KR20030081353A

KR20030081353A - 정제된 리포펩티드의 제조 방법

Info

Publication number: KR20030081353A
Application number: KR10-2003-7008117A
Authority: KR
Inventors: 키이스데니스; 라이장-지
Original assignee: 큐비스트 파마슈티컬즈 인코포레이티드
Priority date: 2000-12-18
Filing date: 2001-12-17
Publication date: 2003-10-17
Also published as: JP4927003B2; EP2261237A3; CN102070703B; JP2004525108A; AU2002246688A1; NZ554405A; EP2261237A2; IL230244A; CN1982330B; KR20090122469A; EP1908770B2; EP1908770A1; ES2377931T3; US20030045678A1; CA2432096A1; HK1108582A1; ES2377931T5; KR20110127732A; NZ571597A; EP2261237B1

Abstract

본 발명은 결정질 및 결정질 유사 형태의 리포펩티드, 예컨대 종래의 항생제에 내성이 있는 균주를 비롯한 그람 양성균에 대해 유효 살균 활성을 갖는 리포펩티드 항생제인 답토마이신에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 리포펩티드, 예컨대 종래의 항생제에 내성이 있는 균주를 비롯한 그람 양성균에 대해 유효 살균 활성을 갖는 리포펩티드 항생제인 답토마이신의 정제 방법에 관한 것이다. 본 발명은 리포펩티드의 정제형을 포함하는 약학 조성물과 이들 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

정제된 리포펩티드의 제조 방법{METHODS FOR PREPARING PURIFIED LIPOPEPTIDES}

항생제 내성 세균에 의해 유발되는 감염을 비롯한 그람 양성 감염 발병율의 급속한 증가는 새로운 종류의 항생제 개발에 다시 관심을 불러일으키는 발단이 되었다. 이러한 종류 중 하나는 리포펩티드 항생제로서, 답토마이신을 포함한다. 답토마이신은 심각하고 생명에 치명적인 질병을 일으키는 임상적으로 관련된 그람 양성균에 대해 시험관내 유효 살균 활성을 갖는다. 이들 세균의 비제한적인 예로는 내성 병원체, 예컨대 반코마이신 내성 엔테로코커스(enterococci) (VRE), 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) (MRSA), 글리코펩티드 중재 감수성 스타필로코커스 아우레우스(GISA), 코아귤라제-음성 스타필로코커스 (CNS), 및 페니실린 내성 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumoniae) (PRSP) 등이 있으며, 이들에 대한 대체 치료법은 거의 없다. 예컨대 문헌[Tally et al., 1999, Exp. Opin. Invest. Drugs 8: 1223-1238] 참조. 답토마이신의 억제 효과는 시험관내 및 생체내에서 신속한 농도 의존적 살균 효과로서, 생체내에서 비교적 장기간 동안 항생제 사용 후에 농도 의존 효과를 나타낸다.

답토마이신은 Baltz의 문헌[Biotechnology of Antibiotics, 2nd Ed., ed. W. R. Strohl (New York : Marcel Dekker, Inc.), 1997, pp. 415-435]에 개시되어 있다. 답토마이신은 LY 146032로도 알려져 있으며, 스트렙토마이시스 로세오스포러스(Streptomyces roseosporus) 발효로 유도할 수 있는 환상의 리포펩티드 항생제이다. 답토마이신은 에스.로세오스포러스의 인자 A-21978C₀형 항생제의 일원으로서, 환상 13-아미노산 펩티드의 N-말단 트립토판에 결합된 데카노일 측쇄로 구성된다(도 1). 답토마이신은 대부분의 그람 양성균에 대해서 상당히 효과적이고; 대단히 신속하게 작용하는 살균제이며; 내성율이 낮고 항생제 내성 유기체에대해서도 효과적이기 때문에 활성 프로필이 양호하다. 비제한적인 예로서 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(MRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스(VRE)를 비롯한 세균이 유발하는 심각한 감염을 치료하기 위한 각종 제제에 사용할 화합물이 현재 개발중에 있다.

다수의 미국 특허는 답토마이신(LY 146032)을 비롯한 A-21978C₀항생제와 답토마이신 관련 리포펩티드를 개시하고 있다. 또한, 이들 특허는 A-21978C₀항생제와 답토마이신 관련 리포펩티드를 제조 및 분리하는 방법도 개시하고 있다.

미국 특허 RE32,333호, RE32,455호, 4,800,157호, 4,874,843호, 및 4,885,243호에는 스트렙토마이시스 로세오스포러스의 발효 배양물로부터 답토마이신을 합성 및 분리하는 방법이 기재되어 있다. 미국 특허 RE32,310호, RE32,311호, 4,537,717호, 4,482,487호 및 4,524,135호는 A-21978C₀항생제와 A-21978C₀항생제를 탈아실화하고 펩티드 핵을 재아실화하는 방법, 그리고 이러한 방법으로 제조된 항생제 유도체를 개시하고 있다. 미국 특허 5,912,226호(이하 '226 특허)는 답토마이신의 제조 과정에서 생긴 2종의 불순물인 무수(anhydro)-답토마이신 및 답토마이신의 β-이성체를 확인 및 분리하는 것을 개시하고 있다. 이들 미국 특허 중에서 리포펩티드의 순도를 증가시키는 방식으로 리포펩티드를 침전 또는 결정화하는 방법을 개시하고 있는 특허는 없었다.

미국 특허 4,439,425호(이하 '425 특허)는 결정질 리포펩티드와 리포펩티드를 결정화하는 방법을 개시하고 있다. '425 특허에 개시된 리포펩티드는 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드와 구조적으로 다르다. 미국 특허 5,336,756호(이하 '756 특허)는 또한 헥사펩티드를 포함하는 결정질 환상 리포펩티드를 개시하고 있다. '756 특허에 개시된 결정질 환상 리포펩티드도 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드와 구조적으로 상이하다. '756 특허는 수성 n-프로판올이 결정화 용매로서 사용된 경우 에치노칸딘형 화합물인 리포펩티드를 얻을 수 있다고 설명하고 있다. 예컨대, '756 특허의 1-2 컬럼 참조. '425 특허에도 '756 특허에도 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 방법은 개시되어 있지 않으며, 또한 스트렙토마이시스가 생성한 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 방법도 개시되어 있지 않다.

답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 방법을 개발하여 이들 리포펩티드에 대한 개선된 정제 방법을 제공하는 것이 유리하다. 또한, 답토마이신 또는 기타 답토마이신 관련 리포펩티드의 결정질 또는 고도로 정제된 침전형은 세균 감염을 치료하기 위한 약학 조성물을 제형화하는 데 유용하다. 또한, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드의 결정질 또는 고도로 정제된 침전형은 멸균 제품, 특히 부피가 큰 멸균 제품을 제조하는 방법에 유용하다. 따라서, 결정질 또는 침전된 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드를 제조하는 방법과 이렇게 하여 제조된 리포펩티드의 결정질 또는 침전된 형태가 필요한 실정이다. 그러나, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시켜, 결정화 또는 침전전보다 그 후에 리포펩티드를 더욱 순수하게 하는 데 효과적인 간단하고 확고한 방법은 없었다.

관련 출원의 상호참조

본 출원은 참고로 인용한 2000년 12월 18일에 출원한 미국 가명세서 출원 60/256,268호; 2001년 3월 9일에 출원한 가명세서 출원 60/274,741호; 2001년 12월 13일에 출원한 가명세서 출원 ____호; 및 2001년 12월 13일에 출원한 가명세서 출원 ____호의 우선권을 주장한다.

본 발명의 기술 분야

본 발명은 결정질 및 결정질 유사 형태의 리포펩티드, 예컨대 종래의 항생제에 내성이 있는 균주를 비롯한 그람 양성균에 대해 유효 살균 활성을 갖는 리포펩티드 항생제인 답토마이신에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유형 형태를 제조하는 방법과 답토마이신을 비롯한 리포펩티드를 정제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 리포펩티드의 정제형을 포함하는 약학 조성물과 이들 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

도 1은 답토마이신의 구조를 도시한다.

도 2는 실시예 12에 개시된 방법으로 제조된 답토마이신의 성게형 결정 또는 결정 유사 입자의 광현미경사진을 도시한다.

도 3은 답토마이신의 침상형 결정의 광현미경사진을 도시한다.

도 4는 답토마이신의 막대형 광현미경사진을 도시한다.

도 5는 100X 확대한 답토마이신 샘플의 광현미경사진을 도시한다. 평면 투과광(A)을 사용한 비정질 답토마이신 및 교차 편광(B)을 사용한 비정질 답토마이신의 광현미경사진이 도시되어 있다. 평면 투과광(C 및 E)을 사용한 답토마이신 결정 및 교차 편광(D 및 F)을 사용한 답토마이신 결정의 광현미경사진이 도시되어 있다. 실시예 7에 개시된 프로토콜로 답토마이신 결정을 제조하였다.

도 6은 비정질 답토마이신의 x-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 7은 실시예 7에 개시된 프로토콜로 제조한 답토마이신 결정의 x-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 8은 실시예 7에 개시된 프로토콜로 제조한 제2의 답토마이신 결정 샘플의 x-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 9는 편광에 노출시 답토마이신의 결정 유사 입자의 복굴절을 도시한다. 결정 유사 입자는 실시예 12에 개시된 방법으로 제조하였다.

도 10은 예시적인 결정화 방법의 공정도를 도시한다.

도 11은 결정화 또는 침전을 사용하지 않은 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 이 제조법에서는 세균 발효로 답토마이신을 포함하는 발효 배양물을 생성한 다음, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 한외여과, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 용매 제거용 음이온 교환 크로마토그래피, 발열원 제거용 한외여과, 역삼투압을 이용하여 답토마이신을 정제하고 답토마이신을 병에 넣는다. 예컨대 이러한 종류의 방법에 대한 상세한 내용은 참고로 인용한 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44274호 참조.

도 12는 발효, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 한외여과, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 13 참조.

도 13은 발효, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 14 참조.

도 14는 발효, 정밀여과, 크기 배제 한외여과, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 15 참조.

도 15는 발효, 정밀여과, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 16 참조.

도 16은 답토마이신의 환상 리포펩티드 유사체인 CB-131547의 구조를 도시한다.

발명의 상세한 설명

발명의 목적

본 발명의 목적은 리포펩티드의 결정화 또는 침전 방법을 제공하는 것이다.일 구체예에서, 이 방법은 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 데 사용된다. 또 다른 구체예에서, 이 방법은 결정화 또는 침전 전의 리포펩티드의 순도와 비교하여 리포펩티드의 순도를 증가시킨다. 이 방법은 리포펩티드의 비정질 제제를 제공하는 단계, 결정질 또는 침전된 결정 유사 리포펩티드가 비정질의 리포펩티드보다 순수한 조건 하에서 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계를 포함한다. 일 구체예에서, 비정질 제제의 순도는 92% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 순도는 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 80% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 60% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 40% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 20% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 추가의 바람직한 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 10% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 특히 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 것을포함하는 리포펩티드의 제조 및 정제 방법을 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전 단계는 리포펩티드를 정제하는 데 사용된다. 바람직한 구체예에서, 결정화 또는 침전은 회분식 결정화 또는 침전으로 실시된다. 또 다른 구체예에서, 공정은 리포펩티드, 바람직하게는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 공업적으로 제조하기 위한 대규모 공정이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 발효로 생산된다. 그 다음 발효 생성물을, 결정화 또는 침전을 비롯한 각종 정제 기법으로 정제한다. 일 구체예에서, 정밀여과, 크기 배제 한외여과 및/또는 음이온 교환 크로마토그래피를 비롯한 다른 정제 기법과 병행하여 결정화 또는 침전 단계를 사용할 수 있다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전을 이용하지 않는 정제 공정에 사용되는 1 이상의 정제 기법 대신에 결정화 또는 침전 단계를 이용한다. 또 다른 구체예에서, 결정화 또는 침전 단계를 사용하여, 결정화 또는 침전 단계를 포함하지 않는 기타 단계들과 비교하여 정제도를 증가시킨다. 바람직한 구체예에서, 이 방법은 결정화 또는 침전 후에 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 회수하는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 다른 목적은 고도로 정제된, 예컨대 멸균의 결정질 또는 결정 유사 형태의 리포펩티드를 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태는 성게형 형상(서로 연결된 침상의 클러스터로서 시각적으로 성게와 비슷함)(도 2 참조), 침상형(도 3), 막대형(도 4), 평판형 또는 박편형을 비롯한 임의의 결정질 또는 결정 유사 형상을 가질 수 있다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사리포펩티드는 순도가 80% 이상이며, 순도는 85%, 90% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태는 순도가 95% 이상이며, 순도는 96%, 97%, 98% 이상일 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태를 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 일 구체예에서, 약학 조성물은 경구 투여용 장용제피의 형태일 수 있으며, 미크론화된 입자 또는 미소구의 형태로 제형화된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 피험체에게 약학 조성물을 투여하는 방법을 제공한다.

정의

달리 정의되지 않는다면, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 업자들이 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다. 본 발명의 실시는, 특별히 지정하지 않는다면, 종래의 화학, 생화학, 생물리학 및 미생물학 기법과 본 명세서에서 사용된 기본 전문용어를 사용한다.

용어 "리포펩티드"는 펩티드 부분에 공유 결합된 지질 유사 부분과, 이의 염, 에스테르, 아미드 및 에테르를 포함하는 분자를 의미한다. 용어 "리포펩티드"는 또한 하나 이상의 아미노, 카르복실레이트 또는 히드록실기가 보호된 리포펩티드의 보호형을 포함한다. 예컨대, 보호기의 예에 대해서는 문헌["Protective Groups in Organic Synthesis" by Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, New York, 1981] 참조. 일 구체예에서, 리포펩티드는 항생제이다. 또 다른 구체예에서,리포펩티드는 LY 303366, 에치노칸딘류, 뉴모칸딘류, 아쿨레아신류, 비스코신, 서팩틴, 플리파스타틴 B1, 암포마이신 또는 미국 특허 5,629,288호에 개시된 리포펩티드 유도체이다. 이들 리포펩티드는 당업계에 공지되어 있다. 예컨대, 미국 특허 5,202,309호 및 국제 PCT 공개 공보 WO 00/08197호 참조. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 관련 분자이다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신이다.

"답토마이신 관련 분자"는 특히 답토마이신, A54145 또는 답토마이신과 구조적으로 관련된 기타 리포펩티드(예, 답토마이신 관련 리포펩티드), 예컨대 이들 분자 내에 존재하는 임의의 키랄 중심에서 만들어질 수 있는 모든 입체이성체를 포함한다.

"답토마이신 관련 리포펩티드"는 미국 특허 4,537,717호, 4,482,487호, RE32,311호, RE32,310호, 및 현재 미국 출원 09/547,357호로 재발행된 5,912,226호에 개시된 리포펩티드를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 답토마이신 관련 리포펩티드는 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44272호, 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44274호 및 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44271호에 개시된 것들을 포함하며, 이들 국제 출원은 본 명세서에서 참고 인용한다. 전술한 출원에 개시된 답토마이신 관련 리포펩티드는 오르니틴 및/또는 키누린 잔기, 및/또는 답토마이신의 지방산 측쇄가 변형된 합성 및 반합성 리포펩티드에 관한 것이다. 답토마이신 관련 리포펩티드는 또한, 답토마이신의 n-데카노일 지방산 측쇄가 n-옥타노일, n-노나노일, n-운데카노일, n-도데카노일, n-트리데카노일 또는 n-테트라데카노일 지방산 측쇄로 치환된 A-21978C₀항생제를 포함한다.

용어 "답토마이신"은 α-아스파르틸기를 포함하는 인자 A-21978C₀형 항생제의 n-데카노일 유도체를 의미한다. "답토마이신"은 LY 146032와 동의어이다.

용어 "무수-답토마이신"은 답토마이신의 α-아스파르틸기가 숙시노이미도기로 환형화된 답토마이신 관련 리포펩티드를 의미한다. 예컨대 무수-답토마이신의 구조에 대한 '226 특허 참조.

용어 "β-이성체" 또는 "답토마이신의 β-이성체"는 α-아스파르틸기 대신에 β-아스파르틸기를 포함하는 답토마이신 관련 리포펩티드를 의미한다. 예컨대, 답토마이신의 β-이성체 구조에 대해서는 '226 특허 참조.

용어 "분리된"은 혼합물 중에 존재하는 화합물이 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%인 화합물 또는 생성물을 의미한다. 또한, 용어 "분리된"은 혼합물군 중에 존재하는 화합물이 적어도 5∼10%, 10∼20%, 20∼30%, 30∼40%, 40∼50%, 50∼60%, 60∼70%, 70∼80% 또는 80∼90%인 화합물을 의미한다. 혼합물 중의 화합물의 비율(%)은, 화합물의 순도를 측정하는 것에 대해 하기에 개시된 바와 같이, 당업계에 공지된 수단으로 측정할 수 있다.

"거의 순수한"은 목적하는 화합물 95% 이상을 포함하는 샘플을 의미한다. 바람직하게는, 샘플의 95% 이상 내지 97% 이상이 답토마이신인 경우 답토마이신은 "거의 순수하다". 유사하게, 답토마이신 관련 리포펩티드는, 샘플의 95% 이상 내지97% 이상이 답토마이신 관련 리포펩티드인 경우 "거의 순수하다".

답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는, 샘플 중 98% 이상 내지 99% 이상이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드인 경우 "실질적으로 순수하다".

다른 화합물이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 1% 이하로 존재하는 경우 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "거의 포함하지 않는다".

다른 화합물이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 0.5% 이하로 존재하는 경우 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "실질적으로 포함하지 않는다".

다른 화합물이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 0.1% 이하로 존재하는 경우 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "포함하지 않는다". 대안적으로, 검출 한계가 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 약 0.05% 이하인 최대 감도의 조건 하에서 화합물이 HPLC로 검출될 수 없는 경우에는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "포함하지 않는다".

"정제된" 답토마이신은 거의 순수한 답토마이신, 실질적으로 순수한 답토마이신, 또는 이의 염, 또는 다른 화합물을 거의 포함하지 않거나, 실질적으로 포함하지 않거나 또는 포함하지 않는 답토마이신 또는 이의 염을 의미한다. 마찬가지로, "정제된" 답토마이신 관련 리포펩티드는 거의 순수한 답토마이신 관련 리포펩티드, 실질적으로 순수한 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 염, 또는 다른 화합물을 거의 포함하지 않거나, 실질적으로 포함하지 않거나 또는 포함하지 않는 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 이의 염을 의미한다.

"미정제" 답토마이신은 순도가 90% 미만인 답토마이신 또는 이의 염을 의미한다. 마찬가지로, "미정제" 답토마이신 관련 리포펩티드는 순도가 90% 미만인 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 이의 염을 의미한다.

"반정제" 답토마이신은 순도가 90% 이상 95% 미만인 답토마이신 또는 이의 염을 의미한다. 유사하게, "반정제" 답토마이신 관련 리포펩티드는 순도가 90% 이상 95% 미만인 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 이의 염을 의미한다.

답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 또 다른 리포펩티드의 순도는 약학 조성물로 제형화하기 전의 리포펩티드를 의미한다. 리포펩티드의 순도는 "순도(%)"로 언급된다. 순도의 수치가 결정질 제제의 결정도의 척도는 아니다. 핵자기 공명(NMR), 기체 크로마토그래피/질량 분광기(GC/MS), 액상 크로마토그래피/질량 분광기(LC/MS) 또는 미생물학적 분석 등의 임의의 수단으로 순도를 측정할 수 있다. 답토마이신의 순도를 측정하는 하나의 바람직한 수단은 분석적 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의한 것이다. 분석적 HPLC의 2가지 방법은 참고로 인용한 2001년 7월 26일에 공개된 WO 01/53330호에 개시되어 있다.

"리포펩티드 결정"은 리포펩티드 또는 리포펩티드 염의 1 이상의 결정을 의미한다. 결정으로서 리포펩티드의 측정은, 특히 광학 현미경, 전자 현미경, x-선 분말 회절, 고체 상태 핵자기 공명(NMR) 또는 편광 현미경을 비롯한 임의의 수단으로 측정할 수 있다. 결정 길이, 직경, 폭, 크기 및 형상을 측정하고, 결정이 단일 입자로서 존재하는지 또는 다결정질인지를 결정하는 데 현미경을 사용할 수 있다.

하나의 수단, 예컨대 육안으로 또는 광학 현미경이니 편광 현미경으로 측정할 때 결정질 특성을 갖는 것으로 측정되지만, 또 다른 수단, 예컨대 x-선 분말 회절로 측정시 결정질 특성을 갖지 않는 것으로 나타나는 경우, 리포펩티드 또는 리포펩티드 입자는 "결정 유사(crystal-like)" 형태이다. "결정 유사" 리포펩티드는 어떤 조건에서는 결정질이지만, 다른 조건에서는 비결정질이 될 수 있다.

"결정질 리포펩티드" 또는 "리포펩티드의 결정질 형태"는 리포펩티드 결정을 포함하는 리포펩티드 또는 이의 염의 제제를 의미한다. 일 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 비정질 리포펩티드를 일정량 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 50 중량% 이상 포함한다. 또 다른 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 포함한다. 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 50∼60%, 60∼70%, 70∼80%, 80∼90% 또는 90∼95% 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 95% 이상, 예컨대 리포펩티드 결정을 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%, 또는 리포펩티드 결정을 100% 포함한다. 결정질 리포펩티드는 대체로 리포펩티드 결정을 95∼100% 포함할 수 있다. 리포펩티드 결정의 중량%는 약학 조성물로 제형화하기 전의 리포펩티드 제제를 의미하는 것이다.

리포펩티드의 "비정질" 형태는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드(또는 결정 유사 입자)가 거의 또는 전혀 없는 리포펩티드 제제를 의미하다. 일 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드 20 중량% 미만을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드를 10 중량% 미만으로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드를 5 중량% 미만으로 포함한다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드 1 중량% 미만을 포함한다.

"회분식 결정화"란 해당 리포펩티드를 용액 중의 결정화 시약과 혼합하여 리포펩티드를 용액 중에서 결정화하는 방법을 의미한다. "회분식 침전"이란 리포펩티드를 용액 중의 침전 시약과 혼합하여 리포펩티드를 용액 중에서 침전시키는 방법을 의미한다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전된 제제를 용액으로부터 수거한다. 또 다른 구체예에서, 결정화 또는 침전 제제를 여과 또는 원심분리로 수거한다.

"유기 침전제"는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG MME) 또는 화학적으로 유사한 화합물을 의미한다.

"염"은 이온성 화합물을 의미한다. 이들 이온성 화합물은 침전제로서 작용할 수 있다.

"저 분자량 알코올"은 1 이상의 알코올 작용기와 8개 이하의 탄소 원자를 포함하는 유기 화합물이다. 예를 들어, 저 분자량 알코올의 비제한적인 예로는 메탄올, 이소프로판올 및 t-부탄올 등이 있다.

"다가 알코올"은 1 초과의 알코올기와 8개 미만의 탄소 원자를 포함하는 화합물이다. 다가 알코올의 예로는 1,6-헥산디올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜,글리세롤, 1,2-프로판디올, 2-메틸-2,4-펜탄디올 및 1,4-부탄디올 등이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.

"용기"는 제품을 유지하는 리셉터클을 의미한다. 예를 들어, 용기는 앰플, 유리병, 관, 병 또는 실린더일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

정제된 리포펩티드의 제조 방법

본 발명의 목적 중 하나는, 리포펩티드의 비정질 제제를 제공하는 단계 및 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계를 포함하는 리포펩티드의 정제 방법을 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 결정화 또는 침전을 실시하기 전보다 실시한 후에 순도가 더 높다. 현적, 시팅 드롭(sitting drop) 또는 샌드위치 드롭 증기 확산, 액체-액체 또는 자유 계면 확산, 마이크로투석 또는 투석, 지연형 용매 증발, 승화, 또는 미량회분식 또는 회분식 결정화로 리포펩티드를 결정화할 수 있다. 일반적으로, 리포펩티드는 유사한 방법으로 침전시킬 수 있으며, 회분식 침전으로 리포펩티드를 침전시키는 것이 바람직하다. 바람직한 구체예에서, 결정화된 또는 침전된 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정화 또는 침전된 리포펩티드는 답토마이신이다.

리포펩티드를 본 명세서의 교시 내용에 따라서 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 일 구체예에서, 하기에 개시된 바와 같이 리포펩티드를 포함하는 용액에 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, pH 완충제 및 1가 또는 2가 양이온을 포함하는 염을 제공하고, 침전 또는 결정화를 유발하여 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 또 다른 구체예에서는, 추가의 pH 완충제가 용액 내에 존재하지 않도록 염이완충능을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 염은 2가 양이온을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 제공된 용액은 PEG 또는 PEG-MME, 또는 화학적으로 유사한 화합물을 포함하지 않는다. 일 구체예에서, 리포펩티드를 침전 또는 결정화시키는 방법은 일반적으로,

a) 1가 또는 2가 양이온을 포함하는 염, 선택적인 pH 완충제 및 저 분자량 알코올이나 다가 알코올과 리포펩티드를 혼합하는 단계; 및

b) 적절한 온도 조건 하에서 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시키는 단계를 포함한다.

특히 현미경 검사로 결정 또는 침전물 형성에 대해 샘플을 모니터링할 수 있으며, 산출물을 분광광도계로 분석할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정화 또는 침전된 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다.

또 다른 구체예에서, 하기에 개시된 바와 같은 저 분자량 또는 다가 알코올(들), 염 및 유기 침전제를 포함하는 용액을 제공하여 리포펩티드를 결정화시킬 수 있다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정화된 리포펩티드는 답토마이신이다. 일반적으로 회분식 결정화법에서는 리포펩티드를 용액 중에 용해시키고, 이 용액에 저분자량 알코올, 염, 완충액 및/또는 유기 침전제를 첨가한다. 그 다음 교반 여부와 관련없이 적절한 온도 조건 하에 샘플을 결정화시킨다. 특히 현미경 검사로 결정 형성에 대해 샘플을 모니터링하고, 분광광도계로 산출물을 분석할 수 있다.

전술한 바와 같이, 리포펩티드, 바람직하게는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 1 이상의 알코올의 존재 하에 결정화 또는 침전된다. 바람직한구체예에서, 알코올은 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올이다. 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올의 비제한적인 예로는, 메탄올, 이소프로판올, t-부탄올, 1,6 헥산디올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 1,2-프로판디올, 2-메틸-2,4-펜탄디올 및 1,4-부탄디올 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 알코올은 이소프로판올, t-부탄올, 글리세롤, 1,6-헥산디올, 1,2-프로판디올, 1,4-부탄디올, 프로필렌 글리콜 및/또는 에틸렌 글리콜이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 알코올은 이소프로판올이다.

염은, 특히 포름산마그네슘, 포름산나트륨, 황산암모늄, 인산2수소암모늄, 아세트산칼슘, 아세트산아연, 구연산3나트륨 2수화물, 아세트산마그네슘, 아세트산나트륨, 염화마그네슘, 염화카드뮴, 아세트산암모늄, 염화나트륨 및 황산리튬 등을 포함한다. 일 구체예에서, 염은 1가 양이온, 예컨대 나트륨을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 염은 2가 양이온을 포함한다. 더욱 바람직한 구체예에서, 염은 칼슘 양이온, 마그네슘 양이온 또는 망간 양이온을 포함한다. 추가의 바람직한 구체예에서, 염은 칼슘 2가 양이온을 포함한다. 일 구체예에서, 염은 염화칼슘, 아세트산칼슘, 아세트산아연, 구연산나트륨, 구연산3나트륨 2수화물, 염화마그네슘, 황산리튬, 염화나트륨, 아세트산마그네슘, 아세트산나트륨 또는 망간염, 예컨대 아세트산망간 또는 염화망간이다. 바람직한 구체예에서, 염은 아세트산칼슘이다. 2가 양이온, 예컨대 칼슘 양이온을 포함하는 다른 염의 예는 당업계에 공지되어 있으며, 특히 참고로 인용된 2000 시그마 카탈로그에 제시된 것들을 포함한다. 어떤 이론에도 구애받지 않고, 염 양이온은 리포펩티드 상의 음 전하, 예컨대 답토마이신 상의 4개의 카르복실산을 중화시킬 수 있는 것으로 생각된다. 유기 침전제로는, 특히 평균 분자량이 300∼10,000으로 다양할 수 있는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG-MME) 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 유기 침전제는 PEG 300, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000, PEG 8000 또는 PEG 10,000이다.

pH 5.0∼9.5로 완충된 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 일 구체예에서, 완충 전에 용액의 pH는 약 1.5, 2.0 또는 3.0이다. 일 구체예에서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 pH가 약 5.5∼약 7.5인 용액으로부터 침전 또는 결정화시킨다. 또 다른 구체예에서, 완충액은 pH가 약 5.9∼약 6.3이다. 일 구체예에서, 완충된 용액은 pH 완충제를 사용하여 얻을 수 있다. pH 완충제의 비제한적인 예로는 트리스, 포스페이트, 시트레이트, HEPES, CHES, 아세트산나트륨 또는 2-모르폴리노에탄설폰산(MES), 붕산나트륨, 카코딜산나트륨, 이미다졸 및 구연산3나트륨 2수화물 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 염은 카코딜산나트륨, 아세트산나트륨, 구연산3나트륨 2수화물, HEPES, MES, CHES, 이미다졸, 아세트산칼슘 및 트리스-HCl이다. 더욱 바람직한 구체예에서, pH 완충제는 아세트산칼슘 pH 6.1, 아세트산나트륨 pH 6.1, 카코딜산나트륨 pH 6.5, 구연산3나트륨 2수화물 pH 5.6, HEPES pH 7.5, 이미다졸 pH 8, MES pH 6.0, 아세트산칼슘 pH 6 및 트리스-HCl pH 8.5이다. 또 다른 구체예에서, 완충능을 갖는 염을 사용하여 용액을 완충시킬 수 있다. 바람직한 구체예에서, pH 완충제는 아세트산칼슘 pH 6.1이다.

현적 증기 확산법을 이용하여 2∼40% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.001∼0.5 M 염 및 0.005∼0.2 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 3∼30% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.01∼0.3 M 염 및 0.01∼0.1 M pH 완충제를 포함하는 용액으로부터 침전 또는 결정화시킨다. 더욱 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 5∼20% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.02∼0.1 M 염 및 0.02∼0.07 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 침전 또는 결정화시킨다. 제공된 용액은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG-MME)를 포함할 수도 포함하지 않을 수도 있다.

회분식 결정화법을 사용하여 65∼95% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.001∼0.5 M 염 및 0.001∼0.2 M pH 완충제를 포함하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 바람직한 구체예에서, 70∼90% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.005∼0.04 M 염 및 0.005∼0.04 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 일부 구체예에서, 3∼8% 유기 침전제도 포함하는 용액으로부터 리포펩티드를 결정화시킨다. 더욱 바람직한 구체예에서, 80∼85% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.01∼0.03 M 염 및 0.01∼0.03 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 일부 구체예에서, 용액은 약 4∼5% 유기 침전제, 예컨대 PEG 또는 PEG-MME를 추가로 포함한다. 다른 구체예에서, 제공된 용액은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG-MME)를 포함할 수도 포함하지 않을 수도 있다.

약 0∼약 30℃의 온도에서 리포펩티드를 침전 또는 결정화시켜 각각 침전물 또는 결정을 형성한다. 바람직한 구체예에서, 약 20∼30℃의 온도에서 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킨다. 더욱 바람직한 구체예에서, 약 23∼28℃에서 혼합물을 결정화 또는 침전시킨다. 더욱 더 바람직한 구체예에서는, 약 27℃에서 혼합물을 결정화 또는 침전시킨다. 결정화 또는 침전을 유발할 수 있는 임의의 시간 동안, 바람직하게는 약 1 시간 ∼약 2주간 혼합물을 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 바람직한 구체예에서, 일정 기간, 바람직하게는 약 3∼약 24 시간, 더욱 바람직하게는 약 8∼18 시간 동안 혼합물을 보관한다.

리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 침상형, 막대형, 성게형, 박편형, 판형 또는 이의 클러스터 형상일 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 성게형, 막대형 또는 침상형이다. 결정 또는 결정 유사 입자의 형상은, 특히 광학 현미경이나 전자 현미경으로 결정할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 임의의 선형 치수가 약 0.5 ㎛ 이상인 임의의 크기일 수 있다. 더욱 바람직한 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 5 ㎛ 이상, 더욱 바람직하게는 10 ㎛ 이상이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 50 ㎛ 이상, 더욱 바람직하게는 100 ㎛ 이상이다. 결정의 크기는 당업계에 공지된 임의의 방법으로 결정할 수 있다. 예컨대 문헌[United States Pharmacopeia (USP), pp. 1965-67] 참조.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 성질은 당업자에게 공지된 임의의 방법으로 결정할 수 있다. 측정할 수 있는 성질로는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 크기, 형상, 복굴절 성질, 분말 x-선 회절 성질, 고체 상태 NMR 성질, 융점과열, 빛, 습도 및 분해에 대한 안정성 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 당업자는 분말 x-선 회절에 의해 리포펩티드가 결정질인지 여부를 결정할 수 있다. 분말 x-선 회절은, 샘플이 무작위로 배향된 작은 결정의 콜렉션인 경우 제제가 결정질인지 여부를 측정하는 데 대단히 유용하다. 무작위로 배향된 미세결정 덩어리에 의한 회절은 연구되는 분자와 그 구조에 대한 일련의 선 또는 고리(검출기에 따라 다름) 특성을 산출한다. 바람직한 구체예에서는, 리포펩티드가 결정질인지를 결정하기 위해서 자동화된 분말 회절 기구로 분말 회절을 측정한다. 예컨대, 분말 회절에 대한 Debye-Scherrer법의 논의에 대해서 참고로 인용한 문헌[Atkins et al., Physical Chemistrv, pp. 710-716 (1978)] 참조. 분말 회절에 대한 임의의 검출기가 구비된 당업계에 공지된 임의의 분말 회절분석 기구를 사용하여 회절 패턴을 측정할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 약 24∼28℃의 온도에서 약 3∼24 시간 동안 약 pH 5.0∼9.5의 완충제, 염 및 알코올을 사용하여 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킨다. 바람직한 구체예에서, 염은 완충제로서, 2가 양이온을 포함하며, 알코올은 저 분자량 알코올이고, pH는 약 5.5∼7.5이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 염은 칼슘염이고, 알코올은 이소프로판올이며, pH는 약 5.9∼6.3이다. 용액이 유기 침전제를 포함하는 구체예에서, 유기 침전제는 PEG 4000 또는 PEG 8000인 것이 바람직하다. 또 다른 구체예에서, 12∼18% 글리세롤, 0.3∼0.8 M 염, 0.03∼0.08 M pH 완충제, 및 12∼18% PEG 600을 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 실시예 2∼3에는 고도로 순수한 결정 유사 답토마이신을 침전시키는 방법이 개시되어 있다. 당업자는 본 명세서의 교시 내용으로부터 실시예들에 제공된 결정화/침전 조건을 변형시켜 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 해당하는 다른 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 또한, 본 명세서의 교시 내용에서는 리포펩티드를 정제하는 방법 중 결정화 또는 침전 단계를 1회 실시한 것을 개시하였지만, 당업자는 이러한 명세서의 교시 내용으로부터 리포펩티드를 정제하는 공정 중 결정화 또는 침전 단계를 복수회 실시할 수 있을 것이다. 본 명세서에 개시된 결정화 또는 침전을 복수회 실시하면 리포펩티드의 순도를 추가로 증가시킬 수 있어 유리할 수 있다.

결정화 또는 침전 후에, 당업계에 공지된 임의의 방법으로 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물을 회수할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물은 원심분리 또는 여과로 회수한다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 리포펩티드를 제조하는 대규모 공정 중에 여과 단계를 쉽게 도입할 수 있기 때문에, 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물을 여과로 회수한다. 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물이 회수된 후에, 세척으로 과량의 결정화 또는 침전 시약을 제거할 수 있다. 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물을 감지할 수 있을 정도로 용해시키지 않는 한 당업계에 공지된 세척 용매를 선택할 수 있다. 세척 용매의 예는 실시예 12에 개시되어 있다. 결정화 물질 또는 결정 유사 침전물을 세척한 후에, 당업계에 공지된 임의의 방법으로 건조할 수 있다. 건조 방법의 예로는 공기 건조, 동결건조(냉동-건조) 또는 데시케이션 등이 있다. 바람직한 방법에서, 결정질 물질 또는 결정유사 침전물을 데시케이션으로 건조한다. 예컨대 실시예 12 참조. 또 다른 구체예에서, 결정질 리포펩티드의 안정성은 잔류 항생제 활성 또는 이의 분해물에 의해 측정할 수 있다. 항생제 활성은 각종 세균 균주에 대한 표준 한천 확산 분석으로 측정할 수 있다. 예컨대, 본 명세서에서 참고로 인용한 미국 특허 4,537,717호의 실시예 32 참조. 분해물의 양은, 특히 2001년 7월 26일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/53330호에 개시된 것과 같은 HPLC 분석으로 측정할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드의 안정성은 비정질 형태의 리포펩티드의 안정성보다 크다. 결정질 리포펩티드의 안정성은, 결정질 리포펩티드와 이의 비정질 형태를 열, 빛, 습도에 노출시킨 다음, 비정질 형태의 분해도에 대한 결정질 형태의 분해도를 측정하여 결정할 수 있다.

리포펩티드의 생물학적 활성 또는 임의의 적용가능한 물리적 파라미터를 측정하여 리포펩티드의 분해도를 측정할 수 있다. 일 구체예에서는, 열, 빛, 습도, pH 변화 또는 양극단의 pH를 가한 후 리포펩티드의 특정 생물학적 활성을 측정하고, 임의의 안정성 테스트 전에 리포펩티드의 동일한 생물학적 활성과 비교하여 분해도를 측정할 수 있다. 분해량은, 예컨대 안정성 테스트 후에 남아있는 생물학적 활성 비율(%)을 결정하여 측정할 수 있다. 남은 생물학적 활성 비율(%)을 동일한 테스트를 받은 비정질 형태의 리포펩티드의 것과 비교할 수 있다. 일 구체예에서, 리포펩티드가 항생제라면, 결정질 리포펩티드를 안정성 테스트 전과 후에 항생제 활성에 대해 테스트하고, 분해 테스트 전과 후에 테스트된 비정질 형태의 것과 비교할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이고, 생물학적 활성 테스트에서는 그람 양성균에 대한 리포펩티드의 항생제 활성량을 측정한다.

리포펩티드 분해는 물리적 분석으로도 측정할 수 있다. 일 구체예에서, 안정성 테스트 후에 남아있는 완전한 결정질 리포펩티드의 비율을 측정하여 분해도를 결정할 수 있다. 잔존하는 완전한 리포펩티드의 비율(%)을 안정성에 대해 동일한 테스트를 받은 비정질 형태의 리포펩티드와 비교할 수 있다. 바람직한 구체예에서는, HPLC, 자외선 분광법, 적외선 분광법, NMR 또는 질량 분광법으로 리포펩티드의 분해를 측정할 수 있다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, HPLC를 사용하여 리포펩티드의 결정형에 대해 안정성 시험을 실시한 후에 남아있는 완전한 리포펩티드의 비율(%)을 측정한다.

어떤 이론에도 구애받지 않고서, 출원인은 답토마이신이 상기 개시된 방법으로 결정화된다고 생각한다. 그러나, 답토마이신 결정의 세척 및/또는 건조는 답토마이신 결정질 물질을 비결정질이지만 결정 유사 형태인 물질로 복원시키는 것으로 생각된다. 그럼에도 불구하고, 상기 개시된 방법이 답토마이신 또는 기타 리포펩티드를 결정화하기보다는 침전시키는 경우, 이 방법으로 리포펩티드가 정제되므로 이 방법도 유리하다.

또한, 본 발명은 상기 개시된 방법으로 제조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 제공한다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 결정화 또는 침전 전에 리포펩티드와 비교하여 1 이상의 불순물을 소량으로 포함한다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 결정화 또는 침전 전의 답토마이신과 비교하여 무수-답토마이신 및/또는 답토마이신의 β-이성체를 소량 포함하는 답토마이신이다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신은 비정질 답토마이신과 비교하여 모둔 불순물을 소량 포함한다. 유사하게, 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 전술한 바와 같은 답토마이신 관련 리포펩티드로서, 비정질 형태의 답토마이신 관련 리포펩티드와 비교하여 1 이상의 불순물을 소량 포함한다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 관련 리포펩티드는 비정질 형태의 답토마이신 관련 리포펩티드와 비교하여 모든 불순물을 소량 포함한다.

상기 개시된 방법으로 제조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 1가 또는 2가 양이온과 물을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 2가 양이온을 포함하는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 2가 양이온은 칼슘 양이온이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 원자 흡수 또는 열 중량 분석으로 측정시 2가 칼슘 양이온 약 1∼10 중량%와 물 약 0∼15 중량%를 포함한다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 2가 칼슘 양이온 약 5 중량%와 물 약 10 중량%를 포함하는 답토마이신이며, HPLC 분석으로 측정시 결정질 또는 결정 유사 답토마이신의 순도는, 관련된 물질 및 유기 오염물에 대하여 적어도 95%, 96%, 97% 또는 98%이거나, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다. 대안적으로, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 1가 양이온(예, 나트륨)을 포함한다. 어떤 이론에도 구애받지 않으면서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 결정화 또는 침전시 1가 또는 2가 양이온과 염을 형성할 수 있는 것으로 생각된다.

리포펩티드의 결정질 형태는 리포펩티드의 비정질 형태보다 용액에서의 증가된 용해도와 증가된 재구성 속도를 나타낼 수 있다. 결정질 리포펩티드가 증가된 용해도 또는 증가된 재구성 속도를 나타내는 지 여부를 당업계에 공지된 방법으로 측정할 수 있다. 예를 들어, 결정질 리포펩티드의 소정량을 수용액 중에 용해시키고 용해된 리포펩티드의 농도를 측정한 다음, 동일한 양의 비정질 리포펩티드를 수용액 중에 용해시켜 제조한 용해된 리포펩티드의 농도와 비교할 수 있다. 마찬가지로, 결정질 리포펩티드를 수용액에 첨가한 다음 경시적으로 용해된 리포펩티드의 농도를 측정하고, 동일한 방법으로 측정된 비정질 리포펩티드의 재구성 속도와 비교하여 결정질 리포펩티드의 재구성 속도를 측정할 수 있다. 리포펩티드의 농도는 HPLC로 측정한다.

상기 개시된 방법은 결정화 또는 침전시 비정질 리포펩티드보다 더욱 순수한 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 제조 방법을 제공한다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 또 다른 구체예에서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 결정화 전에 순도가 92% 이하이지만, 결정 유사 리포펩티드로서 결정화 또는 침전 후에 순도는 대략 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상이거나, 또는 95∼98% 사이의 값이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 결정화 전에 순도가 90% 이하이며, 결정화 후에 약 97% 이상 또는 98% 이상이다.

또 다른 구체예에서, 답토마이신은 결정화 또는 침전 전에 순도가 80% 이하, 바람직하게는 70% 이하, 더욱 바람직하게는 60% 이하이고, 정제 후에 순도가 약 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다. 또 다른 구체예에서, 답토마이신은 결정화 전에 순도가 50% 이하, 바람직하게는 40% 이하, 더욱 바람직하게는 30% 이하이고, 결정화 또는 침전으로 정제한 후에 순도가 약 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다. 추가의 바람직한 구체예에서, 답토마이신은 결정화 전에 순도가 20% 이하, 바람직하게는 15% 이하, 더욱 바람직하게는 10% 이하이고, 정제 후에 순도가 약 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다.

더욱 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신이다. 답토마이신 제제는, 예컨대 본 명세서에서 참고로 인용한 미국 특허 RE32,333호, RE32,455호, 4,800,157호, RE32,310호, RE32,311호, 4,537,717호, 4,482,487호, 4,524,135호, 4,874,843호, 4,885,243호 또는 5,912,226호 중 어느 하나에 개시된 임의의 방법으로 얻을 수 있다. 2001년 7월 26일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/53330호에 개시된 방법 중 하나의 방법으로도 답토마이신 제제를 얻을 수 있다. 리포펩티드 제제가 제조되면, 본 명세서에 개시된 교시 내용에 따라서 리포펩티드 제제를 결정화 또는 침전시켜, 이를 제조하는 데 사용된 리포펩티드 제제보다 더욱 순수하거나 또는 특정 불순물, 예컨대 무수-답토마이신을 소량 함유하는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 생성한다.

발효 배양물로부터 정제된 리포펩티드를 제조하는 방법

본 발명의 또 다른 구체예는 정제된 리포펩티드를 산출하기 위해서 결정화 또는 침전과 공정 크로마토그래피 단계를 결합시킨 공정에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 이 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법, 예컨대 자연 발생 유기체나 재조합 유기체의 발효로 리포펩티드를 제조하는 단계와, 리포펩티드 제제에 대해 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피 및/또는 크기 배제 크로마토그래피(전형적인 크기 배제 크로마토그래피 매체 또는 한외여과) 등의 임의의 1 이상의 정제 방법을 실시하여 부분적으로 정제된 리포펩티드 제제를 산출하는 단계와, 리포펩티드 제제를 결정화 또는 침전시켜 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 얻는 단계를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 발효, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피 및 한외여과와 관련된 단계들은, 예컨대 미국 특허 RE32,333호, RE32,455호, 4,800,157호, RE32,310호, RE32,311호, 4,537,717호, 4,482,487호, 4,524,135호, 4,874,843호, 4,885,243호 또는 5,912,226호, 2001년 7월 26일에 공개된 국제 공개 공보 WO 01/53330호 중 어느 하나에 개시되어 있다.

이 방법은 경우에 따라서 결정화 또는 침전 단계 후에 결정질 또는 결정 유사 물질을 수거 및/또는 세척하는 단계를 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드 제제를 여과로 회수할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 물질을 건조한다.

일 구체예에서, 정제 방법은 스트렙토마이시스 로세오스포러스를 발현시켜답토마이신을 포함하는 발효 배양물을 얻는 단계를 포함한다. 일 구체예에서, 에스. 로세오스포러스는 미국 특허 4,885,243호에 개시된 바와 같이 발효시킬 수 있다. 또 다른 구체예에서, 2001년 7월 26일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/53330호 개시된 바와 같이 A-21978C₀함유 미정제 생성물이 스트렙토마이시스 로세오스포러스에 의해 생산되는 발효 조건을 변경하여 답토마이신 생성을 증가시키고 에스. 로세오스포러스 발효 배양물에 의해 생성되는 불순물 및 관련 오염물을 감소시킨다. WO 01/53330호는 발효의 총 수율을 감소시키지 않으면서 데칸산 공급물을 가능한 최저 농도로 유지하는 변형을 가하여 '243 특허에 개시된 바와 같이 에스. 로세오스포러스를 발효하는 것을 기재하고 있다.

대안적으로, 재조합 방법으로 답토마이신을 생산하는 세균 균주 또는 기타 생산 유기체를 발효시켜 답토마이신을 얻을 수 있다. 일 구체예에서, 재조합 세균 균주 또는 기타 재조합 유기체는 답토마이신 생합성 유전자 클러스터를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 답토마이신 생합성 유전자 클러스터 또는 이의 일부를 세균 인공 염색체(BAC)를 통해 유기체 또는 세균 균주에 도입한다. 또 다른 구체예에서, 사용된 재조합 세균 균주는 답토마이신 생합성 유전자 클러스터를 포함하는 BAC를 보유하는 에스. 로세오스포러스 또는 에스.리비단스(S. lividans)이다. 2001년 2월 28일에 출원된 미국 가명세서 출원 60/272,207호는 에스. 로세오스포러스 유래의 답토마이신 생합성 유전자 클로스터와 이의 사용을 개시하고 있으며, 이 출원은 그 전문을 참고로 인용한다.

발효 후에, 당업계에 공지된 바와 같이 또는 WO 01/53330호 공보에 개시된 바와 같이 발효 브로쓰를 원심분리, 정밀여과 또는 추출로 청정화한다. 바람직한 구체예에서, 청정화는 정밀여과로 실시한다. 예컨대 실시예 13∼16과 도면 11∼15 참조. 도 11은 결정화 또는 침전을 이용하지 않은 예시적인 제조 과정을 도시한다.

발효 브로쓰를 청정화한 후에, 브로쓰 내의 답토마이신 농도는 약 5∼10%이다. 본 발명의 일 구체예에서, 답토마이신 제제에 대해 정밀여과 직후에 상기 개시된 결정화/침전 방법을 실시한다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전은 멸균 조건 하에서 실시한다. 결정화 또는 침전이 완료된 후에, 하기에 추가로 상세히 기술된 바와 같이 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 필요에 따라 회수, 세척 및 건조한다. 그 다음 벌크한 무수 활성 약물을 사용하여 멸균 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 16 및 도 12 참조.

발효 브로쓰의 청정화 후에, 당업계에 공지된 바와 같이 또는 WO 01/53330호 공보나 본 명세서에 개시된 바와 같이 음이온 교환 크로마토그래피로 리포펩티드를 제제 중에 농축시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 13-14 및 도 12-13 참조. 음이온 교환 크로마토그래피 후에, 브로쓰 중의 답토마이신의 순도는 약 35∼40%이다. 본 발명의 일 구체예에서, 답토마이신 제제에 대해 음이온 교환 크로마토그래피 직후에 상기 개시된 결정화 또는 침전 방법을 실시한다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전은 멸균 조건 하에서 실시한다. 결정화 또는 침전이 완료된 후에, 하기에 추가로 상세히 기술된 바와 같이 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 필요에 따라 회수, 세척 및 건조한다. 그 다음 벌크한 무수 활성 약물을 사용하여 멸균 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 14 및 도 13 참조.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 음이온 교환 크로마토그래피 후에 답토마이신 제제에 대해 크기 배제 한외여과를 실시한다. 크기 배제 한외여과는 WO 01/53330호 공보에 개시되어 있다. 2001년 7월 26일에 공개된 이 출원은 10,000∼30,000 공칭 분자량(NMW)의 한외여과 막을 사용한 답토마이신의 발열원제거, 여과 및 농축 방법을 개시하고 있다. 이 출원에는 리포펩티드가 한외여과 막을 통과하는 동안 내독소와 같은 고 분자량 불순물은 여과기로 걸러지는 방법이 개시되어 있다. 막을 통해 리포펩티드를 통과시킨 후에, 리포펩티드가 미셀을 형성하도록 리포펩티드 용액의 pH, 온도 및/또는 염 농도를 바꾼다. 그 다음, 리포펩티드 미셀이 막에 남아있고 더 작은 불순물은 여과기로 통과되는 조건 하에서 한외여과막으로 리포펩티드 용액을 여과시킨다. 이러한 방법으로, 리포펩티드를 추가로 정제한다. 이 출원에는 리포펩티드 미셀이 형성 및 해리될 수 있는 조건과, 더욱 정제된 리포펩티드 응용예를 얻기 위해서 리포펩티드 용액을 여과하는 방법이 개시되어 있다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 그 다음 본 명세서에 개시된 바와 같이 리포펩티드를 결정화할 수 있다. 음이온 교환 크로마토그래피 및 크기 배제 한외여과를 모두 실시한 후에, 답토마이신 순도는 약 80∼90%이다. 상기 논의된 바와 같이, 답토마이신 제제에 대해 전술한 결정화/침전 방법을, 바람직하게는 멸균 조건 하에서 실시한다. 그 다음 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 경우에 따라서 회수, 세척, 건조한 다음 사용하여 전술한 바와 같이 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 13 및 도12 참조.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 미정제 답토마이신 제제에 대해 음이온 교환 크로마토그래피를 실시하지 않고 크기 배제 한외여과를 실시한다. 크기 배제 한외여과 후에, 답토마이신 순도는 35∼40%이다. 그 다음 전술한 바와 같이, 바람직하게는 멸균법으로 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 전술한 바와 같이, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 경우에 따라서 회수, 세척, 건조한 다음 사용하여 멸균 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 15 및 도 14 참조.

대안적인 구체예에서, 음이온 교환 크로마토그래피 또는 크기 배제 여과 후에, WO 01/53330호 공보에 개시된 바와 같은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)로 리포펩티드 제제를 처리한다. 본 명세서에 개시된 바와 같이 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다.

결정화 또는 침전 후에, 본 명세서에 개시된 방법, 예컨대 여과 또는 원심분리로 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 회수할 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 경우에 따라 세척하여 잔류 결정화 또는 침전 용매를 제거한다. 결정 또는 결정 유사 물질의 세척 방법은 하기에 개시되어 있다. 예컨대 실시예 3 참조. 세척되거나 또는 세척되지 않은 결정 또는 결정 유사 물질을 건조할 수 있다. 진공 건조, 분무 건조, 트레이 건조 또는 동결건조를 비롯하여 당업계에 공지된 임의의 방법으로 건조를 실시할 수 있다. 일 구체예에서, 건조는 멸균 조건 하에서 실시된다. 또 다른 구체예에서, 건조는 진공 건조로 실시된다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 건조는 0.65 m³Klein Hastelloy-B 버블 콘 진공 건조기 또는 등가의 장치를 사용하여 실시된다. 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 안정하고 보관이 쉽다.

일 구체예에서, 임의의 통상적인 양의 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드로 병을 충전한다. 일 구체예에서, 멸균 조건 하에서 병을 충전한 다음 마개로 막았다. 또 다른 구체예에서, 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 각각 50∼5000 ㎎을 병에 충전한다. 또 다른 구체예에서, 병에는 각각 100∼1000 ㎎을 충전한다. 또 다른 구체예에서, 병에는 각각 200∼500 ㎎을 충전한다. 또 다른 구체예에서, 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 리포펩티드의 대포장(bulk packaging)에 사용된다. 대포장은 일반적으로 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 각각 5000 ㎎ 이상 포함한다. 일 구체예에서, 대포장은 멸균 조건 하에서 실시된다.

일 구체예에서, 결정화 또는 침전 단계를 멸균 조건 하에서 실시한다. 이러한 구체예에서, 멸균 결정화 또는 침전 시약과 멸균의 제어된 작업 환경이 사용된다. 일구체예에서, 전술한 바와 같이 한외여과 막에 리포펩티드를 여과시킨 다음 멸균 결정화/침전 시약과 혼합한다. 결정화 또는 침전 후에, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 제제를 멸균 조건 하에서 원심분리 또는 여과로 수거한다. 일 구체예에서, 리포펩티드 제제를 멸균 여과로 수거한다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 수거 후에 멸균 처리한다. 멸균 결정화, 침전 및 여과방법과 최종 약학 생성물의 멸균 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예컨대, 본 명세서에서 참고로 인용한 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company (1995), pp. 1474-1487] 참조.

또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 건조되지 않는다. 이 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 특성을 보존하는 용액 중에서 보관하는 것이 바람직하다. 멸균 또는 비멸균 조건 하에서 리포펩티드와 용액으로 병을 충전할 수 있다. 일 구체예에서, 조건은 멸균 조건이다. 대안적으로, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드와 용액을 사용하여 대포장을 충전할 수 있다.

도 10 및 도 11은 결정화를 이용한 예시적인 답토마이신 제조 프로토콜을 개시하는 공정도이다. 제조 프로토콜에 멸균 결정화 단계를 도입하면 프로토콜이 상당히 단축되고, 공정의 3∼4 단계가 생략된다.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 약학 조성물 및 이의 사용 방법

본 발명의 또 다른 목적은 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염과, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염을 포함하는 약학 제제를 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정질 유사 리포펩티드는 답토마이신이다. 그러나, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드에 대한 본 명세서의 모든 참고 문헌은 전술한 바와 같이 구체적으로 답토마이신, 답토마이신 관련 분자, 예컨대 특히 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드를 포함한다.

답토마이신 결정 또는 결정 유사 입자와 기타 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는, 특히 침상형, 판형, 욋가지형, 이심형, 성게형 또는 막대형 등의 형상을 가질 수 있다. 일 구체예에서, 답토마이신 결정 또는 결정 유사 입자는 성게형, 침상형 또는 막대형이다. 결정 또는 결정 유사 입자의 크기는 약 0.5 ㎛ 내지 100 ㎛ 이상이다. 일구체예에서, 입자 크기는 5 ㎛ 이상이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 입자 크기는 10 ㎛ 이상, 더욱 바람직하게는 50 ㎛ 이상이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 입자 크기는 100 ㎛ 이상이다.

또한, 일 구체예에서, 답토마이신 결정은 도 6, 7 및 8에 도시된 x-선 회절 패턴을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드 결정의 융점은 리포펩티드 비정질 형태와 다르다.

본 발명의 일 구체예에서, 리포펩티드 결정질 형태의 안정성은 리포펩티드 비정질 형태의 안정성과 유사하거나 더 크다. 바람직한 구체예에서, 결정질 형태는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 멸균되어 있다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드의 안정성은 리포펩티드의 비정질 형태보다 크다. 결정질 리포펩티드는 비정질 형태보다 열, 빛, 분해 또는 습도에 대한 안정성이 높을 수 있다. 리포펩티드의 안정성은, 예컨대 항생제 활성, 리포펩티드 분해 또는 답토마이신의 무수-답토마이신 또는 답토마이신 β-이성체로의 전환 등을 비롯한 임의의 수단으로 측정할 수 있다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 리포펩티드의 결정질 형태는 리포펩티드의 비정질 형태보다 수용액 내에서 더욱 신속하게 재구성될 수 있다.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드, 약학적 허용염, 에스테르, 아미드, 에테르 및 이의 보호형을, 질병, 특히 세균 감염의 처치, 실험 또는 예방 치료를 위해 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 에어로졸, 국소 또는 비경구 투여용으로 제형화할 수 있다. 본 명세서에서 "결정질 또는 결정 유사 리포펩티드" 또는 "결정질 또는 결정 유사 답토마이신"은 이의 약학적 허용염을 포함한다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신은, 경구 전달용의 편리한 장용제피 리포펩티드 제제, 예컨대 폐로의 에어로졸 전달용의 약학 조성물 및 서방형 리포펩티드 배합물 제제를 가능하게 하는, 미크론 크기의 미소구 입자로 쉽게 제형화할 수 있기 때문에 약학 조성물에 사용하기 특히 유리할 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 및 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 수용액 중에 더욱 쉽게 용해시킬 수 있다.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는, 해당 리포펩티드 또는 답토마이신과 상용성인 임의의 약학적 허용 담체 또는 부형제를 사용하여 제형화할 수 있다. 인간 요법을 위한 각종 항균제를 투여하는 방법에 대한 일반적인 설명에 대해서는, 예컨대 문헌[Handbook of Pharmaceutical Additives: An International Guide to More than 6000 Products by Trade Name, Chemical, Function, and Manufacturer, Ashgate Publishing Co., eds., M. Ash and I. Ash, 1996; The Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, ed. S. Budavari, annual; Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA; Martindale: The Complete Drug Reference, ed. K Parfitt, 1999; and Goodman & Gilman's The PharmaceuticalBasis of Therapeutics, Pergamon Press, New York, NY, ed. L. S. Goodman et al.: 이들 문헌의 내용은 본 명세서에서 참고 인용됨] 참조. 본 발명의 화합물을 종래의 약학적 담체 및 부형제와 혼합하여, 정제, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럼, 오블라토, 크림 등의 형태로 사용할 수 있다. 본 발명의 화합물을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 다른 치료제 및 항생제와 혼합할 수 있다. 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 활성 화합물을 약 0.1∼약 90 중량%, 더욱 일반적으로는 약 10∼약 30 중량% 포함한다.

제어형(예, 캡슐) 또는 서방형 전달계(예, 생분해성 매트릭스)를 사용하여 본 발명의 조성물을 전달할 수 있다. 본 발명의 조성물 투여에 적절한 약물 전달용 지연 방출형 전달계의 예는 미국 특허 4,452,775호(Kent), 5,239,660호(Leonard), 3,854,480호(Zaffaroni)에 개시되어 있다.

조성물은 옥수수 전분 또는 젤라틴, 락토스, 수크로스, 미정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 인산2칼슘, 염화나트륨 및 알긴산 등의 일반적인 담체 및 부형제를 포함할 수 있다. 조성물은 크로스카르멜로스 나트륨, 미정질 셀룰로스, 옥수수 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트 및 알긴산을 포함할 수 있다.

포함될 수 있는 정제 결합제로는 아카시아, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈(Povidone), 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 수크로스, 전분 및 에틸셀룰로스 등이 있다.

사용할 수 있는 윤활제로는 스테아르산마그네슘 또는 기타 금속 스테아레이트, 스테아르산, 실리콘 유체, 탈크, 왁스, 오일 및 콜로이드 실리카 등이 있다.

페퍼민트, 노루발풀 오일, 체리향 등의 착향제를 사용할 수 있다. 착색제를 첨가하여 제형의 외관을 더욱 아름답게 하거나 제품의 확인을 보조하는 것이 바람직할 수 있다.

경구용으로서, 정제와 캡슐 등의 고형 제제가 특히 유용하다. 서방향 또는 장용제피 제제를 고안할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드의 경구 이용율을 증가시키는 담체 조성물과 함께 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 공급할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 답토마이신이다. 소아과 및 노인과용으로, 현탁액, 시럽 및 씹을 수 있는 정제가 특히 적절하다. 경구 투여용 약학 조성물은, 예컨대 정제, 캡슐, 현탁액 또는 액체 형태이다. 약학 조성물은 치료 유효량의 활성 성분을 함유하는 용량 단위 형태로 제조되는 것이 좋다. 이러한 용량 단위의 예는 정제 및 캡슐이다. 치료를 위해서, 정제 및 캡슐은 활성 성분 외에 통상의 담체, 예를 들어 결합제, 예컨대 아카시아검, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 소르비톨 또는 트라가칸스; 충전제, 예컨대 인산칼슘, 글리신, 락토스, 옥수수 전분, 소르비톨 또는 수크로스; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 폴리에틸렌 글리콜, 실리카 또는 탈크; 붕해제, 예컨대 감자 전분, 착향제 또는 착색제, 또는 허용가능한 습윤제를 포함할 수 있다. 경구용 액상 제제는 일반적으로 수성 또는 유성 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽 또는 엘렉시르 형태이며, 현탁제, 유화제, 비수성제, 보존제, 착색제 및 착향제 등의 통상적인 첨가제를 포함할 수 있다. 경구용 액상 제제는 리포펩티드 미셀 또는 리포펩티드의 단량체 형태를 포함할 수 있다. 액상 제제용 첨가제의 예로는 아카시아, 아몬드 오일, 에틸 알코올, 증류된 코코넛 오일, 젤라틴, 글루코스 시럽, 글리세린, 식용 경화지방, 레시틴, 메틸 셀룰로스, 메틸 또는 프로필 파라-히드록시벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 또는 소르브산 등이 있다.

정맥내(IV) 투여용으로 사용하기 위해서, 본 발명의 화합물의 수용성 형태를 통상 사용되는 정맥내 유체 중 임의의 유체 중에 용해시키고, 주입으로 투여할 수 있다. 정맥내 제제는 담체, 부형체 또는 안정화제, 비제한적인 예로서 칼슘, 인간 혈청 알부민, 시트레이트, 아세테이트, 염화칼슘, 카보네이트 및 기타 염을 포함할 수 있다. 정맥내 유체의 비제한적인 예로는 생리 식염수 또는 링거액 등이 있다. 답토마이신 또는 기타 리포펩티드는 주사기, 캐뉼라, 카테터 및 라인 내에 둘 수 있다.

비경구 투여용 제제는 수성 또는 비수성 등장 멸균 주사 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 이들 용액 또는 현탁액은, 경구 투여용 배합물 중에 사용하기 위해 언급된 1 이상의 담체를 포함하는 멸균 산제 또는 과립의 형태로부터 제조될 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수 오일, 벤질 알코올, 염화나트륨 및/또는 각종 완충액에 용해시킬 수 있다. 근육내, 비경구 또는 정맥내 제제용으로서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 화합물의 멸균 배합물 또는 상기 화합물의 적절한 가용성 염, 예컨대 염산염을 주사용 물(WFI), 생리 식염수 또는 5% 글루코스와 같은 약학적 희석제에 용해시켜 투여할 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 적절한 불용성 형태를 수성 기제 또는 약학적 허용 오일 기제(예, 에틸 올레이트와 같은 장쇄 지방산의에스테르) 중의 현탁액으로서 제조하여 투여할 수 있다.

폴리락티드-폴리글리콜리드와 같은 생분해성 중합체 중 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 미세캡슐화 매트릭스를 형성하여 주사성 데포우(depot) 형태를 제조할 수 있다. 약물 대 중합체의 비율과 사용된 특정 중합체의 성질에 따라서, 약물 방출 속도를 제어할 수 있다. 기타 생분해성 중합체의 예로는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물) 등이 있다. 데포우 주사성 제제는, 체조직과 적합성인 마이크로에멀젼 중에 약물을 포집시켜 제조한다.

국소용으로 사용하기 위해서, 본 발명의 화합물은 피부, 또는 코와 목의 점막에 도포하기에 적절한 형태로 제조될 수 있으며, 크림, 연고, 액체 스프레이 또는 흡입제, 로젠즈, 또는 인후 도포물의 형태를 취할 수 있다. 이러한 국소용 제제는 활성 성분의 표면 침투를 촉진하는 디메틸설폭시드(DMSO)와 같은 화학적 화합물을 더 포함할 수 있다. 국소용 제제의 경우, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 이의 적절한 염의 형태를 포함하는 멸균 배합물은 크림, 연고, 스프레이 또는 기타 국소용 외과 처치 연고로 투여할 수 있다. 또한, 국소 제제는 리포펩티드 조성물로 함침시킨 붕대의 형태일 수 있다.

안구 또는 귀에 사용하기 위해서, 본 발명의 화합물은 연고, 크림, 로션, 도포제 또는 산제와 같이 소수성 또는 친수성 기제 중에 배합된 액체 또는 반액체 형태로 제공될 수 있다.

직장 투여용으로서, 본 발명의 화합물은 코코아 버터, 왁스 또는 기타 글리세라이드와 같은 종래의 담체와 혼합된 좌약의 형태로 투여될 수 있다.

에어로졸 제제의 경우, 계량형 흡입기 및 네블라이저와 같은 흡입기 중에서 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이 화합물의 염 형태의 멸균 제제를 이용할 수 있다. 분무형은 폐 및 동(sinus)-계열의 감염과 같은 호흡기 감염을 치료하는 데 특히 유용할 수 있다.

대안적으로, 본 발명의 화합물은 전달시 적절한 약학적 허용 담체 중에서 재구성하기 위한 분말 결정질 또는 결정 유사 형태일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 화합물의 단위 제형은 화합물 또는 이의 염을 적절한 희석제에 용해시켜 멸균의 반구형 밀봉 앰플에 넣은 용액일 수 있다. 단위 제형 중 화합물의 농도는 사용된 화합물과 이의 용해도 및 의사가 원하는 용량에 따라서, 예컨대 약 1∼약 50%로 다양할 수 있다. 조성물이 용량 단위를 포함하는 경우, 각 용량 단위는 활성 물질 약 10∼5000 ㎎, 더욱 바람직하게는 50∼1000 ㎎, 더욱 더 바람직하게는 100∼500 ㎎을 포함한다. 성인 치료의 경우, 사용되는 용량은 투여 경로 및 빈도에 따라서 1일 100 ㎎∼3 g이 바람직하다.

추가의 측면에서, 본 발명은 피험체에서 그람 양성균에 의해 유발되는 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 바람직한 구체예에서, 이 방법을 사용하여 그람 양성균이 유발하는 감염을 치료할 수 있다. 용어 "치료"는 피험체에게 본 발명의 화합물의 치료 유효량을 투여하여 감염 발생을 예방하고 감염(예, 확립된 감염)을 제어하거나 없애는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "피험체"는 포유류, 식물 또는 세포 배양물로서 정의된다. 본 명세서에서 용어 "치료 유효량"은 세균 감염의 개시를 예방하거나, 증상을 경감시키거나 또는 진행을 중단시키는 본 발명의 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 항균 리포펩티드의 양을 의미한다. 바람직한 구체예에서, 피험체는 리포펩티드 치료를 필요로 하는 인간 또는 기타 동물 환자이다. 확립된 감염은 급성 또는 만성일 수 있다. 유효량은 일반적으로 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 0.1∼약 75 ㎎이다. 바람직한 용량은 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 1∼약 25 ㎎이다. 더욱 바람직한 용량은 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 1∼12 ㎎이다. 더욱 더 바람직한 용량은 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 3∼8 ㎎이다. 항균제를 전달하는 예시적인 절차는 미국 특허 5,041,567호(Rogers) 및 국제 PCT 공개 공보 WO 95/05384호에 개시되어 있으며, 이들 문헌은 그 전문이 참고로 인용된다.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신을 1일 1회 용량 또는 1일 다회 용량으로 투여할 수 있다. 치료법에서는 연장 기간 동안, 예컨대 수일 동안 또는 2∼4주 동안 투여해야 할 수 있다. 1회 투여량 또는 총 투여량은 감염의 특성 및 경중, 환자의 연령 및 일반적인 건강 상태, 환자의 리포펩티드에 대한 관용성과 감염과 관련된 미생물(들) 등의 인자에 따라서 달라진다. 투여 방법은 본 명세서에서 참고로 인용한 WO 00/18419호(2000년 4월 6일 공개)에 개시되어 있다.

본 발명의 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물을 그람 양성균감염을 줄이거나 또는 제거하는 데 효과적인 양으로 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 리포펩티드는 경구, 비경구, 흡입, 국소, 직장, 비강, 협측, 질, 또는 이식 저장소, 외부 펍프 또는 카테터로 투여될 수 있다. 안과용 또는 분무용으로 리포펩티드를 제조할 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물을 농양, 실(ventricle) 또는 관절에 직접 주사 또는 투여할 수 있다. 비경구 투여는 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액내, 수조, 경막내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 리포펩티드를 정맥내, 피하 또는 경구 투여한다.

본 발명의 방법을 이용하여 임의의 종류의 그람 양성균에 의해 감염이 유발되거나 악화된 세균 감염 환자를 치료할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 리포펩티드, 또는 이의 약학 조성물을 본 발명의 방법에 따라 환자에게 투여한다. 또 다른 구체예에서, 비제한적인 예로서 메티실린 감수성 및 메티실린 내성 스타필로코커스[예, 스타필로코커스 아우레우스, 스타필로코커스 에피더미스(Staphylococcus epidermidis), 스타필로코커스 해몰티커스(Staphylococcus haemolyticus), 스타필로코커스 호미니스(Staphylococcus hominis), 스타필로코커스 사프로피티커스(Staphylococcus saprophyticus), 및 코아귤라제-음성 스타필로코커스], 글리코펩티드 중재 감수성 스타필로코커스 아우레우스 (GISA), 페니실린 감수성 및 페니실린 내성 스트렙토코커스[예, 스트렙토코커스 뉴모니아, 스트렙토코커스 피오젠스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 아갈락티아(Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 아비움(Streptococcus avium), 스트렙토코커스 보비스(Streptococcus bovis), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코커스 산기우스(Streptococcus sangius) 및 스트렙토코커스 그룹 C, 스트렙토코커스 그룹 G 및 비리단스 스트렙토코커스], 엔테로코커스[예, 바나코마이신 감수성 및 바나코마이신 내성 균주, 예컨대 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis) 및 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium)], 클로스트리디움 디피실(Clostridium difficile), 클로스트리디움 클로스트리디포르메(Clostridium clostridiiforme), 클로스트리디움 이노쿰(Clostridium innocuum), 클로스트리디움 페르프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리디움 라모섬(Clostridium ramosum), 헤모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 리스테리아 모노시토젠스(Listeria monocytogenes), 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium), 비피도박테리아 종(Bifidobacteriumspp.), 유박테리움 애로파시엔스(Eubacterium aerofaciens), 유박테리움 렌툼(Eubacterium lentum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilllus plantarum), 락토코커스 종(Lactococcusspp.), 류코노스톡 종(Leuconostocspp.), 페디오코커스(Pediococcus), 펩토스트렙토코커스 안애로비우스(Peptostreptococcus anaerobius), 펩토스트렙토코커스 아사카로리티커스(Peptostreptococcus asaccarolyticus), 펩토스트렙토코커스 마그너스(Peptostreptococcus magnus), 펩토스트렙토코커스 마이크로스(Peptostreptococcus micros), 펩토스트렙토코커스 프레보티(Peptostreptococcus prevotii), 펩토스트렙토코커스 프로덕터스(Peptostreptococcus productus), 프로피오니박테리움 아신스(Propionibacterium acnes), 및 악티노마이시스 종(Actinomycesspp.) 등의 균에 의해 세균 감염이 유발 또는 악화될 수 있다.

시험관내 실험으로 고전적인 "내성" 균주에 대한 답토마이신 항균 활성을 고전적인 "감수성" 균주에 대한 것과 비교한다. 또한, 감수성 균주에 대한 답토마이신의 최소 억제 농도(MIC) 값은 통상적으로 반코마이신보다 4배 낮다. 따라서, 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물 또는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 중 임의의 것의 약학 조성물을, 본 발명의 방법에 따라서 반코마이신 등의 다른 항생제에 내성이 있는 세균 감염을 나타내는 환자에게 투여한다. 또한, 답토마이신은 글리코펩티드 항생제와는 달리 그람 양성 유기체에 대하여 신속한 농도 의존성 세균 활성을 나타낸다. 따라서, 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물 또는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 중 임의의 것의 약학 조성물을 본 발명의 방법에 따라서 신속하게 작용하는 항생제 치료가 필요한 환자에게 투여한다.

신체의 임의의 기관 또는 조직의 그람 양성균 감염에 대해 본 발명의 방법을 사용할 수 있다. 이들 기관 또는 조직의 비제한적인 예로는, 골격근, 피부, 혈류, 신장, 심장, 폐 및 뼈 등이 있다. 본 발명의 방법을 사용하여 피부 및 연조직 감염, 균혈증 및 요로 감염을 치료할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 방법을 사용하여 지역 획득 호흡 감염, 비제한적인 예로서 중이염, 부비동염,만성 기관지염 및 폐렴(예, 약물 내성 스트렙토코커스 뉴모니아 또는 해모필러스 인플루엔자에 의해 유발된 폐렴)을 치료할 수 있다. 또한 본 발명의 방법을 사용하여 다른 종류의 그람 양성균, 예컨대 호기성, 친카프로성(caprophilic) 또는 혐기성 세균을 포함하는 혼합형 감염을 치료할 수 있다. 이들 유형의 감염으로는 복부내 감염, 폐렴, 골 및 관절 감염과 산과/부인과 감염 등이 있다. 본 발명의 방법을 이용하여 감염, 비제한적인 예로서, 심막내염, 신염, 패혈 관절염 및 골수염을 치료할 수 있다. 바람직한 구체예에서 상기 개시된 질병 중 임의의 질병은, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드, 항균 리포펩티드, 또는 이들 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 중 임의의 것의 약학 조성물을 사용하여 치료할 수 있다.

결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 리포펩티드를 환자 또는 동물의 식사 또는 사료로 투여할 수 있다. 전체 식사 섭취량의 일부로서 투여하는 경우, 답토마이신 또는 기타 리포펩티드의 양은 식사량의 1 중량% 미만, 바람직하게는 0.5 중량% 이하일 수 있다. 동물용 사료는 답토마이신 또는 기타 리포펩티드가 첨가된 일반적인 사료일 수 있거나, 또는 답토마이신을 사전혼합물에 첨가할 수 있다.

본 발명의 방법은 답토마이신 또는 다른 리포펩티드 항생제의 또 다른 형태, 예컨대 결정질 또는 결정 유사 형태가 아닌 것을 투여하거나, 또는 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 기타 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 항생제 이외의 1 이상의 항진균제 및/또는 1 이상의 항생제와 함께 투여하여 실시할 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 다른 리포펩티드 항생제 이외의 항진균제 및 항생제의 동시 투여는, 다른 종류의 그람 양성균에 의해 유발되는 것, 또는 세균과 진균에 의해 유발되는 것과 같은 혼합형 감염에 유용할 수 있다. 또한, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 다른 리포펩티드 항생제는 1 이상의 동시 투여되는 항생제의 독성 프로필을 개선시킬 수 있다. 답토마이신과 아미노글리코시드의 투여는 아미노글리코시드에 의해 유발되는 신장 독성을 개선시킬 수 있는 것으로 확인되었다. 바람직한 구체예에서, 항생제 및/또는 항진균제는 본 발명의 화합물과 함께 동시투여되거나, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물로 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물과 함께 동시 투여할 수 있는 항균제 및 이의 부류의 비제한적인 예로는, 페니실린 및 관련 약물, 카르바페넴, 세팔로스포린 및 관련 약물, 아미노글리코시드, 박시트라신, 그라미시딘, 무피로신, 클로람페니콜, 티암페니콜, 푸시데이트 나트륨, 린코마이신, 클린다마이신, 마크롤리드, 노보비오신, 폴리믹신류, 리파마이신류, 스펙티노마이신, 테트라사이클린류, 반코마이신, 테이코플라닌, 스트렙토그라민류, 항엽산제, 예컨대 설폰아미드류, 트리메토프림 및 이의 조합물 및 피리메타민, 합성 항균제, 예컨대 니트로푸란류, 메텐아민 만델레이트 및 메텐아민 히푸레이트, 니트로이미다졸, 퀴놀론류, 플루오로퀴놀론류, 이소니아지드, 에탐부톨, 피라진아미드, 파라아미노살리실산(PAS), 시클로세린, 카프레오마이신, 에티온아미드, 프로티온아미드, 티아세타존, 비오마이신, 에버니노마이신, 글리코펩티드, 글리실사이클린, 케톨리드류, 옥사조리디논; 이미페넨, 아미카신, 네틸미신,포스포마이신, 젠타미신, 세프트리악손, 지라신, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, 리네졸리드, 시네르시드, 아츠트레오남 및 메트로니다졸, 에피로프림, OCA-983, GV-143253, 산페트리넴 나트륨, CS-834, 비아페넴, A-99058.1, A-165600, A-179796, KA 159, 다이네미신 A, DX8739, DU 6681; 세플루프레남, ER 35786, 세포셀리스, 산페트리넴 셀렉세틸, HGP-31, 세프피롬, HMR-3647, RU-59863, 메르사시딘, KP 736, 리팔라질; 코산, AM 1732, MEN 10700, 레나페넴, BO 2502A, NE-1530, PR 39, K130, OPC 20000, OPC 2045, 베네프림, PD 138312, PD 140248, CP 111905, 설로페넴, 리티페남 아콕실, RO-65-5788, 시클로티알리딘, Sch-40832, SEP-132613, 미카코시딘 A, SB-275833, SR-15402, SUN A0026, TOC 39, 카루모남, 세포조프란, 세페타메트 피복실 및 T 3811 등이 있다.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물과 함께 동시 투여할 수 있는 항균제의 비제한적인 예로는 이미페넨, 아미카신, 네틸미신, 포스포마이신, 젠타미신, 세프트리악손, 테이코플라닌, 지라신, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, 리네졸리드, 시네르시드, 아즈트레오남 및 메트로니다졸 등이 있다.

본 발명의 화합물과 함께 동시 투여할 수 있는 항진균제의 비제한적인 예로는 카스포푼젠, 보리코나졸, 세르타코나졸, IB-367, FK-463, LY-303366, Sch-56592, 시타플록사신, DB-289 폴리엔류, 예컨대 암포테리신, 니스타틴, 프리마리신; 아졸류, 예컨대 플루코나졸, 이트라코나졸 및 케토코나졸; 알릴아민류, 예컨대 나프티피네 및 테르비나핀; 및 항대사제, 예컨대 플루시토신 등이 있다. 다른 항진균제의 비제한적인 예로는 본 명세서에서 참고 인용한 문헌[Fostel et al., DrugDiscovery Today 5: 25-32 (2000)]에 개시되어 있다. Fostel 등은 코리네칸딘, Mer-WF3010, 푸사칸딘류, 아르트리친틴/LL 15G256, 소르다린류, 시스펜타신, 아족시바실린, 아우레오바시딘 및 카프레푼진 등의 화합물을 개시하고 있다.

본 발명의 화합물, 또는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 임의의 1 이상의 약학 조성물을, 세균 감염이 근절되거나 감소될 때까지 본 발명의 방법에 따라서 투여할 수 있다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 약 3일 ∼약 6개월간 투여한다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 7∼56일 동안 투여한다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 7∼28일 동안 투여한다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 7∼14일 동안 투여한다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 필요에 따라 이보다 장기간 또는 단기간 투여될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다.

본 발명을 더욱 완전하게 이해하기 위해서 하기 실시예를 개시한다. 이들 실시예는 단지 예시 목적으로 개시한 것으로서, 어떤 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석해서는 안된다.

발명의 개요

본 발명은 리포펩티드, 구체적으로는 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드의 결정질 및 결정질 유사 형태와 이들의 제조 방법을 제공함으로써 상기한 문제점을 해결한다. 일 구체예에서, 본 발명은 리포펩티드 결정화 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 이 방법은 결정화 또는 침전 전보다 그 후에 더욱 순수한 리포펩티드를 제공한다.

또한 본 발명은, 특히 리포펩티드의 결정화 또는 침전을 포함하는 확고한 펩티드 제조 및 정제 방법을 제공한다. 일 구체예에서는 공정 중의 결정화 또는 침전 단계를 이용하여 리포펩티드를 정제한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 공정은 리포펩티드, 바람직하게는 답토마이신의 대규모 제조 및/또는 공업용 제조에 이용된다.

추가로, 본 발명은 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드의 고도의 정제된 결정질 또는 결정 유사 형태를 제공한다. 일 구체예에서, 약학 조성물 중에 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태를 사용할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 약학 조성물을 사용하는 방법을 포함한다.

실시예 1

종래 기법으로 답토마이신을 제조하였다. 답토마이신 제제는 연황색 비정질 분말이었으며, 25℃에서 수중 용해도는 1 g/㎖ 이상이고 에탄올중의 용해도는 2.8 ㎎/㎖ 였다. 비정질 답토마이신 제제는 흡습성이며 215℃에서 분해되었다.

남아있는 실시예들은 유기 침전제(예, PEG)의 존재 또는 부재 하의 리포펩티드의 결정화 또는 침전에 대해 개시하고 있다.

실시예 2

미량회분식 결정화법에서, 25 ㎕의 답토마이신 원액(메탄올 중 20 ㎎/㎖)을 15 ㎕의 시약 원액(200 mM 아세트산칼슘, 0.1 M 카코딜레이트(pH 6.5), 18% [w/v] PEG 8000 및 15 ㎕ 에틸렌 글리콜)과 연속 혼합하여 수성 성분 27.5%, 메탄올 45% 및 에틸렌 글리콜 27.5%인 용액을 얻었다. HPLC로 측정시 순도가 98%인 성게형 결정이 50% 수율로 형성되었다.

실시예 3

답토마이신 원액은, 25 mM 아세트산나트륨(pH 5.0) 및 5 mM CaCl₂를 함유하는 완충액 1 ㎖ 중에 답토마이신 440 ㎎을 용해시켜 제조하였다. 증기 확산(현적)법으로 결정화를 실시하였는데, 이 방법에서는 답토마이신 원액 5 ㎕를 수중 0.1 M 구연산3나트륨 2수화물(pH 5.6) 및 35% [v/v] t-부탄올 0.5 ㎕에 첨가하여 드롭을 형성한다. 결정화가 일어날 때가지 기밀 환경 하에서 드롭을 저장소 용액(수중 0.1 M 구연산3나트륨 2수화물(pH 5.6), 및 35% [v/v] t-부탄올) 위에 매달았다. 이 방법으로 성게형 답토마이신 결정을 얻었다. 도 2 참조.

실시예 4

실시예 3에서와 같이 제조된 답토마이신 원액 5 ㎕를 0.1 M 카코딜산나트륨 (pH 6.5), 0.2 M 아세트산칼슘 및 9% [w/v] PEG 8000을 함유하는 용액 5 ㎕에 첨가하였다. 실시예 3에 개시된 바와 같은 증기 확산법으로 결정화시켰다. 이 방법으로 침상형 답토마이신 결정이 생성되었다. 예컨대 도 3 참조.

실시예 5

실시예 3에서와 같이 제조된 답토마이신 원액 5 ㎕를 0.1 M 카코딜산나트륨(pH 6.5), 0.2 M 아세트산아연 및 9% [w/v] PEG 8000를 함유하는 0.1 ㎕ 벤즈아미딘 용액 5 ㎕에 첨가하여 최종 농도 220 ㎎/㎖의 답토마이신을 얻었다. 실시예 3에 개시된 증기 확산법으로 결정화시켰다. 이 방법으로 막대형 답토마이신 결정이 생겼다. 예컨대 도 4 참조.

실시예 6

수중 20∼25 ㎎/㎖ 농도의 답토마이신(HPLC로 측정시 순도 97.1%) 1 ㎖를 물 231 ㎕, 아세트산칼슘(pH 6.0) 77 ㎕, 프로필렌 글리콜 960 ㎕ 및 50% [w/v] PEG 4000 231 ㎕와 순차 혼합하였다. 용액을 4℃에서 4∼5 시간 동안 정치시켰다. 75% 수율로 성게형 결정이 생겼다. 결정질 답토마이신을 이소프로판올로 세척하였다. 답토마이신은 HPLC로 측정시 순도가 98.4%였다.

실시예 7

답토마이신(200 ㎎, 97.1% 순도)을 물 2.54 ㎖에 용해시켰다. 답토마이신 용액을 메탄올 10.0 ㎖, 1M 아세트산칼슘(pH 6.0) 0.78 ㎖, 프로필렌 글리콜 9.50 ㎖ 및 50% [w/v] PEG4000 2.20 ㎖와 순서대로 혼합하여 최종 부피 25.02 ㎖를 얻었다. 혼합물을 실온에서 10∼14 시간 동안 혈액학 혼합기(피셔)에서 회전시켰다. 수 분내에 결정이 보이기 시작하였다. 최종 수율은 14시간 후에 약 70∼80%였다. 15분동안 1000 rpm에서 원심분리로 결정을 회수하였다. 상청액을 제거하고 이소프로판올 12.5 ㎖ 중에 결정을 재현탁시켰다. 답토마이신 현탁액을 컬럼(바이오라드)으로 옮기고, 중력에 의해 떨어뜨리는 방식으로 이소프로판올을 제거하였다. 질소류 하에서 결정을 건조시켰다. 덩어리가 있으면 건조 과정에서 깨뜨려 균일한 무수 샘플을 얻었다. 이 방법으로 제조된 결정은 성게형이며, 순도는 98.37%였다.

실시예 8

PEG 8000을 PEG 4000 대신에 사용한 것 외에는 실시예 7에 따라서 답토마이신을 결정화시켰다. 사용된 시약의 양은 실시예 7에서와 동일하다. 이 방법으로 제조된 결정은 성게형으로서 순도는 98.84%였다.

실시예 9

실시예 7에 따라서 2개의 답토마이신 샘플을 제조하고, USP<695> 결정질 테스트를 사용하여 1개의 비정질 샘플을 결정도에 대해 분석하였다. 답토마이신 입자를 유리 슬라이드 상의 광유 중에 놓고 편광 현미경(PLM)으로 검사하였다. 스테이지가 회전할 때 입자가 복굴절(간섭 색상을 보유함)되고 흡광 위치를 갖는다면 그 입자는 결정질인 것으로 결정하였다.

비정질 답토마이신 샘플은 복굴절되지 않는 레이스의 엷은 조각 모양의 입자로 구성된다. 약한 복굴절을 갖는 일부 박편에서 몇몇의 은 유사 영역이 있었으나, 입자는 주로 비정질이었다. 대조적으로, 실시예 7에 따라 제조한 답토마이신 샘플은 약한 복굴절과 일부 흡광을 나타내는 다정질 입자로 구성되었으며, 이것은 샘플이 주로 결정질임을 제시하는 것이다. 도 5 참조.

실시예 10

실시예 7에 따라서 2개의 답토마이신 샘플을 제조하고, x-선 분말 회절로 1개의 비정질 샘플을 결정도에 대해 분석하였다. Siemens D500 자동화된 분말 회절분석기(ORS 1D No. LD-301-4)에서 샘플을 분석하였는데, 상기 장치는 ORS 표준 조작 절차 EQ-27 Rev. 9에 따라 작동시켰다. 회절분석기에는 그래피트 단색화장치와 50 kV, 40 mA에서 작동하는 Cu(λ=1.54 Å) x-선 공급원이 구비되어 있었다. 2θ검정은 NBS 운모 표준품(SRM675)을 사용하여 실시한다. 하기 장치 매개변수를 사용하여 샘플을 분석하였다:

2θ(°)에 대한 측정 범위 4.0-40.0

스텝 폭(°) 0.05

스텝당 측정 시간(s) 1.2

선(Beam) 슬릿1(1°), 2(1°), 3(1°), 4(0.15°), 5(0.15°).

제로 백그라운드 샘플판을 사용하여 ORS 표준 조작 절차 MIC-7 Rev. 1에 따라 샘플 제조를 실시하였다.

모든 샘플에 대해 Cu(λ=1.54 Å) x-선 공급원을 사용하여 실시하였다. 비정질 답토마이신 샘플은 x-선 분말 회절에 의해 어떤 피크도 나타내지 않았다. 도 6 참조. 대조적으로, 2개의 답토마이신 샘플은 모두 x-선 분말 회절에 의한 피크를 나타내었다. 제1 답토마이신 샘플의 회절각(2θ)(도 7)은 19.225, 23.242, 23.427 및 23.603(°)였다. 제2 답토마이신 샘플에 대한 회절각(2θ)(도 8)은 10.966, 19.205 및 23.344(°)였다. 또한 제1 결정질 답토마이신 샘플은 10∼11° 사이에작은 피크를 나타내었다. 도 7 참조.

실시예 11

답토마이신을 물에 용해시켰다. 아세트산나트륨을 첨가하여 최종 농도를 187 mM로 하였다. 염화칼슘을 첨가하여 최종 농도를 28 mM로 하였다. 답토마이신 용액을 혼합하고 최종 농도 78.4%로 이소프로판올을 첨가하였다. 용액을 혼합하고 항온처리하였다. 항온처리 후에 침전된 물질이 형성되었다. 침전 물질은 광학 현미경으로 측정시 직경이 약 60 ㎛인 성게형 결정으로 나타났다. 그 다음 이 물질을 건조시켰다. 건조 물질은 약 30∼40% 염을 함유하였다. 건조 후에, 분말 x-선 회절을 실시하였다. 분말 x-선 회절 결과 건조된 답토마이신 침전물에서 결정의 존재가 확인되지 않았다.

실시예 12

답토마이신(HPLC로 측정시 약 91.5%의 순도) 1 g을 증류수 16.8 ㎖에 첨가하고 용해시켰다. 1M 아세트산칼슘(pH 6.1) 2.5 ㎖ 및 이소프로판올 60 ㎖를 첨가하였다. 용액을 27℃ 수조에 두고 수조 온도로 평형화시켰다. 이소프로판올 5 ㎖ 분액을, 용액이 혼탁해질 때까지 서서히 첨가하였다(총 이소프로판올의 양은 약 30 ㎖). 용액을 27℃에서 밤새 항온처리하여 침전물을 형성하였다. 침전물은, 광학 현미경으로 관찰시 약 60 ㎛의 성게형 결정을 포함하는 것으로 나타났다. 도 2 참조.

답토마이신 침전물을 가압 필터/건조 깔대기에 붓고 중력으로 여과하였다. 침전물을 각회 25 ㎖의 세척액[80% 이소프로판올 및 20% 용액 A(여기서 용액 A는 18 ㎖의 물과 2 ㎖의 빙초산으로 구성됨)]으로 2회 세척하고 밤새 중력에 의해 액체를 떨어드렸다. 그 다음 침전물을 데시케이터에 옮기고 진공 하에서 건조하였다. 건조 후에, 분말 x-선 회절을 실시하였다. 분말 x-선 회절 결과 건조된 답토마이신 침전물에서 결정의 존재가 확인되지 않았다. 그러나, HPLC에 의한 침전 물질의 순도 분석 결과, 이 물질은 순도가 98.2%인 답토마이신이라는 것이 밝혀졌다. 침전 후에 답토마이신 제제는 침전 전의 답토마이신 제제보다 무수-답토마이신이 상당히 적다는 것은 중요하다.

어떤 이론에도 구애받지 않으면서, 본 출원인은 실시예 11 및 12에서 답토마이신을 침전시키는 데 사용된 조건이 실제로 답토마이신의 결정형을 산출하지만, 후속되는 세척 단계 및/또는 건조 단계는 결정질 답토마이신을 비결정질 형태로 복원시킨다고 생각하고 있다. 그럼에도 불구하고, 비결정질 답토마이신은 편광 중의 결정 샘플의 복굴절에 의해 도 3에 도시된 바와 같이 여전히 결정 유사 형태이다.

실시예 13

에스. 로세오스포러스 NRRL 균주 15998의 발효 배양물로, 오염물의 생성을 최소화하면서 항생제의 생성을 최적화하는 수준으로 제어형 데칸산 공급물 발효를 실시하였다. 잔류 데칸산 공급물은 기체 크로마토그래피로 측정하고, 유도 개시(약 시간 30)로부터 회수시까지 표적 잔류 농도는 10 ppm 데칸산이다. 배양물을 원심분리하고 HPLC에 의해 청정화된 브로쓰를 분석하여 답토마이신의 생성을 측정한다. 회수 역가는 통상 발효 브로쓰 1 ℓ당 1.0∼3.0 g이다.

Pall-Sep 또는 등가의 정밀여과 장치를 사용하여 정밀여과시키거나, 또는 완전 공업 규모의 원심분리 및 탁도 여과장치로 발효 배양물을 회수한다. 청정화된브로쓰를 음이온 교환 수지 Mitsubishi FP-DA 13에 가하고, pH 6.5에서 30 mM NaCl로 세척하고 pH 6.0∼6.5에서 300 mM NaCl로 용출시킨다. 대안적으로, pH 6.5에서 30 mM NaCl로 FP-DA 13 컬럼을 세척하고, pH 6.0-6.5에서 300 mM NaCl로 용출시킨다. pH를 3.0∼4.8로 조정하고, 온도를 2∼15℃로 조정한다. 이들 조건 하에서, 답토마이신은 미셀을 형성한다. 미셀 답토마이신 용액을, 임의 형상의 10,000 NMW 한외여과기(AG Technology Corp. UF 중공 섬유 또는 등가물)를 사용하여 여과 세척한다. 답토마이신 미셀은 필터에 남지만, 대부분의 불순물은 10,000 NMW 여과기를 통해 통과하기 때문에 제거된다. 답토마이신 미셀의 한외여과는 답토마이신의 순도를 약 80∼90%로 증가시킨다.

그 다음 전술한 방법 중 하나를 사용하여 멸균 조건 하에서 답토마이신 제제를 결정화 또는 침전시킨다. 바람직한 구체예에서, 답토마이신의 대규모 제조를 위해서 정률증가시킨 것을 제외하고는 실시예 7, 8 또는 12에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 결정화 또는 침전시킨다. 여과, 바람직하게는 진공 여과로 결정화/침전 용액으로부터 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 분리한다. 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 세척액으로 세척한다(실시예 3 참조). 0.65 m³Klein Hastelloy-B 버블 콘 진공 건조기 또는 등가의 장치를 사용하여 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 진공 건조한다. 그 다음 병 1개당 건조된 결정질 답토마이신 250 ㎎ 또는 500 ㎎을 병에 충전한다. 도 9는 제조법의 공정도를 도시한다.

실시예 14

에스. 로세오스포러스의 발효, 발효 배양물의 정밀여과 및 음이온 교환 크로마토그래피를 실시예 13에 개시된 바와 같이 실시한다. 이 시점에서 답토마이신 제제의 순도는 약 35∼40%이다. 음이온 교환 크로마토그래피 후에, 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 결정화 또는 침전시킨다. 그 다음 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 세척 및 건조한다. 실시예 13에 개시된 바와 같이 건조된 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 사용하여 멸균 병에 충전시킨다. 도 6에는 제조법의 공정도가 제시되어 있다.

실시예 15

에스. 로세오스포러스의 발효 및 발효 배양물의 정밀여과는 실시예 13에 개시된 바와 같이 실시한다. 정밀여과 후에, 실시예 13에 개시된 바와 같이 크기 배제 한외여과로 발효 배양물을 처리한다. 이 시점에서 답토마이신 제제의 순도는 약 35∼40%이다. 한외여과 후에, 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 결정화 또는 침전시킨다. 그 다음 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 세척 및 건조한다. 건조된 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 사용하여 실시예 13에 개시된 바와 같이 멸균 병에 충전시킨다. 도 7에는 제조법의 공정도가 제시되어 있다.

실시예 16

에스. 로세오스포러스의 발효 및 발효 배양물의 정밀여과를 실시예 13에 개시된 바와 같이 실시한다. 이 지점에서 답토마이신 제제의 순도는 5∼10%이다. 정밀여과 후에, 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 발효 배양물을 결정화 또는침전시킨다. 실시예 13에 개시된 바와 같이 답토마이신을 세척하고 건조한 다음, 이를 사용하여 멸균 병에 충전시켰다. 도 8에는 제조법의 공정도가 제시되어 있다.

실시예 17

답토마이신의 환상 리포펩티드 유사체인 CB-131547(도 16 참조)은, 답토마이신으로부터 반합성 경로를 통해 제조하였다. CB-131547은 연황색 비정질 분말로서, 25℃에서 일반 염수중 용해도는 ∼80 ㎎/㎖였다.

CB-131547(60 ㎎, ∼90% 순도)을 물 2.5 ㎖에 용해시켰다. CB-131547 용액을 5.0 ㎖ 메탄올, 0.2 ㎖ 1 M 아세트산칼슘(pH 6.0), 2.5 ㎖ 프로필렌 글리콜, 및 1.0 ㎖ 50%(w/v) PEG4000과 차례로 혼합하여 최종 부피 11.2 ㎖를 얻었다. 이 용액을 4℃에서 4∼24 시간 동안 정치시켰다. HPLC로 측정시 순도가 ∼98.0%인 CB131547 결정을 ∼70% 수율로 얻었다.

실시예 18

CB-131547(60 ㎎, ∼90% 순도)을 물 2.5 ㎖에 용해시켰다. 0.2 ㎖ 1 M 아세트산칼슘(pH 6.0) 및 8 ㎖ 이소프로판올을 첨가한다. 실온(25℃)에서 5분간 용액을 평형화시킨다. 용액이 혼탁해질 때까지 이소프로판올 1 ㎖ 분액을 서서히 첨가한다. 용액을 실온에서 밤새 정치시켜 결정을 형성한다.

본 명세서에 인용된 모든 공보 및 특허 출원은, 각각 공보 또는 특허 출원이구체적이고 개별적으로 참고로 인용된 것으로 제시된 범위로 인용된다. 이해를 명확히 할 목적으로 실시예 및 예시의 방법으로 본 발명을 일부 상세히 기술하였지만, 본 발명의 교시 내용으로부터 첨부된 청구범위의 취지 또는 범위를 벗어나지 않고 일부 변화예 및 변형예가 당업자에게는 자명할 것이다.

Claims

리포펩티드가 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되는, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제1항에 있어서, 염이 2가 칼슘염인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제1항에 있어서, 리포펩티드 항생제가 답토마이신인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제3항에 있어서, 염이 2가 칼슘염인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제3항에 있어서, Cu(λ=1.54 Å) x-선 공급원을 사용한 결정질 답토마이신의 x-선 회절 패턴은 회절각(2θ)= 10.9, 19.2 및 23.3(°) 또는 회절각(2θ)= 19.2, 23.2, 23.4 및 23.6(°)인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 결정 유사(crystal-like)는 화합물이 복굴절에 의한 결정질 특성을 보유하지만 x-선 분말 회절에 의한 결정질특성을 나타내지 않는 것을 의미하는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제3항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신은 성게형 또는 침상의 클러스터, 침상형 또는 막대형 결정을 포함하는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제3항에 있어서, 결정질 답토마이신은 순도가 95% 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제3항에 있어서, 결정질 답토마이신 또는 이의 염은 순도가 97% 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제3항에 있어서, 결정질 답토마이신 또는 이의 염은 단일 불순물을 1% 이상 포함하지 않는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제8항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 있어서, 순도를 HPLC로 측정하는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제1항에 있어서, 리포펩티드 결정이 5 ㎛ 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제12항에 있어서, 결정이 50 ㎛ 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제12항 또는 제13항에 있어서, 리포펩티드가 답토마이신인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제1항에 있어서, 결정질 리포펩티드의 안정성이 비정질 형태의 리포펩티드보다 높은 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제15항에 있어서, 결정질 리포펩티드의 열, 빛, 분해 또는 습도에 대한 안정성이 비정질 형태보다 높은 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제16항에 있어서, 안정성을 항생제 활성 또는 리포펩티드 항생제의 분해로 측정하는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제15항에 있어서, 리포펩티드는 답토마이신인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제18항에 있어서, 결정질 리포펩티드는 비정질 형태의 답토마이신보다 무수(anhydro)-답토마이신 또는 답토마이신의 β-이성체로의 전환율이 낮은 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
제1항에 있어서, 답토마이신 관련 리포펩티드인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.
결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 항생제와 약학적 허용 담체를 포함하는 약학 조성물로서, 리포펩티드 항생제가 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되는 것인 약학 조성물.
제21항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드가 답토마이신인 것인 약학 조성물.
제22항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신이 경구 투여용으로 장용 제피된 것인 약학 조성물.
제22항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신이 3∼75 ㎎/kg의 용량으로 제형화되는 것인 약학 조성물.
제22항에 있어서, 담체가 답토마이신의 경구 이용율을 높이는 것인 약학 조성물.
제22항에 있어서, 미크론 크기의 입자 또는 미소구 형태인 것인 약학 조성물.
제21항에 기재된 약학 조성물을 포함하는 용기.
제26항에 있어서, 에어로졸로서 사용되는 것인 약학 조성물.
결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 항생제와 약학적 허용 담체를 포함하는 배합물로서, 리포펩티드 항생제가 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되는 것인 배합물.
제29항에 있어서, 약학 배합물, 식품 배합물, 사료 배합물, 수의용 배합물, 화장용 배합물 또는 개인 용품 배합물인 것인 배합물.
제29항에 있어서, 또 다른 항생제, 안정화제, 흡수 보조제, pH 완충제 또는 무기염을 추가로 포함하는 약학 배합물인 것인 배합물.
제29항에 있어서, 동물 사료를 더 포함하고 경우에 따라서 또 다른 항생제나 비타민을 포함할 수 있는 사료 배합물인 것인 배합물.
제29항에 있어서, 세척용 배합물, 비누, 샴푸 또는 제한제인 개인 용품 배합물인 것인 배합물.
제29항에 있어서, 비누, 샴푸 또는 약학 조성물인 수의용 배합물인 것인 배합물.
결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 이의 약학적 허용염 또는 약학 조성물의 치료 유효량을 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 이의 약학적 허용염 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 방법으로서, 리포펩티드가 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
제35항에 있어서, 리포펩티드 항생제는 순도가 95% 이상인 것인 방법.
제36항에 있어서, 리포펩티드 항생제가 답토마이신인 것인 방법.
제37항에 있어서, 답토마이신은 결정질 답토마이신이고 Cu(λ=1.54 Å) x-선공급원을 사용한 결정질 답토마이신의 x-선 회절 패턴은 회절각(2θ)= 10.9, 19.2 및 23.3(°)인 것인 방법.
제37항에 있어서, 답토마이신은 결정 유사 답토마이신이고 결정 유사 답토마이신은 복굴절에 의해 결정질 특성을 나타내지만 x-선 분말 회절에 의해 결정질 특성을 나타내지 않는 것인 방법.
제35항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 미크론 크기의 입자로서 투여되는 것인 방법.
제35항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드가 표적화된 방출 형태로서 투여되는 것인 방법.
제40항 또는 제41항에 있어서, 리포펩티드가 답토마이신인 것인 방법.
제35항에 있어서, 경구 투여가 피하, 정맥내 또는 근육내로 실시되는 것인 방법.
a) 리포펩티드가 용해된 용액을 제공하는 단계;

b) 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계;

c) 리포펩티드를 회수 및 건조하는 단계; 및

d) 리포펩티드를 보관하는 단계를 포함하는 리포펩티드 보관 방법으로서, 리포펩티드가 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되고, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 비정질 형태의 리포펩티드보다 더욱 안정한 것인 방법.
a) 리포펩티드의 비정질 형태를 제공하는 단계;

b) 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계; 및

c) 결정 또는 결정 유사 리포펩티드를 회수하는 단계를 포함하는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 제조 방법으로서, 리포펩티드는 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
제44항에 있어서, 상기 회수 단계가 여과로 실시되는 것인 방법.
제46항에 있어서, 단계 b) 다음에 리포펩티드의 세척 단계를 더 포함하는 것인 방법.
제45항 또는 제46항에 있어서, 단계 c) 다음에 리포펩티드의 건조 단계를 더 포함하는 것인 방법.
제48항에 있어서, 건조 후에 리포펩티드의 멸균 단계를 더 포함하는 것인 방법.
제45항에 있어서, 단계 c)가 멸균 조건 하에서 실시되는 것인 방법.
제50항에 있어서, 단계 b)가 멸균 조건 하에서 실시되는 것인 방법.
제51항에 있어서, 멸균 조건 하에 단계 c) 다음에 리포펩티드의 건조 단계를 더 포함하는 것인 방법.
제44항에 있어서, 결정질 리포펩티드의 순도가 비정질 형태의 리포펩티드보다 높은 것인 방법.
제53항에 있어서, 비정질 형태의 순도는 약 90%이고 결정질 또는 결정 유사 형태의 순도는 95% 이상인 것인 방법.
제53항에 있어서, 비정질 형태의 순도는 약 93%이고 결정질 또는 결정 유사 형태의 순도는 95% 이상인 것인 방법.
제53항에 있어서, 비정질 형태의 순도는 약 93%이고 결정질 또는 결정 유사형태의 순도는 약 98%인 것인 방법.