser Gly Lys Leu Pro Arg Ser Pro Ser Phe Pro Leu Pro
115 120 125
Lys Ala Phe Glu Gln Tyr Leu Asn Leu Glu Asp Gly Arg Leu Leu Thr
130 135 140
His Leu Arg Met Cys Ser Ala Ala Pro Lys Leu Pro Tyr Asp Leu Trp
145 150 155 160
Phe Lys Arg Cys Phe Ala Gly Cys Leu Pro Glu Ser Ser Leu Gln Arg
165 170 175
Val Trp Asp Lys Val Val Ser Gly Ser Cys Lys Ile Leu Val Phe Val
180 185 190
Ala Val Glu Ile Leu Leu Thr Phe Lys Ile Lys Val Met Ala Leu Asn
195 200 205
Ser Ala Glu Lys Ile Thr Lys Phe Leu Glu Asn Ile Pro Gln Asp Ser
210 215 220
Ser Asp Ala Ile Val Ser Lys Ala Ile Asp Leu Trp His Lys His Cys
225 230 235 240
Gly Thr Pro Val His Ser Ser
245
<210> 99
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP22 primer for PIG51
<400> 99
aagcttttga tcc 13
<210> 100
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for PIG51
<400> 100
aagctttttt tttttg 16
<210> 101
<211> 207
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 101
acgagactgc acggattgtt ttaagaaaat ggcagacaaa ccagacatgg gggaaatcgc 60
cagcttcgat aaggccaagc tgaagaaaac ggagacgcag gagaagaaca ccctgccgac 120
caaagagacc attgagcagg agaagcggag tgaaatttcc taagatcctg gaggatttcc 180
tacccccgtc ctcttcgaga ccccagt 207
<210> 102
<211> 44
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 102
Met Ala Asp Lys Pro Asp Met Gly Glu Ile Ala Ser Phe Asp Lys Ala
1 5 10 15
Lys Leu Lys Lys Thr Glu Thr Gln Glu Lys Asn Thr Leu Pro Thr Lys
20 25 30
Glu Thr Ile Glu Gln Glu Lys Arg Ser Glu Ile Ser
35 40
<210> 103
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP12 primer for MIG12
<400> 103
aagcttgagt gct 13
<210> 104
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for MIG12
<400> 104
aagctttttt tttttc 16
<210> 105
<211> 1527
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 105
agaatgctgg agcctttgcc ctgttgggac gctgcgaaag atctgaaaga acctcagtgc 60
cctcctgggg acagggtggg tgtgcagcct gggaactcca gggtttggca gggcaccatg 120
gagaaagccg gtttggcttg gacgcgtggc acaggggtgc aatcagaggg gacttgggaa 180
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aagcctttcc tgaggaaggc ctgcagcccc agcaacatac ctgctgtcat cattacagac 300
atgggcaccc aggaggatgg ggccttggag gagacgcagg gaagccctcg gggcaacctg 360
cccctgagga aactgtcctc ttcctcggcc tcctccacgg gcttctcctc atcctacgaa 420
gactcagagg aggacatctc cagtgaccct gagcgcaccc tggaccccaa ctcagccttc 480
ctgcataccc tggaccagca gaaacccaga gtgagcaaat catggaggaa gataaaaaac 540
atggtgcact ggtctccctt cgtcatgtcc ttcaagaaga agtacccctg gatccagctg 600
gcaggacacg cagggagttt caaggcagct gccaatggca ggatcctgaa gaagcactgt 660
gagtcagagc agcgctgcct ggaccggctg atggtggatg tgctgaggcc cttcgtacct 720
gcctaccatg gggatgtggt gaaggacggg gagcgctaca accagatgga cgacctgctg 780
gccgacttcg actcgccctg tgtgatggac tgcaagatgg gaatcaggac ctacctggag 840
gaggagctca cgaaggcccg gaagaagccc agcctgcgga aggacatgta ccagaagatg 900
atcgaggtgg accccgaggc ccccaccgag gaggaaaaag cacagcgggc tgtgaccaag 960
ccacggtaca tgcagtggcg ggagaccatc agctccacgg ccaccctggg gttcaggatc 1020
gagggaatca agaaagaaga cggcaccgtg aaccgggact tcaagaagac caaaacgagg 1080
gagcaggtca ccgaggcctt cagagagttc actaaaggaa accataacat cctgatcgcc 1140
tatcgggacc ggctgaaggc cattcgaacc actctagaag tttctccctt cttcaagtgc 1200
cacgaggtca ttggcagctc cctcctcttc atccacgaca agaaggaaca ggccaaagtg 1260
tggatgatcg actttgggaa aaccacgccc ctgcctgagg gccagaccct gcagcatgac 1320
gtcccctggc aggaggggaa ccgggaggat ggctacctct cggggctcaa taacctcgtc 1380
gacatcctga ccgagatgtc ccaggatgcc ccactcgcct gagctgccca cgccctccct 1440
ggcccccgcc tgggcctcct ttcctcctcc tgtgcttcct ttctcgttcc taacttttcc 1500
ttcacttaca cctgactgac cctcctg 1527
<210> 106
<211> 472
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 106
Met Leu Glu Pro Leu Pro Cys Trp Asp Ala Ala Lys Asp Leu Lys Glu
1 5 10 15
Pro Gln Cys Pro Pro Gly Asp Arg Val Gly Val Gln Pro Gly Asn Ser
20 25 30
Arg Val Trp Gln Gly Thr Met Glu Lys Ala Gly Leu Ala Trp Thr Arg
35 40 45
Gly Thr Gly Val Gln Ser Glu Gly Thr Trp Glu Ser Gln Arg Gln Asp
50 55 60
Ser Asp Ala Leu Pro Ser Pro Glu Leu Leu Pro Gln Asp Gln Asp Lys
65 70 75 80
Pro Phe Leu Arg Lys Ala Cys Ser Pro Ser Asn Ile Pro Ala Val Ile
85 90 95
Ile Thr Asp Met Gly Thr Gln Glu Asp Gly Ala Leu Glu Glu Thr Gln
100 105 110
Gly Ser Pro Arg Gly Asn Leu Pro Leu Arg Lys Leu Ser Ser Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Ser Thr Gly Phe Ser Ser Ser Tyr Glu Asp Ser Glu Glu Asp
130 135 140
Ile Ser Ser Asp Pro Glu Arg Thr Leu Asp Pro Asn Ser Ala Phe Leu
145 150 155 160
His Thr Leu Asp Gln Gln Lys Pro Arg Val Ser Lys Ser Trp Arg Lys
165 170 175
Ile Lys Asn Met Val His Trp Ser Pro Phe Val Met Ser Phe Lys Lys
180 185 190
Lys Tyr Pro Trp Ile Gln Leu Ala Gly His Ala Gly Ser Phe Lys Ala
195 200 205
Ala Ala Asn Gly Arg Ile Leu Lys Lys His Cys Glu Ser Glu Gln Arg
210 215 220
Cys Leu Asp Arg Leu Met Val Asp Val Leu Arg Pro Phe Val Pro Ala
225 230 235 240
Tyr His Gly Asp Val Val Lys Asp Gly Glu Arg Tyr Asn Gln Met Asp
245 250 255
Asp Leu Leu Ala Asp Phe Asp Ser Pro Cys Val Met Asp Cys Lys Met
260 265 270
Gly Ile Arg Thr Tyr Leu Glu Glu Glu Leu Thr Lys Ala Arg Lys Lys
275 280 285
Pro Ser Leu Arg Lys Asp Met Tyr Gln Lys Met Ile Glu Val Asp Pro
290 295 300
Glu Ala Pro Thr Glu Glu Glu Lys Ala Gln Arg Ala Val Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Tyr Met Gln Trp Arg Glu Thr Ile Ser Ser Thr Ala Thr Leu Gly
325 330 335
Phe Arg Ile Glu Gly Ile Lys Lys Glu Asp Gly Thr Val Asn Arg Asp
340 345 350
Phe Lys Lys Thr Lys Thr Arg Glu Gln Val Thr Glu Ala Phe Arg Glu
355 360 365
Phe Thr Lys Gly Asn His Asn Ile Leu Ile Ala Tyr Arg Asp Arg Leu
370 375 380
Lys Ala Ile Arg Thr Thr Leu Glu Val Ser Pro Phe Phe Lys Cys His
385 390 395 400
Glu Val Ile Gly Ser Ser Leu Leu Phe Ile His Asp Lys Lys Glu Gln
405 410 415
Ala Lys Val Trp Met Ile Asp Phe Gly Lys Thr Thr Pro Leu Pro Glu
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Gly Gln Thr Leu Gln His Asp Val Pro Trp Gln Glu Gly Asn Arg Glu
435 440 445
Asp Gly Tyr Leu Ser Gly Leu Asn Asn Leu Val Asp Ile Leu Thr Glu
450 455 460
Met Ser Gln Asp Ala Pro Leu Ala
465 470
<210> 107
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP10 primer for PIG37
<400> 107
aagcttccac gta 13
<210> 108
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for PIG37
<400> 108
aagctttttt tttttg 16
<210> 109
<211> 415
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 109
gcagcccgac tagcagtcta gaggcctgag gcttctgggt cctggtgacg gggctggcat 60
gaccccgggg gtcgtccatg ccagtccgcc tcagtcgcag agggtccctc ggcaagcgcc 120
ctgtgagtgg gccattcgga acattggaca gaagcccaaa gagccaaatt gtcacaattg 180
tggaacccac attggcctga gatccaaaac gcttcgaggc accccaaatt acctgcccat 240
tcgtcaggac acccacccac ccagtgttat attctgcctc gccggagtgg gtgttcccgg 300
gggcacttgc cgaccagccc cttgcgtccc caggtttgca gctctcccct gggccactaa 360
ccatcctggc ccgggctgcc tgtctgacct ccgtgcctag tcgtggctct ccatc 415
<210> 110
<211> 113
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 110
Met Thr Pro Gly Val Val His Ala Ser Pro Pro Gln Ser Gln Arg Val
1 5 10 15
Pro Arg Gln Ala Pro Cys Glu Trp Ala Ile Arg Asn Ile Gly Gln Lys
20 25 30
Pro Lys Glu Pro Asn Cys His Asn Cys Gly Thr His Ile Gly Leu Arg
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Arg Gly Thr Pro Asn Tyr Leu Pro Ile Arg Gln Asp
50 55 60
Thr His Pro Pro Ser Val Ile Phe Cys Leu Ala Gly Val Gly Val Pro
65 70 75 80
Gly Gly Thr Cys Arg Pro Ala Pro Cys Val Pro Arg Phe Ala Ala Leu
85 90 95
Pro Trp Ala Thr Asn His Pro Gly Pro Gly Cys Leu Ser Asp Leu Arg
100 105 110
Ala
<210> 111
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP12 primer for GIG44
<400> 111
aagcttgagt gct 13
<210> 112
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG44
<400> 112
aagctttttt tttttg 16
<210> 113
<211> 723
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 113
cgggagaacg ataatgcaaa gtgctatgtt cttggctgtt caacacgact gcagacccat 60
ggacaagagc gcaggcagtg gccacaagag cgaggagaag cgagaaaaga tgaaacggac 120
ccttttaaaa gattggaaga cccgtttgag ctacttctta caaaattcct ctactcctgg 180
gaagcccaaa accggcaaaa aaagcaaaca gcaagctttc atcaagcctt ctcctgagga 240
agcacagctg tggtcagaag catttgacga gctgctagcc agcaaatatg gtcttgctgc 300
attcagggct tttttaaagt cggaattctg tgaagaaaat attgaattct ggctggcctg 360
tgaagacttc aaaaaaacca aatcacccca aaagctgtcc tcaaaagcaa ggaaaatata 420
tactgacttc atagaaaagg aagctccaaa agagataaac atagattttc aaaccaaaac 480
tctgattgcc cagaatatac aagaagctac aagtggctgc tttacaactg cccagaaaag 540
ggtatacagc ttgatggaga acaactctta tcctcgtttc ttggagtcag aattctacca 600
ggacttgtgt aaaaagccac aaatcaccac agagcctcat gctacatgaa atgtaaaagg 660
gagcccagaa atggaggaca tttcattctt tttcctgagg ggaaggactg tgacctgcca 720
taa 723
<210> 114
<211> 211
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 114
Met Gln Ser Ala Met Phe Leu Ala Val Gln His Asp Cys Arg Pro Met
1 5 10 15
Asp Lys Ser Ala Gly Ser Gly His Lys Ser Glu Glu Lys Arg Glu Lys
20 25 30
Met Lys Arg Thr Leu Leu Lys Asp Trp Lys Thr Arg Leu Ser Tyr Phe
35 40 45
Leu Gln Asn Ser Ser Thr Pro Gly Lys Pro Lys Thr Gly Lys Lys Ser
50 55 60
Lys Gln Gln Ala Phe Ile Lys Pro Ser Pro Glu Glu Ala Gln Leu Trp
65 70 75 80
Ser Glu Ala Phe Asp Glu Leu Leu Ala Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Ala
85 90 95
Phe Arg Ala Phe Leu Lys Ser Glu Phe Cys Glu Glu Asn Ile Glu Phe
100 105 110
Trp Leu Ala Cys Glu Asp Phe Lys Lys Thr Lys Ser Pro Gln Lys Leu
115 120 125
Ser Ser Lys Ala Arg Lys Ile Tyr Thr Asp Phe Ile Glu Lys Glu Ala
130 135 140
Pro Lys Glu Ile Asn Ile Asp Phe Gln Thr Lys Thr Leu Ile Ala Gln
145 150 155 160
Asn Ile Gln Glu Ala Thr Ser Gly Cys Phe Thr Thr Ala Gln Lys Arg
165 170 175
Val Tyr Ser Leu Met Glu Asn Asn Ser Tyr Pro Arg Phe Leu Glu Ser
180 185 190
Glu Phe Tyr Gln Asp Leu Cys Lys Lys Pro Gln Ile Thr Thr Glu Pro
195 200 205
His Ala Thr
210
<210> 115
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-AP4 primer for GIG31
<400> 115
aagcttctca acg 13
<210> 116
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anchored oligo-dT primer for GIG31
<400> 116
aagctttttt ttttta 16
Claims (4)
- 서열번호: 2; 서열번호: 6; 서열번호: 10; 서열번호: 14; 서열번호: 18; 서열번호: 22; 서열번호: 26; 서열번호: 30; 서열번호: 34; 서열번호: 38; 서열번호: 42; 서열번호: 46; 서열번호: 50; 서열번호: 54;서열번호 58; 서열번호: 62; 서열번호: 66; 서열번호: 70; 서열번호: 74; 서열번호: 78; 서열번호: 82; 서열번호: 86; 서열번호: 90; 서열번호: 94; 서열번호: 98; 서열번호: 102; 서열번호: 106; 서열번호: 110 또는 서열번호: 114의 아미노산 서열을 갖는 인간 암 억제 단백질.
- 제 1 항에 있어서,상기 암은 정상 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐, 및 말초혈액 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 조직의 암인 단백질.
- 제1항의 원암 단백질을 코딩하는 서열번호: 1 ; 서열번호: 5; 서열번호: 9; 서열번호: 13; 서열번호: 17; 서열번호: 21; 서열번호: 25; 서열번호: 29; 서열번호: 33; 서열번호: 37; 서열번호: 41; 서열번호: 45; 서열번호: 49; 서열번호: 53;서열번호 57; 서열번호: 61 ; 서열번호: 65; 서열번호: 69; 서열번호: 73; 서열번호: 77; 서열번호: 81; 서열번호: 85; 서열번호: 89; 서열번호: 93; 서열번호: 97; 서열번호: 101; 서열번호: 105;서열번호: 109; 또는 서열번 호: 113으로 표시되는 인간 암 억제 유전자.
- 제 3 항에 있어서,상기 암은 정상 유방, 뇌, 심장, 근육, 대장, 흉선, 비장, 콩팥, 간, 소장, 태반, 폐, 및 말초혈액 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 조직의 암인 유전자.
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