KR20030005303A - 퓨린작동성 수용체 작동물질을 사용하는 망막 변성의 치료방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 병리생리학적 또는 신체적 상태로부터 발생하는 망막 변성을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 퓨린작동성 P2Y 수용체 리간드의 세포외 농도를 상승시켜 망막 신경교 및 뉴론 세포 표면 P2Y 수용체를 활성화시키고 신경보호성 반응을 개시시키기에 효과적인 양으로 퓨린작동성 P2Y 수용체 리간드를 함유하는 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 투여 방법에는 초자체내 볼루스 및 서방성 투여, 경공막 전달, 국소 및 전신 투여가 포함된다. 본 발명에서 유용한 약학적 조성물은 유리딘 5'-디- 및 트리포스페이트 (UDP, UTP) 및 이들의 유사체, 아데노신 5'-디포스페이트 (ADP) 및 이의 유사체, 사이티딘 5'-디- 및 트리포스페이트 (CDP, CTP) 및 이들의 유사체, 및 디뉴클레오시드 폴리포스페이트 화합물이 포함되는 P2Y 퓨린작동성 수용체 작동물질을 함유한다.

Description

퓨린작동성 수용체 작동물질을 사용하는 망막 변성의 치료 방법 {METHOD FOR TREATING RETINAL DEGENERATION WITH PURINERGIC RECEPTOR AGONISTS}
망막 뉴론의 변성은 쇠약 상태이고, 세계적으로 비가역적 실명의 주요 원인이다 (National Eye Institute, "Vision Research: A National Plan, 1994-1998"). 망막 변성은 종종 다양한 시각 및 전신 질환 및 환경 상태의 종점이다. 변성 망막증은 일반적으로 망막 내의 두 뉴론성 세포 집단에 영향을 미친다: 광수용체 및 신경절 세포. 광수용체 및 신경절 세포의 변성은 신경변성 질환 (황반 변성, 녹내장, 색소성 망막증), 안신경 변성 및 안신경염, 만성 대사 질환 (증식성 당뇨병 망막증), 신경독에의 노출, 허혈, 및 신체적 외상으로부터 발생할 수 있다 (Yanoff 및 Duker, "Ophthalmology," 8.1.1-8.48.1; National Eye Institute, "Vision Research: A National Plan, 1994-1998").
이전의 연구는 토끼에게 ATP를 결막하 주입하면 맥락막 및 망막 내의 ATP 함량이 증가함을 나타냈다 (Dobromyslov 등, Clinical Conference of May 24, 1966). Dobromyslov 등은 또한 ATP의 결막하 주입이 황반 이영양증, 색소성 이영양증, 복합 근시 및 다진행 녹내장으로 고생하는 환자에서 시력 손실을 개선시킨다는 것을 나타냈다 (Vestn Oftabnol., Jan-Feb;:24-6, 1969). Dobromyslov 등은 망막 내 ATP의 급속한 분해로 인해 ATP의 결막하 투여에서 에너지 저장의 직접적인 메이크업이 발생함을 제시하였다. 저자는 로돕신이 ATP를 가수분해하고 ATP는 세포 내 에너지원으로서 주지되어 있으므로 전체 망막 ATP 수준에서의 증가가 광수용체의 대사적 지지를 증강시킴을 주장하였다. 현재, ATP의 결막하 주사는 망막 이영양증의 치료에 사용되지 않는다.
현재까지, 망막 변성의 치료 방법은 성장 인자 수용체, 예컨대 신경교 유래 신경영양 인자 (GDNF), 섬모 신경영양 인자 (CNTF) 및 뇌-유래 신경영양 인자 (BDNF)를 활성화시키는 것을 표적으로 하였다 (Louis, U.S. 특허 제 5,641,750 호; LaVail. 등, U,S. 특허 제 5,667,968 호). 이러한 시그날링 단백질, GDNF, CNTF 및 BDNF가 사용하는 수용체 시스템은 P2Y 수용체 패밀리와 상이한 수용체 클래스로부터이다. 현재, 이러한 치료는 임상에서의 사용에 대해 개발되지 않는다.
이전의 연구는 성숙한 신경계의 신경교 및 뉴론 세포 내의 P2Y 수용체의 존재를 나타냈다 (Abbracchio 및 Burnstock, Jpn J Pharmacol,78:113-45, 1998). P2Y 수용체는 다양한 세포내 시그날링 경로를 활성화시키는 G-단백질 커플링 수용체 (GPCR)의 클래스에 속한다. 다수의 세포 유형에서의 P2Y 수용체 시그날링의특징이 공지되어 있지만, 신경계에서의 P2Y 수용체의 생리학적 역할은 잘 특징화되어 있지 않다. 중추, 말초 및 감각 신경계에서, P2Y 수용체 활성화는 신경계 발생, 기능 및 생존에 중요한 역할을 하는 세포 유형인 신경교에 깊이 영향을 미친다. 이전의 연구는 신경전달, 뉴론-신경교세포-세포 시그날링, 유전자 발현의 변화, 신경돌기생성, 및 부가적 또는 상승적 방식으로의 성장 인자와의 상호작용에서의 P2Y 수용체의 역할을 제안하였다 (Abbracchio 및 Burnstock, Jpn J Pharmacol,78:113-45, 1998).
성숙한 신경계 내의 신경교 세포는 뉴론에 영양적 지지를 제공하고, 따라서 다양한 신경변성 상태에서의 뉴론 보존 및 생존을 초래하는 생존성 세포성 표적이다. 뮐러 세포, 성상세포 및 망막 색소 상피는 망막 내의 3 개의 신경교 세포 유형이다. 이들은 뉴론 주변의 지지 세포의 네트워크를 형성하고, 이러한 인접한 해부학적 근접성이 신경교 세포에게 생존을 유지시키고 뉴론을 보호하는 능력을 제공하는 것이다. 신경교 세포는 기계적인 지지를 제공하고, 뉴론 사멸 및 손상 후 잔여물을 소거시키고; 신경 충동의 전기적 전도에 대한 절연초를 제공하고; 세포외 이온성, 대사성, 신경전달물질, 및 체액 조성물을 완충시키고; 손상 및 사멸에 이은 뉴론의 성장을 제어하고; 정상 및 병리학 상태의 뉴론에 대한 영양적 지지를 제공한다 (Kandel 및 Schwartz, Principles of Neuroscience, 1979, 2nd Ed., Elsevier, New York, 1985). 신경학적 스트레스 및 질환의 상태에서, 뉴론 및 신경교를 둘러싼 세포외 환경이 극적으로 교란되고, 신경교 세포는 이러한 다수의 외부 자극을 삽입시켜 적절한 적응성 반응을 개시시킬 수 있는 광범위한 수용체를함유한다 (Kandel 및 Schwartz, 상기). 아데노신 5'-트리포스페이트 (ATP)는 세포 에너지의 편재성 원이고, 정상적으로 세포 내에 함유되거나 조절된 상태 하에 세포외로 방출될 수 있다 (Ralevic 및 Burnstock, Pharmacol Rev,50:413-92, 1998). 그러나, 병리학적인 신경학 상태 하에서는, ATP는 손상된 세포로부터 조절되지 않은 용량으로 방출되는 것으로 여겨지고, 결과적으로 신경교 상의 세포 표면 ATP 수용체를 활성화시킬 수 있다 (Abbracchio 및 Burnstock, Jpn J Pharmacol,78:113-45, 1998). 신경교 상에서 발견되는 뉴클레오티드 수용체의 P2Y 아유형은 다양한 세포내 시그날링 경로를 활성화시킴으로써 세포외 뉴클레오티드에 반응하고, 활성화된 신경교 세포가 근원적인 뉴론 스트레스 및 피해에 반응할 수 있게 한다 (Abbracchio 및 Burnstock, Jpn J Pharmacol,78:113-45, 1998).
유리딘 5'-트리포스페이트 (UTP) 및 ATP는 희돌기교세포, 성상세포, 뮐러 세포, 망막 색소 상피 및 상재 대식세포가 포함되는, 중추, 말초 및 감각 신경계의 다중 신경교 세포 내의 퓨린작동성 수용체의 P2Y 아유형을 활성화시키는 것으로 나타났다 (Abbracchio 및 Burnstock, Jpn J Pharmacol,78:113-45, 1998; Kirischuk 등, J Physiol (Lond),483:41-57, 1995; Liu 및 Wakakura, Jpn J Ophthalmol,42:33-40, 1998; Lyons 등, J Neurochem,63:552-60, 1994; Neary 및 Zhu, Neuroreport,5:1617-20, 1994; Peterson 등, J Neurosci,17:2324-37, 1997). 가벼운 기계력은 망막으로부터의 ATP 방출을 자극하는 것으로 나타났고, 이는 망막 신경 및 신경교 세포 상의 P2Y 수용체를 통해 시그날링할 수 있다 (Jensen, IOVS (suppl.), 40:1237, 1999). 신경교 세포 상의 P2Y 수용체의 활성화는 동시적인포스포리파제 C 및 세포내 저장고로부터의 Ca2+의 방출의 자극 및 세포내 ras-MAPK (mitogen-activated protein kinase) 경로의 활성화를 야기하며, 이들은 모두 세포 분화 및 생존에 연결된다 (Idestrup 및 Salter, Neuroscience,86:913-23, 1998; Neary 등, J Neurosci, 19:4211-20, 1999: Segal 및 Greenberg, Annu Rev Neurosci,19:463-89, 1996). 퓨린에 의한 세포 증식 및 DNA 합성의 자극이 1차 성상세포 및 성상세포종 세포에서 관찰되었다 (Neary 등, J Neurochem,63:2021-7, 1994; Neary 등, J Neurochem,63:490-4, 1994; Rathbone 등, In Vitro Cell Dev Biol,28A:529-36, 1992). ATP는 초기 유전자 예컨대 c-fos 및 c-jun의 자극, 전사 활성화제 단백질-1 (AP-1) 복합체의 DNA에의 결합, 및 세포외 시그날-조절 단백질 키나제의 활성화가 포함되는, 유사분열촉진 활성에 연결되는 다양한 세포내 시그날링 경로를 유도한다 (Bolego 등, Br J Pharmacol,121:1692-9, 1997; Chen 및 Sun, Neurochem Res,23:543-50, 1998; Priller 등, Neuroscience,85:521-5, 1998; Wu 등, Mol Pharmacol,53:346, 1998). 신경계에서, AP-1 복합체, 즉각적인 초기 유전자 및 ras-MAPK 경로의 신경교-특이적 활성화는 환경적 및 유전적 병인으로부터 발생하는 혼란 및 외상에 대한 신경교 세포의 1차 반응과 관련된다 (Segal 및 Greenberg, Annu Rev Neurosci, 19:463-89, 1996). 신경교 세포 내에서의 이러한 세포내 시그날링 경로의 활성화는 뉴론 스트레스에 대한 근원적 적응성 반응을 나타내는 것으로 생각되고, 신경교가 신경보호 반응을 개시하여 이어지는 손상 및 피해로부터 뉴론에게 영양적 컨디셔닝을 제공할 수 있도록 한다 (Segal 및Greenberg, Annu Rev Neurosci,19:463-89, 1996).
신경교는 신경교 원섬유 산성 단백질 (GFAP)의 상향조절 및 신경교증 프로세스의 신장이 수반되는 반응성 신경교증으로 공지된 프로세스에서의 증식 및 과영양이 포함되는 스트레스 및 손상에 반응하여 종종 표현형이 변화된다 (Eddleston 및 Mucke, Neuroscience,54:15-36, 1993; Hatten 등, Glia,4:233-43, 1991; Ridet 등, Trends Neurosci,20:570-7, 1997). 최근의 연구는 GFPA-양성 반응성 성상세포가 중추신경계에서의 뉴론 변성의 기계적 손상 모델에서 과도한 세포 사멸로부터 뉴론을 보호하는데 필요하다는 것을 나타냈다 (Bush 등, Neuron,23:297-308, 1999). ATP는 래트 대뇌피질 성상세포에서 GFAP의 발현을 증가시키고 성상세포성 프로세스를 증가시키는 것으로 나타났다 (Abbracchio 등, Int J Dev Neurosci, 13:685-93, 1995). 유사한 효과가 성장 인자 예컨대 염기성 섬유아세포 성장 인자 및 모양체 신경영양 인자에 의해 관찰되었고, 이들은 신경변성의 다양한 동물 모델에서 신경보호를 부여하는 것으로 나타났다 (Segal 및 Greenberg, Annu Aev Neurosci,19:463-89, 1996).
하기 참조문헌에는 P2Y 수용체 작동물질의 조성물 및/또는 안질환의 치료가 개시되어 있다. US 특허 제 5,900,407 호 (Yerxa 등) 호에는 치료를 필요로 하는 대상에서 눈물 분비를 자극하는 방법이 개시되어 있다. 상기 방법은 대상의 눈 표면에 퓨린작동성 수용체 작동물질 예컨대 유리딘 5'-트리포스페이트, 사이티딘 5'-트리포스페이트, 아데노신 5'-트리포스페이트, 또는 이들의 유사체 및 유도체를 눈물액 분비를 자극하기에 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다. US 특허 제 5,837,861 호 (Pendergast 등)에는 X가 산소, 메틸렌, 또는 디플루오로메틸렌이고; n = 0 또는 1이고; m = 0 또는 1이고; n + n = 0, 1 또는 2이며; B 및 B'은 각각 독립적으로 9- 또는 1-위치를 통해 연결된 퓨린 잔기 또는 피리미딘 잔기인 화학식 I의 구조를 갖는 디뉴클레오티드 폴리포스페이트의 P2Y2퓨린작동성 수용체가 개시되어 있다. 상기 화합물은 만성 폐색성 폐질환, 기관지염, 특정 폐렴, 낭포성 섬유증, 정맥두염, 및 중이염의 치료에 유용하다. US 특허 제 5,763,447 호는 치료를 필요로 하는 누워만 있는 또는 움직이지 못하는 대상에서, 환풍기-관련 폐렴이 포함되는 폐렴의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 환자의 기도에 퓨린작동성 수용체 예컨대 유리딘 5'-트리포스페이트 (UTP), P1,P4-디(유리딘-5')테트라포스페이트, 또는 이들의 유사체를 충혈된 기도 내의 체액의 배액을 촉진하기에 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다. WO 99/09998에는 유리딘 5'-디포스페이트 및 이의 유사체를 사용하여 폐 질환을 치료하는 방법이 개시되어 있다. 퓨린작동성 수용체 활성을 갖는 상기 참조문헌 ('407, '861 및 '447 특허, 및 WO 99/09998)에 기술된 화합물은 본원에 참고로 반영된다. Boyer 등 (Br. J. Pharmacol. 118:1959 (1996))은 칠면조 적혈구 막의 포스포리파제 C-연결 P2Y-수용체, C6 래트 신경교종 세포의 아데닐릴 사이클라제-연결 P2Y-수용체 및 1321N1 인간 성상세포종 세포에서 안전하게 발현된 클로닝된 인간 P2U-수용체의 활성화에 대한 작동물질로서 아데노신 모노포스페이트 (AMP)의 일련의 사슬-연장 2-티오에테르 유도체를 합성하여 시험하였다.
망막 변성의 치료에 유용한 방법이 계속 요구된다. 이같은 치료는 다중 병인으로부터 발생하는 망막 변성률을 예방 또는 감소시킬 것이다. 망막 내의 P2Y 수용체의 세포성 정위 및 P2Y 수용체의 시그날링 결로를 기초로, 이같은 치료법의 개발에서 P2Y 수용체 작동물질의 활용에 대한 연구가 자극되었다.
발명의 개요
본 발명은 병리생리학적 또는 신체적 상태로부터 발생하는 망막 변성을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 망막 신경교 및 뉴론 세포의 세포 표면 P2Y 수용체를 활성화시키고 신경보호성 반응을 개시시키기에 유효한 양으로 P2Y 수용체 리간드를 함유하는 약학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 투여 방법에는 초자체내 볼루스 및 서방성 투여, 경공막 전달, 국소, 경구 및 전신 투여, 및 수술중의 투여가 포함된다
본 발명에서 유용한 약학적 조성물은 P2Y 수용체 작동물질을 함유한다. P2Y 작동물질은 Ca2+시그날링, 유사분열유발인자-활성화 단백질 키나제 시그날링 및 망막의 신경교 세포에서의 신경교 원섬유 산성 단백질 발현을 활성화시킨다. P2Y 작동물질에는 유리딘 5'-디- 및 트리포스페이트 (UDP, UTP) 및 이들의 유사체 (화학식 Ia 및 Ib), 5'-아데노신 모노포스페이트 (AMP) 및 이의 유사체, 아데노신 5'-디- 및 트리포스페이트 (ADP, ATP) 및 이의 유사체 (화학식 IIa 및 IIb), 및 사이티딘 5'-디- 및 트리포스페이트 (CDP, CTP) 및 이들의 유사체 (화학식 IIIa 및 IIIb)가 포함된다. P2Y 작동물질에는 화학식 IV의 디뉴클레오시드 폴리포스페이트 화합물이 또한 포함된다.
본 발명의 화합물은 P2Y 수용체의 선택적 작동물질이다. 이들은, 건성 또는 삼출성 노화-관련 황반 변성, 스타르가르드병, 베스트병, 및 낭포 황반 부종, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 박리, 포도막염, 광손상, 수술 및 외상 손상, 및 바이러스-, 박테리아- 및 독소-유도 망막 변성이 포함되는 (이에 제한되지는 않음), 질병 상태 또는 신체적 상태의 결과로 망막 신경절 세포 또는 광수용체가 사멸하기 쉬운 망막에서의 뉴론 변성의 치료에 유용하다.
본 발명은 퓨린작동성 수용체 작동물질 예컨대 유리딘 5'-디- 및 트리포스페이트, 사이티딘 5'-디- 및 트리포스페이트, 디뉴클레오시드 폴리포스페이트, 및 이들의 유사체를 투여함으로써 세포 사멸로부터 망막 뉴론을 보호 또는 지연시키는 방법에 관한 것이다.
도 1: 안티센스 프로브 (좌측) 및 센스 프로브 (우측)의 DIG-라벨링에 의한 성체 토끼 망막 내의 P2Y2mRNA의 원위치 정위.
도 2: 안티센스 프로브 (좌측) 및 센스 프로브 (우측)의 DIG-라벨링에 의한 원숭이 망막 내의 P2Y2mRNA의 원위치 정위.
도 3: 약한 조명에서 이루어진 ERG 레코딩으로부터의 암순응 B-웨이브 진폭에 대한 dCP4U, IP4U, BDNF, 및 비히클 (Veh)의 효과 (24 dB). 각각의 화합물에 대한 농도 및 주사와 밝은 빛에의 노출 사이의 기간이 각각의 짝지워진 막대 그래프의 위쪽에 나타난다. 처리 전에, 각각의 실험 코호트의 양눈 각각으로부터의 ERG 레코딩은 예비처리 눈 중의 B-웨이브 진폭에서 차이를 나타내지 않았다 (상부 패널). 밝은 빛에의 84 시간 노출 후 2주에, dCP4U (1 mM, 16 시간; 10 mM, 16 시간; 및 10 mM, 48 시간), IP4U (10 mM, 48 시간), 및 BDNF (0.5 ㎍, 48 시간)로 처리된 코호트로부터의 눈은 처리되지 않은 대측성 눈보다 큰 B-웨이브 진폭을 나타냈다. 비히클-처리 코호트에서는 비히클과 처리되지 않은 눈 간에 차이가 관찰되지 않았다.
도 4: 밝은 조명에서 이루어진 ERG 레코딩으로부터의 암순응 B-웨이브 진폭에 대한 dCP4U, IP4U, BDNF, 및 Veh의 효과 (0 dB).
도 5: 약한 조명에서 이루어진 ERG 레코딩으로부터의 암순응 A-웨이브 진폭에 대한 dCP4U, IP4U, BDNF, 및 Veh의 효과 (0 dB).
도 6: 약한 빛에의 84 시간 노출 후 2 주에 하부 반구에서의 외핵층 두께 및 내부/외부 분절 두께의 조직학적 파라메터에 대한 dCP4U, IP4U, BDNF, 및 Veh의 효과. 일반적으로, 코호트로 그룹화된 모든 처리된 눈 (dCP4U, IP4U 및 BDNF)은 각각의 코호트에 대히 처리되지 않은 눈보다 큰 조직학적 파라메터를 나타냈다. 이러한 조직학적 파라메터에 대해 비히클의 효과는 나타나지 않았다.
도 7: 밝은 빛에의 84 시간 노출 후 2 주에 상부 반구에서의 외핵층 두께 및 내부/외부 분절 두께의 조직학적 파라메터에 대한 dCP4U, IP4U, BDNF, 및 Veh의 효과. 일반적으로, 코호트로 그룹화된 모든 처리된 눈 (dCP4U, IP4U 및 BDNF)은 각각의 코호트에 대히 처리되지 않은 눈보다 큰 조직학적 파라메터를 나타냈다. 그러나, 비히클 처리로 유사한 효과가 나타났다.
약자: RPE, 망막 색소 상피; OS, 외부 분절; IS, 내부 분절; ONL, 외핵층; INL, 내핵층; IPL, 내부 망상층; GCL, 신경절 세포층. 토끼 및 원숭이 모두의 RPE 및 GCL 층에서 헤비 라벨링이 나타나고, 부가적인 라벨링이 원숭이의 IS 층에서 나타난다.
본 발명은 망막에서 신경보호를 제공함으로써 망막 변성을 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 치료적 유효량의 P2Y 수용체 리간드를 함유하는 약학적 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다. 본원에서 사용되는 "치료적 유효량"은 망막 변성을 치료하기에 유효한 양으로, 망막 뉴론의 변성을 역전환, 정지 또는 지연시키거나 또는 이어지는 피해 및 변성으로부터 망막 뉴론의 보호를 부여하기에 유효한 양을 의미한다. 바람직한 방법은 망막 신경교 및 뉴론을 표적으로 하여, 패밀리 P2Y 수용체의 아유형인 P2Y2수용체의 활성화에 대한 적응성 반응을 유도해내고, 따라서 망막에서의 신경보호적 반응을 시그날링한다. 상기 방법은 작동물질의 세포외 농도가 망막에서의 세포 표면 상의 P2Y 수용체를 활성화시키기에 충분하도록 포유동물에게 유효량의 P2Y 수용체 작동물질을 투여한다.
본 발명에 개시된 치료를 받을 수 있는 망막 변성에는 망막 뉴론 예컨대 광수용체 및 망막 신경절 세포의 손상 또는 사멸로 인한 망막 변성 질환이 포함된다. 망막 변성 질환에는 유전성, 선천성 및 염증 유도 망막 변성 질환이 포함된다. 유전성 망막 변성 질환에는, 예를 들어, 모든 형태의 황반 변성 예컨대 건성 및 삼출성 노화-관련 황반 변성, 스타르가르드병, 베스트병, 녹내장, 색소성 망막염 및 시신경 변성이 포함된다. 후천성 망막 변성 질환은, 예를 들어, 낭포 황반 부종, 망막 박리, 광손상, 정맥 또는 동맥 폐색 또는 기타 혈관 장애로 인한 허혈성망막증, 외상, 수술 또는 눈의 투과 병변으로 인한 망막증, 및 주변부 유리체망막증에 기인한다. 염증-유도 망막 변성 질환은, 예를 들어, 바이러스-, 박테리아- 또는 독소-유도 망막 변성, 또는 포도막염에 기인하고, 그 결과 시신경염이 발생할 수 있다. 본 발명은 보호 양상으로 수술후 외상 및 이어지는 손상을 미치는 밝은 빛에의 노출로부터의 합병증으로 인한 손상으로부터 망막 뉴론을 보호하는 방법을 또한 제공한다. 이러한 방법은, 성장 인자, 뉴로트로핀, 사이토카인, 리보자임, 항염증제, 항생제, 항바이러스제 및 유전자 치료의 투여가 포함되지만 이에 제한되지 않는, 망막 변성을 치료하는 다른 치료적 양상과 함께 사용될 수도 있다.
본 발명은 P2Y2수용체가 망막 내의 다중 세포 유형에 정위되어 있고, 망막 신경절 세포, 성상세포, 뮐러 세포, 광수용체 및 망막 색소 상피에서 대량으로 발현됨을 제공한다. 출원인은 뮐러 세포에서의 P2Y 수용체의 활성화가 뮐러 세포의 방사상 프로세스를 통해 신경교 원섬유 산성 단백질 (GFAP)의 활성화 및 상향조절을 야기하고, 이는 망막 뉴론의 관찰된 P2Y2수용체-유도 보호에서 중요한 역할을 하는 것으로 간주한다.
본 발명은 P2Y 수용체 작동물질을 함유하는 약학적 조성물을 다양한 망막증의 치료에 사용하는 방법을 제공한다. P2Y 작동물질에는 뉴클레오시드 모노-, 디-, 및 트리포스페이트 및 디뉴클레오시드 폴리포스페이트가 포함된다. 본 발명에 유용한 뉴클레오시드 모노포스페이트에는 아데노신 5'-모노포스페이트 (AMP)및 이의 유도체 예컨대 2-티에노에테르-치환 AMP, 예를 들어, 2-헥실티오 AMP가 포함된다 (Br. J. Pharmacol. 118:1959 (1996)). 본 출원에 유용한 뉴클레오시드 디- 및 트리포스페이트에는 화학식 Ia 및 Ib의 유리딘 5'-디- 및 트리포스페이트 (UDP 및 UTP) 및 이들의 유사체; 화학식 IIa 및 IIb의 아데노신 5'-디- 및 트리포스페이트 (ADP 및 ATP) 및 이들의 유사체; 및 화학식 IIIa 및 IIIb의 사이토신 5'-디- 및 트리포스페이트 (CDP 및 CTP) 및 이들의 유사체; 및 화학식 IV의 디뉴클레오시드 폴리소프페이트가 포함된다.
UDP 및 이의 유사체는 하기 화학식 Ia로 묘사된다:
[식중:
X1및 X2는 각각 독립적으로 0-또는 S-이고;
Y는 H 또는 OH이고;
R1은 O, 이미도, 메틸렌 및 디할로메틸렌 (예를 들어, 디클로로메틸렌, 디플루오로메틸렌)으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2는 H, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알콕실, 니트로 및 아지도로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R3는 부재, H, 알킬, 아실 (아릴아실 포함), 및 아릴알킬로 구성되는 군으로부터 선택되며;
R4는 -OR', -SR', NR' 및 NR'R" (식중 R' 및 R"는 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아릴알킬, 알콕실, 및 아릴옥실로 구성되는 군으로부터 선택되며, 단 R4가 피리미딘 고리의 4-위치의 탄소에 산소 또는 황 원자로부터 이중결합되면 R'은 부재한다)으로 구성되는 군으로부터 선택된다].
본원에서 사용된 용어 "알킬"은 선형, 분지형 또는 고리형, 포화 또는 불포화 (예를 들어, 알케닐 및 알키닐) 탄화수소 사슬, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 옥틸, 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐, 옥테닐, 부타디에닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 헵티닐, 알레닐 및 임의 치환된 아릴알케닐 및 아릴알키닐 기가 포함되는 C1-10을 가리킨다. 본원에서 사용된 용어 "아실"은 카르복실 기의 -OH가 다른 치환체로 대체된 유기산 기를 가리킨다 (즉, RCO- (식중 R은 알킬 또는 아릴 기이다)로 표시됨). 이러한 것으로, 용어 "아실"에는 구체적으로 아릴아실 기가 포함된다. 아실 기의 구체적인 예로는 아세틸 및 벤조일이 포함된다. 본원에서 사용된 용어 "아릴"은 5 및 6-원 탄화수소 및 헤테로고리형 방향족 고리를 가리킨다. 아릴 기의 예로는 시클로펜타디에닐, 페닐, 푸란, 티오펜, 피롤, 피란, 피리딘, 이미다졸, 이소티아졸, 이속사졸, 피라졸, 피라진, 피리미딘 등이 포함된다. 본원에서 사용된 용어 "알콕시"는 선형, 분지형 또는 고리형, 포화 또는 불포화 옥소-탄화수소 사슬이 포함되는 C1-10을 가리키고, 예를 들어, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, t-부톡시, 및 펜톡시가 포함된다. 본원에서 사용된 용어 "아릴옥시"는 페닐옥시, 및 알킬, 할로 또는 알콕시 치환 아릴옥시와 같은 아릴옥시를 가리킨다. 본원에서 사용된 용어 "치환된 알킬" 및 "치환된 아릴"에는 아릴 또는 알킬 기의 하나 이상의 원자 또는 관능기가 또다른 원자 또는 관능기, 예를 들어, 할로겐, 아릴, 알킬, 알콕시, 히드록시, 니트로, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 술페이트 및 메르캅토로 대체된 상기 정의된 알킬 및 아릴 기가 포함된다. 본원에서 사용된 용어 "할로", "할라이드" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도 기를 가리킨다.
화학식 Ia의 화합물의 실례가 되는 화합물에는 본원에 참조로 반영된 WO 99/09998에 개시된 것들이 포함된다. 화학식 Ia 화합물에는, 예를 들어, 유리딘 5'-디포스페이트 (UDP); 유리딘 5'-0-(2-티오디포스페이트)(UDPβS); 5-브로모유리딘 5'-디포스페이트 (5-BrUDP); 5-(1-페닐에티닐)-유리딘 5'-디포스페이트 (5-(1-페닐에티닐)UDP); 5-메틸유리딘 5'-디포스페이트 (5-메틸UDP); 4-헥실티오유리딘 5'-디포스페이트 (4-헥실티오UDP); 4-메르캅토유리딘 5'-디포스페이트 (4-메르캅토UDP); 4-메톡시유리딘 5'-디포스페이트 (4-메톡시UDP); 4-(N-모르폴리노)유리딘 5'-디포스페이트 (4-(N-모르폴리노)UDP; 4-헥실옥시유리딘 5'-디포스페이트 (4-헥실옥시UDP); N,N-디메틸사이티딘 5'-디포스페이트 (N,N-디메틸CDP); N-헥실사이티딘 5'-디포스페이트 (N-헥실CDP}; 및 N-시클로펜틸사이티딘 5'-디포스페이트 (N-시클로펜틸CDP)가 포함된다.
화학식 Ia의 바람직한 화합물에는 UDP 및 UDPβS 및 4-티오UDP가 포함된다. 화학식 Ia의 특정 화합물 (예를 들어, UDP, dUDP, UDPβS, 및 4-메르캅토UDP)은 공지되어 있고, 당업자에게 명백할 공지된 절차 또는 이의 변형에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오시드 디포스페이트의 특정 티오포스페이트 유사체 (예컨대 UTP-β-S)의 동정 및 제조는 U.S. 특허 제 3,846,402 호 (Eckstein 등), 및 [R.S. Goody 및 F. Eckstein, J. Am. Chem. Soc. 93: 6252-6257 (1971)]에 기재되어 있다. 대안적으로, UDP, 및 이의 기타 유사체는 Sigma (St. Louis, MO) 및 Pharmacia (Uppsala, Sweden)와 같은 판매자로부터 또한 시판된다.
UTP 및 이의 유사체는 하기 화학식 Ib로 묘사된다:
[식중:
X1, X2및 X3는 각각 독립적으로 0-또는 S-이고;
Y는 H 또는 OH이고;
R1, R2, R3및 R4는 화학식 Ia에서 정의된 대로이다].
바람직하게는, X2및 X3는 O-이고, R1은 산소 또는 이미도이고, R2는 H이다. 화학식 Ib의 특히 바람직한 화합물에는 유리딘 5'-트리포스페이트 (UTP) 및 5'-O-(3-티오트리포스페이트) (UTPγS)가 포함된다.
ADP 및 이의 유사체는 하기 화학식 IIa로 묘사된다:
[식중:
R1, X1, X2및 Y는 화학식 Ia에 정의된 대로이고;
Z는 H, Cl 또는 SR (식중 R은 알킬 (C1-C20포화 또는 불포화)이다)이고;
R2가 부재하고 N-1과 C-6 간에 이중 결합이 존재하면서 R3및 R4가 H이거나 (아데닌),
R2가 부재하고 Z가 SR이면서 R3및 R4가 H이거나,
R2가 O이고 N-1과 C-6 간에 이중 결합이 존재하면서 R3및 R4가 H이거나 (아데닌-1-옥시드),
R3, R4및 R2가 함께 -CH=CH-이어서, N-6과 C-6 간의 이중결합을 갖는 N-6에서 N-1까지의 고리를 형성한다 (1,N6-에테노아데닌)].
특히 바람직한 화학식 IIa의 화합물에는 5'-아데노신 디포스페이트 (ADP) 및 2-메틸-SADP가 포함된다.
ATP 및 이의 유사체는 하기 화학식 IIb로 묘사된다:
[식중:
R1, X1, X2, X3및 Y는 화학식 Ib에서 정의된 대로이고,
R2, R3, R4및 Z는 화학식 IIa에서 정의된 대로이다].
CDP 및 이의 유사체는 하기 화학식 IIIa로 묘사된다:
[식중:
R1, X1, X2및 Y는 화학식 Ia에서 정의된 대로이고;
R7이 부재하고 N-3와 C-4 간에 이중 결합이 존재하면서 R5및 R6이 H이거나 (사이토신),
R5, R6및 R7이 함께 -CH=CH-이어서, N-4와 C-4 간의 이중결합을 갖는 N-3에서 N-4까지의 고리를 형성하고 (3,N4-에테노사이토신), 임의로 에테노 고리의 4- 또는 5-위치의 수소는 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴 (헤테로아릴 등), 알콕시, 니트로, 할로겐 또는 아지도로 치환된다].
CTP 및 이의 유사체는 하기 화학식 IIIb로 묘사된다:
[식중:
R1, X1, X2, X3및 Y는 화학식 Ib에서 정의된 대로이고,
R5, R6및 R7은 화학식 IIIa에 정의된 대로이다].
화학식 IIIb의 바람직한 화합물에는 사이티딘 5'-트리포스페이트 (CTP) 및 4-니트로페닐 에테노사이티딘 5'-트리포스페이트가 포함된다.
단순성을 위해, 본원의 화학식 I, II 및 III은 천연 발생 D-배치의 활성 화합물이 표시되지만, 달리 특정하지 않는 한, 본 발명에는 L-배치의 화합물 및 D- 및 L-배치의 화합물의 혼합물 또한 포함된다. 천연 발생 D-배치가 바람직하다.
디뉴클레오티드 폴리포스페이트는 하기 화학식 IV로 묘사된다:
[식중:
X는 산소, 메틸렌, 디플루오로메틸렌, 이미도이고;
n = 0, 1 또는 2이고;
m = 0, 1 또는 2이고;
n + m = 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
B 및 B'은 각각 독립적으로 9- 또는 1-위치를 통해 각각 연결되는 퓨린 잔기 또는 피리미딘 잔기이며;
Z = OH 또는 N3이고;
Z' = OH 또는 N3이고;
Y = H 또는 OH이며;
Y'= H 또는 OH이다].
리보실 부분은 상기 나타난 바와 같이 D-배치이지만, L- 또는 D- 및 L-일 수 있다. D-배치가 바람직하다.
화학식 IV의 바람직한 화합물에는 하기 화학식 IVa가 포함된다:
[식중:
X = O이고;
n + m = 1 또는 2이고;
Z, Z', Y 및 Y' = OH이고;
B 및 B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴, 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이거나; 또는
X = O이고;
n + m = 3 또는 4이고;
Z, Z', Y 및 Y' = OH이고;
B = 우라실이고;
B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이거나; 또는
X = O이고;
n + m = 1 또는 2이고;
Z, Y 및 Z' = OH이고;
Y' = H이고;
B = 우라실이고;
B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이거나; 또는
X = O이고;
n + m = 0, 1 또는 2이고;
Z 및 Y = OH이고;
Z' = N3이고;
Y' = H이고;
B = 우라실이고;
B' = 티미딘이거나; 또는
X = O이고;
n + m = 0, 1 또는 2이고;
Z 및 Z' = N3이고;
Y 및 Y' = H이고;
B 및 B' = 티미딘이거나; 또는
X = CH2, CF2또는 NH이고;
n 및 m = 1이고;
Z, Z', Y 및 Y' = OH이고;
B 및 B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이다];
[식중:
R1은 수소, C1-8알킬, C3-6시클로알킬, 페닐, 또는 페닐옥시이고; 상기 C1-8알킬, 페닐, 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알콕시, C1-4알킬, C6-10아릴, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노, C1-4알킬아미노, 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함), ω-A(알킬)CONH(알킬)-, 및 ω-A(알킬)NHCO(알킬)- (식중 A는 아미노, 메르캅토, 히드록시 또는 카르복시이다)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환되고;
R2는 0 또는 부재이거나; 또는
R1및 R2는 함께 에테노 부분의 4- 또는 5-위치에서 C1-4알킬, 페닐 또는 페닐옥시로 임의 치환된 5-원의 축합 이미다졸 고리를 형성하고, 이때 상기 C1-4알킬, 페닐, 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알콕시, C1-4알킬, C6-10아릴, C7-12아릴알킬, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노, C1-4알킬아미노 및 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 디알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환되고;
R3는 수소, NH2, C1-8알킬, C3-6시클로알킬, 페닐, 또는 페닐옥시이고; 상기 NH2, C1-8알킬, 페닐, 또는 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알킬, C6-10아릴, C7-12아릴알킬, C1-4알콕시, C7-12아릴알킬옥시; C1-4알킬티오, 페닐티오, C7-12아릴알킬티오, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노, C1-4알킬아미노, 페닐아미노, C7-12아릴알킬아미노, 디-C1-4알킬 아미노 (식중 상기 디알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함), ω-A(알킬)CONH(알킬)B-, 및 ω-A(알킬)NHCO(알킬)B- (식중 A 및 B는 독립적으로 아미노, 메르캅토, 히드록시 또는 카르복시이다)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환된다].
아데닌의 치환된 유도체 (화학식 V)에는 아데닌 1-옥시드; 1,N6-(4- 또는 5-치환 에테노)아데닌; 6-치환 아데닌; 또는 8-치환 아미노아데닌, [6-아미노헥실]카르바모일메틸-아데닌; 및 ω-아실화-아미노(히드록시, 티올 및 카르복시)알킬(C2-10)-아데닌 (식중 아실기는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, 치환-벤조일 등에서 선택되거나 (이에 제한되지는 않음), 또는 카르복실 부분이 이의 에스테르 또는 아미드 유도체, 예를 들어, 에틸 또는 메틸 에스테르 또는 이의 메틸, 에틸 또는 벤즈아미도 유도체로서 존재한다)이 포함된다.
B 및 B'은 1-위치를 통해 리보실 잔기에 연결되는, 하기 화학식 VI의 피리미딘일 수 있다:
[식중:
R4는 수소, 히드록시, 메르캅토, 아미노, 시아노, C7-12아릴알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알콕시, C1-6알킬아미노 또는 디C1-4알킬아미노 (식중 알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함)이고;
R5는 수소, 아세틸, 벤조일, C1-6알킬, 페닐옥시, C1-5알카노일, 아로일, 또는 술포네이트이고;
R6은 히드록시, 메르캅토, C1-4알콕시, C7-12아릴알콕시, C1-6알킬티오, 아미노, S-페닐, C1-5이치환 아미노, 트리아졸릴, C1-6알킬아미노, 또는 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 디아킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성하거나 N3에 연결되어 치환 고리를 형성함)이거나; 또는
R5및 R6은 함께 피리미딘 고리의 위치 3과 위치 4 간의 5-원 축합 이미다졸 고리를 형성하고 3,N4-에테노사이토신 유도체를 형성하며, 상기 에테노 부분은 4- 또는 5-위치에서 C1-4알킬, 페닐 또는 페닐옥시로 임의 치환되고; 상기 C1-4알킬, 페닐 또는 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알콕시, C1-4알킬, C6-10아릴, C7-12아릴알킬, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노, C1-4알킬아미노 및 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 디알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환되고;
R7은 수소, 히드록시, 시아노, 니트로, 또는 C2-8알케닐이고; 상기 알케닐 부분은 산소를 통해 임의로 연결되어 고리를 형성하고, 상기 산소에 인접한 탄소 상의 상기 알케닐 부분의 하나 이상의 수소는 C1-6알킬, 페닐, 치환된 C2-8알키닐, 할로겐, 치환된 C1-4알킬, CF3, C2-3알케닐, C2-3알키닐, 알릴아미노, 브로모비닐, 에틸 프로페노에이트, 또는 프로펜산으로 임의 치환되거나; 또는
R6및 R7은 R6의 N 또는 S를 통해 결합된 5 또는 6-원의 포화 또는 불포화 고리를 형성하고, 상기 고리는 그 자체가 관능성을 갖는 치환체들을 임의로 함유하고; 단 R8이 아미노 또는 치환된 아미노인 경우, R7은 수소이고;
R8은 수소, 아미노 또는 디-C1-4알킬아미노, C1-4알콕시, C7-12아릴알콕시, C1-4알킬티오, C7-12아릴알킬티오, 카르복사미도메틸, 카르복시메틸, 메톡시, 메틸티오, 페녹시 또는 페닐티오이다].
상기 화학식 I, II, III, V 및 VI의 구조식에서, 2- 내지 6-위치의 점선은 이러한 위치에서의 단일 또는 이중 결합의 존재를 가리키기 위한 것이다: 이중 또는 단일 결합의 상대적인 위치는 R4, R5및 R6치환체가 케토-에놀 토토머리즘이 가능한지 여부에 의해 결정된다.
상기 화학식 V 및 VI의 구조식에서, 아실 기는 알카노일 또는 아로일 기를 포함한다. 알킬 기는 탄소수가 1 내지 8, 특히 1 내지 4이고, 하기 기술되는 하나 이상의 적절한 치환체로 임의 치환된다. 아릴옥시와 같은 기의 아릴 부분이 포함되는 아릴 기는 바람직하게는 하기 기술되는 하나 이상의 적절한 치환체로 임의 치환된 페닐 기이다. 상기 언급된 알케닐 및 알키닐 기는 탄소수가 2 내지 8, 특히 2 내지 6이고, 예를 들어, 하기 기술되는 하나 이상의 적절한 치환체로 임의 치환된, 에테닐 또는 에티닐이다.
상기 언급된 알킬, 알케닐, 알키닐 및 아릴 기 상의 적절한 치환체는 할로겐, 히드록시, C1-4알콕시, C1-4알킬, C6-12아릴, C6-12아릴알콕시, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰, 아미노, 및 치환 아미노(식중 아미노는 C1-4알킬로 단일 또는 이중 치환되고, 이중 치환된 경우, 알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함)로부터 선택된다.
본 발명에서 유용한 바람직한 디뉴클레오시드 폴리포스페이트 화합물은 P1, P4-디(유리딘-5')-테트라포스페이트, dUP4U, U2P3, U2P5, dCP4U, CP4U, IP5I, AP4A, CP3U, U3PA 및 A2P3이다.
화학식 I, II 및 III의 일부 화합물은 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다: 일부 화합물은, 예를 들어, Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO 63178)에서 시판한다. 화학식 Ia의 화합물 (UDP 및 이의 유사체)은 WO 99/09998에 따라 제조할 수 있다. 화학식 Ib, IIb 및 IIIb의 화합물 (UTP, ATP, CTP 및 이들의 유사체)은 US 특허 제 5,763,447 호에 따라 제조할 수 있다. 화학식 IV의 화합물은 [Zamecnik 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 838-42 (1981)]; 및 [Ng 및 Orgel, Nucleic Acids Res. 15:3572-80 (1987)], [Pendergast 등, US 특허 제 5,837,861 호], 또는 이의 변형에 기술된 주지된 방법에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물에는 이들의 비독성이고 약학적으로 허용가능한 염, 예컨대 알칼리금속 염 예컨대 나트륨 또는 칼륨; 알칼리토금속 염 예컨대 망간, 마그네슘 또는 칼슘; 또는 암모늄 또는 테트라알킬 암모늄 염, 즉, NX4 +(식중 X는 C1-4이다)이 포함되지만, 이들에 한정되지는 않는다. 약학적으로 허용가능한 염은 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 유지하고 원치 않는 독성학적 효과를 제공하지 않는 염이다. 본 발명에는 본원에 개시된 화합물의 아실화 프로드러그 또한 포함된다. 당업자는 화합물의 비독성이고 약학적으로 허용가능한 염 및 아실화 프로드러그를 제조하는데 사용할 수 있는 다양한 합성 방법을 인지할 것이다.
약학적 조성물은 국소적, 전신적, 공막하, 경공막, 또는 초자체내 전달에 의해 P2Y2작동물질의 세포외 농도가 상승되어 망막 내의 세포 표면 P2Y 수용체를 활성화시키도록 투여될 수 있다. 바람직한 전달 방법은 초자체내 전달 및 경공막 전달이다. 초자체내 전달에는 단일 또는 다중 초자체내 주사가 포함될 수 있거나, P2Y 작동물질을 서방성 기능으로 방출하는 이식성 초자체내 장치를 통할 수 있다. 초자체내 전달에는 안구내 관주 용액에 대한 부가물로서 또는 수술 절차 동안 초자체에 직접 적용되는, 망막 박리, 당뇨병 망막증 또는 황반 변성의 치료에서의 수술 조작 동안의 전달이 또한 포함될 수 있다.
최소 침입성의 경공막 전달을 사용하여 무시할 수 있는 전신 흡수로 망막에 유효량의 활성 화합물을 전달할 수 있다. 경공막 전달은 공막의 크고 접근하기 쉬운 표면 영역, 수용성 물질에 전도성이도록 하는 고도의 수화, 부수적인 소수의 단백질가수분해 효소 및 단백질-결합 부위를 갖는 저세포성, 및 노화에 따라 뚜렷이 감소하지 않는 투과성을 활용한다. 활성 화합물이 망막에 저속-방출 모드로 경공막 전달되도록 활성 화합물이 부하된 삼투압 펌프가 대상에 이식될 수 있다 (Ambati 등, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 41:1186-91 (2000)).
임의의 적절한 수단에 의해 활성 화합물을 환자의 눈에 투여함으로써 활성 화합물을 국소적으로도 투여할 수 있지만, 바람직하게는 점적물, 스프레이 또는 겔 형태의 활성 화합물의 액체 또는 겔 현탁액에 의해 투여한다. 대안적으로, 활성 화합물을 리포좀을 통해 눈에 적용할 수 있다. 또한, 활성 화합물을 눈물 필름 내로 펌프-카테터 시스템을 통해 주입할 수 있다. 본 발명의 또다른 구현예에는 연속적 또는 선택적-방출 장치, 예를 들어, Ocusert™System (Alza Corp., Palo Alto, CA) 또는 Vitrasert™System (Bausch & Lomb, Clairmont, CA)에서 사용되는 막 내에 함유된 활성 화합물이 포함된다. 부가적인 구현예로서, 활성 화합물은 눈에 놓이는 콘택트 렌즈 내에 함유되거나, 이러한 렌즈가 지니거나, 또는 이에 부착될 수 있다. 본 발명의 또다른 구현예에는 눈 표면에 적용될 수 있는 스윕 또는 스폰지 내에 함유된 활성 화합물이 포함된다. 본 발명의 또다른 구현예에는 눈 표면에 적용될 수 있는 액체 스프레이 내에 함유된 활성 화합물이 포함된다.
활성 화합물은 전신적으로 눈에 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "전신적"에는 피하 주사; 정맥내, 근육내, 흉골내 주사; 주입; 흡입, 경피 투여, 경구 투여; 및 수술중 점적이 포함된다.
한 전신적 방법에는 활성 화합물을 함유하는 호흡가능 입자의 에어로졸 현탁액이 포함되고, 대상이 이를 흡입한다. 활성 화합물은 폐를 통해 혈류 내로 흡수되고, 이어서 약학적 유효량으로 눈물샘과 접촉될 수 있다. 호흡가능 입자는 액체 또는 고체일 수 있고, 입자 크기는 흡입시 입 및 후두를 통과할 수 있을 정도로 작고; 일반적으로, 크기가 약 1 내지 10 마이크론, 더욱 바람직하게는 1 내지 5 마이크론인 입자가 호흡가능한 것으로 간주된다.
활성 화합물을 대상의 눈에 전신적으로 투여하는 또다른 방법에는 액체 제형물의 점안액 또는 안세정액 또는 점비액 형태의 액체/액체 현탁액, 또는 환자가 흡입하는 호흡가능 입자의 비강 스프레이를 투여하는 것이 포함된다. 비강 스프레이 또는 점비 또는 점안액을 제조하기 위한 활성 화합물의 액체 약학적 조성물은 활성 화합물을 적절한 비히클, 예컨대 멸균 무발열원수 또는 멸균 생리식염수와 당업자에게 공지된 기술에 의해 배합함으로써 제조될 수 있다.
활성 화합물은 경피 패치 또는 패드를 사용하는 피부에 의한 흡수를 통해 눈에 전신적으로 투여될 수도 있다. 활성 화합물은 피부를 통해 혈류 내로 흡수된다. 활성 화합물의 혈장 농도는 상이한 농도의 활성 화합물을 함유하는 패치를 사용하여 조절할 수 있다.
활성 화합물의 또다른 전신 투여 방법에는 활성 화합물을 함유하는 약학적 조성물이 정제, 로젠지 (lozenge), 수성 또는 유성 현탁액, 점성 겔, 츄잉검, 분산성 분말 또는 과립, 에멀션, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭서르의 형태인 경구 투여가 포함된다. 활성 화합물을 대상의 눈에 전신적으로 투여하는 부가적인 수단에는 치료적 유효량의 화합물이 전신적 흡수 및 순환을 통해 눈에 도달되는, 활성 화합물의 좌약 형태가 포함된다.
활성 화합물의 추가적인 전신 투여 방법에는 치료적 유효량의 활성 화합물의 겔, 크림, 또는 액체 현탁액 형태의 직접적인 수술중 점적이 포함된다.
국소적인 적용을 위해, 활성 화합물을 함유하는 용액은 안과 분야의 당업자가 통상적인 기준을 사용하여 선택할 수 있는 생리학적으로 혼화성인 비히클을 함유할 수 있다. 비히클은 생리식염수용액, 수성 폴리에테르 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 예컨대 폴리비닐 알콜 및 포비돈, 셀룰로스 유도체 예컨대 메틸셀룰로스 및 히드록시프로필셀룰로스, 페트롤륨 유도체 예컨대 미네랄 오일 및 백색 페트롤륨, 동물성 지방 예컨대 라놀린, 아크릴산의 중합체 예컨대 카르복시폴리메틸렌 겔, 식물성 지방 예컨대 땅콩유 및 다당류 예컨대 덱스트란, 및 글리코사미노글리코산 예컨대 소듐 히알루로네이트 및 염 예컨대 염화나트륨 및 염화칼륨이 포함되지만 이에 한정되지 않는 공지된 안과용 비히클로부터 선택될 수 있다.
주사 및 주입과 같은 전신 투여를 위해, 약학적 제형물을 멸균 매질에서 제조한다. 사용된 비히클 및 농도에 따라, 활성 성분은 비히클에 현탁 또는 용해될 수 있다. 국소적 마취제, 방부제 및 완충제와 같은 보조약을 또한 비히클에 용해시킬 수 있다. 멸균 주사 제제는 비독성의 허용가능한 희석제 또는 용매 내의 멸균 주사 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용할 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매는 멸균수, 생리식염수 용액 또는 링거용액이다.
경구 사용을 위해, 물을 분산성 분말 또는 과립에 분산 또는 습윤화제, 현탁제, 하나 이상의 방부제 및 기타 부형제와 함께 첨가하여 수성 현탁액을 제조한다. 현탁제에는, 예를 들어, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스 및 소듐 알기네이트가 포하된다. 분산 또는 습윤화제에는 천연 발생 포스파티드, 알릴렌 옥시드와 지방산의 축합물, 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알콜의 축합물, 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨로부터의 부분 에스테르의 축합물, 및 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터의 부분 에스테르의 축합물이 포함된다. 방부제에는, 예를 들어, 에틸, 및 n-프로필 p-히드록시벤조에이트가 포함된다. 기타 부형제에는 감미제 (예를 들어, 수크로스, 사카린), 향미료 및 착색제가 포함된다. 당업자는 상기 일반적인 설명에 포함되는 많은 특이적 부형제 및 습윤화제를 인지할 것이다.
경구 적용을 위해, 활성 화합물을 정제의 제조에 적절한 비독성의 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼합하여 정제를 제조한다. 이러한 부형제는, 예를 들어, 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화 및 붕해제, 예를 들어, 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어, 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 탈크일 수 있다. 정제는 코팅되지 않거나, 또는 공지된 기술로 코팅되어 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키고, 따라서 장기간 동안 지속적인 작용을 제공할 수 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 사용할 수 있다. 또한 경구용 제형물은 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어, 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어, 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 제시될 수 있다. 경구용 제형물은 활성 성분을 검 내로 포매시켜 저작시 활성 성분이 천천히 방출되도록 함으로써 츄잉검으로 제시될 수도 있다.
직장 투여를 위해, 활성 성분을 통상적인 온도에서는 고체이지만 직장 온도에서는 액체이고 따라서 직장 내에서 용융되어 화합물을 방출하는 적절한 비-자극성 부형제와 혼합함으로써 좌약 형태의 조성물을 제조할 수 있다. 이같은 부형제에는 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜이 포함된다.
본 발명의 P2Y 작동물질 화합물의 약학적 효용은 P2Y 활성에 대한 이노시톨 포스페이트 분석에 의해 나타난다. [E. Lazarowski 등, Brit. J. Pharm. 116, 1619-27 (1995)]에 기술된 바와 같은, 이러한 널리 사용되는 분석은 G-단백질을 통해 포스포리파제 C에 연결된 수용체를 활성화시키는 화합물의 활성의 측정치로서 이노시톨 포스페이트 형성의 측정에 의존한다.
본 발명은 작동물질에 의한 신경교 세포 내의 P2Y 퓨린작동성 수용체의 활성화가 생체내 뉴론의 생존을 증강시킴을 제공한다. 본 발명은 치료적 양상이 임상적으로 유익한 다수의 질환을 다룸으로써 신경보호 반응을 개시시키는 감감 신경계의 신경교 내의 퓨린작동성 수용체의 작동물질-유도 활성화의 효용을 기술한다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 설명되지만, 이러한 실시예는 본 발명의 범주 또는 취지를 이에 기술되는 특정 절차에 한정하는 것으로 파악되지 않는다.
실시예 1: 토끼 및 영장류 망막에서의 P2Y 수용체 유전자 발현의 정위
조직.알비노 토끼 및 원숭이 망막을 눈의 적출, 고정 및 냉동보존에 이어서 제조하였다. 조직을 망막, 망막 색소 상피 및 맥락막을 가로질러 5 ㎛ 두께 단면으로 저온단면화시키고, P2Y2mRNA의 영역에 대해 특이적으로 고안된 센스 및 안티센스 올리고뉴클레오티드 프로브와의 원위치 혼성화를 위해 유리 슬라이드 상에 놓았다. 또한 조직을 헤모톡실린 (H&E)으로 대비 염색하여 연구 조직의 질 및 방위를 평가하였다. H&E 슬라이드의 시험은 모든 조직이 ISH에 적절함을 나타냈다.
리보프로브 합성.인간 P2Y2-R cDNA로부터의 뉴클레오티드 253-651을 함유하는 PCR 생성물을 스폰서로부터 수득하였다. P2Y2-R 뉴클레오티드 272-627을 측면 플라스미드 서열을 제거하고 상류 T3 프로모터 또는 하류 T7 프로모터를 삽입하기 위해 고안된 P2Y2프라이머 (정 프라이머 서열: 5' AGGAGATGTGTTGGGCAGCAGTGAGGAC 3'. 서열 번호 1; 역 프라이머 서열: 역 5' ACCAGGGTTTTCTGGCCAACCTGTGACT 3' 서열번호 2)로 재증폭시켰다. 생성된 PCR 생성물을 사용하여 디곡시게닌-라벨 리보프로브를 생체외 전사 (in vitro transcription: IVT)에 의해 합성하였다. 안티센스 및 센스 리보프로브를 각각 T7 및 T3 RNA 중합효소를 사용하여 디곡시게닌-11 UTP (Boehringer-Mannheim)의 존재 하에 MEGAscript, 또는 MAXIscript IVT 키트 (Ambion)를 사용하여 제조업자에 따라 합성하였다. IVT에 이어서, 주형 DNA를 DNA 분해효소-1로 분해시키고, 삽입되지 않은 디곡시게닌을 초여과에 의해 제거하였다. 리보프로브 삽입을 변성 폴리아크릴아미드 겔을 통해 전기영동에 의해 평가하였다. 겉보기 분자 크기를 100-1000 염기쌍 RNA 래더 (Ambion)의 전기영동 이동성과의 비교에 의해 추정하였다. 프로브 수율 및 라벨링은 블롯 면역화학에 의해 평가하였다. 리보프로브를 5 ㎕ 분취량으로 분배하여 ISH를 위해 사용할 때까지 -80 ℃에서 보관하였다.
원위치 혼성화.동결된 조직을 5 ㎛ 단면으로 절단하고, SuperFrost Plus 슬라이드 (Fisher Scientific) 상에 놓고, pH 7.4의 PBS 내의 4 % 파라포름알데히드에서 15 분 동안 후-고정시켰다. 단면을 프로브의 부재 하에 예비혼성화시킨 후, 400 ng/㎖의 안티센스 또는 센스 프로브를 함유하는 혼성화 완충액 내에서 하룻밤 동안 인큐베이션시켰다. 혼성화에 이어서, 슬라이드를 일련의 후-혼성화 엄격 세정에 적용시켜 비특이적 염색을 감소시켰다. 혼성화를 알칼리성 포스파타제-공액 안티-디곡시게닌 Fab 및 니트로블루 테트라졸륨 클로라이드-브로모클로로인돌릴 포스페이트 (Boehringer-Mannheim)를 사용하여 제조업자에 따라 면역조직화학에 의해 가시화시켰다. 조직 단면을 뉴클리어 패스트 레드 (nuclear fast red)로 대비 염색시켰다. 음성 대조군에는 센스 P2Y2-R 프로브로 염색된 망막 조직이 포함되었다.
결과.두쌍의 슬라이드는 토끼 (도 1) 및 원숭이 조직 (도 2)에 대한 센스 및 안티센스 결과를 나타낸다. 양 조직 모두 안티센스 프로브를 사용하여 양성 염색을 나타내지만 (도 1 및 2, 좌측), 대조군 센스 프로브를 사용하여 음성 염색을 나타낸다 (도 1 및 2, 우측). 이러한 결과는 양 토끼 및 원숭이 망막이 P2Y2수용체에 대한 메세지를 함유함을 나타낸다. 안티센스 프로브의 세포성 정위는 내부 제한막을 따라 점문 P2Y2발현을 나타냈고, 이는 세포체가 주로 이러한 층 내에 존재하는 망막 성상세포의 정위와 일치한다. 세포체 염색이 신경절 세포층 및 내핵층 내의 세포의 부분집합 내에서 또한 관찰되었고, 이는 신경절 및 뮐러 세포 내의 P2Y2의 존재와 일치한다. 부가적인 염색이 외부 제한층에 걸쳐 나타났고, 뮐러 세포 미융모의 세포질 염색 또는 광수용체 내부 세그먼트를 반영할 수 있다. 최종적으로, 강한 염색이 망막 색소 상피 (RPE)를 따라 나타났다. 따라서 P2Y2발현이 망막 뉴론 및 신경교에서 입증되었다.
실시예 2: 지속적인 빛의 손상 효과로부터의 광수용체의 보호
동물 모델.알비노 스프라그-돌리 래트의 광수용체를 약 4 일 동안 지속적인 밝은 빛에 노출시킨 결과 손상되기 쉬워졌다. 스프라그-돌리 래트에서의 빛-유도 광수용체 변성은 독성 수준의 밝은 빛에의 노출에 따른 또는 질환 상태의 인간에서의 망막 변성에 대한 동물 모델로서 널리 사용된다 (La Vail 등, Proc Natl Acad Sci., 89:11249-11253, 1992). 이러한 모델을 사용하여 지속적인 밝은 빛에의 노출에 의해 야기되는 변성으로부터 광수용체를 보호하는 P2Y2수용체의 능력을 시험하였다.
실험 디자인.스프라그-돌리 래트를 ~ 10주령이 되게 하고 ~ 20 ft-cd의 우리내 조도로 12 시간 주기의 밝음/어두움 조명 하에 사육하였다. 밝은 빛에의 노출 전에, 동물에 P2Y 수용체 작동물질, 예컨대 dCP4U 및 IP4U를 초자체내에 주사하고 (1 ㎕ 주사), 16 또는 48 시간 동안 정상적인 주기적 조명 조건으로 되돌린 후, 동물들을 지속적인 밝은 빛 (~175 ft-cd) 하에 84 시간 동안 사육하였다.하기 농도를 각각의 화합물에 대해 시험하였다: dCP4U (1 및 10 mM), IP4U (10 mM), 및 BDNF (0.5 ㎍). 84 시간의 지속적인 밝은 조명 후, 동물들을 정상적인 주기적 조명 조건으로 2 주 동안 되돌리고, 희생시켰다. 망막 기능을 평가하기 위해, 암순응 및 명순응 망막전위도 (ERG)를 밝은 빛에의 노출 일주일 전, 노출시, 및 희생 직전에 수행하였다. ERG는 짧은 섬광에의 노출에 대한 반응에서 망막을 가로질러 유래되는 전기 활성의 기능적 측정을 제공하고, 광수용체 기능 및 통합성의 비교적 비침입성인 측정을 나타낸다. 한 세트의 어두운 (24 dB 조명) 암순응 및 한 세트의 밝은 (0 dB 조명) 암순응 반응을 만들었다. 어두운 조명으로부터의 ERG는 로드 광수용체로부터 주로 발생하였고, 밝은 조명으로부터의 ERG 반응은 혼합된 로드 및 콘 광수용체로부터 발생하였다. 희생 후, 눈을 적출하고 파라핀 섹션에 대해 진행시키고 헤모톡실린 및 에오신으로 염색하여 망막의 조직학적 특징을 해석하였다. 조직학적 분석은 광수용체 및 망막의 다른 부분의 형상적인 정보를 세포 수준에서 제공하였다. 동물들을 한쪽눈은 P2Y 작동물질로 처리하고, 반대쪽 눈은 처리하지 않았다. 동물의 별도의 대조군을 한쪽눈은 비히클 완충액으로 처리하고 반대쪽 눈은 처리하지 않았다. 또다른 별도의 양성 대조군은 한쪽눈은 뇌-유래 신경영양 인자 (BDNF)로 처리하고 반대쪽 눈은 처리하지 않았다. BDNF는 이러한 모델에서 광수용체의 생존을 증강시키는 것으로 앞서 나타났다 (La Vail 등, Proc Natl Acad Sci., 89:11249-11253, 1992).
결과.P2Y 수용체 작동물질, 비히클 또는 BDNF로 처리된 동물을 측정법으로 ERG 및 조직학을 사용하여 광수용체의 신경보호에 대해 시험하였다. P2Y 작동물질로 처리된 눈은 시험된 양 강도의 조명에서 일반적으로 더 큰 ERG 반응을 나타낸 반면 (도 3, 4 및 5), 비히클 단독은 ERG에 최소의 효과를 가졌다. 망막의 하부 반구에서, dCP4U 및 IP4U로 처리된 눈의 외핵층 (광수용체 핵으로 구성됨) 및 내부/외부 분절의 두께는 일반적으로 처리되지 않은 눈 및 비히클로 처리된 눈보다 컸다 (도 6). 두 P2Y 수용체 작동물질의 이러한 효과는 양성 대조군 BDNF의 것과 유사하다 (도 6). 상부 반구에서, 모든 처리군 및 대조군은 외핵층의 두께에서 유사한 증가를 나타냈다 (도 7). 도 3-7의 결과는 P2Y 수용체 작동물질이 BDNF의 효과와 유사하게 빛-손상 모델에서 광수용체의 생존을 증강시킴을 나타낸다.

Claims (18)

  1. 망막 신경교 세포 및 뉴론 세포의 세포 표면 P2Y 수용체가 활성화되어 신경보호성 반응이 개시되도록 망막 내의 P2Y 수용체 작동물질의 세포외 농도를 증가시키기에 유효한 치료적 유효량의 P2Y 수용체 작동물질 화합물을 함유하는 약학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 망막 변성 질환의 치료 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 P2Y 수용체 작동물질이 하기 화학식 Ia, IIa 및 IIIa의 화합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오시드 디포스페이트인 방법:
    [화학식 Ia]
    [식중:
    X1및 X2는 각각 독립적으로 0-또는 S-이고;
    Y는 H 또는 OH이고;
    R1은 O, 이미도, 메틸렌 및 디할로메틸렌으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    R2는 H, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알콕실, 니트로 및 아지도로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    R3는 H, 알킬, 아릴알킬, 아실, 아릴아실, 및 아릴알킬로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    R4는 -OR', -SR', NR' 및 NR'R" (식중 R' 및 R"는 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아릴알킬, 알콕실, 및 아릴옥실로 구성되는 군으로부터 선택되며, 단 R4가 피리미딘 고리의 4-위치의 탄소에 산소 또는 황 원자로부터 이중결합되면 R'은 부재한다)으로 구성되는 군으로부터 선택된다];
    [화학식 IIa]
    [식중:
    R1, X1, X2및 Y는 화학식 Ia에 정의된 대로이고;
    Z는 H, Cl 또는 SR (식중 R은 C1-C20포화 또는 불포화 알킬이다)이고;
    R2가 부재하고 N-1과 C-6 간에 이중 결합이 존재하면서 R3및 R4가 H이거나,
    R2가 O이고 N-1과 C-6 간에 이중 결합이 존재하면서 R3및 R4가 H이거나,
    R3, R4및 R2가 함께 -CH=CH-이어서, N-6과 C-6 간의 이중결합을 갖는 N-6에서 N-1까지의 고리를 형성한다];
    [화학식 IIIa]
    [식중:
    R1, X1, X2및 Y는 화학식 Ia에서 정의된 대로이고;
    R7이 부재하고 N-3와 C-4 간에 이중 결합이 존재하면서 R5및 R6가 H이거나;
    R5, R6및 R7이 함께 -CH=CH-이어서, N-4와 C-4 간의 이중결합을 갖는 N-3에서 N-4까지의 고리를 형성하고, 임의로 에테노 고리의 4- 또는 5-위치의 수소는 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 니트로, 할로 및 아지도로 치환된다].
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 디포스페이트가 5'-유리딘 디포스페이트, 5'-아데노신 디포스페이트, 또는 5'-사이티딘 디포스페이트인 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 퓨린작동성 수용체 작동물질이 하기 화학식 Ib 및 IIIb의 화합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 트리포스페이트인 방법:
    [화학식 Ib]
    [식중:
    X1, X2및 X3는 각각 독립적으로 0-또는 S-이고;
    Y는 H 또는 OH이고;
    R1은 0, 이미도, 메틸렌 또는 디할로메틸렌이고;
    R2는 H 또는 Br이고;
    R3는 부재, H, 알킬, 아실 및 아릴알킬로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    R4는 -OR', -SR', NR', 및 NR'R" (식중 R' 및 R"는 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아릴알킬, 알콕실, 및 아릴옥실로 구성되는 군으로부터 선택되며, 단 R4가 피리미딘 고리의 4-위치의 탄소에 산소 또는 황 원자로부터 이중결합되면 R'은 부재한다)으로 구성되는 군으로부터 선택된다];
    [화학식 IIIb]
    [식중:
    R1, X1, X2, X3및 Y는 화학식 Ib에서 정의된 대로이고,
    R7이 부재하고 N-3과 C-4 간의 이중 결합이 존재하면서 R5및 R6가 H이거나,
    R5, R6및 R7은 함께 -CH=CH-이어서, N-4와 C-4 간의 이중결합을 갖는 N-3에서 N-4까지의 고리를 형성하고, 임의로 에테노 고리의 4- 또는 5-위치의 수소는 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 니트로, 할로겐 및 아지도로 치환된다].
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 트리포스페이트가 유리딘 5'-트리포스페이트, 사이티딘 5'-트리포스페이트, 또는 4-니트로페닐에테노사이티딘 5'-트리포스페이트인 방법.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 P2Y 수용체 작동물질이 하기 화학식 IV의 화합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 디뉴클레오시드 폴리포스페이트인 방법:
    [화학식 IV]
    [식중:
    X는 산소, 메틸렌, 디플루오로메틸렌, 이미도이고;
    n = 0, 1 또는 2이고;
    m = 0, 1 또는 2이고;
    n + m = 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    B 및 B'은 각각 독립적으로 9- 또는 1-위치를 통해 각각 연결되는 퓨린 잔기 또는 피리미딘 잔기이며;
    Z = OH 또는 N3이고;
    Z' = OH 또는 N3이고;
    Y = H 또는 OH이며;
    Y'= H 또는 OH이다].
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 디뉴클레오시드 폴리포스페이트가 하기 화학식 IVa의 화합물인 방법:
    [화학식 IVa]
    [식중:
    X = O이고;
    n + m = 1 또는 2이고;
    Z, Z', Y 및 Y' = OH이고;
    B 및 B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴, 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이거나; 또는
    X = O이고;
    n + m = 3 또는 4이고;
    Z, Z', Y 및 Y' = OH이고;
    B = 우라실이고;
    B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이거나; 또는
    X = O이고;
    n + m = 1 또는 2이고;
    Z, Y 및 Z' = OH이고;
    Y' = H이고;
    B = 우라실이고;
    B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이거나; 또는
    X = O이고;
    n + m = 0, 1 또는 2이고;
    Z 및 Y = OH이고;
    Z' = N3이고;
    Y' = H이고;
    B = 우라실이고;
    B' = 티미딘이거나; 또는
    X = O이고;
    n + m = 0, 1 또는 2이고;
    Z 및 Z' = N3이고;
    Y 및 Y' = H이고;
    B 및 B' = 티미딘이거나; 또는
    X = CH2, CF2또는 NH이고;
    n 및 m = 1이고;
    Z, Z', Y 및 Y' = OH이고;
    B 및 B'은 우라실, 티미딘, 사이토신, 구아닌, 아데닌, 잔틴, 하이포잔틴 또는 화학식 V 및 VI에서 정의된 대로이다];
    [화학식 V]
    [식중:
    R1은 수소; C1-8알킬; 페닐; 또는 페닐옥시이고; 상기 C1-8알킬, 페닐, 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알콕시, C1-4알킬, C6-10아릴, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노,C1-4알킬아미노, 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함), ω-A(C1-6알킬)CONH(C1-6알킬)-, 및 ω-A(C1-6알킬)NHCO(C1-6알킬)- (식중 A는 아미노, 메르캅토, 히드록시 또는 카르복시이다)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환되고;
    R2는 0 또는 부재이거나; 또는
    R1및 R2는 함께 에테노 부분의 4- 또는 5-위치에서 C1-4알킬, 페닐 또는 페닐옥시로 임의 치환된 5-원의 축합 이미다졸 고리를 형성하고, 이때 상기 C1-4알킬, 페닐, 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알콕시, C1-4알킬, C6-10아릴, C7-12아릴알킬, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노, C1-4알킬아미노 및 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 디알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환되고;
    R3는 수소, NH2, C1-8알킬, 페닐, 또는 페닐옥시이고; 상기 NH2, C1-8알킬, 페닐, 또는 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알킬, C6-10아릴, C7-12아릴알킬, C1-4알콕시, C7-12아릴알킬옥시; C1-4알킬티오, 페닐티오, C7-12아릴알킬티오, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노, C1-4알킬아미노, 페닐아미노, C7-12아릴알킬아미노, 디-C1-4알킬 아미노 (식중 상기 디알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함), ω-A(C1-6알킬)CONH(C1-6알킬)B-, 및 ω-A(C1-6알킬)NHCO(C1-6알킬)B- (식중 A 및 B는 독립적으로 아미노, 메르캅토, 히드록시 또는 카르복시이다)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환된다];
    [화학식 VI]
    [식중:
    R4는 수소, 히드록시, 메르캅토, 아미노, 시아노, C7-12아릴알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알콕시, C1-6알킬아미노 또는 디C1-4알킬아미노 (식중 알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함)이고;
    R5는 수소, 아세틸, 벤조일, C1-6알킬, 페닐옥시, C1-5알카노일, 아로일, 또는 술포네이트이고;
    R6은 히드록시, 메르캅토, C1-4알콕시, C7-12아릴알콕시, C1-6알킬티오, 아미노, C1-5이치환 아미노, 트리아졸릴, C1-6알킬아미노, 또는 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 디아킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성하거나 N3에 연결되어 치환 고리를 형성함)이거나;
    R5및 R6은 함께 피리미딘 고리의 위치 3과 위치 4 간의 5-원 축합 이미다졸 고리를 형성하고 3,N4-에테노사이토신 유도체를 형성하며, 상기 에테노 부분은 4- 또는 5-위치에서 C1-4알킬; 페닐; 또는 페닐옥시로 임의 치환되고; 상기 C1-4알킬, 페닐 또는 페닐옥시의 하나 이상의 수소는 할로겐, 히드록시, C1-4알콕시, C1-4알킬, C6-10아릴, C7-12아릴알킬, 카르복시, 시아노, 니트로, 술폰아미도, 술포네이트, 포스페이트, 술폰산, 아미노, C1-4알킬아미노 및 디-C1-4알킬아미노 (식중 상기 디알킬 기들은 임의로 연결되어 헤테로고리를 형성함)로 구성되는 군으로부터 선택되는 부분으로 임의 치환되고;
    R7은 수소, 히드록시, 시아노, 니트로, 또는 C2-8알케닐이고; 상기 알케닐 부분은 산소를 통해 임의로 연결되어 고리를 형성하고, 상기 산소에 인접한 탄소 상의 상기 알케닐 부분의 하나 이상의 수소는 C1-6알킬, 페닐, 치환된 C2-8알키닐, 할로겐, 치환된 C1-4알킬, CF3, C2-3알케닐, C2-3알키닐, 알릴아미노, 브로모비닐, 에틸 프로페노에이트, 또는 프로펜산으로 임의 치환되거나; 또는
    R6및 R7은 R6의 N 또는 S를 통해 결합된 5 또는 6-원의 포화 또는 불포화 고리를 형성하고, 상기 고리는 그 자체가 관능성을 갖는 치환체들을 임의로 함유하고; 단 R8이 아미노 또는 치환된 아미노인 경우, R7은 수소이고;
    R8은 수소, 아미노 또는 디-C1-4알킬아미노, C1-4알콕시, C7-12아릴알콕시, C1-4알킬티오, C7-12아릴알킬티오, 카르복사미도메틸, 카르복시메틸, 메톡시, 메틸티오, 페녹시 또는 페닐티오이다].
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 디뉴클레오시드 폴리포스페이트가 U2P4, dUP4U, U2P3, U2P5, dCP4U, CP4U, IP5I, AP4A, CP3U, U3PA 또는 A2P3인 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물을 초자체내 전달, 경공막 전달, 또는 국소 투여에 의해 환자에게 투여하는 방법.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 국소 투여가 액적, 액체 워시, 겔, 연고, 스프레이 및 리포좀으로 구성되는 군으로부터 선택되는 캐리어 비히클에 의한 것인 방법.
  11. 제 9 항에 있어서, 상기 국소 투여가 상기 화합물을 펌프-카테터 시스템, 연속 또는 선택적 방출 장치 및 콘택트렌즈로 구성되는 군으로부터 선택되는 장치에 의해 눈 표면에 주입하는 것을 포함하는 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 상기 화합물의 전신 투여인 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 전신 투여물이 상기 대상에게 점비약 또는 비강 스프레이용 액체 또는 액체 현탁액; 경구 또는 비인두성 기도로의 투여용 분무액; 경구 형태물; 주사 형태물; 좌약 형태물; 수술중 점적용 겔, 크림, 분말, 폼, 결정, 리포좀, 스프레이 또는 액체 현탁액; 및 경피 패치 또는 경피 패드로 구성되는 군으로부터 선택되는 형태로, 치료적 유효량의 상기 화합물이 전신적 흡수 및 순환을 통해 상기 대상의 망막 조직과 접촉되도록 투여되는 방법.
  14. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 망막 변성 질환이 유전성 망막 변성 질환, 후천성 망막 변성 질환 또는 염증-유도 망막 변성 질환인 방법.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 유전성 망막 변성 질환이 황반 변성, 스타르가르드병, 베스트병, 녹내장, 색소성 망막염 또는 시신경 변성인 방법.
  16. 제 14 항에 있어서, 상기 후천성 망막 변성 질환이 낭포 황반 부종, 망막 박리, 광손상, 정맥 또는 동맥 폐색 또는 기타 혈관 장애로 인한 허혈성 망막증, 외상, 수술 또는 눈의 투과 병변으로 인한 망막증, 또는 주변부 유리체망막증에 기인하는 방법.
  17. 제 14 항에 있어서, 상기 염증-유도 망막 변성 질환이 바이러스-, 박테리아- 또는 독소-유도 망막 변성, 또는 포도막염에 기인하는 방법.
  18. 제 14 항에 있어서, 상기 염증-유도 망막 변성 질환으로 시신경염이 발생하는 방법.
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