KR20050104383A

KR20050104383A - 폐 고혈압의 치료를 위한 에스트라디올 대사물

Info

Publication number: KR20050104383A
Application number: KR1020057015397A
Authority: KR
Inventors: 스테반 피 토포빅; 에드윈 케이 잭슨
Original assignee: 유니버시티 오브 피츠버그
Priority date: 2003-02-20
Filing date: 2004-02-20
Publication date: 2005-11-02
Also published as: EP1610798A2; US20040209855A1; US7192941B2; BRPI0407667A; AU2004213007A1; CN100406015C; WO2004073643A2; CN1764461A; EP1610798A4; CA2516452A1; WO2004073643A3; JP2006518393A

Abstract

폐 고혈압 및 이와 관련된 다른 질환들이 치료방법이 제공된다. 특히, 상기 방법은 에스트라디올 대사물 또는 생분해성 마이크로입자 또는 나노 입자와 결합된 에스트라디올 대사물을 단독으로 또는 다른 치료제와 병용한 폐 고혈압의 치료를 포함한다. 바람직한 에스트라디올 대사물은 2-메톡시에스트라디올, 4-메톡시에스트라디올, 2-히드록시에스트라디올 및 4-히드록시에스트라디올 및/또는 이들의 합성 유도체 및 유사체 또는 이들의 프로드럭을 포함한다. 조성물은 방출 제어 제제 일 수 있다.

Description

폐 고혈압의 치료를 위한 에스트라디올 대사물{ESTRADIOL METABOLITES FOR THE TREATMENT OF PULMONARY HYPERTENSION}

관련 출원들

본 출원은 2003년 2월 20일에 출원된 미합중국 가출원 제60/448,118호로부터 우선권을 주장한다.

기술분야

본 발명은 폐 고혈압과 심부전 및 폐 및 심장의 기능장애를 포함한 이의 후유증을 에스트라디올 대사물을 이용하여 치료하는 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 본 발명은 2-히드록시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올, 2-메톡히에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올과 같이 에스트로겐 활성이 거의 없는 에스트라디올 대사물의 이용에 관한 것으로서 이들 모두는 폐 고혈압 및 관련 질환의 치료를 위하여 방출 제어 제제로 송달될 수 있다.

폐 고혈압(PH)는 폐에서의 혈압 상승을 특징으로 하는 복합적인 건강상 문제이다. 폐 고혈압을 갖는 개체에서, 폐 동맥의 혈압은 휴식시 약 14mmHg의 정상 수준 훨씬 이상으로 증가된다. 폐 고혈압 환자에서 발견되는 전형적인 수준은 휴식시 25mmHg에서 활동시 30mmHg 또는 그 이상까지이다. 이러한 증가된 혈압은 폐에서 소혈관의 변화와 관련이 있으며, 이는 이러한 혈관을 통한 혈류의 증가된 저항성을 야기한다. 이러한 증가된 저항성은 이번에는 심장의 우심실에 부담을 주어서 우심실은 폐를 통하여 적절한 양의 혈액을 이동하게 하기 위하여 보통보다 더 힘들게 일해야 한다.

시간이 지나면서, 폐에서 혈관의 반흔(scarring) 또는 섬유화는 이러한 혈관을 혈류에 보다 저항적이게 하고 일부는 완전히 막힐 수도 있다. 추가로, 혈관 내 반흔 및 폐에서 염증의 존재는 이들의 전체적인 무게를 증가시킨다. 반흔 조직의 계속적인 증가 및 혈관의 과잉 저항성은 심장이 제대로 기능하지 못하는 혈관을 통하여 혈액을 이동시키기 위하여 훨씬 힘들게 펌프 작용하게 한다. 결국, 심장은 그러한 요구를 맞추기 위하여 확장될 것이고 크기의 증가는 수축력 및 효율성의 감소와 관련되어 궁극적으로 심부전을 유도할 수 있다. 불행하게도 이 시점에서야 비로소 폐 고혈압을 갖는 대부분의 개체가 진단받고 치료를 시작한다.

폐 고혈압에는 치료법이 없다. 다수의 치료 선택이 존재하고, 응혈 형성을 방지하는 항응고제와 폐 동맥에서 수축을 이완시키는 칼슘 채널 차단제와 같이 혈류를 증가시키는 약제를 포함한다. 추가로, 수축된 혈관은 프로스타사이클린 또는 프로스타사이클린 유사체를 유치 도관(indwelling catheter)를 통하여 계속적으로 정맥 또는 피하 점적 주입함으로써 이완될 수 있다. 다른 치료법은 폐 동맥압을 감소시키는 엔도텔린(endothelin) 길항제, 전신 체액 축적을 감소시키는 이뇨제, 심박출 효율을 증가시키는 디곡신, 및 혈액에 산소 공급을 증가시키는 보충 산소의 투여를 포함한다. 폐 고혈압 환자는 임의의 지정 시간에 하나 또는 조합된 치료를 받을 수 있다.

불행하게도, 많은 환자들은 이들 치료법에 잘 반응하지 않거나 시간이 경과하면서 반응하지 않게 된다. 이 시기에 유일하게 남은 선택은 폐 이식이다. 장기 공유를 위한 연합 네트워크(United network for Organ Sharing(UNOS))에 따르면, 폐이식을 받은 모든 환자의 환자 생존율은 1987년 및 1992년 사이에 이식받은 환자에서 1개월에 85%, 1년에 69% 및 3년에 51%이다. 이들 연도 이래 결과는 약간 더 좋다. 폐 고혈압 환자의 또 다른 장애물은 심부전으로 인하여 심장 및 폐 이식 양자가 필요한 점일 수 있다. 이러한 위험하고 매우 비용이 많이 소모되는 최후 수단에 대한 대안으로서 모든 연령 및 성별의 환자들을 도울 수 있는 효과적인 치료법이 필요하다.

본원 발명은 본원에서 사용된 에스트라디올 대사물이 거의 부작용이 없기 때문에 특히 유용하다. 또한, 에스트라디올 대사물은 지속 방출을 위한 약제학적 약제으로 투여될 수 있고, 이는 폐 고혈압 및 관련 질환의 치료를 위한 치료제로서 조성물의 폭넓은 사용을 제공할 개선된 것일 수 있다.

본원에서 문헌의 인용은 어느 것도 관련 선행 기술을 자인하는 것으로 의도된 것이 아니다. 이들 문헌의 내용과 관련하여 날짜 또는 표현에 대한 모든 진술은 출원인이 이용할 수 있었던 정보의 주관적인 특징 부여에 기초하고, 이들 문헌의 날짜 또는 내용의 정확성에 대하여 어떠한 자인을 나타내는 것은 아니다.

하기 도는 본원 명세서의 일부를 형성하고 특정 구체예를 더욱 설명하기 위하여 포함된다. 이러한 구체예들은 본원에서 제시된 특정 구체예의 상세한 설명과 조합하여 하나 이상의 이들 도면을 참조함으로써 보다 잘 이해될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따라서 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7)에, 폐 무게(좌측 패널)("폐") 및 체중에 대한 폐무게의 비율(우측 패널)("폐/체중")에 미치는 영향을 나타낸다. 좌측 Y-축은 그램(g) 단위이고 우측 Y-축은 체중 kg 당 그램(g)의 단위이다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(별표)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 2는 본 발명에 따른 심장 무게(좌측 패널)("심장") 및 체중에 대한 심장 무게의 비율(우측 패널("심장/체중")에 대한 치료의 영향을 나타낸다. 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7)로 동물을 치료하였다. 좌측 Y-축은 그램(g) 단위이고 우측 Y-축은 체중 kg 당 그램(g)의 단위이다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(별표)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 3은 본 발명에 따라서 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7)에, 우심실 무게(좌측 패널)("우심실") 및 체중에 대한 우심실 무게의 비율(우측 패널)("우심실/체중")에 미치는 영향을 나타낸다. 좌측 Y-축은 그램(g) 단위이고 우측 Y-축은 체중 kg 당 그램(g)의 단위이다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(별표)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 4는 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7), 우심실의 무게를 좌심실과 중격(septum)을 합한 무게로 나누어서 얻은 비율에 미치는 영향을 나타낸다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(별표)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 5는 본 발명에 따라서 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7), 중심 정맥압("CVP")에 미치는 영향을 나타낸다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(별표)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 6A 내지 6C는 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7), 폐(도 1A), 우심실(도 6B) 및 폐 동맥(도 6C)에서의 세포 증식(PCNA 염색)에 미치는 영향을 나타낸다. 표지(labeling)는 양성 염색된 전체 검사 영역의 비율을 나타낸다("표지 지수"). 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(문자들)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 7A 내지 7B는 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7), 폐(도 7A) 및 폐 동맥(도 7B)에서 염증 세포(ED1+ 세포)("ED1+ 세포의 수")에 미치는 영향을 나타낸다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(문자들)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 8은 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7), 폐에서의 혈관 내피 성장 인자("VEGF") 발현에 미치는 영향을 나타낸다. 양성 영역의 염색 강도는 평균 광학 밀도(좌측 y-축)("평균 광학 밀도")로 평가하였고; 평균 광학 밀도로 조정된 전체 염색은 퀵 스코어(quick score)(우측 y-축)("퀵 스코어")로 평가하였다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(문자들)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

도 9는 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 생리식염수(1ml/kg)를 피하투여한 경우("대조군")(n=6), 담체(vehicle)(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)와 함께 모노크로탈린(60mg/kg)을 피하투여한 경우("MCT")(n=7), 2-히드록시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2HE")(n=7) 및 2-메톡시에스트라디올(10μg/kg/hr)을 모노크로탈린(60mg/kg)와 함께 피하주사한 경우("MCT+2ME")(n=7), 작은 크기의 폐 동맥에서 액틴 염색에 의하여 평가된 벽 두께("벽 두께") 마이크론(micron)에 미치는 영향을 나타낸다. 자료는 일원 분산분석(1F-ANOVA)으로 분석하여 각 군의 평균 간의 전체적인 차이를 얻었다. 사후 비교(문자들)는 피셔의 최소 유의차 검정으로 행하였다.

발명의 상세한 설명

1. 정의

용어 "생분해성"은 특정 치료 상황에서 받아들일 수 있는 기간 내에 생체 내에서 용해 또는 분해되는 고분자를 말한다. 이러한 기간은 생리적 pH 및 온도, 예컨대 6 내지 9의 pH 및 25℃ 내지 40℃의 온도에 노출된 후 일반적으로 5년 미만, 대개는 1년 미만이다.

"폐 고혈압" 또는 "PH"는 폐 고혈압과 관련된 임의의 하나 또는 모든 증상을 말한다. PH의 진단적 범주는 폐동맥 고혈압, 1차성 폐 고혈압, 다른 원인과 관련된 폐 동맥 고혈압, 호흡기계 질환과 관련된 폐 고혈압, 만성 혈전성 또는 색전성 질환으로 인한 폐 고혈압, 폐 혈관에 직접적으로 영향을 미치는 질환으로 인한 폐 고혈압, 콜라겐 혈관 질병들과 관련된 폐 동맥 고혈압, 만성 HIV 감염과 연관된 폐 고혈압, 약물 또는 독소와 연관된 폐 고혈압 및 폐 정맥 고혈압을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 추가로, PH 환자는 중심 정맥압의 증가로 인하여 현재 심부전을 앓고 있거나 심부전의 위험이 있을 수 있다. PH로 불리는 질환의 많은 징후들로 인하여, 본 발명은 상기 질환들 중 임의의 것 또는 모두를 지칭하기 위하여 "폐 고혈압" 또는 "PH"라는 용어를 사용할 것이다.

용어 "에스트라디올"은 17β-에스트라디올을 말한다.

용어 "에스트라디올 대사물(들)"은 에스트로겐 활성이 거의 없고 에스트로겐 수용체에 대하여 낮은 친화도를 갖는 카테콜에스트라디올 및 메톡시에스트라디올과 같은 17β-에스트라디올의 대사물 및/또는 이들의 합성 유도체 및 유사체를 말하며, 이들의 예는 2-메톡시에스트라디올, 4-메톡시에스트라디올, 2-히드록시에스트라디올 및 4-히드록시에스트라디올을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

"개체"는 어느 한쪽 성별의 동물 또는 인간을 말한다.

용어 "프로드럭"은 에스트라디올 대사물을 방출하는 화합물을 말한다.

본 발명에 따르면, 분리된 또는 생물학적으로 순수한 에스트라디올 대사물은 그것의 자연적 환경으로부터 제거되어진 화합물이다. 그 자체로, "분리된" 및 "생물학적으로 순수한"은 반드시 그 화합물이 정제되어진 정도를 반영하는 것은 아니다. 본 발명의 분리된 화합물은 그것의 자연적 공급원으로부터 얻거나, 분자 생물학 기법을 사용하여 제조되거나 화학적 합성에 의하여 제조될 수 있다.

II . 방법들

본 발명은 PH 및 심부전과 폐 및 심장 기능장애와 같은 관련 질환의 치료를 위하여 에스트라디올 대사물을 사용하는 방법을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 PH를 가진 개체에서 중심 정맥 및/또는 동맥의 압력을 낮출 뿐만 아니라, 심장 무게, 폐 무게, 우심실 비대, 혈관 저항, 혈관 섬유화를 감소시키고 그러한 개체의 폐, 심장 및 폐 동맥에서의 염증, 세포 증식, 혈관 리모델링 및 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 발현을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 그러한 질환의 치료를 위하여 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 방법을 제공한다.

본 발명의 방법들을 실시하기 위하여 사용되는 에스트라디올 대사물은 에스트로겐 활성이 거의 없고 에스트로겐 수용체에 대하여 낮은 친화도를 갖는 카테콜에스트라디올 및 메톡시에스트라디올과 같은 17β-에스트라디올의 대사물을 포함하고, 이들의 예는 2-메톡시에스트라디올, 4-메톡시에스트라디올, 2-히드록시에스트라디올 및 4-히드록시에스트라디올 뿐만 아니라 이들의 합성 유도체 및 유사체를 포함하는 다른 것들을 포함한다. 이러한 에스트라디올 대사체는 방출 제어 제제에 편입될 수 있고 또한 다른 치료제와 결합될 수 있다. 이러한 에스트라디올 대사체는 또한 프로드럭으로부터 방출될 수 있다.

방출 제어 제제에 사용될 수 있는 생분해성 마이크로입자 또는 나노입자는 폴리(락티드), 폴리(글리콜리드), 폴리(락티드-코-글리콜리드), 폴리(락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(락트산-코-글리콜산), 폴리카프로락톤, 폴리카보네이트, 폴리에스테르아미드, 폴리안히드리드, 폴리(아미노산), 폴리오르토에스테르, 폴리아세틸, 폴리시아노아크릴레이트, 폴리에테르에스테르, 폴리(디옥사논), 폴리(알킬렌 알킬레이트), 폴리에틸렌 글리콜과 폴리오르토에스테르의 공중합체, 생분해성 폴리우레탄 및 이들의 블렌드(blends) 및 공중합체와 같은 하나 이상의 중합체를 포함한다.

에스트로겐 대사물

본 발명에 따라 사용되는 에스트로겐 대사물은 2-히드록시에스트라디올(에스트라-1,3,5(10)-트리엔-2,3,17-트리올(17β)) 또는 4-히드록시에스트라디올(에스트라-1,3,5(10)-트리엔-3,4,17-트리올(17β))과 같은 카테콜에스트라디올 또는 2-메톡시에스트라디올(에스트라-1,3,5(10)-트리엔-2-메톡시-3,17-디올(17β)) 또는 4-메톡시에스트라디올(에스트라-1,3,5(10)-트리엔-4-메톡시-3,17-디올(17β)과 같은 메톡시에스트라디올을 포함한다. 이들 화합물 모두의 상업적 약제가 용이하게 이용가능하다.

에스트라디올 대사물은 또한 방출 제어 제제에 편입될 수 있다. 이러한 방출 제어 제제는 생분해성 마이크로입자, 생분해성 나노입자, 패취, 결정, 겔, 히드로겔, 리포좀 등일 수 있다. 또한, 에스트라디올 대사물은 임플랜트, 바지날 링(vaginal rings), 삼투압 펌프, 확산 장치 및 경피 송달 장치와 같은 장치에 편입될 수 있다. 본 발명에 따르면, 에스트라디올 대사물의 프로드럭 및/또는 이들의 합성 유도체 및 유사체가 또한 사용될 수 있다. 구체적인 예로는 히드록시에스트라디올 및 메톡시에스트라디올의 에스테르를 포함한다.

상기 열거된 화합물은 단지 예시적인 것이고 에스트라디올 모 화합물의 특정 히드록시화 또는 메틸화 부위에 따라서 많은 변형이 사용될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 예컨대, 에스트라디올은 많은 부위에서 히드록시화 또는 메틸화될 수 있고, 그러한 변형은 당업계에 공지되어 있다.

투여 형태

본 발명의 치료적 조성물은 치료받는 개체가 허용할 수 있는 부형제로 제제화될 수 있다. 이러한 부형제의 예로는 물, 식염수, 링거 액(Ringer's solution), 덱스트로즈 용액, 행크 액(Hank's solution) 및 다른 생리적으로 균형잡힌 염 용액을 포함한다. 불휘발성유(fixed oils), 참깨 오일, 에틸 올레이트 또는 트리글리세리드와 같은 비수용성 담체도 사용될 수 있다. 다른 유용한 제제로는 소디움 카르복시메틸셀룰로오스, 소르비톨 또는 덱스트란과 같은 점도 증가제를 함유하는 현탁액을 포함한다. 부형제는 또한 등장성 및 화학적 안정성을 증가시키는 물질과 같은 소량의 첨가제를 포함할 수 있다.

본 발명의 실시에 사용될 수 있는 버퍼의 예는 포스페이트 버퍼, 바이카보네이트 버퍼 및 트리스 버퍼를 포함하고, 보존제의 예로는 티메로살, 크레졸, 포르말린 및 벤질 알코올을 포함한다. 표준적인 약제는 액상 주사제 또는 적절한 액체에서 주사용 현탁액 또는 용액이 될 수 있는 고체일 수 있다. 따라서, 비-액상 약제에서, 부형제는 덱스트로즈, 인간 혈청 알부민, 보존제 등을 포함할 수 있고, 투여에 앞서 여기에 증류수 또는 식염수가 가해진다.

본 발명은 또한 본원에서 제공된 약제학적 화합물의 적절한 국소, 경구, 전신 및 비경구 제제를 이용하여 실시될 수 있다. 제제는 투여를 위한 종래의 담체에서 다양한 치료적 제형으로 투여될 수 있다. 예컨대, 화합물은 정제, 캡슐제(각각 지효성 및 서방성 제제를 포함하는), 필(pill), 분말, 과립, 엘릭실, 틴크제, 용액, 현탁액, 시럽 및 에멀젼의 형태로 경구 투여용으로 약제화될 수 있다. 마찬가지로, 화합물은 또한 혈관성형술/도관술을 시술하는 동안 정맥투여(볼러스 주사(bolus) 및 점적 주입 모두)되거나, 약제 분야의 당업자에게 공지된 모든 형태를 사용하여 복강 내로, 피하로, 밀봉하거나 하지않고 국소적으로, 또는 근육 내로 투여될 수 있다.

본 발명의 치료적 조성물은 또한 운반체(carrier)를 포함할 수 있다. 운반체는 치료받는 개체에서 치료적 조성물의 반감기를 증가시키는 화합물을 포함한다. 적절한 운반체는 중합성 방출 제어 담체, 생분해성 임플란트, 리포좀, 박테리아, 바이러스 다른 세포 및 글리콜을 포함하지만 이에 한정되지 아니한다.

방출 제어 제제

본 발명의 방법은 또한 개체에 본 발명의 조성물을 서서히 방출시킬 수 있는 방출 제어 제제를 이용할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 방출 제어 제제는 방출 제어 담체에 본 발명의 조성물을 포함시킬 수 있다. 이러한 방출 제어 제제는 당업계에 널리 알려져 있다. 적절한 방출 제어 제제는 생분해성 중합체, 다른 중합성 기질, 캡슐, 마이크로캡슐, 마이크로입자, 나노입자, 패취(미국 특허 제6,238,284호 및 제5,736,154호 참조), 결정(미국 특허 제5,827,531호 참조), 볼러스(bolus) 약제, 리포좀(미국 특허 제6,339,069호 및 제6,143,716호 참조), 리포스피어, 겔(미국 특허 제5,830,506호 참조) 및 히드로겔(미국 특허 제6,372,813호;제6,372,248호; 및 제6,367,929호 참조)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 이러한 방출 제어 담체는 또한 바지날 링(미국 특허 제6,103,256호 및 제5,788,980호 참조), 임플란트(미국 특허 제6,251,418호 및 제5,874,098호 참조), 삼투압 펌프, 확산 장치 및 경피 송달 시스템을 포함한다. 본 발명의 다른 방출 제어 제제는 개체 투여시에 원 위치에서(in situ) 고체 또는 겔을 형성하는 액체 및 현탁액을 포함한다. 바람직한 방출 제어 제제은 생분해성이다. 이러한 조성물 모두는 당업계에 널리 알려져 있다.

본 발명의 방법은 또한 조성물의 치료적 용량 수준에 도달하여 이를 유지하기에 충분한 속도로 개체 내로 본 발명의 조성물을 방출할 수 있는 방출 제어 약제을 이용할 수 있다. 치료적 조성물은 바람직하게는 1일 내지 약 12개월의 기간에 걸쳐 방출된다. 보다 바람직하게는, 이러한 치료적 조성물이 2일 내지 30일의 기간에 걸쳐 방출된다.

용량

용량 결정시 파라미터는 본 발명의 치료적 조성물을 효과적인 방식으로 투여하기 위하여 변화될 수 있다. 이러한 파라미터는 개별 투약 크기, 투약의 수, 투약 빈도 및 투여 형태를 포함한다. 당업자에 의하여 이러한 파라미터의 변화가 이루어질 수 있다. 적절한 단일 복용량은 적절한 기간 동안 1회 이상 투여되었을 때, 동물 또는 인간을 질병으로부터 보호(즉, 예방 또는 치료)할 수 있는 용량이다. 치료적 조성물의 추가적인 투여의 필요성은 당업자가 환자의 주어진 상태에 따라서 결정할 수 있다.

폐 고혈압의 치료

폐 고혈압은 5가지의 기본적인 범주로 나뉘어진다. 첫번째는 폐 동맥 고혈압(Pulmonary Arterial Hypertension, PAH)로서 폐 동맥 손상을 가진 환자를 포함한다. PAH에는 1차성 폐 고혈압(PPH) 및 다른 원인과 관련된 폐 동맥 고혈압의 2가지 유형이 있다. 1차성 폐 고혈압은 약 10%의 경우 PPH 가족력이 있는 가족에서 일어나기 때문에 유전적 요소를 갖는 것으로 보이지만, 어떠한 명백한 원인 없이 일어난다. 게다가, 만삭아 또는 과숙아가 심장 또는 폐기능 곤란을 나타낼 수 있다. PPH의 이러한 유형은 신생아의 지속성 폐 고혈압(Persistent Pulmonary Hypertension of the Newborn)이라고 불리며 청색증 및 빈호흡(tachypnea)을 동반한 호흡 곤란으로 특징지워진다. 유아의 흉부 라디오그래프는 흡인, 폐렴, 횡경막 탈출증 또는 히알린 막증(hyaline membrane disease)과 부합되는 다양한 기형들을 나타낼 수 있다. 신생아의 지속성 폐 고혈압의 진단은 심초음파에 의하여 확인될 수 있다.

다른 원인과 관련된 폐 동맥 고혈압은 펜플루라민 또는 덱스펜플루라민을 함유하는 다이어트 약물, 코카인 또는 메트암페타민과 같은 불법 물질 또는 오염된 음식 또는 물과 같은 독소에의 노출과 연관되어 있다. PAH의 이러한 하부 범주의 다른 원인들은 질병들, 예컨대 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염; 경피증(scleroderma), 루프스 또는 류마티스성 관절염과 같은 콜라겐 혈관 질환; 또는 만성 간질환 또는 간문맥 폐색과 같은 간질환을 포함한다.

PH의 두번째 범주는 호흡기계 질환과 연관된 폐 고혈압이다. 이는 이미 폐기종(emphysema), 천식성 기관지염, 수면 무호흡, 만성 폐쇄성 폐질환, 간질성 폐질환, 수면시 이상 호흡, 폐포 환기저하 질환, 신생아 폐질환, 페포-모세관 형성 장애(alveolar-capillary dysplasia) 또는 높은 고도에의 만성적 노출을 겪고 있는 환자에서 종종 보여진다.

폐 고혈압의 세번째 범주는 만성 혈전성 또는 색전성 질환으로 인한 것이다. 이는 폐동맥의 응혈, 폐 색전 또는 겸상 적혈구 질환을 나타낸 환자에서 종종 보여진다. 추가로 예컨대 혈전, 종양, 기생충 또는 외래 물질로 인한 원위 폐동맥의 폐색을 가진 환자도 또한 만성 혈전성 또는 색전성 질환으로 인한 폐 고혈압을 가진 것으로 분류된다.

폐 고혈압의 네번째 범주는 폐 혈관에 직접적으로 영향을 미치는 질환으로 인한 것이다. 이러한 범주는 예컨대, 주혈흡충증, 사르코이도시스 또는 폐 모세혈관 질환을 갖는 환자에서 종종 관찰된다.

다섯번째 범주는 폐 정맥 고혈압이다. 이는 심장 좌측의 질병 또는 결함, 예컨대 좌측 심방 또는 심실 질환; 좌측 심장 판막 질환; 예컨대 섬유성 종격염(fibrosing mediastinitis) 또는 선병증(adenopathy) 또는 종양으로 중심 폐 정맥의 외인성 압박; 또는 폐 정맥 폐쇄성 질환에 의하여 야기된다. 폐 정맥 고혈압을 앓는 환자는 증가된 폐 동맥압을 나타내지만 이는 심각한 PAH로는 거의 진행되지 않는다.

PH의 초기 증상은 짧은 호흡, 계속적인 피로감, 어지러움, 현기증, 발목 또는 다리의 부어오름 또는 흉통을 포함한다. 심초음파, 심전도, 우측 심장 도관술, 6분 걷기 테스트 및/또는 일일 생활에서 일 수행 평가를 통하여 환자의 심장 및 폐를 더 평가할 때, 이들은 특정 진단 범주에 부합되지 않을 수 있으나 다수의 PH 조건을 갖는다. 추가적으로, 임의의 유형의 PH를 갖는 환자는 중심 정맥압의 계속적인 증가로 인하여 심부전의 위험성이 있다. PH로 불리는 질환의 많은 징후로 인하여, 본 발명은 상기-열거된 증상들의 임의의 하부세트를 지칭하기 위하여 "폐 고혈압" 또는 "PH"라는 용어를 사용할 것이다.

본 발명에 따른 PH 치료에 있어서, 에스트라디올 대사물은 생분해성 마이크로입자 또는 나노입자에 편입되어서 환자에 투여될 수 있다. PH 치료를 위한 적어도 하나의 다른 약제("PH 약제")와 함께 생분해성 마이크로입자 또는 나노입자에 결합된 에스트라디올 대사물을 투여하는 것도 또한 본 발명의 범위 내이다. PH 약제는 예컨대, 항응고제, 칼슘 채널 차단제, 프로스타사이클린, 프로스타사이클린 유사체, 이뇨제, 디곡신, 엔도텔린 길항제, 포스포디에스터라제 저해제, 프로스타글란딘 유사체, 나이트릭 옥사이드, 아데노신, 산소 또는 임의의 다른 적절한 약제일 수 있다. 단일 조성물 또는 에스트라디올 대사물과 PH 약제를 모두 포함하는 약학적 제제를 투여하거나, 하나의 조성물이 생분해성 중합체와 결합되거나 결합되지 않은 에스트라디올 대사물을 포함하고 다른 하나의 조성물이 PH 약제를 포함하는, 두 개의 구별되는 조성물 또는 제제로 동시에 환자를 치료하여 치료가 이루어질 수 있다.

대안으로, 임의의 에스트라디올 대사물 치료는 수분 내지 수주의 간격을 두고 PH 약제 치료를 선행하거나 뒤따를 수 있다. PH 약제 및 임의의 에스트라디올 대사물이 별도로 투여되는 경우에, 각 송달 시점 사이에 상당한 시간이 경과하지 않아서 PH 약제와 에스트라디올 대사물이 여전히 질환에 유리하게 결합된(예컨대, 상승적인) 효과를 발휘할 수 있을 것임을 일반적으로 확실하게 할 것이다. 그러한 경우에, 두 개의 치료제를 서로 약 12-24 시간 내, 보다 바람직하게는 서로 약 6-12시간 내에, 가장 바람직하게는 단지 약 12시간의 지연 시간만을 가지고 투여하려고 생각할 것이다. 일부 상황에서, 오직 그 치료 약제로 치료를 계속하는 기간을 연장시키는 것이 바람직할 수 있는데, 예컨대 각각의 투여 사이에 수일(2,3,4,5,6 또는 7) 내지 수주(1,2,3,4,5,6,7 또는 8)가 경과한다. 병용 요법에 사용되기 적합한 약제는 폐 고혈압을 가진 환자에 유용한 임의의 화합물 또는 치료 방법이다.

본 발명에 따라서 폐 고혈압을 치료할 때, 생분해성 마이크로입자 또는 나노입자에 편입될 수 있고 또한 또 다른 약제와 함께 투여될 수 있는 에스트라디올 대사물은 폐 혈관 비대 및 섬유화를 예방 및/또는 치료하기 위하여 작용할 것이다. 이는 폐 혈관 구조에서 압력을 낮추고 및/또는 심장 및 폐 모두의 병변을 완화시키는 기능을 할 것이다.

이제 본 발명을 더욱 설명할 것이지만 결코 하기의 실시예에 제한되지 않는다. 실시예에 기재된 기법이 본 발명을 실시할 때 잘 기능하기 위하여 본 발명자에 의하여 발견된 기법을 대표하는 것이고 발명의 실시를 위한 현재 바람직한 형태를 구성하는 것으로 여겨질 수 있음을 당업자에게 명백할 것이다. 그러나, 본 발명의 요지 및 범위를 벗어나지 않고 특정한 구체예에서 물질 및 방법 모두에 많은 변형이 이루어질 수 있음은 당업자에게 분명해야 한다.

발명의 요약

폐 고혈압과 심부전을 비롯하여 개체에서 이와 관련된 다른 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 이러한 목적 및 다른 목적들은 하기 구체예 중 하나 이상에 의하여 달성된다.

한 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체의 폐 고혈압 치료방법을 특징으로 한다.

바람직한 구체예에서, 에스트라디올 대사물은 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 바람직한 구체예에서, 조성물은 에스트라디올 대사물의 프로드럭이다.

또 다른 바람직한 구체예에서, 조성물은 방출 제어 제제를 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 중심 정맥압을 낮춰서 폐 고혈압을 치료하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 심장 무게를 감소시켜서 폐 고혈압을 치료하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 폐 무게를 감소시켜서 폐 고혈압을 치료하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 우심실 비대를 감소시켜서 폐 고혈압을 치료하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 폐 혈관 저항을 감소시켜서 폐 고혈압을 치료하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 폐 혈관 섬유화를 감소시켜서 폐 고혈압을 치료하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체의 폐, 심장 및 폐동맥에서 염증, 세포 증식, 혈관 리모델링 및 혈관 내피 성장 인자 발현을 감소시켜서 폐 고혈압을 치료하는 방법을 특징으로 한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 에스트라디올 대사물을 함유하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체의 심부전 치료방법을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 특징들 및 잇점들은 바람직한 구체예에 대한 이하의 기재 및 청구항으로부터 분명해질 것이다.

실시예 1

실험 디자인

전체 27마리의 수컷 스프래그 돌리 랫트(찰스 강, 윌밍톤, 매사추세츠)(378+/-12 그램)가 본 실험에 사용되었다. 동물들은 피츠버그 메디칼 센터 동물 보호 시설에 수용되었다(온도 22℃, 광주기 12시간, 상대습도 55%). 동물들에게 Pro Lab RHM 3000 설치류 식이(PMI 뉴트리션 주식회사, 세인트 루이스, 미주리)를 먹였고 물은 임의로 주어졌다. 동물 복지에 대한 기관의 가이드라인을 준수하였고, 동물 보호 및 사용 위원회(Animal Care and Use Committee)가 실험 프로토콜을 승인하였다.

동물은 식염수(1mg/kg, n=6) 또는 모노크로탈린(시그마, 세인트 루이스, 미주리)(MCT, 60mg/kg 피하투여)(n=21)을 피하 투여받도록 무작위 할당되었다. 모노크로탈린(monocrotaline)은 폐 고혈압을 유도하는 것으로 알려진 약제이다. 최초 주입 6시간 후에 대조군 동물에 담체(폴리에틸렌 글리콜 400, 2.5μl/hr)(시그마, 세인트 루이스, 미주리)를 포함하는 삼투압 미니펌프(모델 2ML4, 알자, 팔로알토, 캘리포니아)를 이식한 반면에, MCT 치료받는 동물에는 담체(MCT 군; n=7), 2-히드록시에스트라디올(스테랄로이즈, 뉴포트, 로드아일랜드)(10μg/kg/hr, MCT+2HE 군, n=7) 또는 2-메톡시에스트라디올(스테랄로이즈, 뉴포트, 로드아일랜드)(10μg/kg/hr, MCT+2ME 군, n=7)을 포함하는 삼투압 미니펌프를 이식하였다. MCT, MCT+2HE 및 MCT+2ME 군에의 할당은 무작위로 수행되었다.

21일 후에 동물의 체중을 측정하고, 펜토바비탈(시그마, 세인트 루이스, 미주리)(50mg/kg)을 복강 투여하여 마취시키고 혈압, 심박수 및 중심 정맥압을 측정하기 위한 도구를 설치하였다. PE-50 카테터를 우측 경정맥으로 삽입하고 약 일 인치 정도 전진시키고 중심 정맥압의 계속적인 측정을 위하여 저압력 분석기(LPA, 마이크로-메드 주식회사, 루이스빌, 켄터키)에 연결시켰다. 또 다른 PE-50 카테터를 좌측 경동맥에 삽입하고 혈압과 심박수의 계속적인 측정을 위하여 혈압 분석기(BPA, 마이크로-메드 주식회사, 루이즈빌 켄터키)에 연결하였다. PE-50 카테터에 연결된 22-G 바늘을 보충 마취제의 송달을 위하여 꼬리 정맥에 삽입하였다. 60분 후, 혈역학적 파라미터의 30-분 기록을 수행하였다.

동물을 마취제 과량 투여로 치사시키고, 심장 및 폐를 제거하여 무게를 측정하였다. 양쪽 심방을 조심스럽게 제거하고 우심실을 좌심실로부터 조심스럽게 분리하였다. 양쪽 심실의 무게를 측정하여 좌심실과 중격의 합에 대한 우심실의 비율을 계산하였다.

우심실, 좌심실, 주요 폐동맥 및 폐의 오른쪽 아래엽을 잘라내어 10% 포르말린 버퍼로 고정하였다. 고정된 표본에 파라핀을 침투시키고 이후의 광학 현미경 및 면역조직화학 분석을 위하여 4-마이크론 두께의 절편으로 잘랐다.

증식을 평가하기 위하여, 증식세포 핵항원(PCNA)를 1차 단일클론 항체(1/200 희석, 다코, 카펜테리아, 캘리포니아)로 표지하고, VEGF 발현은 토끼 다클론항체(1/50희석, 랩 비젼, 프레몬트, 캘리포니아)을 사용하여 측정하였다. 단핵구/대식세포 세포질 항원에 특이적인 다클론 ED1항체(세로텍, 랄리, 노쓰 캐롤라이나)가 혈관(주요 폐동맥) 및 폐 대식세포를 표지하기 위하여 사용되었다. 비특이적 염색 측정을 위해, 1차 항체가 인산 완충 식염수(PBS)로 대체되었다. 절편을 세척하고, 아비딘에 연결된 2차 항체 및 퍼옥시다제가 컨쥬게이트된 비오틴을 포함한 LSAB2 키트를 사용하여, 제조자(다코 코퍼레이션, 카핀테리아, 캘리포니아)의 지시에 따라 더욱 현상시켰다. PCNA 및 VEGF에 대한 면역화학적 염색을 면역염색 분석을 위해 고안된 특별한 컴퓨터 소프트웨어(Immuno-Analysis, version 4.1, 마이크로소프트, 리치몬드, 워싱톤)를 사용하여 SAMBA 4000 영상 분석기(이미지 프로덕츠 인터내셔널, 첸틀리, 버지니아)로 정량적으로 평가하였다. 소프트웨어는 PBS로 1차 항체를 대체한 음성대조군 조직에서 다수의 필드(field)를 평균내어 밀도 한계값(density threshold values)를 설정하였다. 이어서 백그라운드 차감이 모든 조직에 대하여 수행되었다. 10개의 고배율 필드(high power field, X400)에서 염색 밀도, 벽 두께 또는 ED-1 양성 표지 세포를 평가하였다. PCNA 및 VEGF에 대한 결과는 표지 지수로 보고하는데, 이는 양성 염색된 전체 검사 영역의 비율을 나타낸다. 또한, 양성 영역의 염색 강도를 평가하여(평균 광학 밀도) 평균 퀵 스코어를 계산하였다(평균 광학 밀도X표지 지수). 염증 반응 자료는 10개의 고배율 필드 당 ED+1 세포의 총 개수로 표현된다.

혈관 리모델링의 평가를 위하여, 폐동맥의 혈관 평활근 세포를 평활근 알파-액틴 Ab-1 마우스 단일 클론 항체(1/100 희석, 랩 비젼, 프레몬트, 캘리포니아)로 염색하였다. 작은 크기의 폐 대동맥(50-200 마이크론)에서 시판 영상화 소프트웨어를 사용하여 벽 및 메디아(media) 두께를 측정하였다. 대략 환형 프로파일을 갖는 혈관만이 분석되었다.

통계적 분석은 Number Cruncher Statistical software program(케이스빌, 유타)를 사용하여 수행되었다. 군 비교는 일원 분산분석(1-F ANOVA)에 의해 수행되었고, 이어서 피셔의 LSD 테스트를 사용하여 사후비교가 이루어졌다. 모든 자료는 평균±S.E.M으로 나타낸다.

결과:

모노크로탈린을 실험동물에 투여하여 폐고혈압 모델을 만든다(예컨대, B. Meyrick etal., Am. J. Physiology 239 (5) : H692 (1980), 및 Tanino, Y. , Nippon Rinsho 59 (6) : 1076 (2001)참조, 이들의 개시내용은 참조문헌으로 본원에 편입됨). 처음에는, 모노크로탈린이 혈관에서 근내막(myointima)의 증식을 유도함에 따라 작고 큰 폐동맥에서 구조적 변화가 일어난다. 이는 폐의 폐포 대식 세포 활성 증가를 유발하여 폐 무게 증가를 야기하고 차례로, 다양한 염증 매개자를 자극한다. 모노크로탈린의 투여로 인한 폐에서의 이 모든 변화는 폐의 혈관 저항 증가 및 우심실 비대를 일으켜서 우심실 무게 증가를 야기한다.

본 실험에서 모노크로탈린의 투여는 기대된 결과를 야기하였다. 이들 동물에서 도 1에서 보여지는 바와 같이 폐 무게의 주목할만한 증가 및 폐 혈관 저항의 현저한 증가가 있었다. 폐 혈관 저항의 증가는 폐 고혈압을 야기하여 모노크로탈린으로 처리된 동물에서 차례로 도 2에서 보여지는 심장 비대 및 우심실 비대와 도 3에서 보여지는 우심실 무게의 증가를 일으켰다. 추가로, 모노크로탈린-처리된 동물은 도 4에서 보여지듯이, 좌심실 및 중격을 합한 무게에 대한 우심실의 무게의 비율이 더 큰 것으로 나타났다. 폐 고혈압 및 심부전의 표식인 중심 정맥압 또한 도 5에 도시된 바와 같이 모노크로탈린-처리된 동물에서 더 높았다.

반대로, 모노크로탈린 및 2-히드록시에스트라디올 또는 2-메톡시에스트라디올로 처리된 동물은 동일한 수준의 모노크로탈린 처리와 연관된 나쁜 결과들을 나타내지 않았다. 도 1, 2, 3 및 4에서 보여지듯이 이들 동물들은 폐 고혈압, 증가된 폐 무게, 심장 비대 또는 우심실 비대를 경험하지 않아서, 에스트라디올 대사물은 유의적으로 모노크로탈린의 부정적인 효과를 감소시켰다. 추가로, 2-메톡시에스트라디올이 중심 정맥압을 감소하여 차례로 이들 동물을 심부전으로부터 보호하는데 특히 효과적이었다(도 5 참조).

폐, 우심실 및 주요 폐 동맥에서 증식의 정량분석(PCNA 염색)을 도 6A-6C에 각각 나타낸다. 모노크로탈린-유도된 내피 손상 및 이후의 폐 고혈압은 현저한 증식 반응을 수반하였다. 증식 세포에 대한 염색의 증가가 대조군 동물과 비교하였을 때 모노크로탈린-처리된 동물의 폐(도 6A), 우심실(도 6B) 및 주요 폐동맥(도 6C)에서 탐지되었다. 우심실에서 PCNA 양성 세포의 분포는 심장 섬유아세포의 증식 증가를 제시한 반면에; 폐 동맥에서는 뚜렷한 증식반응이 중간막(media) 및 외막(adventitia)에서 탐지되었다. 2HE 및 2ME 모두가 폐(-60% 및 -70%)(도 6A), 우심실(-81% 및 -77%)(도 6B) 및 주요 폐 동맥(-83% 및 -94%, 2HE 및 2ME 각각; 도 6C)에서 증식 반응을 현저하게(p<0.001) 억제하였다.

폐 고혈압의 발전은 또한 폐에서의 유의적인 염증(p<0.001)(도 7A, 대조군 대 MCT, p<0.001)과 연관되었다. 염증(ED1+) 세포가 또한 MCT 처리된 동물의 폐 동맥에서 탐지되었다(도 7B). 에스트라디올 대사물은 거의 완전하게 폐에서의 염증반응을 제거하였고(p<0.001), 폐 동맥에서 염증 세포 침투를 억제하였다(도 7A 및 7B, 각각). VEGF 발현의 면역조직화학 분석은 덜 두드러진 변화를 나타내었다. 사용된 폐 조직의 유사한 퍼센트(표지 지수 34.2±2.2, 42.8±2.6, 37.6±3.3 및 37.6±3.9, 대조군, MCT, MCT+2HE 및 MCT+2ME 군 각각; p=0.482)가 VEGF에 대하여 양성으로 염색되었다. 그러나, 염색의 밀도(평균 광학 밀도) 및 퀵 스코어 지수는 대조군 동물과 비교하여 MCT 군에서 보다 더 높았다(도 8).

MCT 처치된 랫트의 폐에서 VEGF 분포의 반-정량적 분석은 기도(즉, 상피 및 상피하 평활근 세포)에서 가장 높은 발현을 나타내었다. 중요하게도, 대사물은 둘다 이러한 변화를 제거하는 경향을 나타내었다. MCT 처리된 동물에서 폐 고혈압의 발현은 현저한 혈관 리모델링과 연관되었다. 작은 크기의 폐 동맥의 면역조직화학 분석(평활근 알파-액틴 염색)은 MCT 랫트에서 현저한 중간층 비대가 탐지되었다(대조군 동물과 비교하여 MCT 군들에서 87% 증가된 벽두께; 도 9). 중요하게도, 두 에스트라디올 대사물 모두는 MCT-유도된 중간층의 비대를 약화시켰다(-50% 및 -40%, MCT+2HE 및 MCT+2ME 각각; p<0.001).

개시된 방법 및 조성물이 본 발명의 특정한 구체예의 측면에서 기재되었지만, 청구된 발명의 개념, 요지 및 범위를 벗어나지 않고 변형이 적용될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 보다 구체적으로는, 화학적 및 생리적으로 관련된 특정 약제가 본원에 기재된 약제를 대체하여도 동일 또는 유사한 결과를 얻을 것임이 명백할 것이다. 당업자에게 명백한 그러한 모든 유사한 대체물, 변형물은 첨부된 청구항에 의하여 정의되는 본 발명의 범위 내로 간주된다. 따라서, 본원에서 도면 및 발명의 상세한 설명이 단지 발명의 이해를 용이하기 위하여 제공되는 것이고 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니될 것이다.

Claims

개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체의 폐 고혈압 치료방법.
제1항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제1항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제를 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 중심 정맥압을 낮추어서 폐 고혈압을 가진 개체를 치료하는 방법.
제5항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제5항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제5항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 심장 무게를 감소시켜서 폐 고혈압을 가진 개체를 치료하는 방법.
제9항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제9항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제9항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 폐 무게를 감소시켜서 폐 고혈압을 가진 개체를 치료하는 방법.
제13항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제13항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제13항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 우심실 비대를 감소시켜서 폐 고혈압을 가진 개체를 치료하는 방법.
제17항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제17항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제17항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 폐 혈관 저항을 감소시켜서 폐 고혈압을 가진 개체를 치료하는 방법.
제21항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제21항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제21항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 폐 혈관 섬유화를 감소시켜서 폐 고혈압을 가진 개체를 치료하는 방법.
제25항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제25항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제25항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체의 심부전 치료방법.
제29항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제29항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제29항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.
개체에 에스트라디올 대사물을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 폐, 심장 및 폐 동맥에서 염증, 세포 증식, 혈관 리모델링 및 혈관 내피 성장 인자 발현을 감소시켜서 폐 고혈압을 가진 개체를 치료하는 방법.
제33항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물이 2-히드록시에스트라디올, 2-메톡시에스트라디올, 4-히드록시에스트라디올 및 4-메톡시에스트라디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제33항에 있어서, 상기 에스트라디올 대사물의 프로드럭을 추가로 포함하는 방법.
제33항에 있어서, 상기 조성물이 방출 제어 제제을 포함하는 방법.