KR100330311B1 - 인체에스-100에이6단백질에대한단일클론항체,하이브리도마세포주및그의제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 암조직 및 암세포에서 특이적으로 발현되는 인체 S-100A6 단백질에만 높은 결합력을 가지는 생쥐 유래의 단일클론 항체와 이 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 그 세포주의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 단일클론항체는 서로 다른 수종의 암환자로부터 절제된 암조직에 존재하는 암세포에만 특이적으로 결합하므로서 암세포를 특이적으로, 또 정상세포와 명확히 구분하여 선명하게 면역조직염색을 할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.

Description

인체 에스-100에이6 단백질에 대한 단일클론 항체, 하이브리도마 세포주 및 그의 제조방법
본 발명은 인체에 발생하는 수종의 암조직에서 특이적으로 발현되는 인체 S-100A6 단백질에 대한 단일클론 항체와 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 간암 조직 특히 다른 부위의 암조직으로부터 전이되어온 간암 조직과 간의 콜란지오 암조직(cholangio carcinoma)에서 그 발현이 현저하게 증가하는 인체 S-100A6 단백질에 대한 단일클론 항체와 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 암의 진전 표식자로 추정되는 단백질중의 하나인 인체 S-100A6 단백질의 재조합 단백질을 대장균에서 대량 생산하여 수종의 암 특히, 흑색종양, 대장암, 전이된 간암 등을 진단하고 치료하는데 유용하게 사용할 수 있는 인체 S-100A6 단백질에 대한 생쥐 유래의 단일클론 항체와 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 그 제조방법에 관한 것이다.
인체 S-100A6 단백질은 세포질과 핵내에 존재하는 칼슘 결합단백질로서 한 개의 분자에 2개의 칼슘 결합부위가 존재하며 세포 내부에서 칼슘이온의 항상성 유지와 칼슘관련 신호전달 및 세포의 성장, 분화와 관련이 있어 흑색종, 뇌종양, 유방암의 진전을 나타내는 표식자(marker)로 알려져 있다. 이 단백질은 핵내 신호전달 관련물질인 아넥신 IV(annexin Ⅳ)와 결합하는 과정을 통해 세포의 성장 주기와밀접한 관련을 가지고 있다고 알려져 있으며 또 세포질내의 다른 단백질들과 결합하므로써 세포의 구조 변형을 유도할 수 있어 세포의 형태 결정에도 관련되어 있는 것으로 알려져 있다. 인체 S-100A6 단백질의 기능은 아직 잘 밝혀져 있지 않지만 혈청내의 PDF(platelet-derived growth factor) 또는 EGF(epidermal growth factor) 등과 같은 성장인자에 의하여 이 단백질의 발현이 유도되며 세포내의 칼슘 또는 아연이온과 결합하는 능력이 있어 세포내에서 신호전달의 매개체로서 중요한 기능을 하고 있을 것으로 추정된다. 또 인간 골수성 백혈병과 흑색종 환자의 암세포에서 그 발현정도가 현격히 증가되는 것이 발표되어 있고 발암유전자의 하나인 라스(ras)에 의하여 형질전환된 NIH/3T3 세포주에서도 역시 인체 S-100A6 단백질의 발현이 증가된다고 알려져 있다. 인체 S-100A6 단백질은 현재 흑색종 암의 진전을 나타내는 표식자로 알려져 있지만 흑색종 세포주중에서도 특히 전이성이 높은 세포주에서 그 발현정도가 한층 더 높아 암세포의 전이과정에도 관련성이 있을 것으로 추정되고 있다. 이 단백질은 칼슘이온이 존재하는 조건하에서 아넥신 일족(annexin family), 글라이세르알데히드-3'-인산기 가수분해효소(glyceraldehyde-3'-phosphatase) 및 사이알릭산(sialic acid)과 상호작용을 할 수 있어 세포내의 대사 및 성장과 관련된 기능이 있을 것으로 추정된다. 지금까지 S-100A6 단백질이 인체 조직내에서 발현되는 특성은 주로 mRNA 수준에서 노던 블럿을 통하여 그 발현특성을 확인하여 왔으나 암세포에 특이적으로 결합하여 정상세포와 명확히 구분할 수 있는 단일클론항체의 필요성이 요구된다.
따라서, 본 발명의 목적은 서로 다른 수종의 암환자로부터 절제된 암조직에 존재하는 암세포에만 특이적으로 결합하는 우수한 특성을 가진 단일클론항체를 제조하는데 있다. 본 발명의 또다른 목적은 암세포와 특이적으로 결합하여 정상세포와 명확히 구분되며 선명하게 면역조직염색을 할 수 있는 단일클론항체를 제공하므로서 이를 사용하여 암이나 간질환 진단 및/또는 치료제로서의 용도를 제공함에 있다.
본 발명의 상기 목적은 인체 S-100A6 재조합 단백질을 대장균에서 대량 생산하고 이 단백질을 생쥐에 면역주사하여 인체 S-100A6 단백질에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체 및 이를 생산하는 하이브리도마 세포주를 생산하므로써 달성하였다.
이하, 본 발명의 구성 및 작용을 상세히 설명한다.
도1은 인체 S-100A6 단백질의 유전자를 포함하고 있는 핵산 염기서열로서, 오픈리딩후레임 부분으로부터 발현되는 재조합 단백질의 아미노산 서열이다. 밑줄은 단백질의 전사가 시작되는 코돈을 나타내고, 상자로 표시된 부분은 이 단백질이 칼슘이온과 결합할 때 사용되는 부위이다.
도2a는 대장균 세포내에서 발현되는 GST-S100A6 재조합 단백질을 전기영동한 결과이며, 도2b는 아가로스 겔상에서 전기영동을 하여 분리한 단백질들을 나이트로 셀룰로우즈 막으로 옮긴 후 인체 S-100A6에 대한 항체로 웨스턴 블라팅을 한 결과이다.
도3은 인체 S-100A6 단백질에 대한 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주가 생산하는 단일클론 항체의 면역글로블린의 아형(subtype)을 검정하기 위해 2중 확산법(double diffusion)을 시행한 결과이다.
도4는 여러 암조직을 대상으로 면역조직염색법을 실시한 결과로, 도4a는 본 발명의 단일클론 항체가 대장암 환자에게서 얻은 대장 조직 중에서 암세포의 핵 주변에만 특이적으로 결합하여 암세포가 면역염색된 것을 나타내는 사진이고, 도4b는 갑상선 암 환자로부터 얻은 조직에서도 암세포의 핵과 세포질에서만 특이적으로 반응하여면역염색되는 것을 나타낸 사진이다.
본 발명은 인체 S-100A6 유전자를 포함하는 발현벡터를 대장균내에서 배양하여 인체 S-100A6 재조합 단백질을 분리 및 정제하여 항원을 제조하는 단계; 상기 인체 S-100A6 재조합 단백질로 생쥐를 면역하여 하이브리도마 세포주를 제조하는 단계; 상기 하이브리도마 세포주로부터 상기 인체 S-100A6 단백질 항원에 특이적으로 높은 결합력을 가지는 단일클론 항체를 선별하여 대량생산 하는 단계; 및 상기 인체 S-100A6 재조합 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론항체와 인체 S-100A6 재조합 단백질과의 항원-항체 반응을 통하여 그 특이성을 확인하는 단계로 이루어진다.
하이브리도마 세포주의 생산에 필요한 면역화된 생쥐를 얻기위해 인체 S-100A6 재조합 단백질과 동량의 완전 보조항원(complete Freund adjuvant)을 유상화 될 때까지 잘 혼합하여 생쥐의 복강내에 주사하고, 다시 2주후부터 불완전 보조 항원(Freund's incomplete adjuvant, FIA)과 혼합한 인체 S-100A6 재조합 단백질을 이용하여 추가로 3회에 걸쳐 부스터 주사(booster injection)한다. 세포융합을 실시하기 위하여 항원을 주사한 생쥐로부터 적출한 비장세포와 SP2/0 마이엘로마 세포(myeloma cell)를 세포수를 기준으로 10:1의 비율로 혼합한 다음 폴리에틸렌글리콜(분자량 1,450, 시그마사 제품)을 넣어 세포융합 반응을 시킨 다음 배양용 배지 (RPMI 1640)를 가하여 희석시킨다. 다음에 융합된 세포들을 선별용 배지(HAT 배지)에 옮겨 배양한 후 하이브리도마 세포군들의 성장이 명확히 확인되는 시점에서 배양용 배지를 HT 배지로 바꾸어 세포의 증식이 촉진되도록 한다.
HT 배지에서 성장하는 하이브리도마 세포군중 인체 S-100A6 단백질 항원에만 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포군을 간접효소결합 면역흡착검사(indirect ELISA) 분석방법을 사용해 선별하였다. 효소결합 면역흡착검사 판독기(ELISA reader)로 흡광도를 측정하여 정제된 인체 S-100A6 단백질과 높은 결합력을 갖는 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주를 선별하고, 선별된 세포가 단일클론이 되도록 제한 희석법(limiting dilution)을 사용해 하이브리도마 세포를 희석한 후 하나의 세포로부터 자라나온 세포들로 이루어진 세포주를 확립하였으며 확립된 세포주가 분비하는 인체 S-100A6에 대한 단일클론 항체는 항체의 아형이 면역글로블린 엠타입(IgM)임을 확인하였고, 이들중 활성도가 가장 높은 KO2C12-1을 한국 과학기술연구원 부설 생명공학연구소의 유전자은행에 수탁번호 KCTC 0447BP로 기탁하였다.
본 발명의 인체 S-100A6 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론 항체의 특성은 효소결합 면역흡착검사법 외에도 웨스턴 블랏팅 방법을 사용하여 이 항체가 항원인 인체 S-100A6 재조합 단백질에 대한 항원-항체 반응을 나타내는 것을 재확인하였다. 또한 인체 S-100A6 재조합 단백질이 본 발명에서 제작한 항 인체 S-100A6 단일클론 항체에 대한 항원으로 작용하여 항원-항체 결합반응을 하는 것을 재확인할 수 있었다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
I. 항원의 제조
실시예 1. 인체 S-100A6 재조합 단백질의 분리 및 정제
인체 S-100A6 유전자를 포함하고 있는 발현벡터(expression vector : pET22)를 대장균 내에서 배양하여 인체 S-100A6 단백질을 재조합 단백질의 형태로 생산하였다. 이 재조합 단백질을 디이에이-세파셀 분액법(DEAE-Sephacel fractionation : 0∼0.3M NaCl)과 세파크릴 에스-200 젤 필트레이션법(Sephacryl S-200 : gel filtration), 그리고 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동법(10% PAGE)을 사용해 순수하게 분리, 정제하여 인체 S-100A6 재조합 단백질을 에스디에스를 포함한 젤에서 전기영동법(SDS-PAGE)을 시행하였다. 그리고 상기 인체 S-100A6 단백질의 유전자를 포함하고 있는 핵산을 분석한 결과 도1과 같이 총 407개의 염기서열로 이루어져 있으며 이중 S-100A6 단백질을 코딩하는 오픈리딩후레임 부분이 270개의 핵산염기로 이루어진 염기서열임을 밝혀내었다. 또한 도2a에서 볼 수 있듯이 인체 S-100A6 재조합 단백질을 에스디에스를 포함한 젤에서 전기영동법(SDS-PAGE)을 시행한 결과 재조합 단백질이 순수하게 분리되었음을 확인하였다. 또한, 인체 S-100A6 재조합 단백질을 아가로즈 겔상에서 전기영동을 수행하여 분리된 단백질들을 나이트로셀룰로우즈 막으로 옮긴후 인체 S-100A6에 대한 항체로 웨스턴 블랏팅을 시행한 결과는 도2b와 같다. 도2a와 도2b에서 보듯이 각각 6번 레인에서 S-100A6 단백질이 순수하게 정제되었음을 확인할 수 있었다. 한편, 최종 시료를 대상으로 브레드포드법(Bradford method)에 의해 측정한 단백질의 농도는 1㎎/mL이었으며 분리·정제된 재조합 단백질은 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 선별하고 분석하기 위하여 실시한 효소결합 면역흡착검사법을 위한 항원으로 사용하였다.
II. 인간 S-100A6 재조합 단백질에 대한 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마 세포주의 생산
실시예 2. 생쥐의 면역화
하이브리도마 세포주의 생산에 필요한 면역화된 생쥐를 얻기 위하여, 위에 기술된 방법으로 제조한 인체 S-100A6 재조합 단백질과 동량의 완전 보조항원(complete Freund adjuvant)을 유상화 될 때까지 잘 혼합한 후 생후 6-8주가 된 Balb/c 생쥐의 복강내에 주사하였다. 2주 후에 처음 면역주사한 것과 같은 양의 인체 S-100A6 재조합 단백질을 불완전 보조 항원(Freund's incomplete adjuvant, FIA)과 혼합한 후 생쥐의 동일 부위에 주사하였다. 그 후 3-4일 지난 뒤에 생쥐의 꼬리 부위 혈관에서 소량의 피를 뽑아내어 항체의 역가를 확인하고 세포융합 실험을 실시하기 3∼4일 전에 0.85% 생리식염수에 녹인 10㎍의 인체 S-100A6 재조합 단백질을 정맥 및 복강내에 주사하였다.
실시예 3. 세포 융합
하이브리도마 세포의 생산에 필요한 세포융합을 실시하기 위하여, 상기 실시예 1에서 제조한 항원을 주사하여 얻은 생쥐의 비장세포 108개와 골수종 세포(myeloma cell, SP2/0) 107개를 50mL의 시험관에 모았다. 세포융합의 모세포(parent cell)로는 SP2/0ㆍAg14 세포주를 사용하였다. 이 모세포는 10% FBS를 함유하는 RPMI 배지에서 배양하는 동안 최대 밀도를 5×105/mL 정도로 유지시켰다. 그리고 실시예 2와 같은 방법으로 면역화 된 생쥐를 에테르(ether)로 마취시킨 후 몸통의 좌측에 위치한 비장(spleen)을 꺼내서 조직 파쇄기(tissue homogenizer)로 곱게 갈아서 한스완충액(Hans' buffered saline solution, HBSS)을 이용하여 현탁액을 만들고, 이 때 얻어진 비장세포를 15mL의 원심분리관에 넣어서 원심분리하였다. 이 과정을 2회 반복하여 비장세포를 충분히 세척하였다. 한편 모세포인 SP2/0ㆍAg14도 HBSS를 이용하여 2회 원심분리하여 세척하였다. 비장세포와 모세포를 각각 10mL가 되도록 다시 현탁시킨 후 각 현탁액 내의 세포수를 세어서 비장세포와 모세포의 수가 10 : 1의 비율이 되도록 하고 이 두 용액을 50mL의 원심분리관에서 섞은 다음 다시 원심분리하여 침전시켰다. 원심분리관내의 침전물을 손가락으로 가볍게 두드려서 분산시키고, 37℃에서 1분간 정치한 후 한스완충액에 들어있는 45% 폴리에틸 글라이콜(polyethylglycol, PEG)-5% 디엠에스오(DMSO)의 fusogen1mL를 1분간에 걸쳐서 천천히 가하고 또 다시 1분간 약간 흔들어 주었다. 그 후 배양용 배지 (RPMI) 9mL을 3분간에 걸쳐 천천히 첨가하고, 다시 가볍게 흔들어 주면서 서서히 배양용 배지 (RPMI)를 첨가하여 최종적으로 현탁액의 용적이 50mL이 되도록 하였다. 이 현탁액을 다시 원심분리한 후 세포 침전물을 분리용 배지(HAT 배지)에 1∼2×105/mL 정도로 재현탁시키고, 96웰(well) 마이크로 타이터 플레이트에 0.2mL씩 분주한 후 37℃로 유지된 가습 이산화탄소 세포배양기에서 배양하였다.
실시예 4. 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 선별
상기 실시예 3 에서 제조한 하이브리도마 세포군 중에서 인체 S-100A6 재조합 단백질 항원에만 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포들을 선별하기 위해 정제된 인체 S-100A6 재조합 단백질을 항원으로 이용해 ELISA 분석 방법으로 스크리닝을 수행하였다. 마이크로타이터 플레이트(micro-titer plate)에 인간 S-100A6 재조합 단백질을 한 웰당 각각 50㎕(2㎍/mL)씩을 가하여 플레이트 표면에 부착시키고, 반응하지 않은 항원은 세척하여 제거하였다. 이 플레이트에 하이브리도마 세포의 배양액을 한 웰에 50㎕씩을 가한 다음 1시간 동안 반응시킨 후 인산 완충용액-트윈 20(PBST) 용액으로 충분히 세척하여 반응하지 않은 배양액을 제거하였다. 여기에 염소에서 분리된 항-마우스 IgG-호스래디쉬 퍼옥시다제(goat anti-mouse IgG-HRP)를 가하여 1시간 동안 실온에서 반응시킨 다음 PBST 용액으로 충분히 세척하였다. 세척이 끝난 각각의 웰에 퍼옥시다제의 기질용액(OPD)을 넣어 반응시키고, 그 반응된 정도를 효소결합 면역흡착검사 판독기를 사용해 파장 492nm에서 흡광도를 측정하여 결정하였다. 측정결과에 따라, 인체 S-100A6 재조합 단백질 항원에 특이적으로 높은 결합력을 갖는 항체를 분비하는 하이브리도마 세포들을 우선 선별한 후 선별된 세포들을 대상으로 여러번 반복 실험을 시행해 인체 S-100A6 재조합 단백질 항원에만 높은 결합력을 갖고 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포 집단을 재선별한 다음 이 세포들의 집합을 단일클론이 되게 제한 희석법으로 희석하여 우수한 단일클론 항체를 생산하는 하나의 세포로부터 유래한 하이브리도마 세포주를 확립하였다. 이때 최종적으로 2개의 클론을 얻었으며 이 2개의 클론들을 순수하게 클로닝한 다음 동결보존하였다. 세포를 배양한 상등액은 효소면역법으로 역가를 측정하고 이들을 2중 면역확산법으로 면역글로블린의 아형을 결정하였다. 실험결과, 도3에서 볼 수 있듯이 분리된 클론의 아형은 2개 모두 IgM으로 판명되었다. IgM으로 판명된 2개의 클론중 한층 더 높은 항체의 역가를 보이는 1개의 클론(K02C12-1)을 선별하고 이 하이브리도마 세포를 생쥐의 복강에 주사하여 항체를 포함하고 있는 복수액을 얻었다.
실시예 5. 단일클론 항체의 대량 생산
상기 실시예 4 에서 확립한 하이브리도마 세포주로부터 인체 S-100A6 단백질에 대한 단일클론 항체를 대량으로 생산하기 위하여 우선 생쥐(Balb/c) 한 마리당 0.5㎖의 프리스텐(pristane)을 복강내로 주사하였다. 1주일이 지난 다음 하아브리도마 세포들을 생쥐 1마리당 5×106씩 주사하고, 복강이 부풀어 오른 생쥐에서 복수액을 채취하였다. 이 복수액은 높은 농도로 자란 하이브리도마 세포를 포함하고있으므로, 채취된 복수액을 10,000rpm에서 원심분리하여 하이브리도마 세포를 침전시킨 후 상층액만을 취하였다. 이 채취된 상층액은 항체 단백질을 정제할 때까지 섭씨 영하 20도에서 보관하였다.
실시예 6. 인체 S-100A6 재조합 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론항체와 인체 S-100A6 재조합 단백질 항원-항체 반응 확인
인체 S-100A6 재조합 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론 항체는 효소면역 분석방법 외에도 웨스턴 블랏팅 방법을 사용하여 항원과의 반응성을 확인하였다. 인체 S-100A6 재조합 단백질은 10%의 SDS-PAGE로 전기영동한 다음 막필터에 전기적인 방법으로 옮겼다. 막필터에 옮긴 다른 단백질들이 보이는 비특이적인 반응을 줄이기 위해 3%의 소에서 얻은 혈청 알부민 용액으로 12-14시간 동안 막을 차단시켰다. 인체 S-100A6 재조합 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론 항체를 확인하기 위하여, 1차 항체로 본 발명에서 생산한 인체 S100A6 재조합 단백질에 대한 단일클론항체를 사용하여 상온에서 2시간 반응시켰다. 이 막필터를 0.5%의 소 혈청 알부민이 포함된 인산 완충액으로 3회 세척한 다음 2차 항체로는 호스래디쉬 퍼옥시다제가 결합된 항-마우스 면역글로블린(anti-mouse-IgG)을 사용하여 상온에서 반응시키고 다시 0.5% 트윈이 포함된 인산 완충액으로 세척한 후 0.018%(v/v) 4-클로로-1-나프톨과 0.045%(v/v) 과산화수소(H2O2)가 인산 완충용액과 메탄올에 녹아 있는 기질을 이용하여 발색반응을 시켰다. 실험결과, 인체 S-100A6 재조합 단백질이 항원으로 작용하여 S-100A6 재조합 단백질에 대한 단일클론 항체에 대해서만 반응하고 다른 항체인 항-GST 항체와는 반응하지 않음을 확인하여 본 발명의 인체 S-100A6 재조합 단백질에 대한 단일클론 항체는 S-100A6 재조합 단백질에만 특이적으로 반응하는 항체임을 확인하였다.
본 발명에 따른 단일클론항체의 특성을 확인하기 위하여 여러 암조직을 대상으로 면역조직염색법을 실시한 결과, 도4a에서 보는바와 같이 본 발명의 단일클론항체가 대장암 환자에게서 얻은 조직중에서 암세포의 핵주변에만 특이적으로 결합하여 면역염색되는 것을 확인할 수 있었으며 도4b에서 보는바와 같이 본 발명의 단일클론항체가 갑상선 암환자로부터 얻은 조직에서도 암세포의 핵과 세포질에서만 특이적으로 반응하여 면역염색되는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명의 인체 S-100A6 재조합 단백질에 대한 단일클론 항체와 이를 생산하는 하이브리도마 세포주를 이용하면 인체 S-100A6 단백질을 발현하는 암세포를 쉽게 검색할 수 있어 인체 S-100A6 단백질의 발암과정에 대한 관련성 연구 및 간암 또는 갑상선암의 진단에 유용하다. 또한 인체 S-100A6 단백질에 대한 단일클론 항체를 이용하여 혈액내의 S-100A6 단백질을 측정하므로써 간질환의 조기 진단이 가능하다.
본 발명은 상기 실시예를 통하여 알 수 있는바와 같이 서로 다른 수종의 암환자로부터 절제된 암조직에 존재하는 암세포에만 특이적으로 결합하는 우수한 특성을 가진 단일클론항체를 제조하므로써 암세포를 특이적으로 또 정상세포와 명확히 구분하여 선명한 면역조직염색 방법을 제공하는 효과가 있다. 이밖에도 본 발명에 따른 단일클론항체를 사용하면 인체 S-100A6 재조합 단백질이 인체의 각종 조직에서 어느 정도로 발현되며 또 어떻게 분포되어 있는가를 명확히 측정할 수 있으므로 임상적으로 정확한 병변의 확인에 따른 체계적인 연구를 할 수 있을 뿐 아니라 암을 진단하기 위한 정확하고 유용한 표식자로 활용할 수 있는 효과가 있으므로 생물의약산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (4)

  1. KCTC 기탁번호가 0447BP인 하이브리도마 세포주에 의해 생산되고, 인체 S-100A6 단백질에 특이적인 모노클로날 항체.
  2. 제1항의 모노클로날 항체를 유효성분으로 함을 특징으로 하는 간질환 진단 및 간질환 치료제용 조성물.
  3. 제1항의 모노클로날 항체를 유효성분으로 함을 특징으로 하는 암세포 진단 및 암치료제용 조성물.
  4. 제1항의 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 K02C12-1(KCTC 0447BP).
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Hybridoma vol.1(1) pp27-36 (1981) *
J Oral Pathol Med vol.25(10) pp547-555 (1996.11.25; *

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