KR20030036011A - 암 진단을 위한 항프로테인 키나제 에이 항체를 이용한효소면역측정법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 암환자의 혈중에서 증가되는 프로테인키나제 에이 (protein kinase A, PKA)에 대한 단일클론 항체(monoclonal antibody) 및 다중클론 항체(polyclonal antibody)의 생산과 이를 이용한 효소면역측정법 [Enzyme-link immunosorbent assay, 엘리자(ELISA)]에 관한 것으로 상세하게는 정제한 프로테인키나제 에이를 동물에 면역하여 항-프로테인키나제 에이 항체를 생산하고 이를 이용하여 인체 암을 신속하고 간편하게 동정하고 진단하기 위한 효소면역측정법 (ELISA)에 관한 것이다.

Description

암 진단을 위한 항프로테인 키나제 에이 항체를 이용한 효소면역측정법 {Enzyme Linked Immunoassay for protein kinase A using anti-protein kinase A antibodies in diagnosis of cancer}
본 발명은 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체(monoclonal antibody) 및 다중클론 항체(polyclonal antibody)의 생산과 이를 이용한 효소면역측정법에 관한 것이다. 프로테인키나제 에이의 면역원의 제조 및 항-프로테인키나제 에이의 단일클론 및 다중클론 항체의 생산과 이를 이용하여 혈중 프로테인키나제 에이를 효과적으로 검출하는 엘리자법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 암환자의 혈청에서 증가하는 프로테인키나제 에이를 특이적으로 인식하는 단일클론 및 다중클론 항체에 대한 것으로서 상기의 단일 및 다중클론 항체는 혈액내 프로테인키나제 에이 항원을 검색하여 암을 진단하는 데 유용하게 사용될 수 있다.
프로테인키나제 에이는 cAMP에 의해 그 활성이 조절되는 효소로서 ATP의 γ-인산기를 세포내 여러 단백질에 전이시켜 인산화시키는 효소로 알려져 왔는 데 최근에는 인간의 직장암세포주인 LS-174의 경우 세포외 표면에도 이 프로테인키나제 에이가 존재한다는 사실이 밝혀졌다 (Kondrashin et al., Biochemistry 38, 172-179 1999). 이러한 세포외 프로테인키나제 에이는 합성 펩타이드 기질인 켐타이드 (kemptide)를 인산화시키고 이 인산화는 cAMP에 의해 자극되며 PKI (protein kinase A inhibitory protein)에 의해 억제된다는 사실이 밝혀졌다.
최근 각종 암환자의 혈청에서 이 세포외 프로테인키나제 에이의 활성이 증가된다는 사실이 밝혀짐으로서 각종 암진단의 지표물질로 이용될 수 있음을 제시한 바 있다 (Cho et al., Proc. Natl. Acad. Soc USA, 97(2) : 835-40). 암진단을 위하여 현재까지 이용되고 있는 프로테인키나제 에이의 활성측정방법은 방사성동위원소를 이용하는 방법인 데 요약하면 방사성 동위원소가 표지된 [32P]ATP와 합성 펩타이드 기질인 켐타이드 및 혈청 등을 반응 완충액에 혼합하여 반응시킨 후 켐타이드에 인산화된 정도를 측정하기 위하여 양이온을 띤 켐타이드를 음이온 필터페이퍼인 포스포셀룰로스로 수집하여 그 방사성정도를 측정하는 방법이다. 이의 방법은 방사성동위원소를 이용하기 때문에 환경오염의 문제가 있고 측정시간이 많이 걸릴 뿐만 아니라 고가의 기기가 필요하며 반응 및 처리과정도 복잡하여 비전문가는 분석이 불가능하다. 그러므로 빠른 시간에 간편하게 프로테인키나제 에이를 객관적으로 분석할 수 있는 분석방법이 필요하다. 특정물질을 정성적 또는 정량적으로 분석하는 방법에는 여러 가지가 있으며 이들 방법 중 항체를 이용한 면역분석방법이 널리 이용되고 있다.
항원 항체반응을 이용한 면역측정법이라 함은 측정하고자 하는 물질을 항원으로 하여 이에 대한 특정 항체를 만들어서 항원에 결합할 수 있도록 하고 항원 항체의 결합여부와 결합정도를 효소, 방사선 물질, 형광물질과 같은 표지를 사용하여 측정함으로써 생체물질을 정성, 정량하는 방법이다.
이와 같은 면역 측정법을 이용하여 프로테인키나제 에이를 측정하는 분석 시스템을 확립한다면, 그 시스템은 암환자의 혈중에서 증가되는 효소 프로테인키나제의 반응기작 연구에 손쉽게 사용될 수 있고 혈중에서 프로테인키나제 에이를 측정하여 효과적으로 암을 진단하는 데 큰 도움이 될 수 있다.
이에 본 발명자들은 암환자의 혈중에서 증가되는 프로테인키나제를 검색하는 효과적인 시스템을 구축하기 위하여, 프로테인키나제 에이를 마우스에 면역시키고 그 생쥐의 비장세포를 마이엘로마 세포와 융합하여 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체를 생산하는 융합세포주를 선별한 다음 이를 이용하여 프로테인키나제 에이 단백질에 높은 특이성을 나타내는 마우스 단일클론 항체를 대량으로 분리하여 그의 항원 특이성을 확인하고 또한 샌드위치 효소면역측정법에 필요한 다중클론 항체를 만들기 위하여 프로테인키나제 에이를 가토에 면역화시켜 항 프로테인키나제 혈청을 얻어 그의 항원 특이성을 확인하고 이들 두 가지 단일 및 다중클론 항체를 이용하여 정상 및 암환자의 혈중에서 효소면역측정법을 통하여 프로테인키나제를 측정하는 방법을 제공함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 암환자의 혈중에서 특이적으로 증가되는 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주 및 그들의 제조방법, 또한 프로테인키나제에 대한 다중클론항체를 제조하여 단일클론 항체와 같이 사용하여 효소면역측정법을 제공함에 그 목적이 있다.
도 1은 본 발명의 항원으로 사용되는 소심장으로부터 분리 정제한 프로테인키나제 에이를 SDS-PAGE한 결과를 도시한 것이다.
도 2는 본 발명의 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체 (ABI M001)의 항원특이성을 웨스턴 블럿한 결과를 도시한 것이다.
(HeLa Cell의 마쇄액의 상청액을 추출하여 전기영동하고 블롯팅하여 정제된 단일클론 항체를 1:2,000으로 반응시키고 퍼록시데이스가 결합된 이차항체를 1:2,000으로 사용하여 CN-DAB로 발색한 것)
도 3은 본 발명의 가토에서 생산한 다중클론 항체의 항원특이성을 웨스턴 블럿한 결과를 도시한 것이다.
(HeLa 세포주의 마쇄액의 단백질을 정량하여 1 μg 전기영동하여 블롯팅하고 일차항체를 1:1,000으로 희석하여 반응시키고 퍼록시데이스가 결합된 Fc specific Goatanti-rabbit IgG를 1:2,000으로 반응시키고 CN-DAB로 발색시킨 것)
도 4는 완충액에서 엘리자에 의한 프로테인키나제 에이의 표준곡선을 도시한 그래프이다.
도 5는 인체 정상 및 암 환자 혈청에서 엘리자법에 의한 프로테인키나제 에이를 정량한 결과를 도시한 그래프이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 프로테인키나제 에이를 특이적으로 인식하는 단일클론 항체를 제공한다.
또한 본 발명은 프로테인키나제 에이 항원을 특이적으로 인식하는 소단위형이 IgM인 단일클론항체를 생산하는 마우스 융합세포주를 제공한다.
또한 본 발명은 프로테인키나제 에이 항원을 특이적으로 인식하는 단일클론항체를 생산하는 상기 융합세포주의 제조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 프로테인키나제 에이 항원을 특이적으로 인식하는 다중클론 항체를 제공한다.
또한 본 발명은 상기 단일 및 다중 클론 항체를 이용하여 혈중의 프로테인키나제 에이를 측정하는 효소면역측정법을 제공한다.
또한 본 발명은 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체 및 다중클론항체를 혈청내 프로테인키나제 에이 항원농도를 결정하여 암을 진단하는 데 이용하는 용도를 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 프로테인키나제 에이를 특이적으로 인식하는 단일클론 항체를 생산하는 융합세포주를 제조하고 또한 다중클론 항체를 제조하기 위하여, 우선 소심장으로부터 프로테인키나제 에이를 분리, 정제한다.
본 발명은 본 발명은 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체를 생산하는 융합세포주를 제조하기 위하여, 상기 소심장에서 정제한 프로테인키나제 에이를 이용하여 마우스를 면역화시키고 이로부터 추출한 비장 세포와 마이엘로마 세포를 융합시킨 후, 소심장 프로테인키나제 에이에 특이성을 보이는 세포 클론을 효소 면역 측정법(enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA) 등으로 선별한다.
상기에서 선별된 세포 클론이 생산하는 단일클론 항체의 소 단위형을 면역확산법으로 결정하고, 그 중 소 단위형이 IgM인 하나의 마우스 융합세포주를“ABI M001”이라 명명한다.
본 발명은 프로테인키나제 에이에 대한 다중클론 항체를 제조하기 위하여, 상기 소심장에서 정제한 프로테인키나제 에이를 이용하여 가토를 면역화시키고 이로부터 혈청을 분리하여 항체를 제조하고 그 항체를 "ABI P001"이라 명명한다.
본 발명은 상기 융합세포주로부터 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체를 대량으로 생산하기 위하여, 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체를 생산하는 상기 융합세포를 다시 마우스에 주사하고 복강이 부풀어오른 생쥐에서 고농도의 융합세포를 함유하는 복수액을 취하여 본 발명의 단일클론 항체를 대량으로 얻는다.
본 발명은 상기 융합세포주로부터 얻은 프로테인키나제 에이에 대한 단일클론 항체와 가토로부터 얻은 다중클론 항체가 프로테인키나제 에이 단백질을 선별적으로 인식하는 항원 특이성이 있는가를 확인하기 위하여, 상기 과정으로 제조된 단일클론 항체 및 다중 클론 항체를 전기영동하여 웨스턴 블럿을 수행하였다.
그 결과, 상기 단일클론 항체는 프로테인키나제 에이 단백질에 대하여 선별적으로 높은 항원 인식 능력을 나타냄을 확인하였다 (도 2 와 도 3 참조).
본 발명의 가토에서 얻은 다중클론항체를 플레이트에 코팅하여 사람의 혈액에 존재하는 프로테인키나제 에이 항원을 수집하고 수집된 프로테인키나제 에이 항원에 마우스 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체플레이트를 결합시킨 후 퍼옥시다제가 결합된 항마우스 항체를 결합시켜서 퍼옥시다제 기질로 발색시켜 발색정도를 분광광도계로 측정하므로써 혈청내의 프로테인키나제 에이 항원농도를 결정할 수 있을 뿐만 아니라 암 진단에 이용될 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.
단 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 소심장 프로테인키나제 에이의 정제
희생시킨 직후 적출한 신선한 소의 심장을 1mM EDTA와 0.1 mM의 DTT를 포함하는 10mM 인산완충용액과 함께 호모게나이저(homogenizer)를 이용하여 마쇄한 후원심분리기로 상청액만을 분리하고, 초고속 원심분리기를 이용하여 세포 구성물질까지 제거한다. 1mM EDTA와 0.1mM의 DTT가 포함된 55mM 인산완충용액으로 미리 동질화된 DEAE cellulose 컬럼에 위 용액을 통과시키고 1mM EDTA와 0.1mM의 DTT가 포함된 45mM 인산완충용액으로 충분히 세척한다. 세척된 컬럼은 0-100 μM cAMP - 45mM 인산완충용액 -0.1mM DTT(주의: EDTA 없음)으로 용출시킨다. 최초 용출액의 400mL은 흘려보내고 1리터를 취하여 하이드록시아파타이트(hydroxyapatite) 컬럼에 통과시키고 45mM 인산완충용액 -0.1mM DTT로 충분히 세척하였다. 컬럼의 용출은 0-800 mM 기울기의 NaCl - 45mM 인산완충용액 - 0.1 mM DTT를 사용하였고 효소 활성이 있는 분획을 모아 농축하여 PBS로 투석하고 영하 70도 이하의 초저온 냉동고에 보관하였다.(도1 참조)
실시예 2 : 마우스의 면역
융합 세포주의 개발에 필요한 면역된 생쥐를 얻기 위하여, 상기 실시예 1에서 정제한 소심장 프로테인키나제 에이와 동량의 완전 보조항원(complete Freund's adjuvant)을 유상화가 될 때까지 잘 혼합하여 생후 6-8주된 Balb/c 마우스(mouse)의 피하내에 주사하였다. 2 주 후에 처음 주사한 것과 같은 양의 소심장 프로테인키나제 에이를 불완전 보조항원(Freund's incomplete adjuvant)에 혼합하여 복강내에 주사하였다. 그로부터 4-5일 후에 생쥐 꼬리 부위의 혈관에서 소량의 피를 뽑아내어 역가를 확인한 후 세포융합 실험 3-4 일전에 0.85% 생리식염수에 녹인 10μg의 N-아세틸글루코사민 전이효소Ⅲ를 생쥐의 정맥 및 복강내에 주사하였다.
실시예 3 : 융합세포주의 제조
융합세포주를 제조하는데 필요한 세포융합을 실시하기 위하여 상기 실시예 2 에서 정제한 소심장 프로테인키나제 에이 면역원을 주사하여 얻은 생쥐의 비장세포와 골수종 세포(myeloma cell, SP2/0)를 준비하였다.
세포융합의 모(parent)세포로는 골수종 세포 발한 SP2/0·Ag14를 10% FBS를 함유하는 RPMI 배지에서 최대밀도 5×105/mL정도로 항상 유지시켜 사용하였고, 행스완충액(Hank's buffered saline solution, HBSS)을 이용하여 2회 원심분리하였다.
상기 실시예 2에서 면역화된 생쥐를 에테르(ether)로 마취시킨 후 몸통의 좌측에 위치한 비장(spleen)을 꺼내서 곱게 간 다음 한스완충액을 이용하여 현탁액을 만들고 15mL의 원심분리관에 넣어서 원심분리하고 다시 현탁, 원심분리하여 비장세포를 충분히 세척하였다.
비장세포와 SP2/0·Ag14를 각각 10mL씩 재현탁시키고 108 개의 비장세포와 107 개의 SP2/0·Ag14를 50mL 원심분리관에서 섞어 다시 원심분리하여 침전시켰다. 원심분리된 침전물을 다시 손가락으로 가볍게 두드려서 분산시키고 37℃에서 1분간유지시킨 후에 한스완충액이 들어 있는 45% 폴리에틸렌 글라이콜(polyethylene glycol)-5% DMSO의 퓨소겐(fusogen) 1mL를 1분간에 걸쳐 넣고 또다시 1분간 약간 흔들어 주었다. 그 후 배양배지인 RPMI 배지 9mL를 3분간에 걸쳐 첨가하고 다시 50mL가 될 때까지 흔들어 주면서 서서히 RPMI을 첨가하였다. 이 현탁액을 원심분리한 후 세포 침전물을 분리 배지인 HAT 배지에 1-2×105정도로 재현탁시키고 96-웰 마이크로 타이터 플레이트(96-well microtiter plate)에 깔은 후 37℃의 항습 이산화탄소 배양기(humidified CO2incubator, Forma Scientific사)에서 배양하였다.
실시예 4 : 단일클론 항체를 생산하는 융합세포주의 선별
실시예 3에서 제조한 융합세포 중에서 소심장 프로테인키나제 에이에만 특이적으로 반응하는 융합세포주를 선별하기 위하여, 소심장 프로테인키나제 에이 항원을 이용한 효소 면역 측정법을 수행하였다. 구체적으로 소심장 프로테인키나제 에이 항원을 96-웰 엘리자 플레이트에 각 웰당 50㎕ (2 ㎍)씩 가하여 플레이트 표면에 부착시키고 반응하지 않은 항원은 인산완충용액-트윈 20(PBST) 용액으로 세척하여 제거하였다. 여기에 염소 마우스 IgG-서양 고추냉이 퍼옥시다제(goat anti-mouse IgG-horseradish peroxidase)를 가하여 실온에서 1 시간 동안 반응시키고 PBST 용액으로 충분히 세척한 다음 퍼옥시다제의 기질용액인 o-페닐렌디아민 디하이드로클로라이드(o-penylenediamine dihydrochloride, OPD)를 넣어 반응시키고 그 반응정도를 엘리자 해독기(ELISA Reader, Flow. Lab사)로 492 nm에서 흡광도를 측정하여 확인하였다.
그 결과 프로테인키나제 에이 항원에 특이적으로 높은 결합력을 갖는 항체를 분비하는 융합세포주들을 먼저 선별하였고, 여러 번 반복 실험을 퉁하여 프로테인키나제 에이 항원에만 특이적으로 반응하는 융합 세포주를 선별한 후 단일클론이되게 제한 희석(limiting dilution)하여 단일클론항체를 생성하는 융합세포주를 선별하였다.
본 발명에서 선별한 단일클론항체를 생성하는 융합세포주를 한국세포주 연구재단에 2002년 10월 8일자로 기탁번호 KCLRF-BP-00067로 기탁하였다.
상기 과정으로 6개의 클론을 얻어 클로닝하고 동결시킨 다음 상등액을 취해 효소면역측정법으로 역가를 측정하고 면역확산법으로 소 단위형(subclass type)을 확인한 결과 1개의 클론이 IgM으로 판명되었다.
실시예 5 : 다중클론 항체의 제조
프로테인키나제 에이에 대한 특이 다중클론 항체를 생산하기 위하여 실험동물로는 각종 동물이 사용될 수 있으나, 그 중에 다중클론 항체 생산에는 토끼를 사용하였다. 상기에서 얻은 프로테인키나제 에이를 멸균된 완충액, 예를 들면, 포스페이트 완충액에 용해시켜 동량의 완전 보조항원(complete Freund's adjuvant)을 유상화될 때까지 혼합하여 유탁액을 만들어 피하주사한다. 그런 다음 2주일 간격으로 불완전 보조항원(Freund's incomplete adjuvant)와 함께 피하주사로 3회 각 면역 1주일 후에 귀의 정맥으로부터 채혈한다. 채혈 후 약 3시간 실온에 방치하여 혈액이 응고한 다음 항 PKA 다중클론 항체를 생산한다.
실시예 6 : 단일클론 항체의 대량생산
상기 실시예 4에서 얻은 계속적으로 항체를 분비하는 융합세포주로부터 단일클론 항체를 대량 생산하기 위하여 0.5ml 프리스텐(pristane)을 생쥐의 복강내로 주사하였다. 1주일 후에 각각의 융합세포들을 생쥐 한 마리당 5×106씩 주사하고 복강이 부풀어 오른 생쥐에서 복수액을 채취하였다. 복수액에는 융합세포가 고농도로 자라기 때문에 이 액체를 10,000rpm에서 세포를 침전시킨 후 상층액만을 취하고 이 상층액은 정제될 때까지 -20℃에서 보관하였다.
실시예 7 : 항체의 항원 특이성 조사
상기 실시예 1에서 분리, 정제한 프로테인키나제 에이를 10% -폴리아크릴아마이드 젤 전기영동한 다음 필터막에 전기적인 방법으로 옮겼다. 막에 옮긴 단백질의 비특이적인 반응을 줄이기 위해 3% 소혈청 알부민 용액으로 12-14 시간 동안 필터막을 차단시켰다.
프로테인키나제 에이에 특이적으로 반응하는 단일클론 항체를 확인하기 위하여, 1차 항체로 본 발명의 융합세포가 생산하는 항프로테인키나제 에이 단일클론 항체를 사용하여 상온에서 2시간 반응시켰다. 상기 막을 0.5% 소혈청 알부민이 포함된 인산 완충액으로 3회 세척한 다음 2차 항체로는 서양 고추냉이 퍼옥시다제(horseradish peroxidase) 가 결합된 항 마우스 IgG을 사용하여 상온에서 반응시켰고 다시 0.5% 트윈이 포함된 인산 완충 용액으로 세척한 후 0.018%(v/v) 4-클로로-1-나프톨과 0.045%(v/v) 과산화수소가 인산 완충용액과 메탄올에 녹아 있는 기질을 이용하여 발색반응을 시켰다.
프로테인키나제 에이에 특이적으로 반응하는 다중 클론 항체를 확인하기 위하여, 1차항체로 본 발명의 가토에서 생산하는 항프로테인키나제 에이 다중클론 항체를 사용하여 상온에서 2시간 반응시켰다. 상기 막을 0.5%소혈청 알부민이 포함된 인산 완충액으로 3회 세척한 다음 2차 항체로는 서양 고추냉이 퍼옥시다제(horseradish peroxidase) 가 결합된 항 가토 IgG를 사용하여 상온에서 반응시켰고 다시 0.5% 트윈이 포함된 인산 완충 용액으로 세척한 후 0.018%(v/v) 4-클로로-1-나프톨과 0.045%(v/v) 과산화수소가 인산 완충용액과 메탄올에 녹아 있는 기질을 이용하여 발색반응을 시켰다.
그 결과 도 2 와 도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 단일클론 항체 및 다중클론 항체에 의하여 다른 단백은 전혀 인식되지 않는 반면 프로테인키나제 에이 단백질은 상기 단일 및 다중 클론 항체에 특이적으로 결합하였음을 확인하였다.
실시예 8 : 프로테인키나제 에이의 검출을 위한 효소면역측정
다중클론 항체를 각 웰당 50μl (2 μg) 씩 가하여 플레이트 표면에 부착시키고 반응하지 않은 항원은 인산완충용액-트윈 20(PBST) 용액으로 세척하여 제거하였다. 2% 소 혈청 알부민(bovine serum albumin)으로 항체가 결합되지 않은 표면을 브로킹(blocking)시 키고 상기 인산완충액으로 세척한 다음 프로테인키나제 에이나 혈청등을 100㎕씩 가하여 4℃에서 2시간동안 방치하고 인산완충액으로 세척하였다. 그런 다음 다시 세정 완충액으로 3회 세정하고 2차 항체인 효소접합체인 고추냉이 (horseradish) 페옥시다제 콘쥬게이트 고우트 항-마우스 IgG (Horseradishperoxidase Conjugated Goat Anti-mouse IgG, Sigma Co. 제) 15,000배 희석한 것을 100㎕씩 넣고 1시간 반응시킨 다음 세정 완충액으로 3회 세정하였다. 그런 다음 퍼옥시다제의 기질용액인 o-페닐렌디아민 디하이드로클로라이드(o-penylenediamine dihydrochloride, OPD)을 넣어 반응시키고 그 반응정도를 엘리자 해독기(ELISA Reader, Flow. Lab사)로 492 nm에서 흡광도를 측정하여 확인하였다.
프로테인키나제의 용량별로 흡광도가 증가되는 곡선을 얻을 수 있었고 이 표준 곡선을 제 4도에 나타내었다.
또한 상기 도 4에 나타낸 표준곡선을 이용하여, 도 5에 나타낸 바와 같이 정상 및 암환자의 혈청내 프로테인키나제 에이의 양을 측정할 수 있었다.
상기 실시예에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 암환자의 혈중에서 증가되는 프로테인키나제 에이(protein kinase A)를 특이적으로 인식하는 단일클론 및 다중클론 항체를 제조하고, 이들을 함유하는 암진단 시약을 제조함으로써 인체 암을 신속하고 간편하게 동정하고 진단 할 수 있다.

Claims (5)

  1. 기탁번호가 KCLRF-BP-00067인 융합세포주에 의해 생산되고 프로테인키나제 에이(protein kinase A)를 특이적으로 인식하는 단일클론항체 ABI M001.
  2. 제 1 항의 단일클론 항체를 생산하는 융합세포주(KCLRF-BP-00067).
  3. 프로테인키나제 에이(protein kinase A)를 특이적으로 인식하는 가토에서 얻은 다중클론항체 ABI P001.
  4. 제 1 항의 단일클론항체를 유효성분으로 포함함을 특징으로 하는 암진단용 조성물.
  5. 제 3 항의 다중클론항체를 유효성분으로 포함함을 특징으로 하는 암진단용 조성물.
KR1020020066312A 2001-10-30 2002-10-30 암 진단을 위한 항프로테인 키나제 에이 항체를 이용한효소면역측정법 KR20030036011A (ko)

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