KR20060007076A - 아토피 피부염, 여드름, 건선, 로사시아, 지루성 피부염 등의 피부질환 증상을 개선시킬 수 있는, 항염증 및 면역조절 효과를 보유한 천연추출물제제 bsasm - Google Patents

Abstract

아토피성 피부염이 지루성피부염, 여드름, 로사시아 및 건선과 같은 염증을 동반하며 일부 면역계 이상을 동반하는 피부질환의 효과적인 관리를 위해서는, 높은 항염증 효과 및 면역조절 효과와 더불어 최소한의 부작용을 나타내는 치료물질의 사용하는 게 필수적이다. 이러한 특성을 가지는 물질을 탐색하는 방법으로 싸이클로옥시게네이즈(Cyclooxygenase-2; COX-2) 생산억제능 실험, NF-kB 루시퍼라아제 리포터 (NF-kB luciferase reporter), 인터루킨-2 루시퍼라아제 리포터 (interleukin-2 luciferase reporter)를 이용하였다. 100여종의 식물추출물들에 대한 항염효과를 COX-2 생산억제능을 통해 검색한 결과, 뛰어난 항염효과를 보이는 20종의 식물추출물을 일차적으로 선별하였다. 이 20종의 식물추출물중에서 NF-kB 루시퍼라아제 리포터를 이용하여 항염증 뿐만 아니라 동시에 면역조절능을 보유하는 7종의 식물추출물을 확보하였다. 이 7종의 식물추출물을 각각 적정 비율로 배합하여 천연물제제 “BSASM”을 제조하였다. BSASM의 항염 및 면역조절효과를 NF-kB 루시퍼라아제 리포터를 이용하여 측정한 결과 각각의 식물추출물을 단독으로 처리했을 때보다 약 3배정도 높은 효능을 나타내었다. 뿐만 아니라 BSASM은 호염증성 시토카인(proinflammatory cytokine)에 속하는 인터페론-8 (Interleukin-8) 과 TNF-alpha 생산을 농도 의존적으로 감소시켰다. 또한 BSASM의 면역조절효과를 인터루킨-2 루시퍼라아제 리포터로 탐색한 결과, 파이토헤모아그루티닌(Phytohemagglutinin; PHA)에 의해 활성화된 인터루킨-2 프로 모터(promoter)를 크게 억제하는 결과를 보였다. 이를 통해 BioSpectrum Ato Soothing Max(BSASM)은 항염증 및 면역조절 효과를 보유하고 있음을 확인하였고, 직접적인 임상실험을 통하여 아토피성 피부염 증상 및 가려움증을 개선시키는 효과를 관찰하였다. 또한 피부도포 시 전혀 부작용이 관찰되지 않았다. 따라서 이러한 BSASM의 효능은 피부면역질환 (아토피 피부염, 건선, 지루 등)을 개선시킬 수 있는 물질임을 증명한다.

아토피성 피부염, 항염효과, 면역조절효과, 호염증성 시토카인, BSASM

Description

아토피 피부염, 여드름, 건선, 로사시아, 지루성 피부염 등의 피부질환 증상을 개선시킬 수 있는, 항염증 및 면역조절 효과를 보유한 천연추출물제제 BSASM{BSASM, natural multi herbal preparation, has ameliorative effect on skin disease such as atopic dermatitis, acne, psoriasis, rosacea and seborrhea through anti-inflammatory and immunomodulatory functions}

본 발명은 아토피성 피부염 증상이나 여드름, 건선, 지루성 피부염 및 로사시아 등의 증상을 개선시키는 식물추출물의 혼합물인 천연물제제에 관한 것이다. 보다 상세하게는 아토피성 피부염이나 건선의 발생원인인 염증현상 뿐만 아니라 면역적인 불균형을 조절하여 관련 피부염의 증상을 효과적으로 개선시키는 것을 들 수 있다. 이러한 효능은 항염증 및 면역조절 성분 등을 복합처방함으로써 얻어진 결과로 단일 처방에 따른 효능보다 뛰어난 결과를 얻을 수 있다는 가설에 의한 것이다.

아토피성 피부염은 대부분 유아기나 소아때 발생하여 호전과 악화를 반복하는 비교적 흔한 만성 염증성 피부질환으로 아토피의 개인 또는 가족력, 심한 가려움증, 습진의 3가지 특징으로 진단할 수 있으며 감염, 정신적인 스트레스, 계절과 기후변 화, 자극 및 알레르겐에 의해 악화될 수 있다. 아토피 피부염의 병인론은 아직 확실히 밝혀 있지 않지만, 면역학적인 이상이 관여하는 유전적인 질환으로 생각되고 있다. 건선역시 아토피와 마찬가지로 면역계의 이상에 의한 것으로 추정되고 있다. 또 다른 상당 수의 피부질환이 염증과 일부 면역계가 관련되어 있음은 이미 잘 알려져 있다.

아토피 피부염에서는 주로 제2형 T세포가 활성화되어 interleukin-4 (IL-4), interleukin-5 (IL-5), interleukin-10 (IL-10)이 분비되며 이들 중 IL-4는 immunoglobulin E (IgE)의 증가에 중요한 역할을 한다고 보고되어 있다. 아울러 Eosinophil cationic protein (ECP)과 같은 호산구 과립단백질이 아토피 피부염의 병변에 침착하여 염증의 정도를 나타내고, 세포 부착분자인 E-selectin은 cutaneous lymphocyte associated antigen (CLA)과의 상호작용을 통해 기억 T세포를 내피세포에 부착시켜 염증부위로의 침윤을 증가시킨다는 사실이 밝혀지고 있다. 이러한 세포 신호전달 과정에 의해 나타나는 아토피 피부염의 증상은 단순히 피부 건조 증세뿐만 아니라 염증성 피부 병변을 동반하는 경우가 대부분이다. 따라서 대개의 피부과 진료 시 피부 표면의 수분을 유지시켜주는 보습제와 함께 염증반응을 호전시키기 위한 스테로이드 호르몬 즉, 국소 부신피질호르몬 제제를 동시에 처방하는 하는 것이 일반적이다. 하지만, 국소 부신피질 호르몬를 장기간 사용하는 경우, 피부 위축, 혈관 확장, 색소 탈실 및 팽창 선조의 발생 등 다양한 피부 부작용을 야기시킨다고 보고되어 있다. 그러므로 이러한 부작용을 나타내지 않으면서, 항염증 효능을 보유하는 아토피 치료용 원료나 제약을 개발하기 위한 다양한 연구가 활발히 진행되고 있다.

아토피성 피부염 증상 완화를 위한 피부 외용 조성물에 대한 선행 기술들을 살펴보면 단일 처방으로서, 아스피린을 적용한 기술(대한민국 특허 출원 번호 10-2002-7008214)이 개발되어 있고, 알카놀아민, 티로신 및 이의 혼합물로 이루어진 그룹으로 선택된 조성물을 염증 개선에 적용한 사례가 있다(대한민국 특허 출원 번호 10-2001-0060816). 또한 닛폰 유시 가부시키가이샤에서 출원한 특허(출원번호 PCT/JP1999/02883)에서는 w-3계 불포화 지방산의 함유량이 w-6계 불포화 지방산의 함유량의 4배 이상인 천연유지와, 포스포릴콜린 유사기 함유 중합체와 항산화제를 함유하는 조성물로서 아토피성 피부염에 적용한 사례가 있다.

최근에는 아토피 환자들 중 상당 수가 병원치료에 따른 부작용의 위험을 피하기 위하여 병원치료보다 천연유래의 다양한 민간요법 등에 의존하는 경향이 늘어나고 있다. 특히 천연유래 치유법이나 제품은 막연히 부작용이 없을 것이란 가정 하에 광범위하게 퍼지고 있으나 그에 대한 과학적 근거가 충분히 제시되지 못하고 있는 실정이다. 특히 상당수의 치료법이 특정 식물이나 여러 종의 식물추출물을 근거로 한 경우가 많은데 이는 식물체 중 상당 수가 항염증 효과를 나타내는 성분이나 면역조절 효과를 나타내는 성분을 갖고 있는데 기인한다. 아토피 피부염이나 건선은 다양한 염증반응과 동시에 면역이상을 수반하기 때문에 면역조절이나 항염증 중 한가지에 뛰어난 물질보다는 면역계를 조절하면서 동시에 항염증 효과가 있는 천연물질이 치료효과를 나타낼 가능성이 매우 들 수 있을 것으로 여겨지고 있다.

따라서 본 발명에서는 이러한 목적으로 두 가지의 대표적인 세포수준의 효능평가 기술을 사용하여 두 가지의 기능을 모두 갖고 있는 물질을 찾아내어 실제로 그러한 물질이 단일효능의 물질보다 더 효과가 좋은지를 평가하여 상업화가 가능한지 알아보고자 하였다. 또한 이러한 물질이 여러 개 찾아질 경우에는 이들 찾아진 물질을 적절히 배합하여 복합물질화 했을 경우 그 효능이 더 배가되는 지를 알아보고자 하였다.

본 발명은 상기 사항을 근거로, 화장품분야에서 오랫동안 사용되어 온 원료들 중 항염증 효과가 있는 원료들을 먼저 선정하였다. 의약이 아닌 화장품 분야에서 오래 동안 사용되어 온 원료에서 그러한 기능의 물질을 찾고자 한 이유는 의약은 강력한 약효를 나타내나 동시에 일정수준의 부작용을 동반하는 것으로 알려져 있기 때문이다. 반면에 화장품원료는 효과가 미미하나 장기사용에 안전하며 부작용이 거의 없다고 알려져 있다. 실제로 화장품에 사용되는 식물추출물은 그 종류수가 의약용보다 많으며 전 세계적으로 다양한 제품에 장기간 사용되었으며, 현재까지 어떠한 제품에서도 특별한 부작용이 발생한 적이 없어 안전성이 확보되었다고 할 수 있다.

따라서 기존에 사용되고 있는 화장품 원료를 대상으로 항염효과가 있는 식물을 1차로 선정한 후 2차로 면역조절효과가 있는 성분을 다시 선정하여 최종 7종의 생약성분을 선정하였다.

최근에는 비슷한 효능을 나타내는 생약성분을 일정비율로 혼합한 혼합제제에 대한 연구가 많이 이뤄지고 있다. 고 순도의 단일성분은 효과가 확실하고 효능에 대한 예측이 가능한 장점이 있으나 부작용 등의 우려가 있다. 복합제제는 순도가 낮고 효과가 미미하나 여러 가지 성분을 섞어서 사용함으로써 효과를 일정수준 높일 수 있으며 특정성분에 의한 부작용을 피할 수 있는 장점이 있다. 이러한 방법은 전통 한방제제나 화장품 등에 많이 사용되는 방법으로, 하나 또는 몇 가지 유효성분으로 이뤄진 의약품과는 달리 여러 가지 성분을 동시에 사용함으로써 부작용은 최소화 하면서 일정수준 이상의 효능을 기대할 수 있는 제품을 만들어낼 수 있다. 이러한 기술적 근거는 오랫동안 이어져온 동양의학에 뿌리를 두고 있으며 최근의 동양의학에 대한 재조명으로 그러한 복합제에 대한 장점이 잘 드러나고 있다. 실제로 성양의학에서는 독으로 규정된 수은 같은 독극물이 약으로 사용되는 경우가 있다. 극약인 수은도 적절한 다른 성분들과 같이 섞이게 되면 일정수준의 약효를 가진 물질이 될 수 있다. 이러한 복합제에 대한 기반가설은 다양한 물질을 복합하여 사용하는 것이 단일물질보다 부작용을 줄일 수 있음을 의미한다 하겠다.

본 발명에서 항염증효과와 동시에 면역조절효능을 갖고 있는 물질을 찾아내어 적정비율로 복합물질로서 신규물질을 만드는데 목적을 두고 있다. 본 발명에서는 이러한 목적을 위하여 7종의 식물 즉, 감초(Glycyrrhiza glabra), 녹차(Camellia sinensis), 로즈마리(Rosemarinus officinalis), 병풀(Centella asiatica), 카모마일(Matricaria recubita), 황금(Scutellaria baicalensis), 호장(Polygonum cuspidatum) 추출물을 선정하였다. 이들 식물로부터 공지의 일반추출방법에 따라 추출하고 효과가 가장 뛰어난 적정비율로 혼합하여 부작용은 거의 없으면서 항염증효과와 면역조절효과를 가진 신규물질인 BSASM을 만들었다. 이러한 신규의 복합물질인 BSASM은 아토피 피부염, 여드름, 건선, 로사시아, 지루성피부염 및 염증이나 면역계 이상에 기인하는 다양한 질환에 사용되어 질 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 염증 억제 효능 뿐만 아니라 면역 조절능을 보유한 7종의 식물추출물들을 함유하는 것을 특징으로 하는, 아토피, 건선, 지루성피부염, 여드름, 로사시아를 비롯한 염증과 면역계 이상을 동반한 피부질환의 증상 개선용 천연물제제 BSASM을 제공한다.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

각각의 성분에 대하여 상세하게 설명하면 다음과 같다.

항염증 및 면역 조절 효능을 보유하는 감초 추출물(Glycyrrhiza glabra), 녹차 추출물(Camellia sinensis), 로즈마리 추출물(Rosemarinus officinalis), 병풀 추출물(Centella asiatica), 카모마일 추출물(Matricaria recubita), 황금 추출물(Scutellaria baicalensis), 호장 추출물(Polygonum cuspidatum)이 선택되는 것이 바람직하다.

경구투여나 식용을 목적으로 한 경우는 호장대신에 포도추출물, 땅콩 또는 홍화추출물 등이 사용가능하다. 이 경우 주 성분이 레즈베라트롤(resveratrol) 이기 때문에 레즈베라트롤을 함유한 식용, 또는 의약용으로 허가된 식물이면 대체하 여 사용이 가능하다. 또한 병풀 대신에는 영지 추출물이 사용 가능하다.

[실시 예 1] 본 발명에서 선별된 7종의 식물추출물의 제법

본 발명의 스크리닝 단계에서 사용된 모든 식물을 일반적으로 공지된 추출방법에 따라 추출하였으며 1, 2 단계의 스크리닝에서 얻어진 7가지 식물에 대한 추출방법을 정리하면 다음과 같다. 모든 추출물은 최종 용매추출 후 다시 농축 정제과정을 거쳐 건조분말을 얻는다.

병풀(Centella Asiatica)의 잎 또는 뿌리 1kg을 마쇄기로 세절하고, 70% 에탄올 100kg을 넣어 환류 장치가 부착된 장치를 이용해 100도씨에서 4시간 가열 추출한다. 추출한 액을 여과 보조제를 사용하여 여과한 후, 냉소에 7-10일간 방치하여 숙성시키고 나서 침전물을 여과한 다음 70% 에탄올을 추가로 넣어 100kg 제품을 얻는다.

국화과 식물인 카모마일(Matricaria recubita) 1kg을 마쇄기로 세절하고 정제수 100kg을 넣어 100도씨에서 4시간 가열 추출한다. 추출한 여액을 여과 보조제를 사용하여 여과한 다음, 여액을 냉소에 7-10일간 방치하여 숙성시킨 후, 침전물을 여과하여 정제수를 다시 가하여 최종 제품 100kg을 얻는다.

마디풀과 식물인 호장(Polygonum cuspidatum) 1kg을 마쇄기로 세절하고 10% 에탄올 100kg을 넣어 100도씨에서 4시간 가열 추출한다.추출한 액을 여과 보조제를 사용하여 여과한 다음, 10% 에탄올을 추가로 넣어 100kg을 얻는다.

녹차(Camellia sinensis) 또는 그 밖의 동속 식물의 잎 1kg을 세절하고 여기에 10% 에탄올 100kg을 넣어 100도씨에서 4시간 가열 추출하여 여과한 후,여액을 냉소에 7-10일간 방치하여 숙성시킨 다음 침전물을 여과하여 10% 에탄올을 가하여 최종 제품 100kg을 얻는다.

감초(Glycyrrhiza glabra) 또는 그 밖의 동속 식물 1kg을 세절하고 여기에 정제수 100kg을 넣어 100도씨에서 1시간 가열 추출한 다음 여과하여 여액을 냉소에 7-10일간 방치하여 숙성시킨다. 숙성된 여액의 침전물을 여과한 다음 정제수를 추가로 가하여 최종 100kg을 얻는다.

로즈마리 (Rosemarinus officinalis)의 줄기 및 뿌리를 건조하여 세절하고 에탄올을 시료의 10배 부피로 첨가하여 상온에서 24시간 추출한 후 여과하여 그 여과액을 감압 농축기로 농축한 후, 분말화한다.

황금(Scutellaria baicalensis) 1kg을 마쇄기로 세절하고 10% 에탄올 100kg을 넣어 100도씨에서 4시간 가열 추출한다.추출한 액을 여과 보조제를 사용하여 여과한 다음, 10% 에탄올을 추가로 넣어 100kg을 얻는다.

[실시 예 2] 항염증효능 평가

항염증 효과를 가지고 있다고 보고된 100여종의 식물추출물로부터 인간단핵구 세포인 THP-1 세포에서의 통상의 방법에 따라 COX-2 활성억제능 실험을 통해 20종의 식물추출물을 선별하였다. COX-2 활성 억제능이 20% 이상일 경우 효능이 있는 것으로 간주하였다. 최종 선별된 20종의 식물추출물이 면역관련 반응을 억제하는지의 여부를, NF-kB 루시퍼라아제 리포터 활성실험을 통해 다시 조사하였다. NF-kB 프로모터 는 면역관련 시토카인의 생산에 중요한 역할을 한다고 보고되어 있다. NF-kB 루시퍼라아제 활성을 측정하기 위해서 다음과 같은 방법을 사용하였다. 인간단핵구세포인 THP-1 세포를 6 well에 각각 1x10⁶개의 세포를 분주한 후, 수퍼펙트 트란스펙션 리에전트(superfect transfection reagent)를 이용하여 NF-kB 루시퍼라아제 리포터 프라스미드 DNA (NF-kB luciferase reporter plasmid DNA)를 형질감염(transfection)시켰다. 형질감염 후 24시간이 경과한 후, 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; LPS) (100ng/ml)를 처리하여 THP-1 세포를 활성화시킴과 동시에 각각의 추출물을 1% 농도로 처리하였다. 24시간 후 세포를 수집하여 루미노미터(luminometer)를 이용하여 루시퍼라아제 활성을 측정하였다. 결과를 정리하면 다음과 같다 (표 1).

표 1의 결과에 따르면, COX-2 억제효능은 20종의 식물추출물 모두에 존재하지만, NF-kB 루시퍼라아제 억제능은 감초 추출물(Glycyrrhiza glabra), 녹차 추출물(Camellia sinensis), 로즈마리 추출물(Rosemarinus officinalis), 병풀 추출물(Centella asiatica), 카모마일 추출물(Matricaria recubita), 황금 추출물(Scutellaria baicalensis), 호장 추출물(Polygonum cuspidatum) 등 7종의 추출물에서만 뚜렷하게 나타난 반면 포도를 제외한 다른 종류의 추출물들은 억제효능이 없거나 매우 약한 것으로 나타났다. 포도에서 분리된 레즈베라트롤은 호장에서 추출된 레즈베라트롤과 마찬가지로 좋은 효과를 나타냈으나 호장보다는 약하게 나타났다. 따라서 필요한 경우 호장 대신에 포도추추물을 대체하여 사용할 수 있다.

(표 1) 항염증효과 및 면역조절능에 대한 스크리닝 결과요약

추출종류	COX-2 억제능	NF-kB 프로모터 억제능
감초 Glycyrrhiza glabra	○	+++
녹차 Camellia sinensis	○	+++
로즈마리 Rosemarinus officinalis	○	+++
병풀 Centella asiatica	○	+++
카모마일 Matricaria recubita	○	+++
황금 Sutellaria baicalensis	○	+++
호장 Polygonum cuspidatum	○	+++
포도 Vitis Vinifera 상산 Orixa japonica	○ ○	++ -
쉬나무 Evodia daniellii	○	+
영지 Ganodema tsugae	○	++
오수유 Evodia officinalis	○	-
유자나무 Citrus junos	○	-
유피 Citrus grandis	○	-
오가피 Acanthopanax gracilistylus	○	+
천초 Zanthoxylum bungeanum	○	+
초피나무 Zanthoxylum piperitum	○	+
측백나무 Thuja orientalis	○	-
탱자나무 Poncirus trifoliata	○	-
황벽나무 Phellodendron amurense	○	-

○ : COX-2 억제능 보유, -:NF-kB 프로모터 억제능 없음, +: 1～10% 억제능,

++: 11～20% 억제능, +++: 20～30% 억제능,

[실시 예 3] BSASM의 조성비

COX-2 억제능과 NF-kB 프로모터 억제능실험을 통해 선별된 7종의 식물추출물 즉 감 초 추출물(Glycyrrhiza glabra), 녹차 추출물(Camellia sinensis), 로즈마리 추출물(Rosemarinus officinalis), 병풀 추출물(Centella asiatica), 카모마일 추출물(Matricaria recubita), 황금 추출물(Scutellaria baicalensis), 호장 추출물(Polygonum cuspidatum) 등을 각각 동일한 성분비율로 혼합하여 천연물제제 BSASM을 완성시켰다. 성분비는 각 식물추출물 1%, 5%, 10%, 15%, 20% 까지 조합화 하여 총 종의 성분 조합비를 만들었다. 각 성분 조합비에 대하여 다양한 조사를 실시한 결과 몇 개의 조합에서 뛰어난 효과를 나타냈다.

또한 가장 뛰어난 효과를 나타낸 성분비를 설정하여 유효성분을 분석한 결과는 표 2에 요약하였다. 로즈마리에는 카노식산(carnosic acid), 로즈마리산(rosemarinic acid), 아피제닌(apigenin) 등과 그 유도체들이 포함되어 있었으며 이 중 카노식산만을 분석한 결과 0.2%에서 가장 좋은 효과를 나타냈다. 카모마일은 아피제닌과 비사보롤이 주 성분으로 함유되어 있었으며 아피제닌으로 0.2%에서 가장 좋은 효과를 나타냈다. 녹차추출물은 카테킨류가 주요성분이었으며 그 중 EGCG로서 약 0.2% 였을 때 가장 좋은 효과를 나타내었다. 감초의 경우는 여러 가지 성분이 많이 들어 있는데 감초산으로 0.3% 정도가 가장 좋은 효과를 나타내었다. 호장과 포도에서는 레즈베라트롤이 0.01%의 낮은 농도에서 좋은 효과를 나타냈다. 황금에서는 바이칼린(baicalin)이 0.2% 정도에서 좋은 효과를 나타냈으며 병품에서는 아시아티코사이드(asiaticoside)가 0.3% 일 때 가장 좋은 효과를 나타내었다. 상기에 언급된 성분명은 단지 주요성분에 국한하여 표기한 것이며 실제로 추출물을 사용했기 때문에 표기하지 않은 다른 유효성분의 역할에 의하여 효과가 나타났을 수도 있다. 그러므 로 식물 및 성분은 여기에 언급된 것에 한정되지는 않는다. 즉 레즈베라트롤 같은 경우는 땅콩, 작약, 홍화, 포도 등 여러 식물에 존재하므로 성분함량이 비슷하다면 언급된 외의 식물에서 유래한 추출물도 역시 사용이 가능하다.

(표 2) BSASM을 구성하는 식물추출물의 최적 구성비율

월료명	감초추출물	녹차추출물	로즈마리추출물	병풀 (또는 영지)추출물	카모마일추출물	황금추출물	호장(또는 포도)추출물	정제수 또는 용매
주성분	감초산	EGCG	카노식산	아시아티코사이드	아피제닌	바이칼린	레즈베라트롤
함량 (%)	0.3	0.2	0.2	0.3	0.2	0.2	0.01	to 100

국내에서는 병풀과 호장을 식품용으로 인정하고 있지 않기 때문에 식품용으로 사용하고자 할 경우 병풀 대신에 효능은 약간 떨어지나 영지를 호장 대신에 포도를 대체하여 사용할 수 있다.

(표 3) BSASM을 구성하는 식물추출물 종류; 화장품, 식품용 또는 의약용 성분 비

원료명		추출물 및 농도
화장품, 식품, 의약용	BSASM	감초 추출물	녹차 추출물	로즈마리 추출물	병풀 추출물	카모마일 추출물	황금 추출물	호장추출물
	함량 (%)	1-20	1-20	1-20	1-20	1-20	1-20	1-20
화장품, 식품, 의약용	BSASM-G	감초 추출물	녹차 추출물	로즈마리 추출물	영지 추출물	카모마일 추출물	황금 추출물	포도추출물
	함량 (%)	1-20	1-20	1-20	1-20	1-20	1-20	1-20

[실시 예 4]

실시 예 3에서 얻어진 7종의 식물추출물로 이루어진 천연물제제 BSASM의 면역관련 활성을NF-kB 루시퍼라아제 실험을 이용하여 관찰하였다. 또한, 동일농도로 BSASM을 처리했을 경우와 각각의 식물추출물을 단독으로 처리했을 경우에 대한 비교실험을 수행하였다. 결과는 정리하면 다음과 같다 (도 1).

(도 1) BSASM에 의한 NF-kB 활성화 억제

도 1에서 제시된 것과 같이, BSASM은 농도 의존적으로 NF-kB 루시퍼라아제 활성을 억제하는 것을 볼 수 있다. 뿐만 아니라, 7종의 식물추출물 각각을 1% 농도로 처리 하였을 경우와 BSASM을 1%농도로 처리하였을 경우를 비교해 본 결과, BASM이 동일농도에서 높은 억제능을 보였다. 이러한 결과는 BSASM을 구성하는 추출물들 간의 상승작용에 의한 것임을 알 수 있다.

[실시 예 5]

실시 예 4에서 항염증 효능이 입증된 BSASM에 대하여 면역조절능을 살펴보기 위하여 몇 가지 관련 사이토카인에 대하여 전사수준 (transcriptional level)에서의 작용을 살펴본 것이다. 실질적으로 염증 및 면역과정에 작용하는 시토카인인 인터루킨-8과 TNF-alpha 생산에 미치는 BSASM의 효과를 살펴보았다. 인간단핵세포인 THP-1 세포를 LPS (lipopolysaccharide)로 활성화시킨 후, BSASM을 농도별로 처리해서 인터루킨-8과 TNF-alpha의 양을 측정하였다 (도2, 도3).

(도 2) BSASM에 의한 인터루킨-8 생산의 감소

(도 3) BSASM에 의한 TNF-alpha 생산의 감소

도 2와 도 3에서 제시된 것과 같이, LPS에의해 유도된 인터루킨-8과 TNF-alpha 생산이 BSASM에 의해 농도 의존적으로 억제되는 것을 관찰할 수 있다. BSASM 1%와 1.5%사이의 농도가 IC₅₀임을 나타내고 있다. 이러한 결과는 BSASM이 염증 및 면역작용에 관여하는 시토카인의 생산억제를 통해 효능을 보임을 제시한다.

[실시 예 6]

본 발명인 BSASM이 T 임파구 매개 면역반응 즉 T임파구의 증식과 분화에 관여하는지의 여부를 탐색하였다. 일반적으로 T임파구 수용체의 활성화에 의해 인터루킨-2생산이 증가되어 T임파구의 증식과 분화가 발생한다고 보고되어 있다. 이를 근거로 해서 BSASM이 Jurkat T 세포에서의 인터루킨-2 생산에 관여하는 지의 여부를 인터루킨-2 루시퍼라아제 실험 (interleukin-2 luciferase reporter assay)을 통해 관찰하였다 (도4).

(도 4) BSASM에 의한 인터루킨-2 발현의 억제

도4의 결과는 PHA (phytohemagglutinin)에 의해 증가된 인터루킨-2 활성이 억제되고 있음을 보여주고 있다. PHA에 의해 인터루킨-2 리포터 활성이 10배이상 증가하였으나, BSASM이 0.5%농도에서 인터루킨-2 리포터 활성이 50%이하로 현저히 감소되는 현상이 나타나고 있다. 이러한 결과는 BSASM이 T임파구 매개 면역반응 (T cell-mediated immune response)을 억제하는 효과를 가지고 있음을 제시한다. 양성대조구로는 아토피 증상 완화제로 잘 알려진 사이클로스포린 A(Cyclosporin A)를 사용하였다.

[실시 예 7]

아토피성 피부염 완화 효과 및 안전성을 테스트하기 위해서 공개 단독 임상연구를 수행하였다. 연구 대상자로는 경증 또는 중등도의 아토피성 피부염을 가진 만 6세이상 15세 미만의 소아환자 30명을 대상으로 하였다. 전향적, 개방법(prospective open study)으로 아토피 피부염 환자에서 BSASM을 제공하여 임상을 실시하였고, 심 한 소양증시 제공한 항히스타민제 이외에 개인적으로 국소 혹은 전신 스테로이드 제제의 도포나 복용은 금지 하였다. BSASM의 아토피 피부염 증상개선에 대한 효과, 아토피성 피부염의 증상중 하나인 가려움에 미치는 효과, BSASM을 피부에 도포했을 때 발생하는 부작용의 여부 등을 살펴 보았다. EASI score 그리고 가려움증에 대한 점수를 치료전, 치료 2, 4주에 Kruskall-Wallis one-way ANOVA법을 기본 통계법으로 적용하여 비교 평가하였다. 치료 후 호전과 차이에 대한 통계적 검증후 유효편차로 p값이 0.05이하면 유의하다고 판단하였다.

본 발명인 BSASM이 아토피성 피부염에 미치는 임상적 평가를 하기 위해 다음과 같은 방법을 사용하였다. BSASM을 도포하기 전, 도포후 2주, 도포후 4주 경과한 시정에서의 아토피피부염의 증상과 정도를 객관적으로 평가하기 위하여 다음과 같이 EASI(Eczema Area Severity Index)를 이용하여 판정하였다.

몸부위 EASI Score

Head/Neck (H) (E + I + Ex + L) x area x 0.1

Upper Limbs (UL) (E + I + Ex + L) x area x 0.2

Trunk (T) (E + I + Ex + L) x area x 0.3

Lower Limbs (LL) (E + I + Ex + L) x area x 0.4

EASI Sum of the above 4 body region scores

*E=Erythema, I=induration/papulation, Ex=excoriation, L=lichenificatin

(0=none, 1=mild, 2=modreate, 3=severe)

* Area: 0=no eruption, 1=<10%, 2=<10-29%, 3=<30-49%, 4=<50-69%

5=<70-89%, 6=>90-100%,

결과는 정리하면 다음과 같다 (도5).

(도 5) 치료기간에 따른 BSASM의 아토피성 피부염 증상 완화 효과

도 5에서 제시된 것과 같이 BSASM을 도포한 후 시간이 경과함에 따라 EASI score (평균EASI+표준편차)가 통계학적으로 유의성있게 감소하였다 (p<0.001). 따라서 이러한 결과는 BSASM에 의해 아토피의 임상적인 증상이 개선되고 있음을 의미한다. 특히 4주라는 짧은 시간 내에 아토피 증상이 완화되어 단기 사용으로도 좋은 효과를 나타낼 수 있음을 의미한다.

[실시 예 8]

아토피성 피부염의 하나인 가려움증(Pruritus)에 미치는 BSASM의 효과를 조사하였 다. 가려움증 평가는 visual analog scale (가려움증 수치)방법으로 이루어졌고, 가려움이 증가할수록 수치가 높아진다. 실험결과는 다음과 같다 (도 6).

(도 6) 가려움에 미치는 BSASM의 효과

BSASM을 도포한 후, 시간이 경과함에 따라 평균가려움증 수치가 통계학적으로 유의성있게 감소되고 있음을 볼 수 있다 (p<0.022). 따라서 BSASM이 가려움에 대한 억제효과를 보유하고 있음을 제시한다.

상기에서 BSASM이 아토피성 피부염 증상을 개선시키는 효과를 관찰할 수 있었다. 하지만 BSASM을 정상 피부에 도포하였을 경우 발생할 수도 있는 부작용을 조사하기 위해 첩포시험(patch test)을 수행하였다. 10명의 환자를 대상으로 환자의 정상피부(등 혹은 전박부)에 Finn Chamber (직경 5mm)를 사용하여 첩포 시험을 시행하였다. Finn Chamber에 BSASM을 소량 넣은 뒤 피부에 Scanpor tape를 사용하여 붙였다. 첩포를 붙이고 이틀간 붙여 둔 후 첩포를 제거하고 30분 후 첩포부위의 피부상태를 판독하였다. 이틀 후 동일부위를 다시 한번 판독하였다. 판독기준은 다음과 같은 국제 접촉피부염 연구위원회가 추천한 첩포시험 결과의 판독기준을 이용하였 다. 환자들이 첩포시험 3일 전부터 판독이 완료될 때까지(총 1주일) 일체의 항히스타민제의 복용을 금지하였다. 10명의 환자(1명당 2개의 첩포)에서 실시한 첩포시험을 판독하여 시험환자의 몇 %에서 IR 반응(자극반응)이 발생하는지 혹은 몇 %에서 알레르기성 반응이 생기는지를 확인하였다.

국제 접촉피부염 연구위원회가 추천한 첩포시험 결과의 판독기준

?+ 의양성

+ 약양성(비수포성)

++ 강양성(수포성)

+++ 초강양성

IR 자극성

대상 환자 10명에서 첩포 시험을 실시하여 이틀째와 나흘째의 반응을 관찰한 결과, 모든 대상 환자에서 어떠한 이상 반응도 관찰되지않았다. 즉 홍반, 따가움 등의 자극증상, 소양감 등이 관찰되지 않아 BSASM을 피부에 도포할 경우, 부작용이 없음을 확인하였다

[실시 예 9]

본 발명을 통해 구현된 BSASM을 사용한 아토피성 피부염 환자의 증상 개선 결과를 보여주는 그림이다. 4주 간 사용 후 증상이 현저히 개선되었음을 볼 수 있다.

(a) (b)

[도 7] 중증 아토피 환자에 대한 효능평가

a) 도포하기 전의 피부 상태, b) 4주일 간 도포했을 때 개선된 피부 상태

[실시 예 10]

BSASM이 3% 함유된 일반적으로 화장품에 사용되는 리포좀 제형으로 여드름 치료를 위한 로션을 만들어 3개월 간 도포한 결과 30명을 대상으로 한 임상에서 모두에게서 염증완화 효과가 나타났다. 그 중 한 예를 제시하면 다음과 같다.

(a) (b)

[도 8] 여드름 환자에 대한 효능평가

a) 도포하기 전의 피부 상태, b) 3개월 간 도포한 후

[실시 예 11]

BSASM이 5% 함유된 일반적으로 화장품에 사용되는 리포좀 제형으로 건선 치료를 위한 로션을 만들어 3개월 간 도포한 결과 30명을 대상으로 한 임상에서 모두에게서 염증완화 효과가 나타났다. 그 중 한 예를 제시하면 다음과 같다.

(a) (b)

[도 9] 건선피부염 환자에 대한 효능평가

a) 도포하기 전의 피부 상태, b) 3개월 간 도포한 후

[실시 예 12]

BSASM이 3% 함유된 일반적으로 화장품에 사용되는 리포좀 제형으로 지루성 피부염 치료를 위한 로션을 만들어 3개월 간 도포한 결과 30명을 대상으로 한 임상에서 모두에게서 염증완화 효과가 나타났다. 그 중 한 예를 제시하면 다음과 같다.

a) (b)

[도 10] 지루성 피부염 환자에 대한 효능평가

a) 도포하기 전의 피부 상태, b) 3개월 간 도포한 후

[실시 예 13]

BSASM이 3% 함유된 일반적으로 화장품에 사용되는 리포좀 제형으로 로사시아 치료를 위한 로션을 만들어 3개월 간 도포한 결과 30명을 대상으로 한 임상에서 모두에게서 염증완화 효과가 나타났다. 그 중 한 예를 제시하면 다음과 같다.

(a) (b)

[도 11] 로사시아 피부염 환자에 대한 효능평가

a) 도포하기 전의 피부 상태, b) 3개월 간 도포한 후

Claims (7)

1. 염증 및 면역 관련 피부질환의 증상을 완화시키기 위한 복합 천연물 제제 BSASM
2. 복합 천연물 제제 BSASM을 주요 성분 또는 첨가물로 하는 의약품, 화장품, 식품인 경우
3. 제 1항에서 염증 및 면역 관련 피부질환이 아토피피부염, 여드름, 지루성 피부염, 건선, 로사시아인 경우
4. 제 1항에서 BSASM이 로즈마리, 녹차, 호장 또는 포도, 카모마일, 황금, 감초, 병풀또는 영지로 이뤄진 경우
5. 제 4항에서 사용된 각 식물추출물의 농도가 1중량%에서 20중량% 사이인 경우
6. 제 4항에서 사용된 각 식물성분, 카노식산, 아피제닌, EGCG, 레즈베라트롤, 바이칼린, 아시아티코사이드, 감초산 등 단일물질로서 각 0.001중량%에서 20중량% 까지 인 경우
7. 제 2항에 있어서, BSASM은 0.001~ 50중량% 함유함을 특징으로 하는 경우