KR20030016310A - 선택적 안드로겐 수용체 조절제, 및 그의 확인, 고안 및사용 방법 - Google Patents

선택적 안드로겐 수용체 조절제, 및 그의 확인, 고안 및사용 방법 Download PDF

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마크 이. 살바티
마르코 엠. 고타디스
스탠리 알. 쥬니어 크라이스텍
리카르도 엠. 아타
존 에스. 색
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브리스톨-마이어스스퀴브컴파니
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Abstract

본 발명에서는 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나 작용제 활성을 나타내는 선택적 안드로겐 수용체 조절제 (SARM) 뿐만 아니라, SARM을 확인, 고안 및 사용하는 방법이 제공된다.

Description

선택적 안드로겐 수용체 조절제, 및 그의 확인, 고안 및 사용 방법 {Selective Androgen Receptor Modulators and Methods for Their Identification, Design and Use}
안드로겐 수용체 (AR)는 리간드 의존성 전사 인자의 스테로이드계 핵-수용체 거대족의 구성원이며, 전립선 및 정낭, 남성 및 여성 생식기, 피부, 정소, 난소, 연골, 피지선, 모낭, 땀샘, 심근, 골격근, 평활근, 위장 혈관 세포, 갑상선 소포 세포, 부신 피질, 간, 송과선, 및 다수의 뇌 피질 및 피질 하부 영역 (척수 운동 뉴런 (Negro-Vilar, A. JCE＆M 1999 54(10):3459-62) 포함)을 비롯하여 생식 및 비생식 조직에 널리 분포되어 있다. 스테로이드계 수용체 족의 다른 구성원들과 같이, AR은 DNA 결합 도메인 (DBD)과, 안드로겐 결합 부위를 함유하는 261 잔기의 리간드 결합 도메인 (LBD; 분자량=30,245 Da)을 비롯한 몇몇 기능성 도메인을 가지고 있으며, 안드로겐 기능 전환 (switching)에 관여한다. 인간 및 래트 안드로겐 수용체의 cDAN 및 아미노산 서열은 문헌 [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1988 85: 7211-7215]에 기재되어 있다.
AR은 약물 개발 및 환자 치료법의 다수 영역에 있어서 중요한 표적이다. 예를 들어 종양학에서, 안드로겐 수용체 기능의 억제제 (길항제 또는 부분 길항제)는 안드로겐 의존성 전립선암의 치료에 유용하며, AR의 작용제 또는 부분 작용제는 유방암의 치료에 사용할 수 있다. 예를 들어 대사 질환 및 분비성 질환 장애에 있어서, 안드로겐 수용체 기능의 작용제 또는 부분 작용제는 노화 관련 질환, 및 AIDS 등을 비롯한 여러 질환에서 악액질 (cachexia) 증상의 치료에 유용하다. 또한, 기능성 AR은 다양한 골세포에서 확인되었으며, 안드로겐 투여는 남성 및 여성에서 골격근의 발생 및 유지에 유익한 효과를 나타낸다.
안드로겐 치료법의 발전은 원치않는 또는 투여량 제한 부작용으로부터 바람직한 안드로겐 활성의 구별 불능에 의해 제한되었다. 그러나, 원치않는 부작용이 없으면서 에스트로겐 수용체의 표적화에 대한 조직 선택성이 높은 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM)의 발전에 있어서의 최근 진전으로 인해 선택적 안드로겐 수용체 조절제인 SARM의 제안을 초래하게 되었다 (Negro-Vilar, A. JCE＆M 1999 54(10):3459-62; Reid et al. Investigational New Drugs 1999 17:271-284).
미국 특허 제6,017,924호는, "시스-트랜스" 또는 "동시 형질감염" 분석법을 토대로 안드로겐 수용체에 대해 친화성이 높고 특이성이 높은 작용제, 부분 작용제 (즉, 부분 활성화제 및(또는) 조직 특이적 활성화제) 및 길항제임을 특징으로 하는 비스테로이드계 화합물을 개시하고 있다. "시스-트랜스" 또는 "동시 형질감염" 분석법을 통해 안드로겐 수용체에 대해 친화성이 높고 특이성이 높은 작용제, 부분 작용제 (즉, 부분 활성화제 및(또는) 조직 특이적 활성화제) 및 길항제임을 특징으로 하는 비스테로이드계 화합물은 WO 01/16108호, WO 01/16133호 및 WO 01/16139호에 기재되어 있다. 이 동시 형질감염 분석법 (Evans et al. Science 1988 240:889-95)은 천연 호르몬의 효과를 흉내내는 기능성 작용제 및 부분 작용제, 또는 천연 호르몬의 효과를 억제하는 길항제를 확인하는 방법, 및 반응성 세포내 수용체 단백질의 활성을 정량하는 방법을 제공하는 것으로 제안되고 있다.
또한, 대부분의 조직에서 공지된 AR 길항제인 히드록시플루타미드(hydroxyflutamide)도 조골세포에 의한 IL-6 생산 효과에 대한 선택적 AR 조절제 (SARM)로서 기능하는 것으로 제안되었다 (Hofbauer et al. J. Bone Miner. Res. 1999 14:1330-1337).
대부분의 조직에서 완전한 AR 길항제인 것으로 공지된 히드록시플루타미드 및 카소덱스 (Casodex)는 AR-형질감염된 PC3 세포에서 MAP 키나아제인 Erk-1 및 Erk-2를 DHT와 유사하게 AR 의존적 방식으로 활성화시키는 것으로 밝혀졌다 (Peterziel et. al. Oncogene 18, 6322-6329 (1999)).
비스테로이드계 AR 작용제인 화합물 LGD2226은 골다공증, 남성 호르몬 대체요법, 남성 및 여성 성기능부전 및 악액질과 같은 안드로겐 관련 질환의 치료에 사용하기 위한 선택적 안드로겐 수용체 조절제로서 특성화되었다 (2000년 5월 12일 출원된 SCRIP-World Pharmaceutical New; WO 01/16108호; WO 01/16133호; 및 WO 01/16139호).
비스테로이드계 AR 길항제인 화합물 LG120907은 래트에서, 카소덱스와 같이 임상적으로 사용된 다른 AR 길항제에 비해 시상하부 축 및 성욕 (번식율)에 대한 길항제 효과를 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 이와 같이, LG120907은 전립선암의 치료를 위한 선택적 안드로겐 수용체 조절제로서 특성화되었다 (Wang et. al. Poster # P3-126, Endocrine Society 80th Annual Meeting (1998), Hamann et. al. Presentation # S39-2, Endocrine Society 80th Annual Meeting (1998)).
DHT 및 E2와 같은 스테로이드계 성 호르몬의 AR 및 ER에 대한 비유전자성 (nongenotropic) 효과를 조사한 최근 보고서는, 이들 2가지 수용체가 모두 전사 사건과 특이적으로 관련되지 않은 기능을 조절함을 분명히 보여주고 있다 (Kousteni et. al., Cell 104, 719-730 (2001)). ER 및 AR의 항-아팝토시스 효과는 전사에 대한 효과가 전혀 없는 리간드에 의해 유도될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 또한, 전사에 효과가 있는 리간드가 항-아팝토시스 효과가 없을 수도 있는 것으로 밝혀졌다.
안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 작용한 조절에 비해 안드로겐 수용체를 함유하는 종양에서 작용한 조절의 종류에 따른 차이 (특히, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비악성 조직에서의 작용제 활성에 대한 종양에서의 길항제 활성)를 나타내는 SARM은 지금까지 개시되지도, 제안되지도 않았다. 본 발명은 호르몬 의존성 종양에서는 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM, 및 그러한 SARM을 확인 및 고안하는 방법을 제공한다. 하기 기재되는 바와 같이, 이들 SARM은 종양의 증식을 억제함과 동시에 근육 소모/악액질, 성욕 감퇴, 골다공증 및 여성유방증과 같은 부작용을 완화시킴으로써, 환자에서 전립선암과 같은 호르몬 의존성 종양을 치료하는 데 사용될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "환자"는 동물, 바람직하게는 개, 고양이, 또는 가장 바람직하게는 인간과 같은 포유동물을 나타낸다.
<발명의 개요>
본 발명의 목적은 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM을 확인하는 방법을 제공하는 것이다. 한 실시양태에서, 호르몬 의존성 종양에서의 길항제 활성은 시험관내 또는 생체내에서 호르몬 의존성 종양 세포주의 성장 억제를 스크리닝함으로써 확인한다. 이 실시양태에서, 잠재적 SARM의 활성은 또한 정상적인 비종양 세포주에서도 확인한다. 별법으로, 호르몬 의존성 종양에 걸린 동물 모델을 이용하여 종양에 대한 잠재적 SARM의 길항제 활성 및 이 동물의 비종양 조직에서 그의 활성을 평가할 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 에스트라디올, 타목시펜 또는 랄록시펜과의 AR 결정 구조 및 에스트로겐 수용체 (ER) 결정 구조에 관한 정보를 이용하여, 호르몬 의존성 종양에서는 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM을 고안하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 SARM의 확인에 사용하기 위해, 안드로겐 수용체 리간드 결합 도메인 (AR-LBD)의 아미노산인, 본원에 제공된 표 A에 따른 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 및 L907의 구조 좌표에 의해 정의된 리간드 결합 부위의 전부 또는 일부를 포함하는 분자 또는 분자 복합체, 또는 상기 분자 또는 분자 복합체의 돌연변이체 또는 상동체를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 기계 판독 가능한 데이타로 코딩된 데이타 저장물을 포함하는 기계 판독 가능한 데이타 저장 매체를 제공하는 것인데, 여기서 상기 데이타는 표 A에 따른 AR-LBD 리간드와 AR-LBD의, 또는 리간드 복합체 또는 상기 복합체의 상동체의 구조 좌표에 의해 정의되고, 상기 상동체는 복합체의 골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 3.0Å 이하인 골격 원자를 포함한다.
본 발명의 다른 목적은 AR 조절제에 대한 AR-LBD의 결합 부위를 제공하는 것인데, 여기서 상기 리간드의 일부는 표 A에 따른 AR-LBD의 잔기 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907의 임의 일부 또는 전부와 반데르발스 또는 수소결합으로 접촉하고 있다. 바람직한 실시양태에서, 결합 부위는 본원에 제공된 표 A에 따른 AR-LBD의 잔기 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907과 25％ 내지 95％ 동일성을 갖는 상동체 또는 돌연변이체이다.
본 발명의 다른 목적은 호르몬 의존성 종양에서는 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM 뿐만 아니라, 그러한 SARM 하나 이상과 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공하는 것이다. 바람직한 실시양태에서, SARM은 본 발명의 방법에 따라 확인 또는 고안된다.
본 발명의 다른 목적은 호르몬 의존성 종양 세포를, 호르몬 의존성 종양에서는 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 종양 세포의 증식을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.
달리 언급하지 않는 한, 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 본 발명의 SARM은 본 발명의 모든 실시양태에서 추가로 정상적인 전립선 조직에 대해 작용제 또는 길항제 활성을 나타내거나 활성을 나타내지 않는 것으로 생각된다.
본 발명의 또다른 목적은 다모증, 좌창, 지루, 알츠하이머 질환, 안드로겐성 탈모증, 성선 기능저하증, 과다모증, 양성 전립선 비대증, 전립선의 선종 및 종양 (예를 들어, 진행성 전이성 전립선암) 등을 비롯하여 본원에 기재된 안드로겐 수용체 조절제의 투여에 의해 치료될 수 있는 증상의 치료, 안드로겐 수용체를 함유하는 양성 또는 악성 종양 세포 (예를 들어, 유방암, 뇌암, 피부암, 난소암, 방광암, 림프암, 간암 및 신장암의 경우), 췌장암, VEGF의 발현 조절과 항-신생혈관형성제로서의 적용, 골다공증, 정자 형성 억제, 성욕, 악액질, 자궁내막증, 다낭성 난소증후군, 식욕 감퇴, 안드로겐 의존성 노화 관련 질환 및 증상 (예를 들어, 남성의 노화 관련 테스토스테론 감소에 대한 안드로겐 보충), 남성 폐경, 남성 호르몬 대체 요법, 남성 및 여성 성기능부전의 치료, 및 보행가능한 환자의 근육 위축증의 억제에 있어서 이들 SARM을 사용하는 방법을 제공하는 것이다. 특히 바람직한 것은 호르몬 의존성 종양, 특히 초기 전립선암의 치료, 및 호르몬 의존성 암, 특히 전립선암의 화학적 예방에 있어서 SARM을 사용하는 것이다.
미국 특허 출원 등을 비롯하여 본원에서 언급한 모든 문헌은 그 거명을 통해 그 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 출원은 미국 가출원 제60/214,392호 (2000년 6월 28일 출원), 미국 가출원 제60/233,519호 (2000년 9월 19일 출원), 미국 가출원 제60/284,617호 (2001년 4월 18일 출원), 미국 가출원 제60/284,438호 (2001년 4월 18일 출원) 및 미국 가출원 제60/284,730호 (2001년 4월 18일 출원)를 우선권으로 주장하며, 이들 문헌은 각각 이 거명을 통해 그 전문에 본 명세서에 참고로 포함된다.
선택적 안드로겐 수용체 조절제 (selective androgen receptor modulator; SARM)는 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 본 발명은 안드로겐 수용체 조절제를 투여함으로써 치료할 수 있는 증상의 치료에 이들 SARM을 사용하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 새로운 SARM을 고안 및 확인하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 안드로겐 수용체 리간드 결합 도메인 또는 리간드 결합 도메인 복합체의 구조 좌표, 및 안드로겐 수용체를 조절하는 새로운 SARM을 고안 및 선택함에 있어서 이들 구조 좌표를 이용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 이르러서, 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 (즉, 하나 이상의) 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 선택적 안드로겐 수용체 조절제 (SARM)가 확인되었다. 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없는 본 발명의 SARM은 또한 특이적 안드로겐 수용체 조절제로 언급할 수 있다.
본 발명의 목적상, "비종양", "비암성" 또는 "비악성" 안드로겐 수용체 함유 조직의 의미에는 정낭, 남성 및 여성 생식기, 피부, 정소, 난소, 연골, 피지선, 모낭, 땀샘, 근육 (예를 들어, 심근, 골격근 및 평활근), 위장 혈관 세포, 갑상선 소포 세포, 부신 피질, 간, 송과선, 골, 간질세포, 신장관, 방광, 및 다수의 뇌 피질 및 피질 하부 영역 (척수 운동 뉴런 포함)이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
달리 언급하지 않는 한, 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 본 발명의 SARM은 본 발명의 모든 실시양태에서 추가로 정상적인 전립선 조직에 대해 작용제 또는 길항제 활성을 나타내거나 활성을 나타내지 않는 것으로 생각된다.
본원에서 사용된 어구 "활성이 없거나 작용제 활성을 나타내는"은 바람직하게는 대조군 동물에 비해 복부 전립선, 정낭, 항문 거근 및(또는) 황체 호르몬 혈청 양에 대한 생체내 활성화 효과 (5％ 초과)를 가지며, 가장 바람직하게는 정상적인 평균 골밀도, 정상적인 평균 근육 질량, 정상적인 평균 생식 기능, 및(또는) 생식 온혈 수컷 동물, 바람직하게는 인간 남성에서 정상적인 평균 성욕을 유지하는 활성을 갖는 화합물을 나타낸다. 본 발명의 SARM이 "활성이 없거나 작용제 활성을 나타내는"이란 바람직하게는 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내는 것과 동일한 양 또는 양의 범위에서 그러한 활성이 나타나는 것을 의미한다. 환자에 투여시, 호르몬 의존성 종양에 대한 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM의 이러한 양 또는 양의 범위는 바람직한 치료 유효 범위이다. 본 개시 내용을 읽었을 때 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 SARM은 바람직한 치료 유효 범위 이외의 양으로 사용되는 경우에 호르몬 의존성 종양에 대한 동일한 길항제 활성을 나타내며, 비종양 함유 조직에 대해서는 활성이 없거나 작용제 활성을 나타낼 수도, 또는 더이상 동일한 특이성 또는 선택성을 나타내지 않을 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 SARM은 바람직한 치료 유효 범위를 초과하는 양으로 사용되는 경우에 비종양 함유 조직에서 일부 길항제 활성을 나타낼 수도 있다.
본 발명은 이러한 이중 활성을 갖는 SARM, 이들 SARM을 확인하는 방법, 이들 SARM을 포함하는 제약 조성물, 및 안드로겐 수용체 매개의 질환 및 장애의 치료에 있어서 이들 SARM을 사용하는 방법에 관한 것이다.
예를 들어, 본 발명의 SARM은 바람직하게는 다른 비종양 (비암성 또는 비악성을 의미함) 안드로겐 수용체 함유 조직에서 안드로겐 수용체 활성을 활성화시키면서 호르몬 의존성 종양의 증식을 선택적으로 억제하는 데 유용하다. 따라서 본 발명의 SARM은, 다른 비종양 안드로겐 수용체 함유 조직에서는 안드로겐 수용체 활성의 억제와 관련된 원치않는 부작용을 완화시키거나 제거하면서, 안드로겐 수용체 함유 종양, 예를 들어 전립선암, 유방암, 뇌암, 피부암, 난소암, 방광암, 림프암, 간암 및 신장암, 및 췌장암 등을 비롯한 종양의 치료에 유용한다. 전립선암의 치료시 현행의 항-안드로겐 치료법에서 나타나는 디히드로테스토스테론 (DHT)과 같이, 정상적인 안드로겐 기능의 길항 작용으로부터 기인한 원치않는 몇몇 잠재적 부작용에는 근육 소모/악액질, 성욕 감퇴, 골다공증 및 여성유방증이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
그러한 SARM의 부가적인 바람직한 사용은 화학적 예방의 분야, 특히 전립선 암이 속하는 분야에 있다. 본 발명의 SARM은 방사상 전립선 절제 이후 "세심한 기다림 (watchful waiting)"의 기간 동안 투여되어, 전이성 전립선암의 재발율을 감소시킬 수 있다.
또한, 이들 SARM은 악액질 및 골다공증 등을 비롯한 안드로겐 의존성 노화 관련 질환 및 증상의 치료에 유용하다. 그러한 약제는 전통적인 안드로겐 작용제에서 나타나는 전립선암의 위험 증가로 고통받지 않는, 경구적으로 생물이용 가능한 안드로겐 대체 치료법을 제공한다.
본 발명의 SARM은 또한 다모증, 좌창, 지루, 알츠하이머 질환, 안드로겐성 탈모증, 성선 기능저하증, 과다모증, 양성 전립선 비대증, VEGF의 발현 조절과 항-신생혈관형성제로서의 적용, 정자 형성 억제, 성욕, 자궁내막증, 다낭성 난소 증후군, 식욕 감퇴, 및 안드로겐 의존성 노화 관련 질환 및 증상, 예를 들어 남성의 노화 관련 테스토스테론 감소에 대한 안드로겐 보충, 남성 폐경, 남성 호르몬 대체 요법, 남성 및 여성 성기능부전, 및 보행가능한 환자의 근육 위축증 억제와 같이 안드로겐 수용체 조절제의 투여에 의해 치료될 수 있는 다른 증상들을 치료하는 데 유용할 것으로 기대된다.
호로몬 의존성 종양에 대해 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM을 확인하는 다양한 방법이 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 호르몬 의존성 종양에서의 길항제 활성은 시험관내 또는 생체내에서 호르몬 의존성 종양 세포주의 성장 억제를 스크리닝함으로써 확인한다. 잠재적 SARM을 스크리닝하기 위해 사용될 수 있는 호르몬 의존성 종양 세포주의 예에는 인간 유방암 세포주 MDA MB453, 인간 유방암 세포주 ZR-75-1, 쥐 유방 세포주 Shionogi, 래트전립선 선암종 세포주 Dunning R-3327, 인간 전립선암 세포주 MDA PCa 2a 및 PCa 2b, 인간 전립선 세포주 LNCap, 인간 전립선암 세포주 CWR22, 인간 전립선암 세포주 LuCaP 35 및 LuCaP 23.12, 인간 전립선 세포주 LAPC-4 및 LAPC-9, 인간 전립선암 세포주 PC-295, 인간 전립선암 세포주 PC-310, 및 인간 골육종 세포주 MG-63이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 실험용 인간 및 쥐의 전립선 및 유방 세포주, 및 이들에서 유래한 종양 모델 시스템은 인간 호르몬 의존성 종양, 예를 들어 전립선암의 약리학적 징후로서 당업자에 의해 잘 허용된다. 인간 질환 상태에 대한 그러한 모델의 관계의 예는 하기 참고문헌 및 거기에 포함된 참고문헌 등에서 찾아볼 수 있다: Jacques et. al. Endocrinology 140, 416-421 (1999); Yeap et. al. Endocrinology 140, 3282-3291 (1999); Sharma et. al. Oncogene 18, 5349-5355 (1999); Isaacs, J. T. Urol. Oncol. 2, 115-116 (1996); Bentei et. al. In Vitro Cell Dev. Biol. 35, 655-662 (1999); Suzuki et. al. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 37, 559-567 (1990); Peehl, D. M. Urol. Oncol. 2, 100-102 (1996); Wytske et. al. Urol. Oncol. 2, 122-125 (1996); Leland, C. W. K. Urol. Oncol. 2, 126-128 (1996); Buhler et. al. The Prostate 43, 63-70 (2000); Navone et. al. Clin. Cancer Res. 6, 1190-1197 (2000); Etreby et. al. The Prostate 42, 99-106 (2000); Jongsma et. al. Cancer Res. 60, 741-748 (2000); Jongsma et. al. Amer. J. Path. 154, 543-551 (1999); Ye et. al. Clin. Cancer Res. 5, 2171-2177 (1999); Navone et. al. Clin. Cancer Res. 3, 2493-2500 (1997); Klein et. al. Nature Medicine 3, 402-408 (1997); Chen et. al. Cancer Res. 58, 2777-2783(1998); 및 Craft et. al. Cancer Res. 59, 5030-5036 (1999).
이 실시양태에서, 잠재적 SARM의 작용제 또는 길항제 활성은 정상적인 비종양 세포주에서도 측정한다. 이 방법에 유용한 정상적인 비종양 세포주의 예에는 1차 래트 전립선 상피 세포 및 간질세포, 쥐 근육 세포주 C2C12, 1차 기니아 피그 평활근 세포, 미성숙 (I-PSMC) 또는 성체 (A-PSMC) 래트 성기에서 유래한 1차 평활근 세포, 1차 토끼 평활근 세포주, 전립선 평활근 세포주 PS-1, 전립선 평활근 세포주 PSMC1, 마우스 골세포 배양액 및 조골 세포, 및 1차 래트 정낭 세포주 SVC-1 및 SCV-2가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 그러한 세포주는 하기 예시적 참고문헌 및 거기에 함유된 참고문헌에 기재되어 있다: Nemeth et. al. J. Andrology 19, 718-724 (1998); Zhuang et. al. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 41, 693-696 (1992); Zhang et. al. Prostate 30, 117-129 (1997); Ricciardelli et. al. J. Endocrinol. 140, 373-383 (1994); Gonzalez-Cadavid et. al. Mol. Cell. Endocrinol. 90, 219-229 (1993); Sadeghi-Nejad et. al. Int. J. Impotence Res. 10, 165-169 (1998); Gerdes et. al. Endocrinology 139, 3569-3577 (1998); Sarah et. al. J. Cell. Physiol. 185, 416-424 (2000); Chen et. al., FEBS Letters 491, 91-93 (2001) 및 Tajana et. al. EMBO J. 3, 637-644 (1984).
별법으로, SARM의 작용제 및 길항제 효과는, 전립선, 정낭 및 항문 거근 등을 비롯한 조직에서 대체치료 종료점 (surrogate endpoint)이 측정된 일련의 생체내 래트 모델을 통해 비종양 조직에서 측정할 뿐만 아니라, 혈장 황체 호르몬 (LH)의 양 측정을 통한 시상하부 축에서도 측정한다. 몇몇 생체내 대체치료 종료점 분석법이 AR 경로에 대한 약제의 효과를 조사하기 위해 이용될 수 있다. 이들 분석법은 전립선, 정낭, 항문 거근, 골, 성욕, 수정능 및 시상하부 (혈액의 LH 양 측정) 등을 비롯하여 정상적인 안드로겐 의존성 조직 및 기능에 대한 약제의 효과를 측정하는 것을 포함한다. 이들 분석법은 인간에서 AR 경로에 대한 약제의 효과와 직접적인 관련성이 있는 것으로 널리 인식되고 있다. 그러한 생체내 대체치료 종료점 분석법의 일부 예는 하기 참고문헌 및 거기에 함유된 참고문헌 등에서 찾아볼 수 있다: Ashby et. al. J. Appl. Tox. 20, 35-47 (2000); Yamada et. al. Tox. Sciences 53, 289-296 (2000), Hamann et. al. J. Med. Chem. 41, 623-639 (1998); Furr et. al. Eur. Urol 29, 83-95 (1996); Broulik et. al. Bone 20, 473-475 (1997); Wang et. al. Poster # P3-126, Endocrine Society 80th Annual Meeting (1998); Hamann et. al. Presentation # S39-2, Endocrine Society 80th Annual Meeting (1998); Maucher et. al. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 119, 669-674 (1993); 및 Risek et al. Presentation # P1-497, Endocrine Society 83rd Annual Meeting (2001).
호르몬 의존성 종양에 걸린 동물 모델은 동물에서 종양에 대한 잠재적 SARM의 길항제 활성, 및 AR 함유 정상 비종양 조직에 대한 작용제 또는 길항제 활성을 평가하는 데 이용될 수 있다. 예를 들어, 상기 생체내 대체치료 종료점 분석법은 안드로겐 의존성 래트 전립선암을 포함하는 래트, 예를 들어 Dunning R-3327을 이용하여 수행할 수 있다. 이 방법에서, 래트 안드로겐 의존성 전립선암에 대한 SARM의 효과는, 전립선, 정낭 및 항문 거근 등을 비롯한 AR 함유 정상 비종양 조직에 대한 SARM 약제의 효과 뿐만 아니라 혈장 LH 양의 측정을 통한 시상하부 축에 대한 효과를 동시에 조사하면서 측정할 수 있다. 유사한 방식으로, 인간 안드로겐 의존성 전립선암을 포함하는 면역 손실 누드 래트가 이용될 수 있다. 이 방법에서, 인간 안드로겐 의존성 전립선암에 대한 SARM의 효과는, 전립선, 정낭 및 항문 거근 등을 비롯한 정상 비종양 조직에 대한 SARM 약제의 효과 뿐만 아니라 혈장 LH 양의 측정을 통한 시상하부 축에 대한 효과를 동시에 조사하면서 측정할 수 있다. 또한, 생체내 래트 분석법도 성욕 및 생식에 대한 SARM의 효과를 측정하는 데 이용될 수 있다.
호르몬 유도 종양에 대한 길항제 활성을 나타내고, 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성을 나타내는 SARM은 에스트라디올, 타목시펜 또는 랄록시펜과의 AR 결정 구조 및 에스트로겐 수용체 (ER) 결정 구조에 관한 정보를 이용하여 고안할 수도 있다. 안드로겐 수용체 리간드 결합 도메인 (AR-LBD)의 결정 구조는 2.0Å 해상도로 측정되었고, 이는 2000년 10월 13일 출원된 미국 특허 출원 제09/687,609호 및 상응하는 PCT/US00/28495호, 문헌 [Matias et al., J. Biol. Chem. 275, 26164-26171 (2000)] 및 [Sack et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 4904-4909 (2001)]에 기재되어 있으며, 이들은 이 거명을 통해 본 명세서에 참고로 포함된다. ER의 결정 구조는, 예를 들어 이 거명을 통해 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 99/50658호에 개시되어 있다. 이들 결정 구조를 이용하여, 구조에 기초한 또는 이론적인 약물 고안 기술이 본 발명의 억제성 및 자극성 SARM을 비롯한 화학물질의 고안, 선택 및 합성에 이용될 수 있다.
본 발명에 의해 가능해진 특히 유용한 하나의 약물 고안 기술은 반복성 (iterative) 약물 고안이다. 반복성 약물 고안은 단백질/리간드 복합체의 연속적인 세트에 대한 3차원 구조를 결정 및 평가함으로써 단백질과 화합물 사이의 결합을 최적화시키는 방법이다. 당업자는 본 개시 내용을 통해 천연 리간드 또는 기질이 자신의 상응하는 수용체 또는 효소의 결합 포켓 (pocket)과 결합하는 것이 다수의 생물학적 작용 메카니즘의 기본이 된다는 것을 이해할 것이다. 본원에서 사용된 용어 "결합 포켓"은, 분자 또는 분자 복합체 중에서 그 형태로 인해 다른 화학물질 또는 화합물 (즉, 리간드)과 우선적으로 결합하게끔 하는 영역을 나타낸다. 이와 유사하게, 다수의 약물은 수용체 및 효소의 결합 포켓과의 결합을 통해 이들의 생물학적 효과를 발휘한다. 그러한 결합은 결합 포켓의 전부 또는 임의 일부에서 발생할 수 있다. 그러한 결합의 이해는 자신의 표적 수용체 또는 효소와 보다 우선적으로 결합하는 약물의 고안을 보조할 것이며, 그 결과 생물학적 효과를 개선할 수 있다. 따라서, 이 정보는 본 발명의 잠재적 SARM을 고안함에 있어서 가치있는 것이다.
용어 "~와 결합하는"은 화학물질 또는 화합물들, 또는 그의 일부들 (즉, 리간드) 사이의 근접 상태를 나타낸다. 결합은 비공유결합 (수소결합, 반데르발스 상호작용 또는 정전 상호작용에 의해 병렬 배치가 활발하게 부여됨)일 수도, 또는 공유결합일 수도 있다.
반복성 약물 고안에 있어서, 일련의 단백질/리간드 복합체의 결정을 얻는다. 그 후, 각 복합체의 3차원 구조를 해석한다. 이러한 접근법은 각 복합체의 단백질과 리간드 사이의 결합에 대한 통찰력을 제공한다. 이는 억제 활성을 지닌 화합물을 선택하고, 이 새로운 단백질/리간드 복합체의 결정을 얻고, 이 복합체의 3차원 구조를 해석하고, 새로운 단백질/리간드 복합체와 기존에 해석된 단백질/리간드 복합체 사이의 관련성을 비교함으로써 달성한다. 화합물의 변화가 단백질/리간드 결합에 어떤 영향을 미치는지 관찰함으로써, 이들 결합을 최적화시킬 수 있다.
일부 경우, 반복성 약물 고안은 연속적인 단백질/리간드 복합체를 형성한 후에, 각각의 새로운 복합체를 결정화시킴으로써 수행한다. 별법으로, 미리 형성된 단백질 결정을 억제제의 존재하에 침지시키고, 이에 의해 단백질/리간드 복합체를 형성하여 각각의 단백질/리간드 복합체를 결정화시킬 필요성을 제거한다.
본원에서 사용된 용어 "침지된"은 결정이 목적 화합물을 함유하는 용액으로 이동되는 과정을 나타낸다.
또한, 본 발명은 AR-LBD/AR-LBD 리간드 복합체 및(또는) ER-LBD/ER-LBD 리간드 복합체의 결정에 기초한 안드로겐 및(또는) 에스트로겐 수용체의 3차원 모델을 이용한 컴퓨터 방법을 제공한다. 일반적으로, 수용체 리간드를 고안하는 컴퓨터 방법은 수용체 리간드 결합 도메인의 어떤 아미노산(들)이 리간드의 화합물 잔기 하나 이상과 상호작용하는지를 결정한다. 그 후, 리간드는 AR-LBD 또는 ER-LBD를 포함하는 결정화 단백질의 3차원 모델을 이용하여 수용체 LBD의 결합 부위 내로 도킹 (docking)된다. 그 후, 결합 부위에서 리간드의 배향을 최적화시킨 후 (하기 참조), 천연 호르몬 상에서 상호작용 아미노산과 상응하는 화합물 잔기 사이의 상호작용에 비해 수용체 LBD로부터의 상호작용 아미노산(들)과 제2 화합물 잔기 사이의 상호작용을 감소 또는 증가시키는 리간드 구조의 제2 화합물을 생성하는 리간드의 화합물 잔기의 화학적 개질 하나 이상을 고안하기 위해 이를 이용한다.
본 발명의 컴퓨터 방법은 이와 같은 결정 및 3차원 구조 정보를 이용하여 SARM을 고안함으로써, 안드로겐 수용체 LBD 및(또는) 에스트로겐 수용체 LBD의 구조 변화를 조절하는 합성 리간드를 생성하기 위한 것이다. 이러한 컴퓨터 방법은, 안드로겐 수용체에 대한 SARM을 고안하는 데 특히 유용한데, 여기서 SARM은 유전자 발현의 조절에 대한 수용체의 영향을 변화시키는 다수의 리간드 유도 분자 사건 중 어느 하나를 방해하는, 예를 들어 작용제와 같이 자연 발생적인 리간드를 흉내내는 자연 발생 리간드 또는 다른 리간드의 경우에 관찰되는 활성화 도메인의 정상적인 좌표를 방해하는 확장된 잔기를 갖는다. 작용제 또는 길항제와 복합체를 이룬 ER-LBD의 구조 (Shiau, et al. Cell 1998 95:927-937; Pike et al. EMBO J. 1999 18(17): 4608-4618), 및 DHT 또는 다른 리간드와 결합된 AR-LBD의 구조 (이 거명을 통해 그 전문이 본 명세서에 참고로 포함되는, 2000년 10월 13일 출원된 미국 특허 출원 제09/687,609호 및 상응하는 PCT/US00/28495호, 및 본원에 제공된 표 A에 기재됨)에 기초하여, 결합 부위에서 AR-LBD 아미노산과 특이적으로 상호작용하도록 화합물을 개질시키는 방법을 결정할 수 있다. 특히, 상기 확장된 잔기는 타목시펜 또는 랄록시펜과 복합체를 이룬 ER의 구조에서 관찰될 때 헬릭스-12의 위치에 영향을 미치는 방식으로 AR 구조의 헬릭스-12에 대해 유도되어, DHT 또는 R1881 (보다 강력한 작용제인 DHT의 합성 유사체, 문헌 [Matias, et al., J. Biol. Chem. 275, 26164-26171 (2000)] 참조)과 결합한 AR의 결정 구조 및 에스트라디올과 결합한 ER의 결정 구조에서 관찰된 헬릭스-12의 위치와 다른 것일 수 있다. AR-LBD 결합 부위에서 리간드에 영향을 미치거나 리간드와 접촉할 수 있는 헬릭스-12의 잔기에는 M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 및 L907이 포함된다. 또한, 본 발명은 표 A에 기재된 구조 좌표에 의해 정의된 3차원 결정 구조에 관한 것이다. 본 발명의 결정 구조는 표 A에 기재된 좌표를 바람직하게는 25％ 이상, 보다 바람직하게는 50％ 이상, 보다 바람직하게는 75％ 이상, 보다 바람직하게는 90％ 이상, 보다 바람직하게는 95％ 이상, 보다 바람직하게는 99％ 이상, 가장 바람직하게는 모두 포함한다. 보다 바람직하게는, 본원에 제공된 표 A에 따른 AR-LBD 아미노산인 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 및 L907의 구조 좌표에 의해 정의된 리간드 결합 부위를 전부 또는 일부 포함하는 분자 또는 분자 복합체, 또는 상기 분자 또는 분자 복합체의 돌연변이체 또는 상동체가 제공된다. 가장 바람직한 것은, 표 A에 따른 AR-LBD 아미노산인 N705, W741, Q711, R752, F764, T877, M895 및 I898의 구조 좌표에 의해 정의된 리간드 결합 부위를 전부 또는 일부 포함하는 분자 또는 분자 복합체, 또는 상기 분자 또는 분자 복합체의 돌연변이체 또는 상동체이다.
본원에서 사용된 용어 "복합체" 또는 "분자 복합체"는 화학물질 또는 리간드와 공유결합 또는 비공유결합된 AR-LBD, 또는 AR-LBD의 돌연변이체 또는 상동체를 의미한다.
본 발명의 목적상, "적어도 일부분"은 구조 좌표에 의해 정의된 리간드 결합 부위의 전부 또는 임의 일부를 의미한다.
본원에서 사용된 "돌연변이체 또는 상동체"는 AR-LBD와 유사한 구조 및(또는) 서열을 갖는 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. "유사한 구조"는 상기 AR-LBD 아미노산의 골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 1.5Å 이하인 결합 포켓을 갖는 돌연변이체 또는 상동체를 의미한다. "유사한 서열"은 AR-LBD와 30％, 보다 바람직하게는 75％의 동일성을 갖는 돌연변이체 또는 상동체를 의미한다.
용어 "제곱근 평균 제곱 편차"는 평균으로부터 편차의 제곱에 대한 산술 평균의 제곱근 값을 의미한다. 이는 경향 또는 객체로부터의 편차 또는 변량을 나타내는 방법이다. 본 발명의 목적상, "제곱근 평균 제곱 편차"는 본원에 기재된 구조 좌표에 의해 정의된 복합체의 AR 부분의 골격 중 관련 부분으로부터 단백질 또는 단백질 복합체의 골격이 나타내는 변량을 규정한다.
일단 단백질 결정의 구조 좌표가 결정되면, 이들은 다른 결정의 구조를 해석하는 데 유용하다.
따라서, 본 발명에 따라, 안드로겐 수용체/리간드 복합체의 구조 좌표 또는 그의 일부가 기계 판독 가능한 저장 매체에 저장된다. 그러한 데이타는 다양한 목적, 예를 들어 약물 개발 및 x-선 결정 분석 또는 단백질 결정을 위해 이용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 한 실시양태에서는 표 A에 기재된 구조 좌표로 코딩된 데이타 저장물을 포함하는 기계 판독 가능한 데이타 저장 매체가 제공된다. 한 실시양태는 WO 98/11134호에 개시된 시스템 10을 이용하며, 이 개시 내용은 이 거명을 통해 그 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다.
또한, 표 A에 기재된 구조 좌표는 다른 결정화 분자 또는 분자 복합체에 관한 구조 정보 수득을 보조하는 데 이용될 수 있다. 이는 분자 치환을 비롯한 다수의 공지 기술 중 어느 것에 의해 달성할 수 있다.
또한, 표 A에 기재된 구조 좌표는 AR과 구조적으로 유사한 특징을 적어도 일부분 포함하는 분자 또는 분자 복합체의 3차원 구조 중 적어도 일부분을 결정하는 데 이용될 수 있다. 특히, 다른 결정화 분자 또는 분자 복합체에 관한 구조 정보를 얻을 수 있다. 이는 분자 치환을 비롯한 다수의 공지 기술 중 어느 것에 의해 달성할 수 있다.
따라서, 본 발명의 다른 실시양태에서는
a) 결정화 분자 또는 분자 복합체로부터 X선 회절 패턴을 생성하는 단계,
b) 표 A에 기재된 구조 좌표의 적어도 일부분을 X-선 회절 패턴에 적용하여, 구조가 알려지지 않은 분자 또는 분자 복합체의 3차원 전자 밀도 지도를 생성하는 단계, 및
c) 표 A에 기재된 구조 좌표의 전부 또는 일부를 이용하여 AR-LBD 또는 임의의 다른 핵 호르몬 수용체 리간드 결합 도메인의 상동성 모델을 생성하는 단계
를 포함하는, 구조가 알려지지 않은 결정화 분자 또는 분자 복합체에 관한 구조 정보를 얻기 위해 분자 치환을 이용하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 결정화 분자 또는 분자 복합체는 본 발명의 결정을 용액에 침지시킴으로써 얻는다.
분자 치환을 이용함으로써, 본 발명에 의해 제공된 AR-LBD/AR-LBD 리간드 복합체 또는 구조가 알려지지 않은 분자 복합체의 구조 좌표 전부 또는 일부를, 그러한 정보를 최초부터 결정하려는 것에 비해 보다 빠르고 효율적으로 알 수 있다.
분자 치환은 미지의 구조에 대한 상의 정확한 평가를 제공한다. 상은 직접 결정될 수 없는 결정 구조를 해석하는 데 사용되는 방정식의 인자이다. 분자 치환 이외의 방법으로 상에 대한 정확한 값을 얻는 것은 근사치 측정 및 보정의 반복적 주기를 포함하며 결정 구조의 해석을 현저히 방해하는 시간 소모적인 과정이다. 그러나, 적어도 상동성 부분을 함유하는 단백질의 결정 구조가 해석되었을 때, 공지 구조로부터의 상은 미지 구조에 대한 상의 만족할만한 예상치를 제공한다.
따라서, 이 방법은 표 A에 따른 AR-LBD/AR-LBD 리간드 복합체의 관련 부분을 미지 분자 또는 분자 복합체 결정의 단위 셀 내에 배향 및 위치시켜 구조가 알려지지 않은 분자 또는 분자 복합체 결정의 관찰된 X-선 회절 패턴을 최상으로 설명하도록 함으로써, 구조 좌표가 알려지지 않은 분자 또는 분자 복합체의 예비 모델을 생성하는 것을 포함한다. 그 후, 상을 이 모델로부터 계측하고 관찰된 X-선 회절 패턴 진폭과 합하여, 좌표가 알려지지 않은 구조의 전자 밀도 지도를 생성한다. 이는 임의의 공지 모델 구성 및 구조 보정 기술에 번갈아 적용됨으로써, 미지의 결정화 분자 또는 분자 복합체의 정확한 최종 구조를 제공하게 된다 (E. Lattman,"Use of the Rotation and Translation Functions", in Meth. Enzymol., 115, pp. 55-77 (1985); M. G. Rossmann, ed., "The Molecular Replacement Method", Int. Sci. Rev. Set., No. 13, Gordon ＆ Breach, New York (1972)).
AR-LBD/AR-LBD 리간드 복합체의 임의 일부에 충분한 상동성이 있는 임의의 결정화 분자 또는 분자 복합체, 또는 돌연변이체, 상동체 또는 고아 수용체 (orphan receptor)의 구조는 이 방법에 의해 해석될 수 있다. 상기 언급한 AR과 함께, 활성화 또는 탈활성화 리간드가 특성화되지 않은 다수의 수용체들이 또한 존재한다. 이들 단백질은 AR에 대한 강력한 서열 상동성으로 인해 핵 호르몬 수용체로 분류되며, 고아 수용체로서 알려져 있다.
또한, 구조 좌표는 다양한 화학물질과 함께 복합체를 이룬 AR-LBD/AR-LBD 리간드의 결정 구조를 해석하는 데 특히 유용하다. 이 접근법은 후보 AR 억제제의 복합체와의 상호작용을 비롯하여 화학물질들 사이의 최적 상호작용 부위를 결정하도록 해준다. 예를 들어, 상이한 유형의 용매에 노출된 결정으로부터 수집한 고해상도 X-선 회절 데이타는 각 유형의 용매 분자가 어디에 위치하는지 결정할 수 있게 해준다. 이들 부위에 단단히 결합한 소분자를 그 후에 고안 및 합성하여 AR 억제 활성에 대해 시험할 수 있다.
상기 언급한 모든 복합체는 공지의 X-선 회절 기술을 이용하여 연구할 수 있으며, X-PLOR (Yale University, 1992, Molecular Simulations, Inc.에 의해 분배됨; 예를 들어, 문헌 [Blundell ＆ Johnson, 상기 문헌], [Meth. Enzymol., vol. 114 ＆ 115, H. W. Wyckoff et al., eds., Academic Press (1985)] 참조)과 같은컴퓨터 소프트웨어를 이용하여 1.5-3Å 해상도 X-선 데이타에 대해 약 0.20 이하의 R값으로 보정할 수 있다. 따라서, 이 정보는 공지의 AR 작용제, 부분 작용제, 길항제, 부분 길항제 및 SARM을 최적화시키는 데 이용될 수 있으며, 보다 중요하게는 새로운 AR 작용제/길항제를 고안하는 데 이용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 AR-LBD 리간드에 대한 AR-LBD의 결합 부위에 관한 것이며, 여기서 AR-LBD의 일부는 표 A에 따른 AR-LBD의 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907 잔기 중 하나 이상과 반데르발스 또는 수소결합에 의해 접촉하고 있다. 본 발명의 목적상, AR-LBD 결합 부위는 그의 돌연변이체 또는 상동체를 포함하는 의미이다. 바람직한 실시양태에서, 돌연변이체 또는 상동체는 표 A에 따른 AR-LBD 결합 부위의 잔기 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907과 25％ 이상의 동일성, 보다 바람직하게는 50％ 이상의 동일성, 보다 바람직하게는 75％ 이상의 동일성, 가장 바람직하게는 95％ 이상의 동일성을 갖는다.
또한, 본 발명은 기계 판독 가능한 데이타로 코딩된 데이타 저장물을 포함하는 기계 판독 가능한 데이타 저장 매체에 관한 것인데, 여기서 상기 데이타는 표 A에 따른 AR-LBD/AR-LBD 리간드 또는 상기 복합체의 상동체의 구조 좌표에 의해 정의되고, 상기 상동체는 복합체의 골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 3.0Å 이하인 골격 원자를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 기계 판독 가능한 데이타 저장 매체는, 상기 분자 또는 분자 복합체가 표 A에 따른 AR-LBD/AR-LBD 리간드에 대한, 또는 상기 분자 또는 분자 복합체의 상동체 (상동체는 상기 아미노산의 골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 2.0Å 이하임)에 대한 구조 좌표의 세트에 의해 정의되는 것이다. 바람직한 실시양태에서, 기계 판독 가능한 데이타 저장 매체는, 표 A에 따른 AR-LBD/AR-LBD 리간드에 대한 구조 좌표 중 적어도 일부분의 푸리에 (Fourier) 변환을 포함하는 제1 세트의 기계 판독 가능한 데이타에 의해 코딩된 데이타 저장물을 포함하며, 이는 미지 구조의 분자 또는 분자 복합체의 X-선 회절 패턴을 포함하는 제2 세트의 기계 판독 가능한 데이타와, 제1 세트의 데이타와 제2 세트의 데이타를 이용하는 지시가 프로그래밍된 기계를 이용하여 합해질 때, 제2 세트의 기계 판독 가능한 데이타, 상기 제1 세트의 데이타 및 상기 제2 세트의 데이타에 상응하는 구조 좌표의 적어도 일부분을 결정할 수 있다.
또한, 본 발명은 AR-LBD/AR-LBD 리간드 복합체의 결정에 기초한 안드로겐 수용체의 3차원 모델을 이용하는 컴퓨터 방법을 제공한다. 일반적으로, 안드로겐 수용체 리간드를 고안하는 컴퓨터 방법은, AR-LBD와 결합된 리간드를 포함하는 결정화 단백질의 3차원 모델을 이용하고, 상호작용 아미노산과 제2 화합물 잔기 사이의 상호작용을 상호작용 아미노산과 천연 호르몬 상의 상응 화합물 잔기 사이의 상호작용에 비해 감소 또는 증가시키는 구조를 갖는 제2 화합물 잔기를 생성하는 화합물 잔기의 (하나 이상의) 화학적 개질을 선택하여, AR-LBD의 어떤 아미노산(들)이 (하나 이상의) 리간드의 화합물 잔기와 상호작용하는지 결정한다. 바람직한 실시양태에서, 안드로겐 수용체 활성을 조절하는 화합물을 확인하는 방법은 하기 단계들의 임의 조합을 포함한다:
a. 표 A에 따른 구조 좌표에 의해 정의된 AR-LBD 내에 공간적으로 맞는 시험 화합물을 모델링하거나, 또는 AR-LBD, AR-LBD의 돌연변이체 또는 AR-LBD 상동체 또는 그 일부분의 3차원 구조 모델을 이용하는 단계,
b. 본원에 기재된 AR-LBD 구조 좌표 또는 리간드 결합 부위를 이용하여 구조적 및 화학적 특징을 확인하는 단계,
c. 확인된 구조적 또는 화학적 특징들을 이용하여 잠재적 SARM으로서의 화합물을 고안 또는 선택하는 단계,
d. 3차원 구조 모델 또는 리간드 결합 부위를 이용하여 잠재적 SARM으로서의 화합물을 고안 또는 선택하는 단계,
e. 잠재적 SARM을 합성하는 단계,
f. 시험 화합물과 AR-LBD와의 결합에 특징이 있는 분석법으로 잠재적 SARM을 스크리닝하는 단계,
g. 표 A에 따른 AR-LBD의 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706,L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907로 이루어진 군으로부터 선택되는, AR-LBD로부터의 아미노산 하나 이상을 개질시키거나 치환하는 단계.
본 발명의 컴퓨터 방법은 그러한 결정 및 3차원 구조 정보를 이용하여 안드로겐 수용체 LBD의 구조적 변화를 조절하는 합성 리간드를 생성함으로써, 안드로겐 수용체 합성 리간드를 고안하기 위한 것이다. 이러한 컴퓨터 방법 안드로겐 수용체에 대한 작용제, 부분 작용제, 길항제 또는 부분 길항제 또는 SARM을 고안하는 데 특히 유용한데, 여기서 작용제, 부분 작용제, 길항제 또는 부분 길항제 또는 SARM은 유전자 발현의 조절에 대한 수용체의 영향을 변화시키는 다수의 리간드 유도 분자 사건 중 어느 하나를 방해하는, 예를 들어 작용제와 같이 자연 발생적인 리간드를 흉내내는 자연 발생 리간드 또는 다른 리간드의 경우에 관찰되는 활성화 도메인의 정상적인 좌표를 방해하는 확장된 잔기를 갖는다. 본원에 기재된 바와 같이, 안드로겐 수용체의 합성 리간드는 다양한 의학적 증상에서 안드로겐 수용체 활성을 조절하는 데 유용할 것이다.
또한, 중요한 리간드-수용체 상호작용을 안정화시키거나 파괴하는 헬릭스-3 또는 헬릭스-11에 대해 유도된 확장된 화합물 잔기를 고안하는 것도 가능하다 (Humm et al. Arch. Pharm. (Weinheim) 1990 323:83-87; Poujol, et al. J. Biol.Chem. 2000 275 (31):24022-24031). DHT와 복합체를 이룬 AR-LBD의 구조는 안드로겐의 17α-히드록실기 (DHT)가 AR-LBD의 Thr-877 및 Asn-705와 중요한 수소결합을 형성한다는 것을 보여준다 (Sack et al. Proc. Natl Acad. Sci. (USA) 98(9):4904-4909 (2001)). 여러 실험들은 Asn-705가 알라닌으로 돌연변이화 (N705A)된 경우에 비스테로이드계 항-안드로겐이 야생형 AR에 비해 낮은 길항 특성을 가짐을 보여준다. 따라서, Asn-705는 비스테로이드계 항-안드로겐의 부착에 중요한 역할을 하며, Asn-705 및 Thr-877에 대한 화합물 잔기의 고안도 SARM의 개발에 이용될 수 있다. 본원에 기재된 봐와 같이, 안드로겐 수용체의 합성 리간드는 호르몬 유도 종양에서 안드로겐 수용체 활성을 억제하고 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에서 안드로겐 수용체를 활성화시키는 데 유용할 것이다.
ER-LBD 및 AR-LBD의 3차원 구조에 대한 2차 구조 (SS) 성분의 위치는 아래에 도시된다. 아미노산 서열 정렬은 AR-LBD와 ER-LBD를 구조적으로 겹쳐지게 도시하였다. 서열 번호는 AR-LBD에 대한 것이다. H (또는 G)는 특정 아미노산이 헬릭스 내에 있음을 나타내고, E (또는 B)는 특정 아미노산이 베타 가닥에 있음을 나타낸다. AR-LBD 아미노산은 Ile-672에서 His-917 (서열 1)에 걸쳐 있고, ER-LBD 아미노산은 Ser-305에서 Arg-548 (서열 2)에 걸쳐 있다. 헬릭스 번호는 서열 및 구조정의 아래에 기재하였다.
AR 및 ER에 대해 결정학 데이타를 사용하고 본 발명의 SARM의 이론적인 고안을 가능하게 하는 다양한 컴퓨터 프로그램이 입수 가능하다. ICM (버전 2.7 이상; Molsoft LLC, La Jolla, CA) 또는 SYBYL (등록상표; Tripos Inc., St Louis, MO)과 같은 소프트웨어 프로그램이 AR 및 ER 결정으로부터의 원자 좌표에 사용되어, 3차원 모델을 생성하고(하거나) 리간드 결합에 관여하는 구조를 결정할 수 있다. INSIGHT II (등록상표; Pharmacopeia/Molecular Simulations, Inc., San Diego, CA) 및 GRASP (Columbia University, New York, NY)와 같은 다른 분자 가시화 프로그램은 추가의 조작 및 새로운 구조 도입능을 가능하게 한다. 또한, AR-LBD의 서열과 AR-LBD 구조가 입력될 수 있는 다수의 컴퓨터 모델링 시스템이 입수 가능하다. 그 후, 컴퓨터 시스템은 잠재적 AR 조절제가 결합하는 부위의 상세 구조를 생성하여 잠재적 조절제의 상보적인 상세 구조를 결정할 수 있다. 이들 모델링 시스템에서의 고안은 일반적으로 AR-LBD와 물리적으로 및 구조적으로 결합할 수 있는 화합물에 기초하여 이루어진다. 또한, 화합물은 이 화합물이 AR-LBD와 결합하도록 하는 구조를 가정할 수 있게끔 해야 한다. 일부 모델링 시스템에서는 실제 합성 및 시험 전에 잠재적 AR 조절제의 잠재적 억제 또는 결합 효과를 평가한다.
AR 및 ER과 결합하는 능력에 대해 화학물질 또는 그의 단편을 스크리닝하는 방법도 잘 알려져 있다. 대체로 이러한 방법은 컴퓨터 스크린 상에서 활성 부위를 시각적으로 관찰함으로써 시작한다. 선택된 단편 또는 화학물질을 그 후에 AR-LBD 또는 ER-LBD에 위치시킨다. 소프트웨어를 이용하여 도킹을 수행하고, CHARMM 및 AMBER와 같은 표준 분자 기계력장을 사용한 포괄적인 최적화 절차 또는 분자 역학 및 최소화 프로토콜에 의해 수용체 결합 부위에 리간드를 최적화시킨다. 본 발명에 유용한 화합물 단편 또는 화학물질의 분자적 도킹 및 선택을 보조하는 컴퓨터 프로그램의 예에는 GRID (Goodford, P.J. J. Med. Chem. 1985 28:849-857), AUTODOCK (Goodsell, D.S. and Olsen, A.J. Proteins, Structure, Functions, and Genetics 1990 8:195-202), 및 DOCK (Kunts et al. J. Mol. Biol. 1982 161:269-288)과 ICM (Molsoft LLC, La Jolla CA, ICM 2.7 프로그램 메뉴얼, Abagan et al. 1994 J. Mol. Biol. 235:983-1002, Totrov et al. 1997 Proteins Suppl. 1:215-220)이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
바람직한 화학물질 또는 단편의 선택에 있어서, 서로에 대한 그리고 AR 또는 ER에 대한 관계는 가시화될 수 있고, 화학물질 또는 단편은 하나의 잠재적 조절제로서 조립될 수 있다. 개개의 화학물질을 조립하는 데 유용한 프로그램에는CAVEAT (Bartlett et al. Molecular Recognition in Chemical and Biological Problems Special Publication, Royal Chem. Soc. 78, 182-196 (1989)) 및 3D 데이타베이스 시스템 (Martin, Y.C. J. Med. Chem. 1992 35:2145-2154)이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
별법으로, 화합물은 비어있는 활성 부위를 이용하여 또는 임의로 공지 억제제의 일부분을 포함하여 새로이 고안될 수 있다. 이러한 유형의 고안 방법에는 LUDI (Bohm H-J, J. Comp. Aid. Molec. Design 1992 6:61-78) 및 LeapFrog (상표명; Tripos Associates, St. Louis. MO)가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
수용체 결합 부위에서의 고안 및 도킹된 화학물질을 평가하기 위한 다수의 프로토콜이 개발되었다. 단백질 결합 부위에서 화학물질을 평가하는 데 유용한 프로그램에는 DOCK (Kunts et al. J. Mol. Biol. 1982 161:269-288), ICM (Molsoft LLC, La Jolla CA, Totrov et al. 1997 Proteins Suppl. 1:215-220, Schapira et al. 2000 Proc. Natl. Acad. Sci USA 97(3):1008-1013) 및 SYBYL (등록상표; Tripos Inc. St Louis, MO)가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.
일단 컴퓨터로 고안된 리간드 (computationally designed ligand; CDL)가 합성되면, 이를 본원에 기재된 바와 같은 분석법을 이용하여 시험함으로써, 호르몬 의존성 종양에서 길항제로서의 활성을 확립하고 다른 비악성 AR 함유 조직에서의 활성을 평가할 수 있다. 호르몬 의존성 종양에서는 길항제 활성을 나타내지만, 다른 비종양 AR 함유 조직에서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 부분 작용제 또는 작용제 활성을 나타내는 CDL이 본 발명에 따른 SARM이다. 그러한 시험 후, CDL은 LBD에 결합한 CDL로 LBD 결정을 생성함으로써 추가로 개량될 수 있다. 그 후, CDL의 구조는 3차원 모델에 대해 확립된 화학 개질법을 이용하여 추가로 개량됨으로써, CDL의 활성 또는 친화도가 향상되고 "슈퍼 SARM" (선택된 조직에서의 길항제 활성을 유지하면서 우수한 작용제 활성을 지닌 화합물을 의미함)과 같이 향상된 특성을 지닌 제2 세대 CDL이 제조될 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 실시양태에서, 하기 활성 수준을 갖는 SARM을 고려할 수 있다. 그러한 SARM은 본 발명의 방법 및 조성물에 바람직하며, 하기 (i) 및(또는) (ii)에 기재된 길항제 활성 수준을 나타내고, 활성을 나타내지 않거나, 보다 바람직하게는 하기 (iii) 및(또는) (iv)에 기재된 작용제 활성 수준을 나타낸다:
(i) 1종 이상의 호르몬 의존성 세포주, 바람직하게는 전립선암 세포주, 또는 본 발명의 SARM에 대한 스크리닝과 관련하여 상기 기재된 것과 하기 실시예 3, 4 및 6에 기재된 바와 같이, 전립선압 세포주에서의 활성을 예상할 수 있는 다른 호르몬 의존성 종양 세포주의 억제에 있어서, DHT에 대해 얻은 최대 신호 유도에 비해 약 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 0.5 μM 이하, 가장 바람직하게는 0.1 μM 이하의 IC50; 및(또는)
(ii) 상기 기재된 것과 하기 실시예 10, 11, 12 또는 13에 기재된 바와 같은 모델에서 호르몬 의존성 생체내 종양 증식의 억제; 및 바람직하게는,
(iii) DHT에 비해 1 μM에서 30％ 이상의 활성화, 보다 바람직하게는 정상적인 AR 반응성 조직에서 약 0.5 μM 이하의 EC50, 가장 바람직하게는 약 0.1 μM 이하의 EC50;
(iv) 및(또는) 상기 기재된 것 및 실시예 8에 기재된 바와 같이, 대조군 동물에 비해 복부 전립선, 정낭, 항문 거근 및(또는) 황체 호르몬 혈청 양에 대한 20％ 초과, 바람직하게는 40％ 초과, 보다 바람직하게는 70％ 초과, 보다 바람직하게는 90％ 초과의 생체내 활성화 효과.
또한, 본 발명의 바람직한 SARM은 정상적인 평균 골밀도, 정상적인 평균 근육 질량, 정상적인 평균 생식 기능, 및 생식 온혈 수컷 동물, 바람직하게는 인간 남성에서 정상적인 평균 성욕을 유지하는 작용을 한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 SARM은 호르몬 의존성 종양에 대해 길항제 활성을 나타내지만, 동일한 양 또는 양의 범위에 대해서 활성이 없거나 작용제 활성을 나타낸다. 환자에 투여시, 이러한 양 또는 양의 범위는 바람직한 치료 유효 범위이다. 본 개시 내용을 읽었을 때 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 SARM은 바람직한 치료 유효 범위 이외의 양으로 사용되는 경우에 호르몬 의존성 종양에 대한 동일한 길항제 활성을 나타내며, 비종양 함유 조직에 대해서는 활성이 없거나 작용제 활성을 나타낼 수도, 또는 더이상 동일한 특이성 또는 선택성을 나타내지 않을 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 SARM은 바람직한 치료 유효 범위를 초과하는 양으로 사용되는 경우에 비종양 함유 조직에서 일부 길항제 활성을 나타낼 수도 있다.
본 발명은 또한 호르몬-유발된 종양에서는 길항제이며 다른 AR 함유 비종양조직에서 비활성인, 또는 보다 바람직하게는 작용제인 임의의 화합물을 포함하는 선택적 안드로겐 수용체 조절제 (SARM)에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, SARM은 본원에 기재된 스크리닝 분석을 통해 확인되거나, 본원에 기재된 컴퓨터 방법에 따라 고안된다. 소분자 화합물, 특히 펩티드 또는 스테로이드 이외의 화합물이 바람직하다. 특정한 화학형에 제한하려는 것은 아니지만, 하기 화학식 Ia 또는 Ib로부터 선택된 화합물, 특히 본원의 실시예에 기재된 이러한 화학식의 특정 화합물들이 본 발명의 SARM으로 바람직하다. 화학식 Ia의 화합물은 미국 가출원 제60/214,392호 (2000년 6월 28일 출원), 미국 가출원 제60/284,617호 (2001년 4월 18일 출원) 및 미국 특허 출원 ["Fused Cyclic Modulators of Nuclear Hormone Receptor Function", by Salvati et al., 2001년 6월 20일 출원 (대리인 관리 번호 제LD0191(NP)호)]에 ("화학식 I"의 화합물로) 더 기재되어 있고; 화학식 Ib의 화합물은 미국 가출원 제60/233,519호 (2000년 9월 19일 출원), 미국 가출원 제60/284,730호 (2001년 4월 18일 출원) 및 미국 특허 출원 ["Fused Heterocyclic Succinimide Compounds and Analogs Thereof, Modulators of Nuclear Hormone receptor Function", by Salvati et al., 2001년 6월 20일 출원 (대리인 관리 번호 제LD0192(NP)호)]에 ("화학식 I"의 화합물로) 더 기재되어 있다 (이 거명에 의해 이들 모든 출원들의 전문이 본원에 참고로 포함됨). 화학식 Ia는 하기와 같다:
상기 식에서, 기호들은 달리 표시되지 않는 한 하기 의미를 갖고 각 경우 하기로부터 독립적으로 선택된다:
G는 아릴기 또는 헤테로시클로기 (예, 헤테로아릴기)이고, 여기서 상기 기는 모노- 또는 폴리시클릭기이며, 하나 이상의 위치에서 바람직하게는 수소, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 알키닐 또는 치환된 알키닐, 할로, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 아릴 또는 치환된 아릴, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, CN, R1OC=O, R1C=0, R1C=S, R1HNC=O, R1R2NC=O, HOCR3R3', 니트로, R1OCH2, R1O, NH2, NR4R5, SR1, S=OR1, SO2R1, SO2OR1, SO2NR1R1', (R1O)(R1'O)P=O, (R1)(R1')P=O, 또는 (R1')(NHR1)P=0로 임의로 치환될 수 있고;
E는 C=Z2, CR7R7'(예, CHR7), SO2, P=OR2, 또는 P=OOR2이고;
Z1은 O, S, NH, 또는 NR6이고;
Z2는 O, S, NH, 또는 NR6이고;
A1은 CR7또는 N이고;
A2는 CR7또는 N이고;
Y는 J-J'-J"이고, 여기서 J는 (CR7R7')n(n은 0 내지 3임)이고, J'는 결합 또는 O, S, S=O, SO2, NH, NR6, C=O, OC=O, NR1C=O, CR7R7', C=CR8R8', R2P=O, OPOOR2, OPO2, OSO2, C=N, NHNH, NHNR6, NR6NH, N=N, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로 또는 아릴 또는 치환된 아릴이고, J"는 (CR7R7')n(n은 0 내지 3이고, 여기서 Y는 결합이 아님)이고;
W는 CR7R7'-CR7R7', CR8=CR8', CR7R7'-C=O, NR9-CR7R7', N=CR8, N=N, NR9-NR9', 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 또는 아릴 또는 치환된 아릴이고;
Q는 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 알키닐 또는 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴, 헤테로시클로 (예, 헤테로아릴) 또는 치환된 헤테로시클로 (예, 치환된 헤테로아릴), 할로, CN, R1OC=O, R4C=O, R5R6NC=O, HOCR7R7', 니트로, R1OCH2, R1O, NH2, C=OSR1, SO2R1또는 NR4R5이고;
M은 결합, O, CR7R7'또는 NR10이고, M'는 결합 또는 NR10이고, 다만 M 또는 M' 중 적어도 하나는 결합이어야 하고;
L은 결합, (CR7R7')n, NH, NR5또는 N(CR7R7')n(n은 0 내지 3임)이고;
R1및 R1'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬이고;
R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴,아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬이고;
R3및 R3'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 할로, CN, 히드록실아민, 히드록사미드, 알콕시 또는 치환된 알콕시, 아미노, NR1R2, 티올, 알킬티오 또는 치환된 알킬티오이고;
R4는 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, R1C=O, R1NHC=O, SO2OR1또는 SO2NR1R1'이고;
R5는 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴,아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, R1C=O, R1NHC=O, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이고;
R6은 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, CN, OH, OR1, R1C=O, R1NHC=O, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이고;
R7및 R7'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 할로, CN, OR1, 니트로, 히드록실아민, 히드록실아미드, 아미노, NHR4, NR2R5, NOR1, 티올, 알킬티오 또는 치환된 알킬티오, R1C=O, R1OC=O, R1NHC=O, SO2R1, SOR1, PO3R1R1', R1R1'NC=O, C=OSR1, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이고;
R8및 R8'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 니트로, 할로, CN, OR1, 아미노, NHR4, NR2R5, NOR1, 알킬티오 또는 치환된 알킬티오, C=OSR1, R1OC=O, R1C=O, R1NHC=O, R1R1'NC=O, SO2OR1, S=OR1, SO2R1, PO3R1R1', 또는 SO2NR1R1'이고;
R9및 R9'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, CN, OH, OR1, R1C=O, R1OC=O, R1NHC=O, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이고;
R10은 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, CN, OH, OR1, R1C=O, R1OC=O, R1R1'NC=O, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이다.
화학식 Ib는 하기와 같다:
상기 식에서, 기호들은 달리 표시되지 않는 한 하기 의미를 갖고 각 경우 하기로부터 독립적으로 선택된다:
G는 아릴기 또는 헤테로시클로기 (예, 헤테로아릴기)이고, 여기서 상기 기는 모노- 또는 폴리시클릭기이며, 하나 이상의 위치에서 바람직하게는 수소, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 알키닐 또는 치환된 알키닐, 할로, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 아릴 또는 치환된 아릴, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, CN, R1OC=O,R1C=0, R1C=S, R1HNC=O, R1R2NC=O, HOCR3R3', 니트로, R1OCH2, R1O, NH2, NR4R5, SR1, S=OR1, SO2R1, SO2OR1, SO2NR1R1', (R1O)(R1'O)P=O, 옥소, (R1)(R1')P=O, 또는 (R1')(NHR1)P=0로 임의로 치환될 수 있고;
Z1은 O, S, NH, 또는 NR6이고;
Z2는 O, S, NH, 또는 NR6이고;
A1은 CR7또는 N이고;
A2는 CR7또는 N이고;
Y는 J-J'-J"이고, 여기서 J는 (CR7R7')n(n은 0 내지 3임)이고, J'는 결합 또는 O, S, S=O, SO2, NH, NR7, C=O, OC=O, NR1C=O, CR7R7', C=CR8R8', R2P=O, R2P=S, R2OP=O, R2NHP=O, OP=OOR2, OP=ONHR2, OP=OR2, OSO2, C=NR7, NHNH, NHNR6, NR6NH, N=N, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로 또는 아릴 또는 치환된 아릴이고, J"는 (CR7R7')n(n은 0 내지 3이고, 여기서 Y는 결합이 아님)이고;
W는 CR7R7'-CR7R7', CR8=CR8', CR7R7'-C=O, NR9-CR7R7', N=CR8, N=N, NR9-NR9', S-CR7R7', SO-CR7R7', SO2-CR7R7', 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 또는 아릴 또는 치환된 아릴이고, 여기서 W가 NR9-CR7R7', N=CR8, N=N, NR9-NR9', S-CR7R7', SO-CR7R7', SO2-CR7R7', 또는 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로가 아닐 경우 J'는 O, S, S=O, SO2, NH, NR7, OC=O, NR1C=O, OP=OOR2, OP=ONHR2, OSO2, NHNH, NHNR6, NR6NH, 또는 N=N이어야 하고;
Q1은 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 알키닐 또는 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴, 헤테로시클로 (예, 헤테로아릴) 또는 치환된 헤테로시클로 (예, 치환된 헤테로아릴), 할로, CN, R1OC=O, R4C=O, R5R6NC=O, HOCR7R7', 니트로, R1OCH2, R1O, NH2, C=OSR1, SO2R1또는 NR4R5이고;
Q2는 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로알킬또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 알키닐 또는 치환된 알키닐, 아릴 또는 치환된 아릴, 헤테로시클로 (예, 헤테로아릴) 또는 치환된 헤테로시클로 (예, 치환된 헤테로아릴), 할로, CN, R1OC=O, R4C=O, R5R6NC=O, HOCR7R7', 니트로, R1OCH2, R1O, NH2, C=OSR1, SO2R1또는 NR4R5이고;
L은 결합, (CR7R7')n, NH, NR5, NH(CR7R7')n또는 NR5(CR7R7')n(n은 0 내지 3임)이고;
R1및 R1'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬이고;
R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬이고;
R3및 R3'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 할로, CN, 히드록실아민, 히드록사미드, 알콕시 또는 치환된 알콕시, 아미노, NR1R2, 티올, 알킬티오 또는 치환된 알킬티오이고;
R4는 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, R1C=O, R1NHC=O, SO2OR1또는 SO2NR1R1'이고;
R5는 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, R1C=O, R1NHC=O, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이고;
R6은 알킬 또는 치환된 알킬, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, CN, OH, OR1, R1C=O, R1NHC=O, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이고;
R7및 R7'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 할로, CN, OR1, 니트로, 히드록실아민, 히드록실아미드, 아미노, NHR4, NR2R5, NOR1, 티올, 알킬티오 또는 치환된 알킬티오, R1C=O, R1OC=O, R1NHC=O, SO2R1, SOR1, PO3R1R1', R1R1'NC=O, C=OSR1, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이거나, 또는 여기서 A1또는 A2는 R7기를 포함하고 W는 R7기를 포함하고, 상기 A1또는 A2의 R7기는 W와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
R8및 R8'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, 니트로, 할로, CN, OR1, 아미노, NHR4, NR2R5, NOR1, 알킬티오 또는 치환된 알킬티오, C=OSR1, R1OC=O, R1C=O, R1NHC=O, R1R1'NC=O, SO2OR1, S=OR1, SO2R1, PO3R1R1', 또는 SO2NR1R1'이고;
R9및 R9'는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 치환된 알킬, 알케닐 또는 치환된 알케닐, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 치환된 시클로알케닐, 헤테로시클로 또는 치환된 헤테로시클로, 시클로알킬알킬 또는 치환된 시클로알킬알킬, 시클로알케닐알킬 또는 치환된 시클로알케닐알킬, 헤테로시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클로알킬, 아릴 또는 치환된 아릴, 아릴알킬 또는 치환된 아릴알킬, CN, OH, OR1, R1C=O, R1OC=O, R1NHC=O, SO2R1, SO2OR1, 또는 SO2NR1R1'이다.
본 발명은 또한 호르몬-유발된 종양의 증식을 억제하는데 SARM을 사용하는 방법에 관한 것이다. 호르몬-유발된 종양에서는 길항제 활성이 있으며 다른 비종양 AR 함유 조직에서는 활성이 없거나, 보다 바람직하게는 작용제 활성이 있는SARM을 환자에게 유효량으로 투여함으로써 호르몬-유발된 종양을 치료할 수 있다. "유효량"은 환자에서 호르몬-유발된 종양 세포의 증식을 억제하는 SARM의 양 또는 농도를 의미한다. 바람직한 실시양태에서, "유효량"은 또한 비종양 AR 함유 조직에서 작용제 활성을 유발하는 양 또는 농도를 의미한다. 이러한 양 또는 농도는 당업계의 보통 기술자에 의해, 예를 들어 본원에 기재된 세포 기재 분석을 기초로 하거나 또는 다른 당업계에 인식된 수단을 통해 일반적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 SARM은 단독으로, 또는 방사선과 함께 및(또는) 1종 이상의 활성제, 예를 들어 화학요법제와 함께 동시에 또는 연속적으로 투여될 수 있다. 본 발명 화합물과의 조합에 유용한 항암제 및 세포독성제의 예는 이에 제한되지는 않지만, 알킬화제, 예를 들어 질소 겨자 (nitrogen mustard), 알킬 술포네이트, 니트로소우레아, 에틸렌이민 및 트리아젠; 항대사물질, 예를 들어 엽산 길항제, 퓨린 유사체 및 피리미딘 유사체; 항생제, 예를 들어 안트라시클린, 블레오마이신, 미토마이신, 닥티노마이신 및 플리카마이신; 효소, 예를 들어 L-아스파라기나제; 파르네실-단백질 트랜스퍼라제 억제제; 5α 리덕타제 억제제; 17β-히드록시 스테로이드 데히드로게나제 유형 3의 억제제; 호르몬제, 예를 들어 글루코코르티코이드, 에스트로겐/항에스트로겐, 안드로겐/항안드로겐, 프로게스틴 및 황체형성 호르몬-분비 호르몬 길항제, 옥트레오티드 아세테이트; 미세관-장애제, 예를 들어 엑테이나스시딘 또는 그의 유사체 및 유도체; 미세관-안정화제, 예를 들어 탁산 (예, 파클리탁셀 (탁솔 (등록상표, Taxol), 도세탁셀 (탁소테레 (등록상표, Taxotere) 및 이들의 유사체) 및 에포틸론 (예, 에포틸론 A 내지 F 및 이들의 유사체); 식물 유래의 생성물, 예를 들어 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 탁산; 및 토포이소머라제 억제제; 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제; 및 기타 약품, 예를 들어 수산화요소, 프로카르바진, 미토탄, 헥사메틸멜라민, 백금 배위 착화합물 (예, 시스플라틴 및 카르보플라틴); 및 항암제 및 세포독성제로 사용되는 다른 약품, 예를 들어 생물학적 반응 조절제, 성장 인자; 면역 조절제 및 단일클론성 항체를 포함한다. 본 발명의 화합물은 또한 방사선 요법과 함께 사용될 수 있다.
이러한 종류의 항암제 및 세포독성제의 대표적인 예는 이에 제한되지는 않지만, 메클로르에타민 히드로클로라이드, 시클로포스파미드, 클로람부실, 멜팔란, 이포스파미드, 부술판, 카르머스틴, 로머스틴, 세머스틴, 스트렙토조신, 티오테파, 다카르바진, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 머르캅토푸린, 플루다라빈, 펜타스타틴, 클라드리빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 독소루비신 히드로클로라이드, 다우노루비신, 이다루비신, 블레오마이신 술페이트, 미토마이신 C, 악티노마이신 D, 사프라신, 사프라마이신, 퀴노카르신, 디스코데르몰리드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈 타르트레이트, 에토포시드, 에토포시드 포르페이트, 테니포시드, 팍클리탁셀, 타목시펜, 에스트라머스틴, 에스트라머스틴 포스페이트 나트륨, 플루타미드, 버세렐린, 류프로라이드, 프테리딘, 디인네스, 레바미솔, 아플라콘, 인터페론, 인터류킨, 알데스류킨, 필그라스팀, 사르그라모스팀, 리톡시마브, BCG, 트레티노인, 이리노테칸 히드로클로라이드, 베타메토손, 겜시타빈 히드로클로라이드, 알트레타민 및 토포테카 및 이들의 임의의 유사체 또는 유도체를 포함한다.
이러한 종류의 바람직한 구성원은 이에 제한되지는 않지만, 팍실리탁셀, 시스플라틴, 카르보플라틴, 독소루비신, 카르미노마이신, 다우노루비신, 아미노프테린, 메토트렉세이트, 메토프테린, 미토마이신 C, 엑테이나스시딘 743 또는 포르피로마이신, 5-플루오로우라실, 6-메르캅토푸린, 겜시타빈, 시토신 아라비노시드, 포도필로톡신 또는 포도필로독신 유도체, 예를 들어 에토포시드, 에토포시드 포스페이트 또는 테니포시드, 멜팔란, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 류로시딘, 빈데신 및 류로신을 포함한다.
항암제 또는 다른 세포독성제의 예는, 독일 특허 제4138042.8호, WO 제97/19086호, WO 제98/22461호, WO 제98/25929호, WO 제98/38192호, WO 제99/01124호, WO 제99/02224호, WO 제99/02514호, WO 제99/03848호, WO 제99/07692호, WO 제99/27890호, WO 제99/28324호, WO 제99/43653호, WO 제99/54330호, WO 제99/54318호, WO 제99/54319호, WO 제99/65913호, WO 제99/67252호, WO 제99/67253호 및 WO 00/00485호에 기재된 에포틸론 유도체; WO 제99/24416 (미국 특허 제6,040,321호도 참조)에 기재된 시클린 의존 키나제 억제제; 및 WO 제97/30992호 및 WO 제98/54966에 기재된 프레닐-단백질 트랜스퍼라제 억제제; 및 미국 특허 제6,011,029호에 총칭적으로 및 구체적으로 기재된 약품 (상기 미국 특허의 화합물들은 특히 암의 치료에서 AR 조절제, ER 조절제와 같은 NHR 조절제 (이에 제한되지는 않지만 본 발명의 조절제를 포함함) 및 LHRH 조절제와 또는 외과적인 거세와 함께 사용될 수 있음)을 포함한다.
본 발명의 조합 제제는 또한 상기 언급된 상태와 관련된 요법의 투여에서 특히 유용하므로 선택되는 다른 치료제들과 제형화되거나 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 오심, 과민증 및 위 자극을 예방하기 위한 약품, 예를 들어 진토제 및 H1및 H2항히스타민제와 제형화될 수 있다.
본 발명의 SARM, 예를 들어 본원에 개시된 방법에 의해 SARM으로 확인된, 경구 투여시 활성인 화합물들은 시럽, 현탁액 또는 에멀젼과 같은 액형, 정제, 캡슐 및 로젠지로 제형화할 수 있다. 액체 조성물은 일반적으로 적합한 액체 담체(들), 예를 들어 에탄올, 글리세린, 소르비톨, 비수성 용매, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 오일 또는 물 중 화합물의 현탁제, 보존제, 계면활성제, 습윤제, 향미제 또는 착색제와의 현탁액 또는 용액을 포함한다. 다르게는, 액체 제형은 재구성가능한 분말로부터 제조될 수 있다. 예를 들어, 활성 화합물, 현탁제, 수크로스 및 감미료를 함유하는 분말은 물을 사용하여 재구성되어 현탁액으로 형성될 수 있고, 시럽은 활성 성분, 수크로스 및 감미료를 함유하는 분말로부터 제조될 수 있다. 정제 형태의 조성물은 예를 들어 고체 조성물의 제조에 보통 사용되는 임의의 적합한 제약상 담체(들)을 사용하여 제조될 수 있다. 상기 담체들의 예는 마그네슘 스테아레이트, 전분, 락토오스, 수크로스, 미소결정질 셀룰로오스 및 결합제, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 정제는 또한 칼라 필름 코팅 또는 담체(들)의 일부로서 포함된 염료를 사용하여 제공될 수 있다. 또한, 활성 화합물은 조절 방출 투여 형태의 친수성 또는 소수성 매트릭스를 포함하는 정제로 제형화될 수 있다. 캡슐 형태의 조성물은 예를 들어 통상적인 캡슐화 공정, 예를 들어 경질 젤라틴 캡슐로의 활성 화합물 및 부형제의 혼입에 의한 공정을 사용하여 제조될 수 있다. 캡슐 제제의 다른 예는, 예를 들어 경질 젤라틴 캡슐을 활성 화합물의 반고체 매트릭스 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜로 충전시키거나; 또는 폴리에틸렌 글리콜의 활성 화합물의 용액 또는 액체 파라핀 또는 분획화된 코코넛 오일과 같은 식용성 오일 중 현탁액으로 연질 젤라틴 캡슐을 충전시키는 것을 포함한다.
본 발명의 SARM, 예를 들어 본원에 개시된 방법에 의해 확인된, 비경구적으로 투여시 활성인 화합물들은 예를 들어 근육내 또는 정맥내 투여와 같은 임의의 적합한 비경구 투여 방식으로 제형화될 수 있다. 근육내 투여를 위한 전형적인 조성물은 낙화생유 또는 참기름과 같은 오일 중 활성 성분의 현탁액 또는 용액을 포함할 것이다. 정맥내 투여를 위한 전형적인 조성물은 예를 들어 활성 성분, 덱스트로스, 염화나트륨, 공용매, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 및 임의로는 킬레이트화제, 예를 들어 에틸렌디아민테트라아세트산 및 항산화제, 예를 들어 나트륨 메타비술파이트를 함유하는 멸균된 등장성 수용액을 포함할 것이다. 다르게는, 용액은 동결건조된 후, 투여 직전에 적합한 용매를 사용하여 재구성될 수 있다.
본 발명의 SARM, 예를 들어 본원에 개시된 방법에 의해 SARM으로 확인된, 직장 투여시 활성인 화합물은 좌약으로 제형화될 수 있다. 전형적인 좌약 제형은 일반적으로 결합제 및(또는) 윤활제 (예, 젤라틴 또는 코코아 버터 또는 다른 저융점 식물성 또는 합성 왁스 또는 지방)와 함께 활성 성분을 포함할 것이다.
본 발명의 SARM, 예를 들어 본원에 개시된 방법에 의해 SARM으로 확인된, 국소 투여시 활성인 화합물은 경피성 조성물로 제형화될 수 있다. 이러한 조성물은 예를 들어 이면의 활성 화합물 저장 용기, 조절막, 선형 및 접촉 접착제를 포함한다.
SARM의 전형적인 1일 투여량은 SARM의 활성, 개체의 요구, 치료하려는 상태 및 투여 방식에 따라 변화된다. 예시적인 적합한 투여량은 하루에 환자 체중당 1 kg 당 0.001 내지 10 mg의 일반적인 범위이다.
하기 비제한적인 실시예들은 본 발명을 더 설명하기 위해 제공된다.
실시예 1: 본 발명의 예시적인 SARM
본 발명의 예시적인 SARM을 하기 표 1에 나타내었다. 하기 화합물에 대한 절대적인 형태는 결정되지 않았다. 명명법에서의 간결함을 위해, 화합물 [3aR-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴은 본원에서 "R" 형태를 갖는 것으로 정하고, 화합물 [3aS-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴은 본원에서 "S" 형태를 갖는 것으로 정한다. [3aR-(3aα,4β,7β,7aα]-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴로부터 유도된 에난티오적으로 순수한 생성물은 본원에서 "R" 형태를 갖는 것으로 정하고, [3aS-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴로부터 유도된 에난티오적으로 순수한 생성물은 본원에서 "S" 형태를 갖는 것으로 정한다. 명명법에서의 간결함을 위해, 화합물 [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴은 본원에서 "S" 형태를 갖는 것으로 정하고 화합물 [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴은 본원에서 "R" 형태를 갖는 것으로 정한다. [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 본원에서 "S" 형태를 갖는 것으로 정하고 [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 본원에서 "R" 형태를 갖는 것으로 정한다. [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 본원에서 "R" 형태를 갖는 것으로 정하고 [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 본원에서 "S" 형태를 갖는 것으로 정한다.
표 1의 화합물 체류 시간을 결정하는데 사용한 크로마토그래피 기술은 하기와 같다: LCMS = YMC S5 ODS 컬럼, 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.1 ％ TFA를 함유하는 10-90％ MeOH/H20로 용출시킴; 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함; LC = YMC S5 ODS 컬럼, 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2％ 인산을 함유하는 10-90％ MeOH/H20로 용출시킴; 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함. 표 1에 나열된 화합물의 몰질량 (제공된 경우)은 m/z 식에 의해 MS(ES)에 의해 결정되었다.
이러한 예시적인 SARM의 시험관내 활성을 MDA MB-453 유방암 세포주 리포터 분석 (breast tumor line reporter assay), 시오노기 (Shionogi) 마우스 유방암 세포주 증식 분석 및 C2Cl2 근육 세포 리포터 분석으로 시험하였다. DHT에 의해 얻어진 최대 신호에 대한 IC50(길항제 방식, DHT가 존재하는 경우) 및 EC50(작용제방식, DHT가 없는 경우)을 결정하였다. 또한, 리포터 분석에 대해 DHT에 대한 세트 약물 농도에서 ％ 활성 (DHT가 없는 경우) 및 ％ 억제 (DHT가 존재하는 경우)를 결정하였다. 상기 표에 표시되지 않는 한, 화합물들은 라세미체 혼합물로 존재하였다. 이들의 활성 수준이 다소 상이하였지만, 상기 표의 모든 예시적인 화합물들은 본 발명에 따른 SARM 프로파일을 증명하였다.
구체적으로, 시험한 모든 예시적인 SARM은 MDA MB-453 유방암 세포주 리포터 분석에서 0.8 μM 미만의 IC50및 5 μM 초과의 EC50을 나타내었다. 시험한 SARM 중 다수에 대한 시오노기 마우스 유방암 세포주 증식 분석에서 유사한 결과들이 관찰되었다. 구체적으로, 몇몇 화합물들이 0.8 μM 미만의 IC50및 5 μM 초과의 EC50을 나타내었다. 반대로, C2C12 근육 세포 리포터 분석에서 시험한 화합물들 중 다수가 3 μM 이상의 IC50를 나타내었고, 특히 바람직한 시험한 화합물의 일부는 0.8 μM 미만의 EC50또는 25 ％ 초과의 작용제 활성을 나타내었다. 시험한 화합물인, 표 1에서 바람직한 예시적인 SARM은 화합물 3, 7, 11, 13, 19, 23, 24, 25, 30, 31 및 67을 포함한다.
또한, 표 1에서의 SARMS의 효과를 성숙한 래트 전립선 중량 분석 (MRPW, 실시예 9)에서의 완전한 AR 길항제와 비교하였다. 복부 전립선 (VP), 정낭 (SV), 항문 거근 (LA) 및 황체형성 호르몬 (LH) 혈청 수준에서 완전한 AR 길항제와 SARM 화합물 7, 9 및 36의 효과를 비교하기 위해, 성숙한 수컷 래트 (n = 5)에 14일 동안 연속하여 경구적으로 투여한 후, 장기 중량 및 혈청을 분석하였다. 완전한 AR 길항제에 비해 특히 화합물 2e (하기 실시예 2에서 제조함) 및 카소덱스 (Casodex, 공지된 AR 길항제)가 유의한 억제 효과를 나타내었고, SARM 화합물 9 및 36은 최대 투여량 (100 mg/kg 또는 "mpk")에서 VP, SV 및 LA 중량에 대해서만 크지 않은 억제 효과만을 나타내었다. 크지 않은 억제를 나타내는 화합물 7은 (화합물 9 및 26과는 달리) 100 mpk에서 VP, SV 및 LA 중량의 억제제로서 효능이 적은 역 투여량 반응도 또한 나타내었다. 혈청 LH 수준은 무손상 대조군과 매우 유사하였는데, 이는 시상하부-뇌하수체 축에서 SARM의 활성이 존재하더라고 매우 약하다는 것을 시사하고 있다.
본 발명의 SARM 화합물 7 및 9의 생체내 작용제 활성도 또한 약물을 투여하는 예방적인 스케쥴을 사용한 래트 항문 거근 모델 (실시예 8)에서 실험하였다. 이러한 동물 모델에서, 성적으로 성숙한 (생후 6-8 주) 수컷 스프라그-돌리 (Sprague-Dawley) 래트를 사용하였다. 래트를 거세하고, 치료군으로 나누고, 처음 3일 동안 시험 물질로 처리한 후 하기 수술을 하였다. 화합물 7 및 9의 잠재적인 SARM 효과를 테스토스테론 프로피오네이트 (0.3 mg/kg 내지 3 mg/kg)를 상기 SARM과 비교한 투여량-반응 연구를 통해 테스토스테론과 비교하였다. SARM 둘다를 90 mg/kg에서 경구 투여를 통해 시험하였다. 화합물 7은 비히클-처리된 거세된 대조군에 비해 항문 거근 습윤 중량을 27 ％ 증가시켰지만, 전립선 습윤중량에는 아무런 영향을 끼치지 않았다. 화합물 9는 항문 거근 및 전립선 둘 다에서 효과적이지 못하였다.
화합물 7 및 9 (이들은 라세미체임)를 또한 누드 마우스 (n = 8)의 CWR-22전립선 암종 모델에서 카소덱스와 비교하였다. 모든 3가지 화합물들을 14 일 동안 연속적으로 구강 투여하였다. 화합물 7 및 9 둘다는 75 mpk로 투여시 카소덱스와 유사한 억제율 (150 mg/kg)을 나타내었다. 이어서, 화합물 9의 2가지 거울상이성질체를 화합물 25 (표 1에 도시됨) 및 그의 거울상 화합물 25' (표 1에 도시되지 않음)로 분리하였다. 이들 화합물 둘 다를 미성숙 습윤 전립선 중량 분석에서 생체내 시험하였다. 화합물 25는 정상 조직에서는 거의 활성을 나타내지 않았지만, 완전한 길항제 에난티오머 화합물 25'는 뚜렷한 활성 및 투여 반응을 나타내었다. 화합물 25가 (MD-453에서) 더 강한 결합 친화력 및 길항제 활성을 나타낸다는 것을 예상치 못하였다. CWR22 인간 전립선 이종이식 모델에서 화합물 둘다의 시험은 반대되는 활성 프로파일을 나타내었다. 화합물 25는 19 mg/kg 투여량에서 카소덱스 (150 mg/kg)만큼 효능이 있었지만, 화합물 25'는 시험한 최대 투여량 (75 mpk)에서 유의한 활성을 나타내지 못하였다.
얻어진 생체내 데이타는 시험관내 데이타를 반영하였는데, 이는 화합물이 정상 근육 세포주에 대해서는 작용제이지만 2개의 AR 의존 종양 세포주에 대해 길항제임을 나타내고 있다.
실시예 2: SARM의 화학적 합성
본 발명 SARM의 예시적인 화학적 합성법은 하기 실시예 2a 내지 2d(i)를 포함한다. 당업자들은 하기를 읽은 후 본원에 기재된 방법 이외의 다른 방법도 또한 이러한 대표적인 SARM의 합성에 사용할 수 있다는 것을 이해할 것이다.
하기 약어들을 본원에 사용하였다:
DBU = 1,8-디아조비시클로[5.4.0]운데크-7-엔
4-DMAP = 4-디메틸아미노피리딘
ee = 에난티오머 과량
DMF = 디메틸포름아미드
EtOAc = 에틸 아세테이트
Me = 메틸
RT = 체류 시간
TFA = 트리플루오로아세트산
THF = 테트라히드로푸란
TLC = 박층 크로마토그래피
pTSA = 파라-톨루엔술폰산
t-Bu = tert-부틸
Ph = 페닐
Pd/C = 활성탄 상의 팔라듐
Ts = 토실
TBS = tert-부틸디메틸실란
TEA = 트리에틸아민
n-Bu = n-부틸
rt = 실온
LC = 액체 크로마토그래피
Et = 에틸
MS = 분자체
MS (ES) = 전자-분무 질량 분광계
DEAD = 디에틸 아조디카르복실레이트
WSDCC = 수용성 디카르보닐디이미드 1-(3-디메틸아미노프로필-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드
TBAF = 테트라부틸암모늄 플로라이드
DBAD = 디-tert-부틸아조디카르복실레이트
ADDP = 1,1-[아조디카르보닐]디피페리딘
실시예 2a: [5S-(5α,8α,8aα)]-2-[4-시아노-3-(트리플루오로메틸)페닐]헥사히드로-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (2a)의 제조
활성화된 4 Å MS (0.300 g)를 사용하여 톨루엔 (4 mL) 중 4-이소시아네이토-2-(트리플루오로메틸)-벤조니트릴 (1.0 mmol)의 용액에 톨루엔 (6 mL) 중 (1S-엑소)-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2,6-디카르복실산, 2-(1,1-디메틸에틸) 6-메틸 에스테르 (2a(1)) (0.220 g, 0.856 mmol)를 첨가하였다. 25 ℃에서 10 시간 후, DBU (0.166 mL, 1.11 mmol)을 첨가하고 반응물을 81 ℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 이어서, 반응물을 25 ℃로 냉각하고 1 N HCl (50 mL)에 부었다. 용액을 염화메틸렌 (3 x 30 mL)으로 추출하고 합한 유기물을 무수 황산나트륨 상에 건조하였다. 얻어진 조 물질을 아세톤/클로로포름 (0-2-4-8 ％ 아세톤)으로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여2a(0.155 g, 42 ％)를 백색 발포체로 얻었다. MS (ES): m/z 437.09 [M+H]+. HPLC RT = 3.280 분 (100 ％) (YMC S5 ODS 컬럼, 4.6 X 50 mm; 10-90 ％ MeOH/H2O 구배, + 0.1％ TFA; 4 mL/분, 220 nM 검출). HPLC RT = 3.133 분 (100 ％) (YMC S5 ODS 컬럼, 4.6 X 50 mm; 10-90％ MeOH/H2O 구배, + 0.1 ％ TFA; 4 mL/분, 220 nM 검출).
출발 화합물2a(1)를 하기 공정에 따라 제조하였다:
N-(tert-부톡시카르보닐)-L-4-히드록시프롤린 (10.0 g, 43.3 mmol)을 THF에 용해하고 0 ℃로 냉각하였다. 보란/THF (1.0 M 용액, 86.6 mL)를 15 분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 이어서 반응물을 25 ℃로 가온시키고 16 시간 동안 환류로 가열하였다. 반응 플라스크에서 가열원을 제거하고 무수 메탄올 (35 mL)을 천천히 첨가하였다. 25 ℃로 냉각시킨 후, 용매를 진공하에서 제거하고 얻어진 조 디올 중간체를 직접 사용하였다. 조 디올 (1.81 g, 8.34 mmol)을 염화메틸렌 (50 mL)에 용해하고 2,6-루티딘 (1.46 mL, 12.51 mmol)을 첨가하고 혼합물을 78 ℃로 냉각하였다. 이어서, tert-부틸 디메틸실릴트리플루오로-메탄술포네이트 (1.92 mL, 8.34 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 후, 혼합물을 1 N HCl (100 mL)에 붓고 염화메틸렌 (2 x 100 mL)으로 추출하고 유기물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 얻어진조 알코올을 클로로포름 중 아세톤 (0-5-10 ％ 아세톤)으로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 1.011 g (2 단계에서 37 ％)의 (2S-트랜스)-4-히드록시-2-[[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]메틸]-1-피롤리딘카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (2a(2))를 투명한 오일로 얻었다:
2a(2)(3.41 g, 10.3 mmol)를 무수 피리딘 (30.0 mL)에 용해하고 0 ℃로 냉각하였다. 그 후, p-톨루엔술포닐클로라이드 (5.89 g, 30.9 mmol)를 10 분 간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 플라스크를 4 ℃의 냉장기에 48 시간 동안 두었다. 얻어진 용액을 1 N HC1 (300 mL)에 붓고, 염화메틸렌 (3 x 200 mL)으로 추출하고 유기물을 무수 황산나트륨상에서 건조하였다. 조 토실레이트 중간체를 THF (50 mL)에 용해하고, 여기에 H2O (0.5 mL)에 이어 pTSA-H2O (1.03 mmol)를 첨가하였다. 일단 TLC에 의해 반응이 완결되었음이 확인되면, 혼합물을 포화된 수성 NaHCO3(150 mL)에 붓고 염화메틸렌 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합해진 유기물을 황산나트륨상에 건조시켰다. 조 알코올을 아세톤/클로로포름 (0-5-10％ 아세톤)으로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 2.71 g (2 단계에 대해 71 ％)의 (2S-트랜스)-2-히드록시메틸-4-[[(4-메틸페닐)술포닐]옥시]-1-피롤리딘카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (2a(3))을 투명한 오일로 얻었다:
CH2Cl2(40 mL) 중 염화 옥살릴 (CH2Cl2중 2.0 M 용액, 2.82 mL)의 용액에 -78 ℃에서 무수 디메틸술폭시드 (0.462 mL, 6.51 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 15 분 동안 정치시킨 후, CH2Cl2(10 mL) 중2a(3)(1.61 g, 4.34 mmol)의 용액을 천천히 첨가하였다. 30 분이 더 지난 후, 트리에틸아민 (1.81 mL, 13.02 mmol)을 첨가하고 반응물을 천천히 0 ℃로 가온하였다. 이어서, 반응물을 H2O (25 mL)로 켄칭하고 CH2Cl2(100 mL)로 희석하였다. 혼합물을 1 N HCl (1 x 100 mL), 포화 수성 NaHCO3(50 mL) 및 물 (2 x 50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨상에 건조시키고 휘발성 유기물을 진공하에서 제거하였다. 조 알데히드 중간체 (1.60 g, 4.34 mmol)를 THF (25 mL)에 용해하고 디에틸 시아노포스포네이트 (90 ％, 0.95 mL, 5.64 mmol)에 이어 벤질 아민 (1.23 mL, 11.3 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 후, TLC에 의해 반응이 완결되었음을 확인하고, 휘발성 유기물을 진공하에서 제거하였다. 조 반응 혼합물을 아세톤/클로로포름 (0-23％ 아세톤)으로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 1.48 g (70％)의 (2S-트랜스)-2-[시아노[(페닐메틸)아미노]메틸]-4-[[(4-메틸페닐)-술포닐]옥시]-1-피롤리딘카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (2a(4))를 백색 고체로 얻었다. NMR 분광법에 의해2a(4)(하기 구조)를 부분입체이성질체의 약 1:1 혼합물로 결정하였다.
2a(4)(1.48 g, 3.05 mmol)을 디클로로에탄 (25 mL)에 용해하고 디이소프로필 에틸아민 (1.45 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 18 시간 동안 100 ℃로 가열하였다. 휘발물들을 진공하에서 제거하고 얻어진 조 물질을 아세톤/클로로포름 (0-2-3％ 아세톤)로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 (1S-엔도)-6-시아노-5-(페닐메틸)-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (2a(5A)) (0.591 g, 62％) 및 (1S-엑소)-6-시아노-5-(페닐메틸)-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (2a(5B)) (0.370 g, 38％)의 혼합물을 투명한 오일로 얻었다. 이들 화합물에 대한 구조적 할당을 NOE, COESY 및 DEPT NMR 실험 후에 결정하였다:
2a(5A)(0.400 g, 1.28 mmol)를 NaOMe (0.5 M, 12.8 mL)에 용해하고 60 ℃로 5 시간 동안 가열하였다. 반응물을 0 ℃로 냉각하고 3 N HCl (4.0 mL)을 천천히 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 반응물을 포화 수성 NaHCO3(50 mL)에 부었다.혼합물을 CH2Cl2(3 x 50 mL)로 추출하고 합한 유기물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 조 에스테르를 클로로포름/아세톤 (0-2-4％ 아세톤)으로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 0.320 g (0.92 mmol, 72％)의 (1S-엔도)-5-(페닐메틸)-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2,6-디카르복실산, 2-(1,1-디메틸에틸)-6-메틸 에스테르 (2a(6A))을 투명한 오일로 얻었다:
2a(5B)(0.400 g, 1.28 mmol)을 NaOMe (0.5 M, 12.8 mL)에 용해하고, 60 ℃로 5 시간 동안 가열하였다. 반응물을 0 ℃로 냉각하고 3 N HCl (4.0 mL)를 천천히 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 후, 반응물을 포화 수성 NaHC03(50 mL)에 부었다. 혼합물을 CH2Cl2(3 x 50 mL)로 추출하고 합한 유기물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 조 에스테르를 클로로포름/아세톤 (0-2-4％ 아세톤)로 용출시켜 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 0.290g (0.85 mmol, 66 ％)의 (1S-엑소)-5-페닐메틸)-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2,6-디카르복실산, 2-(1,1-디메틸에틸) 6-메틸 에스테르 (2a(6B))를 투명한 오일로 얻었다:
2a(6A)(0.280 g, 0.81 mmol)을 순수한 EtOH (10.0 mL)에 용해하고 Pd/C (10％ Pd, 0.080 g)를 첨가하였다. H2분위기를 풍선을 통해 도입하고 반응물을 25 ℃에서 20 시간 동안 교반하였다. Pd를 셀라이트를 통한 여과에 의해 제거하고 EtOAc로 헹구었다. 휘발물들을 진공하에서 제거하여2a(1)(0.205 g, 99％)를 점성의 황색 오일로 얻었다. 이 화합물을 정제하지 않고 바로 사용하였다. MS (ES) = m/z 257.18 [M+H]+. HPLC RT = 1.223 분 (95 ％) (YMC S5 ODS 컬럼, 4.6 X 50 mm; 10-90％ MeOH/H20 구배, + 0.1％ TFA; 4 mL/min, 220 nM 검출):
실시예 2b : [5S-(5α,8α,8aα)]-4-(헥사히드로-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조 [1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2b)의 제조
2a(0.115 g, 0.264 mmol)을 무수 염화메틸렌 (3 mL)에 용해하고 무수 TFA (1.0 mL)를 25 ℃에서 첨가하였다. 1 시간 후, 반응물을 진공하에서 농축하고 얻어진 잔류물을 염화메틸렌에 용해하고 포화된 수성 NaHCO3에 부었다. 이 용액을 이어서 염화메틸렌 (3 x 10 mL)으로 추출하고 합한 유기물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 이로써 0.089 g (97％)의 유리2b를 황색 고체로 얻었다. MS (ES):m/z 359.09 [M+Na]+. HPLC RT = 1.477 분 (100 ％) (YMC S5 ODS 컬럼, 4.6 X 50 mm; 10-90％ MeOH/H20 구배, + 0.1％ TFA; 4 mL/min, 220 nM 검출).
실시예 2c: [5S-(5α,8α,8aα)]-7-(4-플루오로벤조일)테트라히드로-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-1,3(2H,5H)-디온 (2c)의 제조
[5S-(5α,8α,8aα)]-테트라히드로-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-1,3(2H,5H)-디온 (2c(1)) (0.077 g, 0.228 mmol)을 염화메틸렌 (2.0 mL) 및 TEA (0.127 mL, 0.912 mmol)에 용해하고 4-DMAP (0.001 g)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃로 냉각시키고 4-플루오로벤조일클로라이드 (0.040 mL, 0.342 mmol)를 첨가하였다. 이어서 반응물을 25 ℃로 천천히 가온시켰다. 3 시간 후, 반응물을 염화메틸렌 (50 mL)로 희석한 후 1N HCl 및 포화 수성 NaHCO3으로 연속적으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에 건조하였다. 조 물질을 클로로포름 중 5％ 아세톤으로 용출시키는 실리카 상의 정제 TLC에 의해 정제하여 0.022 g의2c를 황색 고체로 얻었다. HPLC: 2.960 분 (체류 시간)에서 100 ％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2％ 인산을 함유하는 0-90％ 수성 메탄올, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 461.07 [M+H]+. 출발 물질을 하기 기재한 바와 같이 제조하였다.
[5S-(5α,8α,8aα)]-테트라히드로-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-1,3(2H,5H)-디온 (2c(1))
[5S-(5α,8α,8aα)]헥사히드로-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (2c(2)) (0.160 g, 0.37 mmol)을 염화메틸렌 (5.0 mL)에 용해하고 TFA (1.5 mL)를 25 ℃에서 첨가하였다. 1.5 시간 후, 반응물을 진공하에서 농축하고 염화메틸렌에 재용해하였다. 이 용액을 포화 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 수성층을 염화메틸렌 (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물을 이어서 무수 황산 나트륨상에 건조시켰다. 진공하에서 농축하여 0.115 g의2c(1)을 황색 고체로 얻었다. HPLC: 1.747 분 (지연 시간)에서 93 ％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90 ％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ES): m/z 369.07 [M+MeOH]+.
[5S-(5α,8α,8aα)]헥사히드로-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-카르복실산, 1,1-디메틸에틸 에스테르(2c(2))
2a(1)(0.220 g, 0.856 mmol)을 무수 톨루엔 (10.0 mL) 중 막 활성화된 4 Å 분자 체 (0.300 g)의 현탁액에 첨가하였다. 이 혼합물에 4-니트로나프탈-1-이소시아네이트 (0.214 g, 1.0 mmol)을 첨가하였다. 25 ℃에서 14 시간 동안 교반한 후, DBU (0.166 mL, 1.11 mmol)을 첨가하고 반응물을 80 ℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 2 시간 후, 반응물을 25 ℃로 냉각시킨 후 1 N HC1 (50 mL)에 부었다. 이 용액을 염화메틸렌 (3 x 30 mL)으로 추출하고 합한 유기물을 무수 황산나트륨 상에서 건조하였다. 조 물질을 클로로포름 중 0-2-6％ 아세톤으로 용출시키는 실리카 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 0.211 g의2c(2)를 황색 발포체로 얻었다. HPLC: 3.130 분 (체류 시간)에서 95 ％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ES): m/z 439.19 [M+H]+.
실시예 2d: [5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)테트라히드로-7-(5-이소옥사졸릴카르보닐)-5,8-메타노이미다조[1,5a]피라진-1,3(2H,5H)-디온(2dLibSyn1), [5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)헥사히드로-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)카르복실산, 4-플루오로페닐 에스테르(2dLibSyn2), [5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)테트라히드로-7-[(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)술포닐]-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-1,3(2H,5H)-디온 (2dLibSyn3) 및 [5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)-N-(4-플루오로페닐)헥사히드로-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-카르복사미드 (2dLibSyn4)의 제조
용액 상 라이브러리 합성법
하기 공정은 용액 상 라이브러리 형식의 본 발명의 SARM의 합성에 대한 일반적인 접근법이다. 이러한 조합된 접근법을 통해 제조된 각 화합물의 더욱 상세한 설명은 하기와 같다.2c(1)(0.05 mmol, 상기 기재된 바와 같이 제조됨)과 유사한 일련의 유리 아민 출발 물질을 조대한 프릿 (frit)이 있는 폴리스티렌 튜브 중에서 디클로로메탄 (1.5 mL)에 용해하였다. 그 후, N,N-(디이소프로필)아미노메틸 폴리스티렌 (3.49 mmol/g, 60 mg)을 각 용기에 첨가하고, 0.5 mL 디클로로에탄 중 바람직한 산 클로라이드, 이소시아네이트 클로로포르메이트 또는 염화술포닐 (0.10 mmol)을 자동화된 합성기에 의해 첨가하였다. 반응 용기를 25 ℃에서 24 시간 동안 진탕시킨 후 트리스-(2-아미노에틸)아민 폴리스티렌 HL (200-400 메시, 3.3 mmol/g, 75 mg)을 각 반응 용기에 첨가하고, 용기를 다시 25 ℃에서 18 시간 동안 진탕시켰다. 각 튜브로부터 액체를 미리 칭량한 2.5 ml STR 튜브로 배수시키고 수지를 디클로로메탄 (3 x 0.25 mL)으로 헹구었다. 이어서, 미리 칭량한 튜브를 농축시키고 분석 HPLC 및 LC-MS에 의해 분석하였다. HPLC: (페노메넥스 프라임(Phenomenex Prime) 511 C-18 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐서 0.1％ TFA를 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함).
[5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)테트라히드로-7-(5-이소옥사졸릴카르보닐)-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-1,3(2H,5H)-디온 (2dLibSyn1)
[5S-(5α,8α,8aα)]-4-(헥사히드로-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-1-나프탈렌카르보니트릴 (2d(1)) (0.030 g, 0.094 mmol)을 조대한 프릿이 있는 폴리스티렌 튜브 중에서 디클로로메탄 (2.0 mL)에 용해하였다. N,N-(디이소프로필)아미노메틸 폴리스티렌 (3.49 mmol/g, 65 mg)을 각 반응 용기에 첨가한 후 이소옥사졸 산 클로라이드 (0.025 g, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 튜브를 25 ℃에서 24 시간 동안 진탕시킨 후, 트리스-(2-아미노에틸)아민 폴리스티렌 HL (200-400 메시, 3.3 mmol/g, 75 mg)을 반응 용기에 첨가하고, 이를 다시 25 ℃에서 18 시간 동안 진탕하였다. 액체를 미리 칭량된 2.5 ml STR 튜브로 배수시키고 수지를 디클로로메탄 (3 x 0.25 mL)으로 헹구었다. 진공하에서 농축하여 조2dLibSyn1(0.058 g)을 황색 고체로 얻었다. 정제가 필요 없었다. HPLC: 2.237 분 (체류 시간)에서 100 ％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ES): m/z 414.11 [M+H]+.
[5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)헥사히드로-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-카르복실산, 4-플루오로페닐 에스테르 (2dLibSyn2)
2d(1)(0.030 g, 0.094 mmol)를 조대한 프릿이 있는 폴리스트렌 튜브 중에서 디클로로메탄 (2.0 mL)에 용해하였다. 이어서, N,N-(디이소프로필)아미노메틸 폴리스티렌 (3.49 mmol/g, 65 mg)을 각 반응 용기에 첨가한 후 4-플루오로페닐클로로포르메이트 (0.033 g, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 튜브를 25 ℃에서 24 시간 동안 진탕시킨 후, 트리스-(2-아미노에틸)아민 폴리스티렌 HL (200-400 메시, 3.3 mmol/g, 75 mg)을 반응 용기에 첨가하고 이를 다시 18 시간 동안 25 ℃에서 진탕하였다. 액체를 미리 칭량된 2.5 ml STR 튜브에 배수시키고 수지를 디클로로메탄 (3 x 0.25 mL)으로 헹구었다. 진공하에서 농축하여 조2dLibSyn2(0.053 g)를 황색 고체로 얻었다. 정제할 필요가 없었다. HPLC: 2.987 분 (체류 시간)에서 93 ％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ES): m/z 457.07 [M+H]+.
[5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)테트라히드로-7-[(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)술포닐]-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-1,3(2H,5H)-디온 (2dLibSyn3)
2d(1)(0.030 g, 0.094 mmol)을 조대 프릿이 있는 폴리스트렌 튜브 중에서 디클로로메탄 (2.0 mL)에 용해하였다. N,N-(디이소프로필)아미노메틸 폴리스티렌 (3.49 mmol/g, 65 mg)을 이어서 각 반응 용기에 첨가한 후 이미다졸술포닐클로라이드 (0.034 g, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 튜브를 25 ℃에서 24 시간 동안 진탕하고 트리스-(2-아미노에틸)아민 폴리스티렌 HL (200-400 메시, 3.3 mmol/g, 75 mg)을 반응 용기에 첨가하고 25 ℃에서 18 시간 동안 진탕하였다. 액체를 미리 칭량한 2.5 ml STR 튜브로 배수시키고 수지를 디클로로메탄 (3 x 0.25 mL)으로 헹구었다. 진공하에서 농축하여 조2dLibSyn3(0.043 g)을 황색 고체로 얻었다. 정제할 필요가 없었다. HPLC: 1.603 분 (체류 시간)에서 70 ％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ES): m/z 463.07 [M+H]+.
[5S-(5α,8α,8aα)]-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)-N-(4-플루오로페닐)헥사히드로-1,3-디옥소-5,8-메타노이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-카르복사미드(2dLibSyn4)
2d(1)(0.030 g, 0.094 mmol)을 조대 프릿이 있는 폴리스트렌 튜브 중에서 디클로로메탄 (2.0 mL)에 용해하였다. 이어서, N,N-(디이소프로필)아미노메틸 폴리스티렌 (3.49 mmol/g, 65 mg)을 각 반응 용기에 첨가한 후, 4-플루오로페닐이소시아네이트 (0.026 g, 0.19 mmol)에 첨가하였다. 튜브를 25 ℃에서 24 시간 동안 진탕한 후, 트리스-(2-아미노에틸)아민 폴리스티렌 HL (200-400 메시, 3.3 mmol/g, 75 mg)을 반응 용기에 첨가하고, 이를 다시 25 ℃에서 18 시간 동안 진탕하였다. 액체를 미리 칭량한 2.5 ml STR 튜브로 배수시키고 수지를 디클로로메탄 (3 x 0.25 mL)으로 헹구었다. 진공하에서 농축하여 조2dLibSyn4(0.058 g)를 황색 고체로 얻었다. 정제할 필요가 없었다. HPLC: 2.890 분 (체류 시간)에서 100 ％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ES): m/z 456.4 [M+H]+.
실시예 2e: (3aα,4β,7β,7aα)-4-(옥타히드로-4,7-디메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2e)의 제조
(3aα,4β,7β,7aα)-헥사히드로-4,7-에폭시이소벤조푸란-1,3-디온 (2e(1))
새롭게 증류된 디메틸 푸란 (1.60 mL, 15.3 mmol)을 CH2Cl2(2.0 mL)에 용해하고 말레산 무수물 (1.0 g, 10.2 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 25 ℃에서 16 시간 동안 교반한 후 진공하에서 농축하여 황색 고체를 얻었다. 고체를 에틸 아세테이트 (30 mL)에 용해하고 Pd/C (10％ Pd, 0.200 g)를 첨가하였다. 이어서, 수소를 풍선에 의해 도입하고 반응물을 24 시간 동안 교반하였다. 셀라이트를 통한 여과에 의해 Pd를 제거하고 EtOAc로 헹군 후 진공하에서 농축하여2e(1)(1.69 g)을 백색 고체로 얻었다. 2-차원 NOE 실험으로2e(1)의 구조적 할당인 것을 확인하였다.
(3aα,4β,7β,7aα)-4-(옥타히드로-4,7-디메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일)-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2e)
톨루엔 (5 mL) 중2e(1)(640 mg, 3.44 mmol, 1.07 eq) 및 TsOH (10 mg, 촉매량)의 용액을 밀봉된 튜브 중에서 2 일 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후 감압하에서 농축하였다. 50 ％ EtOAc/헥산으로 용출시킨 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 400 mg (1.10 mmol, 34 ％)의2e를 백색 고체로 얻었다. HPLC: 3.04 분 (체류 시간)에서 99％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 포함하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ESI): m/z 382.2 [M+NH4]+.
실시예 2f: (3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-(4-플루오로페녹시)에틸]옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2f)의 제조
불활성 분위기하 실온에서 DEAD (0.06 mL, 0.380 mmol, 1.5 eq)를 THF (1.3 mL) 중 트리페닐포스핀 (100 mg, 0.380 mmol, 1.5 eq)의 용액에 첨가하였다. 10 분 동안 교반 후, 4-플루오로페놀 (43 mg, 0.380 mmol, 1.5 eq)을 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 5 분 동안 교반하고, (3aα,4β,7β,7aα)-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2f(1)) (100 mg, 0.254 mmol, 1 eq)을 첨가하고 교반을 3.5 시간 동안 계속하였다. 50％ EtOAc/헥산으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 이어 정제 크로마토그래피 [HPLC: 11.93 분 (체류 시간) (YMC S5 ODS컬럼 20 x 100 mm, 10 분에 걸쳐 0.1 ％ TFA를 함유하는 0-100％ 수성 메탄올로 용출시킴, 20 mL/min, 220 nm에서 모니터링함)]하여 72 mg (58％)의2f를 고체로 얻었다. HPLC: 3.74 분 (체류 시간)에서 99％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ESI): m/z 487.1 [M-H]-.
출발 화합물2f(1)을 하기 공정에 의해 제조하였다:
n-BuLi (83 mL, 133.0 mmol, 1.2 eq, 헥산 중 1.6 M)의 용액을 THF (85 mL)의 2-메틸푸란 (10 mL, 110.8 mmol, 1 eq)의 교반 용액에 불활성 분위기하 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 4 시간 동안 실온에서 교반한 후 0 ℃로 냉각하였다. 에틸렌 옥시드 (8.3 mL, 166.3 mmol, 1.5 eq)을 적가하고 반응 혼합물을 실온으로 밤새 가온하였다. 포화 수성 NH4Cl로 켄칭한 후, 얻어진 층들을 분리하고 수성층을 Et2O (2 X)로 추출하였다. 합한 유기층들을 Na2SO4상에 건조시키고 감압하에서 농축하였다. 대기압 (170-185 ℃)에서 증류하여 10.13 g (80.3 mmol, 72％)의 5-메틸-2-푸란에탄올 (2f(2))을 연황색 오일로 얻었다:
CH2Cl2(10 mL) 중2f(2)(252 mg, 2 mmol, 1 eq) 및 4-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-피롤-1-일)-3-트리플루오로메틸벤조니트릴 (798 mg, 3 mmol, 1.5 eq)의 용액을 실온에서 2 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에서 농축하였다. 65％ EtOAc/헥산으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 217 mg의 순수한 (3aα,4β,7β,7aα)-4-[1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2f(3A)), 73 mg의 순수한 (3aα,4β,7α,7aα)-4-[1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2f(3B)) 및2f(3A)와2f(3B)의 혼합물 310 mg을 얻었다. 이들 모든 3종의 분획물을 백색 고체로 단리하였고, 총 단리 수율은 600 mg (1.53 mmol, 76.5 ％)이었다.2f(3A): HPLC 2.56 분 (체류 시간)에서 90％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함).2f(3B): HPLC 2.56 분 (체류 시간)에서 90％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함).
EtOH (12 mL) 중2f(3A)(0.2 g, 0.51 mmol, 1 eq) 및 10％ Pd/C (43 mg, 촉매량)의 용액을 수소 분위기 하 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 감압하에서 농축하여 0.2 g (0.51 mmol, 100％)의2f(1)을 백색 고체로 얻었다. HPLC: 2.59 분 (체류 시간)에서 95％ (YMC S5 ODS 컬럼4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.1 ％ TFA를 함유하는 10-90％로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ESI): m/z 394.97 [M+H]+:
실시예 2g: (3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-(2-브로모에틸)옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2g)의 제조
CH2Cl2(2 ml) 중2f(1)(495 mg, 1.26 mmol, 1 eq) 및 피리딘 (0.1 ml, 1.26 mmol, 1 eq)의 용액을 CH2Cl2(2 ml) 중 Ph3PBr2(636 mg, 1.51 mmol, 1.2 eq)의 용액에 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 용매를 감압하에서 제거하였다. 얻어진 잔류물을 10 ml의 EtOAc-헥산 (6:4)으로 2회 세척하고, 합한 세척물을 60％ EtOAc/헥산으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 390 mg (0.85 mmol, 67.7 ％)의2g를 백색 고체로 얻었다. HPLC: 3.51 분 (체류 시간)에서 99％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ESI): m/z 456.7 [M-H]-.
실시예 2h: (3aα,4β,7β,7aα)-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2h)의 제조
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2h(1)) (0.031 g, 0.061 mmol)를 THF (0.5 mL)에 용해하고 폴리프로필렌 컨테이너로 옮긴 후 0 ℃로 냉각하였다. 이어서, HFㆍ피리딘 (약 47％ HF, 0.1 mL)을 첨가하였다. 15 분 후, LC에 의해 반응의 완결을 확인하고 냉각된 포화 수성 NaHCO3에 부었다. 혼합물을 CH2Cl2(3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 1 N HCl (1 x 20 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다.2h를 황색 오일로 단리하였다. 정제할 필요가 없었다.
HPLC: 2.59 분 (체류 시간)에서 95％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.1 ％ TFA를 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ESI): m/z 394.97 [M+H]+.
출발 물질2h(1)을 하기 공정에 따라 제조하였다:
DMF (50 mL) 중 5-메틸-2-푸란에탄올2f(2)(2.00 g, 15.9 mmol)의 용액에 이미다졸 (1.62 g, 23.9 mmol)에 이어 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (2.63 g,17.5 mmol)를 첨가하였다. 25 ℃에서 2 시간 후, 반응물을 디에틸 에테르 (300 mL)에 붓고 물 (1 x 100 mL), 1N HCl (1 x 100 mL), 물 (1 x 100 mL), 염수 (1 x 50 mL)로 세척하고 무수 MgSO4에 건조시켰다. LCMS 및 NMR에 의해 조 2-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-5-메틸푸란 (2h(2))을 분석하고, 다음 단계에 직접 사용하기에 충분히 순수하다는 것을 확인하였다. HPLC: 4.347 분 (체류 시간)에서 100％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.1 ％ TFA를 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함):
2h(2)(4.0 g, 18.9 mmol) 및 말레산 무수물 (1.42 g, 14.51 mmol)을 디클로로에탄 (10 mL)에 용해하고 25 ℃에서 60 시간 동안 교반하였다. 이어서 휘발물들을 진공하에서 제거하고 얻어진 오렌지색 오일을 순수한 에탄올 (50 mL)에 용해하고 Pd/C (10 ％ Pd, 1.00 g)을 첨가하였다. 이어서 수소를 풍선을 통해 도입하였다. 3 시간 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고 EtOAc로 헹구고 진공하에서 농축하였다. 조 무수물을 아세톤/클로로포름 (0-2-4％ 아세톤)으로 용출시키면서 SiO2상에서 신속히 플래시 크로마토그래피하여 3.00 g의 2-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-5-메틸푸란으로부터 출발하여 1.30 g의 (3aα,4β,7β,7aα)-4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]헥사히드로-7-메틸-4,7-에폭시-1H-이소벤조푸란-1,3(2H)-디온 (2h(3))을 투명한 오일로 얻었다. 양성자 NMR 분광법에 의한 특성화는 엑소 이성질체만을 나타내었다. 1H NMR, 400 MHz, CDCl3, 3.83 (2H, t, J= 6.0 Hz), 3.22 (1H, d, J= 8.2 Hz), 3.06 (1H, d, J= 8.2 Hz), 1.70-2.25 (6H, m), 1.55 (3H, s), 0.82 (9H, s), 0.00 (6H, s):
2h(3)(0.250 g, 0.8 mmol) 및 4-아미노-2-트리플루오로메틸벤조니트릴 (0.124 g, 0.668 mmol)을 밀봉된 튜브 중에서 무수 톨루엔 (2.0 mL)에 현탁하였다. 이어서 MgSO4(0.200 g) 및 트리에틸아민 (0.5 mL)을 첨가하고 튜브를 밀봉하여 125 ℃의 오일욕 중에 넣었다. 40 시간 후, 반응물을 25 ℃로 냉각시키고 여과하고 진공하에서 농축하였다. 조 물질을 CH2Cl2로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 0.111 g의2h(1)을 황색 고체로 얻었다. HPLC: 4.203 분 (체류 시간)에서 92％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.1 ％ TFA를 함유하는 10-90％ 수성 에탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함). MS (ESI): m/z 531.1 [M+Na]+:
실시예 2i: 먼저 용출되는 거울상 이성질체인 [3aR-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-4-메틸-1,3-디옥소-7-[2-[4-(트리플루오로메틸)페녹시]에틸]-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2iA), 나중에 용출되는 거울상 이성질체인 [3aS-(3aa,4β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-4-메틸-1,3-디옥소 -7-[2-[4-(트리플루오로메틸)페녹시]에틸]-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2iB)의 제조
2f에 대해 기재된 바와 같이 합성된 라세미체 화합물을 키랄 정상 액체 크로마토그래피에 의해 각 거울상이성질체로 분리하였다. 키랄팩 (Chiralpack) AD 컬럼 (50 x 500 mm)을 사용하였다 (85％ 헥산/7.5％ 메탄올/7.5％ 에탄올로 용출, @ 50mL/min). 220 nm에서 UV 검출을 사용하였다. 분석 키랄 정상 크로마토그래피에 의해, 먼저 용출되는 이성질체2iA(체류 시간 = 55.86 분)은 95.8％ ee ([α]D 25= -53.02 °, CH2Cl2중 C = 3.134 mg/cc)을 갖는 것으로 밝혀졌고, 나중에 용출되는 이성질체2iB(체류 시간 = 62.86 분)는 86％ ee ([α]D 25= +48.74 °, CH2Cl2중 C = 2.242 mg/cc)이었다.
실시예 2j: (αR)-α-메톡시벤젠아세트산, 2-[(3aα,4β,7β,7aα)-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-4H-이소인돌-4-일]에틸 에스테르 (2j) 의 제조
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2j(1))
AcOH (230 mL) 중 4-아미노-1-나프탈렌카르보니트릴 (19.2 g, 114 mmol) 및 말레산 무수물 (14.0 g, 113 mmol)의 용액을 115 ℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압하에서 농축시키고 CH2Cl2(2.5 L)로 희석하였다. 유기층을 H2O (3 L)로 3회, 포화 수성 Na2CO3(1 L)로 1회 및 염수 (1 L)로 1회 세척하고, MgSO4상에 건조시키고, 감압하에서 약 200 mL로 농축하였다. 양이온 교환 수지 (60 g, 유나이티드 케미칼 테크놀로지 (United Chemical Technologies)로부터의 CUBX13M6)상에서 CH2Cl2로 용출하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 25.0 g (88％)의 4-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-1-일)-1-나프탈렌카르보니트릴을 황색 고체로 얻었다. HPLC 2.48 분에서 96％ (페노메넥스-프라임 S5-C18 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 249.25 [M+H]+.
4-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-1-일)-1-나프탈렌카르보니트릴 (1.00 g, 4.03 mmol)을 밀봉된 튜브 중에서 벤젠 (6.0 mL)에 현탁하고2h(2)(1.11 g, 5.24 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 16 시간 동안 가열한 후 25 ℃로 냉각하였다. 벤젠을 진공하에서 제거하여 황색 고체를 얻었다. 고체를 에틸 아세테이트 (40 mL)에 용해하고 Pd/C (10％ Pd, 0.300 g)을 첨가하였다. 수소를 풍선을 통해 도입하였다. 4 시간 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고 에틸 아세테이트로 헹궜다. 진공하에서 농축하여 연황색 고체를 얻었다. 이를 아세톤/클로로포름 (0％-1.5％-3％ 아세톤)으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여2j(1)(1.53 g)을 황색 발포체로 얻었다. HPLC: 4.173 분 (체류 시간)에서 86％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함).
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시 2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2j(2))
2j(1)(1.37 g, 2.97 mmol)을 THF (8.0 mL)에 용해하고 폴리프로필렌 병으로옮기고 0 ℃로 냉각하였다. 이어서 HFㆍ피리딘 (2.0 mL)을 첨가하였다. 20 분 후, 반응물을 조심스럽게 냉각된 포화 수성 중탄산나트륨에 붓고, 염화메틸렌 (3 x 30 mL)으로 추출하였다. 유기물을 1 N HCl로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 진공하에서 농축하여2j(2)(0.99 g)를 황색 발포체로 얻었고, 이를 더 정제하지 않았다. HPLC: 2.443 및 2.597 (회전장애 이성질체) 분 (체류 시간)에서 96％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 399.02 [M+Na]+.
(αR)-α-메톡시벤젠아세트산, 2-[(3aα,4β,7β,7aα)-2-(4-시아노-1-나프탈레닐)옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-4H-이소인돌-4-일]에틸 에스테르 (2j)
2j(2)(0.200 g, 0.575 mmol)를 디클로로메탄 (6.0 mL) 중 WSDCC (0.138 g, 0.719 mmol) 및 (R)-만델산 (0.096 g, 0.575 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서 4-DMAP (0.005 g)를 첨가하고 반응물을 25 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 1 N HCl (2 x 10 mL) 및 중탄산나트륨 (10 mL)으로 1회 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조하였다. 진공하에서 농축하여2j(0.220 g)를 황색 고체로 얻었고, 이를 더 정제하지 않았다. HPLC: 3.283 분 (체류 시간)에서 100％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS(ES): m/z 547.26 [M+Na]+.
실시예 2k: (3aα,4β,7β,7aα)-7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]헥사히드로-5-히드록시-4-메틸-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-4,7-에폭시-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (2k)의 제조
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-3a,4,7,7a-테트라히드로-7-메틸-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-4,7-에폭시-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (2k(1))
벤젠 (2 mL) 중2h(2)(455 mg, 1.894 mmol) 및 1-[4-니트로나프탈렌]-1H-피롤-2,5-디온 (254 mg, 0.947 mmol)의 용액을 60 ℃에서 밤새 가열하였다. 1-[4-니트로나프탈렌]-1H-피롤-2,5-디온을2j(1)에 기재된 바와 같이 제조하였다. 반응 혼합물을 감압하에서 농축하여 조2h(2)를 갈색 고체로 얻었고, 이를 더 정제하지 않고 다음 단계에서 직접 사용하였다.
(3aα,4β,5β,7β,7aα)-7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]헥사히드로-5-히드록시-4-메틸-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-4,7-에폭시-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (2k)
BH3ㆍTHF (0.95 mL, 0.95 mmol, THF 중 1M 용액)을 THF (2 mL) 중 조2k(1)(0.95 mmol)의 용액에 0 ℃에서 첨가하였다.2k(1)를 소비한 후, 반응 혼합물을 감압하에서 농축하였다. 얻어진 잔류물을 톨루엔 (2 mL)에 용해하고, Me3NO (71 mg, 2.84 mmol)을 첨가하고 혼합물을 환류로 밤새 가열하였다. 이어서 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, H2O에 첨가하고 EtOAc (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 MgS04상에 건조시키고 감압하에서 농축하였다. 75％ EtOAc/30％ 헥산으로 용출시키는 Si02상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 130.2 mg (26％)의2k를 갈색 고체로 얻었다. HPLC: 3.92 분 (체류 시간)에서 94％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 527.5 [M+H]+.
실시예 21: (3aα,4β,5β,7β,7aα)-헥사히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-4,7-에폭시-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (2l)의 제조
CH3CN (6 mL) 중 TBAF (0.3 mL, 0.296 mmol, THF 중 1 M) 및 HF (0.3 mL,H20 중 50％)의 혼합물을 0 ℃에서 THF (2 mL) 중2k(104 mg, 0.197 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 출발 물질이 소비된 것을 TLC에 의해 확인한 후, H20 및 EtOAc를 첨가하고 층들을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (1X)로 추출하고 합한 유기 츠들을 H20 (1X) 및 염수 (1X)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에서 농축하였다. 5％ MeOH/CH2Cl2로 용출시키는 Si02상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 61.2 mg (75％)의2l을 황색 고체로 얻었다. HPLC: 2.47 분 (체류 시간)에서 99％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 411.2 [M-H]-.
실시예 2m: (3aα,4β,5β,7β,7aα)-7-[2-(4-플루오로페녹시)에틸]헥사히드로-5-히드록시-4-메틸-2-(4-니트로-1-나프탈레닐)-4,7-에폭시-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (2m)의 제조
DBAD (37.7 mg, 0.164 mmol, 1.5 eq)을 THF (1 mL) 중 PPh3(43 mg, 0.164 mmol, 1.5 eq)의 용액에 첨가하였다. 10 분 동안 교반 후, 4-플루오로페놀 (18.3 mg, 0.164 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고 반응 혼합물을 5 분 더 교반하였다. THF (1mL) 중2l(45 mg, 0.109 mmol, 1 eq)의 용액을 첨가하고 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. HPLC는 조 반응 혼합물이 대부부 출발 디올 (2l)을 함유함을 나타내었고, 이 혼합물을 THF (4 mL) 중 PPh3 (86 mg, 3 eq), DBAD (75.4 mg, 3 eq) 및 페놀 (36.6 mg, 3 eq)의 미리 형성된 혼합물에 첨가하였다. 모든2l이 소비되었음이 HPLC에 의해 확인될 때까지 교반을 계속하였다. 반응물을 감압하에서 농축하였다. 정제 크로마토그래피 [15.2 분 (체류 시간)에서 HPLC (YMC S5 ODS A 컬럼 20 x 100 mm, 15 분에 걸쳐 0.1％ TFA를 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 20 mL/min, 220 nm에서 모니터링함)]에 의해 정제하여 25.0 mg (45％)의2m을 연황색 고체로 얻었다. HPLC: 3.53 분 (체류 시간)에서 99％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 505.2 [M-H]-.
DEAD (37.7 mg, 0.164 mmol)을 THF (1 mL) 중 PPh3(43 mg, 0.164 mmol)의 용액에 첨가하고 반응 혼합물을 5 분 더 교반하였다. 10 분 동안 교반한 후, 4-플루오로페놀 (18.3 mg, 0.164 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 5 분 더 교반하였다. THF (1 mL) 중 화합물2l(45 mg, 0.109 mmol)의 용액을 첨가하고 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. HPLC는 조 반응 혼합물이 대부분 출발 디올 (화합물2l)을 함유하는 것을 나타내었고, 실온에서 이 혼합물을 THF (4 mL) 중 PPh3(86 mg), DBAD (75.4 mg) 및 페놀 (36.6 mg)의 미리 형성된 혼합물에 첨가하였다. 모든2l이 소비될 때까지 교반을 계속하였다. 반응물을 감압하에서 농축하였다. 정제 크로마토그래피 [15.2 분 (체류 시간)에서 HPLC (YMC S5 ODS A 컬럼 20 x 100 mm, 15 분에 걸쳐 0.1％ TFA을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 20 mL/min, 220 nm에서 모니터링함)]에 의해 정제하여 25.0 mg (45％)의2m을 연황색 고체로 얻었다. HPLC: 3.53 분 (체류 시간)에서 99％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 505.2 [M-H]-.
실시예 2n: [3aR-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2nA) 및 [3aS-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-4-(2-히드록시에틸)-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2nB)의 제조
라세미체2j(2)를 정제 키랄 HPLC (키랄팩 AD 5 x 50 cm 컬럼; 헵탄 중 20％ MeOH/EtOH (1:1)로 용출시킴 (등용매), 50 mL/min, @ 220 nm)에 의해 그의 에난티오머로 분리하여 먼저 용출되는 화합물2nA(키랄 HPLC: 13.54 분; 키랄팩 AD 4.6 x 250 mm 컬럼; 헵탄 중 20％ MeOH/EtOH (1:1)로 용출시킴, 1 mL/min) 및 나중에 용출되는 화합물2nB(키랄 HPLC: 14.99 분; 키랄팩 AD 4.6 x 250 mm 컬럼; 헵탄 중 20％ MeOH/EtOH (1:1)로 용출시킴, 1 mL/min)을 얻었다. 화합물2nA및2nB에대한 절대적인 배열은 정해지지 않았다. 명명법에서의 간결함을 위해, 화합물2nA가 "R" 형태를 갖고 화합물2nB가 "S" 형태를 갖는 것으로 정하였다.2nA로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 "R" 형태를 갖고2nB로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 "S" 형태를 갖는 것으로 정해질 것이다.
실시예 20: [3aR-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[4-[2-(3-플루오로페녹시)에틸]옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2oA) 및 [3aS-(3aα,4β,7β,7aα)]-4-[4-[2-(3-플루오로페녹시)에틸]옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2oB)의 제조
THF (2.0 mL) 중 트리페닐포스핀 (0.0524 g, 0.20 mmol)의 용액에 DBAD (0.046 g, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 10 분 후, 3-플루오로페놀 (0.018 mL, 0.2 mmol)을 첨가하였다. 10 분이 더 지난 후, 에난티오머적으로 순수한2nA(0.050 g, 0.133 mmol)를 첨가하였다. 25 ℃에서 3 시간 후, 반응물을 진공하에서 농축하고 정제 HPLC (YMC S5 ODS 20 x 100 mm, 15 분에 걸쳐 0.2％ TFA를 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 20 mL/min, 220 nm에서 모니터링함)에 의해 정제하여 0.031 g의 화합물2oA를 백색 고체로 얻었다. 이 공정을 에난티오머적으로 순수한 화합물2nB를 사용하여 반복하여2oB를 얻었다.2oA: HPLC: 3.80 분 (체류 시간)에서 100％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 471.65 [M+H]+, [α]D 25= -47.371 (c = 4.412 mg/cc, CH2Cl2).2oB: HPLC: 3.80 분 (체류 시간)에서 100％ (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 471.65 [M+H]+, [α]D 25= +24.3 (c = 4.165 mg/cc, CH2Cl2).
실시예 2p: [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2pA) 및 [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2pB)의 제조
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2p(1))
4-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-1-일)-1-나프탈렌카르보니트릴 (18.3 g, 68.7 mmol)을 벤젠 (75 mL) 중2h(2)(26.6 g, 110.6 mmol)의 용액에 첨가하고 60 ℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압하에서 농축하였다. 잔류물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반하면서 MeOH (250 mL)로 처리하였다. 얻어진 고체를 여과하고 냉 MeOH (2 X 10 mL)로 세척하고 건조시켜 26.7 g (79.5％)의2p(1)을 황색 고체로 얻었다. 상기 고체를 HPLC 분석 (HPLC 조건: 2.48 분에서 95％ (페노메넥스-프라임 S5-C18 컬럼, 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2％ H3PO4를 함유하는 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출함))하여 95％ 순수함을 밝혔다. 이어서 여액을 감압하에서 농축하고 얻어진 고체를 3％ 아세톤/CHCl3으로 용출시키는 크로마토그래피하여 추가의 4.36 g의2p(1)(13％)를 얻었다 (총 최종 수율 92.5％).
(3aα,4β,5β,7β,7aα)-4-[7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2p(2))
2p(1)(10 g, 20.46 mmol) 및 RhCl(PPh3)3(0.947 mg, 1.02 mmol)의 혼합물을 배기시키고 아르곤 (3X)으로 충전하였다. THF (200 mL)를 첨가하고, 일단 모든 성분들이 용해되면 카테콜보란 (4.4 mL, 40.93 mmol)을 천천히 적가하였다. 생성물 형성의 중단이 HPLC에 의해 확인되면, 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각하고 포스페이트 완충액 (330 mL, pH 7.2)에 이어 EtOH (130 mL)로 켄칭하고 H202(300 mL, 30％ 수용액)을 첨가하였다. 일단 보로네이트가 소비되면, 혼합물을 CH2Cl2(3X)로 추출하고 합한 유기층들을 1N NaOH, 10％ 수성 NaHSO3(1:1, 1X)및 염수 (1X)로 세척하였다. 합한 세척물들을 CH2Cl2(1 X)로 세척하고 합한 유기층들을 Na2SO4상에 건조하였다. 10％-30％ 아세톤/CHCl3구배로 25 분에 걸쳐 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 7.1 g (68％)의2p(2)를 황색 고체로 얻었다. HPLC 조건: 3.82 분에서 98％ (페노메넥스-프라임 S5-C18 컬럼 4.6 x 50 mm, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출).
[3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2p(3A)) 및 [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2p(3B))
키랄 정상 액체 크로마토그래피에 의해 라세미체 화합물2p(2)를 각 에난티오머로 분리하였다. 키랄팩 OD 컬럼 (50 x 500 mm)을 사용하여 99 분에 걸쳐 50mL/min로 13％ EtOH/헥산으로 용출하고 220 nm에 검출하였다. 먼저 용출되는 이성질체2p(3A)는 체류 시간이 45 분이었고 나중에 용출되는 이성질체2p(3B)는 체류 시간이 66 분이었다.
[3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2pA) 및 [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴, (2pB)
2p(3A)(0.84g, 2.14 mmol)을 2％ 12 N HCl/EtOH (20 mL)에 용해하고 5 분 동안 교반하고 감압하에서 농축하였다. 5-10％ MeOH/CH2Cl2로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 0.57 g (88％)의2pA를 얻었다. 먼저 용출되는 이성질체 (2p(3A))로부터의2pA는 분석 키랄 정상 크로마토그래피에 의해 99.7％ ee를 갖는 것이 밝혀졌다. HPLC 조건: 2.17 분에서 99.7％ (키랄셀 OJ 44.6 X 250 mm, 10 micron, 40 ℃, 등용매 80％ 헵탄/20％ EtOH/MeOH (1:1), 1.0 mL/min., 288 nm에서 검출).
2p(3B)(0.86 g, 2.19 mmol)를 2％ 12N HCl/EtOH (20 mL)에 용해하고 5 분 동안 교반하고 감압하에서 농축하였다. 5-10％ MeOH/CH2Cl2로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 0.60 g (90％)의2pB를 얻었다. 나중에 용출되는 이성질체 (2p(3B))로부터의 2pB는 분석 키랄 정상 크로마토그래피에 의해 87.1％를 갖는 것으로 밝혀졌다. HPLC 조건: 18.4 분에서 87.1％ (키랄셀 OJ 44.6 X 250 mm, 10 micron, 40 ℃, 등용매 80％ 헵탄/20％ EtOH/MeOH (1:1), 1.0 mL/min., 288 nm에서 검출).
화합물2pA및2pB에 대한 절대적인 배열은 정해지지 않았다. 명명법에서의 간결함을 위해, 화합물2pA가 "R" 형태를 갖고 화합물2pB가 "S" 형태를 갖는 것으로 정하였다.2pA로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 "R" 형태를 갖고2pB로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 "S" 형태를 갖는 것으로 정해질 것이다.
실시예 2q: [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-(4-시아노페녹시)에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2qA) 및 [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-(4-시아노페녹시)에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2qB)의 제조
DBAD (26 mg, 0.115 mmol)를 THF (0.65 mL) 중 PPh3(30 mg, 0.115 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10 분 동안 교반 후, 4-시아노페놀 (13.6 mg, 0.115 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 5 분 더 교반하였다. 화합물2pA(30 mg, 0.076 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압하에서 농축하였다. 30％ 아세톤/70％ CHCl3으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 23.1 mg (0.047 mmol, 61.7％)의 화합물2qA를 얻었다. HPLC 조건: 3.06 분에서 95％ (YMC S5 ODS 4.6X50 mm, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출함). MS (ES): m/z 494.09 [M+H]+. [α]D= 53.30 °, THF 중 C = 4.5 mg/cc, @ 589 nm)
DBAD (26 mg, 0.115 mmol)를 THF (0.65 mL) 중 PPh3(30mg, 0.115 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10 분 동안 교반한 후, 4-시아노페놀 (13.6 mg, 0.115 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 5 분 더 교반하였다. 화합물2pB(30 mg, 0.076 mmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압하에서 농축하였다. 30％ 아세톤/70％ CHCl3으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 20.3 mg (0.041 mmol, 54.2％)의 화합물2qB를 얻었다. HPLC 조건: 3.07 분에서 90％ (YMC S5 ODS 4.6 X 50 mm, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출함). MS (ES): m/z 494.09 [M+H]+. [α]D= -42.87, THF 중 C = 6.6 mg/cc, @ 589 nm)
실시예 2r: (3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-[(6-클로로-1,2-벤즈이소옥사졸-3-일)옥시]에틸]옥타히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2r)의 제조
0.5 mL THF 중 PPh3(52 mg, 0.20 mmol)의 용액에 DBAD (46 mg, 0.20 mmol)를 고체로 한번에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 10 분 동안 교반한 후, 6-클로로-3-히드록시-1,2-벤즈이소옥사졸 (34 mg, 0.20 mmol)을 첨가하였다. 10 분 동안 교반을 계속한 후, 0.5 mL THF 중2j(2)(50 mg, 0.13 mmol)의 용액을 캐뉼라를 통해 도입하였다. 얻어진 혼합물을 주위 온도에서 24 시간 동안 교반하고 농축하여 정제 역상 HPLC (YMC S5 ODS 20 x 100 mm 컬럼; 10 분에 걸쳐 20 mL/min로 0.1％ TFA를 함유하는 30-100％ 수성 MeOH로 용출시킴)에 의해 정제하여 백색 고체를 얻었다. 얻어진 고체를 CH2Cl2에 용해하고 포화 NaHCO3용액으로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시키고 농축하여 50 mg (71％)의2r을 무색 오일로 얻었다. HPLC: 3.89 분에서 26％ 및 4.02 분에서 74％ (회전장애 이성질체의 혼합물, 체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm 발리스틱 (Ballistic), 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 528.4 [M+H]+.
실시예 2s: (3aα,4β,7β,7aα)-4-[옥타히드로-4-메틸-7-[2-[(6-니트로-1H-인다졸-3-일)옥시]에틸]-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2s)의 제조
톨루엔 (1 mL) 중2j(2)(50 mg, 0.13 mmol)의 용액에 ADDP (50 mg, 0.20 mmol), 6-니트로-3-인다졸리논 (36 mg, 0.20 mmol) 및 n-Bu3P (50 ㎕, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 80 ℃로 24 시간 동안 가열하고 농축하여 정제 역상 HPLC (YMC S5 ODS 20 x 100 mm 컬럼; 10 분에 걸쳐 20 mL/min로 0.1％ TFA을 함유하는 30-100％ 수성 MeOH로 용출시킴) 및 플래시 크로마토그래피 (실리카겔, 25％ CHCl3중 아세톤)를 함께 사용하여 17 mg (25％)의2s를 황색 고체로 얻었다.HPLC: 3.60 분에서 24％ 및 3.74 분에서 76％ (회전장애 이성질체의 혼합물, 체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm 발리스틱, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 537.6 [M+H]+.
실시예 2t: [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-(1,2-벤즈이소옥사졸-3-일옥시)에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2t)의 제조
PPh3(47 mg, 0.18 mmol), DBAD (41 mg, 0.18 mmol), 3-히드록시-1,2-벤즈이소옥사졸 (24 mg, 0.18 mmol) 및 화합물2pA(35 mg, 0.09 mmol)을2r에 대해 기재된 공정에 따라 반응시켰다. 역상 HPLC (YMC S5 ODS 20 x 100 mm 컬럼; 10 분에 걸쳐 20 mL/min로 0.1 ％ TFA를 함유하는 30-100％ 수성 MeOH로 용출시킴)에 의해 정제하여 백색 고체를 얻었다. 얻어진 고체를 CH2Cl2에 용해하고 포화 NaHCO3용액으로 세척하고 Na2SO4상에 건조시키고 농축하여 29 mg (64％)의2t를 무색 오일로 얻었다. HPLC: 3.29 분에서 96％ (회전장애 이성질체의 혼합물, 체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm 발리스틱, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 0％-100％ 수성메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 510.2 [M+H]+.
실시예 2u: [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-(1,2-벤즈이소옥사졸-3-일옥시)에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2u)의 제조
PPh3(47 mg, 0.18 mmol), DBAD (41 mg, 0.18 mmol), 3-히드록시-1,2-벤즈이소옥사졸 (24 mg, 0.18 mmol) 및2pB(35 mg, 0.09 mmol)을2r에 대해 기재된 공정에 따라 반응시켰다. 역상 HPLC (YMC S5 ODS 20 x 100 mm 컬럼; 10 분에 걸쳐 20 mL/min로 0.1 ％ TFA를 함유하는 30-100％ 수성 MeOH로 용출시킴)에 의해 정제하여 백색 고체를 얻었다. 얻어진 고체를 CH2Cl2에 용해하고 포화 NaHCO3용액으로 세척하고 Na2SO4상에 건조시키고 농축하여 23 mg (51％)의2u를 무색 오일로 얻었다. HPLC: 3.29 분에서 95％ (회전장애 이성질체의 혼합물, 체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm 발리스틱, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 0％-100％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 510.4 [M+H]+.
실시예 2v:(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-(4-시아노페녹시)에틸]-7-에틸옥타히드로-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2v)의 제조
2-에틸-5-(2-히드록시에틸)푸란 (2v(1))
n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 4.4 mL, 11 mmol)를 THF (10 mL) 중 2-에틸푸란 (1.05 mL, 10 mmol)의 용액에 -25 ℃에서 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온시키고 3 시간 동안 교반하였다. 산화에틸렌 (0.75 mL)을 -78 ℃에서 첨가하였다. 반응물을 0.5 시간 동안 -15 ℃에서 교반하고 실온에서 밤새 교반하였다. 수성 포화 NH4Cl을 첨가하고 혼합물을 에테르 (3X)로 추출하였다. 합한 추출물들 물 (1X) 및 염수 (1X)로 세척하고 Na2SO4상에 건조시켰다. 30％ EtOAc/70％ 헥산으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 1.12 g (8.02 mmol, 80.2％)의2v(1)을 황색 오일로 얻었다.
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-에틸-1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-7-(2-히드록시에틸)-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2v(2))
벤젠 (2 mL) 중2v(1)(280 mg, 2.00 mmol) 및 4-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-1-일)-1-나프탈렌카르보니트릴 (496 mg, 2.00 mmol)의 용액을 60 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에서 농축하였다. 황색 고체인2v(2)를 다음 단계에 바로 사용하였다.
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-에틸옥타히드로-7-(2-히드록시에틸)-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2v(3))
EtOAc (36 mL) 중2v(2)(764 mg, 1.97 mmol) 및 10％ Pd/C (115 mg, 촉매량)의 혼합물을 수소 분위기 하의 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 감압하에서 농축하여 779 mg의 조2v(3)을 얻었다. 상기 조 생성물을 70％ EtOAc/30％ 헥산으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 235 mg (0.6 mmol, 30.1％)의2v(3)을 얻었다. HPLC 조건: 2.84 분에서 99％ (YMC S5 ODS 4.6X50 mm, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출함). MS (ES): m/z 391.12[M+H]+.
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-(4-시아노페녹시)에틸]-7-에틸옥타히드로-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2v)
DBAD (44.2 mg, 0.192 mmol)를 THF (1 mL) 중 PPh3(50.4 mg, 0.192 mmol)의용액에 첨가하였다. 10 분 동안 교반 후, 4-시아노페놀 (23 mg, 0.192 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 5 분 더 교반하였다.2v(3)(50 mg, 0.128 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압하에서 농축하였다. 40％ EtOAc/60％ 헥산으로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 43 mg (0.087 mmol, 68.4％)의 화합물2v를 백색 고체로 얻었다. HPLC 조건: 3.65 분에서 99％ (YMC S5 ODS 4.6 X 50 mm, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출함). MS (ES): m/z 492.16 [M+H]+.
실시예 2w: [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-(아세틸옥시)에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2wA) 및 [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2wB)의제조
화합물2pA및2pB의 라세미체 혼합물 (1.90 gram)을 2 L 플라스크 중에서 100 mL의 무수 THF에 용해하였다. 무수 tert-부틸-메틸 에테르 (900 mL) 및 비닐 아세테이트 (40 mL)를 교반하면서 플라스크로 이동시키고 리파아제 (20 g, 돼지 췌장으로부터의 유형 II 조 리파아제; 시그마 (Sigma), Cat# L3126)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 21 시간 동안 실온에서 교반하고, 이 때 추가로 5 g의 리파아제 및 20 mL의 비닐 아세테이트를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 19 시간 동안 더 교반하고 4 ℃에서 36 시간 동안은 교반하지 않으면서 보관한 후 실온에서 22 시간 동안 교반하였다 (목적하는 ％ ee가 키랄 HPLC에 의해 확인될 때까지). 반응을 모니터링하기 위해, 200 ㎕의 혼합물을 꺼내어 원심분리하였다. 상청액 (100 ㎕)를 질소하에서 건조시키고 얻어진 잔류물을 100 ㎕의 EtOH에 용해하고 HPLC 분석을 수행하였다:
1) 역상 HPLC: 컬럼, YMC-ODS AQ 150x4.6; 유속, 1.2 mL/min; 샘플 크기; 10 ㎕
용매 A: 물 중 1 mM HCl; 용매 B: MeCN;300 nm에서 모니터링함
구배:
시간 (min)088.59.51012
B％306085853030
2) 키랄-HPLC: 컬럼, 키랄셀 OJ 4.6 x 250 mm
이동상, 헥산/MeOH/EtOH (8:1:1)
유속, 1 mL/min; 샘플 크기, 20 ㎕
220 및 300 nm 둘 다에서 모니터링함
25 ℃ 및 40 ℃에서 수행함
(반응 혼합물의 ee％를 결정하기 위해)
효소를 여과에 의해 제거하고 여액을 진공하에서 농축하였다. 얻어진 혼합물을 CHCl3에 용해하고 실리카겔 (63-200 마이크론)에 흡착시켰다. 상기 고체를 5 cm 층 높이의 실리카겔 (25-40 마이크론)을 함유하는 VLC 깔때기 (3 cm I.D., VLC는 바닥에 24/40 조인트를 갖는 유리 깔때기를 사용하는 진공 액체 크로마토그래피임) 및 단계 구배를 수행하였다. 구배는 처음 3 분획에서는 100％ CHCl3으로 하고 CHCl3-1％ MeOH (3 분획), CHCl3-2％ MeOH (3 분획), CHCl3-3％ MeOH (3 분획), CHCl3-4％ MeOH (3 분획), 및 마지막으로 CHCl3-5％ MeOH (3 분획)로 하였다. CHCl3-3％ MeOH에 도달하기 전 분획물의 부피는 100 mL이었고, 이 시점 이후의 부피는 200 mL이었다. 100％ CHCl3의 마지막 두개의 분획물에서 CHCl3-2％ MeOH의 첫번째 용출물까지2wA가 용출되었다. CHCl3-2％ MeOH의 두번째 분획물에서 시작하여 CHCl3-5％ MeOH의 첫번째 분획물까지2wB가 용출되었다. 소량의 착색된 불순물을함유하는 조 화합물2wB에서 상기 불순물을 세파덱스 (Sephadex) 컬럼 [CHCl3-MeOH (2:1) 중 팽윤된 LH-20, 컬럼 (2.5 cm I.D. 및 90 cm 길이)에 의해 제거하여 632 mg의 화합물2wB를 얻었다. 화합물2wA: HPLC 조건: 7.2 분에서 98％ (방법 1), 키랄 HPLC 조건: 29.0 분 @ 25 ℃ (방법 2). 화합물2wB: HPLC 조건: 4.6 분에서 98％ (방법 1), 키랄 HPLC 조건: 25.7 분에서 96％ ee (@ 25 ℃) 및 19.8 분 (@ 40 ℃) (방법 2).
실시예 2x: (3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 및 (3aα,4α,7α,7aα)-4-[4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-7-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2xA 및 2xB)의 제조
화합물2h(2)(2.00 g, 8.50 mmol) 및 4-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-피롤-1-일)-2-트리플루오로메틸벤조니트릴 (1.50 g, 5.60 mmol)을 벤젠 (5.0 mL)에 혼합하고 60 ℃에서 14 시간 동안 가열한 후 25 ℃로 냉각하였다. 용매를 진공하 40 ℃에서 1 시간 동안 제거하여 조 물질을 얻었고, 이를 0.5％ EtOAc/CH2Cl2로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 2.0 g의 화합물2xA및1.3g의 화합물2xB를 둘다 연갈색 고체로 얻었다. 화합물2xA: HPLC: 4.200 분에서 95％ (체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 507.1 [M+H]+. 화합물2xB: HPLC: 4.20 분에서 95％ (체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 507.1 [M+H]+.
실시예 2y: [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 및 [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2yA 및 2yB)의 제조
화합물2xA(1.40 g, 2.77 mmol) 및 RhCl(PPh3)3(0.128 g, 0.14 mmol)을 플라스크 중에서 혼합하였다. 이어서 플라스크를 배기시키고 아르곤으로 3회 충전한 후, THF (3.0 mL)를 주사기로 첨가하였다. 일단 모든 성분들이 용해되면, 카테콜보란 (0.59 mL, 5.54 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 아르곤하 25 ℃에서 30분 동안 교반한 후 0 ℃로 냉각하였다. 포스페이트 완충액 (pH = 7, 20 mL)에 이어 EtOH (10 mL), 30％ H202/H20 (2 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 3 시간 동안 교반한 후 디클로로메탄 (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층들을 1 N NaOH (25 mL), 10％ Na2SO3(25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척하였다. 이어서 조 물질을 농축하고 2％ EtOAc/CH2Cl2에서 10％ EtOAc/CH2Cl2로 용출시키는 SiO2상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물2yA및2yB의 라세미체 혼합물 0.63 g을 연황색 고체로 얻었다. HPLC: 3.867 분에서 99％ (체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 525.1 [M+H]
화합물2yA및2yB의 라세미체 혼합물을 키라셀 OD 컬럼 (5 cm x 50 cm)을 사용하여 정상 정제 키랄 HPLC (용매 A (헥산) 중 13％ 용매 B (EtOH), 유속: 50 mL/min)에 의해 분리하였다. 화합물2yA는 34 분 내지 38 분에 용출되었고 화합물2yB는 44 분 내지 49 분에 용출되었다. 에난티오머 과량을 키랄 HPLC에 의해결정하였다. 화합물2yA: > 99％ ee (12.576 분 (체류 시간) (키랄셀 OJ 컬럼 4.6 x 250 mm, 등용매 85％ 헵탄/15％ MeOH/에탄올 (1:1)로 용출시킴, 1 mL/min, 220 nm에서 모니터링함, 40 ℃). 화합물2yB: 99％ ee (18.133 분 (체류 시간) (키랄셀 OJ 컬럼 4.6 x 250 mm, 등용매 85％ 헵탄/15％ MeOH/에탄올 (1:1)로 용출시킴, 1 mL/min, 220 nm에서 모니터링함, 40 ℃).
화합물2yA및2yB에 대한 절대적인 배열은 정해지지 않았다. 명명법에서의간결함을 위해, 화합물2yA가 "R" 형태를 갖고 화합물2yB가 "S" 형태를 갖는 것으로 정하였다.2yA로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 "R" 형태를 갖고2yB로부터 유도된 에난티오머적으로 순수한 생성물은 "S" 형태를 갖는 것으로 정해질 것이다.
실시예 2z: [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 및 [3aS-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴 (2zA 및 2zB)의 제조
화합물2yA(180 mg, 0.34 mmol)를 2％ HCl/EtOH (5.0 mL)에 용해하였다. 30 분 후, 포화 NaHCO3을 첨가하고 수성층을 디클로로메탄 (20 mL x 3)으로 추출하고, 염수로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시켜 135 mg의 화합물2zA를 백색 고체로 얻었다. HPLC: 2.257 분에서 99％ (체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.2 ％ 인산을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 411.1 [M+H]+.
상기 공정을 화합물2yB를 사용하여 반복하여 바람직한 디올 화합물2zB를유사한 수율로 얻었다.
실시예 2a(i): [3aR-(3aα,4β,5β,7β,7aα)]-4-[7-[2-[(5-클로로-2-피리디닐)옥시]에틸]옥타히드로-5-히드록시-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-2-(트리플루오로메틸) 벤조니트릴 (2a(i))의 제조
트리페닐포스핀 (0.026 g, 0.098 mmol) 및 DBAD (0.023 g, 0.098 mmol)를 THF (0.5 mL) 중 혼합하였다. 상기 혼합물을 15 분 동안 반응되도록 한 후, 2-히드록시-6-클로로피리딘 (0.016 g, 0.100 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 10 분 도안 교반하고 화합물2zA(0.020 g, 0.049 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25 ℃에서 2 시간 동안 교반한 후 조 물질을 10％ 아세톤/CHCl3으로 용출시키는 정제 TLC에 의해 정제하여 0.014 g의 화합물2a(i)를 연갈색 고체로 얻었다. HPLC: 3.370 분에서 100％ (체류 시간) (YMC S5 ODS 컬럼 4.6 x 50 mm, 4 분에 걸쳐 0.1％ TFA을 함유하는 10-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 4 mL/min, 220 nm에서 모니터링함), MS (ES): m/z 522.08 [M+H]+.
실시예 2b(i): (3aα,4β,5β,7β,7aα)-4-[4-에틸옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴(2b(i)C)의 제조
tert-부틸-[2-(5-에틸-푸란-2-일)-에톡시]-디메틸-실란 (2b(i)A)
이미다졸 (255 mg, 3.75 mmol) 및 TBSCl (414 mg, 2.75 mmol)을 DMF (4 mL) 중2v(1)(350 mg, 2.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15 시간 동안 교반한 후 100 mg (0.66 mmol)의 추가의 TBSCl을 첨가하여 반응이 완결되도록 하였다. 1 시간 더 교반한 후, 반응 혼합물을 디에틸에테르 (100 mL)로 희석하고 물 (20 mL), 1 N HC1 (20 mL), 물 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4상에 건조시키고 감압하에서 농축하여 509 mg의 화합물2b(i)A(80.3％)를 황색 오일로 얻었다.
(3aα,4β,7β,7aα)-4-[4-[2-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]에틸]-4-에틸-1,3,3a,4,7,7a-헥사히드로-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2b(i)B)
벤젠 (2 mL) 중 화합물2b(i)A(509 mg, 2.00 mmol) 및 4-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-1-일)-1-나프탈렌카르보니트릴 (498 mg, 2.00 mmol)의 용액을 60 ℃에서 18 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압하에서 농축하여 992 mg (99％)의 조 화합물2b(i)B를 얻었고, 이를 더 정제하지 않고 다음 단계에 직접 사용하였다.
(3aα,4β,5β,7β,7aα)-4-[4-에틸옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2b(i)C)
화합물2b(i)B(992 mg, 1.98 mmol) 및 RhCl2(PPh3)3(183 mg, 0.198 mmol)의 혼합물을 배기키키고 아르곤 (3 x)으로 충전하였다. THF (20 mL)를 첨가하고 일단 모든 성분들이 용해되면, 카테콜보란 (0.42 mL, 3.96 mmol)을 천천히 적가하였다. 생성물의 형성이 중단됨이 HPLC에 의해 확인되면, 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 포스페이트 완충액 (34 mL, pH 7.2)에 이어 추가의 EtOH (19 mL) 및 H202(2.9 mL, 30％ 수용액)로 켄칭하였다. 2 시간 후, 추가의 포스페이트 완충액 (6.8 mL, pH 7.2), EtOH (3.8 mL) 및 H202(0.6 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 일단 보로네이트 중간체 소비되면, 혼합물을 CH2Cl2(300 mL)로 추출하고 합한 유기층들을 1N NaOH, 10％ 수성 NaHSO3및 염수로 세척하였다. 합한 유기 층들을 Na2SO4상에 건조시켰다. 10％ MeOH/CH2Cl2로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 75 mg (9.3％)의 화합물2b(i)C를 회색 고체로 얻었다. HPLC 조건: 2.43 분에서 97％ (페노메넥스-프라임 S5-C18 컬럼 4.6 x 50 mm, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출함). MS (ES): m/z 407.18 [M+H]+.
실시예 2c(i): (3aα,4β,5β,7β,7aα)-4-[7-[2-(4-시아노페녹시)에틸]-4-에틸옥타히드로-5-히드록시-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2c(i))의 제조
DBAD (39.6 mg, 0.172 mmol)을 THF (0.8 mL) 중 PPh3(45.1 mg, 0.172 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10 분 동안 교반한 후, 4-시아노페놀 (20.5 mg, 0.172 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 5 분 더 교반하였다. 화합물2b(i)C(25.0 mg, 0.062 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압하에서 농축하였다. 10％ 아세톤/CHCl3으로 용출시키는 정제 TLC에 의해 정제하여 18.1 mg (0.036 mmol, 57.6％)의 화합물2c(i)를 얻었다. HPLC 조건: 3.15 분에서 96％ (YMC S5 ODS 4.6 X 50 mm, 4분에 걸쳐 0.2％ H3PO4구배로 10％-90％ 수성 메탄올로 용출시킴, 220 nm에서 검출함). MS (ES): m/z 508.14 [M+H]+.
실시예 2d(i): (3aα,4β,5β,7β,7aα)-4-[옥타히드로-5-히드록시-7-(2-히드록시에틸)-4-메틸-1,3-디옥소-4,7-에폭시-2H-이소인돌-2-일]-1-나프탈렌카르보니트릴 (2d(i))의 제조
생물학적 변환에 의해 화합물 (2j(1)) 및 (2j(2))를 화합물2d(i)로 변환시켰다.
화합물 2j(1)의 미생물 히드록실화
단계 1: 반응
스트렙토마이세스 그리세우스 (Streptomyces griseus) ATCC 10137의 냉동된 바이알 (약 2 ml) 하나를 100 ml의 형질전환 배지를 포함하는 500 ml 플라스크에 첨가하였다. 형질전환 배지는 다음과 같이 준비하였다: 2 리터 플라스틱 비커에 20 g의 덱스트로스, 5.0 g의 효모 추출물, 5.0 g의 대두 가루, 5.0 g의 염화 나트륨, 5.0 g의 이인산 칼륨 및 1 리터의 탈이온수를 첨가하고 혼합물을 실온에서 3 내지 30분 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물의 pH를 1 N HCl 또는 1 N NaOH를 이용하여 7.0으로 조정하였다. 결과의 혼합물을 500 ml 플라스크 (플라스크 당 100 ml)에 나누어 담았다. 플라스크를 바이오/랩 (Bio/Wrap)으로 덮고 121 ℃에서 15분 동안 오토클레이빙하고 사용 전에 온도를 실온으로 낮추었다.
배양액을 28 ℃ 및 250 rpm에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 결과의 배양액 1 ml을 100 ml의 형질전환 배지를 포함하는 500 ml 플라스크에 첨가하고 플라스크를 28 ℃ 및 250 rpm에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 결과의 배양액 10 ml 을 50 ml 플라스크로 옮기고, 거기에 0.2 ml 에탄올 중 1 mg의 화합물2j(1)을 첨가하였다. 플라스크를 28 ℃ 및 250 rpm에서 23시간 동안 인큐베이션하고 반응 배양액을 EtOAc (10 ml)로 추출하였다. EtOAc 추출물을 N2하에 건조시키고 잔류물을 1 ml의 MeOH에 용해시켰다 (반응 추출물). HPLC 분석 결과 반응 배양액 중 화합물2d(i)대 화합물2j(1)의 피크 면적 비율이 약 1.1/1인 것으로 나타났다.
단계 2: 생성물 분석
HPLC:
10 ㎕의 반응 추출물을 HPLC 컬럼 (YMC ODS-AQ C-18 컬럼, 내경 150 x 6.0 mm)에 주입하였다. 컬럼을 유속 1.2 ml/분에서 물/CH3CN (8분에 걸쳐 30에서 60 ％ CH3CN, 0.5분에 걸쳐 60에서 85 ％ CH3CN, 1분에 걸쳐 85 ％ CH3CN, 0.5분에 걸쳐 85에서 30 ％ CH3CN) 중의 1 mM HCl로 용출하였다. 용출액을 300 nm에서 모니터링하였다. 면적 비율이 약 1:1인 두 개의 주요 피크가 관찰되었는데, 이들은 화합물2d(i)및(2j(1))의 피크와 동일한 UV 스펙트럼을 갖고, 각각 4.55분 및 7.23분의 체류 시간을 가지며, 화합물2d(i)(4.53분) 및 화합물(2j(1))(7.2 분)의 진정한 샘플의 체류 시간과 일치한다.
LC/MS
반응 추출물: 두 개의 주요 UV 피크.
피크 1, Tr 4.68 분: 391 [M+H]+, 343, 319, 303, 289
피크 2, Tr 5.35 분: 375 [M+H]+, 345
진정한 샘플
화합물2d(i), Tr 4.82 분: 391 [M+H]+, 343, 319, 289
화합물(2j(1)), Tr 5.48 분: 375 [M+H]+, 345
본 문헌을 읽는 당업계 숙련자들에게 이해되는 바와 같이, 본 발명에 사용하기 위한 추가의 SARM은 또한 본원에 기재된 방법에 따라 확인할 수 있다. 예를 들면 선택적 안드로겐 수용체 조절 활성을 갖는 것으로 의심되는 시험 화합물을 하기에 기재한 바와 같이 호르몬-의존성 종양 세포주, 예를 들면 인간 또는 마우스 유방 종양 세포주에서 길항제 활성에 대해 스크리닝할 수 있고, 다른 비종양 안드로겐 수용체 함유 세포주, 예를 들면 근육, 전립선 또는 정낭 세포주에서 작용제 활성에 대해 스크리닝할 수 있다. 이들 스크리닝 분석법은 본원에 제공된 교시에 따라 통상적으로 수행될 수 있다.
실시예 3: AR 결합 분석법
전세포 결합 분석법에 있어서, 차콜로 스트리핑한 10 ％ CA-FBS (코칼레코 바이올로지칼스사 (Cocaleco Biologicals))로 보충된 RPMI 1640 또는 DMEM를 포함하는 96-웰 마이크로타이터 플레이트 내의 인간 LNCaP 세포 (T877A 돌연변이체 AR) 또는 MDA 453 (야생형 AR)을 각각 37 ℃에서 인큐베이션하여 세포내 수용체와 복합체를 형성할 수 있는 임의의 내인성 리간드를 제거하였다. 48시간 후에, 3중수소 디히드로테스토스테론 ([3H]-DHT)에 대한 Kd를 결정하는 포화 분석법 또는 [3H]-DHT와 경쟁하는 시험 화합물의 능력을 평가하는 결합 분석법을 수행하였다. 포화 분석법에 있어서, 500-배 몰 과량의 비표지된 DHT의 부재 (총 결합) 또는 존재 (비특이적 결합) 하에 [3H]-DHT (0.1 nM 내지 16 nM 범위의 농도)를 함유하는 배지 (RPMI 1640 또는 DMEM-0.2 ％ CA-FBS)를 세포에 첨가하였다. 37 ℃에서 4시간 후에, 각각의 [3H]-DHT 농도에서 총 결합 배지의 분취물을 분리하여 유리 [3H]-DHT의 양을 측정하였다. 남은 배지를 제거하고 세포를 PBS로 3회 세척하고 유니필터 (UniFilter) GF/B 플레이트 (팩커드사 (Packard)) 상에서 수거하고, 마이크로신트 (Microscint) (팩커드사)를 첨가하고 플레이트를 톱-카운터 (Top-Counter) (팩커드)에서 계수하여 결합한 [3H]-DHT의 양을 평가하였다.
포화 측정법에 있어서, 총 결합과 비-특이적 결합의 차이를 특이적 결합으로 정의하였다. 특이적 결합은 [3H]-DHT에 대한 Kd를 결정하는 스캣차드 (Scatchard) 분석에 의해 평가하였다. 예를 들면, 이 거명을 통하여 본 명세서에 참고로 포함되는 문헌 [D. Rodbard, Mathematics and statistics of ligand assays: an illustrated guide: In: J. Langon and J. J. Clapp, eds., Ligand Assay, Masson Publishing U.S.A., Inc., New York, pp. 45-99, (1981)]을 참조할 수 있다.
경쟁 연구에 있어서, 1 nM [3H]-DHT 및 10-10내지 10-5M 농도 범위의 시험 화합물을 포함하는 배지를 세포에 첨가하였다. 각각의 샘플을 2배수로 시험하였다. 37 ℃에서 4시간 후에, 세포를 세척하고 수거하고 상기와 같이 계수하였다. 주어진 화합물에 대한 투여량 반응 곡선의 범위에 걸쳐 잔여 [3H]-DHT (시험 화합물의 부재 하에 대조군의 ％)의 양으로서 데이타를 플롯팅하였다. 로그-로짓 (log-logit) 변환 후에, 경쟁 리간드의 부재 하에 결합한 [3H]-DHT 양의 50 ％를 억제하는 시험 화합물의 농도를 정량하였다 (IC50). KI값을 다음의 쳉-프루소프 (Cheng-Prusoff) 방정식을 IC50값에 적용함으로써 결정하였다:
비특이적 결합에 대한 보정 후에, IC50값을 결정하였다. IC50을, 특이적 결합을 50 ％만큼 감소시키는 데 필요한 경쟁 리간드의 농도로서 정의하였다. MDA 453 및 LNCaP에 있어서 [3H]-DHT에 대한 Kd값은 각각 0.7 및 0.2 nM이었다.
실시예 4: 인간 전립선 세포 증식 분석법
인간 전립선암 세포주의 증식에 대한 시험 화합물의 효과도 시험하였다. 그를 위하여, MDA PCa2b 세포, 즉 거세하지 않은 환자의 전이증으로부터 유래된 세포주 (문헌 [Navone et al., Clin. Cancer Res.,3, 2493-500 (1997)] 참조)를 72시간 동안 시험 화합물과 함께 또는 시험 화합물 없이 인큐베이션하고, DNA로 혼입된 [3H]-티미딘의 양을 세포 수 및 그로 인한 증식을 측정하는 방식으로 정량하였다. MDA PCa2b 세포주를 10 ％ FBS로 보충된 BRFF-HPC1 배지 (메릴랜드주 소재의 바이올로지칼 리서치 패컬티 앤드 패실리티사) 중에 유지시켰다. 분석을 위하여, 세포를 바이오코팅된 96-웰 마이크로플레이트에 넣고 37 ℃에서 10 ％ FBS (차콜로 스트리핑함)/BRFF-BMZERO (안드로겐 없음) 중에 인큐베이션하였다. 24시간 후에, 세포를 1 nM DHT의 부재 (블랭크) 또는 존재 (대조군) 하에 처리하거나 또는 10-10내지 10-5M 범위 농도의 시험 화합물 (샘플)로 처리하였다. 각각의 샘플을 2배수로 시험하였다. 화합물 희석을 바이오멕 (Biomek) 2000 라보래토리 워크 스테이션 상에서 수행하였다. 72시간 후에 0.44 μCi의 [3H]-티미딘 (아머샴사 (Amersham))을 각 웰에 첨가하고, 다시 24시간 동안 인큐베이션한 후에 트립신 처리하고, GF/B 필터 상에서 세포를 수거하였다. 마이크로-신트 (Micro-scint) PS를 필터에 첨가한 후, 베크만 톱카운트(Beckman TopCount) 상에서 계수하였다.
억제 ％를 다음과 같이 계산하였다:
억제 ％ = 100 x (1- [평균대조군-평균블랭크/평균샘플-평균블랭크])
데이타를 플롯팅하고 [3H]-티미딘 혼입의 50 ％가 억제된 화합물의 농도를 정량하였다 (IC50).
실시예 5: C2C12 마우스 근모세포 트랜스활성화 (transactivation) 분석법
두가지 기능성 트랜스활성화 분석을 루시퍼라제 리포터를 사용하여 근육 세포 배경에서 안드로겐 작용제의 효능을 평가하기 위해 개발하였다. 첫번째 분석 (ARTA 스테이블 (Stable) 1)은 전장의 래트 안드로겐 수용체를 안정하게 발현하나 인핸서/리포터의 일시적 형질감염을 필요로 하는 세포주인 스테이블 1 (클론 번호 72)을 사용하였다. 이 세포주는 C2C12 마우스 근모세포로부터 유래되었다. 두번째 분석 (ARTA 스테이블 2)은 rAR 및 인핸서/루시퍼라제 리포터 둘 다를 안정하게 발현하는, 스테이블 1로부터 유래된 세포주인 스테이블 2 (클론 번호 133)를 사용하였다. 이들 분석 및 세포주는
이 시스템에 사용된 인핸서/리포터 작제물은 pGL3/2XDR-1/루시퍼라제이다. 2XDR-1은 CV-1 세포에서 AR 특이적 반응 요소임이 보고되었다 (문헌 [Brown et. al. The Journal of Biological Chemistry272, 8227-8235, (1997)] 참조). 그것은 AR/GR 컨센서스 인핸서 서열의 랜덤 돌연변이에 의해 개발되었다.
ARTA 스테이블 1 분석에 있어서, 스테이블 1 세포를 96 웰 포맷에서 10 ％ 차콜 및 덱스트란 처리된 FBS (HyClone Cat. No.: SH30068.02), 50 mM HEPES 완충액 (Gibco BRL, Cat. No.: 15630-080), 1X MEM Na 피루베이트 (Gibco BRL, Cat. No.: 11360-070), 0.5X 항생제-항진균제, 및 800 ㎍/ml 제네티신 (Gibco BRL, Cat. No.: 10131-035)을 함유하는 페놀 레드(Gibco BRL, Cat. No.: 21063-029)가 없는 고 글루코스 DMEM 중에 웰 당 6,000 개의 세포로 플레이팅하였다. 48시간 후에, 세포를 리포펙트아민 플러스 시약 (상표명, LipofectAMINE Plus) (Gibco BRL, Cat.No.: 10964-013)을 사용하여 pGL3/2XDR-1/루시퍼라제로 형질감염시켰다. 구체적으로, 웰당 5 ng의 pGL3/2XDR-1/루시퍼라제 DNA 및 웰 당 50 ng의 연어 정자 DNA (담지체로서)를 웰 당 5 ㎕의 Opti-MEMem 배지 (Gibco BRL, Cat. No.: 31985-070)로 희석하였다. 여기에 웰 당 0.5 ㎕의 플러스 시약을 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 15분간 인큐베이션하였다. 별도의 병에서, 웰 당 0.385 ㎕의 리포펙트아민 시약을 웰 당 5 ㎕의 Opti-MEM으로 희석하였다. 그 다음 DNA 혼합물을 리포펙트아민 혼합물과 혼합하고 실온에서 추가의 15분간 인큐베이션하였다. 이 시간 동안 세포로부터 배지를 제거하고 웰 당 60 ㎕의 Opti-MEM으로 대체하였다. 여기에 웰 당 10 ㎕의 DNA/리포펙트아민 형질감염 혼합물을 첨가하였다. 세포를 4시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 형질감염 혼합물을 세포로부터 제거하고 10 ％ 차콜 및 덱스트란 처리된 FBS (HyClone Cat. No.: SH30068.02), 50 mM HEPES 완충액 (Gibco BRL, Cat. No.: 15630-080), 1X MEM Na 피루베이트 (Gibco BRL, Cat. No.: 11360-070), 0.5X 항생제-항진균제, 및 800 ㎍/ml 제네티신 (Gibco BRL, Cat. No.: 10131-035)을 함유하는 페놀 레드 Gibco BRL, Cat.No.: 21063-029)가 없는 90 ㎕의 고 글루코스 DMEM로 대체하였다. 그 다음 적절한 약물 희석액에서 웰 당 10 ㎕의 시험 화합물을 각각의 웰에 넣었다. 24시간 후에, 활성도를 탐지하기 위해 스테디-글로 (상표명, Steady-Glo) 루시퍼라제 분석 시스템을 제조자의 지시에 따라 사용하였다 (Promega, Cat. No.: E2520).
ARTA 스테이블 2 분석에 있어서, 스테이블 2 세포를 96 웰 포맷에서 10 ％ 차콜 및 덱스트란 처리된 FBS (HyClone Cat. No.: SH30068.02), 50 mM HEPES 완충액 (Gibco BRL, Cat. No.: 15630-080), 1X MEM Na 피루베이트 (Gibco BRL, Cat. No.: 11360-070), 0.5X 항생제-항진균제, 800 ㎍/ml 제네티신 (Gibco BRL, Cat. No.: 10131-035) 및 800 ㎍/ml 하이그로마이신 β(Hygromycin β) (Gibco BRL, Cat. No.: 10687-010)을 함유하는 페놀 레드 (Gibco BRL, Cat. No.: 21063-029)가 없는 고 글루코스 DMEM 중에 웰당 6,000 개의 세포로 플레이팅하였다. 48시간 후에, 세포 상의 배지를 제거하고 90 ㎕의 신선한 배지로 대체하였다. 그 다음 적절한 약물 희석액에서 웰 당 10 ㎕의 시험 화합물을 각각의 웰에 넣었다. 24시간 후에 활성도를 탐지하기 위하여 스테디-글로 (상표명) 루시퍼라제 분석 시스템을 제조자의 지시에 따라 사용하였다 (Promega, Cat. No.: E2520). 그의 거명을 통하여 전체가 본 발명에 포함되는, 자세크 오스트로브스키 (Jacek Ostrowski) 등에 의해 2002년 6월 20일에 출원된 미국 특허 출원 제____호 (비배정), 발명의 명칭 "안드로겐 수용체 조절제의 확인을 위한 세포주 및 세포-기재 분석" (대리인 관리 번호 제D0177호)을 참조할 수 있다.
실시예 6: 쥐의 유방 세포 증식 분석
AR의 기능을 조절하는 시험 화합물의 능력을 시오노기 (Shionogi) 종양으로부터 유래된 안드로겐 반응성 쥐 유방 세포주를 사용하여 증식 분석에서 상기 화합물을 시험함으로써 결정하였다 (문헌 [Hiraoka et al., Cancer Res., 47, 6560-6564 (1987)] 참조). 모(母) 시오노기 세포주의 스테이블 AR 의존적 클론을 문헌 [Tetuo, et. al. (Cancer Research 25, 1168-1175 (1965)]에 본래 기재된 일반 방법 하에 종양 단편을 시험함으로써 확인하였다. 상기 방법으로부터, 한 스테이블세포주인 SC114를 단리하고 특성화하고 실시예 화합물의 시험을 위하여 사용하였다. SC114 세포를 72시간 동안 시험 화합물과 함께 또는 없이 인큐베이션하고 DNA로 혼입된 [3H]-티미딘의 양을 문헌 [Suzuki et. al. (J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 37, 559-567 (1990))]에 개시된 바와 같이 세포 수 및 그로 인한 증식률을 평가하기 위해 대체치료 종료점으로서 정량하였다. SC114 세포주를 10-8M 테스토스테론 및 2 ％ DCC-처리된 FCS를 함유하는 MEM에서 유지시켰다. 분석에 있어서, 세포를 96-웰 마이크로플레이트 중 유지 배지에 넣고 37 ℃에서 인큐베이션하였다. 그 다음날 배지를 10-8M 테스토스테론 및 10-1내지 10-5M 농도 범위의 본 발명 시험 화합물과 함께 (길항제 방식) 또는 없이 (작용제 방식) 혈청-무함유 배지 [Ham's F-12 : 0.1 ％ BSA를 함유한 MEM (1;1, v/v)]로 바꾸었다. 각각의 샘플을 2배수로 시험하였다. 화합물 희석을 바이오맥 2000 라보래토리 워크 스테이션 상에서 수행하였다. 72시간 후에, 웰 당 0.44 μCi의 [3H]-티미딘 (아머샴사)을 첨가하고, 다시 2시간 동안 인큐베이션 한 후에 트립신을 처리하고, GF/B 필터 상에서 세포를 수거하였다. 마이크로-신트 PS를 필터에 첨가한 후, 베크만 톱카운트에서 계수하였다.
길항제 방식에서, 억제 ％는 다음과 같이 계산하였다:
억제 ％= 100 x (1-[평균샘플-평균블랭크/평균대조군-평균블랭크]).
데이타를 플롯팅하고 [3H]-티미딘 혼입의 50 ％가 억제된 화합물의 농도를 정량하였다 (IC50).
작용제 방식에서, 대조군 ％는 DHT의 경우 천연 호르몬으로 관찰된 최대 효과에 대한 시험 화합물의 효과로 언급되고 다음과 같이 계산된다:
대조군 ％ = 100 x (평균샘플-평균블랭크)/ (평균대조군-평균블랭크)
데이타를 플롯팅하고 [3H]-티미딘 혼입의 50 ％가 억제된 화합물의 농도를 정량하였다 (EC50).
실시예 7: 전립선 습윤 중량 분석 AR 길항제 분석
AR 길항제로서 시험 화합물의 활성은 주어진 화합물의 항안드로겐 활성의 표준으로 인식되는 시험인 미성숙 수컷 래트 모델에서 조사하였다 (문헌 [Hershberger et al. Proc. Soc. Expt. Biol. Med.,83, 175 (1953)]; [Walsh. P. C. and Gittes, R. F., Endocrinology,86, 624 (1970)]; 및 [Furr et al., J. Endocrinol.,113, R7-9 (1987)] 참조). 이 분석은 수컷 성 부속 기관, 예를 들면 전립선 및 정낭이 생식 기능에 있어서 중요한 역할을 한다는 사실에 기초한다. 이들 분비샘은 성장하도록 자극받고, 뇌하수체의 황체 호르몬 (LH) 및 여포 자극 호르몬 (FSH)의 조절 하에 정소의 라이디히 (Leydig) 세포에 의해 생산되는 주요 혈청 안드로겐(> 95 ％)인 혈청 테스토스테론 (T)의 계속적인 존재에 의해 크기 및 분비 기능을 유지한다. 테스토스테론은 전립선 내에서 5α-리덕타제에 의해 보다 활성 형태인 디히드로테스토스테론 (DHT)으로 전환된다. 부신 안드로겐은 또한 65세 남성에서 총 DHT의 40 ％에 기여하는데 비해 래트 전립선에서 총 DHT의 약 20％에 기여한다 (문헌 [Labrie et al. Clin. Invest. Med.,16, 475-492 (1993)] 참조). 그러나, 동물 및 인간 모두에서 거세가 수반된 부신 적출술 없이도 전립선 및 정낭의 거의 완전한 퇴화를 초래하기 때문에 이것은 주요 경로가 아니다. 그러므로, 정상 조건 하에서 부신은 전립선 조직의 중요한 성장을 지지하지 않는다 (문헌 [Luke, M.C. and Coffey, D.S. "The Physiology of Reproduction" ed. By E. Knobil and J.D. Neill,1, 1435-1487 (1994)] 참조). 수컷 성 기관은 안드로겐 활성화의 조절에 가장 반응성이 높은 조직이기 때문에 이 모델은 거세된 미성숙 래트에서 성 부속 기관의 안드로겐 의존적 성장을 결정하는데 사용된다.
수컷 미성숙 래트 (생후 19 내지 20일 된 스프라그-돌리, 할란 (Harlan) 스프라그-돌리)을 메토판 (metofane) 마취 하에 거세하였다. 수술 후 5일 째에 이들 거세된 래트 (60 내지 70 g, 생후 23 내지 25 일)에게 3일간 투여하였다. 동물들에게 아라키스 오일 비히클 중의 테스토스테론 프로피오네이트 (TP)를 1 mg/kg으로 피하(s.c.) 투여하고 시험 화합물 (본 발명의 화합물)을 80 ％ PEG 400 및 20 ％ 트윈 (Tween) 80 (PEGTW)에 용해시킨 현탁액으로 위관 영양법 (p.o.)에 의해 경구 투여하였다. 동물들에게 체중 100 g 당 0.5 ml (v/w)의 비히클을 투여하였다. 실험군은 다음과 같다:
1. 대조군 비히클
2. 테스토스테론 프로피오네이트 (TP) (래트에게 1일 3 mg 피하투여)
3. TP + 카소덱스 (PEGTW, QD 중에서 p.o. 투여, 참고 화합물로서 인정된 항안드로겐).
4. 길항제 활성을 측정하기 위하여 시험 화합물을 TP (2군에 s.c. 투여)와 함께 투여량 범위 내에서 투여(PEGTW, QD 중에서 p.o.투여).
5. 작용제 활성을 측정하기 위하여 시험 화합물을 투여량 범위 내에서 단독 투여 (PEGTW, QD 중에서 p.o.투여).
3일의 처치가 끝났을 때 동물들을 죽이고 복부 전립선의 무게를 재었다. 다른 실험으로부터의 데이타와 비교하기 위하여 먼저 성 기관의 무게를 체중 100 g 당 mg으로 표준화하고 TP에 의해 유도된 기관 무게의 증가를 최대 증가 (100 ％)로 간주하였다. 아노바 (ANOVA) 후에 스튜덴트 (Student) 또는 피셔 (Fischer)의 단측 정확 검정을 통계적 분석에 사용하였다.
성 기관 무게의 증가 또는 감소는 혈청 안드로겐 농도에 따른 세포수 (DNA 함량) 및 세포 질량 (단백질 함량)의 변화를 반영한다 (문헌 [Okuda et al., J. Urol.,145, 188-191 (1991)] 참조). 그러므로 기관 습윤 중량의 측정은 안드로겐 및 안드로겐 길항제의 생물활성을 지시하기에 충분하다. 거세된 미성숙 래트에서 외인성 안드로겐의 대체는 투여량에 의존적인 방식으로 정낭 (SV) 및 복부 전립선 (VP)을 증가시켰다.
기관 무게에서 최대 증가는 3일 동안 래트에 3 mg/일의 테스토스테론 (T) 또는 래트에 1 mg/일의 테스토스테론 프로피오네이트 (TP)를 투여하였을 때 4배 내지 5배였다. T 및 TP의 EC50은 각각 약 1 mg 및 0.03 mg이었다. 또한 VP 및 SV 무게의 증가는 혈청 T 및 DHT 농도의 증가와 정비례 관계였다. 피하 주사 후 2시간 째에 T의 투여로 TP의 농도보다 T 및 DHT의 혈청 농도가 5배 더 높게 나타났음에도 불구하고, 그 이후에 이 높은 수준은 매우 급속하게 하락하였다. 반대로, TP-처리된 동물에서 T 및 DHT의 혈청 농도는 24시간 동안 매우 일정하였고, 그리하여 TP는 유리 T보다 10 내지 30배 높은 효능을 나타내었다.
또한, 이 거세된 미성숙 래트 모델에서, 공지된 AR 길항제 (카소덱스)를 투여량 의존적인 방식으로 VP 및 SV 무게의 테스토스테론-매개 증가를 억제하는 0.1 mg의 TP (ED80)와 함께 동시 투여하였다. 길항제 효과는 경구 또는 피하 투여되었을 때 유사하였다. 또한 본 발명의 SARM은 VP 및 SV 무게의 테스토스테론-매개 증가를 억제함으로써 AR 길항제 활성을 나타내었다.
실시예 8: 항문 거근 및 전립선 습윤 중량 분석 AR 작용제 분석
AR 작용제로서 시험 화합물의 활성을 주어진 화합물에 대한 근육에서의 동화 효과 및 성 기관에서의 지속 효과의 승인된 시험인 미성숙 수컷 래트 모델에서 조사하였다 (문헌 [Hershberger et al., Proc. Soc. Expt. Biol. Med.,83, 175 (1953)]; [Beyler et al., J. Amer. Med. Women's Ass.,23, 708 (1968)]; [Fukuda et al., Nago Dai. Yak. Ken. Nem.14, 84 (1966)] 참조). 이 분석은 동물 또는 인간에서 근육 조직 및 성 부속 기관의 유지 및 성장에 있어서 안드로겐성 약제의 잘 정의된 작용에 기초한다. 테스토스테론 (T)과 같은 안드로겐성 스테로이드는 근육 질량을 유지시키는 능력을 특징으로 한다. 거세 후에 동물 또는 인간을 T의 외인성 공급원으로 처리하는 것은 근위축의 역전을 야기시킨다. 래트의 항문 거근근육에서 근위축에 대한 T의 효과는 특성화되어 있다 (문헌 [Masuoka et al., Am. J. Anat.119, 263 (1966)]; [Gori et al., Boll.-Soc. Ital. Biol. Sper.42, 1596 (1966)]; [Gori et al., Boll.-Soc. Ital. Biol. Sper.42, 1600 (1966)]; [Boris et al., Steroid15, 61 (1970)] 참조). 실시예 6에 기재한 바와 같이, 전립선 및 정낭과 같은 수컷 성 부속 기관의 유지에 있어서 안드로겐의 효과가 잘 기재되어 있다. 거세는 전립선 및 정낭의 급속한 퇴화 및 위축을 야기시킨다. 이 효과를 안드로겐의 외인성 첨가에 의해 역전시킬 수 있다. 항문 거근 근육 및 수컷 성 기관 모두 안드로겐성 약제의 효과에 가장 반응성이 높은 조직이기 때문에, 이 모델은 거세된 미성숙 래트에서의 항문 거근 근육 및 성 부속 기관 위축의 안드로겐 의존성 역전을 결정하기 위해 사용된다.
성적으로 성숙한 래트 (200 내지 250 g, 생후 6 내지 8주, 스프라그-돌리, 할란)을 거세된 상태로 제조자 (타코닉사 (Taconic))로부터 공급받았다. 래트를 군으로 나누고 7 내지 14일 동안 다음 중 하나로 매일 처리하였다:
1. 대조군 비히클
2. 테스토스테론 프로피오네이트 (TP) (래트에게 1일 3 mg 피하 투여)
3. TP + 카소덱스 (PEGTW, QD 중에서 p.o. 투여, 참고 화합물로서 인정된 항안드로겐).
4. 길항제 활성을 측정하기 위하여 시험 화합물을 TP (2군에 s.c. 투여)와 함께 투여량 범위 내에서 투여(PEGTW, QD 중에서 p.o.투여).
5. 작용제 활성을 측정하기 위하여 시험 화합물을 투여량 범위 내에서 단독 투여(PEGTW, QD 중에서 p.o.투여).
7 내지 14일의 처치가 끝났을 때 동물들을 이산화탄소에 의해 죽이고, 항문 거근, 정낭 및 복부 전립선의 무게를 재었다. 다른 실험으로부터의 데이타와 비교하기 위하여 먼저 항문 거근 근육 및 성 기관의 무게를 체중 100 g당 mg으로 표준화하고 TP에 의해 유도된 기관 무게의 증가를 최대 증가 (100 ％)로 간주하였다. 수퍼-아노바 (Super-anova) (1 요인)를 통계적 분석에 사용하였다.
성 기관 무게의 증가 또는 감소는 혈청 안드로겐 농도에 따른 세포수 (DNA 함량) 및 세포 질량 (단백질 함량)의 변화를 반영한다 (문헌 [Okuda et al., J. Urol.,145, 188-191 (1991)] 참조). 그러므로 기관 습윤 중량의 측정은 안드로겐 및 안드로겐 길항제의 생물활성을 지시하기에 충분하다. 거세된 미성숙 래트에서 외인성 안드로겐의 대체는 투여량 의존적인 방식으로 항문 거근, 정낭 (SV) 및 전립선을 증가시켰다.
기관 무게에서 최대 증가는 3일 동안 래트에 3 mg/일의 테스토스테론 (T) 또는 래트에 1 mg/일의 테스토스테론 프로피오네이트 (TP)를 투여하였을 때 4배 내지 5배였다. T 및 TP의 EC50은 각각 약 1 mg 및 0.03 mg이었다. 또한 VP 및 SV 무게의 증가는 혈청 T 및 DHT 농도의 증가와 정비례 관계였다. 피하 주사 후 2시간 째에 T의 투여로 TP의 농도보다 T 및 DHT의 혈청 농도가 5배 더 높게 나타났음에도 불구하고, 이 높은 수준은 매우 급속하게 하락하였다. 반대로, TP-처리된 동물에서 T 및 DHT의 혈청 농도는 24시간 동안 매우 일정하였고, 그리하여 TP는 유리 T보다 10 내지 30배 높은 효능을 나타내었다.
실시예 9: 성숙 래트 전립선 무게 분석
또한 시험 화합물의 활성을 성숙 수컷 래트 모델에서 조사하였는데, 이는 실시예 7에 기재된 항문 거근 및 전립선 습윤 중량 변화 분석이다. 실시예 6 및 7의 생체내 분석은 주어진 화합물에 대한 근육에서의 동화 효과 및 성 기관에서의 지속 효과를 결정하기 위한 인정된 시험이다 (문헌 [Hershberger et al., Proc. Soc. Expt. Biol. Med.,83, 175 (1953); [Beyler et al., J. Amer. Med. Women's Ass.23, 708 (1968)]; [Fukuda et al., Nago Dai. Yak. Ken. Nem.14, 84 (1966)] 참조). 이 분석은 동물 및 인간에서 근육 조직 및 성 부속 기관의 유지 및 성장에 있어서 안드로겐성 약제의 잘 정의된 작용에 기초한다.
수컷 성 부속 기관, 예를 들면 전립선 및 정낭은 생식 기능에 있어서 중요한 역할을 한다. 이들 분비샘은 성장하도록 자극받고, 뇌하수체의 황체호르몬 (LH) 및 여포 자극 호르몬 (FSH)의 조절 하에 정소의 라이디히 세포에 의해 생산되는 주요 혈청 안드로겐(> 95 ％)인 혈청 테스토스테론 (T)의 계속적인 존재에 의해 크기 및 분비 기능을 유지한다. 테스토스테론은 전립선 내에서 5α-리덕타제에 의해 보다 활성 형태인 디히드로테스토스테론 (DHT)으로 전환된다. 부신 안드로겐은 또한 65세 남성에서 총 DHT의 40 ％에 기여하는 데 비해 래트 전립선에서 총 DHT의 약 20 ％에 기여한다 (문헌 [Labrie et al. Clin. Invest. Med.,16, 475-492 (1993)] 참조). 그러나 동물 및 인간 모두에서 거세가 수반된 부신 적출술 없이도 전립선 및 정낭의 거의 완전한 퇴화를 초래하기 때문에 이것은 주요 경로가 아니다. 그러므로, 정상 조건 하에서 부신은 전립선 조직의 중요한 성장을 지지하지 않는다 (문헌 [Luke, M. C. and Coffey, D. S."The Physiology of Reproduction" ed. By E. Knobil and J. D. Neill, 1, 1435-1487 (1994)] 참조). 수컷의 성 기관 및 항문 거근은 안드로겐 활성화의 조절에 가장 반응성이 높은 조직이기 때문에, 이 모델은 성숙 래트에서 안드로겐 수용체 경로를 조절하는 화합물의 활성을 결정하는데 사용된다.
전립선, 정낭 및 근육과 같은 조직 상에서 유사분열 촉진 인자와 함께, 테스토스테론은 또한 그의 생합성에 있어서 음성 조절인자로서 작용한다. 정소의 라이디히 세포에서 테스토스테론 생성은 뇌하수체 분비샘으로부터 방출되어 순환하는 LH의 수준에 의해 조절된다. LH 수준은 시상하부 지역에서 생성된 LHRH 수준에 의해 스스로 조절된다. 혈액 내 테스토스테론 수준은 LHRH의 분비를 억제하고, 결과적으로는 LH의 수준, 그리고 최종적으로는 순환하는 테스토스테론 수준을 감소시키는 작용을 한다. 시험 화합물에 의해 달성되는 LH의 혈중 수준을 측정함으로써 이 내분비 사이클의 시상하부 축에서 상기 화합물의 작용제 또는 길항제 활성 수준을 결정할 수 있다.
할란 스프라그-돌리 래트 (생후 40 내지 42일, 180 내지 220 g)의 짝지어진 집합에게 80 ％ PEG 400 및 20 ％ 트윈 80 (PEGTW)의 용해시킨 현탁액 중의 시험 화합물을 위관 영양법 (p.o.)에 의해 14일 동안 경구 투여하였다. 두 대조군, 즉 하나는 거세되지 않은 그리고 하나는 거세된 군에게 PEGTW 비히클만 경구 투여하였다. 동물들에게 체중 100 g 당 0.5 ml (v/w)의 비히클을 투여하였다. 실험군은다음과 같다:
1. 거세되지 않은 비히클 (p.o., PEGTW, QD)
2. 대조군 비히클 (p.o., PEGTW, QD)
3. 비아칼루타미드 (Biacalutamide) (카소덱스, 인정된 항안드로겐, 참조 화합물로서) 또는 시험 화합물, PEGTW QD 중에서 p.o. 투여.
14일의 처치가 끝났을 때 동물들을 죽이고 복부 전립선, 정낭 및 항문 거근을 외과적으로 제거하여 무게를 재었다. 다른 실험으로부터의 데이타와 비교하기 위하여 먼저 기관의 무게를 체중 100 g당 mg으로 표준화하고 거세되지 않은 군에서 각각의 기관 값의 퍼센트로서 표현하였다.
래트 황체 호르몬 (rLH)을 바이오트랙 (Biotrak) [125I] 키트 (아머샴 파마시아 바이오테크사)를 이용하여 제조자의 지시에 따라 정량하였다. 분석은 아머렉스 (Amerlex)-M 비드/항체 현탁액에 대해 [125I] rLH가 결합한 혈청 중에 존재하는 LH에 의한 경쟁에 기초한다. 혈청과 인큐베이션한 후에 세척하고 남은 방사능을 표준 곡선에서 외삽법에 의해 추정하여 ng/ml 단위로 판독하였다.
성 기관 및 항문 거근 무게의 증가 또는 감소는 혈청 안드로겐 농도에 따른 세포수 (DNA 함량) 및 세포 질량 (단백질 함량)의 변화를 반영한다 (문헌 [Okuda et al., J. Urol., 145, 188-191 (1991)] 참조). 그러므로 기관 습윤 중량의 측정은 안드로겐 및 안드로겐 길항제의 생물활성을 지시하기에 충분하다. 성숙 래트 분석에서 활성 작용제는 효과가 없거나 또는 1종 이상의 안드로겐 반응성 기관 (항문 거근, 전립선, 정낭)의 무게를 증가시킬 것이고, LH 분비에 있어서는 효과가 없거나 억제 효과를 가질 것이다. 길항제 활성을 갖는 화합물은 1종 이상의 안드로겐 반응성 기관 (항문 거근, 전립선, 정낭)의 무게를 감소시킬 것이고 LH 분비에 있어서 효과가 없거나 감소된 억제 효과를 가질 것이다.
실시예 10: MDA PCa2b 인간 전립선 이종이식 분석
생체내 항종양 시험에 있어서, MDA-PCa-2b 인간 전립선 종양을 Balb/c nu/nu 누드 마우스에서 유지시켰다. 공여자 마우스에서 얻은 종양 단편을 이용하여 종양을 성숙 수컷 누드 마우스 (생후 4 내지 6주)에서 피하 이식체로서 증식시켰다. 종양 계대 접종을 매 5 내지 6주마다 수행하였다.
항종양 효능 시험에 있어서, 의미있는 반응을 탐지하기 위해 필요한 요구된 수의 동물들을 실험의 개시시점에서 모아 각각에 종양 단편 (~50 mg)을 13-게이지 외관침으로 피하 이식시켰다. 종양을 약 100 내지 200 mg (범위를 초과하는 종양은 배제함)이 되도록 키우고 동물들을 공평하게 다양한 처치군과 대조군으로 나누었다. 각 동물의 처치는 각자의 체중에 기초하였다. 처치된 동물들을 매일 독성/사망 관련 처치에 대하여 체크하였다. 동물들의 각각의 군을 처치 시작 (Wt1) 전에 체중을 잰 다음 마지막 처치 투여 (Wt2) 후에 다시 채중을 재었다. 체중의 차이 (Wt2-Wt1)는 처치-관련 독성의 측정치이다.
종양 반응성을 종양이 소정의 "목표" 크기인 0.5 gm에 도달하기 전까지 일주일에 2회 캘리퍼스로 종양을 측정함으로써 결정하였다. 종양의 무게 (mg)를 다음 식으로부터 추정하였다:
종량 무게 = (길이 x 폭2)÷2
종양 반응 종료점을 대조군 (C) 종양의 종양 중량 중간값에 대한 처치 (T) 종양의 종양 중량 중간값 비율로서 정의한 종양 성장 억제율 (％ T/C)라는 용어로 표현하였다.
종양 세포 사멸을 측정하기 위하여, 먼저 종양 부피가 두배로 되는 시간을 다음 식으로 계산하였다:
TVDT = 대조군 종양이 목표 크기에 도달하는데 걸리는 시간 (일수)의 중간값 - 대조군 종양이 목표 크기의 절반에 도달하는데 걸리는 시간 (일수)의 중간값.
그 다음 로그 세포 사멸을 다음 식으로 계산하였다:
로그 세포 사멸= (T-C)÷(3.32 x TVDT)
데이타의 통계적 평가를 게한 (Gehan)의 일반화된 윌콕손 (Wilcoxon) 검정을 사용하여 수행하였다.
실시예 11 : CWR22 인간 전립선 이종이식 분석
생체내 항종양 시험을 또한 Balb/c nu/nu 누드 마우스에서 유지시킨 CWR22 인간 전립선 종양으로 수행하였다. 공여체 마우스로부터 얻은 종양 단편을 사용하여 종양을 성숙 수컷 누드 마우스 (생후 4 내지 6주)에서 피하 이식체로서 증식시켰다. 종양 계대 접종을 매 5 내지 6주마다 수행하였다.
항종양 효능 시험에 있어서, 의미있는 반응을 탐지하기 위해 필요한 요구된 수의 동물들을 실험의 개시시점에서 모아 각각에 종양 단편 (~50 mg)을 13-게이지 외관침으로 피하 이식시켰다. 종양을 약 100 내지 200 mg (범위를 초과하는 종양은 배제함)이 되도록 키우고 동물들을 공평하게 다양한 처치군과 대조군으로 나누었다. 각 동물의 처치는 각자의 체중에 기초하였다. 처치된 동물들을 매일 독성/사망 관련 처치에 대하여 체크하였다. 동물들의 각각의 군을 처치 시작 (Wt1) 전에 체중을 잰 다음 마지막 처치 투여 (Wt2) 후에 다시 채중을 재었다. 체중의 차이 (Wt2-Wt1)는 처치-관련 독성의 측정치이다.
종양 반응성을 종양이 소정의 "목표" 크기인 0.5 gm에 도달하기 전까지 일주일에 2회 캘리퍼스로 종양을 측정함으로써 결정하였다. 종양의 무게 (mg)를 다음 식으로부터 추정하였다:
종량 무게 = (길이 x 폭2)÷2
종양 반응 종료점을 대조군 (C) 종양의 종양 중량 중간값에 대한 처치 (T) 종양의 종양 중량 중간값 비율로서 정의한 종양 성장 억제율 (％ T/C)라는 용어로 표현하였다.
종양 세포 사멸을 측정하기 위하여, 먼저 종양 부피가 두배로 되는 시간을 다음 식으로 계산하였다:
TVDT = 대조군 종양이 목표 크기에 도달하는데 걸리는 시간 (일수)의 중간값 - 대조군 종양이 목표 크기의 절반에 도달하는데 걸리는 시간 (일수)의 중간값.
그 다음 로그 세포 사멸을 다음 식으로 계산하였다:
로그 세포 사멸= (T-C)÷(3.32 x TVDT)
데이타의 통계적 평가를 게한 (Gehan)의 일반화된 윌콕손 (Wilcoxon) 검정을 사용하여 수행하였다.
실시예 12: 더닝 (Dunning) R3327H 래트 전립선 종양 분석
더닝 R3327H 전립선 종양은 전립선의 자발적으로 유도된, 잘 분화된 안드로겐 반응성 선암이다 (문헌 [Smolev et al. Cancer Treat Rep.61, 273-287 (1977)] 참조). R3327H 서브라인 (subline)의 성장은, 거세되지 않은 수컷 래트에서 높은 안드로겐-의존성 및 생식가능한 성장으로 선별하였다. 그러므로, 이 종양 모델 및 다른 서브라인은 항안드로겐, 예를 들면 플루타미드 및 바실루트아미드/카소덱스의 생체내 항종양 활성을 평가하는데 폭넓게 사용되어 왔다 (문헌 [Maucher A., and von Angerer, J. Cancer Res. Clin,. Oncol. 119,669-674 (1993)], [Furr B. J. A. Euro. URL. 18 (suppl. 3), 2-9 (1990)], [Shain S. A. and Huot RI. J Steriod Biochem.31, 711-718 (1988)] 참조). 이 분석을 위하여, 더닝 종양 조각 (약 4 x 4 mm)을 성숙 수컷 코펜하겐 래트 (생후 6 내지 7주, 할란-스프라그 돌리, 메릴랜드주 인디애나폴리스 소재)의 옆구리에 피하 이식하였다. 이식 후 약 6주째에 측정가능한 크기 (약 80 내지 120 mm2)의 종양을 갖는 동물을 처치군 (군 당 8 내지 10 마리의 래트)으로 임의 추출하고 처치를 시작하였다. 래트의 한 군을 거세하여 종양 증식의 음성 대조군으로 하였다. 동물들을 매일 시험 화합물, 바실루트아미드와 같은 표준 항안드로겐 또는 비히클 (대조군)으로 평균 10 내지 14 주 동안 처치하였다. 시험 화합물을 1 ％ 카르복시메틸 셀룰로스 중의 10 ％ 폴리에틸렌 글리콜 및 0.05 ％ 트윈-80 (PEG/CMC) 비히클 (체중 1 kg 당 2.5 ml)에 용해시켰다 (미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마사). 전형적으로 실험에는 각각의 표준 또는 시험 화합물에 대한 세 단계 상승 투여의 세가지 군이 포함된다 (300 내지 3 mg/kg의 범위).
비히클 군의 종양 및 대조군의 종양은 크기 1500 내지 2500 mm3에 도달하였다. 반대로, 거세된 동물군은 전형적으로 14주의 관찰 기간에 걸쳐 종양 울혈 (stasis)을 나타내었다. 20 mg/kg의 바실루트아미드 또는 플루타미드로 경구 처치된 동물들은 14주의 처치 후에 대조군에 비해 종양 부피에 있어서 40 ％의 감소를 나타낼 것으로 기대하였다. 종양의 크기를 버니어 캘리퍼스 (스위스 소재의 프로보쯔사 (Froboz))에 의해 매주 측정하여 길이 및 폭의 수직 측정값을 얻었다. 종양의 부피를 다음 식을 사용하여 mm3로 얻었다: 길이 x 폭 x 높이 = 부피. 처치군과 대조군의 통계적 차이를 다중 아노바 분석을 사용한 후에 단측 비모수 스튜덴트 t 검정을 사용하여 평가하였다.
실시예 13: 더닝 R3327H 래트 전립선 종양 및 전립선 습윤 중량 분석
실시예 11에 기재된 바와 같이 더닝 종양 조각 (약 4 x 4 mm)을 성숙 수컷 코펜하겐 래트 (생후 6 내지 7주, 할란-스프라그 돌리, 메릴랜드주 인디애나폴리스 소재)의 옆구리에 피하 이식하였다. 이식 후 약 6주 째에 측정가능한 크기 (약 80 내지 120 mm2)의 종양을 갖는 동물을 처치군 (군 당 8 내지 10 마리의 래트)으로 임의 추출하고 처치를 시작하였다. 래트의 한 군을 거세하여 종양 증식의 음성 대조군으로 하였다. 동물들을 매일 시험 화합물, 바실루트아미드와 같은 표준 항안드로겐 또는 비히클 (대조군)으로 평균 10 내지 14 주 동안 처치하였다. 시험 화합물을 1 ％ 카르복시메틸 셀룰로스 중의 10 ％ 폴리에틸렌 글리콜 및 0.05 ％ 트윈-80 (PEG/CMC) 비히클 (체중 1 kg 당 2.5 ml)에 용해시켰다 (미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마사). 전형적으로 실험에는 각각의 표준 또는 시험 화합물에 대한 세 단계 상승 투여의 세가지 군이 포함된다 (300 내지 3 mg/kg의 범위).
비히클 군의 종양 및 대조군의 종양은 크기 1500 내지 2500 mm3에 도달하였다. 반대로, 거세된 동물군은 전형적으로 14주의 관찰 기간에 걸쳐 종양 울혈을 나타내었다. 20 mg/kg의 바실루트아미드 또는 플루타미드로 경구 처치된 동물들은 14주의 처치 후에 대조군에 비해 종양 부피에 있어서 40 ％의 감소를 나타낼 것으로 기대하였다. 종양의 크기를 버니어 캘리퍼스 (스위스 소재의 프로보쯔사)에 의해 매주 측정하고 길이 및 폭의 수직 측정값을 얻었다. 종양의 부피를 다음 식을 사용하여 mm3로 얻었다: 길이 x 폭 x 높이 = 부피. 처치군과 대조군의 통계적 차이를 다중 아노바 분석을 사용한 후에 단측 비모수 스튜덴트 t 검정을 사용하여 평가하였다.
처치가 끝났을 때, 동물들을 죽이고 복부 전립선, 정낭 및 항문 거근을 외과적으로 제거하여 무게를 재었다. 다른 실험으로부터의 데이타와 비교하기 위하여 먼저 기관의 무게를 체중 100 g당 mg으로 표준화하고 거세되지 않은 군에서 각각의 기관 값의 퍼센트로서 표현하였다.
래트 황체 호르몬 (rLH)을 바이오트랙 [125I] 키트 (아머샴 파마시아 바이오테크사)를 이용하여 제조자의 지시에 따라 정량하였다. 분석은 아머렉스-M 비드/항체 현탁액에 대해 [125I] rLH가 결합한 혈청 중에 존재하는 LH에 의한 경쟁에 기초한다. 혈청과 인큐베이션한 후에 세척하고 남은 방사능을 표준 곡선에서 외삽법에 의해 추정하여 ng/ml 단위로 판독하였다.
성 기관 및 항문 거근 무게의 증가 또는 감소는 혈청 안드로겐 농도에 따른 세포수 (DNA 함량) 및 세포 질량 (단백질 함량)의 변화를 반영한다 (문헌 [Okuda et al., J. Urol., 145, 188-191 (1991)] 참조). 그러므로 기관 습윤 중량의 측정은 안드로겐 및 안드로겐 길항제의 생물활성을 지시하기에 충분하다. 성숙 래트 분석에서 활성 작용제는 효과가 없거나 또는 1종 이상의 안드로겐 반응성 기관 (항문 거근, 전립선, 정낭)의 무게를 증가시킬 것이고, LH 분비에 있어서는 효과가 없거나 억제 효과를 가질 것이다. 길항제 활성을 갖는 화합물은 1종 이상의 안드로겐 반응성 기관 (항문 거근, 전립선, 정낭)의 무게를 감소시킬 것이고 LH 분비에 있어서 효과가 없거나 감소되는 억제 효과를 가질 것이다.

Claims (24)

  1. 호르몬 의존성 종양 세포의 증식 억제를 필요로 하는 환자에게, 호르몬 의존성 종양에서는 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나 작용제 활성을 나타내는 선택적 안드로겐 수용체 조절제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 호르몬 의존성 종양 세포의 증식을 억제하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 종양 세포가 전립선암 세포이고, 상기 선택적 안드로겐 수용체 조절제가 상기 종양 세포에서는 길항제 활성을 나타내고 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나 작용제 활성을 나타내는 것에 더하여, 정상 전립선 조직에 대해 작용제 또는 길항제 활성을 나타내거나 활성을 나타내지 않는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 선택적 안드로겐 수용체 조절제가 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해 작용제 활성을 나타내는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 선택적 안드로겐 수용체 조절제가 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해 활성을 나타내지 않는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 호르몬 의존성 종양이 전립선암인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직이 정낭, 남성 및 여성 생식기, 피부, 정소, 난소, 연골, 피지선, 모낭, 땀샘, 근육, 위장 혈관 세포, 갑상선 소포 세포, 부신 피질, 간, 송과선, 골, 간질세포, 신장관, 방광 및(또는) 뇌 피질 및 피질 하부 영역 중 하나 이상의 조직을 포함하는 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직이 심근, 골격근 및(또는) 평활근 중 하나 이상의 조직을 포함하는 것인 방법.
  8. 호르몬 의존성 종양에서는 길항제 활성을 나타내지만, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비종양 조직에 대해서는 활성이 없거나 작용제 활성을 나타내는 선택적 안드로겐 수용체 조절제.
  9. 환자에게 제8항의 선택적 안드로겐 수용체 조절제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 선택적 안드로겐 수용체 조절제의 투여에 의해 치료될 수 있는 다모증, 좌창, 지루, 알츠하이머 질환, 안드로겐성 탈모증, 성선 기능저하증, 과다모증, 양성 전립선 비대증, 전립선의 선종 또는 종양, 안드로겐 수용체를 함유하는 양성 또는 악성 종양 세포, 췌장암, 항-신생혈관형성제로서의 사용을 위한 VEGF의 발현 조절, 골다공증, 정자 형성 억제, 성욕, 악액질, 자궁내막증, 다낭성 난소 증후군, 식욕 감퇴, 안드로겐 의존성 노화 관련 질환 및 증상, 남성 폐경, 남성 호르몬 대체 요법, 남성 및 여성 성기능부전, 및 보행가능한 환자의 근육 위축증로부터 선택된 증상의 치료 방법.
  10. 시험 화합물을 호르몬 의존성 종양 세포주의 증식 억제에 대해 스크리닝하고, 상기 시험 화합물을 안드로겐 수용체를 함유하는 비악성 세포주에서의 안드로겐 수용체 활성에 대해 스크리닝하는 것을 포함하며, 호르몬 의존성 종양 세포주의 증식은 억제하지만 비악성 세포주에서 안드로겐 수용체 활성이 없거나 안드로겐 수용체 활성의 활성화를 나타내는 시험 화합물을 선택적 안드로겐 수용체 조절제로서 확인하는, 제8항의 선택적 안드로겐 수용체 조절제를 확인하는 방법.
  11. 호르몬 의존성 종양에 걸린 동물 모델에서 이 호르몬 의존성 종양의 증식 억제와, 안드로겐 수용체를 함유하는 다른 비악성 조직에서 안드로겐 수용체의 활성화 둘 다에 대해 시험 화합물을 스크리닝하는 것을 포함하며, 호르몬 의존성 종양의 증식은 억제하지만, 상기 동물 모델의 비악성 조직에서는 안드로겐 수용체 활성이 없거나 안드로겐 수용체 활성의 활성화를 나타내는 시험 화합물을 선택적 안드로겐 수용체 조절제로서 확인하는, 제8항의 선택적 안드로겐 수용체 조절제를 확인하는 방법.
  12. 표 A의 구조 좌표에 의해 정의된 3차원 결정 구조의 분자 또는 분자 복합체.
  13. 표 A에 따른 AR-LBD 아미노산 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 및 L907의 구조 좌표에 의해 정의된 리간드 결합 부위의 전부 또는 임의 일부를 포함하는 분자 또는 분자 복합체, 또는 상기 분자 또는 분자 복합체의 돌연변이체 또는 상동체.
  14. 제13항에 있어서, 상기 돌연변이체 또는 상동체가 상기 AR-LBD 아미노산의 골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 1.5Å 이하이거나 상기 AR-LBD 아미노산과 30％의 서열 동일성을 나타내는 결합 포켓 (pocket)을 포함하는 것인 분자 또는 분자 복합체.
  15. 표 A에 따른 AR-LBD 아미노산 N705, W741, Q711, R752, F764, T877, M895 및 I898의 구조 좌표에 의해 정의된 리간드 결합 부위의 전부 또는 임의 일부를 포함하는 분자 또는 분자 복합체, 또는 상기 분자 또는 분자 복합체의 돌연변이체 또는 상동체.
  16. 제15항에 있어서, 상기 돌연변이체 또는 상동체가 상기 AR-LBD 아미노산의골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 1.5Å 이하이거나 상기 AR-LBD 아미노산과 30％의 서열 동일성을 나타내는 결합 포켓을 포함하는 것인 분자 또는 분자 복합체.
  17. 표 A에 따른 AR-LBD/AR-LBD 리간드 또는 리간드 복합체, 또는 복합체의 골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 3.0Å이하인 골격 원자를 포함하는 상기 복합체의 상동체의 구조 좌표에 의해 정의된 기계 판독 가능한 데이타로 코딩된 데이타 저장물을 포함하는, 기계 판독 가능한 데이타 저장 매체.
  18. 제17항에 있어서, 상기 AR-LBD/AR-LBD 리간드 또는 리간드 복합체가 상기 아미노산의 골격 원자로부터의 제곱근 평균 제곱 편차가 2.0Å 이하인 상동체인, 기계 판독 가능한 데이타 저장 매체.
  19. 표 A에 따른 AR-LBD/AR-LBD 리간드에 대한 구조 좌표 중 적어도 일부분의 푸리에 (Fourier) 변환을 포함하는 제1 세트의 기계 판독 가능한 데이타에 의해 코딩된 데이타 저장물을 포함하며; 미지 구조의 분자 또는 분자 복합체의 X-선 회절 패턴을 포함하는 제2 세트의 기계 판독 가능한 데이타와, 제1 세트의 데이타와 제2 세트의 데이타를 이용하는 지시가 프로그래밍된 기계를 이용하여 합해질 때, 제2 세트의 기계 판독 가능한 데이타, 상기 제1 세트의 데이타 및 상기 제2 세트의 데이타에 상응하는 구조 좌표의 적어도 일부분을 결정할 수 있는, 기계 판독 가능한데이타 저장 매체.
  20. 표 A에 따른 AR-LBD의 잔기 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907의 임의 일부 또는 전부와 반데르발스 또는 수소결합에 의해 리간드의 일부가 접촉하고 있는, AR 조절제에 대한 AR-LBD에서의 결합 부위.
  21. 제20항에 있어서, AR-LBD가 표 A에 따른 AR-LBD의 잔기 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706, L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907과 25％ 내지 95％의 동일성을 갖는 상동체 또는 돌연변이체인 결합 부위.
  22. a. AR-LBD/AR-LBD 리간드 복합체를 포함하는 결정화 단백질의 3차원 모델을 이용하여 AR-LBD 리간드의 제1 화합물 잔기 하나 이상과 상호작용하는 AR-LBD의 상호작용 아미노산 하나 이상을 결정하고,
    b. 상기 제1 화합물 잔기의 화학 개질을 하나 이상 선택하여, 상기 상호작용 아미노산과 상기 제1 화합물 잔기 사이의 상호작용에 비해 상기 상호작용 아미노산과 제2 화합물 잔기 사이의 상호작용을 감소 또는 증가시키는 구조를 갖는 제2 화합물 잔기를 생성하는 것
    을 포함하는, 안드로겐 수용체 합성 리간드를 고안하는 컴퓨터 방법.
  23. a. 표 A에 따른 구조 좌표에 의해 정의된 AR-LBD 내에 공간적으로 맞는 시험 화합물을 모델링하거나, 또는 AR-LBD, AR-LBD의 돌연변이체 또는 AR-LBD 상동체 또는 그 일부분의 3차원 구조 모델을 이용하는 단계,
    b. 상기 구조 좌표 또는 제20항에 기재된 리간드 결합 부위를 이용하여 구조적 및 화학적 특징을 확인하는 단계,
    c. 확인된 구조적 또는 화학적 특징들을 이용하여 잠재적 SARM으로서의 화합물을 고안 또는 선택하는 단계,
    d. 3차원 구조 모델 또는 리간드 결합 부위를 이용하여 잠재적 SARM으로서의 화합물을 고안 또는 선택하는 단계,
    e. 잠재적 SARM을 합성하는 단계,
    f. 시험 화합물과 AR-LBD와의 결합에 특징이 있는 분석법으로 잠재적 SARM을 스크리닝하는 단계,
    g. 표 A에 따른 AR-LBD의 V685, L700, L701, S702, S703, L704, N705, E706,L707, G708, E709, Q711, A735, I737, Q738, Y739, S740, W741, M742, G743, L744, M745, V746, F747, A748, M749, G750, R752, Y763, F764, A765, L768, F770, M780, M787, I869, L873, H874, F876, T877, F878, L880, L881, V889, F891, P892, E893, M894, M895, A896, E897, I898, I899, S900, V901, Q902, V903, P904, K905, I906 또는 L907로 이루어진 군으로부터 선택되는, AR-LBD로부터의 아미노산 하나 이상을 개질시키거나 치환하는 단계
    의 임의 조합을 포함하는, 안드로겐 수용체 활성을 조절하는 화합물을 확인하는 방법.
  24. 제10항, 제11항, 제22항 또는 제23항의 방법에 따라 선택 또는 고안된 선택적 안드로겐 수용체 조절제, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
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Families Citing this family (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6071957A (en) 1996-11-27 2000-06-06 The University Of Tennessee Research Corporation Irreversible non-steroidal antagonist compound and its use in the treatment of prostate cancer
US6995284B2 (en) 2000-08-24 2006-02-07 The University Of Tennessee Research Foundation Synthesis of selective androgen receptor modulators
CA2413683A1 (en) * 2000-06-28 2002-01-03 Bristol-Myers Squibb Company Fused cyclic compounds as modulators of nuclear hormone receptor function
US20030114420A1 (en) * 2000-06-28 2003-06-19 Salvati Mark E. Fused cyclic modulators of nuclear hormone receptor function
US7001911B2 (en) * 2000-06-28 2006-02-21 Bristol-Myers Squibb Company Fused cyclic modulators of nuclear hormone receptor function
US20040077605A1 (en) * 2001-06-20 2004-04-22 Salvati Mark E. Fused heterocyclic succinimide compounds and analogs thereof, modulators of nuclear hormone receptor function
US20070173546A1 (en) * 2000-08-24 2007-07-26 Dalton James T Selective androgen receptor modulators and method of use thereof
US8008348B2 (en) 2001-12-06 2011-08-30 University Of Tennessee Research Foundation Treating muscle wasting with selective androgen receptor modulators
US6838484B2 (en) 2000-08-24 2005-01-04 University Of Tennessee Research Foundation Formulations comprising selective androgen receptor modulators
US7919647B2 (en) 2000-08-24 2011-04-05 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
US7622503B2 (en) * 2000-08-24 2009-11-24 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
US7026500B2 (en) 2000-08-24 2006-04-11 University Of Tennessee Research Foundation Halogenated selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
US6998500B2 (en) 2000-08-24 2006-02-14 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
US8445534B2 (en) 2000-08-24 2013-05-21 University Of Tennessee Research Foundation Treating androgen decline in aging male (ADAM)-associated conditions with SARMs
US7855229B2 (en) * 2000-08-24 2010-12-21 University Of Tennessee Research Foundation Treating wasting disorders with selective androgen receptor modulators
US7645898B2 (en) * 2000-08-24 2010-01-12 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and method of use thereof
GEP20074144B (en) * 2000-09-19 2007-07-10 Bristol Myers Squibb Co Fused heterocyclic succinimide compounds and analogs thereof, modulators of nuclear hormone receptor function
EP1854798A3 (en) * 2000-09-19 2007-11-28 Bristol-Myers Squibb Company Fused heterocyclic succinimide compounds and analogs thereof, modulators of nuclear hormone receptor function
US20040087548A1 (en) * 2001-02-27 2004-05-06 Salvati Mark E. Fused cyclic succinimide compounds and analogs thereof, modulators of nuclear hormone receptor function
US20080249183A1 (en) * 2001-11-29 2008-10-09 Steiner Mitchell S Treatment of androgen-deprivation induced osteoporosis
US20060269611A1 (en) * 2001-11-29 2006-11-30 Steiner Mitchell S Prevention and treatment of androgen-deprivation induced osteoporosis
US20050080143A1 (en) * 2001-11-29 2005-04-14 Steiner Mitchell S. Treatment of androgen-deprivation induced osteoporosis
US20070161608A1 (en) * 2001-12-06 2007-07-12 Dalton James T Selective androgen receptor modulators for treating muscle wasting
US8853266B2 (en) * 2001-12-06 2014-10-07 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators for treating diabetes
DK1463497T3 (da) 2001-12-06 2012-01-30 Gtx Inc Behandling af muskelsvind med selektive androgenreceptormodulatorer
TWI263640B (en) * 2001-12-19 2006-10-11 Bristol Myers Squibb Co Fused heterocyclic succinimide compounds and analogs thereof, modulators of nuclear hormone receptor function
JP4434740B2 (ja) 2001-12-19 2010-03-17 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 核ホルモン受容体機能の調節剤である、縮合ヘテロ環化合物およびその類似体
EP1480634B1 (en) 2002-02-07 2011-08-03 University of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators (SARMs) for treating benign prostate hyperplasia
US7772433B2 (en) * 2002-02-28 2010-08-10 University Of Tennessee Research Foundation SARMS and method of use thereof
WO2003074450A2 (en) 2002-02-28 2003-09-12 The University Of Tennessee Research Corporation Radiolabeled selective androgen receptor modulators and their use in prostate cancer imaging and therapy
ATE533494T1 (de) 2002-02-28 2011-12-15 Univ Tennessee Res Foundation Mehrfach substituierte selektive androgen- rezeptor-modulatoren und anwendungsverfahren dafür
US7803970B2 (en) 2002-02-28 2010-09-28 University Of Tennessee Research Foundation Multi-substitued selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
EP1359160A1 (en) * 2002-02-28 2003-11-05 Pfizer Products Inc. Androgen receptor overexpressing skeletal myoblasts
WO2003106401A1 (en) 2002-06-17 2003-12-24 University Of Tennessee Research Foundation N-bridged selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
US7741371B2 (en) 2002-06-17 2010-06-22 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
EP1553074B1 (en) * 2002-08-12 2014-06-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Fused benzene derivative and use
CA2501797A1 (en) * 2002-10-15 2004-04-29 Gtx, Inc. Treating obesity with selective androgen receptor modulators
US20060276539A1 (en) * 2002-10-16 2006-12-07 Dalton James T Treating Androgen Decline in Aging Male (ADAM)- associated conditions with SARMS
US8309603B2 (en) 2004-06-07 2012-11-13 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
US7332525B2 (en) 2003-01-17 2008-02-19 Castle Erik P Method of treatment of prostate cancer and composition for treatment thereof
FR2860793A1 (fr) * 2003-10-14 2005-04-15 Entomed Composes derives de norcantharidine, leurs procedes de preparation, les compositions les contenant et leurs utilisations
CN101721402B (zh) * 2003-10-14 2013-03-13 田纳西大学研究基金会 用选择性雄激素受体调节剂治疗骨相关病症
EP2428516A1 (en) 2003-11-19 2012-03-14 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel phosphorus-containing thyromimetics
KR101536701B1 (ko) 2004-01-07 2015-07-14 앙도르쉐르슈 인코포레이티드 헬릭스 12 배향형 스테로이드계 약학 제품
US7417040B2 (en) * 2004-03-01 2008-08-26 Bristol-Myers Squibb Company Fused tricyclic compounds as inhibitors of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3
US7378426B2 (en) * 2004-03-01 2008-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Fused heterotricyclic compounds as inhibitors of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3
US20110237664A1 (en) * 2004-06-07 2011-09-29 Dalton James T Selective androgen receptor modulators for treating diabetes
US9884038B2 (en) 2004-06-07 2018-02-06 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulator and methods of use thereof
US9889110B2 (en) 2004-06-07 2018-02-13 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulator for treating hormone-related conditions
US7709516B2 (en) 2005-06-17 2010-05-04 Endorecherche, Inc. Helix 12 directed non-steroidal antiandrogens
EP1911743B8 (en) 2005-08-01 2013-01-16 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cyclic amine compound
JP2009507843A (ja) * 2005-09-09 2009-02-26 シェーリング コーポレイション アザ縮合サイクリン依存性キナーゼ阻害剤
US7790745B2 (en) 2005-10-21 2010-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Tetrahydroisoquinoline LXR Modulators
US7741317B2 (en) 2005-10-21 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company LXR modulators
US7888376B2 (en) 2005-11-23 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic CETP inhibitors
US20100004249A1 (en) * 2006-07-11 2010-01-07 Takahiro Matsumoto Bicyclic heterocyclic compound and use thereof
US10010521B2 (en) 2006-08-24 2018-07-03 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
US9730908B2 (en) 2006-08-24 2017-08-15 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
US9844528B2 (en) 2006-08-24 2017-12-19 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
PL2054049T3 (pl) 2006-08-24 2016-11-30 Podstawione acyloanilidy i sposoby ich stosowania
US7468439B2 (en) * 2006-09-06 2008-12-23 Bristol-Myers Squibb Company Alkylene bridged sultam compounds useful as modulators of nuclear hormone receptor function
CN101663262B (zh) 2006-12-01 2014-03-26 百时美施贵宝公司 用于治疗动脉粥样硬化和心血管疾病的作为cetp抑制剂的n-(3-苄基)-2,2-(二苯基)-丙-1胺衍生物
US20080176255A1 (en) * 2007-01-23 2008-07-24 Edward Sobek Mold detection composition and methods
US9284345B2 (en) 2007-04-12 2016-03-15 Endorecherche, Inc. 17alpha-substituted steroids as systemic antiandrogens and selective androgen receptor modulators
JP2010531894A (ja) 2007-06-27 2010-09-30 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 核ホルモン受容体機能のモジュレーターとして有用な縮合ヘテロ環化合物
US7968603B2 (en) 2007-09-11 2011-06-28 University Of Tennessee Research Foundation Solid forms of selective androgen receptor modulators
WO2009059077A1 (en) * 2007-11-01 2009-05-07 Bristol-Myers Squibb Company Fused heterocyclic compounds useful as modulators of nuclear hormone receptor function
EP2222636B1 (en) 2007-12-21 2013-04-10 Ligand Pharmaceuticals Inc. Selective androgen receptor modulators (sarms) and uses thereof
US8268872B2 (en) 2008-02-22 2012-09-18 Radius Health, Inc. Selective androgen receptor modulators
BRPI0907844B8 (pt) * 2008-02-22 2021-05-25 Radius Health Inc compostos e método para modular um receptor de andrógeno, processos de preparação e composição farmacêutica dos mesmos e seus usos
US20090280112A1 (en) * 2008-05-05 2009-11-12 The Regents Of The University Of California Inhibitory effects of nordihydroguaiaretic acid (ndga) on the igf-1 receptor and androgen dependent growth of lapc-4 prostate cancer cells
JP5816087B2 (ja) 2008-08-29 2015-11-18 エンメエッセディ・イタリア・エッセ・エッレ・エッレ Ｓｍｏアンタゴニストとしての飽和二環式複素環誘導体
WO2010093601A1 (en) 2009-02-10 2010-08-19 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel sulfonic acid-containing thyromimetics, and methods for their use
EP2531029B1 (en) 2010-02-04 2016-10-19 Radius Health, Inc. Selective androgen receptor modulators
PT2568806T (pt) 2010-05-12 2016-08-05 Radius Health Inc Regimes terapêuticos
US8642632B2 (en) 2010-07-02 2014-02-04 Radius Health, Inc. Selective androgen receptor modulators
ES2550319T3 (es) 2010-09-28 2015-11-06 Radius Health, Inc Moduladores selectivos del receptor de andrógenos
CN102875556B (zh) * 2011-07-12 2016-03-30 天津药明康德新药开发有限公司 (4s)-1-取代-2,5-二氮杂双环[2,2,1]庚烷衍生物及制备方法
AU2013207900B2 (en) * 2012-01-12 2017-12-07 Cambridge Enterprise Limited Compounds and methods for the enhanced degradation of targeted proteins and other polypeptides by an E3 ubiquitin ligase
US9969683B2 (en) 2012-07-13 2018-05-15 Gtx, Inc. Method of treating estrogen receptor (ER)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMS)
US10987334B2 (en) 2012-07-13 2021-04-27 University Of Tennessee Research Foundation Method of treating ER mutant expressing breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMs)
US10314807B2 (en) 2012-07-13 2019-06-11 Gtx, Inc. Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS)
US9622992B2 (en) 2012-07-13 2017-04-18 Gtx, Inc. Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs)
US9744149B2 (en) 2012-07-13 2017-08-29 Gtx, Inc. Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs)
US10258596B2 (en) 2012-07-13 2019-04-16 Gtx, Inc. Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS)
LT2872482T (lt) 2012-07-13 2020-12-28 Oncternal Therapeutics, Inc. Krūties vėžių gydymo būdas selektyviu androgeno receptoriaus moduliatoriumi
PE20190845A1 (es) * 2012-07-27 2019-06-17 Aragon Pharmaceuticals Inc Metodos para determinar resistencia a terapia de receptor de androgeno
AU2013306380A1 (en) 2012-08-23 2015-03-05 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Method for determining breast cancer treatment
AR092982A1 (es) 2012-10-11 2015-05-13 Isis Pharmaceuticals Inc Modulacion de la expresion de receptores androgenicos
WO2014130932A2 (en) * 2013-02-25 2014-08-28 Novartis Ag Novel androgen receptor mutation
AU2014223548A1 (en) 2013-02-26 2015-10-15 Triact Therapeutics, Inc. Cancer therapy
EP3044593A4 (en) 2013-09-09 2017-05-17 Triact Therapeutics, Inc. Cancer therapy
US9682960B2 (en) 2013-12-19 2017-06-20 Endorecherche, Inc. Non-steroidal antiandrogens and selective androgen receptor modulators with a pyridyl moiety
EP3613418A1 (en) 2014-01-17 2020-02-26 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating hormone levels
CN105640645A (zh) * 2014-11-26 2016-06-08 华东医院 一种多囊卵巢动物模型的建立方法及其应用
US20170327469A1 (en) 2015-01-20 2017-11-16 Arvinas, Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of androgen receptor
KR20220029783A (ko) * 2015-01-20 2022-03-08 아비나스 오퍼레이션스, 인코포레이티드 안드로겐 수용체의 표적화된 분해를 위한 화합물 및 방법
LT3474841T (lt) 2016-06-22 2022-06-10 Ellipses Pharma Ltd Ar+ krūties vėžio gydymo būdai
PL3660004T3 (pl) * 2016-10-11 2023-10-02 Arvinas Operations, Inc. Związki i sposoby do ukierunkowanej degradacji receptora androgenowego
JP2021512153A (ja) 2018-01-26 2021-05-13 イエール ユニバーシティ タンパク質分解のイミド系モジュレーターおよび使用方法
EP4077309A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 Arvinas Operations, Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of androgen receptor
CN112064141B (zh) * 2020-08-17 2022-11-25 咖法科技(上海)有限公司 一种含茶叶渣的聚乳酸纤维面料制作方法及其面料
US11701332B2 (en) 2020-11-18 2023-07-18 Bryce Nicholas Day Methods and compositions for treating female sexual interest and arousal disorder

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3343940A (en) 1964-06-12 1967-09-26 Pennsalt Chemicals Corp Process for plant desiccation
US3261845A (en) 1964-07-14 1966-07-19 Dow Chemical Co N-phenyl derivatives of 3,6-epoxyhexahydrophthalimide
US3428538A (en) 1966-01-13 1969-02-18 Peter Scheiner Method for preparing aziridines by photolysis of triazolines
JPS4916937B1 (ko) * 1970-01-21 1974-04-25
US4089650A (en) 1971-12-20 1978-05-16 Petrolite Corporation Use of Diels-Alder adducts of dihydro-nitrogen heterocyclic phosphoramidates as corrosion inhibitors
US3821232A (en) 1971-12-20 1974-06-28 Petrolite Corp 1,2-dihydro-pyridine-n-phosphonates and thiophosphonates
US3923490A (en) 1971-12-20 1975-12-02 Petrolite Corp Use of 1,2-dihydro-pyridine-N-phosphonates and thiophosphonates as microbiocides
US3965264A (en) 1971-12-20 1976-06-22 Petrolite Corporation Process for controlling microbiological organisms in aqueous or petroleum hydrocarbon systems
US3998833A (en) 1971-12-20 1976-12-21 Petrolite Corporation Diels-alder adducts of dihydro-nitrogen heterocyclic phosphoramidates
JPS5032306B2 (ko) 1972-11-02 1975-10-20
US3925554A (en) 1972-11-30 1975-12-09 Sumitomo Chemical Co Certain 3,5-dichlorophenyl compound used as a plant fungicide
US3948933A (en) 1973-11-01 1976-04-06 Gruppo Lepetit S.P.A. Pyrrolo[1,2-c]imidazolediones
NL7501563A (nl) 1974-02-28 1975-09-01 Merck & Co Inc Werkwijze voor het bereiden van preparaten te- gen het samenpakken van bloedplaatjes.
US3997293A (en) 1974-03-19 1976-12-14 Petrolite Corporation Use of dihydro-nitrogen heterocyclic phosphoramidates as corrosion inhibitors
JPS5417047Y2 (ko) * 1974-06-24 1979-07-03
FR2329276A1 (fr) 1975-10-29 1977-05-27 Roussel Uclaf Nouvelles imidazolidines substituees, procede de preparation, application comme medicament et compositions les renfermant
JPS5188631A (en) * 1975-01-31 1976-08-03 Hiiryoyosatsukinzai oyobi sonoseizoho
EP0002309B1 (en) 1977-10-12 1982-12-01 Imperial Chemical Industries Plc Acylanilides, process for their manufacture and pharmaceutical and veterinary compositions containing them
CA1138334A (en) 1977-10-28 1982-12-28 Karl Bernauer Pharmaceutical preparations containing certain urea derivatives
MC1220A1 (fr) * 1977-10-28 1979-07-20 Hoffmann La Roche Nouveaux derives d'imidazolidine
US4191775A (en) 1977-12-15 1980-03-04 Imperial Chemical Industries Limited Amide derivatives
DE2817157A1 (de) 1978-04-17 1979-10-25 Schering Ag Verwendung von antioestrogenen und antigonadotrop wirkenden antiandrogenen zur prophylaxe und therapie der prostatahyperplasie
FR2465486A1 (fr) 1979-09-21 1981-03-27 Roussel Uclaf Nouvelle application utilisant la lh-rh ou des agonistes
FR2492381A1 (fr) 1980-10-21 1982-04-23 Science Union & Cie Nouveaux acides aza bicyclo alcane carboxyliques substitues leurs procedes de preparation et leur emploi comme inhibiteur d'enzyme
DE3121152A1 (de) 1981-05-22 1982-12-09 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen "verwendung der kombination eines aromatase-hemmers mit einem antiandrogen zur prophylaxe und therapie der prostatahyperplasie"
US4753957A (en) 1981-09-28 1988-06-28 Rohm And Haas Company Substituted 2,4-imidazolidinediones and fungicidal compositions
US5155206A (en) 1987-09-03 1992-10-13 The Boeing Company Crosslinkable polyamideimide oligomers and a method of preparation
US5512676A (en) 1987-09-03 1996-04-30 The Boeing Company Extended amideimide hub for multidimensional oligomers
US5116935A (en) 1987-05-04 1992-05-26 The Boeing Company Polyimide oligomers and blends and method of curing
US4536559A (en) 1983-06-17 1985-08-20 The Boeing Company Thermally stable polyimide polysulfone compositions for composite structures
US5780583A (en) 1991-01-09 1998-07-14 The Boeing Company Reactive polyarylene sulfide oligomers
US5516876A (en) 1983-09-27 1996-05-14 The Boeing Company Polyimide oligomers and blends
US4851495A (en) 1987-02-20 1989-07-25 The Boeing Company Polyetherimide oligomer
US5104967A (en) 1987-09-03 1992-04-14 The Boeing Company Amideimide oligomers and blends
US5645925A (en) 1988-03-14 1997-07-08 Boeing Company Advanced composite blends
US5446120A (en) 1985-10-07 1995-08-29 The Boeing Company Polyethersulfone oligomers and blends
US5693741A (en) 1988-03-15 1997-12-02 The Boeing Company Liquid molding compounds
US4584364A (en) 1984-02-06 1986-04-22 The Boeing Company Phenolic-capped imide sulfone resins
US5286811A (en) 1983-09-27 1994-02-15 The Boeing Company Blended polyimide oligomers and method of curing polyimides
US5210213A (en) 1983-06-17 1993-05-11 The Boeing Company Dimensional, crosslinkable oligomers
US5714566A (en) 1981-11-13 1998-02-03 The Boeing Company Method for making multiple chemically functional oligomers
US5367083A (en) 1987-09-03 1994-11-22 The Boeing Company Extended acid halide capping monomers
US4507303A (en) 1981-12-22 1985-03-26 Sumitomo Chemical Company, Limited Succinimide derivatives, compositions and method of use
DE3382406D1 (de) 1982-04-08 1991-10-17 Shell Int Research Neue hydantoine, ihre herstellung und verwendung.
DE3227055A1 (de) * 1982-07-20 1984-01-26 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Neue derivate der 2-aza-bicyclo(2.2.2)octan-3-carbonsaeure, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung sowie 2-aza-bicyclo(2.2.2)octan-3-carbonsaeure als zwischenstufe und verfahren zu deren herstellung
US4473393A (en) 1982-08-06 1984-09-25 Buffalo Color Corporation Pesticidal thiohydantoin compositions
US4739030A (en) 1983-06-17 1988-04-19 The Boeing Company Difunctional end-cap monomers
US4980481A (en) 1983-06-17 1990-12-25 The Boeing Company End-cap monomers and oligomers
US5112939A (en) 1983-06-17 1992-05-12 The Boeing Company Oligomers having pyrimidinyl end caps
US4476184A (en) 1983-08-09 1984-10-09 The Boeing Company Thermally stable polysulfone compositions for composite structures
US4582886A (en) 1984-02-27 1986-04-15 General Electric Company Heat curable epoxy resin compositions and epoxy resin curing agents
US4562255A (en) 1984-03-30 1985-12-31 American Home Products Corporation Substituted bi-alicyclic imides
US4533737A (en) 1984-04-02 1985-08-06 General Electric Company Silicon functionalized norbornane carboxyimide and methods for making
GB8411928D0 (en) 1984-05-10 1984-06-13 Robinson Bros Ltd Preparing substituted oxazolines
US4666885A (en) 1985-02-08 1987-05-19 Fernand Labrie Combination therapy for treatment of female breast cancer
US4775660A (en) 1984-08-02 1988-10-04 Fernand Labrie Treatment of breast cancer by combination therapy
US4760053A (en) 1984-08-02 1988-07-26 Fernand Labrie Combination therapy for selected sex steroid dependent cancers
US4659695A (en) 1985-02-08 1987-04-21 Fernand Labrie Method of treatment of prostate cancer
US4670536A (en) 1985-06-01 1987-06-02 Director-General Of Agency Of Industrial Science And Technology Addition-curable quinoxaline resin oligomer and intermediate material for fiber-reinforced composite
US4656235A (en) 1985-09-05 1987-04-07 Polytechnic Institute Of New York Siloxane-containing polyimide coatings for electronic devices
US5594089A (en) 1985-09-05 1997-01-14 The Boeing Company Heterocycle or heterocycle sulfone oligomers with multiple chemically functional end caps
US5151487A (en) 1985-09-30 1992-09-29 The Boeing Company Method of preparing a crosslinking oligomer
US5084472A (en) 1986-11-04 1992-01-28 Roussel Application of 1-(3'-trifluoromethyl-4'-nitrophenyl)-4,4'-dimethylimidazoline 2,5-dione in the treatment of hormone-dependent cancers other than that of the prostate
FR2619381B1 (fr) 1987-08-13 1989-12-08 Roussel Uclaf Nouvelles imidazolidines substituees par un radical hydroxymethyle et un radical phenyl substitue, leur procede de preparation, leur application comme medicaments, les compositions pharmaceutiques les renfermant et un intermediaire pour leur preparation
US4892578A (en) 1987-11-06 1990-01-09 Fmc Corporation Phenylmethyl-4,4-dimethyl-3-isoxazolidinone plant regulators
US5817744A (en) 1988-03-14 1998-10-06 The Boeing Company Phenylethynyl capped imides
US4895715A (en) 1988-04-14 1990-01-23 Schering Corporation Method of treating gynecomastia
JP2959838B2 (ja) 1989-03-10 1999-10-06 アンドルシェルシュ・インコーポレイテッド エストロゲン感受性疾患の治療のための組合せ療法
US5595985A (en) 1989-03-10 1997-01-21 Endorecherche Inc. Combination therapy for prophylaxis and/or treatment of benign prostatic hyperplasia
FR2649110B1 (fr) * 1989-06-29 1994-10-21 Adir Nouveaux derives peptidiques, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
DE69034148T2 (de) 1989-07-07 2005-06-30 Endorecherche Inc., Ste-Foy Kombinationstherapie zur Prophylaxe und/oder Behandlung von gutartiger prostatischer Hyperplasie
FR2656302B1 (fr) * 1989-12-22 1992-05-07 Roussel Uclaf Nouveau procede de preparation de l'anandron et derives de l'anandron.
US5114612A (en) 1990-04-04 1992-05-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Energy Liquid crystal polyester thermosets
JP2800953B2 (ja) 1990-07-06 1998-09-21 住友製薬株式会社 新規なイミド誘導体
US5093500A (en) 1990-10-17 1992-03-03 Shell Oil Company Spirodilactam bisimides
WO1992009690A2 (en) * 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
HUT62296A (en) 1990-12-18 1993-04-28 Sandoz Ag Herbicidal composition comprising hydantoin derivative as active ingredient and process for producing the active ingredient
FR2671348B1 (fr) * 1991-01-09 1993-03-26 Roussel Uclaf Nouvelles phenylimidazolidines, leur procede de preparation, leur application comme medicaments et les compositions pharmaceutiques les renfermant.
US5411981A (en) 1991-01-09 1995-05-02 Roussel Uclaf Phenylimidazolidines having antiandrogenic activity
USRE35956E (en) 1991-01-09 1998-11-10 Roussel Uclaf Phenylimidazolidines having antiandrogenic activity
ZA924811B (en) 1991-06-28 1993-12-29 Endorecherche Inc Controlled release systems and low dose androgens
DK0627940T3 (da) * 1992-03-05 2003-09-01 Univ Texas Anvendelse af immunokonjugater til diagnose og/eller terapi af vaskulariserede tumorer
FR2694290B1 (fr) 1992-07-08 1994-09-02 Roussel Uclaf Nouvelles phénylimidazolidines éventuellement substituées, leur procédé de préparation, leur application comme médicaments et les compositions pharmaceutiques les renfermant.
ES2151515T3 (es) 1992-09-10 2001-01-01 Degussa Imidas biciclicas en calidad de herbicidas.
JPH06235309A (ja) * 1992-12-16 1994-08-23 Mitsubishi Motors Corp 内燃機関用動弁装置
IL107719A0 (en) 1992-12-21 1994-02-27 Du Pont Imidazolones their manufacture and their use as herbicides
US5399725A (en) 1993-05-27 1995-03-21 Bristol-Myers Squibb Co. 7-oxabicycloheptane carboxylic acid prostaglandin analog intermediates useful in the preparation of anti-thrombotic and anti-vasospastic compounds and method for preparing same
US5514571A (en) 1993-08-05 1996-05-07 University Technologies International Inc. Cyclin D1 negative regulatory activity
TW521073B (en) 1994-01-05 2003-02-21 Hoechst Marion Roussel Inc New optionally substituted phenylimidazolidines, their preparation process, their use as anti-androgenic agent and the pharmaceutical compositions containing them
FR2716110B1 (fr) 1994-02-16 1996-04-05 Roussel Uclaf Compositions cosmétiques ou pharmaceutiques comprenant des liposomes.
ATE197889T1 (de) 1994-09-14 2000-12-15 Univ Sheffield Kontrolle des haarwuchses
DE69636677D1 (de) * 1995-12-13 2006-12-14 Univ California Kristalle der mit einem Ligand komplexierten Ligandenbindedomäne des Schilddrüsenhormonrezeptors
FR2742749B1 (fr) * 1995-12-22 1998-02-06 Roussel Uclaf Nouvelles phenylimidazolidines comportant notamment un radical nitrooxy ou carbonyloxy, procede et intermediaires de preparation, application comme medicaments, nouvelles utilisations et compositions pharmaceutiques
US6017924A (en) * 1996-06-27 2000-01-25 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Androgen receptor modulator compounds and methods
DE19643555A1 (de) * 1996-10-24 1998-04-30 Univ Dresden Tech Metallischer Gegenstand mit einer dünnen mehrphasigen Oxidschicht sowie Verfahren zu dessen Herstellung
US6071957A (en) 1996-11-27 2000-06-06 The University Of Tennessee Research Corporation Irreversible non-steroidal antagonist compound and its use in the treatment of prostate cancer
US5929146A (en) 1996-12-27 1999-07-27 Minnesota Mining And Manufacturing Company Modifying agents for polyolefins
US6054487A (en) 1997-03-18 2000-04-25 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
EP1024820A1 (en) * 1997-08-28 2000-08-09 Janus Pharmaceuticals, Inc. Androgen activity antagonists as therapies for anorexia, anorexia nervosa, and disorders characterized by a pathologically underweight condition
US5986055A (en) 1997-11-13 1999-11-16 Curagen Corporation CDK2 interactions
JP2000169474A (ja) 1998-12-07 2000-06-20 Kotobuki Seiyaku Kk イソキヌクリジン誘導体及びその製造方法並びにこれを含有する高コレステロール血症治療剤
US6184249B1 (en) * 1998-12-18 2001-02-06 Biophysica, Inc. Androgen receptor suppressors in the therapy and diagnosis of prostate cancer, alopecia and other hyper-androgenic syndromes
US6075053A (en) 1999-02-09 2000-06-13 Bionumerik Pharmaceuticals, Inc. Method of reducing or reversing neuropathy
US6358947B1 (en) * 1999-05-04 2002-03-19 American Home Products Corporation Tetracyclic progesterone receptor modulator compounds and methods
HUP0202814A3 (en) * 1999-08-27 2003-11-28 Ligand Pharmaceuticals Inc San Androgen receptor modulator compounds and methods for their preparation and pharmaceutical compositions containing them and their use
US6566372B1 (en) * 1999-08-27 2003-05-20 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Bicyclic androgen and progesterone receptor modulator compounds and methods
WO2001016133A2 (en) * 1999-08-27 2001-03-08 Ligand Pharmaceuticals Incorporated 8-substituted-6-trifluoromethyl-9-pyrido[3,2-g]quinoline compounds as androgen receptor modulators
US7019026B1 (en) * 1999-09-10 2006-03-28 Novo Nordisk A/S Modulators of Protein Tyrosine Phosphatases (PTPases)
EP1222459A4 (en) * 1999-10-14 2003-01-22 Bristol Myers Squibb Co CRYSTALLOGRAPHIC STRUCTURE OF THE ANDROGEN RECEPTOR LIGAND BINDING DOMAIN
US6200573B1 (en) * 1999-12-03 2001-03-13 Starcor Pharmaceuticals, Inc. Method of medical management for lower urinary tract symptoms and benign prostatic hyperplasia
JP2004507456A (ja) * 2000-05-11 2004-03-11 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー 成長ホルモン分泌促進薬として有用なテトラヒドロイソキノリン類縁体
CA2413683A1 (en) * 2000-06-28 2002-01-03 Bristol-Myers Squibb Company Fused cyclic compounds as modulators of nuclear hormone receptor function
GEP20074144B (en) * 2000-09-19 2007-07-10 Bristol Myers Squibb Co Fused heterocyclic succinimide compounds and analogs thereof, modulators of nuclear hormone receptor function
EP1397137B1 (en) * 2001-05-25 2009-10-14 Bristol-Myers Squibb Company Hydantion derivatives as inhibitors of matrix metalloproteinases

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