KR20040084580A

KR20040084580A - 상황버섯 액체배양 균사체 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20040084580A
Application number: KR1020030019745A
Authority: KR
Inventors: 전민현
Original assignee: 전민현
Priority date: 2003-03-28
Filing date: 2003-03-28
Publication date: 2004-10-06

Abstract

본 발명은 상황 버섯(Phellinus linteus) 액체배양 균사체 추출물을 함유하는 피부 노화방지 보습력 주름 방지 및 항산화 효과 천연 화장료 조성물에 관한 것이다 상황버섯액체배양균사체 추출물은 곰팡이 균류인Escherichia coli,Bacillus subtilis효모균accharomyces cerevisiae와candida lypolytica는 테트라사이클린(tetracycline) 보다 높은 항균활성을 보여 상황버섯액체배양 균사체 추출물 함유 항산화. 항미생물.항암활성 피부암 예방 기능성 화장료 조성물 제공을 특징으로 한다

Description

상황버섯 액체배양 균사체 추출물을 함유하는 화장료 조성물{omitted}

본 발명은 피부에 각종 영양분을 공급하며 피부의 표면에 깨끗함과 피부염증을 억제하면서 치료를 행할 수 있는 피부암 예방 천연 화장료 조성물에 관한 것으로 보다 상세하게는 상황 버섯(Phellinus linteus)액체배양 균사체의 추출물을 함유함으로써 항산화 효과와 피부암 예방 화장료 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 표피.진피 및 피하조직으로 이루어져 환경으로 부터의 많은 영향을 받으며 인체의 외피로서 체온조절작용. 물질대사작용. 등 내적으로는 건강 상태를 나타내어 환자들의 피부는 거칠어지고 칙칙하게 보인다. 또한 건강한 사람의 피부는 맑게 보이면서 우리는 외적인 피부를 보고도 상대의 건강상태를 짐작 할 수 있도록 민감하다 이러한 피부는 나이를 먹으면서 보습력이 떨어지고 거칠어져 많은 사람들이 신경을 쓰는 부분이다

화장품에 배합되는 보습제에는 다가 알코올 계의 그리세린.프로필렌글리콜.솔피트. 1.3-부티렌글리콜. 플리에틸렌글리콜, 히아루론산 등 외에 유산 나트륨 등이 사용되어 왔다 그러나 이러한 물질들은 가려움. 홍반 피부자극이라는 부작용을 수반하게되어 화장품이 추구하는 제품의 안전성 측면을 만족시킬 수 없어 화장품으로서의 가치를 낮출 수 밖에 없는 문제점이 있다

상황버섯이 항종양성을 갖는 것은 공지의 사실이지만 최근에 상황버섯을 가지고 항암효과의 규명에 대한 연구만이 국내에서 진행되고 있는 실정이며 대한민국 특허등록 제206538호. 공개특허 99-30419호에 소개된 바와 같이 자연. 인공재배된 상황버섯에서 추출물을 소정의 처리과정을 거친 후 화장품 조성물에 사용하고 있다. 그러나 상항버섯 추출물은 가격이 고가이며 장시간이 요구되는 단점이 있다

이에 본 발명자는 보다 피부에 자극이 없고 효과적인 미백효과와 고보습력을 갖는 화장료를 제공하고자 연구한 결과 피부에 각종 영향분을 공급하며 아토피 등의 피부염증을 억제하고 항염증. 항미생물. 및 피부자극 완화 효과와 항암활성 피부암 예방 화장료 조성물에 관한 것으로 보다 상세하게는 상황 버섯(Phellinus linteus)액체배양 균사체 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다

본 발명의 발명자는 방부제의 부작용으로 인하여 피부에 자극이 발생되어 화장품 사용시 트러블이 발생하고 순수한 생화장품(生化粧品)을 만들고자 여러 가지 약용 식물 및 버섯류를 검색하였으며 상황버섯액체배양 균사체 추출물이 항균활성 실험결과 항생제와 비슷한 수준임을 발견하였다.

상항버섯속(Phellinus linteus.)은 분류학상 담자균아문(Basidiomycotina).의 민주름버섯목(Aphyllophorales) 소나무비늘버섯과(Hymenochaetaceae)의 진흙버섯속(PhellinusQuel. em. lmaz)에 속하는 버섯으로 뽕나무 줄기에 자생하며 삿갓표면을 제외하고는 모두 황색이며 신농본초경에서 상이는 상근백피. 명대의 이시진은 본초강목에서 목이의 향으로 분류하여 상이. 상유. 상아. 상신 및 상황 등으로 기록하고 있고 동의보감에서는 상이. 상황등으로 분류하고 있다.

한편 상황이란 중국에서 유래되었으며 우리말로는 목질진흙(상황)버섯 [Phellinus linteus(berk. et Curt)Aoshima]으로 명명하고 있으며 주로 뽕나무의 그루터기에서 자생하는 버섯으로 그 모양은 초기에는 노란 진흙덩이가 뭉친 것 같은 형태를 유지하다가 다 자란후의 형태는 그루터기에 혓바닥을 내민 모습이어서 수설 이라고도 한다. 그 효능은 여러 측면에서 보고되고 있으며 '동의보감'에서는 상황버섯을 쌀과 죽을 끓여 복용하면 하혈.지루.장풍 소염 증상에 효염이 있고 최근에는 항암효과로 알려져 있다.

본 발명에서 이용되는 상황버섯 균사는 치악산에서 채집한것을 사용 하였다.

이하 실시예를 참조하여 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명한다.

실시예 1 :. 균사체 시료생산 방법

1). 한국산 상황버섯 자실체를 채집하여 분류 및 동정을 실시한 후 자실체와 자실체로부터 분리한 균사를 PDA에서 25℃로 7일 동안 배양한 후 순수 분리된 균사체를 액체배지의 종균으로 이용하였다.

2). 액체배지는 glucose 4％. yest extract 0.5％. peptone 0.2％. K₂HPO₄0.05％ KH₂PO₄0.1％. MgSO₄0.05％. 효모추출물 1.5％와 basal medium 10㎖을 가해최종 1ℓ로 조정한 합성배지(PH 5.5)를 사용 하였다.

3) 사면 배지로부터 균사체를 백금구로 분리하여 100㎖액체 배지가 들어있는 500㎖ 삼각 플라스크에 넣고 25-28℃서 7일 동안 배양 하였다.

4). 100㎖의 액체배양용 기본배지가 함유된 500㎖배양용 삼각플라스크에 10㎖를 접종하여 25-28℃에서 120rpm으로 7일간 진탕 배양하였다.

5). 2차 종균배양은 액체배양용 배지 100㎖가 들어 있는 500㎖의 배양플라스크에 균질화된 종균배양액 10㎖를 접종하여 25-28℃에서 7일간 진탕 배양하였다.

6). 2차 종균 배양으로부터 배양한 배양액을 5L발효조에 5％(v/v)되게 접종하고 120rpm으로 통기량은 0.5vvm으로 하여 25-28℃에서 7일간 배양한 균사체를 시료로 하였다.

실시예 2 : 항균 활성 시료 추출물의 제조방법 및 수율

상황버섯액체배양 균사체로 부터 에탄올추출물의 조제는 상황버섯액체배양 균사체를 완전히 마를 때까지 동결 건조한 후 잘게 마쇄하여 메탄올에 48시간 실온에서 침지한 후 여과지(Ø110mm, Whatmam) 2겹을 이용하여 여과시킨 후 40℃ 중탕에서 감압 농축하여 에탄올 농축물을 얻었다. 에탄올 추출물의 균사체 수율은 6.83％를 보였다.

실시예 3 : DPPH(1, 1-dipheny1-2-picrylhydrazy)에 의한 항산화 활성 검정 방법

상황버섯액체배양 균사체 추출물에서의 항산하 효과를 검증하기 위한 실험은 자유 라디칼(Freea radical)인 1,1 - dipheny1-2-picrylhydrazy(DPPH) 자유라디칼포착 할성(Blois, Nature, 188: 1199, 1958; Choi, et al., Kor. J. Phamacogn, 24: 299- 303, 1993)으로 조사 하였다 여러농도의 시료를 4㎖의 에탄올에 녹여 1.5×10-⁴M DDPH 에탄을 용액을 1㎖를 첨가한 후 30분간 실온에 방치 후 517nm에서의 흡광도를 측정 하였다.

시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도를 1/2로 감소시키는데 필요한 시료의 양(ug)을 IC₅₀으로 나타내었으며 흡광도는Hitach U-2001 Spectrophotomenter를 사용하여 측정하였다.

합성 항산화제인 α- Tocoperol 보다 상황버섯액체배양 균사체 추출물이 항산화 활성은 약 4배정도 높게 나타 났다[ 표 1 ]

실시예 4 : 항미생물 활성 측정 시험

박테리아에 대한 항균 시험은 피검균(Escherichia coli,Bacillus subtilis)으로 이용하였으며 피검균을 LB배지(bactotryptone 10g, yeast extract 5.0g. NaCl 10g) 10㎖를 직경 25mm시험관에 접종하고 28℃에서 12시간 동안 배양하여 얻은 현탁액을 LB배지에 200배로 희석하여 항박테리아 시험에 사용하였다.

시료를 96공 평판배양기(96 well microtiter plate)의 제1번째 구에 1,000 ppm의 농도로 넣고 조제된 균체 현탁액을 분주하여 2배씩 희석하여 1,000ppm부터7,8ppm까지 변하하여 사용하였다 이것을 28℃에서 24시간 동안 암조건에서 배양하면서 박테리아의 생육을 억제하는 최저농도인 최소억제농도(MIC, minimum inhibitory concentration)를 구하였다.

효모에 대한 항균 시험은 피검균으로Staphylocos aureus는 LB배지에Saccharomyces cerevisiae와candida lypolytica는 YM배지(Dextrose 10g + Yeast extract 3g + Peptone 5g+ Malt extract 3g)에서 배양되었다 배지를 96공 평판배양기(96 well microtiter plate)의 제1번째 구에 1,000ppm의 농도로 넣고 조제된 균체 현탁액을 분주하여 2배씩 희석하여 1,000ppm부터 7,8ppm까지 변화하여 사용하였다 이것을 28℃에서 24시간 동안 암조건에서 배양하면서 효모의 생육을 억제하는 최저농도인 최소억제농도(MIC, minimum inhibitory concentration)를 구하였다.

일반적으로 식물의 분획층에서 항균활성이 1000 - 500ppm사이이면 보통의 활성을 가진다는 것과 비교하여 볼 때 상황버섯 액체배양 균사체 추출물에서의 항균활성이 최소농도 평균 125ppm에서 활성을 가질 뿐만 아니라 상황버섯 액체배양 균사체 추출물에서는 피검균(Staphylocos aureus)에 대해 62.5ppm에서의 높은 항균 할성을 보여주었다[ 표 2 ]

특히 피검균Staccharomyces cerevisiae에 대해서 일반적인 박테리아나 효모의 항생물질로 사용되는 Tetracycline이 활성을 나타내지 않는 반면에 상황버섯 액체배양 균사체 추출물에서는 1000ppm에서 활성을 보였다 따라서 상황버섯액체배양 균사체 추출물은 항산화, 항암활성과 함께 생체방어물질도 함유하고 있음이 판단되었다 [ 표 2 ]

실시예 5 : 항암활성 측정 시험

세포독성 검정에 사용된 배양세포를 3.0 ×10⁴cell/㎖이 되도록 농도를 맞추어 96공(96-well flat - bottom microplte)에 100㎕씩 주입하였다. 주입한 후 CO₂항온 기내에서 각각의 세포주에 상응하는 배지로 배양한 후 처리하여 마이크로플레이트 리더(Microplate leader)를 사용하여 540nm의 파장에서의 광학농도(optical density)를 측정하여 검정균과 대조균을 비교 판정하였다. 시료 추출물 30㎕/㎖ 농도이하의 IC₅₀(50％ inhibitory concentration)치가 되는 것을 유효치로 하였다.

상항버섯 액체배양 균사체 추출물은 항산화. 항미생물. 항암활성에 우수한 효과가 있음을 확인 하였다 [ 표 3 ]

상황버섯 액체배양 균사체 추출물 구성 당은 대부분 분획에서 glucose가 주를 이루면서 여러가지 단당으로 구성되어 있고 또한 아미노산의 경우 대부분 분획은 Asp, Gly, Glu를 다당함유하고 있었으며 당과 단백질의 결합력에 관여하고 있는 Ser과 Thr를 다량 함유하고 있는 것으로 조사되었다 다당류의 분자량은 12KD부근에서 주를 이루고 있으며 IR spectrum patterm은 다당류의 전형적인 peak 흡수대를 나타냈으며, 9-glucan과 α-glucan이 혼재된 다당류인 것으로 추정되나 890cm^-1부근에서 흡수대가 나타나므로 β-glucosidic 결합이 상대적으로 다량 함유된 β-glucan성 다당류인 것이다.

본 발명의 화장료 조성물은 상황 버섯(Phellinus linteus)액체배양 균사체 추출물을 함유함으로써 고보습력으로 주름방지 효과 항염증 및 피부자극 완화 효과를 갖는 천연 피부암 예방 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며 예를 들면 스킨.로션.영양크림. 맛사지크림. 에센스. 아이크림 . 여성청결제. 해어토닉. 마스크팩 등의 화장료로 제형화 될 수 있다. 상기 상황버섯 액체배양 균사체 추출물 총 중량에 대하여 0.5 - 20％의 양으로 함유한다 이하 제형예에 상황버섯 액체배양 균사체 추출물을 함유하는 화장료 조성물이 이들 제형예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 6 : 비교 및 실시 제형 예 (제형 예 . 에센스)

(제조방법)

1. 원료 16)에 원료9)를 분산시킨 후 여기에 원료 1-8을 혼합하여 수상으로 하였다

2. 상기 수상에 원료 10)을 넣고 혼합하였다

3. 원료 11)에 원료 12- 14를 용해시킨 것을 알콜상으로 하였다

4, 상기 알콜상을 수상에 교반하면서 서서히 가하고 여기에 원료 15)를 혼합하였다

＜시험예 1＞

본 발명에 따른 화장료 조성물의 각종 효과를 알아보기 위하여 실시예 1 및 비교예 1의 에센스를 시료로 이용하여 피부에 사용하고 각종 효과를 평가하였다

＜평가방법＞

25 - 45세 연령의 여성 100명을 대상으로 안면 좌부에는 실시예 1을. 우부에는 비교예1을 2주간 아침 및 저녁으로 깨끗하게 세안한 얼굴에 사용하게 한 후. 보습 및 주름방지에 있어서 현저한 효과가 있는 경우는 5점으로 전혀 효과가 없는 경우를 0점으로 하여 6단계로 평가하게 하고 평균을 내었다 [ 표 4 ]

한편 피부자극은 얼굴에 홍반. 가려움.여부에 대하여 전혀 자극이 없는 경우 0점으로 자극이 심한 경우을 5점으로 하여 각 6단계로 평가하게 하였다 [ 표 4 ]

이상의 실험결과에서 알 수 있듯이 본 발명에서와 같이 상황버섯 액체배양 균사체 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항주름 보습효과 및 피부 안정면에서 아주 우수하다.

이하 상기한 시험예들의 결과를 근거로 하여 상황버섯 액체배양 균사체 추출물을 함유함으로써 항주름 보습효과 및 피부안정을 가져오는 화장료를 조성하여 제시한다 그러나 본 발명의 조성물이 하기의 제형예에 한정되는 것은 아니다

실시예 7 : 유연성 화장수

실시예 8 : 로 션

실시예 9 : 클렌징 크림

실시예 10 : 팩

이상에서 살펴 본 바와 같이 본 발명의 상항버섯 액체배양 균사체 추출물이피부에 상재하는 염증 및 여드름 유발 균총의 증식을 억제하고 제품의 방부력 증강과 천연자연 추출물로 피부자극도가 낮은 항여드름. 항주름 보습 효과와 항산화. 항미생물, 항암활성. 피부염증억제.피부암예방 피부안정면에서 효능과 안전성을 지닌 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다

Claims

화장료 조성물에 있어서 상황버섯 액체배양 균사체를 완전히 마를 때까지 동결 건조한 후 잘게 분쇄 한 후 에탄올에 48시간 실온에서 침지 한 후 여과지(Ø여과지(Ø110mm, Whatmam) 2겹을 이용하여 여과시킨 후 40℃ 중탕 감압 농축하여 제조한 상항버섯 액체배양 균사체 추출물 조성물 총 중량에 대하여 0.5 - 20％의 양으로 함유함을 특징으로 하는 항산화. 항미생물. 항암활성에 우수한 효과 있는 화장료 조성물