KR20020020748A

KR20020020748A - 만성 ｈｂｖ 감염의 치료 방법

Info

Publication number: KR20020020748A
Application number: KR1020017016489A
Authority: KR
Inventors: 수헨리
Original assignee: 케네스 엠. 골드만; 카이론 코포레이션
Priority date: 1999-06-22
Filing date: 2000-06-22
Publication date: 2002-03-15
Also published as: EP1189633A2; BR0011908A; CN1365286A; AU5885700A; WO2000078343A2; WO2000078343A3; JP2003502384A; WO2000078343A8

Abstract

만성 HBV 감염을 치료하는 방법 및 키트가 설명된다. HBV의 PreS2 + S 항원 및 대사가능한 기름 보조제를 함유하는 조성물이 이용된다.

Description

만성 ＨＢＶ 감염의 치료 방법{METHOD FOR TREATING CHRONIC HBV INFECTION}

아동 HBV 감염 중 85% 이상이 만성으로 된다. 성인의 급성 HBV 감염 중 1 내지 5%가 또한 해결되지 않는 만성 감염을 가져온다. 만성 감염은 만성 활성 간염 (20 내지 50% 케이스), 간경변 또는 심지어 간부전(10 내지 20% 케이스), 그리고 어떤 경우에는 간암(1 내지 3% 케이스)을 가져올 수 있다. 간손상은 감염된 간세포에 대한 세포 면역 반응에 주로 기인한다.

미국에서만 대략 100만명의 HBV 만성 보균자가 있다. 전세계적으로는 300만명 이상의 만성 보균자가 있다. 대다수의 만성 보균자는 환태평양을 따라, 즉 타이완, 일본, 남동아시아 및 아프리카에서 발견된다.

만성 HBV 감염을 초래하는 메카니즘은 분명하지 않다. B형 간염 e-항원("HBe Ag" 또는 "HBe", 프레-코어 폴리펩티드)의 존재가 활성 바이러스 복제와 관련되며, 증가된 감염성 및 심함의 표시이다. 예후는 환자가 항-HBe 양성인 경우 보다 좋지만, 급성 및 만성 감염의 해결은 B형 간염 표면 항원("HBsAg" 또는 "HBs")에 대한 항체의 발생에 관련된다. 중화 항-HBs 항체의 출현과 함께 HBsAg 손실은 감염의 클리어런스를 표시한다. 그러나, 항-HBs로의 자발적 혈청전환은 대단히 희귀하다. 연간 대략 10%의 환자가 HBeAg에서 항-HBe로의 자발적 혈청전환을 경험하고, HBs에서 항-HBs로의 혈청전환은 연간 약 1%의 환자에서만 발생한다.

만성 HBV를 위한 요법들이 이용가능하지만, 대부분은 범위 및 효능이 제한된다. 인터페론 요법은 3 내지 5%의 환자에서만 항-HBs 혈청전환을 가져온다. 이에 더하여, 인터페론 요법은 매우 비싸고, 심한 부작용을 가질 수 있으며, 매일 피하 주사해야 한다.

라미부딘과 같은 새로운 항-바이러스제는 바이러스 부담을 줄일 수는 있지만, 소수의 환자에게만 항-HBs 혈청전환을 가져온다. 더욱이, 그것들은 장기간 사용되어야 하며 - 중단은 바이러스의 재출현을 가져오며 가능한 치료 수명에 대한 필요조건을 만든다 - 내성 돌연변이가 나타날 수 있다.

면역요법이 또한 이용가능하다. 일부 면역요법들은 항체의 투여를 기초로 한다. 항-HBs 항체("HBIG")는 단독으로 사용된 때 HBV 감염에 관한 간이식에서 증명된 바와 같은 치료적 활성을 갖는다. 단백질 디자인 랩은 Ig 주입 요법을 위한 사람화된 항-HBs 항체의 사용을 추구한다.

다른 면역요법은 항원의 투여를 기초로 한다. 어떤 항원-기초 면역요법은 RIBI및 QS-21(SmithKline Beecham)을 갖는 기름/물 에멀젼과 함께 이스트-발현 HBsAg를 이용한다. 그것은 현재 만성 감염에 관해 2 단계 시험중이다. 다른 것은 PreS1 + PreS2 + S/alum(Medeva)을 이용한다. 현재 150명의 피험자에게 면역요법 시험중인 또 다른 것은 PreS2 + S/alum(Institut Pasteur)을 사용한다. 다른 항원-기초 면역요법은 세포독성 T 림프구 반응(Cytel)을 유도하기 위하여 코어-유도 펩티드를 이용한다.

만성 HBV 감염을 개선할 수 있는 효능 있는 면역요법에 대한 요구가 남아있다.

본 발명은 만성 B형 간염 바이러스("HBV") 감염 및 질환의 치료를 위한 면역치료에 관한 것이다.

도 1은 발현 플라스미드를 제조하기 위한 관심의 제한 부위를 갖는 HBV 게놈 및 적응인자를 묘사한다.

도 2는 클로닝 전략을 도식적으로 묘사한다.

도 3a-b, 4a-b 및 5a-b는 3명의 환자에 대한 HBe/항-HBe(a) 및 혈청 ALT/HBV DNA(b) 결과를 묘사하며, 두번째는 일시적 플레어를 나타낸다.

(발명의 개요)

한 양태로서, 본 발명은 HBsAg의 재조합 PreS2 + S 단백질 및 대사가능한 기름 보조제를 포함하는 조성물, 및 선택적으로 항-바이러스제 또는 화합물의 투여를 포함하는 만성 HBV 감염을 치료하는 방법에 관한 것이다.

더 이상의 양태로서, 본 발명은 HBsAg의 PreS2 + S 단백질, 대사가능한 기름 보조제 및 선택적으로 항-바이러스제 또는 화합물을 포함하는 면역요법용 키트에 관한 것이다.

(상세한 설명)

본 발명의 실행은 달리 나타낸 바가 없다면 본 분야 내의 바이러스학, 면역학, 미생물학, 분자생물학 및 재조합 DNA 기법에 대한 종래의 방법을 사용할 것이다. 그러한 기법은 문헌에 충분히 설명된다. 예를 들어, Sambrook et al., Molecu-lar Cloning: A Laboratory Manual(2nd Edition, 1989); DNA Cloning: A Practical Approach, Vols, I & II(D. Glover, ed); Methods In Enzymology(S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV(D. M. Weir and C. C. Blackwell eds., Blackwell Scientific Publica-tions); 및 Fundamental Virology, 2nd Edition, Vols. I & II(B. N. Fields and D. M. Knipe, eds.) 참조.

본 발명은 만성 HBV 감염을 치료하기 위한 항원-기초 면역요법에 방침을 둔다. 본원에 사용된 바와 같은, "치료"는 만성 HBV 감염의 개선 및/또는 제거 뿐만 아니라, 면역 반응, 바람직하게는 항-HBsAg 또는 항-HBe 반응의 자극을 포함한다. 사람 HBV는 조류 및 포유류 종을 감염시키는 간-굴성 DNA 바이러스 중 헤파드나바이러스 패밀리의 일원이다. 외부 멤브레인-관련 항원 - HBsAg - 이 중화 보호 항체 반응을 도출하는 원인이다. HBsAg는 공통 아미노산 서열 - S, PreS2 + S, 및 PreS1 + PreS2 +S를 공유하는 3개의 관련 단백질로 구성된다.

본 발명에 사용되는 항원-함유 조성물은 HBV의 PreS2 + S 항원 및 대사가능한 기름 보조제를 포함한다. 한 구체예에서, PreS2 + S 항원은 중국 햄스터 난소 세포에서 재조합적으로 생성된다. 더 이상의 바람직한 구체예에서, 대사가능한 기름 보조제는 아래 설명된 보조제 MF59이다.

본 발명에 따르는 방법에서, 전술한 조성물이 피험자에게 투여된다. 선택적으로, 항-바이러스제가 항원-함유 조성물의 투여 전이나, 투여와 동시에, 또는 투여에 이어서 투여된다. 항원-함유 조성물의 투여 전 항-바이러스제의 투여는 1개월에서 24개월 전까지의 범위일 수 있다. 만성 HBV에는 감염된 간세포의 큰 집단이 있다. 간손상이 감염된 간세포에 대한 세포 면역 반응에 주로 기인하기 때문에, 연장된 항-바이러스 요법이 감염된 간세포의 수를 감소시키기 위해 다른 요법들에 우선한다는 것이 시사된다(Genome, J. Clin. Invest., 102(5): 867-868, September,1988). 이에 더하여, 항-바이러스제로 혈중 HBsAg의 레벨을 감소시키는 것은 자유 항원의 유효성을 감소시킴으로써 면역요법의 개시시에 항원-항체 복합물의 침착 가능성을 감소시킬 수 있다.

전술한 조성물의 유효량이 만성 HBV 감염을 나타내는 피험자에게 투여된다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "유효량"은 독성, 자극 또는 알러지 반응과 같은 바람직하지 않은 부작용 없이 치료의 의도된 목적을 달성하기 위해 필요한 양으로 간주한다. 개인적 필요는 다양할 수 있지만, 조제물 유효량의 최적 범위에 대한 측정은 본 분야의 범위 내이다. 사람은 또한 동물 연구에 의거하여 쉽게 추정될 수 있다(Katocs et al., Chapter 27 In: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990). 일반적으로, 당업자에 의해 적합하게 될 수 있는 조제물의 유효량을 제공하는데 필요한 용량은 레시피언트의 나이, 건강, 신체 조건, 체중, 질환 또는 장애의 종류 및 정도, 치료 빈도, 동시 요법의 성질, 및 필요한 경우 바람직한 효과(들)의 성질 및 범위에 의존하여 다양할 것이다(Nies et al., Chapter 3 In: Goodman & Gilman's The Pharmacologi-cal Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al., eds., McGraw-Hill, New York, NY, 1996). 약 5 내지 100㎍ 범위의 용량이 숙고된다.

조성물의 1회 이상 투여가 필요할 수 있음이 또한 숙고된다. 투여 사이의 시간은 제공되는 투여 수에 의존한다. 예를 들어, 2회 투여가 제공된다면, 1차는 0개월에 발생할 수 있고, 2차는 1, 2 또는 6개월에 발생할 수 있다. 4회 투여가 제공된다면, 그것들은 각각 0, 1, 2 및 6개월에 발생할 수 있다. 또는 달리, 투여는 1개월 간격으로 발생할 수 있다. 다수 투여 사이의 시간은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 한 구체예에서는 8회 투여가 제공된다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "투여"는 이것들에 한정되는 것은 아니나, 경피, 비경구, 피하, 근육내, 경구 및 국소 운반을 포함한다. 어떤 투여 경로에 대한 공통의 필요조건은 효능 및 용이한 운반이다. 바람직한 구체예에서, 조성물은 근육내로 투여된다.

개시된 발명 방법의 의도된 목적은 만성 HBV 감염의 개선이다. 개선은, 예를 들어 핵산 분석법을 사용하여 측정되는 혈액중 HBV DNA의 감소; 상용 시험에 의해 측정되는 혈청 알라닌 아미노트랜스페라제(ALT)의 감소; 또는 상용 시험에 의해 측정되는 트랜스아미나제의 일시적 플레어에 의해 측정될 수 있다. 바람직하게, 본 발명에 따르는 치료는 HBe의 동시 감소/소실과 함께 항-HBe의 출현, 또는 더 바람직하게는 HBsAg의 동시 감소/소실과 함께 항-HBs의 출현을 가져올 것이며, 이것 모두는 상용 면역분석법에 의해 측정될 수 있다. 본 발명을 위하여, 정상 ALT 레벨이 여성에 대해 약 6 내지 34 IU/L, 그리고 남성에 대해 6 내지 43 IU/L로 규정된다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "대사가능한 기름 보조제"는 그것이 투여되는 피험자에 대해 비독성이고 피험자에 의해 대사가능한 기름을 포함하는 보조제로 간주하며, 바람직하게는 약 6 내지 약 30 탄소 원자를 갖는 것으로서 이것들에 한정되는 것은 아니나, 알칸, 알켄, 알킨, 및 그것들의 상응하는 산 및 알콜, 그것들의 에테르 및 에스테르, 그리고 그것들의 혼합물을 포함한다. 기름은 보조제가 투여될 숙주 동물의 몸에 의해 대사될 수 있고 피험자에 대해 독성이 아닌 어떤 야채유, 생선유, 동물유 또는 합성제조유일 수 있다. 숙주 동물은 전형적으로 포유류이며, 바람직하게는 사람이다. 광유 및 유사한 독성 석유증류유는 본 발명에서 명백히 배제된다.

야채유의 모범적 공급원은 견과, 종자 및 곡물을 포함한다. 가장 통상적으로 이용가능한 땅콩유, 대두유, 코코넛유 및 올리브유가 견과유를 예시한다. 종자유는 홍화유, 목화씨유, 해바라기씨유, 참깨씨유 등을 포함한다. 곡물군에서는 옥수수유가 가장 쉽게 이용가능하고, 밀, 귀리, 호밀, 쌀, 테프, 라이밀 등의 다른 시리얼 곡물의 기름도 또한 사용될 수 있다.

야채유를 얻기 위한 기술은 잘 개발되어 잘 공지되어 있다. 이들 및 다른 유사한 기름의 조성은 예를 들어 머크 인덱스에서 알 수 있으며, 식품의 근원 물질, 영양소 및 식품 기술도 마찬가지다.

글리세롤 및 1,2-프로판디올의 6 내지 10 탄소 지방산 에스테르는 종자유에서 자연적으로 발생되지는 않지만, 견과유 및 종자유로부터 출발하는 적합한 물질의 가수분해, 분리 및 에스테르화반응에 의해 제조될 수 있다. 이들 제품은 PVO International, Inc., Chemical Specialties Division, 416 Division Street, Boo-ngon, NJ의 상품명 NEOBEE등으로 상업적으로 입수가능하다.

어떤 동물 공급원의 기름이 또한 보조제 및 본 발명의 면역원성 조성물에 사용될 수 있다. 동물유 및 지방은 그것들이 트리글리세리드로서 존재하고 생선 또는 야채로부터의 기름 보다 높은 포화도를 갖는다는 사실로 인해 생리학적 온도에서 보통 고체이다. 그러나, 지방산은 자유 지방산을 제공하는 부분적 또는 완전한 트리글리세리드 비누화에 의해 동물 지방으로부터 얻을 수 있다. 포유류 젖으로부터의 지방 및 기름은 대사가능하며, 따라서 본 발명의 실행에 사용될 수 있다. 동물 공급원으로부터 순수한 기름을 얻는데 필수적인 분리, 정제, 비누화 및 다른 수단에 대한 과정이 본 분야에 잘 공지되어 있다.

대부분의 생선은 쉽게 회수될 수 있는 대사가능한 기름을 함유한다. 예를 들어, 대구간유, 상어간유, 및 경랍과 같은 고래기름이 본원에 사용될 수 있는 몇개의 생선유를 예시한다. 다수의 분지 사슬 기름이 5-탄소 이소프렌 단위로 생화학적으로 합성되며, 일반적으로 테르페노이드로서 간주한다. 상어간유는 스쿠알렌으로 공지된 분지 불포화 테르페노이드인 2,6,10,15,19,23-헥사메틸-2,6,10,14,18,22-테트라코사헥사엔을 함유하며, 이것은 본원에서 특히 바람직하다. 스쿠알렌의 포화 유사체인 스쿠알란이 또한 특히 바람직한 기름이다. 스쿠알렌 및 스쿠알란을 포함하는 생선유는 상업적 공급원으로부터 쉽게 입수가능하고, 본 분야에 공지된 방법에 의해 얻을 수 있다.

이들 보조제 및 면역원성 조성물의 기름 성분은 약 0.5부피%에서 약 20부피%까지, 바람직하게는 약 15% 이하의 양으로 존재하며, 특히 약 1% 내지 약 12%의 양으로 존재할 것이다. 약 1%에서 약 4%까지의 기름을 사용하는 것이 가장 바람직하다.

본원에 숙고된 바와 같은 대사가능한 기름 보조제는 참고자료로 포함된 EP 0 399 843 B1에 설명된다. 바람직한 보조제는 MF59이다. 이것은 상기 특허 및 본원에 참고자료로 포함된 Ott 등의 "MF59, Design and Evaluation of a Sage and PotentAdjuvant for Human Vaccines," Chapter 10, pp. 277-296, Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Michael F. Powell and Mark J. Mewman, eds., Plenum Press, New York, 1995에 설명된다. 구체적으로, MF59는 다음과 같이 조제된다: 4.3% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v Tween 80, 0.5% Span 85, 및 400㎍/ml MTP-PE(N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-[1,2-디팔미토일-슨-글리세로-3-3(히드록시포스포릴옥시)]에틸아미드). MF59의 작용 메카니즘은 강한 CD4⁺T 세포 반응의 발생이라고 여겨진다.

또한, 보조제는 유화제 및/또는 면역자극제를 포함할 수 있다. 실질적인 수의 유화제 및 현탁제가 제약과학에서 일반적으로 사용된다. 이것들은 나무로부터의 검, 야채 단백질, 알기네이트 및 셀룰로스와 같은 당-기제 중합체 등과 같은 자연적으로 유도된 물질을 포함한다. 포비돈, 폴리비닐알콜 및 글리콜에테르-기제 일가 및 다가 화합물과 같은, 탄소 백본상에 히드록시드 또는 다른 친수성 치환체를 갖는 어떤 산소중합체 및 중합체가 계면활성제 활성을 갖는다. 긴사슬 지방산-유도 화합물이 본 발명에 사용될 수 있는 유화제 및 현탁제의 제 3의 실질적인 군을 형성한다. 전술한 계면활성제 중 어느 것이 그것들이 비독성인 한 유용하다.

모범적인 면역자극제는, 예를 들어 레바미솔 및 이소프리노신과 같은 숙주 면역을 증가시키는 합성 보조제를 포함한다. 레바미솔은 테트라미솔의 레보 이성질체로서 T 세포-의존성 메카니즘을 통해 체액 및 세포 면역을 강화시킨다. 이노신, 아데노신의 퓨린 전구물질 및 구아노신을 함유하는 복합물인 이소프리노신은 T 세포 미토지네시스를 촉진한다. 면역글로불린(Ig) 중쇄의 서열에 상동성인 4개 아미노산 펩티드(Thr-Lys-Pro-Arg)인 터프트신(Tuftsin)은 대식세포를 주로 자극한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "피험자"는 동물, 전형적으로 포유류, 바람직하게는 사람으로 간주한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "약"은 ± 약 10%를 의미한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "한" 및 "그"는 단수 및 복수로 간주한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "만성 HBV 감염"은 일반적으로 급성 단계를 지나서 지속되는 HBV 감염으로 간주한다. 만성 감염은 아동 또는 성인의 후천적인 만성 질환에 기인할 수 있다. 질환의 결과로서 만성 감염은 일반적으로 비정상적인 ALT 레벨과 함께 HBsAg의 존재에 의해 확인될 수 있으며, HBeAg의 레벨은 검출가능하거나 또는 검출가능하지 않다. 정상 ALT 레벨은 일반적으로 10에서 32 U/L까지의 범위이다(여성은 9 내지 24 U/L이고, 유아의 정상 범위는 성인의 2배이다. 웹 페이지: Focus: On Hepatitis C International, "Laboratory Blood Tests," revised 7/ 10/98). 그러나, 만성 감염은 또한 정상 ALT를 갖는 무증상 보균자를 포함한다; 환자는 처음에 검출가능한 레벨 이하로 바이러스를 감소시키기 위해 인터페론과 같은 항-바이러스로 치료된다; 간이식 후 환자는 항-바이러스 요법을 유지하거나 또는 Ig 주입을 받는다. 급성 감염 후 6개월 이상 동안 HBsAg의 지속은 만성 감염임을 보증한다. 또한, 만성 감염을 갖는 환자에서 결함이 있는 항-바이러스 T 세포 반응이 보고되었다(Boni et al., J. Clin. Invest., 102(5): 968-975, Septemb-er, 1998).

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항-바이러스제" 또는 "항-바이러스 화합물"은 라미부딘을 포함하여, 인터페론 및 뉴클레오시드 유사체를 제한 없이 포함한다. 라미부딘은 만성 HBV에 의해 야기된 간손상을 감소시키는데 사용되며, 1년까지의 기간 동안 하루 당 환자 당 25mg 내지 300mg의 투여량으로 경구 투여된다. 그러나, 항-바이러스제의 적합한 용량은 특히 제제 및 환자에 의존할 것이다.

재조합 HBV PreS2 + S 항원(10㎍) 및 대사가능한 기름-물 보조제 MF59를 포함하는 백신은 성인에서 면역원성을 증진시키는 것으로 알려져 있다(Poland et al., 37th ICAAC, p. 216, September 28 - October 1, 1997). 백신의 1회 투여량 후, 시험 피험자 중 89%에서 혈청보호 항-HBs 역가가 발생했다. 시험 피험자 100%가 2회 주사 후 보호되었다. 더 이상으로, PreS2 + S/MF59 백신의 기하 평균 항체 역가는 보조제로서 알루미늄을 함유하는 대조군 백신의 역가 보다 100배 이상이었다(Poland et al., 위와 동일). 본 발명자들은 유사한 조성물이 만성 HBV 감염을 치료하기 위한 면역치료제로서 사용될 수 있다고 예언했다.

실시예 1

기름-물 보조제 MF59와 조합하여 재조합 PreS2 + S를 포함하는 조성물을 제조했다. 재조합 PreS2 + S를 아래 설명된 바와 같이 제조했다. 모든 배지 및 보충제는 Hyclone가 공급했다.

재조합 플라스미드 pKSVAdPreS-BglII를 2개 적응인자를 사용하여 S + PreS2 유전자를 삽입함으로써 구성했다(도 1 - 도 2). 재조합 발현 시스템의 구성에 사용된 클로닝 벡터는 Pharmacia의 pKSV-10이었다. pKSV-10 벡터는 7.2Kb 길이이고, 클로닝 부위는 BglII이다. 바이러스 DNA를 본원에 참고자료로 포함된 Valenzuela et al., Nature, 280: 815-819, August, 30, 1979에 설명된 바와 같이 분리했다. 바이러스 게놈 DNA로부터 약 1880bp의 EcoRI/BglII 단편을 HhaI로 부분적으로 소화시켜 1230bp EcoRI/HhaI 단편을 분리했다. 적응인자를 EcoRI/HhaI 단편과 리게이션되도록 디자인하여 pKSV-10으로의 클로닝을 위한 BglII/BglII 단편을 만들었다. 다음에, pKSV-10/BglII를 PreS BglII/BglII 단편과 리게이션하여 DNA 플라스미드 벡터 pKSVAdPreS-BglII를 얻었다. 이것은 수용성 세포 HB 101의 형질전환으로 이어졌다. 형질전환체를 스크리닝하고 큰-제조물을 만들었다.

클로닝 벡터 pSV7d/AML-dhfr을 pSV7d 안에 dhfr 서열을 삽입함으로써 구성했다(Stibbe et al., Virology, 123: 436-442, 1982, 본원에 참고자료로 포함됨). DG44(dhgr-) CHO 세포(Urlaub et al., PNAS USA, 77: 4216-4220, 1980, Chiron의 Dr. Leslie Rall로부터 1985, 9월에 대략 통과수 100에서 얻어짐)를 pKSVAdPres- BglII 및 pAML/dhfr로 공동-트랜스펙션했다. 그 후에, 48 개체 클론을 24 웰 마이크로웰 플레이트에서 성장시켰다. 클론을 Abbott ELISA 분석법을 사용하여 스크리닝하고, PKSVAdPreS 16으로 표시되는 고 생산자 클론을 메토트렉세이트 선택을 사용해 증폭하여 궁극적으로 클론 PKSVAdPreS 16-12-80-30(HEP 30 세포로 약기)를 얻었다. HEP 30 세포를 확장하여 HBV B30 세포로 표시되는 Master/Working Cell Bank를 제조했다.

HBV B30 Master Cell Bank로부터의 세포를 클로닝하여 6% 투석된 FBS 및 50μM 메토트렉세이트(MTX)로 보충된 DME/F12 배지에서 확장시켰다. 확장 후, 3L 스피너 플라스크에서 FBS 농도를 6%에서 2%까지 점직적으로 감소시키면서 세포를 몇 단계를 통해 MTX-DMEM/F12 배지에 적합하게 했다. 적합하게 한 후, 세포를 3L 교반된 관류 용기 안에 접종하고, DMEM/F12 2% FBS를 관류시켰다.

다음에, 관류된 세포 중 일부를 50μM MTX의 존재하에 DMEM/F12 10% FBS 배지에서 서브클로닝하고, 다수의 쉐이크 플라스크를 통과시켜 2% FBS 및 2μM MTX의 존재하에 HBV 생성 배지에 적합하게 했다. 14 통과에서, 서브클론의 생산성을 시험하고, 모 배양 바이알로서 냉동시켰다(CMCC11336으로서 Chiron Cell Culture Coll-ection에 기탁됨). 이들 세포 중 일부를 DM122 배지에서 해동시킨 후, 200mM L-글루타민, 1mM(1:500) MTX로 보충된 DM122 배지에서 확장시켰다. 세포 밀도가 4.0 내지 8.0 x 10⁵생존가능한 세포/ml에 도달했을 때, 세포를 DM122, 10% 사람 혈청 알부민(w/v) + 7.5%(v/v) DMSO 중에서 1.0 x 10⁹로 농축하고, 바이알 당 1ml로 나누어 새로운 HBV Master Cell Bank(MBVMK001)을 생성했다. 이들 세포를 1℃/분으로 -96℃까지 냉동한 후 -176℃에 저장했다.

MF59를 본원에 참고자료로 포함된 Ott 등(위와 동일)에 설명된 바와 같이 멸균 기름-물 에멀젼으로 제조했다. 0.25ml 부피 항원 중 PreS2 + S 10㎍을 0.5ml의 최종 투여량 부피를 위해 0.25ml MF59와 조합했다. 백신 성분을 아래 표 1 및 표 2에 기재한다.

실시예 2

실시예 1에 설명된 조성물 500㎕를 6개월 이상 동안 HBsAg의 존재에 의해 측정된 바대로 만성 HBV를 나타낸 13명의 사람 환자의 삼각근 안에 근육내 투여했다.8명의 환자가 HBe 양성이었다. 13명 환자 모두 상승된 혈청 ALT(1.2 x ULN 이상, 즉 정상 상한)를 가졌고, 대상부전 간질환의 증거는 없었다. 투여는 0, 1, 2 및 6개월에서 수행했다. 효능을 HBV DNA의 감소, 혈청 ALT 레벨, 및 HBeAg 레벨의 감소를 측정함에 의해, 그리고 2차 투여 후 1개월에 항-HBe 항체의 출현에 의해 측정했다. HBV DNA는 bDNA 방법을 사용하여 측정했다(Chiron, and Chen et al., J. Virol Methods, 53(1): 131-7, May 1995, 본원에 참고자료로 포함됨). HBeAg, 항-HBe, HBsAg, 및 항-HBs의 레벨은 다음과 같은 화학발광 면역분석법을 사용하여 측정했다. 또한, 그 전체가 본원에 참고자료로 포함된 미국 특허 번호 5,395,752 참조. 결과는 광학 밀도 단위(s/co)로 기록한다.

HBeAg를 측정하기 위해서, 혈청 100㎕를 유액 자성 입자(600㎍/ml)와 짝을 이룬 사람 항-HBe 100㎕와 조합하고 37℃에서 18분간 인큐베이션했다. DMAE(디메틸 아크리디늄 에스테르, ml 당 300 3000만 상대 광 단위, "RLU")와 짝을 이룬 사람 항-HBe 100㎕을 가하고 37℃에서 18분간 인큐베이션했다. 입자를 완충액으로 3번 세척한 후 화학발광을 측정했다. 사용된 완충액은 다음 조성: 50mM TRIS, pH 8.0; 500mM 염화칼륨; 0.09% 나트륨 아지드; 1mM EDTA; 0.05% TWEEN 20; 및 술포히드릴 변형된 1.75% BSA을 가졌고, MILLIPAK-60 0.22㎛ 필터 단위를 사용하여 여과했다.

HBsAg를 측정하기 위해서, 혈청 100㎕를 상기 설명된 완충액으로 1/100 희석하고, 상자성 입자(각각 280㎍/ml 및 150㎍/ml의 항체 농도에 대해)와 짝을 이룬 마우스 항-HBs(HBsAg의 항-"a" 중화 에피토프에 특이적으로 결합함) 100㎕ 및 상기 설명된 완충액으로 희석된 마우스 항-HBs(항-"a", 75.0ng/ml)와 짝을 이룬 DMAE 50㎕와 조합하고, 37℃에서 18분간 인큐베이션했다. 입자를 완충액으로 3번 세척한 후 화학발광을 측정했다.

항-HBe를 측정하기 위해서, 혈청 50㎕를 재조합 HBeAg SOD 융합 단백질(50ng /ml)(예를 들어, Choo et al., Science, 1989, 244, 359-362, 전체가 본원에 참고자료로 포함됨) 100㎕ 및 유액 자성 입자(600㎍/ml)와 짝을 이룬 사람 항-HBe 100㎕와 조합하고, 37℃에서 36분간 인큐베이션했다. DMAE(300 x 10⁶RLU/ml)과 짝을 이룬 사람 항-HBe 100㎕을 가하고 37℃에서 18분간 인큐베이션했다. 입자를 완충액으로 3번 세척한 후 화학발광을 측정했다. 사용된 완충액은 다음 조성: 100mM 붕산염 완충액, pH 8.9; 0.09% 나트륨 아지드; 5mM EDTA; 0.05% TWEEN 20; 및 0.2% 젤라틴(생선)을 가졌고, MILLIPAK-60 0.22㎛ 필터 단위를 사용하여 여과했다.

항-HBs는 표준 효소 면역분석법(Abbott)을 사용하여 측정했다.

3-4회 주사 후 HBe에 대해 처음에 양성이었던 8명의 환자 중 4명에서 HBV DNA 및 혈청 ALT의 감소에 관련된 HBeAg 레벨의 의미 있는 감소 및 항-HBe 항체의 발생이 도출되었다. 3명의 환자에 대한 데이타를 도 3a-b, 도 4a-b 및 도 5a-b에 묘사한다. 또한, 의미 있는 항-HBs 항체 레벨이 처음에 HBe를 나타내지 않았던 환자를 포함하여, 몇몇 환자에서 도출되었다(예를 들어, 표 3 내지 표 5 참조, 항-HBs 칼럼). 8명의 환자 중 2명은 연구 동안 혈청 ALT의 의미 있는 증가를 나타냈다. 2명 모두 해결되었다.

더 이상의 추적 검사로, 13명의 환자 중 반 이상에서 항-HBsAg가 발생했다.4명의 환자는 항-HBe로 혈청전환되었고, 4명의 혈청전환 환자 중 3명은 HBV DNA 음성으로 되었다.

실시예 3

실시예 1에 설명된 조성물 500㎕ 및 라미부딘 100mg을 시간 0에서 피험자에게 투여한다. 실시예 1에 설명된 조성물의 또 다른 500㎕ 및 라미부딘의 또 다른 100mg을 1개월에서 투여한다. 효능을 2차 투여 후 1개월에 항-HBs 역가를 측정하고, HBs 존재에 대해 분석함으로써 측정한다. 검출가능한 HBs가 여전히 존재한다면, 3차 투여를 수행한다. 이 과정을 HBs가 더 이상 검출되지 않을 때까지 반복한다.

실시예 4

라미부딘 100mg을 시간 0에서 출발하여 피험자에게 투여하고, 1일 1회 투여량 스케쥴대로 계속 투여한다. 실시예 1에 설명된 조성물 500㎕를 1, 2, 3 및 7개월에 피험자에게 근육내 투여한다. 효능을 실시예 1의 조성물의 투여 후 1개월에 HBeAg 및 항-HBe 역가를 측정하고, HBV DNA에 대해 분석함으로써 측정한다. 검출가능한 HBe가 여전히 존재한다면, 실시예 1의 조성물의 추가 투여를 수행한다. 이 추가 투여 후 1개월에 검출가능한 HBe가 존재한다면, 추가 투여를 수행한다. 이 과정을 HBe가 더 이상 검출되지 않을 때까지 반복한다.

실시예 5

실시예 1에 설명된 조성물 500㎕를 시간 0에서 피험자에게 투여한다. 라미부딘 100mg을 1개월에 피험자에게 투여한다. 효능을 실시예 1의 조성물의 투여 후 1개월에 항-HBs 역가를 측정하고, HBs 및 HBe 존재에 대해 분석함으로써 측정한다. 검출가능한 HBs 또는 HBe가 여전히 존재한다면, 실시예 1의 조성물의 2차 투여를 수행한다. 검출가능한 HBs 또는 HBe가 여전히 존재한다면, 3차 투여를 수행한다. 이 과정을 HBs가 더 이상 검출되지 않을 때까지 반복한다.

실시예 6

라미부딘 100mg을 6개월 동안 매일 투여한다. 실시예 1에 설명된 조성물 500㎕를 7, 8, 9 및 13개월에 피험자에게 투여한다. 검출가능한 HBs 또는 HBe가 존재한다면, 추가 투여를 수행할 수 있다.

실시예 7

물질:

ChironHBV/MF59: 항원: 재조합 HBV PreS2 + S(20㎍/투여량)를 CHO 세포로부터 생성하고 정제했다. 보조제: MF59, 미세유체화된 기름-물 에멀젼. 항원 및 MF59를 개별 바이알에 마련해 두고 주사시에 혼합했다. 각 투여량을 0.5ml의 총 부피로 근육내로 제공했다. 스케쥴은 0, 1, 2 및 6개월 스케쥴대로 투여되는 4회 투여량으로 구성했다(표 6).

라미부딘(Epivir, Glaxo Wellcome): 환자를 ChironHBV/MF59 요법을 개시하기 전에 적어도 1개월 동안 치료해야 한다. 라미부딘을 ChironHBV/MF59 치료 전의 투여량 레벨(하루 당 100mg 내지 300mg)로 그 후 7개월(즉, 4차 주사 후 1개월) 동안 계속했다.

효능 측정: 연구 결말에서, 각각의 다음 파라미터를 갖는 환자의 비율을 측정했다/측정할 것이다: HBsAg의 손실 또는 감소, HBeAg의 손실, 및 항-HBs 또는 항 -HBe 혈청전환. Chiron을 사용한 요법-전부터 HBV DNA 레벨 및 혈청 ALT/AST의 변화를 ChironHBV/MF59 치료 기간 동안 및 치료 기간 후 요약할 것이다. 이 개시에 있어서, 입수가능한 효능 데이타는 선택된 시간 포인트로 제한되었고, 완전한 분석이 수행되지는 않았다.

방법:

기름-물 보조제 MF59와 조합된 재조합 PreS2 +S 항원을 포함하는 조성물, 예를 들어 ChironHBV/MF59(표 2)를 라미부딘을 받은 만성 HBV 감염을 갖는 환자에게 제공했다. 피험자는 0, 1, 2, 6개월 스케쥴대로 ChironHBV/MF59의 근육내 주사를 4회 받았다. 환자를 ChironHBV/MF59 주사의 6개월 기간 내내 라미부딘으로 계속 치료했고, 4차 투여량 후 추가의 1개월 동안 라미부딘을 계속 받았으며, 이 후 라미부딘을 중단했다.

유자격 피험자는 스크리닝중에 라미부딘을 받고 있었거나 또는 라미부딘과 함께 요법이 개시되는 후보자였던, 대상성 간질환과 함께 만성 HBV 감염(적어도 6개월 동안 혈청중 양성 HBsAg 및 스크리닝 시험에 대한 양성 HBsAg의 병력에 의해 규정됨)을 갖는 환자를 포함했다. 스크리닝시 라미부딘을 받고 있는 피험자는 1차 ChironHBV/MF59 투여량의 투여 전 적어도 1개월 동안 라미부딘 치료를 받았다. 이들 피험자는 연구-전 투여량(하루 당 100 내지 300mg 사이)으로 라미부딘을 계속했다. 스크리닝시에 라미부딘 치료를 받고 있지 않았던 피험자는 ChironHBV/ MF59를 개시하기 전 적어도 1개월 동안 치료했다. 이들 피험자는 하루 당 100mg의 승인된 투여량으로 라미부딘을 받았다. 병력, 신체 시험, 임상 검사실 평가, 또는 사전 간생체검사를 토대로 대상성 또는 진전된 간질환에 대한 불충분한 어떤 증거를 갖는 모든 환자를 참가로부터 배제시켰다.

잠재적 환자를 정식 등록 전 1 내지 8주 내에 최초 스크리닝 왕진했다. 이 시간 동안 그들의 의학적 병력을 조사하고, 신체 시험 및 혈액 및 요 샘플을 취했다. 데이타를 HBV 감염에 대한 다음의 혈청학적 및 바이러스학적 파라미터에 대한 스크리닝중에 얻었다(정성 및 정량 측정): HBsAg, HBeAg, 항-HBs, 및 항-HBe. 추가의 분석은 간기능검사(LFT): ALT, AST, 알칼리성 포스파타제, 빌리루빈(총 및 지정), 프로트롬빈 시간, 총 단백질 및 알부민; 전혈구계산(CBC); 및 단백질, 혈액 및 원주에 대한 요검사를 포함한다. 정량적 HBV DNA 레벨을 중합효소 사슬 반응(PC R)에 의해 측정했다. 스크리닝 전 또는 스크리닝시에 측정된 바대로 피험자가 라미부딘 내성 돌연변이의 증거를 갖는 경우 그들을 배제시켰다(상승된 HBV DNA 레벨을 토대로). 스크리닝 왕진중에 추가의 임상 검사실 시험은 항-HCV 항체, 항-HIV 항체, 및 델타형 간염 항체를 포함했다. 이들 중 어느 것에 대해 양성이었던 피험자를 참가로부터 배제시켰다.

포함 및 배제 기준에 더하여, 연구 스크리닝 왕진시에 라미부딘 요법을 받고 있지 않았던 잠재적 유자격 환자는 유자격이 성립하기 위해 다음의 추가 포함 기준을 만족해야 한다: 정상 상한의 1.2배 이상의 혈청 ALT, 및 bDNA 분석법에 의해 측정된 바 0.7 Meq/ml 이상의 HBV DNA. 이들 실험값은 스크리닝 왕진중에 수집된 혈액 샘플로부터 얻었다.

포함 기준을 모두 만족하고 배제 기준은 어느 것도 만족하지 않는 피험자(임상 검사실 시험의 결과를 포함함)가 1차 근육내 주사를 받기 위해 다시 왔다. 그들을 즉각적인 국소 및 전신 반응의 증거에 대해 각 주사 후 30분간 관찰했다. 그들은 주사 후 7일 동안의 국소(예를 들어, 주사 부위의 통증, 따뜻함, 홍반, 경화) 및 전신(예를 들어, 피로, 권태, 열, 오한, 근육통, 관절통, 오심, 두통, 발진) 반응을 설명하기 위해 일일 카드를 완성했다. 일일 카드는 의학적 문제 및 7일 기간 동안 취해진 약물처치를 기록하기 위해 환자가 보관했다. 각 주사 후 7일에 피험자와 전화 통화했다. 이 시험 동안 어떤 시점에서 피험자가 요법과 관련될 수 있는 어떤 유별나거나 심하거나 또는 심각한 부작용을 경험했다면, 그것들을 임상에서 즉시 볼 수 있도록 통고했다. 다음 주사를 받기 전에 임상 검사실 시험(LFT, 요검사, 크레아티닌)을 체크하기 위해, 피험자를 2차, 3차 및 4차 주사(즉, 각각 1개월, 2개월, 및 6개월) 전 14일에 만났다.

ChironHBV/MF59의 1차 주사 후 7개월에 라미부딘을 중단했다. 환자들은 임상 및 실험실 추적 검사를 위해 7.5, 8, 9, 10.5 및 12개월에 다시 왔다.

모든 부작용(AE)을 ChironHBV/MF59의 개시부터 최종 왕진까지 시험 내내 모니터했다. 시험 내내 사용된 모든 처방한 약물처치를 기록했다.

피험자수: 계획된 및 실제 등록 피험자는 24명이었다. 모든 피험자는 ChironHBV/MF59 주사를 4회 받았다.

결과의 요약

피험자 특징 및 인구통계학: 피험자의 평균 나이는 42세였다(범위: 27 내지 63세). 24명의 피험자 중에서, 20명(83%)은 여성이었다. 13명(54%)의 피험자는 아시아 출신이었고, 9명(38%)은 코카시안, 1명은 아프리칸-아메리칸이었고, 1명은 혼합된 민족성을 가졌다. 등록시 14명(58%)의 피험자는 HBeAg 양성이었고, 8명(33%)은 항-HBe 양성이었다(2개 모두 EIA, Abbott): 한 환자 및 다른 환자는 2개 모두에대해 음성이었기 때문에 데이타를 입수할 수 없었다. 평균 혈청 ALT 레벨은 등록시 70 IU/L(범위: 17 IU/L 내지 276 IU/L)이었다(표 7). 라미부딘 사용의 평균 지속 기간(3개월 이상까지 중단 없이)은 ChironHBV/MF59의 1차 주사를 받기 전 7.7개월(범위: 1 내지 33개월)이었다(표 7). 24명의 환자 중 16명은 이 시험을 시작하기 전에 라미부딘에 더해진 또는 라미부딘 이외의 치료를 받았다. 이들 치료는 인터페론(인트론-a 및 CIFN 형태를 포함함), 팜시클로비르, 및 B형 간염 백신(CV-1899)를 포함했다(표 9).

2000년 1월 1일 현재, 24명의 피험자 모두 ChironHBV/MF59의 4회 주사를 모두 받았다. 22명의 환자는 이어서 최소 2개월 동안 라미부딘을 중단했다. 이들 22명의 환자 가운데, 5명의 환자는 데이타를 10.5개월까지 수집하고, 2명의 환자는 전체 연구(12개월)를 완료했다.

임상 실험실 평가: 연구-전 혈청 ALT 레벨에 대한 병력 정보를 가능한 광범하게 수집했다. 입수가능한 데이타의 기간 및 수는 각 피험자에 있어 다양했다. 많은 피험자가 라미부딘을 받기 전에 연구-전 ALT 레벨의 실질적인 상승을 포함하는 다양한 시간 기간에 걸친 매우 변동이 있는 ALT 레벨을 가졌다. 24명의 피험자 가운데, 9명은 700 IU/L을 능가하는 최고 혈청 ALT 레벨을 갖는 연구-전 간염 플레어에 대한 문헌에 보고된 증거를 가졌다. 이들 9명 환자 가운데 최고 ALT 레벨의 중앙값은 1035 IU/L이었고, 범위는 782 IU/L 내지 3116 IU/L이었다.

혈청 ALT 레벨은 스크리닝시 및 연구 참가의 처음 7개월 동안에 대부분의 피험자에서 정상이거나, 또는 최소로 상승(정상 상한의 2배 미만)했다. 이것은 이 기간 동안 모든 피험자가 라미부딘을 받고 있었기 때문으로 예상된다. 2명의 환자(20 5 및 601)에서, 혈청 ALT 레벨이 지속적으로 비정상이었다. 라미부딘을 받는 동안 연구중 기록된 최대 레벨은 각각 112 IU/L 및 119 IU/L이었다. 2명의 환자는 모두 라미부딘을 받는 동안 bDND 분석법에 의해 검출가능한 HBV DNA를 가졌으며, 환자 601은 라미부딘을 받는 동안 HBV DNA의 레벨에 현저한 증가를 나타냈다. 이것은 라미부딘-내성 돌연변이의 발생 가능성을 시사한다.

혈청 ALT 레벨에 대한 데이타를 표 10 및 표 11에 요약한다. 표 10은 가장 최근 왕진까지의 데이타가 입수가능했던 24명의 환자 중 22명에 대한 라미부딘 중단 후의 최대 ALT 레벨을 나타낸다. 10명의 환자에서, 최대 ALT 값은 50 IU/L 미만이었다. 6명의 환자는 50 IU/L 내지 100 IU/L 사이의 최대 ALT 값을 가졌고, 5명의 환자는 101 IU/L 내지 200 IU/L 사이의 최대값을 가졌고, 한 환자(502)는 최고 레벨이 1870 IU/L인 200 IU/L을 초과하는 최고 ALT 값을 가졌다. 50 IU/L 이상의 최대 ALT 레벨을 가졌던 12명의 환자 가운데, 라미부딘 중단 후의 최대 ALT 값을 본 연구에 등록하기 전에 기록된 최대 병력 값과 비교했다(표 11). 한 환자(502)를 제외하고, 모든 환자가 연구-전 최고값 미만(22명의 환자 중 10명)이거나, 또는 그 값에 필적(22명 환자 중 1명)했던 라미부딘 중단 후의 최대 ALT 레벨을 가졌다.

환자 502는 라미부딘의 중단시 초기 바이러스 재발을 나타냈으며, 10.5개월까지 해결되었다. 라미부딘 중단 후 1개월(8개월)에, HBV DNA 레벨이 511 Meq/ml로 증가했고, ALT 레벨이 63 IU/L로 증가했다. 이것은 초기 바이러스 재발이 발생했음을 나타낸다. 라미부딘 치료 중단 후 2개월(9개월)에, 환자 502의 ALT 레벨은 1870 IU/L에서 최고였지만, HBV DNA 레벨은 118 Meq/ml로 감소했다. 9개월 후, 환자 502의 ALT 레벨은 10.5개월에서 46 IU/L로 계속 감소했다.

정량적 HBV DNA 평가: 정량적 HBV DNA 레벨에 대한 평가는 제한된 수의 시간 포인트에 대해 입수가능하다. 3명의 피험자(402, 504 및 601)는 라미부딘을 받는 동안 HBV DNA에 의미 있는 증가(>100배)를 가졌다. 이들 증가는 라미부딘에 대한 내성을 갖는 HBV 이스케이프 돌연변이의 출현 때문인 것 같다. 이들 샘플의 HBV 유전형화를 수행했다. 라미부딘 중단 후 바이러스 재발에 대한 초기 정보는 8 또는 9개월에 측정된 HBV DNA 레벨을 가졌던 16명의 환자에서 입수가능했다. 이들 16명의 환자 가운데, 7명(401, 403, 404, 501, 503, 504, 505)은 8 또는 9개월(라미부딘중단 후 1 또는 2개월)에 bDNA 분석법의 검출 레벨 이하의 HBV DNA 레벨을 가졌다. 이것은 라미부딘을 받는 동안 이스케이프 돌연변이가 발생할 수 있지만(7개월에 57 7 Meq/ml HBV DNA 레벨을 갖는다), 그 후의 추적 검사 동안 HBV DNA 음성으로 된 한 환자(504)를 포함한다. HBV DNA를 측정했던 남은 9명의 환자는 라미부딘 중단 후 검출가능한 HBV DNA를 가졌다.

정량적 HBeAg 및 항-HBe 평가: HBeAg 및 항-HBe 레벨의 정량적 변화에 대한 제한적 데이타를 평가했다. HBeAg 및 항-HBe 역가를 집단내 EIA에 의해 측정했다. 집단내 HBeAg 분석에 대한 검출 하한을 상업적 EIA(Abbott)와 비교한다. 스크리닝중에 HBeAg 양성이었던 14명의 환자 가운데(즉, >0.1), 4명(102, 404, 505 및 602)의 피험자가 최종 주사 후 검출 레벨 이하의 정량적 HBeAg를 가졌다. 이들 4명의 환자 중 2명(102 및 505)은 또한 항-HBe 역가에 의미 있는(>4배) 증가를 가졌다(표 12).

전술한 실시예들은 본 발명을 예시하도록 의도되며, 어떤 방식으로도 한정하지 않는다. 당업자는 첨부된 청구항에 예시된 바와 같은 본 발명의 정신 및 범위내의 변형을 인정할 것이다.

본원에 인용된 모든 참고자료는 그것들의 전체가 참고자료로서 본원에 포함된다.

Claims

PreS2 + S 항원 및 대사가능한 기름 보조제를 포함하는 조성물의 유효량을 피험자에게 투여하는 것을 포함하는, 만성 B형 간염 바이러스(HBV) 감염의 치료 방법.
제 1 항에 있어서, PreS2 + S 항원을 투여량 당 약 5㎍에서 약 100㎍까지로 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 2 항에 있어서, PreS2 + S 항원을 투여량 당 약 20㎍으로 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, PreS2 + S 항원을 1회 이상 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, PreS2 + S 항원을 8회 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, PreS2 + S 항원을 4회 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, PreS2 + S 항원을 HBV 감염이 개선될 때까지 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, PreS2 + S 항원을 HBV 감염이 제거될 때까지 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7 항에 있어서, HBV 감염의 개선을 HBV DNA, 알라닌 아미노트랜스페라제( ALT), HBsAg 및 HBeAg로 구성된 군으로부터 선택된 혈청 성분의 농도 감소를 측정함에 의해 측정하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7 항에 있어서, HBV 감염의 개선을 항-HBs 및 항-HBe로 구성된 군으로부터 선택된 혈청 성분의 농도 증가를 측정함에 의해 측정하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항에 있어서, HBV 감염의 개선을 정상 레벨까지 혈청 ALT의 농도 감소를 측정함에 의해 측정하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 PreS2 + S 항원이 중국 햄스터 난소 세포에서 재조합적으로 생성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 대사가능한 기름 보조제가 MF59인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 항-바이러스제 또는 화합물을 투여하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 14 항에 있어서, 항-바이러스제가 라미부딘인 것을 특징으로 하는 방법.
제 15 항에 있어서, 라미부딘을 하루 당 약 100mg에서 약 300mg까지로 매일 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 라미부딘을 하루 당 약 100mg으로 매일 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 14 항에 있어서, 항-바이러스제를 PreS2 + S 항원을 투여하기 전에 적어도 1개월 동안 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
재조합 PreS2 + S 항원을 포함하는 조성물 및 대사가능한 기름 보조제를 포함하는 조성물을 포함하고, 항-바이러스제 또는 화합물을 더 포함하는 만성 B형 간염 감염 치료용 키트.
제 20 항에 있어서, 대사가능한 기름 보조제가 MF59인 것을 특징으로 하는 키트.
제 19 항 또는 제 20 항에 있어서, 재조합 PreS2 + S 항원이 중국 햄스터 난소 세포에서 생성되는 것을 특징으로 하는 키트.