KR20030048419A

KR20030048419A - 친수성 활성 성분 (인슐린) 을 운반하기 위한서브마이크론 입자의 콜로이드성 현탁액, 및 그것의 제조방법

Info

Publication number: KR20030048419A
Application number: KR10-2003-7004651A
Authority: KR
Inventors: 브리송나땅
Original assignee: 플라멜 테크놀로지스
Priority date: 2000-10-06
Filing date: 2001-10-01
Publication date: 2003-06-19
Also published as: EP1322296A1; FR2814951A1; WO2002028374A1; BR0114513A; MXPA03002977A; CA2424981A1; AU2001293939A1; US20040048782A1; CN1468095A; FR2814951B1; JP2004510729A

Abstract

본 발명은 친수성 활성 성분 (인슐린) 을 운반하기 위한 입자의 현탁액에 관한 것이다. 상기 운반체 입자는 폴리에틸렌 글리콜/소수성 중성 폴리아미노산 이중-블록 중합체를 기재로 한다. 상기 폴리에틸렌 글리콜/소수성 중성 폴리아미노산 입자가 친수성 활성 성분 (인슐린) 과 연합된다. 본 발명은 또한 운송 입자가 유도되는 분말 고체에 관한 것이며, 폴리에틸렌 글리콜/소수성 중성 폴리아미노산 입자 및 인슐린을 기재로 하는 운송 입자의 상기 고체 및 상기 현탁액의 제조에 관한 것이다. 상기 제조 방법에서는, N-메틸/피롤리돈, 메탄올 및 아민-작용화된 폴리에틸렌 글리콜의 존재 하에, 소수성 중성 폴리아미노산 입자의 N-카르복시-무수물을 공중합하고, 이로써 폴리에틸렌 글리콜/소수성 중성 폴리아미노산 (후자는 인슐린과 연합함) 을 수득하고; 물로 석출시켜, 운반체 입자를 수득하며; 임의적으로 중성화, 투석, 농축 및 물 제거함으로써, 분말 고체 또는 현탁된 운반체 입자를 수득하고, 약제학품을 제조하는 것으로 구성된다.

Description

친수성 활성 성분 (인슐린) 을 운반하기 위한 서브마이크론 입자의 콜로이드성 현탁액, 및 그것의 제조 방법{COLLOIDAL SUSPENSION OF SUBMICRONIC PARTICLES FOR CARRYING HYDROPHILIC ACTIVE PRINCIPLES (INSULIN) AND METHOD FOR PREPARING SAME}

본 발명은 활성 성분 (AP : Active Principles) 의 투여에 유용한 운반체 입자 (CP : Carrier Particles) 의 분야에 관한 것이다. 후자는, 바람직하게 구강 또는 비강, 질내 눈, 피하, 정맥내, 근육내, 피내, 복강내, 뇌내, 비경구 또는 기타 경로에 의해 동물 또는 인간에게 투여하기 위한 약물 또는 영양물이다. 본 발명이 더욱 특히 관계하는 AP 는, 화학적 성질에 따라, 친수성이며, 예를 들어 단백질, 당단백질, 펩티드, 다당류, 리포다당류 또는 폴리뉴클레오티드이다.

본 발명은 보다 자세히는 폴리알킬렌 글리콜 (PAG) 형, 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 형의 친수성 중합체 및 소수성 폴리아미노산의 블록을 기재로 하는, 유리하게는 서브마이크론 형인 운반체 입자의 콜로이드성 현탁액에 관한 것이다.

본 발명은 상기와 같은 맨(bare) 입자, 및 하나 이상의 AP 가 로딩된 입자들로 구성되는 친수성 AP (인슐린) 용 운반체 계에 관한 것이다.

본 발명은 또한 이 CP 를 포함하는 분말 고체에 관한 것이다.

본 발명은 또한 친수성 AP (인슐린) 이 로딩된 입자의 상기 콜로이드성 현탁액의 제조 방법에 관한 것이다.

CP 내 AP를 포획하는 목적은 특히, 그것들의 작용 시간을 변형시키고/시키거나, 그것들을 처리 위치에 전달하고/하거나, 상기 AP 의 생체이용률을 증가시키는 것이다. 수많은 포획 기술이 이미 제안되었다. 그러한 기술의 목적은, 한편으로는 AP를 치료 작용의 위치에 운송될 수 있도록 하면서, 그와 동시에 그것을 유기체의 침해 (가수분해, 효소적 소화 등) 로부터 보호하는 것이며, 다른 한편으로는 작용 위치에서의 AP 방출을 제어하여, 유기체에 유용한 양을 원하는 수준으로 유지시키는 것이다. 그와 같은, 유기체 내 운송 및 체류 변화들에 연관된 AP 는 예컨대 단백질이나, 그것은 또한 합성 또는 천연 기원의 유기 분자들과 매우 상이한 생성물일 수 있다. [M.J. HUMPHREY 의 평론 "Delivery system for peptide drugs", S. DAVIS 및 L. ILLUM 편저, Plenum 출판부, N.Y. 1986] 은, 운반체와 제어된 방출계의 이점 및 AP 생체이용률의 향상과 관련된 문제점을 논하고 있다.

CP 형성을 위해 고려될 수 있는 모든 물질들 중, 중합체가 그 고유 성질로 인해 점차 널리 사용되고 있다. CP 에 대해 얻고자 하는 사양 시이트 (specifications sheet) 가 특히 요구되고 있으며, 특히 하기 사양을 포함한다 :

1. CP 에 대해 요구되어지는 제 1 사양은, CP 가, CP 를 구성하는 중합체가 생체적합성, (분비에 의한) 제거 가능성 및/또는 생체분해성을 가지고, 또한 특히 그것이 유기체에 비독성인 생성물로 대사작용되도록 하는 것이다. 게다가, 유기체 내 생체분해는 충분히 짧은 시간 동안의 것이어야 한다.

2. CP 가 유기 용매 및/또는 계면활성제의 보조없이 안정한 수성 현탁액을 형성할 수 있는 것이 유리할 것이다.

3. CP 가, 액체 내 현탁액에서 포어 직경 0.2 ㎛ 이하의 필터를 이용한 무균 여과에 견딜 수 있을 만큼 충분히 작은 것이 바람직할 것이다.

4. CP 및 CP-AP 계가 AP 에 대해 비변성적인 방법에 의해 수득가능한 것이 바람직하다.

5. CP 는 유리하게 AP 방출 속도를 제어할 수 있어야 한다.

6. 또다른 중요 사양은, CP-AP 계가 우수한 주사용 약물을 구성할 수 있는 것이다. 주사 투여, 예컨대 정맥내 또는 근육내 주사에 대한 향상된 적합성, 즉 "주사성" 은 하기를 특징으로 한다 :

(i) (소정의 치료 분량에 대한) 감소된 주사 용량(부피), 또한

(ii) 낮은 점도.

이 2 가지 성질은, AP 의 치료 분량이 최소량의 CP 와 연합될 때 충족된다. 즉, CP 는 높은 AP 로딩 인자를 가져야 한다.

7. 주사용 제제 내 CP 의 고유 비용은 감소되어야 하고, 여기에서도 또다시 CP 가 높은 AP 로딩 인자를 가져야 한다. 사실상, 작은 크기 및 높은 로딩 인자는 CP 에 대해 요구되어지는 주요 사양이다.

8. CP 의 구성 중합체가 면역 반응을 유도하지 않을 경우도 또한 유리하다.

9. 친수성 AP 의 계통, 특히 단백질, 더욱 특히는 인슐린의 경우, CP 는 연합 및 방출의 용이성, 및 비변성적 특성의 측면에서 상기 AP 계통에 대해 적응되어야 한다.

이하 기술되는 초기 기술적 제안은 상기 사양을 모두 충족시키고자 시도하였다. 초기 제안 (a) 내지 (j) 는 하기 설명에 의해 언급된다 :

(a) 특허 US-A-5 286 495 는 반대 전하를 지닌 물질, 즉 알긴산염 (음전하) 및 폴리라이신 (양전하) 을 이용하여 수성상 내 단백질의 증기화로써 포획하는 방법에 관한 것이다. 이 제조 방법은 35 ㎛ 초과의 크기로 입자를 제조할 수 있도록 한다.

(b) 또한, 유화 기술은 AP 가 로딩된 마이크로입자를 제조하는데 통상 사용된다. 예를 들어, 특허 출원 WO 91/06286, WO 91/06287 및 WO 89/08449 은, 유기 용매가 중합체, 예를 들어 폴리락트산형 중합체의 용해에 사용되는 상기 유화 기술을 개시한다. 그러나, 그 용매는 특히 펩티드 또는 폴리펩티드 AP 에 대해, 변성적일 수 있다는 것이 밝혀졌다.

(c) 또한, [X. FOX 및 K. DOSE "Molecular evolution and the origin of life", Marcel DEKKER Inc. 발행, (1977)] 에 의해 1970 이후로 기술되었던, 프로티노이드라 불리는 생체적합성 CP 가 공지되었다. 이에 따라, 특허 출원 WO 88/01213 는 용해도가 pH 에 의존하는 합성 폴리펩티드의 혼합물에 기재하는 계를 제안한다. 상기 발명에 따른 매트릭스 마이크로입자를 수득하기 위해, 저자는 폴리펩티드의 혼합물을 용해시킨 후, pH 변화로써 그것들이 프로티노이드 입자를 석출시키도록 한다. 석출이 AP 의 존재 하에서 일어나면, AP 는 입자 내 포획된다.

(d) 특허 US 4 351 337 는 본 발명에 특징적인 AP 운송체의 분야와 상이한 분야에 관한 것으로, 또한 그 또한 고려 대상으로 인용될 수 있다. 이 특허는 유기체 내 매우 특이적인 위치에 고정되고 배치된 매스 임플란트를 개시한다. 이 임플란트는, 아미노산 N-카르복시 무수물(NCA) 단량체의 공중합에 의해 수득되는 폴리아미노산 공중합체, 예컨대 폴리(글루탐산/루이신) 또는 폴리(벤질 글루타메이트/루이신) 공중합체로 구성되는, 현미경 크기 (160 ㎛, 길이 2000 ㎛) 의 튜브 또는 중공 캡슐이다. AP 는 중합체 및 AP 의 혼합물로부터의 용매 증발 기술에 의해 유도된다. 특허 US 4 450 150 는 상기 연구된 특허 US 4 351 337 과 같은 계통에 속하고, 본질적으로 그 요지가 동일하다. 구성 성분 PAA 는 폴리(글루탐산/에틸 글루타메이트) 공중합체이다.

(e) PCT/FR 특허 출원 WO 97/02810 는, 적어도 일부가 결정성인 생체분해성 중합체 (락트산 중합체) 의 복수의 라멜라 입자 및 그 입자에 흡수된 AP 를 포함하는 활성 성분의 제어된 방출을 위한 조성물을 개시한다. 이 경우, 활성 성분은 탈착에 의해 방출된다.

(f) [발행물 "CHEMISTRY LETTERS 1995, 707, AKIYOSHI 등"] 은, 콜레스테롤의 그라프트에 의해 소수성이 된 다당류와의 초분자 착화에 의한 인슐린 안정화에 관한 것이다.

(g) [논문 "MACROMOLECULES 1997, 30, 4013-4017"] 는, L-페닐-알라닌, (벤질-L-글루타메이트 또는 O-(테트라-O-아세틸-D-글루코피라노실)-L-세린 기재의 폴리펩티드 블록, 및 폴리(2-메틸-2-옥사졸린) 또는 폴리(2-페닐-2-옥사졸린) 과 같은 합성 블록으로 구성된 공중합체를 기재하고 있다. 중합체는 수성 매질에서 응집하여, 효소 리파아제와 연합할 수 있는 400 nm 입자를 형성한다. 용어 "연합(됨)" 은 본원에서, 단백질이 물리적 현상에 의해(공유 결합 없음) 입자에 흡착됨을 의미한다.

(h) PCT 특허 출원 WO 96/29991 은 특히 인슐린과 같은 친수성 AP를 포함하는 AP를 운반하는데 유용한 폴리아미노산의 입자에 관한 것이다. 이 입자는 크기가 10 내지 500 nm 이다. WO 96/2999 에 따른 입자는, PAA 가 수용액과 접촉 시에 자발적으로 형성된다. PAA 는 소수성 중성 아미노산 단량체(AAO) 및 친수성 이온화가능한 단량체(AAI) 를 포함한다.

이 입자들은 인슐린이 바람직하게 PAA 중량 기준으로 6.5 건조 중량% 의 인슐린의 양으로 로딩될 수 있다. Ta 는 이하 기술되는 절차 Ma 에 의해 측정된다.

(i) EP 0 583 955 는 소수성 AP 를 물리적으로 트래핑할 수 있는 중합체 미셀을 개시한다. 이 미셀은 PEG/폴리-AANO 블록 공중합체 (AANO = 아미노-Acide Neutre hydrophObe = 소수성 중성 아미노산) 로 구성된다.

AANO 는 Leu, Val, Phe, Bz-O-Glu 또는 Bz-O-Asp 일 수 있고, 후자가 바람직하다. PEG/폴리-AANO 미셀 내 트래핑된 소수성 활성 성분 AP 는, 예컨대 아드리아마이신, 인도메타신, 다우노마이신, 메토트렉세이트 및 미토마이신이다.

상기 특허 출원에 주어진 유일한 예는 PEG/폴리Glu-O-Bz 기재의 미셀이다.이제, 지적컨대, 상기 에스테르 Glu-O-Bz 는 수성 매질 내 가수분해에 대해 안정하지 않다. 더욱이, 상기 문헌은, 코어가 소수성 중성 폴리아미노산으로 형성된 PEG/폴리-AANO 블록으로 구성되고, PEG 기재의 친수성 외부 격자를 포함하는 입자로서, 친수성 AP 와 연합하고, 그것을 생체 내 방출할 수 있는 입자에 대해 전혀 언급하고 있지 않다.

(j) PEG 사슬이 그라프트된 운반체 나노입자가 또한 공지되어 있고, 한 예는 폴리락티드 또는 리포좀의 나노입자이다. PEG 사슬로의 이 피복은, PEG 로 피복된 상기 나노입자 상의 (친수성) 단백질의 흡착을 피하기에 효과적인, 당업자에게 공지된 수단이다. 상기 나노입자 또는 리포좀을 기술하는데 사용된 용어는 "스텔스"이다. PEG 의 그라프트에 의한 표면 상의 단백질 흡착 방지는, 매우 수많은 문헌들, 예컨대 [L. Illum 등, J. Pharm. Sci.72, 1086 (1983)]에 기재되어 있다. "스텔스 리포좀(stealth liposomes)" 의 기재는 [D.D. Lasic, F.J. Martin, "Stealth liposomes", CRC 출판부 (BocaRaton, FL) 1995; M.C. Woodle, D.D. Lasic, "Sterically stabilized liposomes" Biochim. Biophys. Acta 1992, 1113, 171-199; M.C. Woodle, "Controlling liposome blood clearance by surface grafted polymers", Advanced Drug Delivery Reviews 1998, 32, 139-152] 에서 찾아볼 수 있다. 이 문제들의 요약은 또한 ["Polyethylene glycol-coated biodegradable nanospheres, R. Gref 등, "Microparticulates for the delivery of proteins and vaccines", S. Cohen 등, Marcel Dekker 발행, 1996"] 에서 찾아볼 수 있다. 이러한 스텔스 나노입자는 활성 입자가 로딩되는 것이 방지되고, 상기 저자들은 활성 입자를, 유기 용매를 이용하는 방법에 의해 코어 내 포획할 것을 권장한다. 이제 이러한 유형의 방법은 상기 정의된 사양 시이트의 사양 2 & 4 를 따르지 않는다.

그러므로 상기 내용으로부터, 상기 기재된 초기 기술적 제안, 특히 제안 (i) 이 상기 언급한 사양 시이트의 사양을, 특히 친수성 활성 성분 (인슐린과 같은 단백질) 과의 입자의 연합, 및 친수성 AP 가 로딩된 상기 입자가 운송에 의해 부정적 영향을 받지 않으면서 생체 내에서 AP 를 방출하는 성능에 대해 불완전하게 충족시킴이 명백하다.

상기 사실들이 성립됨에 따라, 본질적 목적들 중 하나는, 계면활성제 또는 유기 용매의 보조 없이, CP 의 안정한 수성 현탁액을 자발적으로 형성하고, 친수성 AP (특히, 인슐린과 같은 단백질) 의 운반에 적합한 신규 CP 를 제공하는 것이다. 그 목적은, 친수성 활성 성분, 바람직하게는 인슐린과 같은 단백질이 로딩된 입자의 현탁액을 수득하는 것이다.

본 발명의 또다른 본질적 목적은, 폴리아미노산 (PAA) 기재의, 안정한 콜로이드성 수성 현탁액 (특히 가수분해에 대해 안정함) 또는 분쇄 형태의 신규 CP 로서, 바람직하게 상기 언급된 시이트의 사양 1 내지 9 를 충족하는 신규 CP 를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 본질적 목적은, 특허 출원 EP 0 583 955 에 개시된 입자를 향상시키는 것이다.

본 발명의 또다른 본질적 목적은, 특히 AP 로딩 인자 및 AP 방출 동력학의제어 측면에서 완벽하게 제어되는 특성을 갖는, 신규 CP 의 현탁액을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 본질적 목적은, 주사용 친수성 의약 현탁액을 제공하는 것이다. 상기 현탁액에 필요한 사양은 작은 주사 용량 및 낮은 점도이다. 콜로이드성 입자에 의해 운송되는 활성 성분 AP 의 양을 제한하지 않으면서, 주사 분량 당, 콜로이드성 입자의 질량을 가능한 한 작게 하여, 치료 효능을 감축시키지 않는 것이 중요하다.

본 발명의 또다른 본질적 목적은, 상기 언급된 사양을 충족하는 활성 성분 운반체 입자를 포함하고, 인간 또는 동물에 대한 투여, 예를 들어 구강 투여에 적합한 적절한 생약 형태를 구성하는 콜로이드성 수성 현탁액 또는 분말 고체를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 본질적 목적은, 멸균 목적을 위한 0.2 ㎛ 필터 상에 여과될 수 있는 활성 성분 운반체 입자를 포함하는 콜로이드성 현탁액을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은, 특히 친수성 활성 성분 (특히 인슐린과 같은 단백질) 용 운반체로서 유용한 PAA 입자 (건조 또는 액체 내 현탁액 형태) 의 제조 방법으로서, 수행하기에 보다 간단하고, 활성 성분에 대해 비변성적이며, 부가적으로 수득된 입자의 평균 크기에 대한 미세한 제어를 항상 가능하게 하는 방법을 제안하는 것이다.

본 발명의 또다른 본질적 목적은, 특히 구강, 비강, 질, 눈, 피하, 정맥내,근육내, 피내, 복강내, 뇌내 또는 비경구 투여를 위한 약물 (예컨대, 백신) 의 제조를 위해, 수성 현탁액 또는 고체 형태의 상기 언급된 입자를 사용하는 것이며, 특히 이들 약물의 친수성 활성 성분은 단백질, 당단백질, 펩티드, 다당류, 리포다당류, 올리고뉴클레오티드 및 폴리뉴클레오티드일 수 있다.

본 발명의 또다른 목적은, 활성 성분의 연장된 방출을 위한 계로 구성되는 유형의 약물로서, 제조하기 용이하고 경제적이며, 또한 생체적합성을 가지고, AP 의 매우 높은 수준의 생체이용률을 확실히 할 수 있는 약물을 제공하는 것이다.

(무엇보다도) 그 생성물과 관련된 목적은, 우선적으로 특히 하나 이상의 활성 성분 (AP) 을 운반하는데 사용될 수 있는 서브마이크론 입자의 콜로이드성 현탁액으로서, 그것이 함유하는 입자가 친수성 AP, 바람직하게는 단백질 (이 AP 는 특히 바람직하게는 인슐린으로 구성됨) 으로부터 선택되는 하나 이상의 AP 와 연합되고/되거나 연합될 수 있는 것을 특징으로 하는 현탁액에 관한 본 발명에 의해 달성되며, 상기 입자는 하기와 같은 개별적 초분자 배치를 가진다 :

· 하기를 포함하는 양친성 공중합체를 기재로 함 :

- α-펩티드 연결기를 갖는 소수성의 직선상 폴리아미노산(들)(PAA) 의 하나 이상의 블록 (이 PAA 블록을 구성하는 소수성 아미노산 AAO 는 상호 동일하거나 상이함); 및

- 폴리알킬렌 글리콜 (PAG) 형, 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 형의 친수성 중합체(들) 의 하나 이상의 블록; 및

· 비용해된 상태로 콜로이드성 현탁액 내 하나 이상의 AP 와 연합하고, 그것을 특히 생체 내에서 연장 및/또는 지연 방식으로 방출할 수 있음.

안정한 콜로이드성 수성 현탁액 또는 분말 고체 형태의 신규 운반체 입자 CP 의 주요 진보적 측면들 중 하나는, 계면활성제 또는 용매의 부재 하에 안정한 콜로이드성 수성 현탁액을 형성하고, 친수성 AP 에 적당한 서브마이크론 크기의 입자를 수득하기 위한 친수성 중합체/소수성 폴리아미노산 블록 공중합체의 신규 선택법에 관한 것이다.

소수성 활성 성분을 트래핑하는 것으로 공지된 (EP 0 583 955), 폴리알킬렌 글리콜 친수성 중합체/소수성 폴리아미노산 블록 공중합체 기재의 입자가 친수성 AP, 특히 인슐린과 같은 단백질과 연합하고, 그것을 생체 내 방출할 수 있다는 것은 특히 놀랍고도 예견하지 못하던 것이다.

게다가, 당업자는 친수성 단백질의 흡착을 방지하기 위한 PEG 의 외부층 사용에 익숙한 바, 대조적으로 다량의 친수성 단백질을 흡착한다고 일컬어지는, 나노입자의 착안을 위해 상기 용액을 매우 당연히 제거할 것이다. 모든 기대와 대조적으로, 이는 본 발명의 구성 내에 전혀 포함되지 않는 경우이다.

PAG/폴리-AAO 블록 공중합체의 구조 및 아미노산 AAO 의 성질은 하기와 같이 되도록 선택된다 :

· 중합체 사슬이 작은 입자 (CP) 로 자체 조직화하고;

· 입자가 수 중 및 생리학적 매질 중의 안정한 콜로이드성 현탁액을 형성하며;

· CP 가 단백질에 대해 비변성적인 자발적 메카니즘에 의해 수성 매질 내단백질 또는 기타 친수성 AP 와 연합하고; 또한

· CP 가 생리학적 매질 내 친수성 AP 을 방출하고, 보다 정확히는 생체 내에서 그러하며; 방출 동력학은 CP 의 전구체인 PAG/폴리-AAO 공중합체의 성질에 의존한다.

이에 따라, 공중합체의 특이적 구조를 변화시킴으로써, 동력학적 및 정량적 관점에서 볼 때 AP 연합 및 방출 현상을 제어할 수 있다.

바람직하게는, PAG 는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜 (PPG) 에 상응하고, PEG 가 특히 바람직하다.

본 발명의 또다른 특징에 따라, PAG, 바람직하게는 PEG 가 500 내지 50,000 D, 바람직하게는 1000 내지 10,000 D, 특히 바람직하게는 1000 내지 5000 D 의 중량 평균 분자량을 가진다.

유리하게는, 본 발명에 따른 현탁액은, 사용된 인슐린의 중량에 대한 연합된 인슐린의 중량의 % 로 표현하고, 절차 Ma 에 의해 측정한, 운반체 입자의 인슐린 로딩 인자 Ta 가 하기와 같음을 특징으로 한다 :

7 ≤ Ta,

바람직하게는 8 ≤ Ta ≤ 50,

특히 바람직하게는 10 ≤ Ta ≤ 30.

절차 Ma :

(a) 인슐린 수용액의 제조 : 동결건조된 인간 재조합 인슐린 (Sigma no. 10259) 을 0.1 N HCl 용액에 25 ℃ 에서 5 분간 주입한다. 이어서, 이 용액을포스페이트 완충액에 주입하고, 이를 0.1 N NaOH 의 첨가로써 최종적으로 중성화한다. 용액을 계속해서 실온에서 30 분간 방치한 후, 0.8 ~ 0.2 ㎛ "acrodisc" 막 상에 여과한다. 인슐린의 중량을, 그 농도가 60 IU/ml 이도록 하는, 용액의 원하는 체적의 함수로서 계산한다.

(b) 인슐린 용액 내 연합된 PAA 운반체 입자의 분산 : 동결건조된 CP 를 10 mg CP/ml 용액의 속도로 인슐린 용액에 첨가한다. 이 혼합물을 보어텍스(Vortex)에서 2 또는 3 회 교반한 후, 실온에서 18 시간 동안 좌우흔듬식 교반기(rocking stirrer) 에 둔다. 이어서 콜로이드성 현탁액을 4 ℃ 에서 저장한다.

(c) 연합된 인슐린으로부터의 유리 인슐린의 분리, 및 유리 인슐린의 검정 : 인슐린 및 CP 를 함유하는 용액을 60,000 g 에서 1 시간 동안 20 ℃에서 원심분리하였다. 상등액을 초여과막 (컷-오프 쓰레스홀드 : 100,000 Da) 이 장착된 튜브에 옮기고, 20 ℃에서 2 시간 동안 3000 g에서 원심분리한다. 여과물 내 인슐린을 HPLC 로 분석한다.

입자를 구성하는 공중합체를 약간 더 잘 정의하기 위해, 그것은 교대 서열 형 (블록) 의 것이라고 나타낼 수 있다.

이에 따라, 본 발명에 따른 CP 의 현탁액의 한 바람직한 구현예에서,

- AAO 가 소수성 중성 아미노산 AANO 이고,

- 비 PAG/AANO 가 >1 이며, 또한

- PEG 블록의 절대 길이가 >2 단량체, 바람직하게는 >10 단량체, 특히 바람직하게는 >20 단량체이다.

유리하게는, AANO 기재의 PAA 블록(들)은 5 이상, 바람직하게는 10 이상, 특히 바람직하게는 적어도 10 내지 50 AANO 를 포함한다.

더욱 더 바람직하게는, 입자가 PEG/AANO 의 "2-블록" 이다.

실제로, 이 소수성 중성 아미노산 (AANO)은 하기를 포함하는 군에서 선택된다 :

· 천연의 중성 아미노산 : Leu, Ile, Val, Ala, Pro, Phe, 이들의 혼합물,

· 희귀 또는 합성 중성 아미노산 : 노르류이신, 노르발린, 및

· 극성 아미노산의 유도체 : 메틸 글루타메이트, 에틸 글루타메이트, 벤질 아스파르테이트, N-아세틸라이신.

본 발명의 한 바람직한 특성에 따라서, 입자를 구성하는 블록 PAA 는 30 내지 600, 바람직하게는 50 내지 200, 특히 바람직하게는 60 내지 150 의 중합도를 가진다.

본 발명은 상기 정의된 바와 같은 맨 입자의 현탁액 뿐만 아니라, 하나 이상의 활성 성분 AP를 포함하는 입자의 현탁액에 관한 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 현탁액은 수성이고, 안정하다. 이들 입자는, AP 의 로딩 여부와 상관없이, 유리하게는 액체 (현탁액), 바람직하게는 수성 액체 내에 분산된 형태이나, 또한 상기 정의된 바와 같은 CP 의 현탁액으로부터 수득된 분말 고체 형태일 수도 있다.

이에 따라서, 본 발명은 CP 의 콜로이드성 (바람직하게는 수성) 현탁액 뿐만아니라, 본 발명에 따른 현탁액으로부터 수득되는 CP 함유의 분말 고체에 관한 것이다.

본 발명의 또다른 필수 목적은 콜로이드성 현탁액 형태 또는 분말 고체 형태인, (상기 기재된 바와 같은) 선택된 입자들의 제조 방법에 관한 것이다. 당해 제조 방법은 본질적으로 전구체 PAG/폴리-AAO 공중합체를 합성하여, 이를 구조화된 입자로 전환하는 것으로 구성된다.

보다 정확하게는, 제조 방법은 무엇보다도, 특히 하나 이상의 활성 성분을 운반하는데 사용될 수 있는 서브마이크론 구조화된 입자로 형성된 상기 언급된 분말 고체의 제조 방법으로서, 상기 입자는 하기와 같은 개별적 초분자 배치를 가진다 :

· 하기를 포함하는 양친성 공중합체를 기재로 함 :

상기 방법은 하기를 특징으로 한다 :

1) 각기 하나 이상의 알킬렌 글리콜 또는 아미노산 단량체를 각각 포함하고,하나 이상의 PAA-PAG 연결기 (바람직하게는 아미드 연결기)를 형성하기 위한 하나 이상의 반응기를 포함하는 하나 이상의 PAG 세그먼트가 하나 이상의 PAA 세그먼트와 반응하여, PAG/폴리-AAO 블록 공중합체를 수득하고;

2) 단계 1 에서 수득된 PAG/폴리-AAO 블록 공중합체를 석출 (바람직하게는 수 중에서 석출) 시킴으로써, 그 결과 AP 운반체 입자를 자발적으로 형성시키며;

3) 하나 이상의 친수성 활성 성분 AP 를 입자와 연합시키고;

4) 반응 매질을 임의적으로 투석하여, 구조화된 입자의 수성 현탁액을 정제하며;

5) 상기 단계 4 의 현탁액을 임의적으로 농축하고; 또한

6) 액체 매질을 제거하여, 입자를 포함하는 분말 고체를 수집할 수 있음.

단계 1 의 PAG 및 PAA 세그먼트의 작용기는 아민 또는 카르복실산기일 수 있다. PAG-PAA 연결기의 형성 전, 중 또는 후에, PAG 및/또는 PAA 블록을 수득하게 하는 중합을 수행함을 구상할 수 있다.

이 모든 변형법들은 당업자의 영역 내에 포함된다 :

바람직하게, 단계 1 에서,

1.1) 하기의 것들의 존재 하에, 소수성 아미노산 AAO 의 아미노산 N-카르복시 무수물 (NCA) 로 형성된 단량체들 간에 공중합을 수행하고 :

- 바람직하게 N-메틸피롤리돈 (NMP), 디메틸포름아미드 (DMF), 디메틸 술폭시드 (DMSO), 디메틸아세트아미드 (DMAc) 및 피롤리돈을 포함하는 군에서 선택되는 하나 이상의 비방향족 극성 용매 (NMP 가 특히 바람직함); 및

- 임의적으로, 비양자성 용매 (바람직하게는 1,4-디옥산) 및/또는 양자성 용매 (바람직하게는 피롤리돈) 및/또는 물 및/또는 알콜로부터 선택되는 하나 이상의 조용매 (메탄올이 특히 바람직함);

1.2) 하나 이상의 폴리알킬렌 글리콜 PAG (바람직하게는 PEG 또는 PPG), 중합체 블록이, 알킬렌 글리콜 단량체 (바람직하게는 에틸렌 또는 프로필렌 글리콜) 의 중합체으로부터 취해지거나 제조되며, 상기 PAG 블록은 바람직하게 아민 (특히 1차 또는 2차 아민), 알콜 또는 티올을 포함하는 군에서 선택되는 하나 이상의 친핵성의 반응성 작용기에 의해 (유리하게는 한 말단 또는 양 말단에서) 작용화되며; 또한

1.3) 단계 2 의 작용화된 PAG를 중합 전, 중 또는 후에 폴리-AAO 블록 중합 매질에 첨가함.

방법의 단계 1.1 은 예컨대, [논문 "Biopolymers, 15, 1869 (1976)"] 및 [문헌 H.R.KRICHELDORF 의 제목 "α-아미노산 N-카르복시 무수물 및 관련 헤테로사이클", Springer Verlag (1987)] 에 기재된 α-아미노산 N-카르복시 무수물 (NCA) 의 공지된 중합 기술에 기초한다.

한 변형법에서, 단계 1.1 후, 수득된 폴리(AAO/pAAI) 공중합체를 (바람직하게는 수 중에서) 석출시키고, 이 석출물을 수집한다. 이 변형법은 폴리(AAO/pAAI) 공중합체가 안정한 중간체를 구성하는 석출물 형태로 단리되는 배치식 입자 제조 방식에 해당한다. 이 석출물을 예를 들어 여과 제거, 세척 및 건조시킬 수 있다.

특히 바람직하게는, NCA-pAAI 는 O-알킬화 글루탐산 또는 아스파르트산의 NCA, 예를 들어 NCA-Glu-O-Me, NCA-Glu-O-Et 또는 NCA-Glu-O-Bz (Me = 메틸, Et = 에틸) 이다.

바람직하게는, 작용화된 PAG 블록(들)은, 정상적 대기압 하에, 바람직하게 20 내지 120 ℃ 의 온도에서 일어나는 중합 전 및/또는 개시 시에 도입된다.

유리하게는, 단계 1.2 의 PAG 는 시판용 제품 (예컨대 PEG) 이거나, 에틸렌 옥시드의 중합법의 의한 지금까지 공지된 방식으로 수득된다.

다른 파라미터, 예컨대 중합 농도, 반응 혼합물의 온도, 친수성 중합체의 첨가 방식, 감압 사용, 반응 시간 등을 당업자에게 공지된 원하는 효과에 따라 조정한다.

하나 이상의 AP 의 입자와의 연합 (단계 3) 을, 본 발명에 따른 수가지 방법들을 이용함으로써 수행할 수 있다. 이 방법들의 비제한적 예는 이하 열거된다 :

제 1 방법에 따라, AP 함유의 (수성 또는 비수성) 액체상을 입자의 콜로이드성 현탁액과 접촉시킴으로써, AP 를 입자와 연합시킨다.

제 2 방법에 따라, 고체 상태의 AP 를 입자의 콜로이드성 현탁액과 접촉시킴으로써, AP를 입자와 연합시킨다. 고체 AP 는 예컨대 동결건조물, 석출물 또는 분말의 형태, 혹은 또다른 형태일 수 있다.

제 3 방법에 따라, 생성물로서, 또한 그 제조 특징에 의해 상기 기재된 바와 같은 분말 고체 (PAA) 를 AP 함유의 (수성 또는 비수성의) 액체 상과 접촉시킨다.

제 4 방법에 따라, 생성물로서, 또한 그 제조 특징에 의해 상기 기재된 바와 같은 분말 고체를 고체 형태의 AP 와 접촉시킨다. 이어서 이 고체 혼합물을 액체 상, 바람직하게는 수용액 중에 분산시킨다.

이 모든 방법들에서, 사용된 AP 는 순수 형태 또는 예제형된(preformulated) 형태일 수 있다.

임의적 단계 5 에 따라, 불순물 (염) 및 용매를 임의의 적절한 물리적 분리 처리, 예컨대 투석여과 (투석) (단계 4), 여과, pH 변경, 크로마토그래피 등으로써 제거한다.

이는 예컨대 증류 또는 임의의 다른 적당한 물리적 수단, 예컨대 초여과 또는 원심분리로써 농축될 수 있는 구조화된 입자의 수성 현탁액을 수득하도록 한다.

입자를 농축시키거나 (단계 6), 또는 그것들을 액체 현탁 매질로부터 분리시키기 위해 (단계 7), 수성상을, 예를 들어 증류, 건조 (예컨대 오븐 내 건조), 동결건조 또는 임의의 다른 적당한 물리적 수단, 예컨대 초여과 또는 원심분리에 의해 제거한다. 백색 분말 고체를 상기 단계 7 의 마지막에 회수한다.

지적컨대, 상기 방법의 단계 1, 2, 3, 4 및 임의적으로 5 의 이행은 높은 친수성 AP 로딩 인자를 갖는 서브마이크론 입자의 콜로이드성 현탁액의 제조에 해당한다. 이 콜로이드성 현탁액의 제조에서, 단계 1 의 PAG/폴리-AAO 양친성 공중합체를 PAG 의 적어도 일부가 가용성이고, AANO 의 적어도 일부가 불용성인 수성 매질에 둔다. PAG/폴리-AANO 공중합체는 이 수성 매질 중에서 나노입자 형태로 존재한다.

본 발명에 따른 CP 의 현탁액의 대안적 제조 방법은, 생성물로서, 또한 그 제조 방법에 의해 상기 기재된 바와 같은 분말 고체를 AAN 에 대해 비용매인 수성 매질과 접촉시키는 것으로 구성된다.

입자가 소정의 나노미터 크기를 가질 때, 현탁액은 멸균 필터 상에서 여과될 수 있어, 멸균 주사용 의약용 액체를 저비용으로 용이하게 수득할 수 있다. 본 발명에 의해 제공되는, 입자 크기를 제어하고 25 내지 100 nm 의 Dh 값에 도달하기 위한 능력은 매우 중요한 자산이다.

본 발명은 또한 입자 전구체인 PAG/폴리-AAO 공중합체로 구성되는 것을 특징으로 하는, 상기 기재된 방법의 신규 중간체에 관한 것이다.

또다른 그것의 특징에 따라, 본 발명은 상기 정의되고/되거나, 상기 기재된 방법에 의해 수득된 바와 같은 현탁액 및/또는 분말 고체에 관한 것이며, 상기 현탁액 및 상기 고체는 바람직하게 하기의 것들로부터 선택되는 하나 이상의 친수성 활성 성분을 포함한다 :

· 백신;

· 단백질 및/또는 펩티드 (이들 중 하기 것들이 특히 바람직하게 선택된다 : 헤모글로빈, 시토크롬, 알부민, 인터페론, 항원, 항체, 에리트로포이에틴, 인슐린, 성장 호르몬, 인자 VIII 및 IX, 인터류이킨 또는 이들의 혼합물, 및 조혈 자극 인자);

· 다당류 (헤파린이 더욱 특히 선택된다);

· 핵산, 바람직하게는 RNA 및/또는 DNA 올리고뉴클레오티드;

· 각종 항암 화학치료법 범주에 속하는 비-펩티도-단백질 분자, 특히 안트라사이클린 및 탁소이드; 및

· 이들의 혼합물.

마지막으로, 본 발명은 친수성 AP 가 로딩된, 상기 정의된 바와 같은 현탁액 및/또는 분말 고체를 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제학적, 영양적, 식물 건강 또는 화장적 전유품에 관한 것이다.

또다른 목적에 따라, 본 발명은 또한 AP 의 제어된 방출을 위한 계로 구성되는 유형의 약물을 제조하기 위한, AP 가 로딩된, 상기 CP (현탁액 또는 고체 형태) 의 용도에 관한 것이다.

약물의 예는, 구강, 비강, 질내 눈, 피하, 정맥내, 근육내, 피내, 복강내, 뇌내 또는 비경구 경로에 의해 바람직하게 투여될 있는 약물이다.

고려될 수 있는 화장용 용도의 예는, 본 발명에 따라 CP 와 연합된 AP를 함유하고, 피부를 통해 투여될 수 있는 조성물이다.

하기 실시예는 인슐린으로 형성된 친수성 AP 에 관한 것으로, 그것의 상이한 생성물/방법/용도 특징에 따라 본 발명의 이해를 도울 것이다. 이 실시예는 인슐린이 로딩되거나 로딩되지 않을 수 있는 폴리아미노산 입자의 제조 방법을 설명하고, 또한 상기 입자의 구조적 특성 및 성질을 제시한다.

도 1 - 시간 T (hr) 의 함수로서의, 속도 0.5 lU/kg 로 인슐린이 로딩된 CP 의 제형물을 주사한 후의 당혈증 G:(기준 수준에 대한 % 평균), 및 평균인슐린혈증 I (mIU/l) :의 변화.

실시예 1 -

폴리(류이신/에틸렌 글리콜) 블록 공중합체의 제조

NCA 를 블록 또는 랜덤 구조를 가지는 중합체로 중합시키는데 사용되는 기술은 당업자에게 공지되어 있고, 또한 [문헌 H.R.KRICHELDORF 의 제목 "α-아미노산 N-카르복시 무수물 및 관련 헤테로사이클", Springer Verlag (1987)] 에 상세하게 기재되어 있다. 하나의 상기 중합체의 합성이 이하 상세하게 설명된다.

폴리(Leu) ₄₀ -PEG 의 합성 :10 g 의 NCA-Leu 를 60 ℃ 에서 150 ml 의 NMP 에 용해시킨다. 50 ml 의 NMP 중 2 g 의 아미노에틸-PEG (Mw = 5000 D) 의 용액 5 ml을 한 번에 단량체에 첨가한다. 2 시간 후, 반응 매질을 1 ℓ 의 물에 주입한다. 형성된 석출물을 여과 제거, 세척 및 건조시킨다. 수율 > 95 %.

실시예 2 -

폴리(페닐알라닌/에틸렌 글리콜) 블록 공중합체의 제조

폴리(Phe) ₄₀ -PEG 의 합성: 10 g 의 NCA-Phe 를 60 ℃에서 150 ml 의 NMP 에 용해시킨다. 50 ml 의 N-메틸피롤리돈 (NMP) 중 2 g 의 아미노에틸-PEG (Mw = 5000 D) 의 용액 5 ml를 한 번에 단량체에 첨가한다. 2 시간 후, 반응 매질을 1 ℓ 의 물에 주입한다. 형성된 석출물을 여과 제거, 세척 및 건조시킨다. 수율 > 95%.

실시예 3 -

광산란법(LS) 및 투과전자분광법(TEM) 에 의한 나노입자의 증명

중합체 1 의 입자 10 mg 을 10 ml 의 물 또는 염 수용액에 현탁시킨다. 이어서, 그 용액을 코울터(Coulter) 입도분석기 (또는 레이저 회절장치) 에 도입한다. 시험된 상이한 생성물들의 입도 분석 결과가 하기 표 1 에 나와 있다.

CP 의 크기 측정

실시예	중합체	크기(nm)
1	폴리(Leu)₄₀-PEG	100
2	폴리(Phe)₄₀-PEG	100

실시예 4 -

단백질 (인슐린) 과의 나노입자의 연합 시험

pH 7.4 의 등장성 포스페이트 완충액을 사용하여, 40 lU/ml 에 상응하는, 1.4 mg/ml 를 함유하는 인간 인슐린의 용액을 제조한다. 실시예 1 에서 제조된 10 mg 의 CP를 1 ml 의 상기 인슐린 용액에 분산시킨다. 실온에서 15 시간 동안 인큐베이션한 후, CP 와 연합된 인슐린 및 유리 인슐린을 원심분리 (60,000 g, 1 시간) 및 초여과 (여과 쓰레스홀드 : 300,000 D) 에 의해 분리한다. 여과물로부터 회수된 유리 인슐린을 HPLC 또는 ELISA 에 의해 분석하고, 연합된 인슐린의 양을 차이로써 구한다. CP 와 연합된 인슐린의 양은 0.77 mg 초과이며, 이는 사용된 총 인슐린의 55 % 초과를 나타낸다.

하기 표는 상이한 CP 상에 수행된 연합도 측정의 결과를 나타낸다. 연합도는 1.4 mg/ml 의 인슐린 및 10 mg/ml 의 CP 를 함유하는 제제에서 사용된 인슐린에 대한 연합된 인슐린의 퍼센티지를 나타낸다. 이 값은 100 % 의 단백질 결합의 제형을 나타내며, CP 100 mg 당 인슐린 mg 로 표시되는 로딩인자로 전환된다.

0.14 mg 인슐린/mg CP 의 혼합물에 대한 인슐린과의 연합도 측정

실시예	중합체	로딩 인자mg/100mg CP
1	폴리(Leu)₄₀-PEG	13.6
2	폴리(Phe)₄₀-PEG	> 15

실시예 5-

단식시킨 건강한 개의 인슐린-로딩된 CP 의 약물동력학(pharmacokinetics 및 pharmacodynamics)

이 실시예의 프로토콜은 하기와 같다 :

실시예 4 의 제제를, 전체 췌장절제시켜 당뇨화시키고, 전날 저녁 이후 단식시킨 개에게 주사하였다. 11 am 에, 제제를 동물의 생 체중 kg 당, 인슐린 0.5 IU 의 분량으로 흉부에 피하 투여하였다. 투여된 체적은 0.18 내지 0.24 ml 이다. -4, -2, 0, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44 및 48 시간 째에, 1 ml 의 혈액을 진공 하에, 경부 천자(jugular puncture)로써 나트륨 헤파리네이트 관에 취한다. 30 ㎕ 의 전체 혈액을 즉시 사용하여, 당혈증을 측정한다. 이어서 관을 원심분리하고, 상등액을 데칸테이션하고, 혈장을 -20 ℃에서 저장하여, 인슐린을 분석한다. 이하 도 1 에 나와 있는 결과는, 인슐린이 12 시간까지 방출됨(연속선)과, 또한 주사 후, 20 시간까지 연장된 시간까지 실질적 저혈당 효과가 있음(점선)을 보여준다.

본 발명에 따른 CP 의 존재 하에서의 인슐린의 작용 (저혈당 효과) 시간의 측정

실시예	중합체	기준 수준으로의 복귀 시간(h)
	가용성 인슐린(CP 부재)	1
1	폴리(Leu)₄₀-PEG	20
2	폴리(Phe)₄₀-PEG	> 20

이 실시예는 본 발명에 따른 CP 의 존재 하에서의 인슐린의 비변성을 입증한다.

그것은 또한 비제형된 인슐린 대비의, 인슐린 작용 시간의 증가, 및 그에 따른 인슐린의 제어된 방출을 위한 계로서의 CP 의 유용성을 입증한다.

Claims

특히 하나 이상의 활성 성분 (AP) 을 운반하기 위해 사용될 수 있는 서브마이크론 입자의 콜로이드성 현탁액으로서, 상기 입자가 하기와 같은 개별적 초분자 배치를 가지고 :

· 하기를 포함하는 양친성 공중합체를 기재로 함 :

- α-펩티드 연결기를 갖는 소수성의 직선상 폴리아미노산(들)(PAA) 의 하나 이상의 블록 (이 PAA 블록을 구성하는 소수성 아미노산 AAO 는 상호 동일하거나 상이함); 및

- 폴리알킬렌 글리콜 (PAG) 형, 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 형의 친수성 중합체(들) 의 하나 이상의 블록; 및

· 비용해된 상태로 콜로이드성 현탁액 내 하나 이상의 AP 와 연합하고, 그것을 특히 생체 내에서 연장 및/또는 지연 방식으로 방출할 수 있음;

그것이 함유하는 입자가 친수성 AP, 바람직하게는 단백질 (이 AP 는 특히 바람직하게는 인슐린으로 구성됨) 으로부터 선택되는 하나 이상의 AP 와 연합되고/되거나 연합될 수 있는 것을 특징으로 하는 현탁액.
제 1 항에 있어서, 사용된 인슐린의 중량에 대한 연합된 인슐린의 중량의 % 로 표현하고, 절차 Ma 에 의해 측정한, 운반체 입자의 인슐린 로딩 인자 Ta 가 하기와 같음을 특징으로 하는 현탁액 :

7 ≤ Ta,

바람직하게는 8 ≤ Ta ≤ 50,

특히 바람직하게는 10 ≤ Ta ≤ 30.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, PAG, 바람직하게는 PEG 가 500 내지 50,000 D, 바람직하게는 1000 내지 10,000 D, 특히 바람직하게는 1000 내지 5000 D 의 중량 평균 분자량을 가지는 것을 특징으로 하는 현탁액.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

- AAO 가 소수성 중성 아미노산 AANO 이고,

- 비 PAG/AANO 가 >1 이며, 또한

- PEG 블록의 절대 길이가 >2 단량체, 바람직하게는 >10 단량체, 특히 바람직하게는 >20 단량체

인 것을 특징으로 하는 현탁액.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, AANO 기재의 PAA 블록(들)이 5 이상, 바람직하게는 10 이상, 특히 바람직하게는 적어도 10 내지 50 AANO 을 포함하는 것을 특징으로 하는 현탁액.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 입자가 PEG/AANO "2-블록"인 것을 특징으로 하는 현탁액.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, AANO 가 하기를 포함하는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 현탁액 :

· 천연의 중성 아미노산 : Leu, Ile, Val, Ala, Pro, Phe, 이들의 혼합물,

· 희귀 또는 합성 중성 아미노산 : 노르류이신, 노르발린, 및

· 극성 아미노산의 유도체 : 메틸 글루타메이트, 에틸 글루타메이트, 벤질 아스파르테이트, N-아세틸라이신.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 수성이고 안정한 것을 특징으로 하는 현탁액.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 현탁액으로부터 수득되는 것을 특징으로 하는 분말 고체.
하기를 특징으로 하는, 제 9 항에 따른 분말 고체의 제조 방법 :

1) 각기 하나 이상의 알킬렌 글리콜 또는 아미노산 단량체를 각각 포함하고, 하나 이상의 PAA-PAG 연결기 (바람직하게는 아미드 연결기)를 형성하기 위한 하나 이상의 반응기를 포함하는 하나 이상의 PAG 세그먼트가 하나 이상의 PAA 세그먼트와 반응하여, PAG/폴리-AAO 블록 공중합체를 수득하고;

2) 단계 1 에서 수득된 PAG/폴리-AAO 블록 공중합체를 석출 (바람직하게는 수 중에서 석출) 시킴으로써, 그 결과 AP 운반체 입자를 자발적으로 형성시키며;

3) 하나 이상의 친수성 활성 성분 AP 를 입자와 연합시키고;

4) 반응 매질을 임의적으로 투석하여, 구조화된 입자의 수성 현탁액을 정제하며;

5) 상기 단계 4 의 현탁액을 임의적으로 농축하고; 또한

6) 액체 매질을 제거하여, 입자를 포함하는 분말 고체를 수집할 수 있음.
제 10 항에 있어서, 단계 1에서, 하기를 특징으로 하는 방법 :

1.1) 하기의 것들의 존재 하에, 소수성 아미노산 AAO 의 아미노산 N-카르복시 무수물 (NCA) 로 형성된 단량체들 간에 공중합을 수행하고 :

- 바람직하게 N-메틸피롤리돈 (NMP), 디메틸포름아미드 (DMF), 디메틸 술폭시드 (DMSO), 디메틸아세트아미드 (DMAc) 및 피롤리돈을 포함하는 군에서 선택되는 하나 이상의 비방향족 극성 용매 (NMP 가 특히 바람직함); 및

- 임의적으로, 비양자성 용매 (바람직하게는 1,4-디옥산) 및/또는 양자성 용매 (바람직하게는 피롤리돈) 및/또는 물 및/또는 알콜로부터 선택되는 하나 이상의 조용매 (메탄올이 특히 바람직함);

1.2) 하나 이상의 폴리알킬렌 글리콜 PAG (바람직하게는 PEG 또는 PPG), 중합체 블록이, 알킬렌 글리콜 단량체 (바람직하게는 에틸렌 또는 프로필렌 글리콜) 의 중합으로부터 취해지거나 제조되며, 상기 PAG 블록은 바람직하게 아민 (특히 1차 또는 2차 아민), 알콜 또는 티올을 포함하는 군에서 선택되는 하나 이상의 친핵성의 반응성 작용기에 의해 (유리하게는 한 말단 또는 양 말단에서) 작용화되며; 또한

1.3) 단계 2 의 작용화된 PAG를 중합 전, 중 또는 후에 폴리-AAO 블록 중합 매질에 첨가함.
제 11 항에 있어서, 작용화된 PAG 블록(들)이 바람직하게 정상적 대기압 하에, 20 내지 120 ℃ 의 온도에서 일어나는 중합 전 및/또는 출발 시에 도입되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항에 따른 분말 고체 및/또는 제 10 항에 따른 방법에 의해 수득되는 분말 고체를 AAO 에 대해 비용매인 수성 매질과 접촉시키는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 현탁액의 제조 방법.
제 10 항에 따른 방법의 단계 1, 2, 3, 4 및 임의적으로 5 를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 현탁액의 제조 방법.
친수성 AP 함유의 액체상을 입자의 콜로이드성 현탁액과 접촉시킴으로써, 친수성 AP 를 입자와 연합시키는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 현탁액의 제조 방법.
고체 상태의 AP 를 입자의 콜로이드성 현탁액과 접촉시킴으로써, 친수성 AP 를 입자와 연합시키는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 현탁액의 제조 방법.
제 9 항에 따른 분말 고체 및/또는 제 10 항에 따른 방법에 의해 수득되는 분말 고체를 친수성 AP 함유의 액체 상과 접촉시키는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 현탁액의 제조 방법.
제 9 항에 따른 분말 고체 및/또는 제 10 항에 따른 방법에 의해 수득되는 분말 고체를 고체 형태의 친수성 AP 와 접촉시키는 것과, 상기 고체 혼합물을 액체 상, 바람직하게는 수용액 중에 분산시키는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 현탁액의 제조 방법.
입자의 전구체인 PAG/폴리-AAO 공중합체, 바람직하게는 PEG/폴리-AANO 공중합체로 구성되는 것을 특징으로 하는, 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 방법의 중간체.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따르고/따르거나 제 10 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 수득되는 현탁액, 및/또는 제 9 항에 따른 분말 고체로서, 바람직하게 하기의 것들로부터 선택되는 하나 이상의 친수성 활성 성분을 포함하는 현탁액 및 분말 고체 :

· 백신;

· 단백질 및/또는 펩티드 (이들 중 하기 것들이 특히 바람직하게 선택된다 : 헤모글로빈, 시토크롬, 알부민, 인터페론, 항원, 항체, 에리트로포이에틴, 인슐린, 성장 호르몬, 인자 VIII 및 IX, 인터류이킨 또는 이들의 혼합물, 및 조혈 자극 인자;

· 다당류 (헤파린이 더욱 특히 선택된다);

· 핵산, 바람직하게는 RNA 및/또는 DNA 올리고뉴클레오티드;

· 각종 항암 화학치료법 범주에 속하는 비-펩티도-단백질 분자, 특히 안트라사이클린 및 탁소이드; 및

· 이들의 혼합물.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따르고/따르거나 제 10 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 수득되는 현탁액 및/또는 제 9 항에 따른 분말 고체를 함유하는 것을 특징으로 하는, 약제학적, 영양적, 식물 건강 또는 화장적 전유품.