KR20020069863A - 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의제조방법 - Google Patents
단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법에 관한 것이다. 본 이중코팅 유산균 원말의 제조방법은 1%-10%농도의 대두분리단백과 탈지분유를 소정의 혼합비로 혼합하여 1%-10%수용액으로 만든 후 유산균주에 따라서 대단백질 중량비 0.01%-1%범위의 단백분해 효소용액을 가하여 효소처리하는 단백질효소분해단계와, 상기 효소처리액에 중량비 1%-5%범위의 포도당, 0.1%-1.5%범위의 효모추출물, 0.1%-1.5%범위의 육엑기스, 0.01%-0.1%범위의 이온성분을 첨가하여 용해시키고 발효관에서 스팀살균 후 유산균을 배양하는 유산균 발효단계와, 상기 발효된 발효액을 고속원심분리기에 의해 분리 농축하여 균체를 분리하고 코팅하는 1차 단백질코팅단계와, 상기 회수된 균체에 대비하여 중량비 1%-10%의 동결보호제 성분을 35%-45% 수용액으로 제조하고, 회수균체에 대비하여 1%-10%의 다당류 성분을 1%-10%수용액으로 제조하여 균체, 동결보호제 수용액, 다당류 수용액을 혼합균질화 하여 코팅하고 동결건조하는 2차코팅단계를 포함한다. 이와 같이, 본 발명은 수용액상에서의 균질화 및 동결건조공정만으로 이중코팅된 유산균체를 획득할 수 있어 별도의 설비없이 제조공정이 유지되므로 공정의 융통성 및 호환성이 큰 장점이 있다.
Description
본 발명은 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법에 관한 것으로써 좀더 상세하게 설명하면 유산균에 단백질과 다당류를 이중코팅하는 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법에 관한 것이다.
일반적으로 유산균은 장에 정착하여 장관운동 활성화, 유해균 억제, 비타민 및 면역증강 물질 촉진 등 다양한 생리활성 효과를 발휘하는데, 인체의 구조상 사람이 유산균 섭취시 장까지 도달하기 까지에는 위를 거치게 되어있어 위에서 분비되는 위산으로 인해 유산균이 사멸하여 유산균 본래의 생리활성 기능을 발휘하지 못하게 되는 경우가 많다.
특히, 종래의 비코팅 유산균 원말의 제조공정은 도 1에서와 같이 유산균 발효, 균체 회수, 동결건조의 과정으로 이루어지는데, 이러한 비코팅 유산균 분말은 공기, 수분, 온도조건에 민감하게 반응하므로 저장 및 유통안정성과 2차 제품 제조시의 가공안정성을 확보하기에 어려움이 있다. 또한 사람 및 동물의 섭취시에는 위산 및 담즙산과의 직접적인 접촉에 의해 급격히 사멸하므로 장내정착성 및 유산균 고유의 효능, 효과를 보장할 수 없는 문제점이 있다.
이러한 문제점을 해결하기 위해 유산균에 코팅을 하여 사용하게 되었는데, 유산균 코팅 기술로는 캡슐제를 이용한 장용코팅제와 젤라틴, 당류, 껌류 등을 이용한 마이크로캡슐화(Microencapsulation)공정 등이 있는데 유산균체의 회수공정 이후에 코팅제를 투입하는 별도의 코팅공정에 의해 실시되어 진다.
종래 유산균 코팅공정은 건조 완료된 유산균 분말에 코팅제를 첨가하여 실시되는 경우가 많으며, 일반적인 공정은 도 1과 같다. 유산균 배양(M1,M2)은 일반적으로 펩톤류, 육엑기스, 효모추출물, 포도당 및 무기이온이 조합된 발효배지를 이용하여 혐기적 발효장치 내에서 이루어진다. 이들 배지 성분은 주로 유산균이 증식하는 데에 이용되는 수용성 성분만으로 구성되어 진다. 유산균체의 회수(M3)는 원심분리 또는 한외여과기를 이용하여 이루어지며 균체와 배양 여액과의 분리 및 균체의 농축만을 목적으로 하고 있다. 급속동결 및 동결건조 과정(M4)에서 유산균의 급격한 사멸이 발생하므로 당류, 아미노산등을 조합한 유산균 동결보호제(M5)를 첨가하여 건조분말화(M6) 시킨다. 이후 유산균 분말에 수용액상의 코팅제 조성물이 가해지고 교반 및 혼합 후 동결 건조되어 진다. 또는 매우 미세한 구형의 비드(Bead) 형성능이 있는 코팅제 조성물이 가해지고 노즐분사에 의해 마이크로캡슐화 공정이 이루어 진다.
이러한, 종래 유산균 코팅공정은 유산균체의 회수 및 건조분말화 공정 이후에 코팅제의 혼합교반 또는 마이크로캡슐화 공정이 이루어지므로 고가의 코팅제 및 공정추가에 따르는 비용부담이 발생하며 기타 미생물의 혼입이 우려되므로 무균조작에 어려움이 발생할 수 있다. 또한, 액상코팅 후 동결건조과정에서는 우수한 생존률 및 안정성을 확보하기 위해서 동결보호제 및 안정제의 사용이 필요하므로 재료 또는 공정의 충돌이나 중복이 발생하는 문제점이 있다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출한 것으로써, 공기, 수분과의 직접적인 반응이 억제되며 내열성, 내산성, 내담즙성이 강화되어 생균 안정성 및 가공 안정성이 증강된 유산균 원말의 제조 및 이와 관련된 유산균 코팅공정을 단백질 소재를 이용하여 저렴하고 신속한 제조방법에 의해 실시하는 단백질코팅 유산균에 추가적으로 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose), 리벤(Levan)과 같은 다당류를 균주에 따라서 단독, 또는 혼합 사용하여 2중으로 코팅하는 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
도 1은 종래 코팅 유산균의 제조방법에 따른 공정도이고,
도 2는 본 발명인 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법에 따른 공정도이고,
도 3은 본 발명인 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법에 따른 실시 예를 나타내는 공정도이다.
상기 목적은, 본 발명에 따라, 1%-10%농도의 대두분리단백과 탈지분유를 소정의 혼합비로 혼합하여 1%-10%수용액으로 만든 유산균주에 따라서 대단백질 중량비 0.01%-1%범위의 단백분해 효소용액을 가하여 효소처리하는 단백질효소분해단계와, 상기 효소처리액에 중량비 1%-5%범위의 포도당, 0.1%-1.5%범위의 효모추출물, 0.1%-1.5%범위의 육엑기스, 0.01%-0.1%범위의 이온성분을 첨가하여 용해시키고 발효관에서 스팀살균 후 유산균을 배양하는 유산균 발효단계와, 상기 발효된 발효액을 고속원심분리기에 의해 분리 농축하여 균체를 분리하고 동시에 발효액에 존재하는 단백질 침적물 내에 균체를 코팅하는 1차 단백질코팅단계와, 상기 회수된 균체에 대비하여 중량비 1%-10%의 동결보호제 성분을 35%-45% 수용액으로 제조하고, 회수균체에 대비하여 중량비 1%-10%의 다당류 성분을 1%-10% 수용액으로 제조하여 균체, 동결보호제 수용액, 다당류 수용액으로 혼합 균질화하여 코팅하고 동결건조하는 2차코팅단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법에 의해 달성된다.
여기서, 상기 이온성분으로 암모니움 시트레이트, 소디움 아세테이트, 디포타시움 포스테이트, 마그네슘 설페이트, 망간 설페이트, 소디움 클로라이드의 이온성분을 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 다당류 수용액으로 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose), 리벤(Levan)을 사용하는 것이 바람직하다.
그리고, 상기 1차 단백질코팅단계 이후 동결건조하는 단계를 더 포함하는 것이 바람직하다.
이하, 첨부한 도면인 도 2와 도3을 참고하여 본 발명인 단백질 및 다당류를이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법을 설명하면 다음과 같다. 도 2는 균체회수 후 단백질 및 다당류를 사용하여 이중코팅 후 동결건조하여 제조하는 이중코팅 원말의 제조공정도이고, 도 3은 단백질 코팅하여 제조된 유산균 원말에 대하여 다당류 수용액을 사용하여 2차 코팅한 후 동결건조하여 제조하는 이중코팅유산균 원말의 제조공정도이다.
본 발명인 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법은 발효배지 안에 포함된 단백질 코팅제에 의해 1차 코팅하고 다당류수용액을 사용하여 다시 코팅하는 이중코팅방법으로 단백질효소분해단계와 유산균발효단계와 1차 단백질코팅단계와 2차 코팅단계로 이루어진다.
상기 단백질효소분해단계(S1)에서는 발효배지로 사용되는 탈지분유와 대두분리단백을 각각 단독으로 또는 혼합하여 1%-10%수용액으로 만든 후 유산균주에 따라서 대단백질 중량비 0.01%-1%범위의 단백분해 효소용액을 가하여 효소처리하게 된다. 여기서, 탈지분유(Skim Milk)와 대두분리단백(Isolated Soy Protein)의 효소처리 가수분해물은 유산균 증식에 이용되는 수용성 또는 저분자량의 펩타이드 성분과 유산균체의 포집 및 코팅에 사용되어지는 반수용성 또는 고분자량의 펩타이드 성분으로 구별된다.
상기 유산균발효단계(S2)에서는 효소처리액에 중량비 1%-5%범위의 포도당, 0.1%-1.5%범위의 효모추출물, 0.1%-1.5%범위의 육엑기스, 0.01%-0.1%범위의 암모니움 시트레이트, 소디움 아세테이트, 디포타시움 포스테이트, 마그네슘 설페이트, 망간 설페이트, 소디움 클로라이드 등의 이온성분을 첨가하여 용해시키고 혐기적발효관에서 스팀 살균 후 유산균을 배양한다.
상기 1차 단백질코팅단계(S3)에서는 발효된 발효액을 15,000RPM이상의 고속원심분리기에 의해 분리 및 농축한다. 이때 발효액 중의 잔존 단백질 성분이 균체와 함께 침적되면서 균체를 포집 및 포괄하는 코팅기작이 발생한다. 여기서, 가수분해물 조성은 유산균종의 생리특성에 따라 단백질의 농도 및 효소처리율을 가감함으로써 고농도의 유산균 증식효과를 얻을 수 있고, 급속동결시에는 균체를 포괄하여 아이스크리스탈의 형성으로부터 균체를 방어하므로 동결보호제로서의 효과도 동시에 지니게 된다.
상기 2차 코팅단계(S4)에서는 회수된 균체에 대비하여 동결보호제로써 중량비 1%-10%의 트리할로즈, 말토덱스트린, 만니톨, 탈지분유 성분을 35%-45% 수용액으로 조성하고, 회수균체 대비 1%-10%의 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose), 리벤(Levan)을 각각 단독으로 또는 혼합으로 사용하여 1%-10% 수용액으로 제조하여 가압살균한 후에 회수균체, 동결보호제 수용액과 혼합하고 교반기에서 교반하여 균질화시킨 후 동결건조한다. 또는 단백질코팅 후 동결건조된 단백질 코팅 유산균 원말에 대비하여 중량비 1%-10%의 트리할로즈, 말토덱스트린, 만니톨, 탈지분유 수용액을 35%-45%의 중량비의 농도로 조성하고 유산균 원말에 대비하여 1%-10%의 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose), 리벤(Levan)을 각각 단독으로 또는 혼합하여 1%-10% 수용액으로 제조하여, 가압살균 후에 단백질코팅된 유산균 원말과 혼합하여 교반기에서 교반하여 균질화시킨 후 동결건조(S3-1)하여 2차 코팅(S4)한다. 다당류 수용액에 균질화된 단백질코팅 유산균은 동결건조 후 다당류가 보유한 강력한 접착력에 의해 균체사이의 결합이 발생하며 매우 치밀한 구조를 지닌 균괴를 형성하고 원말의 분쇄공정을 거쳐 40-120의 일정한 입도를 갖게 된다.
그림 1. 이중 코팅 유산균 원말의 형상도
여기서, 상기 2차 코팅제로 사용되는 다당류의 특성을 살펴보면 특유의 점착성에 의해 각 균체를 결합하여 균괴를 형성시키며 친수성을 지니므로 1차 코팅제인 단백질과의 결합은 물론 기타 수용성의 당류, 아미노산 성분인 동결보호제 및 유산균 안정제와의 병용사용이 가능한 장점이 있다. 특히, 다당류재료는 수용액 상태일 때 산성의 조건에서는 용해도가 극히 낮고 중성 이상의 pH에서는 쉽게 해리, 용출되므로 산성조건에서의 유산균의 안정성 및 장내정착성이 매우 우수해질 수 있다.
이러한 2중 코팅방법을 사용하여 제조된 제품에 따른 몇 가지 실시 예를 들면 아래와 같다. 첫째, 단백질 코팅된 Lactobacillus acidophilus CBT-LH원말의 생산은 탈지분유 4Kg, 대두분리단백 2kg을 물 100Kg에 현탁시킨 후 저속 교반기, 온도조절장치, pH조절장치가 장착된 효소처리조에서 55℃ 온도, 초기 pH7.0의 조건에서 단백분해효소제(Amano사 제품, Protease-N) 1.02g을 100ml의 물에 용해시켜서 첨가하고 pH가 6.0으로 감소할 때까지 가수분해하였다. 이 가수분해 용액에 포도당 5Kg, 육엑기스 1Kg, 효모추출물 0.5Kg, 디포타슘 포스페이트 50g, 암모니움 시트레이트 50g, 소디움 아세테이트 50g, 마그네슘 설페이트 10g, 망간 설페이트 10g을 첨가하여 용해시키고 200L 용량의 혐기적 발효관에 이송하여 121℃에서 15분간 살균하고 종균 2L를 접종하여 암모니아로 pH를 6.0으로 유지하면서 12시간 발효하였다. 발효액을 60L/Hr의 유속으로 연속식 원심분리기로 이송시키면서 균체와 잔존 단백성분을 침적시키고 회수하였다. 트리할로즈 1Kg, 만니톨 1Kg, 말토덱스트린 1Kg으로 조성된 동결보호제 수용액 10L를 가압살균하여 제조하고, 10g 잔탐검(Xantan gum), 10g 셀룰로즈(Cellulose), 10g 리벤(Levan)을 용해시킨 다당류 수용액 3L를 가압살균하여 회수균체, 동결보호제 수용액, 다당류 수용액을 혼합한 후 교반기에서 5,000RPM으로 교반하여 균질화시키고 -55℃의 냉동고에서 급속동결한 후 0℃에서 40℃사이의 조작조건에서 동결건조 하였다. 원심분리 침적과정에서 반 수용성의 잔존 단백성분은 균체를 포괄하고 수용성 펩타이드 성분은 균체의 세포벽에 침착하여 단백질코팅을 형성하였으며 다당류 성분은 균체 사이의 결합에 의해 매우 치밀한 구조를 지닌 균괴를 형성하였다. 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose), 리벤(Levan)의 혼합 조성물에 의한 이중코팅 유산균은 비코팅 유산균에 비하여 우수한 가속시험 안정성, 내산성, 내담즙성을 나타내었다. 이에 따른 시험결과는 아래(표1)와 같다.
표1. 단백질 코팅된 Lactobacillus acidophilus CBT-LH의 내산성, 내담즙성, 가속시험 결과.
| 내산성 시험(pH2.1의 인공위액 중) | 내담즙성 시험(0.5% Oxgall 용액 중) | 가속시험(40℃, 70% 상대습도) | ||||||
| 노출시간(분) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) | 노출시간(분) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) | 경과시간(일) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) |
| 0 | 3.4x1011 | 3.3x1011 | 0 | 3.5x1011 | 3.4x1011 | 0 | 3.1x1011 | 3.2x1011 |
| 30 | 3.2x1011 | 2.3x1011 | 30 | 3.3x1011 | 2.1x1011 | 10 | 2.9x1011 | 1.1x1011 |
| 60 | 3.1x1011 | 1.5x109 | 60 | 3.2x1011 | 1.4x1011 | 20 | 2.6x1011 | 8.9x1010 |
| 90 | 3.1x1011 | 1.2x1011 | 90 | 3.0x1011 | 1.1x1011 | 30 | 2.5x1011 | 1.0x1010 |
| 120 | 2.9x1011 | 9.3x1011 | 120 | 2.9x1011 | 9.9x1010 | 40 | 2.0x1011 | 9.8x109 |
| 120분경과시의 생존율(%) | 85.3 | 28.2 | 120분경과시의 생존율(%) | 82.9 | 29.1 | 40일경과시의생존율(%) | 64.5 | 3.1 |
둘째, 단백질 코팅된 Streptococcus thermophilus CBT-ST 원말의 생산은 탈지분유 6Kg을 물 100Kg에 현탁시킨 후 저속 교반기, 온도조절장치, pH조절장치가 장착된 효소처리조에서 55℃ 온도, 초기 pH7.0의 조건에서 단백분해효소제(Amano사 제품, Protease-N) 6g을 100ml의 물에 용해시켜서 첨가하고 pH가 6.2로 감소할 때까지 가수분해하였다. 이 가수분해 용액에 포도당 4Kg, 육엑기스 0.5Kg, 효모추출물 0.5Kg, 디포타슘 포스페이트 50g, 암모니움 시트레이트 50g, 소디움 아세테이트 50g, 마그네슘 설페이트 20g, 망간 설페이트 5g을 첨가하여 용해시키고 200L 용량의 혐기적 발효관에 이송하여 121℃에서 15분간 살균하고 종균 2L를 접종하여 암모니아로 pH를 6.0으로 유지하면서 12시간 발효하였다. 발효액을 60L/Hr의 유속으로 연속식 원심분리기에 이송시키면서 균체와 잔존 단백성분을 침적시키고 회수하였다. 트리할로즈 0.5Kg, 만니톨 0.5Kg, 말토텍스트린 0.5Kg, 탈지분유 1.5Kg으로 조성하고 가압살균하여 제조한 동결보호제 수용액 10L와 잔탐검(Xantan gum)15g, 셀룰로즈(Cellulose) 15g을 가하여 용해시키고 가압살균하여 제조한 다당류 수용액 3L를 균체침적물과 혼합하여 교반기에서 5,000RPM으로 교반하여 균질화시키고 -55℃의 냉동고에서 급속동결한 후 0℃에서 40℃사이의 온도에서 동결건조하였다. 탈지분유에 의한 단백질 코팅 및 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose)혼합조성에 의한 이중코팅 유산균은 비코팅 유산균에 비하여 우수한 가속시험 안정성, 내산성, 내담즙성을 나타내었다.
표2. 단백질 코팅된 Streptococcus thermophilus CBT-ST의 내산성, 내담즙성, 가속시험 결과.
| 내산성 시험(pH2.1의 인공위액 중) | 내담즙성 시험(0.5% Oxgall 용액 중) | 가속시험(40℃, 70% 상대습도) | ||||||
| 노출시간(분) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) | 노출시간(분) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) | 경과시간(일) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) |
| 0 | 2.0x1011 | 2.2x1011 | 0 | 2.7x1011 | 2.9x1011 | 0 | 2.6x1011 | 2.7x1011 |
| 30 | 1.9x1011 | 1.7x1011 | 30 | 2.7x1011 | 2.3x1011 | 10 | 2.5x101 | 1.3x1011 |
| 60 | 1.8x1011 | 1.2x1011 | 60 | 2.5x1011 | 1.9x1011 | 20 | 2.5x1011 | 9.7x1010 |
| 90 | 1.8x1011 | 9.5x1010 | 90 | 2.4x1011 | 1.5x1010 | 30 | 2.4x1011 | 8.6x1010 |
| 120 | 1.8x1011 | 8.4x1010 | 120 | 2.4x111 | 9.2x1010 | 40 | 2.2x1011 | 5.1x1010 |
| 120분경과시의 생존율(%) | 90.0 | 38.2 | 120분경과시의 생존율(%) | 88.9 | 31.7 | 40일경과시의생존율(%) | 84.6 | 18.9 |
세째, 단백질 코팅된 Bifidobacterium longum CBT-BG원말의 생산은 대두분리단백 2Kg을 물 100Kg에 현탁시킨 후 저속 교반기, 온도조절장치, pH조절장치가 장착된 효소처리조에서 55℃온도, 초기 pH7.0의 조건에서 단백분해효소제(Amano사 제품, protease-N) 5.4g을 100ml의 물에 용해시켜서 첨가하고 pH가 6.2로 감소할 때까지 가수분해하였다. 이 가수분해 용액에 포도당 4Kg, 육엑기스 0.5Kg, 효모추출물 0.5Kg, 카제인 펩톤 1Kg, 디포타슘 포스페이트 50g, 포타슘 포스페이트 50g, 마그네슘 설페이트 10g, 소디움 클로라이드 1g, 망간 설페이트 10g을 첨가하여 용해시키고 200L용량의 혐기적 발효관에 이송하여 121℃에서 15분간 살균하고 종균 2L를 접종하여 암모니아로 pH를 6.0으로 유지하면서 15시간 발효하였다. 발효액을 60L/Hr의 유속으로 연속식 원심분리기에 이송시키면서 균체와 잔존 단백성분을 침적시키고 회수하여 미리 살균한 트리할로즈 0.5Kg, 만니톨 0.5Kg, 말토덱스트린 0.5Kg, 탈지분유 1.5Kg으로 조성된 동결보호제 수용액 10L를 가하여 교반기에서 5,000RPM으로 교반하여 균질화시키고 -55℃의 냉동고에서 급속동결한 후 0℃에서 40℃사이의 온도에서 동결건조하였다. 유산균 동결건조 분말 100g과 물 3L에 15g의 잔탐검(Xantan gum)과 15g의 셀룰로즈(Cellulose)를 가하여 용해시키고 가압살균한 다당류 코팅 조성물을 혼합한 후 교반기에서 5,000RPM으로 교반하여 균질화시키고 -55℃의 냉동고에서 급속동결한 후 0℃에서 40℃사이의 온도에서 동결건조하였다. 대두분리단백에 의한 단백질 코팅 및 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose)의 혼합조성에 의한 이중코팅 유산균은 비코팅 유산균에 비하여 우수한 가속시험 안정성, 내산성, 내담즙성을 나타내었다.
표3. 단백질 코팅된 Bifidobacterium longum CBT-BG의 내산성, 내담즙성, 가속시험 결과.
| 내산성 시험(pH2.1의 인공위액 중) | 내담즙성 시험(0.5% Oxgall 용액 중) | 가속시험(40℃, 70% 상대습도) | ||||||
| 노출시간(분) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) | 노출시간(분) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) | 경과시간(일) | 시험구(cfu/g) | 대조구(cfu/g) |
| 0 | 4.0x1011 | 3.8x1011 | 0 | 3.7x1011 | 3.6x1011 | 0 | 3.6x1011 | 4.0x1011 |
| 30 | 3.9x1011 | 2.3x1011 | 30 | 3.5x1011 | 2.6x1011 | 10 | 3.3x1011 | 1.1x1011 |
| 60 | 3.8x1011 | 2.1x1011 | 60 | 3.4x1011 | 2.3x1011 | 20 | 2.9x1011 | 9.3x1010 |
| 90 | 3.8x1011 | 1.3x1010 | 90 | 3.2x1011 | 1.9x1011 | 30 | 2.7x1011 | 3.7x1010 |
| 120 | 3.5x1011 | 9.9x1010 | 120 | 3.0x1011 | 9.8x1010 | 40 | 2.3x1011 | 1.4x1010 |
| 120분경과시의 생존율(%) | 87.5 | 26.1 | 120분경과시의 생존율(%) | 81.3 | 27.2 | 40일경과시의생존율(%) | 63.9 | 3.5 |
이와 같이 본 발명으로 제조된 이중코팅 유산균 원말은 비코팅 유산균 및 1차 코팅 유산균에 비교하여 매우 우수한 저장 안정성과 내산성, 내담즙성, 내열성을 갖는다.
본 발명은 균주에 따라서 여러 종류의 동결보호제 및 안정제 등과 혼합하여 사용이 가능하고 수용액상에서의 균질화 및 동결건조공정만으로 이중코팅된 유산균체를 획득할 수 있으므로 별도의 설비사용이 없이 제조공정이 유지될 수 있으며 건조 전의 회수 균체 또는 건조 균체에 모두 적용 할 수 있어 공정의 융통성 및 호환성이 크며, 균체의 생존율은 50%-90%로 유산균 원말의 회수율이 특히 개선되어질 수 있어 생산성이 향상되며, 이 공정에 의해 생산되는 이중코팅 유산균 원말은 내열성, 내산성, 내담즙성, 저장안정성이 크게 개선되고, 인체에 투여시에는 장내정착성이 매우 우수하여 유산균 고유의 생리활성 기능의 발휘가 탁월하므로 사용자의 사용상 효율성을 극대화한다.
Claims (4)
- 대두분리단백과 탈지분유를 소정의 혼합비로 혼합하여 1%-10%수용액으로 만든 단백질 수용액을 유산균주에 따라서 대단백질 중량비 0.01%-1%범위의 단백분해 효소용액을 가하여 효소처리하는 단백질효소분해단계와;상기 효소처리액에 중량비 1%-5%범위의 포도당, 0.1%-1.5%범위의 효모추출물, 0.1%-1.5%범위의 육엑기스, 0.01%-0.1%범위의 이온성분을 첨가하여 용해시키고 발효관에서 스팀살균 후 유산균을 배양하는 유산균 발효단계와;상기 발효된 발효액을 고속원심분리기에 의해 분리 농축하여 균체를 분리하고 코팅하는 1차 단백질코팅단계와;상기 회수된 균체에 대비하여 중량비 1%-10%의 동결보호제 성분으로 조성한 35%-45% 동결보호제 수용액과, 회수균체 대비 1%-10%의 다당류 성분으로 조성한 1%-10% 다당류 수용액을 혼합 사용하여 코팅하고 동결건조하는 2차코팅단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법.
- 제 1항에 있어서,상기 이온성분으로 암모니움 시트레이트, 소디움 아세테이트, 디포타시움 포스테이트, 마그네슘 설페이트, 망간 설페이트, 소디움 클로라이드의 이온성분을 사용하는 것을 특징으로 하는 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법.
- 제 1항에 있어서,상기 다당류 수용액으로 잔탐검(Xantan gum), 셀룰로즈(Cellulose), 리벤(Levan)을 사용하는 것을 특징으로 하는 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법.
- 제 1항에 있어서,상기 1차 단백질코팅단계에 의하여 제조된 유산균 원말에 대하여 2차 다당류 코팅을 실시하고, 동결건조하여 제조하는 것을 특징으로 하는 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의 제조방법.
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