KR100817543B1 - 당뇨망막증 진단용 단백질 - Google Patents

Abstract

본 발명은 당뇨망막증 진단용 단백질에 관한 발명으로, 더욱 상세하게는 당뇨망막증에서 양이 감소하는 아포리포프로틴 J 단백질에 관한 발명이다. 이 단백질을 쉽게 정량화하기 위해서 단백질의 항체를 이용한 ELISA 정량법을 개발하여 당뇨망막증 진단 목적으로 사용할 수 있다.

Description

당뇨망막증 진단용 단백질{Protein for Diagnosing Diabetic Retinopathy}

도 1은 단백질체학에 적용하기 위한 안구 유리체 전처리과정을 도식화하여 나타낸 것이다.

도 2는 안구 유리체 단백질을 2차원 전기영동 후 CBB염색한 젤 사진을 나타낸 것이다. 화살표한 영역은 정상인 유리체에는 과량 존재하지만 당뇨망막증 유리체에는 그 양이 감소된 단백질을 보이고 있다.

도 3은 도 2의 화살표 영역의 단백질을 트립신으로 절단한 후 MALDI-TOF 질량분석기로 분석한 펩타이드 질량 스펙트럼 그림이다.

도 4는 Q-TOF 분석기를 이용하여 도 2의 화살표 영역의 단백질 중 트립신처리된 하나의 펩타이드의 아미노산 분석한 결과이다.

도 5는 항 아포리포프로틴 J 항체를 이용하여 웨스턴블로팅을 수행한 결과를 보여주는 사진이다. 확인한 혈청은 웨스턴블로팅하기 전에 Blue-sepharose 및 protein A column을 negative하게 처리하였다. 이 사진에 표기된 숫자는 다음과 같다.

1: 2ug의 당뇨만을 앓고 있는 환자의 혈청 단백질

2: 2ug의 증식성 당뇨망막증 환자의 혈청 단백질

3: 2ug의 비증식성 당뇨망막증 환자의 혈청 단백질

4: 2ug의 정상인의 혈청 단백질

본 발명은 당뇨망막증 진단용 단백질에 관한 발명으로, 더욱 상세하게는 당뇨망막증 유리체내에서 아포리포프로틴(apolipoprotein) J가 정상인 유리체에 비해 감소한다는 사실로부터 혈액내 이 단백질이 변화가 있음을 확인하고 이를 이용 면역학적 방법으로 완성된 당뇨망막증 진단용 단백질, 그 진단키트 및 그 진단방법에 관한 것이다.

당뇨병은 미세혈관계에 병변을 일으키는 복잡한 대사성 질환으로 눈을 포함한 전신조직에 광범위한 장애를 초래하며, 눈에 영향을 끼치는 전신질환 중 가장 중요한 질환이다(이태희,최영길.당뇨병성 혈관합병증, 서울:고려의학(1993)). 그 중 당뇨망막증은 가장 심한 합병증에 속하며 생활 수준향상과 치료수준의 발전으로 당뇨병 환자의 수명과 유병기간이 길어짐에 따라 중요한 문제가 되어왔다(Klein R. et al , Arch Ophthalmol. 102:520-532(1984)). 당뇨망막증은 혈관장애로 인한 망막의 병변이 망막내에 국한되어 있는 비증식성 당뇨망막증과 망막에서부터 유리체강으로 신생혈관조직이 자라 들어가는 증식성 당뇨망막증으로 구분한다(Green , In : Spencer WH, ed. Ophthalmic Pathology : an atlas and textbook. 4th ed. Philadelphia: WB Saunder; 1124-1129 (1996)). 당뇨망막증의 진단은 안저에서 특징적인 구조변화를 관찰하여 이루어진다. 당뇨망막증에 의한 시력손상은 증식성 당 뇨망막증에서의 유리체 출혈, 황반의 견인망막박리와 함께 황반변증 때문인데, 이에 대해서 수술치료와 함께 레이저치료 효용성이 잘 알려져 있다 (Diabetic Retinopathy Study Report Number 14:photocoagulation treatment of diabetic retinopathy. Int Ophthalmol Clin. 27:239-253(1987)). 이런 치료는 적절한단계에 시행함으로서 부작용을 최소화하면서 시력상실을 미리 막을 수 있다. 따라서 당뇨망막증의 검사와 진단상의 노력은 수술치료를 해야 할 단계에 이미 도달했는지 등을 판단하기 위해서 자주 검사를 통해서 이루어져야 한다. 하지만 현재까지는 진단방법으로 안과에서 행해지는 안저촬영에 의한 검사만이 가능하다. 그래서 조기에 진단하기 어려움에 따라 예방 및 수술시기를 놓치는 경우가 빈번하다. 따라서 본 발명에서는 혈액에서 쉽게 진단할 수 있는 방법을 고안했다. 현재 이와 같이 혈액을 통한 당뇨망막증을 진단법은 없으며 본 발명가들은 단백질체학을 이용하여 혈액내 변화가 있는 단백질을 찾아 진단에 응용하였다. 이 단백질은 당뇨만을 앓고 있는 환자와 당뇨합병증까지 앓는 환자에서 뚜렷한 양적 변화를 보이므로서 면역학적 방법에 의한 정확한 정량법을 이용하여 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 상기한 문제점을 해결하고, 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 혈액내에서 쉽게 당뇨망막증과 관련된 단백질군을 정량할 수 있는 단백질을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 단백질을 사용하여 면역학적 방법을 이용한 키트를 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 당뇨망막증 진단에 효과적인 서열목록 1에 기재된 아포리포프로틴 J 단백질 및 서열목록 2를 포함하는 아포리포프로틴단백질의 펩타이드 절편을 제공한다.

또 본 발명은 상기의 단백질에 결합하는 항체를 제공하고, 상기의 항체는 폴리크로날, 단일크로날 모두 바람직하나, 단일크로날항체가 더욱 바람직하다.

또 본 발명은 상기의 항체를 포함하는 당뇨망막증 진단용 키트를 제공한다.

본 발명의 키트는 아포리포프로틴 J 단백질을 효소 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스페테이즈 또는 바이오틴 등으로 표지시킨 항원을 더욱 포함한다.

또 본 발명은 상기의 항체에 유리체 또는 혈액 샘플과 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스페테이즈 또는 바이오틴 등으로로 표지시킨 아포리포프로틴 J 표지 단백질를 처리하는 단계; 및 상기의 복합체의 흡광도를 측정하여 정상보다 높은 흡광도(낮은 ELISA값)를 나타내는 경우에 당뇨 망막증임을 진단하는 방법을 제공한다.

즉 본 발명은 아포리폴프로틴 J 단백질에 대한 항체에 대하여 검사하려는 샘플의 아포리폴프로틴 J 단백질과 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스페테이즈 또는 바이오틴 등으로 표지시킨 아포리포프로틴 J 표지 단백질사이의 결합경쟁에 의하여 만약 샘플 내에 아포리폴프로틴 J 단백질의 양이 적다면 높은 흡광도(낮은 ELISA 값)을 나타내는 특성을 이용하여 당뇨망막증 진단에 응용하는 것이다.

또한 본 발명은 아포리포프로틴 J 단백질을 코딩하는 서열목록 3 및 그 절편인 서열목록4를 포함하는 아포리포프로틴 J 유전자를 제공한다.

본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명은 우선 당뇨망막증에 특별히 변화가 있는 단백질군을 단백질체학(proteomics) 방법으로 분석하였다. 정상인과 당뇨망막증 환자 유리체의 변화를 단백질 종류와 양적인 변화를 분석하여 다음과 같은 신규한 현상을 발견하였고, 발견된 동일한 단백질 변화를 혈액내에서 확인한 후 당뇨망막증 진단에 적용하기 위한 적절한 면역학적 방법으로 진단키트를 제작하였다.: 첫째,정상인을 대조군으로 하여 당뇨병환자, 당뇨망막증환자에서 안구내 유리체를 채취하여 2차원 젤 분리 및 이미지분석을 통해 정성 및 정량적 차이를 보이는 단백질군을 확보하고, 이들 단백질군의 정체를 알아보기 위해 MALDI 질량분석기과 Q-TOF 분석기로 동정하였다. 변화가 관측되고 확인된 단백질은 apolipoprotein J였다. 당뇨망막증환자의 유리체내에는 정상인 유리체에서 과량 관찰되는 아포리포프로틴 J가 감소함이 관찰되었다. 당뇨망막증 유리체내에서 아포리포프로틴 J가 감소된다는 보고는 아직없다. ; 둘째, 이런 정량적 변화를 보이는 이 단백질은 혈액내에서의 양적 변화를 보였다. 당뇨병환자 혈액을 대조군으로 했을 경우 아포리포프로틴 J는 당뇨망막증 환자 혈액내에서 감소하였다. 이런 결과 또한 아직 보고된 바 없다.; 셋째, 단백질의 존재 수치는 면역학적 방법을 통한 키트를 제작함으로서 사용이 용이하고 민감하면서 정확도가 높은 방법을 채택하였다.

이하, 비한정적인 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.

실시예 1: 단백질체학 분석을 위한 안구 유리체 샘플처리

당뇨망막증은 당뇨가 장기간 지속되면서 발생되는 합병증 중에 하나이다. 이 질환은 불완전한 혈관구조를 갖는 신생혈관이 많이 생성되면서 안구내 유리체에 출혈을 일으키므로서 망막에 이상을 유발하게 되고 정도에 따라 시력저하 및 상실에 이른다. 본 발명에서는 정상 대조군과 당뇨망막증 환자 유리체의 단백질분석을 통해서 질환 유발 인자를 탐색과 더불어 질환 상태를 대변하는 단백질에 대한 정보를 얻어 진단의 목적을 이루었다. 단백질 분석은 최신기법인 단백질체학 방법을 사용하였다. 우선 단백질체학 방법에 적용하기 위해서 안구 유리체를 분석하기 용이하게 처리하였다. 유리체는 고분자당인 hyaluronic acid가 과량함유되어 있다. 그런데 이 당은 단백질 분리시 상당히 악영향을 미치는 것으로 판명되었다. 따라서 이를 효과적으로 제거할 수 있는 방법을 고안하였다 (도 1 참조). 이 방법은 4 ml의 유리체를 16ml의증류수로 희석하여 1,000,000 cut off 막이 있는 튜브에 넣어 4℃에서 8,000rpm속도로 2시간 원심분리하고 이 과정을 3회 반복하여 1,000,000 이상되는 고분자당을 분자량의 차이를 이용하여 걸러냈다. 걸리지 않은 단백질은 10,000 cut-off 막이 있는 튜브에 넣어 4℃에서 4,000rpm속도로 원심분리하여 농축한 후 분석에 이용하였다. 고분자당을 제거하는 방법은 낮은 pH에서 분리가 잘되지 않았던 문제를 해결하므로서 매우 효과적인 분석을 가능케하였다.

실시예 2: 정상인과 당뇨망막증환자의 안구내 유리체내 변화된 단백질군 조사

각각의 유리체에서 단백질만을 농축하여 1mg의 단백질을 분석에 사용하였다. 과정은 우선 단백질을 2가지 다른 특성을 이용하는 분리법으로 2차원적으로 분리시켰다. 하나는 pH에 따른 단백질이동 성질(IEF)(pH3-10), 또하나는 분자량 크기에 따른 (폴리아크릴아마이드 8-18%) 단백질의 이동을 시행하였다. pH에 따른 단백질이동은 젤당 50mA의 전류로 12시간동안 이동시킨 후 폴리아크릴아마이드에서 젤당 50mA로 6시간 전기 이동시켰다. 이렇게 이동된 단백질을 CBB(Coomassie Brillant Blue)염색약으로 염색하여 존재를 확인한 후 정상인이 갖고 있는 단백질과 당뇨망막증환자의 유리체내 단백질의 차이를 컴퓨터에서 이미지분석 소프트웨어 Phoretix (Nonlinear dynamics사,UK)를 이용하여 분석하였다. 이 두 군사이의 단백질을 분석한 결과, 차이를 보이는 단백질군이 존재하였다(도 2 참조).

실시예 3: 정상인과 당뇨망막증에서 다른양 존재하는 단백질의 동정

양적 혹은 질적으로 차이를 보이는 단백질을 찾아 MALDI-TOF 질량분석기 (도 3 참조) 및 Q-TOF 분석기로 동정을 수행하여 단백질 종류를 알게 되었다(도 4 참조). 이를 통해 당뇨망막증 유리체내에서 아포리포프로틴 J가 양이 감소한다는 사실을 알게되었다.

실시예 4: 혈액에서 아포리포프로틴 J에 대한 웨스턴 블롯팅

당뇨만을 앓고 있는 환자와 당뇨망막증을 앓고 있는 환자의 혈액내에서 아포리포프로틴 J의 존재 및 양의 변화를 알아보기위해서 각 혈청에 대해 폴리아크릴 아미드젤에서 전기영동을 수행하였으며, 전기영동한 젤로부터 단백질들을 막에 옮 기고 항 아포리포프로틴 J 단백질 단일 항체(Santa Cruz Biotechnology, USA)를 이용하여, 웨스턴 블롯팅(western blotting)을 수행하였다. 이때, 특이성을 갖는 단백질만의 접착을 위해 막을 5%의 스킴밀크(skim milk)를 포함한 PBS용액으로 30분간 충분히 반응시킨 후 위에서 언급한 1차 항체와 실온에서 1시간 이상 반응시켰다. 부착되지 않은 항체를 제거하기 위해 PBST용액 (PBS+0.5% Tween20)으로 막을 3회 각각 10분간 세척하였다. 세척이 완료된 막은 적당히 희석되고 퍼옥시다제(peroxidase)효소가 부착된 항마우스항체(Axell Accurate,USA) 및 5% 스킴밀크를 포함한 PBS용액의 혼합액과 1시간동안 진탕하여 반응시켰다. 이 후 PBST 용액으로 막을 3회 10분간씩 세척한 후 ECL 발색방법을 사용한 결과 예상된 위치에서 단백질 밴드를 확인하였으며, 당뇨병만을 앓고 있는 환자와 비증식성당뇨망막증(NPDR)환자에 비해 정상인과 당뇨망막증환자(증식성 당뇨망막증:PDR)에서 아포리포프로틴 J 단백질 밴드가 약하게 나타남을 알았다 (도 5 참조).

실시예 5: 96공 플레이트에 사람 아포리포프로틴 J에 대한 항체를 코팅하고 효소표지된 아포리포프로틴 J를 포함하는 진단 연구

Peroxidase 효소로 표지된 아포리포프로틴 J를 사용하여 엘라이자(ELISA)를 통하여 당뇨환자 중 당뇨망막증환자의 혈청을 식별할 수 있는지를 알아보기 위해 본 연구를 수행하였다. 병원으로부터 얻은 10명의 당뇨망막증환자 혈청과 당뇨망막증이 없는 당뇨환자 대조군 10명의 혈청을 사용하였다. 먼저 EIA 96공 플레이트에 각 well 당 코팅버퍼(50 mM NaHCO₃, pH9.0)에 10ug/ml의 농도로 용해된 항 아포리포프로틴 J 100ul(각 well당 1ug의 항체 단백질)을 상온에서 1시간 반응시켜 코팅하고 400ul의 PBST로 2회 각각 10분간 세척한 후 1% BSA를 포함한 PBS로 후코팅시켰다. PBST 버퍼로 희석된 환자의 혈청을 50ul와 퍼옥시데이즈(peroxidase)가 부착된 아포리포프로틴 J 표지 단백질을 50ul 넣어 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 이것을 다시 PBST 버퍼로 3회 세척 후 1mg/ml OPD(o-페닐렌디아민 다하이드로클로라이드) 및 0.03% H₂O₂가 함유된 0.1M 시트레이트-포스페이트 버퍼(pH4.9) 100ul을 넣어 실온에서 20-30분 후 3M 황산을 100ul을 넣어 반응을 정지시키고 엘라이자 리더(ELISA reader)를 이용하여 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 흡광도를 표준 적정곡선을 통한 환산과 희석배율을 적용하여 혈액단위부피(ml)당 아포리포프로틴 J의 양을 결정하였다. 이 결과를 표 1에 나타내었다. 당뇨만을 앓고 있는 환자의 혈청내 아포리포프로틴 J의 측정값은 0.72 - 1.5 mg/ml으로 당뇨망막증환자 0.4 mg/ml 이하(60%), 0.4 - 0.7 mg/ml ( 20%) 0.7 mg/ml 이상 (20 %) 의 분포를 보였다. ELISA값 0.7 mg/ml이하로 존재하는 경우를 당뇨망막증 양성으로 판정한다면 약 80%의 정확도를 정확도를 가진다고 할 수 있다.

[표 1] ELISA를 통한 환자 혈청내 아포리포프로틴 J와 반응성 연구

번호	혈청	ELISA 값 mg/ml
1	당뇨환자	1.23
2	당뇨환자	1.34
3	당뇨환자	1.03
4	당뇨환자	1.43
5	당뇨환자	0.87
6	당뇨환자	1.23
7	당뇨환자	0.98
8	당뇨환자	0.71
9	당뇨환자	1.16
10	당뇨환자	1.50
11	당뇨망막증 환자	0.25
12	당뇨망막증 환자	0.45
13	당뇨망막증 환자	0.15
14	당뇨망막증 환자	0.35
15	당뇨망막증 환자	0.23
16	당뇨망막증 환자	0.78
17	당뇨망막증 환자	0.48
18	당뇨망막증 환자	0.81
19	당뇨망막증 환자	0.28
20	당뇨망막증 환자	0.32

본 발명은 당뇨병의 합병증인 당뇨망막증을 쉽게 진단할 수 있는 기술이다. 현재까지 당뇨망막증 진단에 대한 상업적으로 판매되는 효율적인 진단제는 없는 실정이다. 당뇨망막증에 대한 진단은 전적으로 병원에 내원하여 안과의사의 검진에 의해서 이루어졌다. 따라서 당뇨병환자들이 자각증세로 시력의 이상을 느끼지 않고, 정기적인 안과검사를 받지 않은 상황에서는 조기 진단은 불가능하다. 이 진단제의 개발은 간단한 혈액검사를 통해 이루어지는 특징을 갖고 있으므로 안과검진 전에 미리 합병증이 발생되었는지를 확인할 수 있다는 점에서 매우 유용성이 크다. 특히 이 발명은 대량으로 검사가 가능한 96공을 이용한 ELISA방법을 채택함으로서 건강검진시 혹은 내과에 내원한 다수의 당뇨병환자를 대상으로 비용이 싸면서도 쉽 고 간단히 처리할 수 있는 장점을 지닌다. 면역학적 방법이 사용되므로서 정확성과 정밀성등이 우수하다. 결론적으로 본 발명품은 당뇨망막증 진단에서 조기진단과 스크링에 유용성이 있으며, 잠재 당뇨망막증 환자에게는 치료제 투여시기를 결정하는데 도움을 주므로서 당뇨망막증 치료제 효과를 증진시킬 것이다.

<110> EYEGENE Inc.;YOO, WON IL <120> Protein for Diagnosing Diabetic Retinopathy <130> 2002DPA084 <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 416 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ser Asn Gln Gly Ser Lys Tyr Val Asn Lys Glu Ile Gln Asn Ala 1 5 10 15 Val Asn Gly Val Lys Gln Ile Lys Thr Leu Ile Glu Lys Thr Asn Glu 20 25 30 Glu Arg Lys Thr Leu Leu Ser Asn Leu Glu Glu Ala Lys Lys Lys Lys 35 40 45 Glu Asp Ala Leu Asn Glu Thr Arg Glu Ser Glu Thr Lys Leu Lys Glu 50 55 60 Leu Pro Gly Val Cys Asn Glu Thr Met Met Ala Leu Trp Glu Glu Cys 65 70 75 80 Lys Pro Cys Leu Lys Gln Thr Cys Met Lys Phe Tyr Ala Arg Val Cys 85 90 95 Arg Ser Gly Ser Gly Leu Val Gly Arg Gln Leu Glu Glu Phe Leu Asn 100 105 110 Gln Ser Ser Pro Phe Tyr Phe Trp Met Asn Gly Asp Arg Ile Asp Ser 115 120 125 Leu Leu Glu Asn Asp Arg Gln Gln Thr His Met Leu Asp Val Met Gln 130 135 140 Asp His Phe Ser Arg Ala Ser Ser Ile Ile Asp Glu Leu Phe Gln Asp 145 150 155 160 Arg Phe Phe Thr Arg Glu Pro Gln Asp Thr Tyr His Tyr Leu Pro Phe 165 170 175 Ser Leu Pro His Arg Arg Pro His Phe Phe Phe Pro Lys Ser Arg Ile 180 185 190 Val Arg Ser Leu Met Pro Phe Ser Pro Tyr Glu Pro Leu Asn Phe His 195 200 205 Ala Met Phe Gln Pro Phe Leu Glu Met Ile His Glu Ala Gln Gln Ala 210 215 220 Met Asp Ile His Phe His Ser Pro Ala Phe Gln His Pro Pro Thr Glu 225 230 235 240 Phe Ile Arg Glu Gly Asp Asp Asp Arg Thr Val Cys Arg Glu Ile Arg 245 250 255 His Asn Ser Thr Gly Cys Leu Arg Met Lys Asp Gln Cys Asp Lys Cys 260 265 270 Arg Glu Ile Leu Ser Val Asp Cys Ser Thr Asn Asn Pro Ser Gln Ala 275 280 285 Lys Leu Arg Arg Glu Leu Asp Glu Ser Leu Gln Val Ala Glu Arg Leu 290 295 300 Thr Arg Lys Tyr Asn Glu Leu Leu Lys Ser Tyr Gln Trp Lys Met Leu 305 310 315 320 Asn Thr Ser Ser Leu Leu Glu Gln Leu Asn Glu Gln Phe Asn Trp Val 325 330 335 Ser Arg Leu Ala Asn Leu Thr Gln Gly Glu Asp Gln Tyr Tyr Leu Arg 340 345 350 Val Thr Thr Val Ala Ser His Thr Ser Asp Ser Asp Val Pro Ser Gly 355 360 365 Val Thr Glu Val Val Val Lys Leu Phe Asp Ser Asp Pro Ile Thr Val 370 375 380 Thr Val Pro Val Glu Val Ser Arg Lys Asn Pro Lys Phe Met Glu Thr 385 390 395 400 Val Ala Glu Lys Ala Leu Gln Glu Tyr Arg Lys Lys His Arg Glu Glu 405 410 415 <210> 2 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Val Thr Thr Val Ala Ser His Thr Ser Asp Ser Asp Val Pro Ser Gly 1 5 10 15 Val Thr Glu Val Val Val Lys 20 <210> 3 <211> 1248 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 atgtccaatc agggaagtaa gtacgtcaat aaggaaattc aaaatgctgt caacggggtg 60 aaacagataa agactctcat agaaaaaaca aacgaagagc gcaagacact gctcagcaac 120 ctagaagaag ccaagaagaa gaaagaggat gccctaaatg agaccaggga atcagagaca 180 aagctgaagg agctcccagg agtgtgcaat gagaccatga tggccctctg ggaagagtgt 240 aagccctgcc tgaaacagac ctgcatgaag ttctacgcac gcgtctgcag aagtggctca 300 ggcctggttg gccgccagct tgaggagttc ctgaaccaga gctcgccctt ctacttctgg 360 atgaatggtg accgcatcga ctccctgctg gagaacgacc ggcagcagac gcacatgctg 420 gatgtcatgc aggaccactt cagccgcgcg tccagcatca tagacgagct cttccaggac 480 aggttcttca cccgggagcc ccaggatacc taccactacc tgcccttcag cctgccccac 540 cggaggcctc acttcttctt tcccaagtcc cgcatcgtcc gcagcttgat gcccttctct 600 ccgtacgagc ccctgaactt ccacgccatg ttccagccct tccttgagat gatacacgag 660 gctcagcagg ccatggacat ccacttccac agcccggcct tccagcaccc gccaacagaa 720 ttcatacgag aaggcgacga tgaccggact gtgtgccggg agatccgcca caactccacg 780 ggctgcctgc ggatgaagga ccagtgtgac aagtgccggg agatcttgtc tgtggactgt 840 tccaccaaca acccctccca ggctaagctg cggcgggagc tcgacgaatc cctccaggtc 900 gctgagaggt tgaccaggaa atacaacgag ctgctaaagt cctaccagtg gaagatgctc 960 aacacctcct ccttgctgga gcagctgaac gagcagttta actgggtgtc ccggctggca 1020 aacctcacgc aaggcgaaga ccagtactat ctgcgggtca ccacggtggc ttcccacact 1080 tctgactcgg acgttccttc cggtgtcact gaggtggtcg tgaagctctt tgactctgat 1140 cccatcactg tgacggtccc tgtagaagtc tccaggaaga accctaaatt tatggagacc 1200 gtggcggaga aagcgctgca ggaataccgc aaaaagcacc gggaggag 1248 <210> 4 <211> 69 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 caccacggtg gcttcccaca cttctgactc ggacgttcct tccggtgtca ctgaggtggt 60 cgtgaagct 69

Claims (7)

1. 서열목록 1에 기재된 아포리포프로틴 J 단백질을 유효성분으로 하는 당뇨망막증 진단용 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 서열목록 1 또는 서열목록 2의 단백질에 결합하는 항체를 포함하는 당뇨망막증 진단용 키트.
5. 제 4 항에 있어서,

   상기의 키트는 아포리포프로틴 J 단백질을 효소 퍼옥시데이즈, 알칼라인포스페테이즈 또는 바이오틴으로 표지시킨 항원을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 당뇨망막증 진단용 키트.
6. 삭제
7. 제 4항에 있어서, 상기 서열목록 1의 단백질은 서열목록 3에 기재된 유전자에 의하여 코딩되고, 서열목록 2에 기재된 단백질은 서열목록 4의 유전자에 의하여 코딩되는 것을 특징으로 하는 당뇨망막증 진단용 키트.

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