KR20030060442A - 수박 형질전환체의 제조방법 및 형질전환 수박 - Google Patents
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Abstract
Description
구 분 | 배지 1 | 배지 2 | 배지 3 | 배지 4 |
NAAa(㎎/ℓ) | 0 | 0 | 0.1 | 0.1 |
BAPb(㎎/ℓ) | 2 | 4 | 2 | 4 |
염 | MSc | MS | MS | MS |
비타민 | B5d | B5 | B5 | B5 |
aNAA: 1-naphthaleneacetic acidbBAP: 6-benzylaminopurinecMS: Murashinge & Skoog 배지dB5: 니코틴산, 티아민-HCl, 피리독신-HCl |
품종 및 배지 조건에 따른 재분화율 및 평균 신초수 | |||||||||
품종 | 식물조직 | BAP/NAA (㎎/ℓ) | |||||||
2.0/0.0 | 4.0/0.0 | 2.0/0.1 | 4.0/0.1 | ||||||
재분화율(%) | 평균 신초수(개) | 재분화율(%) | 평균 신초수(개) | 재분화율(%) | 평균 신초수(개) | 재분화율(%) | 평균 신초수(개) | ||
Aa | 자엽 | 53.0 | 1.33 | 40.0 | 1.13 | 33.0 | 0.73 | 20.0 | 0.47 |
배축 | 0.0 | 0.00 | 0.0 | 0.00 | 0.0 | 0.00 | 6.0 | 0.22 | |
Bb | 자엽 | 50.0 | 1.10 | 20.0 | 0.30 | 25.0 | 0.50 | 30.0 | 0.35 |
배축 | 0.0 | 0.00 | 0.0 | 0.00 | 0.0 | 0.00 | 0.0 | 0.00 | |
Cc | 자엽 | 50.0 | 1.00 | 30.0 | 0.40 | 15.0 | 0.30 | 10.0 | 0.15 |
배축 | 0.0 | 0.00 | 0.0 | 0.50 | 0.0 | 0.20 | 0.0 | 0.50 | |
Dd | 자엽 | 30.0 | 0.55 | 10.0 | 0.10 | 5.0 | 0.05 | 0.0 | 0.00 |
배축 | 0.0 | 0.00 | 0.0 | 0.00 | 5.0 | 0.05 | 5.0 | 0.05 | |
a슈퍼금천수박;b사철꿀수박;c아폴로수박;d금보수박 |
형질전환에 사용된 배지 조성표 | |||||
성분 | 발아배지 | 감염 브로스 | 재분화 배지 | 선택배지 | 발근배지 |
염 | MS | MS | MS | MS | MS |
비타민 | B5 | B5 | B5 | B5 | B5 |
수크로스(g/ℓ) | 10 | 20 | 20 | 30 | 30 |
MES(㎎/ℓ) | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 |
피타겔(g/ℓ) | 6 g(아가) | - | 4.0 | 4.0 | 2.0 |
2,4-D(㎎/ℓ) | - | 1 | - | - | - |
BAP(㎎/ℓ) | - | - | 2 | 2 | - |
IAA(㎎/ℓ) | - | - | - | - | 0.1 |
기타 | - | 아세토시린곤(200 μM) | 카베니실린(500 ㎎/ℓ) | 카베니실린(500 ㎎/ℓ)카나마이신(200 ㎎/ℓ) | - |
Claims (13)
- 다음의 단계를 포함하는 수박 형질전환체의 제조방법:(ⅰ) 수박 세포의 지놈 DNA에 삽입될 수 있고 다음과 같은 서열을 갖는 벡터가 내재되어 있는 아그로박테리움 튜머페이션스(Agrobacterium tumefaciens)로 자엽 또는 배축으로부터 유래된 수박 조직을 감염시키는 단계: (a) 수박 세포 내에서 작동하여 RNA를 형성할 수 있는 프로모터; (b) 상기 프로모터 서열에 기능적으로 결합되어 있는 외래 단백질을 인코딩하는 구조 유전자 서열; 및 (c) 수박 세포 내에서 작동하여 RNA의 3' 말단에 폴리아데닐을 형성시키는 폴리아데닐 시그널 서열; 그리고,(ⅱ) 상기 감염된 수박 조직을 6.0-1.0 ㎎/ℓ의 시토키닌 및 0.2-0 ㎎/ℓ의 옥신계 성장 조절제를 포함하는 배지에서 재분화시키는 단계.
- 다음의 단계를 포함하는 수박 형질전환체의 제조방법:(ⅰ) 수박의 종자를 발아배지에서 2-6일 동안의 암배양 및 12-30 시간 동안의 광배양을 통하여 발아시키는 단계;(ⅱ) 상기 발아에 의해 형성된 자엽의 세포의 지놈 DNA에 삽입될 수 있고 다음과 같은 서열을 갖는 벡터가 내재되어 있는 아그로박테리움 튜머페이션스로 수박 조직을 감염시키는 단계: (a) 수박 세포 내에서 작동하여 RNA를 형성할 수 있는 프로모터; (b) 상기 프로모터 서열에 기능적으로 결합되어 있는 외래 단백질을 인코딩하는 구조 유전자 서열; 및 (c) 수박 세포 내에서 작동하여 RNA의 3' 말단에 폴리아데닐을 형성시키는 폴리아데닐 시그널 서열; 그리고,(ⅲ) 상기 감염된 수박 조직을 6.0-1.0 ㎎/ℓ의 시토키닌 및 0.1-0 ㎎/ℓ의 옥신계 성장 조절제를 포함하는 배지에서 재분화시키는 단계.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 시토키닌은 6-벤질아미노퓨린, 키네틴, 제아틴 및 이소펜틸아데노신으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것임을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 옥신계 성장 조절제는 1- 나프탈렌아세트산, 인돌아세트산 및 (2,4-디클로로페녹시) 아세트산으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것임을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 시토키닌의 함량은 4.0-1.5 ㎎/ℓ이고, 상기 옥신계 성장 조절제의 함량은 0.02-0 ㎎/ℓ인 것을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 5 항에 있어서, 상기 시토키닌의 함량은 2.0 ㎎/ℓ이고, 상기 옥신계 성장 조절제의 함량은 0 ㎎/ℓ인 것을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 2 항에 있어서, 상기 발아시키는 단계는 3-4일 동안 암배양하고, 16-24 시간 광배양하여 실시하는 것을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 식물 세포는 자엽으로부터 유래된 것임을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 8 항에 있어서, 상기 아그로박테리움 튜머페이션스로 수박 조직을 감염시키는 단계는 채취한 자엽의 절편을 아그로박테리움 튜머페이션스의 배양액에 침지시켜 1시간-5분 동안 공동배양하여 실시됨을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 9 항에 있어서, 상기 아그로박테리움 튜머페이션스로 수박 조직을 감염시키는 단계는 자엽의 절편을 아그로박테리움 튜머페이션스의 배양액에 침지시켜 20분-7분 동안 공동배양하여 실시됨을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 제 10 항에 있어서, 상기 아그로박테리움 튜머페이션스로 수박 조직을 감염시키는 단계는 자엽을 두 개의 절편으로 절단한 다음, 상기 절편들을 아그로박테리움 튜머페이션스의 배양액에 침지시켜 20분-7분 동안 공동배양하여 실시됨을 특징으로 하는 수박 형질전환체의 제조방법.
- 다음의 단계를 포함하는 수박 형질전환체의 제조방법:(ⅰ) MS, B5, LS, N6 및 화이트'스로 구성된 그룹으로부터 선택되는 영양 기본 배지, 당을 포함하는 에너지원 그리고 비타민을 포함하는 발아배지에서 3-5일 동안의 암배양 및 20-28 시간 동안의 광배양을 통하여 발아시키는 단계;(ⅱ) 상기 발아에 의해 형성된 자엽의 세포의 지놈 DNA에 삽입될 수 있고 다음과 같은 서열을 갖는 벡터가 내재되어 있는 아그로박테리움 튜머페이션스로 수박 조직을 감염시키는 단계: (a) 수박 세포 내에서 작동하여 RNA를 형성할 수 있는 프로모터; (b) 상기 프로모터 서열에 기능적으로 결합되어 있는 외래 단백질을 인코딩하는 구조 유전자 서열; (c) 수박 세포 내에서 작동하여 RNA의 3' 말단에 폴리아데닐을 형성시키는 폴리아데닐 시그널 서열; 및 (d) 선택 표지로서의 항생제 내성유전자;(ⅲ) 상기 감염된 수박 조직을 6-벤질아미노퓨린, 키네틴, 제아틴 및 이소펜틸아데노신으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 시토키닌 4.0-1.5 ㎎/ℓ; MS, B5, LS, N6 및 화이트'스로 구성된 그룹으로부터 선택되는 영양 기본 배지; 에너지원인 당; 그리고 비타민을 포함하는 재분화 배지에서 재분화시키는 단계; 그리고,(ⅳ) 상기 재분화 단계에서 형성된 신초를 1- 나프탈렌아세트산, 인돌아세트산 및 (2,4-디클로로페녹시) 아세트산으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 옥신계 성장 조절제; MS, B5, LS, N6 및 화이트'스로 구성된 그룹으로부터 선택되는 영양 기본 배지; 에너지원인 당; 그리고 비타민을 포함하는 발근배지에서 발근시키는 단계.
- 상기 제 1 항, 제 2 항 또는 제 12 항의 방법에 의해 제조된 수박 형질전환체.
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