KR20040009808A - 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯과 이의 가공품 - Google Patents

콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯과 이의 가공품 Download PDF

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Abstract

본 발명은 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯과 이의 가공품에 관한 것이다. 특히 본 발명은 콜레스테롤 저하효과를 가지는 미생물소재인 진균류 배양액을 생버섯에 혼합배양함으로써 버섯과 진균류의 상호작용에 의해 이차대사산물 생성을 촉진함으로써 다량의 콜레스테롤 저하 생리활성물질을 함유한 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯과 이의 가공품에 관한 것이다.

Description

콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯과 이의 가공품{Cholesterol-lowering and diet mushroom and its processed}
본 발명은 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯과 이의 가공품에 관한 것이다.
현재 저개발국을 제외한 대다수 국가들에서는 농산물 부족보다는 과잉생산이 더 문제가 될 정도이어서 인류는 빈곤으로부터 해방되었으며 의학 및 생명공학의 발전으로 인해 생명연장의 시대에 진입하였다. 그러나 사회의 서구화 및 현대화가진행되면서 운동부족, 스트레스증가, 과식, 동물성식품의 섭취증가 등으로 인해 심혈관질환, 암, 고혈압, 당뇨, 비만 등의 성인병질환이 증가하고 있어 이의 예방이나 치료의 중요성이 갈수록 커가고 있다.
특히 1900년대의 통계에 의하면 심혈관질환은 폐렴과 인플루엔자, 결핵, 설사나 장염에 이어서 네번째 사인으로 전체 사망자의 8%에 지나지 않았으나 현재에 와서는 인류의 첫번째 사인으로 등장했다. 전세계적으로도 동맥경화로 인한 뇌색전, 중풍, 뇌출혈 등으로 불리는 뇌혈관계질환과 협심증이나 심근경색, 심장질환, 심장마비 등의 관상동맥질환등의 심혈관질환이 성인사망요인 1위를 차지하고 있다. 한국인의 사망원인에서도 심혈관질환이 37%로 1위를 차지하고 있으며 대부분의 나라에서 사망의 20 - 50%를 차지하고 있다. 이렇듯 대표적 성인병인 심혈관질환의 경우는 동물성식품 소비증가로 인한 고콜레스테롤증이 원인으로 생각되고 있다.
콜레스테롤은 모든 동물성식품에 존재하는 지방의 일종으로 세포의 구성성분이며 호르몬 합성에 필수적인 성분으로 적정량의 콜레스테롤은 건강유지에 아주 중요한 역할을 한다. 그러나 지나치게 많은 콜레스테롤은 오히려 인체에 악영향을 미치기 때문에 적정수준의 콜레스테롤 유지가 건강에 매우 중요하다. 고콜레스테롤증은 사람의 혈중 콜레스테롤 수치가 200mg/dL 이상인 경우를 말하는데 세계 성인인구의 52%에서 찾아볼 수 있을 정도로 흔한 만성질환으로, 동맥경화의 직접적인 원인이며 궁극적으로는 고혈압, 협심증, 심근경색증, 뇌졸중 등과 같은 각종 심혈 관질환 및 비만을 일으키는 원인이 된다. 이에 따라 고콜레스테롤증 환자를 대상으로 하는 콜레스테롤 저하제 시장이 급격히 성장하였으며 1999년 통계에 의하면 세계매출규모 상위 10개 의약품 중 5개를 콜레스테롤 저하제가 차지하고 있을 정도이다.
따라서 1950년대 이후로 성인사망원인 1위로 떠오른 심혈관질환의 예방을 위해서 혈중 콜레스테롤 수치를 낮춤으로써 고콜레스테롤증을 예방하는 것이 인류보건측면에서 매우 중요시되고 있다. 이를 위한 방법으로는 콜레스테롤을 다량 함유하고 있는 알제품(계란), 육제품(고기), 유제품(우유, 버터) 등과 같은 동물성식품의 소비를 줄이는 방법이 있다. 그러나 식단의 서구화와 함께 동물성식품의 섭취량은 매년 증가하고 있는 추세이며 특히 경제가 발전할수록 동물성식품의 소비가 늘어나고 있어 이를 획기적으로 줄이는 것은 현실적으로 거의 불가능한 것으로 생각되고 있다.
고콜레스테롤증을 예방하기 위한 또 다른 방법은 콜레스테롤 저하물질을 함유한 음식물의 섭취이다. 음식물을 통해 섭취되는 콜레스테롤 저하성분으로는 식이섬유가 대표적인데 예를 들어 현미, 통밀, 오트밀 등의 곡류의 셀룰로스(Cellulose), 감귤류 및 과일류의 프로토펙틴(Protopectin & pectin), 산채류의 리그닌(Lignin), 갑각류의 키틴(chitin & chitosan), 버섯류의 균사체 및 섬유질 성분 등이 대표적인 예로 이 성분들은 콜레스테롤에 결합하여 체외로 배출시킴으로써 혈중 콜레스테롤을 낮추는 기능을 가진다. 그러나 이들 성분이 음식물 속에 함유된 양은 아주 적어서 음식물 형태로 섭취되는 양으로는 가시적인 콜레스테롤 저하효과를 보기는 어려운 현실이다.
이에 반해 의약품으로 개발될 정도로 콜레스테롤 저하효과가 뛰어난 생리활성물질은 미생물에서 주로 생성되는 것으로 알려져 있는데 대표적인 미생물들이 진균류에 속하는 여러 미생물들로 붉은 곰팡이 또는 홍국 (Monascus속), 청국 또는 푸른곰팡이 (Penicillium속), 그리고 황국 또는 누룩곰팡이 (Aspergillus속) 등이 있으며 이들은 일정기간 복용시 15%정도의 뛰어난 혈중 콜레스테롤 저하효과를 가진다(한국특허 10-1999-7002751, 10-2002-0009321, 10-2001-0006031, 10-2001-7007701, 10-1980-0001707, 10-1980-0000654).
이들 미생물들이 혈중 콜레스테롤 저하효과를 가지는 원리는 콜레스테롤의 생합성 자체를 막음으로써 혈중 콜레스테롤 수치를 낮추는 것이다. 인체에서 콜레스테롤 생합성은 아세틸코에이 (acetyl-CoA)로부터 출발해 다단계 과정을 거쳐 합성되는데, 콜레스테롤 생합성과정 중에서 가장 핵심적인 역할을 하는 과정은 3-히드록시-3-메틸글루타릴 코엔자임 A 리덕타제(3-hydroxy-3 -methylglutaryl coenzyme A reductase)라는 제한효소에 의해 메발론산(mevalonic acid)이 합성되는 과정이다. 따라서 이 효소의 활성도를 저해시키면 콜레스테롤 생합성을 저해함으로써 혈중 콜레스테롤을 낮추는 것으로 알려져 있다.
붉은 곰팡이 또는 홍국 (Monascus속), 청국 또는 푸른곰팡이 (Penicillium속), 그리고 황국 또는 누룩곰팡이 (Aspergillus속) 등의 미생물들은 메발론산과 유사한 구조를 가진 물질들을 분비함으로써 콜레스테롤 생합성 저해효과를 가지는 것으로 보고되었는데 청국 속에 속하는 페니실리움 시트리넘 (Penicillium citrinum)에서 콤팩틴(compactin)이라는 콜레스테롤 저하물질이 처음으로 분리되었다 (미국특허 3,983,140; 4,049,495; 4,137,322). 그 후 콤팩틴과 유사한 콜레스테롤 생합성 저해물질들이 황국과 홍국 등 다른 진균류에서도 보고되었다 (lovastatin, monacolin, mevacor, MB530B, MK803, MSD803으로 불림). 이들 미생물을 이용하여 발효과정에서 콜레스테롤 저하물질의 분리방법 및 이로부터 콜레스테롤 저하제를 생산하는 방법 역시 보고되었다 (미국특허 4,231,938; 4,294,846; 4,294,926; 4,319,039; 4,323,648; 4,342,767; 4,346,227; 4,376,863; 4,420,491; 4,432,996; 4,444,784; 4,450,171; 4,739,073; 5,273,995).
현재 미생물의 발효물을 이용하여 약품화된 콜레스테롤 저하물질들은 메바스타틴(mevastatin: 미국특허 3,883,140), 로바스타틴 (lovastatin) 또는 메비놀린 (mevinolin: 미국특허 4,231,938), 프라바스타틴 (pravastatin: 미국특허 4,346,227), 심바스타틴(simvastatin: 미국특허 4,444,784와 4,450,171), 플루바스타틴(fluvastatin: 미국특허 4,739,073), 아토르바스타틴 (atorvastatin: 미국특허 5,273,995) 등이 있다.
이외에도 예로부터 널리 이용되어온 약용식물 및 약용버섯류가 콜레스테롤 저하물질들을 함유하고 있는데 이들은 대개 식품형태로 섭취하기에는 맛이 좋지 않아서 주로 건강보조식품으로 이용되어 왔으나 음식물과는 별도로 복용해야 하는 번거로움이 있어 복잡한 현대생활과 각종 스트레스에 시달리는 현대인이 장기간 또는 평생 복용하기에는 어려운 현실이다.
즉 의학의 발달과 더불어 의학상식에 대한 이해가 깊어질수록 성인사망원인 1위인 심혈관질환의 유발요인인 고콜레스테롤증의 심각성은 분명해진다 하겠다. 뚜렷한 자각증상이 없이 만성질환으로 진행되기 쉬운 고콜레스테롤증의 경우 발병 후 평생 치료하기보다는 평소 섭취하는 음식물을 통해 사전에 예방하는 것이 건강유지에 아주 중요하다. 그러나 문명의 발달 및 식단의 서구화 등으로 인해 갈수록 늘어나고 있는 동물성식품의 소비추세를 볼 때, 음식물로 섭취되는 콜레스테롤의 양을 현저히 줄여서 고콜레스테롤증을 예방하기는 어려운 현실이다. 다음으로 콜레스테롤 저하물질을 함유한 음식을 통한 식이요법의 경우, 콜레스테롤 저하물질이 미량이므로 효과적인 예방법이 될 수 없다. 따라서 고콜레스테롤증의 예방을 통한 심혈관질환 예방 차원에서 음식물 형태로 섭취될 수 있으면서도 콜레스테롤 저하 기능이 뛰어난 새로운 식품의 개발이 요구된다.
본 발명은 상기한 종래 기술의 문제점을 획기적으로 해결하기 위하여 고안된것으로서, 인류가 가장 선호하는 기호식품의 하나인 버섯에, 콜레스테롤 저하물질을 함유한 진균류 배양액을 분무한 후 콜레스테롤 저하물질의 생성을 촉진하는 혼합배양공정을 거쳐 생산된 버섯이다.
지구상에 존재하는 모든 생물체는 살아가기 위해 필수적인 대사과정 즉 일차대사과정 (primary metabolic pathway)을 가지고 있다. 그러나 일부 식물이나 일부 미생물에서는 동물과는 다르게 이차대사과정 (secondary metabolic pathway)을 통해 매우 다양한 화학물질을 생산해낸다. 이를 이차대사산물 (secondary metabolite)이라 하는데 항생제, 항암제, 성장호르몬, 생리활성물질 등 여러 가지 유용한 물질로 인류에게 활용된다. 이차대사과정에 의한 이차대사산물은 각 생물체가 특수한 환경에 놓여 있을 경우에 한해 활발히 발현된다고 생각되고 있다.
본 발명에서는 콜레스테롤 저하물질을 분비하는 진균류 미생물들을 이차대사산물의 생산을 촉진하는 발효배지에서 배양하여 콜레스테롤 저하물질 등의 이차대사산물이 풍부하게 함유된 배양액을 얻는다. 다음으로 진균류를 역시 균의 일종인 버섯과 혼합배양한다. 이 과정에서 진균류 배양액 속의 이차대사산물은 버섯의 이차대사산물의 생성 및 분비를 촉진하고, 버섯의 이차대사산물은 진균류의 이차대사산물의 생성 및 분비를 촉진하는 상호연쇄작용에 의해 진균류의 이차대사산물 생성을 증폭시키게 된다. 따라서 버섯위에 분무된 진균류의 콜레스테롤 저하물질과 같은 유용한 생리활성성분을 다량 포함하게 되므로 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯이 된다. 이 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯을 통해 현재 전 세계적으로 심각한 문제가 되고 있는 고콜레스테롤증과 비만을 치료 및 예방하고자 한다.
이하, 하기에서는 본 발명의 상세한 구성 및 상세한 내용을 설명한다.
도 1은 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯의 생산공정을 도식화한 것이다.
도 2는 실시예 1의 방법으로 준비된 홍국균 (Monascus purpureusWent IFO 4513)의 배양액으로부터 실시예 5의 방법으로 이차대사산물을 추출하여 HPLC 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 일반 표고버섯 (Lentinus edodes)으로부터 실시예 5의 방법으로 이차대사산물을 추출하여 HPLC 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 실시예 1의 방법으로 준비된 홍국표고버섯으로부터 실시예 5의 방법으로 이차대사산물을 추출하여 HPLC 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 실시예 1의 방법으로 준비된 홍국표고버섯을 흰쥐에 급이시 혈중 콜레스테롤 농도를 실시예 6의 방법으로 측정하여 나타낸 것이다.
도 6은 실시예 1의 방법으로 준비된 홍국표고버섯을 흰쥐에 급이시 혈중 콜레스테롤 저하효과를 나타낸 것이다.
도 7은 실시예 1의 방법으로 준비된 홍국표고버섯을 흰쥐에 급이시 총콜레스테롤 (total cholesterol) 및 고밀도 (HDL) 콜레스테롤과 저밀도 (LDL) 콜레스테롤의 농도를 실시예 6의 방법으로 측정하여 나타낸 것이다.
도 8은 실시예 1의 방법으로 준비된 홍국표고버섯을 흰쥐에 급이시 비만치료효과를 측정하여 나타낸 것이다.
본 명세서에서 "콜레스테롤 저하물질"이란 콜레스테롤 생합성을 저해하거나, 소화관을 통한 담즙산의 재흡수를 저해하거나, 또는 콜레스테롤의 담즙산 전환을 촉진함으로써 혈청 또는 혈중 콜레스테롤 저하효과를 가지는 생리활성물질을 말한다. 특히 진균류의 모나콜린 K (monacolin K), 모나콜린 L(monacolin L), 모나콜린 J(monacolin J), 모나콜린 X(monacolin X), 모나콜린 M(monacolin M), 로바스타틴(lovastatin), 콤팩틴(compactin) 및 코프로스타놀 (coprostanol) 등과 이들로부터 유도된 물질들이 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 "진균류 배양액"이란 홍국(Monascus), 황국(Aspergillus), 청국(Penicillium)속에 속하는 한 종 이상의 미생물을 고체 또는 액상 발효시킴으로써 콜레스테롤 저하물질이 이차대사산물로 포함되어 있는 배양액을 말한다.
본 명세서에서 "버섯"이란 건조과정을 거쳐서 식용 또는 약용으로 쓰이는 모든 종류의 버섯을 말한다. 구체적으로는 표고버섯, 팽이버섯, 목이버섯, 석이버섯, 양송이버섯, 느타리버섯, 영지버섯, 구름버섯, 신령버섯(아가리쿠스), 동충하초, 목질진흙버섯(상황버섯), 차가버섯(검은자작나무버섯), 복령, 저령, 잔나비걸상, 노루궁뎅이버섯 등이 포함되나 꼭 이에 국한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 "가공품"이란 상기 특수버섯을 구성성분으로 포함하여 생산되는 모든 종류의 가공품을 의미한다. 구체적으로는 건조버섯과 이를 이용한 식품, 버섯가루 또는 버섯분말을 이용한 환, 캡슐, 정제, 음료 등을 들 수 있으나 꼭 이에 국한되는 것은 아니다. 또한 가축이나 애완동물용으로 개발된 사료 등도 포함될 수 있다.
본 명세서에서 "콜레스테롤 저하"란 10% 이상의 혈중 콜레스테롤 저하효과를 가짐을 의미한다.
본 명세서에서 "비만 치료"란 5% 이상의 체중감소 효과를 가짐을 의미한다.
이하 다음에서는 본 발명의 목적을 달성하기 위해 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯의 조성을 좀더 구체적으로 설명하겠다.
본 발명에서 콜레스테롤 저하기능을 가지는 진균류의 미생물들은 홍국(붉은 곰팡이, Monascus), 황국(누른곰팡이, Aspergillus), 청국(푸른곰팡이, Penicillium) 속에 속하는 미생물들로 이들이 분비하는 스테틴(statin) 계열의 이차대사산물은 콜레스테롤 생합성을 저해함으로써 약품으로 개발될 정도의 뛰어난 콜레스테롤 저하효과를 가지는 것으로 알려져 있다.
스테틴(statin)은 콜레스테롤 생합성과정을 저해함으로써 저밀도 콜레스테롤 (low density lipoprotein or LDL cholesterol)을 낮춰주고 이로 인해 15%의 혈청 콜레스테롤 저하효과를 가질 뿐 아니라 중성지질 저하효과도 보고되어 있어 심혈관질환의 예방 및 치료효과를 갖는다는 사실이 잘 알려져 있다. 또한 연구에 의하면 약품으로 쓰이는 콜레스테롤 저하제는 주로 홍국 배양액에서 추출해왔으나 이 배양액 속에는 지금까지 알려지지 않은 콜레스테롤 저하물질 및 기타 유익한 생리활성물질을 이차대사산물로 포함하고 있을 것이라고 여겨진다. 이는 홍국 배양액으로부터 분리해낸 스테틴의 콜레스테롤 저하효과보다 홍국 배양액을 그대로 함유하고 있는 흥미(red yeast rice)의 경우 사람의 혈중 콜레스테롤 저하효과가 훨씬 뛰어나기 때문이다 (Downs et al, JAMA 1998, 279: 1615-22). 따라서 콜레스테롤 저하물질을 이차대사산물로 다량 포함하고 있는 진균류 배양액의 경우 콜레스테롤 저하효과가 기존의 콜레스테롤 저하제보다 훨씬 우수하리라고 생각된다. 본 발명에서는 이 점에 착안하여 콜레스테롤 저하물질을 다량 포함한 진균류 배양액을 버섯에 첨가하여 콜레스테롤 저하효과를 가지는 특수버섯을 특징으로 한다.
홍국 이외에도 콜레스테롤 저하물질을 분비하는 것으로 이미 알려진 청국(Penicillium)이나 황국(Aspergillus)이 사용될 수 있다. 또한 콜레스테롤 생합성을 저해하거나, 소화관을 통한 담즙산의 재흡수를 저해하거나, 또는 콜레스테롤의 담즙산전환을 촉진함으로써 혈중 콜레스테롤 저하효과를 가지는 콜레스테롤 저하물질을 생산하는 미생물로부터 생산된 발효물 역시 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구성원인 버섯은 자낭균류와 담자균류에 주로 해당되는 균류의 일종으로 세계적으로는 약 15,000종이 분포하는데 한국의 경우 자생버섯류는 약 970여 종이 기록되어 있다. 1930년대부터 인공재배되기 시작한 표고버섯을 시작으로 현재 전국 12,000여 농가에서 표고, 느타리, 양송이, 영지, 팽이버섯 등이 약 51,000여 톤이 생산되고 있는데, 5,000만 달러 이상을 수출하여 농가소득 증대에 크게 기여하고 있는 우수 자원이라 할 수 있다. 또한 버섯은 맛과 향기가 독특하고 단백질원을 많이 함유하고 있는 우수 식품원일 뿐 아니라 펩타이드, 필수아미노산, 비타민, 무기물, 핵산 및 섬유성분 등 건강을 증진시켜주는 생리활성성분이 많이 포함되어 있어 한방소재로도 널리 활용되어 온 약품소재이자 동시에 식품소재라 할 수 있다.
버섯의 우수한 생리활성성분을 보면 균사체에 많이 포함되어 있는 다당체성분인 베타 글루칸(beta-glucan)이 항암 및 면역증강효과와 테페노이드(terpenoid) 성분의 가노데란(ganoderin, ganoderol)의 혈압조절 효과가 잘 알려져 있다. 이에비해 콜레스테롤 관련으로는 섬유질 성분이 약간의 콜레스테롤 저하효과를 가지는 것으로 알려져 있다.
버섯은 수확된 직후 생버섯으로 소모되기도 하나 저장성이 극히 낮아 장기저장을 위해서는 반드시 건조를 필요로 한다. 버섯의 건조시 장기저장성, 운반의 용이성, 경량화에 의한 물류비 절감, 수출가능 등의 이유로 표고버섯, 목이버섯과 식이버섯 들과 같은 식용버섯들은 주로 건조버섯 형태로 소비된다. 동충하초, 아가리쿠스, 상황버섯, 영지버섯들과 같은 약용버섯들의 경우 역시 장기보관 및 유통문제를 해결해주기 위해 주로 말려서 건조버섯 형태로 소모된다.
생버섯을 건조시켜 건조버섯으로 상품화시키는 경우 유통과정에서의 보관의 용이성 뿐 아니라 맛과 향 및 영양학적인 측면에서도 우수해진다는 추가적인 장점이 있다. 예를 들어 버섯류 중에서 단백질을 제일 많이 가지고 있어 고기대용식품으로까지 여겨지는 표고버섯의 경우 생버섯은 70-95% 정도의 수분과 5-30%의 유기 및 무기성분으로 구성되어 있으나 건조시키게 되면 15-30% 정도의 단백질, 2-10%의 지방과 50% 정도의 가용성 무기물, 5-10%의 섬유, 칼륨, 인산, 회분 등이 들어있어 건조과정을 통해 영양학적인 측면에서는 오히려 우수하다고 할 수 있다. 또한 건조시에는 생 버섯의 경우보다 맛과 향이 좋고 비타민 D의 전구체인에르고스테롤(ergosterol)이 비타민 D로 바뀌게 되어 칼슘의 체내흡수를 원활히 해주는 기능까지 가지게 된다.
이에 본 발명은 상기한 바와 같은 콜레스테롤 저하물질을 이미 다량 포함한 진균류 배양액을 고단백 저칼로리 식품으로 각광받고 있는 생버섯에 침투시킨 후 혼합배양을 통해 버섯의 이차대사산물과 진균류 배양액의 이차대사산물이 상호연쇄작용에 의해 대량 증폭되어 다량의 콜레스테롤 저하물질과 다량의 생리활성물질을 함유한다. 이로 인해 콜레스테롤 저하효과가 뛰어나고 또한 비만 치료효과가 뛰어난 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯이 만들어진다.
이하 다음에서는 도 1에서 보여주는 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯의 제조방법을 공정별로 설명하겠다.
제 1 공정 : 진균류 배양공정
진균류 배양액의 준비를 위해서, 콜레스테롤 저하물질인 스테틴을 분비하는 진균류 미생물인 홍국 (Monascus sp.)을 배양하기 위해 1 L 배플드 플라스크 (baffled flask)에 0.25 L의 증식배지(3g 콩추출물, 5g 펩톤, 3g 맥아추출물, 340g 자당, 10g 포도당, 1g MgCl2·6H2O/L)를 넣고 3.5×109의 포자를 접종한 후 26℃에서 150 rpm으로 1∼2일 동안 배양한다. 상기 배양과정을 통해 증식된 홍국을, 이차대사산물 분비를 촉진할 수 있는 발효배지(10g 콩추출물, 22.5g 설탕, 3g NaCl, 3g CaCO3, 40mg ZnCl2, 200mg FeCl3·6H2O, 10mg CuCl2·2H2O, 10mg MnCl2·4H2O, 10mg Na2B4O7·10H2O, 10mg (NH4)6Mo7O24·4H2O/1 Liter 증류수)에서 충분히 산소를 공급하면서 26℃에서 6∼10일 동안 배양한다. 배양에는 배플드 플라스크 (baffled plask)나 생물반응기를 이용할 수 있으며, 배플드 플라스크를 이용할 경우 플라스크 1ℓ당 250㎖ 정도의 배지를 공급하고 교반속도는 150 rpm 정도로 한다. 배양 후 콜레스테롤 저하물질을 발효산물로 포함하고 있는 배양액 자체를 본 발명의 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯 생산용 진균류 배양액으로 사용한다.
제 2 공정 : 첨가 및 접종공정
수확한 뒤 이물질을 제거한 신선한 생버섯에 상기 제 1 공정에서 준비된 진균 배양액을 버섯의 갓(pileus)과 대(stipe)를 포함한 표면에 버섯 중량의 0.1-30%를 직접 첨가함으로써 콜레스테롤 저하물질이 버섯에 첨가되는 동시에 배양액 내의 진균이 접종되도록 한다. 이때 첨가방법은 버섯의 표면에 버섯 중량의 0.1-30%를 직접 분무하는 방법이 있으며 소규모 생산시에는 직접 도포도 가능하며 또는 진균류 배양액에 버섯을 수초간 침수시킨 후 꺼냄으로써 진균류 배양액이 버섯의 겉 표면에 진균류 배양액이 고루 묻도록 할 수도 있다.
제 3 공정 : 이차대사산물의 생성촉진 혼합배양공정
상기 제 2공정에서 콜레스테롤 저하물질을 분비하는 진균류 배양액을 버섯에 첨가시켜, 버섯 위에 진균류 배양액이 착상되어지면 이것을 20-35℃에서 3-72시간 배양하는 혼합배양공정을 거친다. 보다 바람직하게는 27℃에서 12-15시간 혼합배양한다. 버섯이나 진균류처럼 환경이 열악해지면 이차대사산물을 분비하는 생명체는, 주변의 다른 생명체가 이차대사산물을 분비하면 이에 대한 반응으로써 이차대사산물의 생성 및 분비를 더욱 촉진한다. 따라서 진균류 배양액이 첨가된 버섯의 배양공정에서는 진균류의 콜레스테롤 저하 이차대사산물은 버섯의 콜레스테롤 저하 및 생리활성 대사산물 분비를 촉진시키고, 다시 버섯의 이차대사산물은 진균류의 이차대사산물 분비를 촉진시키는 상호연쇄반응에 의해 대량의 이차대사산물이 생성됨으로써 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯이 탄생되어진다.
제 4 공정 : 건조공정
상기 제 3 공정에서 생산되어진 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯은 마지막으로 건조공정을 통해 제품생산을 완료한다. 먼저 버섯의 수분 및 진균류 배양액의 수분을 제거하기 위해서, 환기구를 완전히 연 상태에서 40∼45℃의 온도로 4시간 정도 건열열풍시킨다. 그 다음 환기구는 반만 연 상태에서 55℃까지 서서히 온도를 올려주면서 8시간 정도 계속 건조시킨 다음 환기구를 닫은 상태에서 55℃에서 3∼5시간 후기건조시켜 주면 거의 건조가 끝난 상태가 된다. 여기서부터 60℃로 온도를 상승시켜 1 시간 정도 건조시키면 완전히 건조작업이 끝나게 되는데, 이것이 마무리건조 단계다. 건조가 완전히 끝난 버섯의 수분함량은 13∼14%정도이며 최종건조된 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯은 그 자체로 이용되거나 좀더 섭취를 용이하게 해주기 위해 분쇄된 분말형태로 하여 환, 정제, 캡슐 등으로 가공될 수 있다.
이하 본 발명의 구체적인 방법 및 작용을 실시예를 통하여 상세히 설명하고자 하지만 본 발병의 권리범위가 이들 실시예에만 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 콜레스테롤저하 및 비만치료 홍국표고버섯 제조
상기 공정에서 기술한 방법대로 홍국균 (Monascus purpureusWent IFO 4513)을 액체배양하여, 표고버섯 (Lentinus edodes) 자실체 10g당 1mL의 홍국균 배양액을 첨가하여 27℃에서 12시간 혼합배양하여 이차대사산물 생성을 촉진해 건조공정을 거쳐 콜레스테롤 저하 및 비만치료 홍국표고버섯을 제조했다. 홍국을 배양하기 위해 1 L 배플드 플라스크 (baffled flask)에 0.25 L의 증식배지(3g 효모추출물, 5g 펩톤, 3g 맥아추출물, 340g 자당, 10g 포도당, 1g MgCl2·6H20/L)를 넣고 3.5×109의 홍국포자를 접종한 후 26℃에서 150 rpm으로 1∼2일 동안 배양하였다. 상기 배양과정을 통해 증식된 홍국을 이차대사산물 분비를 촉진할 수 있는 발효배지(10g 콩추출물, 22.5g 설탕, 3g NaCl, 3g CaCO3, 40mg ZnCl2, 200mg FeCl3·6H2O, 10mg CuCl2·2H2O, 10mg MnCl2·4H2O, 10mg Na2B4O7·10H2O, 10mg (NH4)6Mo7O24·4H2O/1Liter 증류수)에서 충분히 산소를 공급하면서 26℃에서 6∼10일 동안 배양하였다. 배양에는 배플드 플라스크(baffled plask)나 생물반응기를 이용할 수 있으며, 배플드 플라스크를 이용할 경우 플라스크 1ℓ당 250㎖ 정도의 배지를 공급하고 교반속도는 150 rpm 정도로 하였다.
표고버섯은 수확 직후의 생표고버섯으로 준비하였으며 각각의 중량을 측정하였다. 다음으로 상기 진균류 배양액을 버섯의 갓(pileus)과 대(stipe)를 포함한 표면에 골고루 분무하였는데 총 첨가량은 전체 버섯중량의 10%로 하였다. 다음으로는 27℃에서 12시간 혼합배양하여 이차대사산물 생성을 촉진한 후 일반 버섯의 건조과정을 이용하여 진균류 배양액이 첨가된 특수버섯을 건조하였다. 먼저 환기구를 완전히 연 상태에서 40∼45℃의 온도로 4시간 건열열풍시켰다. 그 다음 환기구를 반만 연 상태에서 55℃까지 서서히 온도를 올려주면서 8시간 건조시킨 다음 환기구를 닫은 상태에서 55℃에서 3∼5시간 건조시켰다. 다음 60℃에서 1시간 건조하였다.
실시예 2. 콜레스테롤저하 및 비만치료 홍국동충하초 제조
실시예 1에서 기술한 방법대로 홍국균 (Monascus purpureus Went IFO 4513)을 액체배양한 후, 동충하초 (Cordyceps sinensis) 10g당 1mL의 홍국균 배양액을 도포하여 27℃에서 12시간 혼합배양하여 이차대사산물 생성을 촉진해 건조공정을 거쳐 콜레스테롤 저하 및 비만치료 홍국동충하초를 제조했다. 동충하초는 수확 직후의 것으로 준비하였으며 상기 진균류 배양액을 표면에 골고루 분무하였는데 총 첨가량은 전체 버섯중량의 10%로 하였다. 다음으로는 27℃에서 12시간 혼합배양하여 이차대사산물 생성을 촉진한 후 상기 공정에서 기술한 방법대로 진균류 배양액이 첨가된 특수버섯을 건조하였다.
실시예 3. 콜레스테롤저하 황국표고버섯 제조
실시예 1에서 기술한 방법대로 황국균 (Aspergillus terreusATCC 20542)을 액체배양하여, 표고버섯 자실체 10g당 1mL의 황국균 배양액을 도포하여 27℃에서 12시간 혼합배양하여 이차대사산물 생성을 촉진해 건조공정을 거쳐 콜레스테롤저하 황국표고버섯을 제조했다.
실시예 4. 콜레스테롤저하 청국표고버섯 제조
제 1 실시예에서 기술한 방법대로 청국균 (Penicillium citrinumATCC 20606)을 액체배양하여, 표고버섯 자실체 10g당 1mL의 청국균 배양액을 도포하여27℃에서 12시간 혼합배양하여 이차대사산물 생성을 촉진해 건조공정을 거쳐 콜레스테롤저하 청국표고버섯을 제조했다.
실시예 5. 홍국표고버섯의 혼합배양을 통한 이차대사산물 증폭여부 측정
제 1 실시예에서 제조된 콜레스테롤 저하 및 비만치료 홍국표고버섯의 이차 대사산물이 홍국균 자체나 표고버섯 자체에 비해 어느 정도 이차대사산물이 증폭되었는지를 측정하기 위해 홍국균 액체 배양액, 표고버섯, 콜레스테롤 저하 및 비만치료 홍국표고버섯으로부터 이차대사산물을 추출하여 High Pressure Liquid Chromatography (HPLC)를 통해 이차대사산물을 분석하였다.
1. 홍국균 액체 배양액 HPLC 시료 준비
발효배지에서 10일간 배양된 홍국균 액체 배양액을 먼저 0.45㎛ 필터로 여과시키고 3N 염산으로 산성화한 후, 같은 양의 에틸 아세테이트로 이차대사산물을 추출하였다. 다음 Speed Vac을 이용하여 에틸 아세테이트를 증발시키고 메탄올 20㎕로 용해시켜 HPLC 시료를 준비하였다.
2. 표고버섯 HPLC 시료 준비
시험관에 표고버섯 5g과 클로로포름/메탄올 (50:50, v/v) 10mL을 넣고 균질기로 균질화한 후, 3N 염산으로 산성화하고, 에틸 아세테이트로 이차대사산물을 추출하였다. 다음 Speed Vac을 이용하여 에텔아세테이트를 증발시키고 메탄올 20㎕로 용해시켜 HPLC 시료를 준비하였다.
3. 콜레스테롤 저하 및 비만치료 홍국표고버섯의 HPLC 시료 준비
콜레스테롤 저하 및 비만치료 홍국표고버섯의 HPLC 시료는 표고버섯의 HPLC시료 준비 방법과 동일한 방법을 사용하였다.
4. HPLC 조건
홍국 액체 배양액, 표고버섯, 콜레스테롤저하 및 비만치료 홍국표고버섯의 시료는 reverse phase HPLC (Waters liquid chromatography)에 의해 분석되었다. 각 시료들의 이차대사산물은 분당 1mL의 flow rate에서 40분 동안 5∼95% 아세토나이트릴의 gradient를 이용하여, Waters NovaPak C18 column (0.8 × 10 cm) 에 의해 분리되었다. Detection 은 photo diode array를 이용하였다.
도 2, 도 3과 도 4를 비교하여 보면, 도 4에서 전반적으로 peak의 길이가 2배 이상 길어진 사실로 보아 혼합배양과정을 통해 생성된 이차대사산물의 양이 많아졌음을 알 수 있었고, retention time 0.592 min와 17.540 min에서 홍국 액체 배양액과 표고버섯에서는 극히 미량으로 존재하는 이차대사산물이 콜레스테롤저하 및 비만치료 홍국표고버섯에서 대량으로 생성되었음을 알 수 있었다. 이를 OD값으로 측정해본 결과 홍국 액체 배양액과 표고버섯에서 생성된 이차대사산물의 양에 비해 콜레스테롤저하 및 비만치료 홍국표고버섯의 이차대사산물의 양이 3-4배 정도 증가했음을 알 수 있었다.
실시예 6. 홍국표고버섯의 콜레스테롤 저하 효과
실험에 사용된 쥐는 Sprague-Dawley (SD) 수컷이며, 생후 5주령이고 150∼180g을 사용하였다. 각 실험군과 대조군에는 최소한 5마리 이상의 쥐를 가지고 실험하였다. 콜레스테롤 저하효과를 보기 위해서는 우선 쥐에서 고콜레스테롤증을 유발하기 위해 일반 실험용 쥐의 사료에 라드(lard) 25%와 콜레스테롤 2%를 섞은 고지혈증 유발사료를 처음 2주 동안 급이하여 고콜레스테롤증 또는 고지혈증을 유발시킨 후 쥐의 꼬리 정맥에서 혈액을 채취하여 바로 15,000rpm에서 15분 동안 원심분리하여 혈청만 추출하여 4℃에 보관하였다. 다음으로 상기 실시예를 통해 준비된 콜레스테롤 저하 홍국표고버섯을 아래 표에서와 같이 준비하여 상기 고지혈증 유발사료의 10% 중량으로 섞어 12시간마다 한번씩 쥐에게 자유급이 방법으로 6일동안 먹였다. 쥐의 꼬리 정맥에서 혈액을 3일 간격으로 채취하여 혈청만 추출하여 콜레스테롤 함량분석에 사용하였다.
쥐의 혈중 콜레스테롤 함량은 다음과 같은 방법으로 측정하였다. 쥐의 혈청 0.1㎖를 0.3㎖의 33% KOH (v/v)와 3㎖의 95% 에탄올(v/v)로 60℃에서 15분 동안 검화시켰다. 검화 반응이 끝난 후, 10㎖의 헥산으로 콜레스테롤을 추출한 후 헥산층의 1㎖를 다른 시험관에서 증발시켰다. 이 시험관에서 콜레스테롤 에스테라제, 콜레스테롤 옥시다제, 퍼옥시다제를 이용하여 반응시킨 다음, 500nm에서의 흡광도를 측정한 후, 표준곡선과 비교하여 혈중 콜레스테롤 함량을 계산하였다. 결과는 다음의 도 5, 도 6, 도 7 및 표 1과 같다. 이에 의하면 홍국 배양액만을 6일 급이한 경우는 홍국의 콜레스테롤 저하효과가 5% 미만이었고 일반 표고버섯만을 급이한 경우는 대조군에 비해 30% 정도의 혈중 콜레스테롤 저하효과를 보였다. 이에 반해 동량의 홍국 배양액과 동량의 표고버섯이 혼합배양되어 생산된 홍국표고버섯의 경우 홍국 배양액이나 일반 표고버섯만을 단독급이한 경우에 비해 혈중 콜레스테롤의 저하율이 50 - 60% 에 이를 정도로 저하효과가 훨씬 뛰어났다. 다시 말해 홍국 배양액과 표고버섯의 혼합배양을 통해 이차대사산물의 생성 및 분비를 촉진하는 혼합배양공정시 이로 인해 증폭된 이차대사산물로 인해 혈중 콜레스테롤의 저하율이 50 - 60%에 이를 정도로 뛰어난 콜레스테롤 저하 특수버섯이 생산됨을 알 수 있다.
[표 1]
홍국표고버섯의 콜레스테롤 저하효과
실시예 7. 홍국표고버섯의 비만치료 효과
상기 실시예 6에서 기술한 바와 같이 우선 쥐에서 고지혈증 유발사료를 통해 비만을 유발시켰다. 다음으로 상기 실시예1를 통해 준비된 홍국표고버섯을 준비하여 상기 사료의 10% 중량으로 섞어 12시간마다 한번씩 쥐에게 자유급이 방법으로 6일동안 먹였다. 1주일 후 쥐의 몸무게를 측정하였다. 결과는 도 8과 표 2와 같이 단기간의 급이에도 불구하고 대조군에 비해 5-10%에 해당하는 체중감소효과를 보였다.
[표 2]
홍국표고버섯의 비만치료 효과
실시예 8. 홍국동충하초의 콜레스테롤 저하 효과
상기 실시예 6에서 기술한 바와 같이 우선 쥐에서 고지혈증 유발사료를 통해 고콜레스테롤증 또는 고지혈증을 유발시켰다. 다음으로 상기 실시예2를 통해 준비된 홍국동충하초를 준비하여 상기 고지혈증 유발사료의 10% 중량으로 섞어 12시간마다 한번씩 쥐에게 자유급이 방법으로 6일동안 먹였다. 쥐의 혈중 콜레스테롤 함량은 상기 실시예 6에서 기술한 바와 같은 방법으로 측정하였다. 결과는 다음의 표 3과 같다. 홍국동충하초의 경우 역시 20-30% 정도로 상당히 뛰어난 콜레스테롤 저하 효과를 보였다.
[표 3]
홍국동충하초의 콜레스테롤 저하 효과
실시예 9. 황국표고버섯의 콜레스테롤 저하 효과
상기 실시예 6에서 기술한 바와 같이 우선 쥐에서 고지혈증 유발사료를 통해 고콜레스테롤증 또는 고지혈증을 유발시켰다. 다음으로 상기 실시예3를 통해 준비된 황국표고버섯을 준비하여 상기 고지혈증 유발사료의 10% 중량으로 섞어 12시간마다 한번씩 쥐에게 자유급이 방법으로 1주동안 먹였다. 쥐의 혈중 콜레스테롤 함량은 상기 실시예 6에서 기술한 바와 같은 방법으로 측정하였다. 결과는 다음의 표 4와 같다. 황국표고버섯의 경우 역시 30-40% 정도로 상당히 뛰어난 콜레스테롤 저하 효과를 보였다.
[표 4]
황국표고버섯의 콜레스테롤 저하 효과
실시예 9. 청국표고버섯의 콜레스테롤 저하 효과
상기 실시예 6에서 기술한 바와 같이 우선 쥐에서 고지혈증 유발사료를 통해 고콜레스테롤증 또는 고지혈증을 유발시켰다. 다음으로 상기 실시예 4를 통해 준비된 청국표고버섯을 준비하여 상기 고지혈증 유발사료의 10% 중량으로 섞어 12시간마다 한번씩 쥐에게 자유급이 방법으로 6일동안 먹였다. 쥐의 혈중 콜레스테롤 함량은 상기 실시예 6에서 기술한 바와 같은 방법으로 측정하였다. 결과는 다음의 표 5와 같다. 청국표고버섯의 경우 역시 20-30% 정도로 상당히 뛰어난 콜레스테롤 저하 효과를 보였다.
[표 5]
청국표고버섯의 콜레스테롤 저하 효과
본 발명은 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯과 그 가공품에 관한 것이다. 특히 본 발명은 혈중 콜레스테롤 저하효과가 이미 입증된바 있는 콜레스테롤 저하물질을 함유한 진균류 배양액을 버섯의 건조과정에 이용함으로써 콜레스테롤 저하기능이 부여된 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯을 특징으로 한다. 특히 본 발명에서는 음식물형태로 쉽게 섭취될 수 있는 버섯에 콜레스테롤 저하 기능성을 부여함으로써, 콜레스테롤 수치조절이 요구되는 현대인의 식단에 추가로 따로 섭취해야되는 번거로움이 없이 음식섭취를 통해 혈중 콜레스테롤 수치를 낮추어줌으로써 현대인에 가장 위협적인 건강문제로 다가온 심혈관질환의 예방을 통한 국민건강 향상에 기여할 수 있다. 특히 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯의 경우 버섯을 이용한 모든 종류의 음식에 활용될 수 있으며 이를 이용한 가공식품에도 활용될 수 있다. 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수 표고버섯의 경우 이를 이용하여 표고비빔밥, 표고볶음밥, 표고나물, 표고국, 표고찌개, 표고매운탕, 표고육개장, 표고구이, 표고잡채, 표고탕수육, 표고팔보채, 표고냉채, 표고전골, 표고덮밥, 표고튀김, 표고냄비요리, 표고조림, 표고전, 표고만두, 표고스프, 표고양념구이, 표고야채볶음, 표고밥 등으로 요리하면 콜레스테롤 저하효과를 음식물의 섭취와 동시에 얻을 수 있다. 이러한 요리 이외에도 콜레스테롤 저하 건조표고를 분말화하여 만들어지는 표고가루를 천연조미료로 사용하게 되면 거의 모든 음식물에 사용이 가능하다. 즉 콜레스테롤 저하 표고버섯으로 만든 모든 음식물을 섭취하게 되면 영양의 공급과 동시에 혈중 콜레스테롤 조절이라는 건강증진효과를 가질 수 있다.
본 발명의 또 다른 효과는 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯의 상품화를 통해 농가소득의 향상에 기여할 수 있다는 점이다. 본 발명에서 기술한 바와 같이, 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯은 일반 버섯의 건조과정에 진균류 배양액을 단순히 추가하여 생산되는 건조버섯으로써 고부가가치를 가지는 특용작물이다. 이는 국내시장의 농산물 수입개방을 통해 점차 늘어나고 있는 수입농산물에 대해 차별성 뿐 아니라 국제시장에서의 경쟁력을 가지는 대한민국 특산품으로 개발할 수 있다. 예를 들어 장기저장이 어려운 생버섯의 경우는 국산의 시장점유가 훨씬 용이하나, 건조버섯은 생버섯과는 달리 저장과 운송이 용이하므로 가격이 저렴한 수입 중국산 건조버섯과 경쟁이 심하다. 이로 인해 일본의 경우 건표고 생산량은 11,000톤 정도로 감소 추세에 있으나 중국은 30,000톤으로 증가되고 있다. 따라서 뚜렷한 품질 및 차별성을 가지는 고품질 건조버섯 즉 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯의 상품화시 버섯재배농가의 소득향상에 크게 기여할 수 있다.
본 발명의 또 다른 효과는 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯을 이용하여 여러 가공품을 생산할 수 있다는 점이다. 사람과 같은 콜레스테롤 대사과정을 가지는 온혈동물에게서는 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯의 효과가 거의 비슷하다고 볼 수 있으므로 가축이나 애완동물 등 경제가치를 가지는 동물들을 대상으로 하는 가축사료로도 가공이 가능하다.

Claims (7)

  1. 진균류 배양액을 일반 버섯에 첨가하여 생산된 콜레스테롤 저하 및 비만치료 특수버섯
  2. 제1항에 있어서, 진균류 배양액은 홍국(Monascus), 황국(Aspergillus), 청국(Penicillium) 속(Genus)에 속하는 포함되는 미생물 중 하나 이상 또는 이들의 혼합 미생물을 고체 또는 액상 발효시킴으로써 콜레스테롤 저하물질이 이차대사산물로 포함되어 있는 배양액을 말함
  3. 제1항에 있어서, 진균 배양액이 버섯 중량의 0.1-30%로 첨가된 버섯
  4. 제1항에 있어서, 진균 배양액이 버섯에 첨가된 후 20-35℃에서 3-72시간 배양하는 혼합배양공정을 거쳐서 생산된 버섯
  5. 제1항의 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯을 이용하여 생산된 버섯 가공식품
  6. 제1항의 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯을 이용하여 생산된 가축용 사료
  7. 제1항의 콜레스테롤저하 및 비만치료 특수버섯을 이용하여 생산된 애완동물용 사료
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