JPH0682448A - アポリポ蛋白質ｂの測定方法 - Google Patents
アポリポ蛋白質ｂの測定方法Info
- Publication number
- JPH0682448A JPH0682448A JP26287192A JP26287192A JPH0682448A JP H0682448 A JPH0682448 A JP H0682448A JP 26287192 A JP26287192 A JP 26287192A JP 26287192 A JP26287192 A JP 26287192A JP H0682448 A JPH0682448 A JP H0682448A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- apolipoprotein
- blood
- measurement
- sample
- measuring
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明の目的は免疫学的測定方法に基づく血
中アポリポ蛋白質Ｂ(Ａｐｏ Ｂ)の測定において、測定
試料の不安定性に起因する測定値の変動を抑制する方法
を提供することにある。 【構成】 本発明は免疫学的測定方法に基づくＡｐｏ
Ｂの測定において、測定試料の調製にあたり、毛細管で
採取された被検血液を使用することを大きな特徴とす
る。即ち、血液を毛細管で採取後、安定剤を含有する溶
液上に溶出、希釈してこれを測定試料とし、Ａｐｏ Ｂ
対する抗体より構成される免疫学的測定方法によってＡ
ｐｏ Ｂ量を測定する。
中アポリポ蛋白質Ｂ(Ａｐｏ Ｂ)の測定において、測定
試料の不安定性に起因する測定値の変動を抑制する方法
を提供することにある。 【構成】 本発明は免疫学的測定方法に基づくＡｐｏ
Ｂの測定において、測定試料の調製にあたり、毛細管で
採取された被検血液を使用することを大きな特徴とす
る。即ち、血液を毛細管で採取後、安定剤を含有する溶
液上に溶出、希釈してこれを測定試料とし、Ａｐｏ Ｂ
対する抗体より構成される免疫学的測定方法によってＡ
ｐｏ Ｂ量を測定する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は血中アポリポ蛋白質Ｂの
測定方法に関する。さらに詳細には、免疫学的測定方法
に基づく血中アポリポ蛋白質Ｂの測定において、被検試
料の簡易且つ安定的な調製法を提供する技術に関する。
従って、本発明は血中アポリポ蛋白質Ｂの測定に生化学
的あるいは医学的意義を有する分野、例えば臨床診断の
分野に広く利用される。
測定方法に関する。さらに詳細には、免疫学的測定方法
に基づく血中アポリポ蛋白質Ｂの測定において、被検試
料の簡易且つ安定的な調製法を提供する技術に関する。
従って、本発明は血中アポリポ蛋白質Ｂの測定に生化学
的あるいは医学的意義を有する分野、例えば臨床診断の
分野に広く利用される。
【０００２】
【従来技術及び本発明が解決しようとする問題点】高コ
レステロール血症は動脈性心疾患の主要な危険因子の一
つであり、その発症メカニズムは近年、詳細に明らかに
されつつある。Goldstein と Brown が家族性高コレス
テロール血症IIの研究を精力的に展開し、彼らによって
本症はアポリポ蛋白質Ｂに対するレセプターの異常が原
因となって発症することが明らかにされ、この原因によ
って患者の血中アポリポ蛋白質Ｂ値が高くなることが判
明した。即ち、血中アポリポ蛋白質Ｂの測定によって高
コレステロール血症の診断が可能となる。下記文献(ａ)
は上述の従来知見をさらに詳細に説明する資料として参
照される。 (ａ) Goldstein J.L. and Brown M.S., The LDL recept
or defect infamilial hyperchoresterolemia, Med. Cl
in. North Am. 66, p.273-(1982)
レステロール血症は動脈性心疾患の主要な危険因子の一
つであり、その発症メカニズムは近年、詳細に明らかに
されつつある。Goldstein と Brown が家族性高コレス
テロール血症IIの研究を精力的に展開し、彼らによって
本症はアポリポ蛋白質Ｂに対するレセプターの異常が原
因となって発症することが明らかにされ、この原因によ
って患者の血中アポリポ蛋白質Ｂ値が高くなることが判
明した。即ち、血中アポリポ蛋白質Ｂの測定によって高
コレステロール血症の診断が可能となる。下記文献(ａ)
は上述の従来知見をさらに詳細に説明する資料として参
照される。 (ａ) Goldstein J.L. and Brown M.S., The LDL recept
or defect infamilial hyperchoresterolemia, Med. Cl
in. North Am. 66, p.273-(1982)
【０００３】高コレステロール血症は新生児の早い段階
から既に発症しており、それ以後の長い年月にわたる進
行の結果として、動脈硬化症に至ることが知られてい
る。従って、新生児のできるだけ早い時期に高コレステ
ロール血症の危険因子を発見し、これを除去してコレス
テロール値をコントロールすることができれば成人にな
ってからの動脈硬化症をかなり減少させることができ
る。この意味で新生児における血中アポリポ蛋白質Ｂの
測定は非常に重要であることが理解される。
から既に発症しており、それ以後の長い年月にわたる進
行の結果として、動脈硬化症に至ることが知られてい
る。従って、新生児のできるだけ早い時期に高コレステ
ロール血症の危険因子を発見し、これを除去してコレス
テロール値をコントロールすることができれば成人にな
ってからの動脈硬化症をかなり減少させることができ
る。この意味で新生児における血中アポリポ蛋白質Ｂの
測定は非常に重要であることが理解される。
【０００４】しかしながら、新生児の採血量には限度が
あるため、新生児の血中アポリポ蛋白質Ｂの測定にはこ
れを容易に行なうことができない難点がある。このた
め、一般には濾紙を用いた濾紙血液が使用されている。
しかし、この方法では特に採血直後に測定できない場
合、即ち採血して数日後の測定を与儀なくされる場合に
は当該蛋白質の不安定性に起因して測定値の再現性が低
下するという大きな問題があった。
あるため、新生児の血中アポリポ蛋白質Ｂの測定にはこ
れを容易に行なうことができない難点がある。このた
め、一般には濾紙を用いた濾紙血液が使用されている。
しかし、この方法では特に採血直後に測定できない場
合、即ち採血して数日後の測定を与儀なくされる場合に
は当該蛋白質の不安定性に起因して測定値の再現性が低
下するという大きな問題があった。
【０００５】このような問題点に鑑み、本発明者は極め
て微量の採血サンプルであってもその血中アポリポ蛋白
質Ｂを安定的に感度よく測定することのできる方法の提
供を課題として鋭意検討した。
て微量の採血サンプルであってもその血中アポリポ蛋白
質Ｂを安定的に感度よく測定することのできる方法の提
供を課題として鋭意検討した。
【０００６】
【発明の構成】種々の検討の結果、毛細管を使用して新
生児より定量的に極微量の採血を行ない、これをアルブ
ミン等の安定剤を含む保存液に浸せきすることによっ
て、アポリポ蛋白質Ｂの安定な測定試料とすることが可
能となった。この試料を適当な免疫学的測定法と組み合
わせることにより、再現性に優れた測定方法を提供する
本発明を完成するに至った。
生児より定量的に極微量の採血を行ない、これをアルブ
ミン等の安定剤を含む保存液に浸せきすることによっ
て、アポリポ蛋白質Ｂの安定な測定試料とすることが可
能となった。この試料を適当な免疫学的測定法と組み合
わせることにより、再現性に優れた測定方法を提供する
本発明を完成するに至った。
【０００７】以下に本発明の概略を説明する。アポリポ
蛋白質にはＡ-I、Ａ-II、Ｂ、Ｃ-II、Ｃ-III、Ｅ等があ
るが、本発明はこれらのうちアポリポ蛋白質Ｂのみを測
定対象とする。アポリポ蛋白質Ｂの説明については前記
文献(ａ)の記述が本発明のために参照される。
蛋白質にはＡ-I、Ａ-II、Ｂ、Ｃ-II、Ｃ-III、Ｅ等があ
るが、本発明はこれらのうちアポリポ蛋白質Ｂのみを測
定対象とする。アポリポ蛋白質Ｂの説明については前記
文献(ａ)の記述が本発明のために参照される。
【０００８】本発明において使用される毛細管には特別
な制約はない。一般に広く市販されているものを希望の
長さに切断し、採血量を調整することによって使用され
る。例えば、内径０.９mm、長さ２.０cmの毛細管を用い
て新生児より管全体に微量採血することによって、定量
採血することができる。採取された血液は溶液中、例え
ば適当な緩衝液中に溶出されるが、当該溶液にアルブミ
ン等の安定剤を含有させることによってアポリポ蛋白質
Ｂを長期間安定に保存することができる。本発明に用い
られる安定剤としてはアルブミン等の血清蛋白質、糖
類、糖アルコール類、アミノ酸あるいはＥＤＴＡ等のキ
レート剤より好適なものが選択される。本発明はこれら
の知見を組み合せることによって、定量的にしかも長期
間安定なアポリポ蛋白質Ｂ測定用の検体を提供し得る点
に大きな特長を有する。
な制約はない。一般に広く市販されているものを希望の
長さに切断し、採血量を調整することによって使用され
る。例えば、内径０.９mm、長さ２.０cmの毛細管を用い
て新生児より管全体に微量採血することによって、定量
採血することができる。採取された血液は溶液中、例え
ば適当な緩衝液中に溶出されるが、当該溶液にアルブミ
ン等の安定剤を含有させることによってアポリポ蛋白質
Ｂを長期間安定に保存することができる。本発明に用い
られる安定剤としてはアルブミン等の血清蛋白質、糖
類、糖アルコール類、アミノ酸あるいはＥＤＴＡ等のキ
レート剤より好適なものが選択される。本発明はこれら
の知見を組み合せることによって、定量的にしかも長期
間安定なアポリポ蛋白質Ｂ測定用の検体を提供し得る点
に大きな特長を有する。
【０００９】後述の実験例に示すごとく、一定の長さに
切断された毛細管全体に採血することによって、簡便に
しかも採血量は極めて一定化し、さらに、採血血液をア
ルブミン等の安定剤を含む緩衝液に浸せきすることによ
って、長期間にわたり再現性の良い高感度の測定が可能
となる。
切断された毛細管全体に採血することによって、簡便に
しかも採血量は極めて一定化し、さらに、採血血液をア
ルブミン等の安定剤を含む緩衝液に浸せきすることによ
って、長期間にわたり再現性の良い高感度の測定が可能
となる。
【００１０】本発明に係る免疫学的測定方法はアポリポ
蛋白質Ｂと抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体との特異反応を利用
するいかなる方法であってもよい。すなわち、酵素免疫
測定法(ＥＬＩＳＡ法)、放射免疫測定法(ＲＩＡ法)及び
ラテックス凝集法等の中から任意に選択して適用すれば
よく、例えば二抗体サンドイッチ型のＥＬＩＳＡ法は好
ましい態様である。この方法を応用する場合について概
略を述べれば以下のごとくになる。
蛋白質Ｂと抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体との特異反応を利用
するいかなる方法であってもよい。すなわち、酵素免疫
測定法(ＥＬＩＳＡ法)、放射免疫測定法(ＲＩＡ法)及び
ラテックス凝集法等の中から任意に選択して適用すれば
よく、例えば二抗体サンドイッチ型のＥＬＩＳＡ法は好
ましい態様である。この方法を応用する場合について概
略を述べれば以下のごとくになる。
【００１１】まず、予め準備した抗アポリポ蛋白質Ｂ抗
体(ＩｇＧ)をマイクロタイタープレートのウェルに吸着
させる。ここに毛細管で採血し保存液で希釈した測定試
料を加えてインキュベートし、最後に基質液を加え、一
定時間後に反応を停止し、基質の分解量を吸光度によっ
て測定すればよい。
体(ＩｇＧ)をマイクロタイタープレートのウェルに吸着
させる。ここに毛細管で採血し保存液で希釈した測定試
料を加えてインキュベートし、最後に基質液を加え、一
定時間後に反応を停止し、基質の分解量を吸光度によっ
て測定すればよい。
【００１２】抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体は従来より公知の
方法の組み合せによって調製することができる。その概
略は以下のごとくである。アポリポ蛋白質Ｂは低比重リ
ポ蛋白質(ＬＤＬ)の９８％を占めることから、先ず Hav
el らの方法(文献ｂ)により正常ヒト血清より超遠心処
理によってＬＤＬを分取し、次に McConathy らの方法
(文献ｃ)により ConA-Sepharose カラムを用いてアポリ
ポ蛋白質Ｂを精製する。
方法の組み合せによって調製することができる。その概
略は以下のごとくである。アポリポ蛋白質Ｂは低比重リ
ポ蛋白質(ＬＤＬ)の９８％を占めることから、先ず Hav
el らの方法(文献ｂ)により正常ヒト血清より超遠心処
理によってＬＤＬを分取し、次に McConathy らの方法
(文献ｃ)により ConA-Sepharose カラムを用いてアポリ
ポ蛋白質Ｂを精製する。
【００１３】得られたアポリポ蛋白質Ｂでウサギを免疫
し、抗血清を調製する。次に、該抗血清からアフィニテ
ィークロマトグラフィーを用いて抗アポリポ蛋白質Ｂ抗
体(ウサギＩｇＧ)を精製分取する。ここでアフィニティ
ーカラムとしてはＣＮＢｒで活性化した Sepharose 4B
を用い、膨潤ゲル１ml当り１mgのアポリポ蛋白質ＢをCu
atrecasas 等の方法(文献ｄ)でカップリングさせたもの
を使用すればよい。溶出には０.２Ｍグリシン塩酸 ｐＨ
２.２を使用すればよい。精製分取した抗アポリポ蛋白
質Ｂ抗体(ウサギＩｇＧ)はさらにペプシン処理し、その
Ｆ(ab)2にさらにメルカプトエチルアミンを反応させ、
抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体(ウサギＦab)とすることができ
る。このＦabは例えば、石川等の方法(文献ｅ)によりペ
ルオキシダーゼで標識することができる。
し、抗血清を調製する。次に、該抗血清からアフィニテ
ィークロマトグラフィーを用いて抗アポリポ蛋白質Ｂ抗
体(ウサギＩｇＧ)を精製分取する。ここでアフィニティ
ーカラムとしてはＣＮＢｒで活性化した Sepharose 4B
を用い、膨潤ゲル１ml当り１mgのアポリポ蛋白質ＢをCu
atrecasas 等の方法(文献ｄ)でカップリングさせたもの
を使用すればよい。溶出には０.２Ｍグリシン塩酸 ｐＨ
２.２を使用すればよい。精製分取した抗アポリポ蛋白
質Ｂ抗体(ウサギＩｇＧ)はさらにペプシン処理し、その
Ｆ(ab)2にさらにメルカプトエチルアミンを反応させ、
抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体(ウサギＦab)とすることができ
る。このＦabは例えば、石川等の方法(文献ｅ)によりペ
ルオキシダーゼで標識することができる。
【００１４】以下の文献(ｂ)〜(ｅ)は上記の方法の説明
のための試料として参照することができる。 (ｂ) Havel R.J. et al., J. Clin. Invest. 34, p.134
5 (1955) (ｃ) McConathy W.J. et al., FEBS Lett. 41, p.174
(1974) (ｄ) Cuatrecasas P., J. Biol. Chem. 245, p.3059 (1
970) (ｅ) Yoshitake S. et al., J. Biochem. 92, p.1413
(1982)
のための試料として参照することができる。 (ｂ) Havel R.J. et al., J. Clin. Invest. 34, p.134
5 (1955) (ｃ) McConathy W.J. et al., FEBS Lett. 41, p.174
(1974) (ｄ) Cuatrecasas P., J. Biol. Chem. 245, p.3059 (1
970) (ｅ) Yoshitake S. et al., J. Biochem. 92, p.1413
(1982)
【００１５】また、上記のごとく調製されたアポリポ蛋
白質Ｂを免疫原として、Nature, 256,p.495-497(1975)
に記載のMilstein等の方法を参考にしてハイブリドーマ
を作製し、それよりアポリポ蛋白質Ｂに対するモノクロ
ーナル抗体を調製して免疫学的測定方法に供するのも好
ましい態様である。
白質Ｂを免疫原として、Nature, 256,p.495-497(1975)
に記載のMilstein等の方法を参考にしてハイブリドーマ
を作製し、それよりアポリポ蛋白質Ｂに対するモノクロ
ーナル抗体を調製して免疫学的測定方法に供するのも好
ましい態様である。
【００１６】本発明の理解を助けるために、以下の実施
例及び実験例を基に説明を加えるが、これらは本発明の
範囲を何等拘束するものではない。
例及び実験例を基に説明を加えるが、これらは本発明の
範囲を何等拘束するものではない。
【００１７】
【実施例】実施例 １ (試料の調製) 内径 ０.９mm、長さ ２.０cm の毛細管(萱垣医理科工業
社製の毛細管を所定の長さに切断したもの)を用いて、
新生児より毛細管全量を採血する。リン酸塩、ＮａＣ
ｌ、牛血清アルブミン(生化学工業社製、Albumin Fract
ion V, Bovine)、ＥＤＴＡをそれぞれ ０.０１Ｍ、０.
１５Ｍ、１％、２mＭ濃度に溶解し、ｐＨ７.３に調整し
た緩衝液２mlに前記の採血毛細管を浸せきする。得られ
た溶液をリン酸塩、ＮａＣｌ、ＥＤＴＡ、界面活性剤を
それぞれ０.０１Ｍ、０.１５Ｍ、０.２mＭ、０.１％の
濃度に溶解しｐＨを７.３に調整した溶液で４倍希釈
し、測定試料とした。
社製の毛細管を所定の長さに切断したもの)を用いて、
新生児より毛細管全量を採血する。リン酸塩、ＮａＣ
ｌ、牛血清アルブミン(生化学工業社製、Albumin Fract
ion V, Bovine)、ＥＤＴＡをそれぞれ ０.０１Ｍ、０.
１５Ｍ、１％、２mＭ濃度に溶解し、ｐＨ７.３に調整し
た緩衝液２mlに前記の採血毛細管を浸せきする。得られ
た溶液をリン酸塩、ＮａＣｌ、ＥＤＴＡ、界面活性剤を
それぞれ０.０１Ｍ、０.１５Ｍ、０.２mＭ、０.１％の
濃度に溶解しｐＨを７.３に調整した溶液で４倍希釈
し、測定試料とした。
【００１８】実施例 ２ (ＥＬＩＳＡ法による測定) ０.１Ｍ炭酸塩緩衝液(ｐＨ８.５)に抗アポリポ蛋白質Ｂ
抗体(ウサギＩｇＧ)を１０μg／mlになるように溶解
し、これを９６ウェルのマイクロタイタープレート(NUN
C社製、 IMMUNO MODULE MAXISORP F8)に１ウェル当り１
００μlずつ入れ、４℃で一夜静置した。各ウェルを吸
引除液し、０.１５Ｍ ＮａＣｌ(ｐＨ７.５)の洗浄液で
３回洗浄し、１％牛血清アルブミン溶液(０.０１Ｍ リ
ン酸緩衝液、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７.５)２５０μ
lを入れ、３７℃で３時間インキュベートした。吸引除
去し、前記洗浄液で３回洗浄して測定用ウェルとする。
別にペルオキシダーゼ標識した抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体
(ウサギＦab)を準備して、前記測定用ウェルと組み合わ
せ、本発明に用いる測定試薬とした。
抗体(ウサギＩｇＧ)を１０μg／mlになるように溶解
し、これを９６ウェルのマイクロタイタープレート(NUN
C社製、 IMMUNO MODULE MAXISORP F8)に１ウェル当り１
００μlずつ入れ、４℃で一夜静置した。各ウェルを吸
引除液し、０.１５Ｍ ＮａＣｌ(ｐＨ７.５)の洗浄液で
３回洗浄し、１％牛血清アルブミン溶液(０.０１Ｍ リ
ン酸緩衝液、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７.５)２５０μ
lを入れ、３７℃で３時間インキュベートした。吸引除
去し、前記洗浄液で３回洗浄して測定用ウェルとする。
別にペルオキシダーゼ標識した抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体
(ウサギＦab)を準備して、前記測定用ウェルと組み合わ
せ、本発明に用いる測定試薬とした。
【００１９】測定用ウェルに実施例１の方法で調製した
測定試料を１ウェル当り１００μlづつ入れ、３７℃で
２時間インキュベートし、各ウェルを吸引除液後、前記
緩衝液で４回洗浄した。次にペルオキシダーゼ標識した
抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体(ウサギＦab)、リン酸塩、Ｎａ
Ｃｌ、正常ウサギ血清をそれぞれ１μg／ml、０.０１
Ｍ、０.１５Ｍ、２０％の濃度に溶解しｐＨを７.４に調
整した溶液１００μlを各ウェルに入れ、３７℃で３時
間インキュベーションした。各ウェルを吸引除液し、前
述の緩衝液で４回洗浄後、o-フェニレンジアミン及び過
酸化水素を含有する基質溶液１００μlを各ウェルに入
れ、室温で１時間反応させた後、３規定Ｈ2ＳＯ4を加え
反応を停止させた。この後、オートリーダー(ＷＡＫＯ
Molecular Devices, THRMO maxmicroplate reader)によ
って４９２nmの吸光度を測定した。
測定試料を１ウェル当り１００μlづつ入れ、３７℃で
２時間インキュベートし、各ウェルを吸引除液後、前記
緩衝液で４回洗浄した。次にペルオキシダーゼ標識した
抗アポリポ蛋白質Ｂ抗体(ウサギＦab)、リン酸塩、Ｎａ
Ｃｌ、正常ウサギ血清をそれぞれ１μg／ml、０.０１
Ｍ、０.１５Ｍ、２０％の濃度に溶解しｐＨを７.４に調
整した溶液１００μlを各ウェルに入れ、３７℃で３時
間インキュベーションした。各ウェルを吸引除液し、前
述の緩衝液で４回洗浄後、o-フェニレンジアミン及び過
酸化水素を含有する基質溶液１００μlを各ウェルに入
れ、室温で１時間反応させた後、３規定Ｈ2ＳＯ4を加え
反応を停止させた。この後、オートリーダー(ＷＡＫＯ
Molecular Devices, THRMO maxmicroplate reader)によ
って４９２nmの吸光度を測定した。
【００２０】実施例 ３ (ラテックス法による測定) ０.０１Ｍリン酸食塩緩衝液(ＰＢＳ、ｐＨ７.３０)に固
形分２.０％となるようにラテックスを分散させた２.５
mlの懸濁液と同じＰＢＳに抗アポリポ蛋白質Ｂ ＩｇＧ
抗体(ヤギ抗体)を１〜４mg／mlとなるように溶解した抗
体液２.５mlとを混合し、この溶液をマグネットスター
ラーを用いて撹拌しながら３７℃で１時間インキュベー
トした。その後、同ＰＢＳに溶解した２％ＢＳＡ溶液５
mlを添加し、マグネットスターラーを用いて撹拌しなが
ら、３７℃で１時間インキュベートした。これに、ＢＳ
Ａ、ショ糖及びアジ化ナトリウムを加え、最終的にラテ
ックス固形分０.５％、ＢＳＡ１.０％、ショ糖１.０
％、アジ化ナトリウム０.１％とした。
形分２.０％となるようにラテックスを分散させた２.５
mlの懸濁液と同じＰＢＳに抗アポリポ蛋白質Ｂ ＩｇＧ
抗体(ヤギ抗体)を１〜４mg／mlとなるように溶解した抗
体液２.５mlとを混合し、この溶液をマグネットスター
ラーを用いて撹拌しながら３７℃で１時間インキュベー
トした。その後、同ＰＢＳに溶解した２％ＢＳＡ溶液５
mlを添加し、マグネットスターラーを用いて撹拌しなが
ら、３７℃で１時間インキュベートした。これに、ＢＳ
Ａ、ショ糖及びアジ化ナトリウムを加え、最終的にラテ
ックス固形分０.５％、ＢＳＡ１.０％、ショ糖１.０
％、アジ化ナトリウム０.１％とした。
【００２１】実施例１の方法で調製した測定試料４０μ
l、希釈液２.８ml、上記のラテックス試薬２００μlを
混合後、すばやく撹拌して、正確に５分後の濁度を波長
７５０nmで測定した。
l、希釈液２.８ml、上記のラテックス試薬２００μlを
混合後、すばやく撹拌して、正確に５分後の濁度を波長
７５０nmで測定した。
【００２２】実験例 １ 内径０.９mm、長さ２.０cmの毛細管を多数用意し、ＥＤ
ＴＡ採血した血液からこの毛細管を用いて、この毛細管
全量に血液を採取した。これらを実施例２記載のＥＬＩ
ＳＡ法によって血中アポリポ蛋白質Ｂを測定した。結果
を表１に示す。表１より本発明での毛細管採血法は採血
量が微量ながら、定量的に採血されており、同時再現性
に優れていることが判明した。
ＴＡ採血した血液からこの毛細管を用いて、この毛細管
全量に血液を採取した。これらを実施例２記載のＥＬＩ
ＳＡ法によって血中アポリポ蛋白質Ｂを測定した。結果
を表１に示す。表１より本発明での毛細管採血法は採血
量が微量ながら、定量的に採血されており、同時再現性
に優れていることが判明した。
【００２３】
【表１】 試料数 ｎ=３２， 平均値 ６１.１ 標準偏差 ２.７ ＣＶ(％) ４.３９
【００２４】実験例 ２ (イ) 一般的に用いられている濾紙を用いた採血による
濾紙血液中のアポリポ蛋白質Ｂの安定性、 (ロ) 本発明による毛細管を用いて採血を行ない、アル
ブミンを含む緩衝液中でのアポリポ蛋白質Ｂの安定性及
び (ハ) 本発明による毛細管を用いて採血を行ない、アル
ブミンを含まない緩衝液中でのアポリポ蛋白質Ｂの安定
性を調べた。日時を変えて、実施例２に記載の方法によ
ってそれぞれ血中アポリポ蛋白質Ｂを測定した。
濾紙血液中のアポリポ蛋白質Ｂの安定性、 (ロ) 本発明による毛細管を用いて採血を行ない、アル
ブミンを含む緩衝液中でのアポリポ蛋白質Ｂの安定性及
び (ハ) 本発明による毛細管を用いて採血を行ない、アル
ブミンを含まない緩衝液中でのアポリポ蛋白質Ｂの安定
性を調べた。日時を変えて、実施例２に記載の方法によ
ってそれぞれ血中アポリポ蛋白質Ｂを測定した。
【００２５】結果を図１〜図３に示す。図の横軸は採血
後の経日日数。縦軸は採血直後の検体についての測定値
を１００％とした時のアポリポ蛋白質Ｂの相対量(％)を
示す。図２で示される結果より、本発明で提供される方
法は安定化した測定値をもたらすことが理解される。
後の経日日数。縦軸は採血直後の検体についての測定値
を１００％とした時のアポリポ蛋白質Ｂの相対量(％)を
示す。図２で示される結果より、本発明で提供される方
法は安定化した測定値をもたらすことが理解される。
【００２６】実験例 ３ ５０人について実施例１記載の方法で採血を実施し、Ｅ
ＬＩＳＡ法については実施例２記載の要領で血中のアポ
リポ蛋白質Ｂを測定し、ラテックス法については実施例
３に記載の要領で測定した。このようにして測定した血
中アポリポ蛋白質Ｂについての両者の相関を図４に示
す。図４よりＥＬＩＳＡとラテックス法との間で良好な
相関が認められ、本発明による方法は種々の免疫学的測
定方法に適用した場合でも良好な測定が可能であること
が明らかである。
ＬＩＳＡ法については実施例２記載の要領で血中のアポ
リポ蛋白質Ｂを測定し、ラテックス法については実施例
３に記載の要領で測定した。このようにして測定した血
中アポリポ蛋白質Ｂについての両者の相関を図４に示
す。図４よりＥＬＩＳＡとラテックス法との間で良好な
相関が認められ、本発明による方法は種々の免疫学的測
定方法に適用した場合でも良好な測定が可能であること
が明らかである。
【００２７】
【発明の効果】本発明により、アポリポ蛋白質Ｂの測定
に関する被検試料の安定性に優れ、従って、再現性に優
れた測定方法を提供することが可能となった。
に関する被検試料の安定性に優れ、従って、再現性に優
れた測定方法を提供することが可能となった。
図１〜図３は採血後の経日日数と測定の安定性との関係
を示すグラフである。図４は本発明によってもたらされ
る被検試料をいくつかの免疫学的測定方法に適用した場
合の相関を示す図である。
を示すグラフである。図４は本発明によってもたらされ
る被検試料をいくつかの免疫学的測定方法に適用した場
合の相関を示す図である。
Claims (4)
- 【請求項１】免疫学的測定方法による血中アポリポ蛋白
質Ｂの測定において、測定試料の調製にあたり、毛細管
を用いて定量的に採取された被検血液を、アルブミンで
代表される安定剤を含む溶液で保存し測定に供すること
を特徴とする血中アポリポ蛋白質Ｂの測定方法。 - 【請求項２】使用される毛細管が内径約０.５mm〜約２.
０mm、長さ約１.０cm〜約５.０cmである請求項１記載の
血中アポリポ蛋白質Ｂの測定方法。 - 【請求項３】免疫学的測定方法が酵素免疫測定法(ＥＬ
ＩＳＡ法)、放射免疫測定法(ＲＩＡ法)及びラテックス
凝集法より選択される請求項１記載の血中アポリポ蛋白
質Ｂの測定方法。 - 【請求項４】血中アポリポ蛋白質Ｂの測定が高コレステ
ロール血症の診断方法である請求項１から請求項３記載
の血中アポリポ蛋白質Ｂの測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26287192A JPH0682448A (ja) | 1992-09-03 | 1992-09-03 | アポリポ蛋白質ｂの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26287192A JPH0682448A (ja) | 1992-09-03 | 1992-09-03 | アポリポ蛋白質ｂの測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0682448A true JPH0682448A (ja) | 1994-03-22 |
Family
ID=17381793
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26287192A Withdrawn JPH0682448A (ja) | 1992-09-03 | 1992-09-03 | アポリポ蛋白質ｂの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0682448A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4229283A1 (de) * | 1991-09-02 | 1993-03-04 | Jatco Corp | Getriebe eines kraftfahrzeugs mit mittelmotor |
| KR100817543B1 (ko) * | 2002-07-12 | 2008-03-27 | 아이진 주식회사 | 당뇨망막증 진단용 단백질 |
| WO2017081946A1 (ja) * | 2015-11-11 | 2017-05-18 | オリンパス株式会社 | 十二指腸液試料の保存方法 |
-
1992
- 1992-09-03 JP JP26287192A patent/JPH0682448A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4229283A1 (de) * | 1991-09-02 | 1993-03-04 | Jatco Corp | Getriebe eines kraftfahrzeugs mit mittelmotor |
| KR100817543B1 (ko) * | 2002-07-12 | 2008-03-27 | 아이진 주식회사 | 당뇨망막증 진단용 단백질 |
| WO2017081946A1 (ja) * | 2015-11-11 | 2017-05-18 | オリンパス株式会社 | 十二指腸液試料の保存方法 |
| JP6184654B1 (ja) * | 2015-11-11 | 2017-08-23 | オリンパス株式会社 | 十二指腸液試料の保存方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4399217A (en) | Process and a device for the determination of serum lipoproteins | |
| JP3108103B2 (ja) | ヒト心筋ミオグロビンに対するモノクローナル抗体 | |
| US4828985A (en) | Antibodies against the complex of a small molecule and its binding protein, their preparation and their use in diagnostic methods | |
| JPS5994069A (ja) | 分析対象物−シトリシン抱合体を用いる特殊結合分析 | |
| JPH09304382A (ja) | ヘモグロビンＡ１ｃの測定法及びキット | |
| JP2002539458A (ja) | 唾液中のａｐｏａおよびａｐｏｂ、ならびにそれらの比を検出するための方法およびデバイス | |
| Yamamoto et al. | Automated homogeneous liposome-based assay system for total complement activity | |
| US4722893A (en) | Reagents for enzyme immunoassay for apolipoprotein B | |
| Yamada et al. | A rapid method for measuring serum amyloid A protein by latex agglutination nephelometric immunoassay | |
| JPH1090269A (ja) | 被検体の亜集団の測定のための均一検出方法 | |
| US20050014198A1 (en) | Assays and kits for detecting and monitoring heart disease | |
| AU2004223553B2 (en) | Latex reagent for adiponectin analysis and method of adiponectin analysis | |
| JPH0682448A (ja) | アポリポ蛋白質ｂの測定方法 | |
| Wu et al. | Highly sensitive method for the assay of plasminogen | |
| JPH08304406A (ja) | カリブレーターマトリックス | |
| Kostner et al. | Immunochemical determination of lipoprotein Lp (a): comparison of Laurell electrophoresis and ELISA | |
| JP3998245B2 (ja) | 酸化アポリポタンパク質ａｉ及びそれを含有する酸化リポタンパク質の測定法及びキット | |
| Tsugawa et al. | An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for guanosine 3′, 5′-cyclic monophosphate (cGMP) in human plasma and urine using monoclonal antibody | |
| Närvänen et al. | Evaluation and characterization of EIA measuring autoantibodies against oxidized LDL | |
| EP0100395B1 (en) | Reagent for determination of human urine kallikrein | |
| JP3032891B2 (ja) | 遊離ヘモグロビン測定用試薬キット及びそれを用いる遊離ヘモグロビンの測定法 | |
| JP3262401B2 (ja) | リポプロティンスモールａの測定方法 | |
| Ludlam et al. | Plasminogen assay by a haemagglutination inhibition technique | |
| JPH07103978A (ja) | 遊離ヘモグロビン測定 | |
| JP4588053B2 (ja) | 酸化アポリポタンパク質ａｉ及びそれを含有する酸化リポタンパク質の測定法及びキット |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 19991130 |