KR20060044620A - 망막혈관질환 진단용 단백질 및 그 분석방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 망막혈관질환 진단용 단백질 및 그의 절편, 이를 포함하는 망막혈관질환 진단용 키트, 이를 코딩하는 유전자 및 이를 이용하여 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 망막혈관질환 진단용 단백질, 이를 포함하는 키트 및 이를 이용한 분석방법을 사용하여 망막혈관질환을 간단하고 빠르게 진단할 수 있다.

Description

망막혈관질환 진단용 단백질 및 그 분석방법{Protein for analyzing a retinal vascular disease and analyzing method thereof}
도 1은 사람 망막 단백질에 대한 정상인, 당뇨환자, 비증식성 당뇨망막증 환자, 증식성 당뇨망막증 환자의 세포질분획 및 막분획에 대한 혈청 웨스턴 블럿(western blot) 결과이다.
도 2는 사람 망막 단백질에 대한 2차원 전기영동 결과이다.
도 3a는 도 2의 전기영동한 겔을 건강한 남성의 혈청을 이용하여 4부분으로 나눠 웨스턴 블럿한 결과이다.
도 3b는 도 2의 전기영동한 겔을 비증식성 당뇨망막증 환자의 혈청을 이용하여 4부분으로 나눠 웨스턴 블럿한 결과이다.
도 3c는 도 2의 전기영동한 겔을 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청을 이용하여 4부분으로 나눠 웨스턴 블럿한 결과이다.
도 4은 크레아틴 키나제(creatine kinase) B을 이용하여 정상인, 당뇨환자, 비증식성 당뇨망막증 환자, 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청에 대한 ELISA 진단 결과이다.
도 5은 알돌라제(aldolase) C을 이용하여 정상인, 당뇨환자, 비증식성 당뇨 망막증 환자, 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청에 대한 ELISA 진단 결과이다.
본 발명은 망막혈관질환 진단용 단백질 및 그의 절편, 이를 포함하는 망막혈관질환 진단용 키트, 이를 코딩하는 유전자 및 이를 이용하여 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법에 관한 것이다.
일반적으로 당뇨병은 미세혈관계에 병변을 일으키는 복잡한 대사성 질환이다. 이는 전신조직에 광범위한 장애를 초래하며, 특히 눈에 영향을 끼치는 전신질환 중 가장 중요한 하나이다 (이태희, 최영길, 당뇨병성 혈관합병증, 서울, 고려의학, 1993). 그 중 당뇨망막증은 가장 심한 합병증에 속하며 생활 수준향상과 치료수준의 발전으로 당뇨병 환자의 수명과 유병기간이 길어짐에 따라 중요한 문제가 되어왔다 (Klein R. et al., Arch Ophthalmol., 102, 520-532, 1984). 당뇨망막증은 혈관장애로 인한 망막의 병변이 망막 내에 국한되어 있는 비증식성 당뇨망막증(non-proliferative diabetes retionsis, NPDR)과 망막에서부터 유리체강으로 신생혈관조직이 침투되어가는 증식성 당뇨망막증(proliferative diabetes retionsis, PDR)으로 구분한다 (Green, In: Spencer WH, ed., Ophthalmic Pathology: an atlas and textbook. 4th ed., Philadelphia: WB Saunder; 1124-1129, 1996). 당뇨망막증에 의한 시력손상은 증식성 당뇨망막증에서의 유리체 출혈, 황반의 견인망막박리와 함께 황반변증 때문인데, 이에 대해서 수술치료와 함께 레이저치료 효용성이 잘 알려져 있다 (Diabetic Retinopathy Study Report Number 14, Int Ophthalmol Clin., 27, 239-253, 1987). 이런 치료는 적절한 단계에 시행함으로서 부작용을 최소화하면서 시력상실을 미리 막을 수 있다. 따라서 당뇨망막증의 진단은 적절한 수술 시기를 확보하기 위하여 자주 검사를 통해서 이루어져야 한다.
당뇨망막증의 진단은 안저에서 특징적인 구조변화를 관찰하여 이루어지는데 현재까지는 진단방법으로 안과에서 행해지는 안저촬영에 의한 검사만이 가능하다. 따라서 당뇨병환자들이 자각증세로 시력의 이상을 느끼지 않고, 정기적인 안과검사를 받지 않은 상황에서는 조기 진단은 불가능하다. 이로 인해 조기에 진단하기가 어렵고, 예방 및 수술시기를 놓치는 경우가 빈번하다.
따라서 본 발명의 목적은 상기 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 상기 필요성을 충족시키는 망막혈관질환 진단용 단백질 및 그의 절편, 이를 포함하는 망막혈관질환 진단용 키트, 이를 코딩하는 유전자 및 이를 이용하여 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명의 일 태양은 망막혈관질환 진단용 단백질 및 그의 절편, 이를 포함하는 망막혈관질환 진단용 키트, 이를 코딩하는 유전 자 및 이를 이용하여 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법을 제공한다.
본 발명자들은 안구 내 혈관에 혈액-눈 막(blood-ocular barrier)이 존재하며, 이로 인하여 망막의 단백질은 정상적인 상황에서는 면역계에 노출되지 않지만, 당뇨망막증과 같은 안구 내 혈관의 질환에 있어서는 망막 단백질이 면역계에 노출되어 자가항체(autoantibody)가 생성 될 수 있음을 확인하였다. 본 발명자들은 이러한 자가항체를 이용하여 혈액에서 쉽게 망막혈관질환을 진단하기 위한 진단용 단백질 및 그의 절편, 이를 포함하는 키트, 이를 코딩하는 유전자 및 이를 이용하여 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법을 발명하였다.
이하 본 발명을 구체적으로 설명한다.
본 발명의 일 태양은 상기 목적을 달성하기 위한 서열번호 1 내지 22의 아미노산 서열로 이루어진 망막혈관질환 진단용 단백질 및 그의 절편을 제공한다. 본 발명자들은 본 발명의 단백질 및 그의 절편이 망막혈관질환을 가진 환자의 망막혈관으로부터 유출되어 혈액에서 자가항체를 유도하며, 이 자가항체의 증가가 본 발명의 단백질 및 그의 절편을 이용하여 측정될 수 있음을 발명하였다. 특히 상기 22개의 단백질 중에서 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 알돌라제 C가 그 제조방법의 경제성, 망막혈관질환 진단의 정확성 등을 고려하여 가장 바람직하였다.
본 발명자들은 1차원 및 2차원 웨스턴(western) 면역블럿팅(immunoblotting) 실험을 실시하여 상기 사실을 확인하였다. 또 자가항체를 생성할 수 있는 여러 단백질들 중 일부를 이용한 효소링크 면역학적 분석법(enzyme linked immunosorbent assay, 이하 "ELISA"라 함) 방법으로 실제 환자의 혈액에 대한 평가실험을 수행한 결과 본 발명이 망막혈관질환을 효과적으로 진단할 수 있음을 확인하였다.
상기 단백질들은 인간뿐아니라 동물들의 단백질도 포함된다.
본 발명 단백질의 아미노산 서열에서 있어 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 망막혈관질환 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 역시 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명에 의하여 진단이 가능한 망막혈관질환은 당뇨망막증(diabetic retinopathy), 노인성 황반 변성 (age-related macular degeneration), 망막부종 등과 같이 안구내 혈관으로 망막단백질이 노출된 질환이 바람직하고, 특히 당뇨망막증이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 태양은 상기 단백질 또는 그의 절편을 포함하는 망막혈관진단용 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 상기 단백질 또는 그의 절편을 포함한 ELISA 방법에 이용될 수 있는 키트이며, 본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한 여러 가지 첨가제가 본 발명의 키트에 포함될 수 있다. 바람직하기로 본 발명의 키트는 상기 단백질 또는 그의 절편이 부착된 웰(well) 플레이트(plate)를 포함한다.
또 바람직하기로 본 발명의 망막혈관진단용 키트는 상기 단백질 또는 그의 절편에 의해 환자의 혈액 내에서 생성된 자가항체에 결합할 수 있는 항 항체 단백질을 포함하며, 더욱 바람직하기로는 상기 항 항체 단백질은 흡광도를 측정하기 위한 표지를 포함하고 있다. 상기 표지로는 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스파테이즈, 바이오틴 등과 같이 본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한, ELISA 방법에 이용될 수 있는 여러 가지 효소로 표지될 수 있다.
본 발명의 또 다른 태양은 서열번호 1 내지 22의 아미노산 서열로 이루어진 망막혈관질환 진단용 단백질을 코딩하는 유전자를 제공한다. 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인해서 또는 상기 단백질을 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여 본 발명의 유전자는 코딩영역으로부터 발현되는 목적하는 망막혈관질환 진단용 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 코딩영역을 제외한 부분에서도 유전자의 발현에 영향을 미치지 않는 범위 내에서 다양한 변형 또는 수식이 이루어질 수 있으며, 그러한 변형 유전자 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서, 본 발명은 상기 단백질을 코딩하는 유전자와 실질적으로 동일한 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 염기서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.
본 발명의 또 다른 태양은 상기 망막혈관질환 진단용 단백질을 채취된 혈액과 접촉하는 단계를 포함하는 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법을 제공한다. 바람직하게 상기 항체를 분석하는 방법은 표지된 항 항체 단백질을 첨가하는 단계를 더욱 포함하고, 더욱 바람직하게 상기 항 항체 단백질은 항 이미노글로 브린 G 항체 단백질이다.
또한 상기 항체를 분석하는 방법의 표지는 흡광도를 이용하는 것이 바람직하며, 이 표지로는 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스파테이즈, 바이오틴 등과 같이 본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한, ELISA 방법에 이용될 수 있는 여러 가지 효소가 포함될 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만 하기 실시예는 본 발명을 구체적 예시를 위하여 제공되는 것으로 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어져서는 아니 된다.
실시예 1: 웨스턴 블럿을 이용한 사람 망막 단백질에 대한 자가항체 분석
사람 망막 단백질의 분리
안구에서 망막만을 떼어낸 후 식염수로 수 회 닦아내었다. ProteoPrep Universal Extraction Kit(Sigma S2813)를 이용하여 세포질분획(cytosol fraction)과 막분획(membrane fraction)을 분리한 후 Pierce BCA Protein Assay Kit 23227(Pierce, 미국)을 이용하여 정량하였다.
정상인 및 환자 혈청에 대한 망막 단백질 웨스턴 블럿팅
망막 단백질 30ug을 12% 아크릴 아마이드 겔에서 전기영동한 후 니트로-셀룰로오스 막에 옮긴 후 정상인, 당뇨환자, 비증식성 당뇨망막증 환자 및 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청을 이용하여 블럿팅하여 자가항체 존재를 확인하였다. 그 결과를 도 1 및 표 1에 종합하여 나타내었다.
세포질분획 막분획
IgG 중쇄번호 분자량 (kDa) 컨트롤 정상인 DM NPDR PDR 컨트롤 DM NPDR PDR
1 56.1 + + + + + +
2 53.4 ++ + +
3 44.4 + + +++ ++ +
4 63.5 +
5 58.9 + +
6 40.7 +
7 79.2 + +
8 65.0 + + + +
9 49.6 + ++ + +
10 26.1 + +
11 73.6 +++
표 1에서 DM은 당뇨환자, NPDR은 비증식성 당뇨망막증 환자, PDR은 증식성 당뇨망막증 환자를 의미한다. +는 양성밴드가 나타났음을 의미하며, 그 갯수는 밴드의 강도를 나타낸다.
실시예 2: 사람 망막 단백질의 2차원 겔 웨스턴 블럿팅
2차원 겔 전기영동
망막 단백질을 2가지 다른 특성을 이용하는 단계적 분리법인 2차원 전기영동으로 분리시켰다. 첫번째 과정은 단백질에 전기적 자극을 가하여 단백질 요소가 가진 pH에 따른 단백질 이동(pH3-10), 두 번째 과정은 단백질이 가진 각각의 분자량에 따라 아크릴 아마이드 겔(8-18%) 상에서 단백질의 이동을 시행하였다. 1차원 전기이동(pH에 따른 단백질이동)은 젤당 50mA의 전류로 12시간 동안 이동시켰으며, 2차원 전기이동(분자량에 따른 단백질이동)은 폴리아크릴 아마이드 상에서 겔당 50mA로 6시간동안 전기이동시켰다. 이렇게 이동된 단백질을 Coomassie Brilliant Blue-250 염색약 및 실버 스테이닝 방법으로 염색하여 존재를 확인하였다. 이러한 겔은 같은 방법으로 4장이 만들어져 한 장은 정상인이 갖고 있는 단백질의 2차원 겔 상의 분포를 확인하였고, 나머지 3장은 각각 4부분으로 잘라서 웨스턴 면역블럿팅을 위하여 사용되었다. 그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에 표시된 숫자는 후술하는 표 2의 스팟번호를 나타낸다.
웨스턴 면역블럿
2차원 겔 전기영동된 겔을 정상인, 비증식성 당뇨망막증 환자 및 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청을 이용하여 블럿팅하여 자가항체 위치를 확인하였다. 그 결과를 각각 도 3a, 도 3b 및 도 3c에 나타내었다.
정상인이 갖고 있는 항체와 당뇨망막증 환자의 혈액 내 항체의 차이를 컴퓨터에서 이미지분석 소프트웨어 Phoretix (Nonlinear dynamics, 영국)를 이용하여 분석하였다. 이 두 군 사이의 분석결과를 2차원 겔에 대입하여 얻은 스팟(spot)을 MALDI-TOF를 이용하여 분석하여 당뇨망막증 환자의 혈액에 표 2의 단백질에 대한 자가항체가 형성됨을 확인하였다. 당뇨망막증 환자에서 나타나는 자가항체에 대한 항원 단백질을 표 2에 종합하여 나타내었다.
스팟번호 단백질 이름
1 (서열번호 1) 알파 에놀라제(Alpha enolase, non-neural enolase)
2 (서열번호 2) 단백질 KIAA0193(protein KIAA0193)
3 (서열번호 3) 명칭이 정해지지 않은 단백질 프로덕트 갑상선 호르몬 결합 단백질 전구체 (unnamed protein product thyroid hormone binding protein precursor)
4 (서열번호 4) 크레아틴 키나제-B(creatine kinase-B)
5 (서열번호 5) DDAH1 단백질
6 (서열번호 6) 락테이트 디하이드로게나제 B(Lactate dehydrogenase B)
7 (서열번호 7) 캡핑 단백질(Capping protein(actin filament)) muscle z-line, beta
8 (서열번호 8) 디하이드로피리미디나제(dihydropyrimidinase)-like 2
9 (서열번호 9) 2-포스포파이루베이트-하이드라타제 알파-에놀라제 (2-phosphopyruvate-hydratase alpha-enolase)
10 (서열번호 10) 알돌라제 C(aldolase C)
11 (서열번호 11) 글리세르알데히드-3-포스페이트 디하이드로게나제 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)
12 (서열번호 12) 포스포글리세레이트 키나제 1(프라이머 인식 단백질 2) (phosphoglycerate kinase 1(primer recognition protein 2), (PRP2))
13 (서열번호 13) 락테이트 디하이드로게나제 A(lactate dehydrogenase A)
14 (서열번호 14) 카르보닉 안하이드라제 II(carbonic anhydrase II)
15 (서열번호 15) 글루코시다제 II 베타 서브유닛(glucosidase II beta subunit)
16 (서열번호 16) HS24/P52
17 (서열번호 17) 칼레티큘린(calreticulin)
18 (서열번호 18) 튜불린 베타-4q 체인(Tubulin beta-4q chain)
19 (서열번호 19) 베타-튜불린(beta-tubulin)
20 (서열번호 20) 구아닌 뉴클레오티드-결합 단백질, 베타-4 (guanine nucleotide-binding protein, beta-4)
21 (서열번호 21) 구아닌 뉴클레오티드-결합 단백질(G 단백질), 베타 폴리펩타이드 1 guanine nucleotide-binding protein(G protein), beta polypeptide 1
22 (서열번호 22) 전립샘 결합 단백질; 포스파티딜에탄올아민 결합 단백질 (prostatic binding protein; phosphatidylethanolamine binding protein)
실시예 3: 서열번호 4의 크레아틴 키나제 B를 이용한 ELISA 방법에 의한 당뇨망막증 진단
크레아틴 키나제 B를 사용하여 ELISA 방법을 통하여 당뇨환자 중 당뇨망막증환자의 혈청을 식별할 수 있는지를 알아보기 위해 본 실험을 수행하였다. 병원으로부터 얻은 3명의 정상인, 10명의 당뇨망막증 없는 당뇨환자, 20명의 당뇨망막증 환자 혈청을 사용하였다. 먼저 EIA 96공 플레이트에 각 웰(well) 당 코팅버퍼(50mM NaHCO3, pH9.0)에 10ug/ml의 농도로 용해된 크레아틴 키나제 B(Sigma, C6638) 100ul(각 웰당 1ug의 단백질)을 상온에서 1시간 반응시켜 코팅하고 400ul의 PBST(phospate buffer saline, 0.05% Tween 20)로 2회 각각 10분간 세척한 후 1% BSA(bovine serum albumin)를 포함한 PBS로 후코팅시켰다. PBST로 희석된 환자의 혈청을 100ul를 넣고 1시간동안 반응 후 PBS로 5회 세척하고 퍼옥시데이즈로 표지된 항 사람 이미노글로브린 G 항체(KOMA Biotech Inc., 한국)를 희석하여 100ul를 넣고 1시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 후 PBS로 3회 세척한 후 1mg/ml OPD(o-페닐렌디아민 디하이드로클로라이드) 및 0.03% H2O2가 함유된 0.1M 시트레이트-포스페이트 버퍼(pH4.9) 100ul을 넣어 실온에서 30분 반응시킨 후 3M 황산을 100ul을 넣어 반응을 정지시키고 ELISA 리더를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다. ELISA 측정결과 정상인의 혈청내 크레이틴 키나제 B의 평균값은 정상인 경우 0.04, 당뇨만을 앓고 있는 환자인 경우 0.05, 당뇨망막증 중 비증식성 환자인 경우 0.08, 증식성인 경우 0.08 이었다. 이 결과에서 비증식성과 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청 내 크레아틴 키나제 B의 양이 증가하고 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 4: 서열번호 10의 알돌라제 C 를 이용한 ELISA 방법에 의한 당뇨망막증 진단
알돌라제 C를 사용하여 ELISA 방법을 통하여 당뇨환자 중 당뇨망막증환자의 혈청을 식별할 수 있는지를 알아보기 위해 본 연구를 수행하였다. 병원으로부터 얻은 3명의 정상인, 10명의 당뇨망막증 없는 당뇨환자, 20명의 당뇨망막증 환자 혈청을 사용하였다. 먼저 EIA 96공 플레이트에 각 웰당 코팅버퍼(50mM NaHCO3, pH9.0)에 10ug/ml의 농도로 용해된 알돌라제 C(Sigma, A2714) 100ul(각 웰당 1ug의 단백질)을 상온에서 1시간 반응시켜 코팅하고 400ul의 PBST로 2회 각각 10분간 세척한 후 1% BSA를 포함한 PBS로 후코팅시켰다. PBST 버퍼로 희석된 환자의 혈청을 100ul를 넣고 1시간동안 반응 후 PBS로 5회 세척하고 퍼옥시데이즈로 표지된 항 사람 이미노글로브린 G 항체(KOMA Biotech Inc., 한국)를 희석하여 100ul를 넣고 1시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 후 PBS로 3회 세척한 후 1mg/ml OPD 및 0.03% H2O2가 함유된 0.1M 시트레이트-포스페이트 버퍼(pH4.9) 100ul을 넣어 실온에서 30분 반응시킨 후 3M 황산을 100ul을 넣어 반응을 정지시키고 ELISA 리더를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다. ELISA 측정결과 정상인의 혈청내 알돌라제 C의 평균값은 정상인 경우 0.78, 당뇨만을 앓고 있는 환자인 경우 0.84, 당뇨망막증 중 비증식성 환자인 경우 0.98, 증식성인 경우 1.0 이었다. 이 결과에서 비증식성과 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청 내 알돌라제 C의 양이 증가하고 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 3 및 실시예 4의 결과로 알 수 있는 바와 같이, 정상인과 비교하여 상기 크레아틴 키나제 B 및 알돌라제 C의 양이 크레아틴 키나제 B의 경우 정상인 대비 50%씩 증가하였으나, 알돌라제 C의 경우 각각 25%, 28% 증가하였습니다.
이러한 경우 증가된 혈청을 가진 환자는 당뇨망막증이 있음을 확인할 수 있다.
본 발명의 망막혈관질환 진단용 단백질, 이를 포함하는 키트 및 이를 이용한 분석방법을 사용하여 망막혈관질환을 간단하고 빠르게 진단할 수 있을 뿐만 아니라 기존에 검사방법과 비교하여 면역학적 방법을 사용하므로 정확성 및 정밀성이 우수하다. 또한 본 발명의 망막혈관질환 진단용 키트 및 이를 이용한 분석방법은 매우 경제적이다.
<110> EyeGene, Inc. <120> Protein for analyzing a retinal vascular disease and analyzing method thereof <130> P04-263 <160> 22 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 434 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ser Ile Leu Lys Ile His Ala Arg Glu Ile Phe Asp Ser Arg Gly 1 5 10 15 Asn Pro Thr Val Glu Val Asp Leu Phe Thr Ser Lys Gly Leu Phe Arg 20 25 30 Ala Ala Val Pro Ser Gly Ala Ser Thr Gly Ile Tyr Glu Ala Leu Glu 35 40 45 Leu Arg Asp Asn Asp Lys Thr Arg Tyr Met Gly Lys Gly Val Ser Lys 50 55 60 Ala Val Glu His Ile Asn Lys Thr Ile Ala Pro Ala Leu Val Ser Lys 65 70 75 80 Lys Leu Asn Val Thr Glu Gln Glu Lys Ile Asp Lys Leu Met Ile Glu 85 90 95 Met Asp Gly Thr Glu Asn Lys Ser Lys Phe Gly Ala Asn Ala Ile Leu 100 105 110 Gly Val Ser Leu Ala Val Cys Lys Ala Gly Ala Val Glu Lys Gly Val 115 120 125 Pro Leu Tyr Arg His Ile Ala Asp Leu Ala Gly Asn Ser Glu Val Ile 130 135 140 Leu Pro Val Pro Ala Phe Asn Val Ile Asn Gly Gly Ser His Ala Gly 145 150 155 160 Asn Lys Leu Ala Met Gln Glu Phe Met Ile Leu 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Gly Phe Gln Leu Thr His Ser Leu Gly Gly Gly Thr Gly 130 135 140 Ser Gly Met Gly Thr Leu Leu Ile Ser Lys Ile Arg Glu Glu Tyr Pro 145 150 155 160 Asp Arg Ile Met Asn Thr Phe Ser Val Val Pro Ser Pro Lys Val Ser 165 170 175 Asp Thr Val Val Glu Pro Tyr Asn Ala Thr Leu Ser Val His Gln Leu 180 185 190 Val Glu Asn Thr Asp Glu Thr Tyr Cys Ile Asp Asn Glu Ala Leu Tyr 195 200 205 Asp Ile Cys Phe Arg Thr Leu Lys Leu Thr Thr Pro Thr Tyr Gly Asp 210 215 220 Leu Asn His Leu Val Ser Ala Thr Met Ser Gly Val Thr Thr Cys Leu 225 230 235 240 Arg Phe Pro Gly Gln Leu Asn Ala Asp Leu Arg Lys Leu Ala Val Asn 245 250 255 Met Val Pro Phe Pro Arg Leu His Phe Phe Met Pro Gly Phe Ala Pro 260 265 270 Leu Thr Ser Arg Gly Ser Gln Gln Tyr Arg Ala Leu Thr Val Pro Glu 275 280 285 Leu Thr Gln Gln Met Phe Asp Ala Lys Asn Met Met Ala Ala Cys Asp 290 295 300 Pro Arg His Gly Arg Tyr Leu Thr Val Ala Ala Val Phe Arg Gly Arg 305 310 315 320 Met Ser Met Lys Glu Val Asp Glu Gln Met Leu Asn Val Gln Asn Lys 325 330 335 Asn Ser Ser Tyr Phe Val Glu Trp Ile Pro Asn Asn Val Lys Thr Ala 340 345 350 Val Cys Asp Ile Pro Pro Arg Gly Leu Lys Met Ser Ala Thr Phe Ile 355 360 365 Gly Asn Ser Thr Ala Ile Gln Glu Leu Phe Lys Arg Ile Ser Glu Gln 370 375 380 Phe Thr Ala Met Phe Arg Arg Lys Ala Phe Leu His Trp Tyr Thr Gly 385 390 395 400 Glu Gly Met Asp Glu Met Glu Phe Thr Glu Ala Glu Ser Asn Met Asn 405 410 415 Asp Leu Val Ser Glu Tyr Gln Gln Tyr Gln Asp Ala Thr Ala Glu Glu 420 425 430 Glu Gly Glu Phe Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Val Ala 435 440 445 <210> 20 <211> 340 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Met Ser Glu Leu Glu Gln Leu Arg Gln Glu Ala Glu Gln Leu Arg Asn 1 5 10 15 Gln Ile Gln Asp Ala Arg Lys Ala Cys Asn Asp Ala Thr Leu Val Gln 20 25 30 Ile Thr Ser Asn Met Asp Ser Val Gly Arg Ile Gln Met Arg Thr Arg 35 40 45 Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Gly 50 55 60 Tyr Asp Ser Arg Leu Leu Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu Ile 65 70 75 80 Ile Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Met His Ala Ile Pro Leu Arg 85 90 95 Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Tyr Val 100 105 110 Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Ile Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Thr 115 120 125 Arg Glu Gly Asn Val Arg Val Ser Arg Glu Leu Pro Gly His Thr Gly 130 135 140 Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Ser Gln Ile Val Thr Ser 145 150 155 160 Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp Ile Glu Thr Ala Gln Gln 165 170 175 Thr Thr Thr Phe Thr Gly His Ser Gly Asp Val Met Ser Leu Ser Leu 180 185 190 Ser Pro Asp Met Arg Thr Phe Val Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ser 195 200 205 Lys Leu Trp Asp Ile Arg Asp Gly Met Cys Arg Gln Ser Phe Thr Gly 210 215 220 His Val Ser Asp Ile Asn Ala Val Ser Phe Phe Pro Asn Gly Tyr Ala 225 230 235 240 Phe Ala Thr Gly Ser Asp Asp Ala Thr Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg 245 250 255 Ala Asp Gln Glu Leu Leu Leu Tyr Ser His Asp Asn Ile Ile Cys Gly 260 265 270 Ile Thr Ser Val Ala Phe Ser Lys Ser Gly Arg Leu Leu Leu Ala Gly 275 280 285 Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp Asp Thr Leu Lys Gly Asp Arg 290 295 300 Ala Gly Val Leu Ala Gly His Asp Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val 305 310 315 320 Thr Asp Asp Gly Met Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu 325 330 335 Arg Ile Trp Asn 340 <210> 21 <211> 340 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Met Ser Glu Leu Asp Gln Leu Arg Gln Glu Ala Glu Gln Leu Lys Asn 1 5 10 15 Gln Ile Arg Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Ala Thr Leu Ser Gln 20 25 30 Ile Thr Asn Asn Ile Asp Pro Val Gly Arg Ile Gln Met Arg Thr Arg 35 40 45 Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Gly 50 55 60 Thr Asp Ser Arg Leu Leu Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu Ile 65 70 75 80 Ile Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala Ile Pro Leu Arg 85 90 95 Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Tyr Val 100 105 110 Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Ile Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Thr 115 120 125 Arg Glu Gly Asn Val Arg Val Ser Arg Glu Leu Ala Gly His Thr Gly 130 135 140 Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Gln Ile Val Thr Ser 145 150 155 160 Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp Ile Glu Thr Gly Gln Gln 165 170 175 Thr Thr Thr Phe Thr Gly His Thr Gly Asp Val Met Ser Leu Ser Leu 180 185 190 Ala Pro Asp Thr Arg Leu Phe Val Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala 195 200 205 Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Met Cys Arg Gln Thr Phe Thr Gly 210 215 220 His Glu Ser Asp Ile Asn Ala Ile Cys Phe Phe Pro Asn Gly Asn Ala 225 230 235 240 Phe Ala Thr Gly Ser Asp Asp Ala Thr Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg 245 250 255 Ala Asp Gln Glu Leu Met Thr Tyr Ser His Asp Asn Ile Ile Cys Gly 260 265 270 Ile Thr Ser Val Ser Phe Ser Lys Ser Gly Arg Leu Leu Leu Ala Gly 275 280 285 Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp Asp Ala Leu Lys Ala Asp Arg 290 295 300 Ala Gly Val Leu Ala Gly His Asp Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val 305 310 315 320 Thr Asp Asp Gly Met Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu 325 330 335 Lys Ile Trp Asn 340 <210> 22 <211> 187 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Pro Val Asp Leu Ser Lys Trp Ser Gly Pro Leu Ser Leu Gln Glu 1 5 10 15 Val Asp Glu Gln Pro Gln His Pro Leu His Val Thr Tyr Ala Gly Ala 20 25 30 Ala Val Asp Glu Leu Gly Lys Val Leu Thr Pro Thr Gln Val Lys Asn 35 40 45 Arg Pro Thr Ser Ile Ser Trp Asp Gly Leu Asp Ser Gly Lys Leu Tyr 50 55 60 Thr Leu Val Leu Thr Asp Pro Asp Ala Pro Ser Arg Lys Asp Pro Lys 65 70 75 80 Tyr Arg Glu Trp His His Phe Leu Val Val Asn Met Lys Gly Asn Asp 85 90 95 Ile Ser Ser Gly Thr Val Leu Ser Asp Tyr Val Gly Ser Gly Pro Pro 100 105 110 Lys Gly Thr Gly Leu His Arg Tyr Val Trp Leu Val Tyr Glu Gln Asp 115 120 125 Arg Pro Leu Lys Cys Asp Glu Pro Ile Leu Ser Asn Arg Ser Gly Asp 130 135 140 His Arg Gly Lys Phe Lys Val Ala Ser Phe Arg Lys Lys Tyr Glu Leu 145 150 155 160 Arg Ala Pro Val Ala Gly Thr Cys Tyr Gln Ala Glu Trp Asp Asp Tyr 165 170 175 Val Pro Lys Leu Tyr Glu Gln Leu Ser Gly Lys 180 185

Claims (6)

  1. 서열번호 1 내지 9 및 11 내지 22의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 단백질 또는 그의 절편을 포함하는 망막혈관질환 진단용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 망막혈관질환은 당뇨망막증, 망막부종 및 노인성 황반변성으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환인 것을 특징으로 하는 망막혈관질환 진단용 조성물.
  3. 제1항의 단백질 또는 그의 절편을 포함하는 망막혈관질환 진단용 키트.
  4. 제3항에 있어서, 상기 키트는 표지된 항 이미노글로브린 G 항체 단백질을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 망막혈관질환 진단용 키트.
  5. 서열번호 1 내지 9 및 11 내지 22의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 망막혈관질환 진단용 단백질을 혈액과 접촉하는 단계를 포함하는 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 항체를 분석하는 방법은 표지된 항 이미노글로브린 G 항체 단백질을 첨가하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 망막혈관질환으로 생성된 항체를 분석하는 방법.
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