KR20020002393A - 가르도스 통로 길항제 - Google Patents

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Abstract

칼륨 흐름의 신규한 저해제를 기술한다. 이 저해제는 놀라운 생물학 배지내 분해 내성을 나타내고 비-플루오르 치환된 상동물과 비교하여 생체내 반감기를 증가시켰다. 이들 화합물의 이용 방법은 겸상 적혈구병을 치료하고, 적혈구의 탈수를 방해하며 칼륨의 흐름을 억제하는 것을 포함한다.

Description

가르도스 통로 길항제{GARDOS CHANNEL ANTAGONISTS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 1999년 3월 24일 출원된 미국 출원 제 60/135,511호의 우선권을 주장하며, 그 기술 내용이 모든 목적을 위해 여기서 참조로써 관계한다.
겸상 적혈구병(sickle cell disease)은 수세기동안 서아프리카내에서 인식되어왔다. 겸상 적혈구성 빈혈과 겸상 헤모글로빈(Hb S)의 실재는 분자 수준에서 이해되는 첫번째 유전적 질병이다. 현재 이것은 배타 글로빈 사슬의 No. 6 위치에서 발린 치환에 대한 글라이신의 형태적이고 임상적인 결과로서 인지된다(Ingram,Nature178:792-794(1956)). 아미노산 변화와 질병 상태의 기원은 단일한 뉴클레오타이드의 치환 결과이다(Marotta 등,J.Biol.Chem. 252:5040-5053(1977)).
겸상 적혈구병으로 고통받는 환자의 질병률과 사망의 주요한 원인은 겸상 적혈구가 야기시키는 혈관 폐색이고, 이것은 급성 및 만성적인 형태로 고통의 반복적인 에피소드를 야기시키고 또한 시간의 경과에 따라 장기의 손상을 진행시킨다. 탈산소화가 종료되자마자 겸상 헤모글로빈, 헤모글로빈 S(Hb S)의 폴리머화와 세포내 젤라틴화에 의한 겸상 적혈구의 변형과 왜곡이 야기된다. 이 현상이 Eaton 등,Blood70:1245(1987)에서 만족스럽게 검토 및 논의된다. Hb S의 세포내 젤라틴화와 폴리머화는 적혈구가 혈관을 지나는 중 어느 순간에도 일어날 수 있다. 따라서, 폴리머화 헤모글로빈 S를 함유하지 않는 겸상 적혈구병 환자내 적혈구는 생리미소순환을 통과하여 겸상 없이 허파로 돌아올 수 있고, 정맥에서 겸상하거나 모세관에서 겸상할 수 있다.
적절한 모세관 운반 시간에 비례하는 세포내 젤라틴의 지연 시간에 의해 이들 각 경우의 가능성을 측정한다(Eaton 등,Blood47:621(1976)). 바꾸어 말해, 지연 시간은 헤모글로빈의 산화 정도에 의존하고, 탈산소화는 지연 시간을 단축시킨다. 만약 세포내 젤라틴화의 발생이 열역학적으로 불가능하다거나, 정맥 산소압에서 지연 시간이 약 15초 보다 길지 않다면, 적혈구 겸상이 일어나지 않을 것이다. 만약 지연 시간이 약 1 내지 15초 사이라면, 적혈구는 정맥에서 겸상할 것이다. 만약 지연 시간이 약 1초 미만이면, 적혈구는 모세관내에서 겸상할 것이다.
모세관내에서 겸상하는 적혈구에 대하여, 결과적으로 수많은 경우가 가능하다. 이들은 운반 시간에 대한 무효과로부터, 모세관의 전이 폐색, 궁극적으로 국소 빈혈 또는 주변 세포의 경색을 야기하고 이어서 적혈구의 파괴를 야기할 수 있는보다 영구적인 저해까지의 범위를 갖는다.
표준의 적혈구는 약 70%의 물을 함유한다. 물은 밀리세컨드 동안에 표준의 적혈구 막을 가로지른다. 세포의 수분 손실로 인해 세포내 평균 헤모글로빈 농도(MCHC)가 약 32g/dl 이상으로 증가하므로 세포질내 점도가 지수적으로 증가한다. 세포질내 점도는 적혈구 변형력과 겸상의 주요한 결정 인자이므로 적혈구의 탈수는 실질적인 유동학과 병리학적인 결과를 초래한다. 적혈구의 탈수를 조절하는 것은 겸상 적혈구병의 치료를 위한 중요한 치료적 접근으로서 인식된다. 세포의 수분은 세포내 이온 농도상에 어떠한 삼투압적 변화에 기인하므로 적혈구의 칼륨 농도를 유지하는 것이 특히 중요하다(Stuart 등,Brit J.Haematol.69:1-4(1988)).
탈수된 겸상 적혈구를 치료학적으로 처리하기 위한 많은 접근이 이루어졌으나(이렇게 혈장의 삼투압을 낮춤으로써 헤모글로빈 S의 폴리머화를 감소시킴) 제한된 성공을 거두었으며, 다음과 같은 접근이 있었다; 정맥내 증류수의 주입(Gye 등,Am.J.Med.Sci. 266:267-277(1973)); 유체의 높은 섭취 및 염의 제한과 함께 항이뇨 호르몬 바소프레신의 투여(Rosa 등,M.Eng.J.Med. 303:1138-1143(1980)); Charache 등,Blood58:892-896(1981)); 겸상 적혈구의 양이온 함량을 높이기 위해 모넨신의 사용(Clark 등,J.Clin.Invest. 70:1074-1080(1982)); Fahim 등,Life Sciences29:1959-1966(1981)); 세티에딜(cetiedil) 시트레이트의 정맥내 투여(Benjamin 등,Blood67:1442-1447(1986)); Berkowitz 등,Am.J.Hematol. 17:217-223(1984)); Stuart 등,J.Clin.Pathol. 40:1182-1186(1987)); 및 옥스펜티필린의 사용(Stuart 등, 상술함).
탈수된 겸상 적혈구를 치료학적으로 처리하기 위한 또다른 접근은 칼슘-의존성 칼륨 통로를 목표화함으로써 적혈구 칼륨의 흐름을 변경시키는 것을 포함한다(Ishi 등,Proc.Natil.Acad.Sci. 94(21):11651-6(1997)). 또한 이러한 칼슘 활성화 칼륨 통로를 가르도스 통로로서 언급한다(Brugnara 등,J.Clin.Invest.92:520-526(1993)). 최근에, 인간의 복제된 중재 전도성 칼슘 활성화 칼륨 통로인 hIK1이 그 생물 물리학 및 약물적 특성의 조건 모두에서 가르도스 통로와 실질적으로 유사함이 밝혀졌다(Ishi, 상술함).
가르도스 통로를 억제하기 위해 사용되는 방법으로는 적혈구에 이미다졸, 니트로이미다졸 및, 예컨대 클로트리마졸과 같은 트리아졸 항진균제의 투여가 있다(Brugnarna등의 미국 특허 제 5,273,992호). 이미다졸-함유의 항진균제인 클로트리마졸은 전형적인 겸상 적혈구의 가르도스 통로에 대하여 특정하고 유력한 저해제로서 알려져 있고, 시험관과 생체내 모두에서 겸상 적혈구의 Ca2+-의존성 탈수를 막는다(Brugnara, 상술함; De Franceschi 등,J.Clin.Invest. 93:1670-1676(1994)). Hb S의 산구조를 안정화시키는 화합물을 겸할 때, 클로트리마졸은 미세구멍 여과기의 막힘률을 부가로 감소시키고 불가역적으로 겸상 적혈구의 형성을 약화시킬 수 있다(Stuart 등,J.Haematol. 86:820-823(1994)). 가르도스 통로를 저해함으로써 겸상 적혈구의 탈수를 감소시키는데 유용하다고 알려진 헤테로아릴 이미다졸-같은 부분을 함유하는 그밖의 화합물로는 미코나졸, 에코나졸, 부토코나졸, 옥시코나졸과 술코나졸이 있다. 이들 화합물이 겸상 적혈구의 탈수를 감소시키기위해 유효하다고 입증되었으나, 그밖의 이미다졸 화합물은 가르도스 통로를 저해할 수 없고 칼륨의 손실을 막지 못한다고 알려져 있다.
겸상 적혈구성 빈혈은 만성적인 질병이므로, 이를 치료하도록 설계된 약제는 해결할 수 있는 병(예컨대, 균사체 감염)의 치료를 위한 약물로서 덜 필수적인 일정한 특성을 나타내는 것이 이상적이다. 임상적으로 유용한 가르도스 저해제는 장기간 투여에 걸쳐 극히 낮은 독성을 나타내고 우수한 생체이용성을 가지며 가르도스 통로에 고도로 특이적이고, 이 통로와의 상호작용에서 효능이 있다.
클로트리마졸 및 특정한 관련 화합물이 가르도스 통로를 저해하고 칼륨의 손실을 막는다고 알려져 있으나, 이들 화합물은 겸상 적혈구성 빈혈 치료에 덜 이상적인 임상용 약제이다. 그 주된 이유는, 장기간의 이미다졸 항진균제의 투여가 간세포 독성을 야기시키는 것이 입증되었기 때문이다(Rodriguez 등,Toxicology6:83-92(1995); Findor 등,Medicina58:277-81(1998); 및 Rodriguez 등,J.Biochem.Toxicol. 11:127-31(1996)). 약제의 독성 경향은 그밖의 특성, 예컨대 생체 이용성, 목표 선택성 및 유효성과 균형을 이루어야 한다.
현재 알려져 있는 가르도스 통로 저해제는 생체내에서 낮은 반감기와 낮은 생체 이용성을 갖는다. 사람의 수명 중 상당한 부분에 걸쳐서 정기적으로 약물을 투여해야 하므로, 이 결함들은 약물과 관련한 특수한 관심사이다. 이러한 약물에서, 투약 양생법에 대한 환자의 순응성은 중대한 것이며, 보다 단순한 양생법이라면 환자는 보다 잘 받아들일 것이다. 낮은 생체 이용성을 갖는 가르도스 통로 저해제는 자주 투여해야 하고, 이것은 복용을 빠뜨릴 위험이 높아지므로 그 결과 적혈구의 탈수를 막기 위한 혈장내 약물 수준이 부족하게 된다. 잦은 복용에 추가하여, 낮은 생체 이용성을 갖는 약제는 일반적으로 보다 나은 생체 이용성을 갖는 유사한 약제에 비해 보다 높은 복용량으로 투여해야 한다. 높은 복용량의 경우, 소망하지 않는 부작용과 독성이 매우 실재적인 문제가 된다.
낮은 생체 이용성에 추가하여, 클로트리마졸과 같이, 알려져 있는 가르도스 통로 저해제는 또한 가르도스 통로와의 상호작용에서 비교적 낮은 유효성을 갖는다. 화합물의 낮은 유효성은 그 낮은 생체 이용성과 급속한 전신 청소능에 의해 병을 악화시킨다. 알려진 수많은 가르도스 통로 저해제의 부가적인 결점은 칼슘 활성화된 칼륨 통로와 상호작용하는 비-특이적인 특성에 있다; 이들 약제는 가르도스 통로보다 칼슘 활성화된 칼륨 통로와 용이하게 상호 작용한다. 알려진 가르도스 통로 저해제는, 낮은 유효성, 낮은 특이성 및 낮은 생체 이용성과 함께, 보다 높고 보다 잦은 복용을 요구하고, 이에 따라 소망하지 않는 부작용 및 독성의 위험을 증가시킨다.
상기-기술한 대로 현재 알려져 있는 가르도스 통로 저해제의 결점을 고려할 때, 구조 성분으로서 이미다졸을 함유하지 않고, 상당한 생체 이용성을 가지며, 천천히 대사 및 분비되고, 가르도스 통로와의 상호 작용에서 유력하고 특이적인 가르도스 통로 저해제의 발견은 겸상 적혈구성 빈혈의 치료에 상당한 진보를 가져올 것으로 예상된다. 매우 놀랍게도, 본 발명은 이러한 특성을 갖는 가르도스 통로 저해제를 제공한다.
본 발명은 적혈구의 Ca2+-활성화된 칼륨 통로(가르도스(Gardos) 통로)에 대해 특정하고 효력 있으며 안전한 저해제인 유기 화합물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 시험관내 생물학 배지에서 분해에 대해 현저하게 향상된 내성과 비-플루오르화 동족체와 비교하여 연장된 생체내 반감기를 나타내는 플루오르 치환된 트리아릴메탄-기재의 저해제에 관한 것이다.
도 1은 화합물 1(정맥내(◆), 경구(▲)), 3(정맥내(), 경구(●)) 및 18(정맥내(■), 경구(×))에 대하여 평균 혈장 농도 대 시간으로 점을 찍어 표시한 것이다. 복용량은 정맥내 (1mg/kg)이고 경구 (10mg/kg)이다.
발명의 요약
가르도스 통로의 봉쇄에 의해 겸상 적혈구의 탈수를 감소시키는 것은 겸상 적혈구병을 치료 및/또는 예방하는 강력한 치료적 접근이다. 겸상 적혈구의 탈수를 감소시키는 수단으로써 가르도스 통로를 저해할 수 있는 화합물이 가장 바람직하며, 본 발명의 목적이 된다. 입증 가능한 효능에도 불구하고, 오늘날까지 연구되어온 이미다졸-기재의 가르도스 통로 저해제는 잘-증명된 간세포 독성의 가능성을 포함하여 몇가지 단점에 의해 제한된다. 이 독성은 저해제의 낮은 유효성, 가르도스 통로보다 칼슘 활성화된 칼륨 통로와의 비-특이적인 상호 작용 및 낮은 생체 이용성에 의해 병을 악화시키며, 이들 각각은 저해제를 보다 많이 그리고 보다 자주 투여해야 하는 원인이 된다.
이들 종래의 약제와 대조적으로, 약리적으로 유용한 차세대 가르도스 통로 저해제는 생물제제 환경에서 장기간 안정하며 가르도스 통로에 대해 유효성과 선택성을 가질 것이다. 이상적인 약제는 생물제제 환경(예컨대, 마이크로솜 조제물)에서 두시간 배양 후 60% 미만으로 분해되고 가르도스 통로에 대해 30nM을 넘지 않는 IC50을 갖는다. 게다가, 이들 약제는 다른 칼륨 통로, 예컨대 IKs보다 가르도스 통로에 대해 100배 이상 선택적이다.
이제, 한가지 이상의 페닐기가 한가지 이상의 플루오르 원자 또는 플루오르-함유 부분으로 치환된 트리페닐아세트아미드-기재의 가르도스 통로 저해제가 발견되었고, 이것은 클로트리마졸 및 유사한 비-플루오르화 트리페닐아세트아미드에 비해 놀라울 정도로 향상된 생체내 반감기 및 시험관내 대사 안정성을 갖는다. 예를 들어, 클로트리마졸(19)은 간의 마이크로솜 조제물에서 2시간 배양 후 94.2% 분해되고 비-플루오르화 트리페닐아세트아미드(20)는 2시간 후 87% 분해된다. 현저히 대조적으로, 본 발명의 대표적인 디플루오르화 화합물 3과 5는 동일한 배양 후, 단지 24%와 29%로 각각 분해된다.
이들 플루오르화 약제가 그 염화 동족체에 비해 덜 빠르게 대사되는 것을 플루오르화 트리페닐이미다졸 항진균제의 연구를 통해 입증하였으나, 이들 약제는 또한 유사한 염화 유도체보다 낮은 약물적 활성을 갖는다(Conte 등,Arneim-Forsch./Drug Res. 42:854-858(1992); 및 Bartoli 등,Arneim-Forsch./Drug Res.42:832-835(1992)). 그러나, 놀랍게도 본 발명의 화합물에서 완전히 상반된 경향이 관찰된다: 플루오르화 화합물이 보다 유효할 뿐 아니라, 가르도스 통로에 대해 클로트리마졸보다 선택적인 저해제이다. 예를 들어, 화합물 3과 5는 가르도스 통로에 대해 클로트리마졸보다 약 8- 및 10-배 유효하다. 게다가, 화합물 3과 5는 그밖의 칼륨 이온 통로(예컨대, IKs)에 관하여 클로트리마졸보다 약 16- 및 17-배 가르도스 통로에 대해 선택적이다.
따라서, 첫번째 양상에서, 본 발명은 다음 화학식 1의 구조를 갖는 화합물을 제공한다.
이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다;
m, n과 p가 모두 1일 때, 고리 1과 고리 2의 플루오로 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체, 메타에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 독립적으로 선택되는 위치에 존재하며, 고리 3의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체와 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되고;
p는 0, m은 1이고 n은 1일 때, 고리 1의 플루오로 치환체는 파라에서 아세트아미드 치환체이고, 고리 2의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되는 위치에 존재한다.
두번째 양상에서, 본 발명은 약리적으로 허용되는 부형제와 혼합된 화학식 1의 화합물을 포함하는 약리적 조성물을 제공한다. 이 조제물을 본 발명의 방법에 따라 투여할 수 있다.
질병의 영향을 받는 세포내 이온 흐름을 바꿈으로써 질병(예컨대, 겸상 적혈구병)을 조절하는 것은 강력한 치료적 접근이다. 게다가, 질병의 진행과 표준 생리학 모두에서 세포내 이온 흐름의 역할에 대한 기본적인 이해는 새로운 치료적 양상, 양생법과 약제를 제공할 수 있게 한다. 세포의 이온 흐름을 변화시키는, 구체적으로 칼륨 흐름을 억제하는 화합물은 약물로서 그리고 이들 이온 흐름의 기초가 되는 기본적인 메카니즘을 설명하는 시험으로서 매우 바람직하다. 유사하게, 기본적인 연구와 치료적 응용에서 이들 화합물을 이용하는 방법은 연구자와 임상학자 모두의 기술 축적에서 가치있는 도구가 될 것이다.
따라서, 세번째 양상에서 본 발명은 세포의 칼륨 흐름을 억제하는 방법을 제공한다. 이 방법은 칼륨의 흐름을 억제하기 위해 유효한 양의 화학식 1의 화합물을 세포와 접촉시키는 것으로 이루어진다.
겸상 적혈구병의 치료상 중요한 치료적 경로는 적혈구의 세포내 이온 흐름을 조작함으로써 적혈구의 탈수를 막거나 지연시키는 것이다. 따라서, 또다른 양상에서, 본 발명은 적혈구의 탈수를 감소시키는 방법을 제공한다. 이 방법은 적혈구의 탈수를 감소시키기 위해 유효한 양의 화학식 1의 화합물을 적혈구와 접촉시키는 것으로 이루어진다.
다섯번째 양상에서, 본 발명은 겸상 적혈구병을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 이 방법은 겸상 적혈구병으로 고통받는 대상에게 화학식 1의 구조를 갖는 치료적으로 유효한 양의 화합물을 투여하는 것으로 이루어진다.
본 발명의 화합물은 대사적 분해에 대하여 우수한 내성을 보이고 가르도스 통로에 대한 선택성과 유효성 모두가 그 비-플루오르화 동족체에 비해 향상된, 칼슘 활성화 칼륨 흐름을 억제하는 신규한 부류의 저해제를 대표한다. 따라서, 여섯번째 양상에서, 본 발명은 트리페닐메틸 부분을 포함하는 칼륨 통로 저해제의 생물제제 배지에서 분해에 대한 내성을 증가시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 이러한 그리고 그밖의 목적 및 이점은 후술하는 상세한 설명과 구체예로부터 명백해질 것이다.
본 발명의 상세한 설명과 바람직한 구체예
약자 및 정의
"MCHC"는 "평균 미립자 헤모글로빈 농도"이다.
"SAD-1"은 Trudel 등,EMBO J., 10(11):3157-3165(1991)에서 기술한대로 겸상 적혈구병의 돌연변이(transgenic) 마우스 모델이다.
여기서 사용한 "생물학 배지"는 시험관내와 생체내 모두의 생물적 환경을 언급한다. 예로써 시험관내 "생물학 배지"는, 이에 제한하는 것은 아니나, 세포 배양, 조직 배양, 균질액, 혈장과 혈액을 포함한다. 생체내 응용은 일반적으로 포유류, 바람직하게는 인간에서 수행된다.
"플루오로알킬"은 부분적으로 플루오르화되거나 과(per)-플루오르화된 알킬 또는 치환된 알킬기를 포함하는 "치환된 알킬"의 하위 부류를 언급한다. 플루오르 치환은 단지 알킬 부분의 치환일 수 있고 또는 실질적으로 그밖의 치환체 또는 치환체군을 이용한 어떠한 조합일 수 있다.
도입
상기 기술한대로, 가르도스 통로의 저해를 통한 겸상 탈수의 억제는 겸상 적혈구병을 치료 및/또는 예방하기 위한 강력한 치료적 접근이다. 시험관내 연구를통해, 이미다졸-함유의 항진균제인 클로트리마졸이 Ca2+-활성화된 K+흐름과 겸상 적혈구내 세포 탈수를 억제하는 것을 보았다(Brugnara 등,J.Clin.Invest. 92:520-526(1993)). 겸상 적혈구병으로 돌연변이된 마우스 모델, SAD-1 마우스에 대한 연구(Trudel 등,EMBO J. 11:3157-3165(1991))에서 클로트리마졸의 경구 투여가 적혈구 가르도스 통로의 저해와 적혈구 K+ 함량의 증가, 평균 미립자 헤모글로빈 농도(MCHC)의 감소 및 감소된 세포 농도를 이끄는 것을 볼 수 있다(De Franceschi 등,J.Clin.Invest. 93:1670-1676(1994)). 게다가, 클로트리마졸을 이용한 경구 치료는 겸상 적혈구병 환자에서 가르도스 통로의 저해를 유발하고 적혈구 탈수를 감소시킨다(Brugnara 등,J.Clin.Invest. 97:1227-1234(1996)). 시험관에서 가르도스 통로를 저해하는 그밖의 항진균제로는 미코나졸, 에코나졸 부토코나졸, 옥시코나졸과 술코나졸이 있다(Brugnara 등의 미국 특허 제 5,273,992호). 이들 화합물 모두는 이미다졸-같은 고리, 즉 두개 이상의 질소를 함유하는 헤테로아릴 고리를 포함한다.
입증 가능한 효능에도 불구하고, 오늘날까지 연구되어온 이미다졸-기재의 가르도스 통로 저해제는 잘-증명된 간세포 독성의 가능성을 포함하여 몇가지 단점에 의해 제한된다. 이 독성은 저해제의 낮은 유효성, 가르도스 통로보다 칼륨 통로와의 비-특이적인 상호 작용 및 낮은 생체 이용성에 의해 병을 악화시키며, 이들 각각은 저해제를 보다 많이 그리고 보다 자주 투여해야 하는 원인이 된다.
가르도스 통로를 저해할 수 있는 우수한 약리제를 제공하기 위해서는 세가지약물학적 표준을 만족해야 한다. 첫째로, 이 화합물은 가르도스 통로에 대해 30nM 보다 낮거나 동일한 IC50을 갖는, 유력한 가르도스 통로의 저해제이어야 한다. 가르도스 통로에 대한 그 유효성에 추가하여, 이 화합물은 또한 통로와의 상호 작용에 선택적이어야 한다. 화합물의 선택도는 IC50비율(IKs/가르도스)로 측정시 80보다 크거나 동일해야 한다.
화합물
첫번째 양상에서, 본 발명은 화학식 1의 구조를 갖는 화합물을 제공한다:
화학식 1
이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다;
m, n과 p가 모두 1일 때, 고리 1과 고리 2의 플루오로 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체, 메타에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 독립적으로 선택되는 위치에 존재하며, 고리 3의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체와 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되고;
p는 0, m은 1이고 n은 1일 때, 고리 1의 플루오로 치환체는 파라에서 아세트아미드 치환체이고, 고리 2의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되는 위치에 존재한다.
바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 2의 구조를 갖는다:
이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다.
이 구조를 갖는 화합물을 표 1에 나타내었고 화합물 1-5를 포함한다.
또다른 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 3의 구조를 갖는다:
이 때, m은 0이거나 1이다.
화학식 3에 따르는 화합물을 표 1에 나타내었고 화합물 3과 5를 포함한다.
본 발명의 화합물과 구조적으로 밀접하게 관련된 화합물들을 또한 표 1에 나타내었다. 본 발명의 화합물과 구조적으로 관련된 화합물들은, 본 발명의 플루오르화 화합물의 유리한 점과 소망하지 않는 특성, 그리고 이점을 평가하기 위한 "기준"으로서 이용된다.
화합물의 합성
유기 합성 분야에서 표준이 되는 기술에 의해 본 발명의 화합물을 제조할 수 있다. 적절한 출발 물질과 시약은 시판되거나 표준의 유기 화학 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 특정한 구체예를 들어 바람직한 공정을 설명한다. 전형적인 합성 경로를 반응식 1에서 제공한다.
반응식 1에서, 플루오르-치환된 벤조페논과, 벤조페논 케톤에 페닐 또는 플루오르-치환된 페닐 부분을 첨가시키는 시약으로 제조한 상응하는 플루오르-치환된 트리페닐메탄올로부터 플루오르-치환된 트리페닐아세트아미드의 합성을 시작한다. 그 다음에 알코올을 아세틸 클로라이드에 이어서 구리 시아나이드에 노출시킴으로써, 플루오르-치환된 트리페닐메탄올을 상응하는 플루오르-치환된 트리페닐아세토니트릴로 전환시킨다. 니트릴 중간 생성물을 황산 및 빙초산의 혼합물과 반응시켜 아세트아미드를 형성할 수 있다. 플루오르-치환된 트리페닐메탄 종류, 구체적으로 아세트아미드를 이끄는 그밖의 합성 경로를 당업자가 이용할 수 있다.
화합물의 안정성
가르도스 통로 저해제로서 작용하는 약리적으로 유용한 화합물에서, 후보가 되는 화합물은 생체내에서 허용 가능한 생체 이용성과 안정성 모두를 입증해야 한다. 화합물은 생물학 배지(예컨대, 마이크로솜 조제물)에서 두시간 배양시, 초기 화합물 양의 40% 이상이 손상되지 않고 남아있을 때 충분한 정도의 안정성을 갖는다고 평가된다. 이 수준의 안정성은 겸상 적혈구성 빈혈과 같은 만성적인 증후군을치료할 때 특히 중요하다. 겸상 적혈구성 빈혈에 대해 치료 받는 대상은 그 일생 동안 항-겸상제(예컨대, 가르도스 통로 저해제)를 정기적으로 복용해야 한다. 그 중에서도, 이러한 일생의 투약 양생법은 양생법에 따라 다양한 환자에서 심각한 위험을 유발한다. 만약 불충분한 순응 결과 환자의 조직내 약물의 적정 농도가 감소한다면, 겸상 적혈구 사건 및 그에 수반된 고통의 발생과, 물리적이고 생리적인 손상의 위험이 높아진다. 증가된 생체내 체류 시간 및 생체 이용성을 갖는 화합물은 단순화된 투약 양생법을 가능하게 한다(즉, 일당 보다 적은 분량 및/또는 보다 적은 약물). 게다가, 투여되는 화합물의 양을 감소시키는 것은 약물 및/또는 그 대사 산물에서 야기되는 부작용을 감소시킬 수 있다. 따라서, 우수한 생체 이용성과 생체내에서 향상된 안정성이 입증된 가르도스 통로 저해제를 제공하는 것이 가장 바람직하다.
당해 분야의 방법에 따라 다양한 생물학 배지에서 본 화합물의 안정성을 분석할 수 있다. 한 구체예에서, 시험관내 조제물에서 본 화합물의 안정성을 분석한다. 바람직한 구체예에서, 시험관내 조제물은 간의 마이크로솜 조제물이다. 이러한 시험관내 분석 결과 본 화합물의 생체내 안정성과 관련된 수치를 제공한다. 본 화합물의 안정성을 분석하기에 유용한 그밖의 시험관 분석이 당해 분야에 알려져 있다.
시험관 방법에 추가하여, 약물 동력학 연구와 같은 생체내 방법을 동물 모델의 범위에서 수행할 수 있다. 본 발명의 한가지 이상의 화합물을 동물, 바람직하게는 래트에 별개의 분량 및/또는 별개의 경로(예컨대, 정맥내, 복강내, 구강내)로투여할 수 있다. 혈액, 소변 및/또는 대변 샘플을 연속적인 시점에서 수집할 수 있고, 샘플이 현존하는대로 및/또는 본 화합물(들)의 농축물 및/또는 본 화합물(들)의 대사 산물을 분석할 수 있다.
별개의 화합물에서 얻은 수치를 비교하기 위해 모든 고유한 양을 이용할 수 있다. 예가 되는 것은 반감기, 생체 이용성, 예정된 기간 후 완전하게 남아있는 화합물의 양 등이다. 바람직한 구체예에서, 예정된 기간 후 손상되지 않고 남아있는 화합물을 양을 이용한다. 여기서 이용한 "완전한"이란 대사되지 않았거나 그렇지 않으면 원래의 화합물로부터 별개의 종류로 분해되지 않은 화합물을 언급한다.
바람직한 구체예에서, 예정된 기간은 약 2시간부터 약 72시간이고, 보다 바람직하게는 약 4시간부터 약 24시간이다. 또다른 바람직한 구체예에서, 두시간의 예정된 기간 후 남아있는 완전한 화합물의 양은 초기 샘플의 40% 이상, 바람직하게는 50% 이상, 보다 바람직하게는 70% 이상이다.
검출을 가능하게 하고, 바람직하게는 화합물(들) 및/또는 대사 산물의 정량을 가능하게 하는 모든 기술이 본 화합물의 분석에 이용하기 적절하다. 그 방법은, 이에 제한하는 것은 아니나, 분광법(예컨대, NMR(예컨대,19F NMR), MS, IR, UV/vis), 크로마토그래피법(예컨대, LC, GC, HPLC) 및 분광법과 크로마토그래피법을 모두 이용하는 하이브리드 방법(예컨대, GC/MS, LC/MS, LC/MS/MS)을 포함한다. 추가로, 이 방법은 방사성 동위 원소(예컨대, 3H, 15N, 14C) 또는 형광 표지(예컨대, 플루오레세인, 로다민)로 표지화된 본 발명의 화합물과 같은 검출 가능한 표지를 이용할 수 있다. 구체적으로 생물활성 분자에 응용할 수 있는, 작은 유기 분자의 생체내 지속성을 분석하기 위한 그밖의 방법이 당업자에게 명백할 것이다.
화합물의 활성
약리적으로 유용한 가르도스 통로 저해제를 얻기 위해, 후보가 되는 화합물은 표적 통로에 대하여 허용되는 활성을 입증해야 한다. 가르도스 통로에 대한 IC50이 30nM을 넘지 않는다면 충분히 유효성이 있는 것으로 평가된다.
화합물의 안정성에 대한 문단에서 상기 기술한대로, 이러한 수준의 활성은 겸상 적혈구성 빈혈과 같은 만성적인 증후를 치료할 때 특히 중요하다. 환자의 순응성 및 부작용에 대한 다양한 관심이 가르도스 통로에 대해 30nM의 유효성을 갖는 가르도스 통로 저해제에 의해 잘 다루어진다.
가르도스 통로와 같은 이온 통로에 대한 본 화합물의 활성을 당해 분야에 알려진 방법을 이용하여 분석할 수 있다. 예를 들어, Brugnara 등,J.Biol.Chem., 268(12):8760-8767(1993). 참조 중에 기술한 방법을 이용하여 가르도스 통로의 저해 퍼센트와 본 화합물의 IC50을 분석할 수 있다.
예가 되는 분석에서, 인간의 적혈구 세포를 이용하여 적혈구 가르도스 통로의 검사 화합물에 의한 저해를 분석할 수 있다. 저해 정도는86Rb와 같은 검출가능한 물질을 이용하여 측정한다.86Rb를 이용한 예가 되는 분석에서, 적혈구 세포를86Rb와 검사 화합물에 노출시키고 세포가 취하는86Rb의 양을 측정함으로써 가르도스통로 저해를 분석할 수 있다. 이 분석에 대한 수많은 변형이 당업자에게 명백할 것이다.
본 화합물의 유효성은 Brugnara 등,J.Clin.Invest., 92:520-526(1993)에서 기술한 방법에 의해 적혈구를 이용하여 분석할 수 있다. 간단히 말해서, 적혈구를 검사 화합물과86Rb를 함유하는 배지에 노출시킨다.86Rb 운반의 초기 비율은 세포(들)가 취하는86Rb의 선형 최소 정사각형의 사면과 같은 변수로부터 계산된다. 저해 상수는 컴퓨터-용 비선형 곡선 설정을 이용하여 표준법에 의해 계산할 수 있다.
이온 통로의 활성과 이온 통로에 영향을 미치는 약제의 활성을 분석하는 그밖의 방법은 당해 분야에 알려져 있다. 적절한 분석법의 선택은 당업자의 능력내에 있다. 예를 들어, Hille, B., IONIC CHANNELS OF EXCITABLE MEMBRANES, Sinaner Associates, Inc. Sunderland, MA(1992)을 참고한다.
본 발명의 화합물과 그밖의 밀접하게-관련된 화합물을 이용하여 가르도스 통로와 적혈구 저해를 분석한 결과를 표 2에 후술한다. 표 2 중 화합물 번호는 표 1에 표시한 화합물의 구조와 상호-관련된다.
화합물의 선택성
약리적으로 유용한 가르도스 통로 저해제로서 작용하는 화합물에서, 후보가 되는 화합물은 목표 통로에 대하여 허용 가능한 선택성을 입증해야 한다. 가르도스 통로에 대하여 선택성을 갖는 화합물은, IKs에 대한 화합물의 IC50대 가르도스 통로에 대한 IC50의 비율을 측정하여 80 이상이면 충분히 선택적인 것으로 평가된다. 현재의 IKs기록은 Turgeon 등,Circulation Research75:879-86(1994)에 따라 기니 돼지의 근세포 상에서 전체 세포의 패치 클램프 방법을 이용하여 얻은 것이다.
또다른 칼륨 이온 통로와 비교하여 가르도스 통로에 대한 화합물의 특수한 선택성은 두 화합물의 결합-관련 분량(예컨대, IC50) 비율로서 편리하게 측정된다. 바람직한 구체예에서, 상기 기술한대로 측정한 활성을 이용하여 선택성을 결정할 수 있으나, 이온 통로의 활성과 이온 통로에 영향을 미치는 약제의 활성을 분석하는 그밖의 방법이 당해 분야에 알려져 있다. 적절한 분석법의 선택은 충분히 당업자의 능력내에 있다. 예를 들어, Hille, B., IONIC CHANNELS OF EXCITABLE MEMBRANES, Sinaner Associates, Inc. Sunderland, MA(1992)을 참고한다.
본 발명의 화합물과 그밖의 밀접하게-관련된 화합물에 대하여 선택성을 측정한 결과를 표 2에 후술한다. 가르도스 통로에 대한 본 화합물의 선택성을 IKs, 그 예로써 칼륨 이온 통로와 비교하여 측정하였다. 표 2 중 화합물 번호는 표 1에 표시한 화합물의 구조와 상호-관련된다.
상기 표시한 결과에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 화합물은 다른 칼륨 이온 통로(예컨대, IKs)보다 가르도스 통로에 대해 보다 현저한 선택성을 입증하고 있다. 게다가, 본 발명의 화합물은 가르도스 통로의 유효한 저해제이다. 추가로, 이들 화합물의 생체내 반감기는 클로트리마졸과 같은 비-플루오르화 화합물과 비교하여 명백히 증가한 것이다.
한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 가르도스 통로에 의해 매개되는 것과 같은, 칼륨 흐름의 유효하고 선택적이며 안정한 저해제이다.
본 발명의 화합물은 생물제제 환경에서 두시간 배양 후 40% 이상, 바람직하게는 50% 이상, 보다 바람직하게는 70% 이상의 완전한 화합물을 보존하면서, 생물학 배지, 예컨대 시험관내 마이크로솜의 효소 조제물에서 바람직하게 안정하다.
특정한 작용 이론과 결부시키지 않고도 본 화합물의 일정한 구조적 특성(즉, 플루오르로 수소를 대신함)은 본 화합물의 안정성, 선택성 및 유효성과 관련이 있다고 여겨진다. 따라서, 바람직한 구체예에서 본 발명의 저해제는 아릴 부분을 포함하고, 이 때 아릴 부분 중 하나 이상의 수소 원자가 플루오르 원자를 포함하는 래디칼에 의해 대신된다. 이 구체예에서, 본 발명은 칼륨 이온의 흐름을 억제하는 화합물, 구체적으로 가르도스 통로의 저해 특성을 갖는 화합물의 플루오르화 유도체를 포함한다(예컨대, 항진균제, 즉, 미코나졸, 에코나졸, 부토코나졸, 옥시코나졸과 술코나졸). 칼륨 이온 통로의 저해 특성, 구체적으로 가르도스 통로의 저해 특성을 갖고, 하나 이상의 플루오르 원자 함유의 한가지 이상의 아릴 부분을 포함하는 그밖의 약제가 본 발명의 범위내에 있다.
바람직한 구체예에서, 아릴 부분은 페닐기이다. 또다른 바람직한 구체예에서, 아릴 부분은 트리페닐메틸기의 성분이다.
본 발명의 화합물(들)은 그 자체로 투여할 수 있고 또는, 활성 화합물(들)이 약리적으로 허용되는 한가지 이상의 담체, 부형제 또는 희석제와 혼합물 형태로 존재하는 약리적 조성물의 형태일 수 있다. 따라서, 세포의 이온 흐름에 영향을 주는 화합물(예컨대, 가르도스 통로의 저해 활성)에 추가하여, 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 함유하는 약리적 배합물을 제공한다.
약리적 배합물
두번째 양상에서, 본 발명은 약리적으로 허용되는 부형제와 혼합시킨 화학식 1에 따른 본 발명의 화합물을 함유하는 약리적 배합물을 제공한다. 바람직한 구체예에서, 이 화합물은 화학식 2에 따른 것이고 보다 바람직하게는 화학식 3에 따른 것이다.
여기서 기술한 화합물, 또는 약리적으로 허용되는 부가염 또는 그 수산화물은 광범한 범위의 경로 또는 투여 방법을 이용하여 환자에게 운반되도록 배합될 수 있다. 적절한 투여 경로는, 이에 제한하는 것은 아니나, 근육내, 피하 및 정맥내 주입을 포함하여 흡입, 경피, 경구, 눈, 직장, 경점막, 장 및 비경구 투여를 포함한다.
여기서 기술한 화합물, 또는 약리적으로 허용되는 염 및/또는 그 수산화물은 단독으로, 본 발명의 다른 화합물과 함께, 및/또는 다른 치료제와 함께 혼합하여 투여할 수 있다. 본 발명의 화합물과 공-투여할 수 있는 치료제의 선택은 치료하고자 하는 상태에 일부 의존할 것이다.
예를 들어, 겸상 적혈구병으로 고통받는 환자에게 투여하려면, 겸상 적혈구병과 통상적으로 관련되는 고통, 감염과 그밖의 증후 및 부작용을 치료하는 약제와 혼합하여 본 발명의 화합물을 투여할 수 있다. 이러한 약제는, 예컨대 진통제, 항생 물질 등이다. 본 발명의 화합물을 또한, 부티레이트와 부티레이트 유도체(Perrine 등,N.Engl.J.Med. 328(2):81-86(1993)); 히드록시우레아(Charache 등,N.Engl.J.Med. 323(20):1317-1322(1995)); 에리트로포이에틴(Goldberg 등,N.Engl.J.Med. 323(6):366-372(1990)); 및 마그네슘과 같은 식이염(De Franceschi 등,Blood88(648a):2580(1996))을 포함하는, 겸상 적혈구병을 치료하기 위한 통상의 다른 약제를 함유하는 혼합물로서 투여할 수 있다.
약리적으로 이용할 수 있는 조제물내로 활성 화합물의 조작을 촉진시키는 부형제와 보조제를 함유하는 한가지 이상의 생리적인 허용 담체를 이용하여 본 발명에 따라 이용되는 약리적 조성물은 종래의 방법대로 배합될 수 있다. 적절한 배합은 투여 경로의 선택에 따라 달라질 수 있다.
주입을 위하여, 본 발명의 약제를 수성 용액으로, 바람직하게는 행크스(Hanks's) 용액, 링거스(Ringer's) 용액 또는 생리적인 살린 완충액과 같은 생리적으로 적합한 완충액으로 배합할 수 있다. 여기 바람직한 구체예에서, 배합물은 물과 알코올 및/또는 글리콜을 포함한다. 배합물의 그밖의 유용한 성분은, 예를 들어, 계면 활성제, 유화제 및 에톡실화 오일과 같은 물질을 함유한다. 실례가 되는 배합물은 본 발명의 화합물, 폴리(에틸렌글리콜)400, 에탄올과 물을 1:1:1의 비율로 포함한다. 또다른 예가 되는 배합물은 본 발명의 화합물, 물, 폴리(에틸렌글리콜)400과 크레모포어(Cremophor)-EL을 포함한다.
경점막 투여(예컨대, 구강, 직장, 코, 눈 등)를 위하여, 스며드는 장벽을 향한 적절한 침투제를 배합물에 이용한다. 이러한 침투제는 당해 분야에 일반적으로알려져 있다.
경구 투여를 위하여, 당해 분야에 잘 알려져 있는 약리적인 허용 담체와 함께 활성 화합물(들)을 혼합시킴으로써 본 화합물을 용이하게 배합시킬 수 있다. 이러한 담체는, 본 발명의 화합물을 치료 환자가 경구 섭취하기 위한 정제, 알약, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 배합시킬 수 있다. 경구 투여용 약리적 조제물은, 임의로 생성된 혼합물을 분쇄하면서, 그리고 과립화 혼합물을 처리하면서, 소망한다면 정제 또는 당의정 코어를 얻기 위하여 적절한 보조제를 첨가한 후에 고체 부형제와 혼합할 수 있다. 적절한 부형제는, 구체적으로, 락토오스, 수크로스, 만니톨 또는 솔비톨을 포함하는 당류와 같은 충전재; 예를 들어 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸트, 메틸 셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)와 같은 셀룰로스 조제물이다. 소망한다면, 교차-결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 소듐 알기네이트와 같은 그 염을 붕해제로서 첨가할 수 있다.
당의정 코어는 적절한 피막을 갖도록 제공된다. 이를 위하여, 농축된 당용액을 이용할 수 있고, 이는 임의로 아라빅, 탤크, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 티타늄 디옥사이드, 래커 용액, 및 적절한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 포함할 수 있다. 동정을 위하여 또는 다르게 조합시킨 활성 화합물의 투여량을 특징 지우기 위하여 정제 또는 당의정 피막에 염료 또는 안료를 첨가할 수 있다.
경구적으로 이용할 수 있는 약리적 조제물은 젤라틴과, 글리세롤 또는 솔비톨과 같은 가소제로 이루어진 연질의 밀폐된 캡슐 뿐 아니라 젤라틴으로 이루어진 푸쉬-피트(push-fit) 캡슐을 포함한다. 푸쉬-피트 캡슐은 락토오스와 같은 충전재, 전분과 같은 결합재, 및/또는 탤크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제, 그리고 임의로 안정화제의 혼합물내에 활성 성분을 함유할 수 있다. 연질의 캡슐에서, 활성 성분은, 적절한 액체, 예컨대 지방질 오일, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해 또는 현탁될 수 있다. 추가로, 안정화제를 첨가할 수 있다. 모든 경구 투여용 배합물은 이러한 투여에 적절한 적량이어야 한다.
구강 투여를 위한 조성물은 통상의 방법으로 배합된 정제 또는 마름모꼴 정제(lozenges)의 형태이다.
흡입에 의한 투여를 위하여, 본 발명의 화합물은 편리하게도 적절한 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 카본 디옥사이드 또는 그밖의 적절한 기쳬를 이용하여, 압축시킨 팩 또는 분무기의 에어로졸 분무 조제물 형태로 운반된다. 압축된 에어로졸의 경우, 투여 단위는 계량된 양을 운반하기 위한 밸브를 제공함으로써 결정 가능하다. 흡입기 또는 취입기에 이용하는, 예컨대 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 화합물의 분말 혼합물 및 락토오스 또는 전분과 같은 적절한 분말 기재를 함유하도록 배합할 수 있다.
주입, 예컨대 일시 주사 또는 지속적인 주입에 의한 비경구 투여용 화합물을 배합할 수 있다. 주입용 배합물은 단위 투여 형태, 예컨대 방부제가 첨가된 앰플 또는 다중-투여 컨테이너 형태로 존재한다. 조성물은 현탁액, 용액 또는 지성 또는수성 담체내 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있고, 배합화제, 예컨대 교차-결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 소듐 알기네이트등의 그 염과 같은 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 첨가시킬 수 있다.
비경구 투여용 약리적 배합물은, 상기 정맥내 투여에서 기술한대로, 수용성 형태내 활성 화합물의 수성 용액을 포함한다. 추가로, 활성 화합물의 현탁액은 유질의 적적한 주입 현탁액으로서 제조할 수 있다. 적절한 친유성 용매 또는 담체는 세사미 오일과 같은 지질 오일, 또는 에틸 올레이트 또는 트리글리세라이드와 같은 합성 지방산 에스테르 또는 리포솜을 포함한다. 수성의 주입 현탁액은 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 솔비톨 또는 덱스트란과 같이 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 포함할 수 있다. 임의로, 현탁액은 또한 고농축된 용액을 조제할 수 있도록 화합물의 용해성을 증가시키는 적절한 안정화제 또는 약제를 포함할 수 있다.
선택적으로, 활성 성분은 사용 전에 적절한 담체, 예컨대 무균의 발열원이-없는 물을 갖는 구성용 분말 형태일 수 있다.
본 화합물은 또한 좌약 또는 보유 관장과 같이 통상의 좌약 기재로서, 예컨대 코코아 버터 또는 그밖의 글리세라이드를 함유하는 직장용 조성물로 배합될 수 있다.
상술한 배합물에 추가하여, 본 화합물을 또한 데포 조제물로서 배합할 수 있다. 이렇게 길게 작용하는 배합물은 피하 주입 또는 경피성 운반(예컨대, 피하내로 또는 근육내로), 근육내 주입 또는 경피성 패치로 응용할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본 화합물을 적절한 폴리머성 또는 소수성 물질(예컨대, 허용되는 오일내 에멀젼) 또는 이온 교환 수지, 또는 드물게 용해성 유도체, 예를 들어 드물게 용해성 염과 함께 배합할 수 있다.
또한 약리적 조성물은 적절한 고체 또는 겔상 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 이러한 담체 또는 부형제의 예로는, 이에 제한하는 것은 아니나, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당류, 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴과 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리머가 있다.
유효한 투여 적량
본 발명에서 사용이 적절한 약리적 조성물은 활성 성분이 치료상 유효한 양, 즉 그 의도한 목적을 달성하기에 유효한 양으로 함유된 조성물이다. 특정한 응용에서 실질적으로 유효한 양은, 특히 치료하는 증상에 따라 달라진다. 예를 들어, 겸상 적혈구의 탈수 감소 및/또는 적혈구의 겸상 발생 또는 그 위치에서 왜곡을 지연시키기 위한 방법으로 투여된다면, 이 조성물은 그러한 결과를 달성하기에 유효한 양의 활성 성분을 함유할 것이다. 유효량의 결정은, 특히 본 발명의 상세한 설명에 비추어서, 충분히 당업자의 능력내에 있다.
여기서 기술한 모든 화합물에서, 치료적인 유효량은 세포 배양 분석으로부터 초기에 결정할 수 있다. 목표가 되는 혈장 농도는 가르도스 통로의 저해를 유발할 수 있는 활성 화합물(들)의 농도일 것이다. 바람직한 구체예에서, 가르도스 통로 활성은 25% 이상 저해된다. 여기서 가르도스 통로의 칼륨 흐름 저해를 약 50% 이상, 75%, 또는 심지어 90% 보다 높이 유발할 수 있는 활성 화합물(들)의 목표 혈장 농도가 바람직하다. 환자에서 가르도스 통로의 저해 퍼센티지는 얻어진 혈장내 약물 농도의 고유치를 이용하여 모니터링할 수 있고, 소망하는 저해 퍼센티지를 얻기 위하여 투여량을 보다 높게 또는 보다 낮추어 조절할 수 있다.
당해 분야에 잘 알려진대로, 인간에게 사용하는 치료적 유효량은 동물 모델로부터 결정된다. 예를 들어, 인간을 위한 투여량은 동물에서 유효하다고 밝혀진 순환 농도를 얻기 위해 정해질 수 있다. 겸상 적혈구병을 위해 구체적으로 유용한 동물 모델은 SAD-1 마우스 모델(Trudel 등,EMBO J. 11:3157-3165(1991))이다. 인간에서 투여량은 가르도스 통로 저해를 모니터링하고, 상술한대로, 투여량을 많게 또는 적게 조절함으로써 맞출 수 있다.
치료적으로 유효한 분량은 또한, 클로트리마졸 및 그밖의 항진균제와 같이, 유사한 약물적 활성을 나타내는 종래의 화합물에서 얻은 인간에 대한 수치로부터 결정할 수 있다(Brugnara 등,JPET273:266-272(1995)); Benzaquen 등,Nature Medicine1:534-540(1995); Brugnara 등,J.Clin.Invest. 97(5):1227-1234(1996)). 이렇게 적용된 분량을 클로트리마졸과 비교한 투여 화합물의 상대적인 셍체 이용성과 유효성을 기초로 조절할 수 있다.
상술한 방법과 그밖의 방법을 기초로 인간에서 최대한의 효능을 달성하기 위해 투여량을 조절하는 것은 충분히 당업자의 능력내에 있다.
국소 투여의 경우, 투여된 화합물의 전신적인 순환 농도는 특별히 중요하지 않다. 이러한 경우는, 국소적인 영역에서 의도한 결과를 달성하기에 효과적인 농도를 얻도록 화합물을 투여한다.
만성적인 겸상 적혈구 에피소드 및 급성의 겸상 적혈구 발증을 포함하는 겸상 적혈구병을 예방 및/또는 치료하기 위하여, 투여된 화합물의 약 0.001ΓM 내지 20ΓM의 순환 농도가 유효하다고 고려되며, 약 0.01ΓM 내지 5ΓM이 바람직하다.
여기서 기술한 경구 투여용 화합물의 환자 복용량은, 그것이 만성적인 겸상 적혈구 에피소드의 예방과 치료에 바람직한 투여 방법일 경우, 통상적으로 약 1mg/일 내지 약 10,000mg/일, 보다 통상적으로 약 10mg/일 내지 약 1,000mg/일, 그리고 가장 통상적으로 약 50mg/일 내지 약 500mg/일이다. 환자의 체중 관점에서 볼 때 통상적인 투여량은 약 0.01 내지 약 150mg/kg/일, 보다 통상적으로 약 0.1 내지 약 15mg/kg/일, 가장 통상적으로 약 1 내지 약 10mg/kg/일 범위이다.
그밖의 투여 방법에서, 치료 중 특정한 임상적 지시에 따른 화합물의 유효한 혈장 투여 수준을 제공하도록 투여량 및 간격을 개별적으로 조절할 수 있다. 예를 들어, 급성의 겸상 발증이 가장 우세한 임상 징후라면, 한 구체예에서, 본 발명의 화합물을 일당 비교적 높은 농도로 여러번 투여할 수 있다. 선택적으로, 드물게, 주기적으로 또는 불규칙하게, 단지 주기적인 겸상 적혈구 발증을 나타내는 환자라면, 한 구체예에서, 극소의 유효 농도로 본 발명의 화합물을 투여하고 덜 빈번한 투여 양생법을 이용하는 것이 보다 바람직하다. 이로써 겸상 적혈구병의 개별적인 심함 정도에 따라 적절한 치료적 양생법을 제공할 것이다.
여기서 제공된 사실을 이용함으로써, 실질적으로 독성을 야기하지 않는 유효한 예방 또는 치료적 처리 양생법을 계획할 수 있고, 이것은 특정 환자에서 입증된 임상적 증후를 치료하기에 전적으로 효과적이다. 이 계획에는 화합물의 유효성, 상대적인 생체 이용성, 환자의 체중, 반하는 부작용의 존재와 심함 정도, 바람직한투여 방법 및 선택된 약제의 독성 프로파일과 같은 인자를 고려한 활성 화합물의 신중한 선택이 포함되어야 한다.
화합물의 독성
특정 화합물의 독성과 치료 효과간의 비율은 치료상의 지침이 되며, LD50(개체군 중 50% 치사의 화합물 양)과 ED50(개체군 중 50%에 유효한 화합물 양)간 비율로 표현할 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 세포 배양 분석 및/또는 동물 연구에서 얻은 치료 지수 수치를 인간을 위한 배합물의 투여량 범위로 이용할 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게 극히 낮은 ED50또는 독성이 전혀 없는 혈장 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 적용된 투여 형태와 사용된 투여 경로에 따라 이 범위내에서 다양할 수 있다. Fingl 등,In:THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Ch.1, p.1, 1975. 엄밀한 배합, 투여 경로와 투여량은 환자의 상태 및 화합물이 사용된 특정한 방법을 고려하여 의사가 개별적으로 선택한다.
방법
상세하게 논의한 화합물 및 약리적 배합물에 추가하여, 본 발명은 본 발명의 화합물을 이용하는 수많은 방법을 제공한다. 이 방법의 범위는 기본적인 메카니즘, 예를 들어, 약물 동력학, 약물 활성, 질병의 기원 및 진행 등을 규명하기 위한 실험실 세트에 이용할 수 있는 것들부터이다.
따라서, 세번째 양상에서, 본 발명은 세포의 칼륨 흐름을 저해하는 방법을제공한다. 이 방법은, 화학식 1의 구조를 갖는 화합물의 유효량을 세포와 접촉시키는 것으로 이루어진다. 바람직한 구체예에서, 화합물은 화학식 2의 구조를 갖고 보다 바람직하게는 화학식 3의 구조를 갖는다.
본 발명의 이러한 양상은 광범한 범위의 용도를 가지나, 칼륨 흐름의 기초가 되는 기본적인 메카니즘과 이 흐름을 조절하는 약제의 활성 메카니즘 연구를 위한 양상으로서 바람직하다. 추가로, 본 발명의 화합물은 칼륨 흐름을 조절하는 신규한 약제의 개발상에 도구로서 이용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 추정되는 칼륨 흐름의 저해 효능을 시험하기 위한, 예컨대 경쟁적인 분석과 같은 분석법에 이용할 수 있다. 본 발명의 이러한 방법은 시험관과 생체내 모두에서 수행할 수 있다. 본 발명에 따른 분석법은, 예를 들어, 본 발명의 화합물을 결합시킬 수 있는 당해 분야-인정된 방법을 변형시킴으로써 수행된다. 이러한 변형은 충분히 당업자의 기술력내에 있다.
또다른 바람직한 구체예에서, 칼륨의 흐름을 조절함으로써 실제적으로 영향을 미칠 수 있는 증상을 치료적으로 처리 또는 예방하는데 이 방법을 이용한다. 여기 바람직한 구체예에서, 그 증상은 겸상 적혈구병이다.
네번째 양상에서, 본 발명은 적혈구의 탈수를 감소시키는 방법을 제공한다. 이 방법은 적혈구를, 화학식 1의 구조를 갖는 화합물의 유효량과 접촉시키는 것으로 이루어진다. 바람직한 구체예에서, 이 화합물은 화학식 2의 구조를 갖고 보다 바람직하게는 화학식 3의 구조를 갖는다.
본 발명의 이러한 양상은, 예를 들어 적혈구의 탈수 메카니즘 연구, 적혈구의 탈수를 억제하거나 역전시키는 화합물의 조사 및 적혈구 탈수와 관련된 질병의 치료 또는 예방 등의 목적을 달성하기 위해 이용할 수 있다.
다섯번째 양상에서, 본 발명은 겸상 적혈구병을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 이 방법은 겸상 적혈구병을 앓는 대상에게 화학식 1의 구조를 갖는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것으로 이루어진다. 바람직한 구체예에서, 이 화합물은 화학식 2의 구조를 갖고 보다 바람직하게는 화학식 3에 따른다.
급성적인 겸상 사건의 발병을 억제하거나 이들 사건의 영향을 개선시키는데 본 발명의 이러한 양상을 이용할 수 있다. 추가로, 이 방법은 만성적인 겸상 적혈구병을 치료 및/또는 예방하는데 이용할 수 있다. 본 발명의 화합물을 그 자체로 이용하거나, 바람직하게는 본 발명의 약리적 배합물을 이용한다. 적절한 투여 방법, 투여 수준의 선택 및 복용 빈도는 상술한대로이다.
여섯번째 양상에서, 본 발명은 페닐 부분을 포함하는, 칼륨 통로 저해제의 생물학 배지에서 분해에 대한 내성을 향상시키는 방법을 제공한다. 이 방법은 저해제의 페닐 래디칼 상 수소 원자 대신에 페닐 원자를 포함하는 래디칼을 대신 이용하는 것으로 이루어진다.
이 방법은 범위내 구조를 갖는 칼륨 통로 저해제를 이용하여 실행할 수 있다. 단지 저해제의 구조상 제한점은 페닐 고리가 저해제의 구조내 성분으로서 존재해야 하는 것이다. 바람직한 구체예에서, 페닐 고리는 트리페닐메틸 래디칼의 성분이다. 추가로 바람직한 구체예에서, 두시간 동안 생물학 배지와 접촉 후 분해되는 화합물은 60% 미만까지 감소한다.
수소를 플루오르 래디칼로 치환시키는 것은 여기서 기술한 방법 또는 유기 화학적인 그밖의 표준 방법에 의해 수행할 수 있다. 예컨대, Aldrich Chemical Co.(Milwaukee, WI)와 같은 상업 공급자에 의해 용이하게 입수할 수 있는 플루오로-아릴 화합물로부터, 요구되는 치환을 갖는 광범한 범위의 화합물을 조합할 수 있다. 추가로, 본 방법에 따라 조합된 화합물에 대하여 적절한 출발 물질 화합물을 손쉽게 조합하기 위한 수많은 표준의 합성 경로가 존재한다.
플루오로-유도체로 전환시키기 위한 목표를 선택할 때, 가르도스 통로에 대해 알려진 활성을 갖는 아릴-함유 화합물로부터 출발하는 것이 바람직함을 당업자는 이해할 것이다. 항진균 특성을 갖는 많은 당해 분야-인정된 약제들은 입증할 수 있는 가르도스 통로 활성을 갖는다. 따라서, 당업자는 항진균 활성을 갖는 약제, 또는 플루오르화 동족체를 제조하기 위한 이들 화합물의 동족체를 선택할 것이다. 신규한 약제의 유효성과 생물학적 분해에 대한 내성 분석은, 당해 분야에 알려진 방법에 추가하여 여기서 제공된 방법을 이용함으로써 당업자가 관례대로 수행할 수 있다. 추가로, 이들 방법을 이용한 관례적인 실험을 통해, 당업자는 가르도스 통로에 대한 활성에서, 한가지 이상의 아릴-함유 분자를 신속하게 분석할 수 있다.
최적의 약리적 특성
a. 대사의 내성
한가지 이상의 페닐기가 한가지 이상의 플루오르 원자 또는 플루오르-함유 부분으로 치환된 본 트리페닐아세트아미드-기재의 가르도스 통로 저해제는 클로트리마졸과 같은 종래의 저해제와 비교하여 상당히 높은 대사적 안정성을 갖는다. 예를 들어, 클로트리마졸 19는 간의 마이크로솜 조제물에서 2시간 배양 후 94.2% 분해된다. 대조적으로, 본 발명의 대표적인 플루오르화 화합물인, 예컨대 3과 5는 유사한 배양 후 단지 24%와 29% 분해된다. 이들 플루오르화 트리페닐아세트아미드는 또한 그 비-플루오르화 동족체보다 현저하게 안정하다. 예를 들어, 화합물 20은 유사한 배양 후 87% 분해된다.
플루오로-치환에 대하여 일반적으로 개선된 안정성 경향을 확인하였으나, 이것이 모든 플루오르화 유도체에 해당하는 것은 아니다. 예를 들어, 두개의 페닐 고리상 3-과 3'-위치가 치환된 트리페닐아세트아미드 9는 마이크로솜 조제물에서 2시간 후 97% 분해된다. 따라서 이 경우, 플루오로 치환은 클로트리마졸 및 비-플루오르화 트리페닐아세트아미드 모두와 비교할 때 분해량을 명백히 증가시킨다.
유사하게, 하나의 고리상에 두개의 플루오로 치환체를 포함하는 동족체 화합물 또한 급속하게 분해된다. 에를 들어, 마이크로솜 조제물에서 두시간 후, 2-, 4-위치가 치환된 유도체(8)와 3-, 4-위치가 치환된 유도체(7)는 각각 61%와 85% 분해된다. 게다가, 세개의 페닐 고리 각각이 단일 치환된 특정 화합물 또한 급속하게 분해된다. 예를 들어, 3-, 3'-과 3''-위치가 치환된 유도체(17)는 마이크로솜 조제물에서 두시간 후 82% 분해되었다.
상술한대로, 단지 선택된 치환 패턴만이 필요한 수준의 안정성을 플루오르화 트리페닐아시트아미드에 부여하는 것을 발견하였다. 치환 패턴을 갖는 화합물의 유효성과 선택성에서 또한 유사한 차이를 관찰하였다.
b. 유효성
페닐 고리상에서 수소 대신 플루오르를 치환시켜 얻은 예상하지 못한 결과는 클로트리마졸과 비-플루오르화 트리페닐아세트아미드와 비교할 때 가르도스 통로에 대한 본 발명의 화합물의 유효성이 현저하게 향상된 것이다. 예를 들어, 비-플루오르화 트리페닐아세트아미드 20은 가르도스 통로에 대해 50nM의 IC50을 갖는다. 대조적으로, 유사한 단일플루오르화 트리페닐아세트아미드 2는, 유효성에서 330%의 개선을 반영하면서, 15nM의 IC50을 갖는다.
플루오르화 트리페닐아세트아미드 유도체에 대하여 일반적으로 개선된 유효성 경향을 확인하였으나, 특정한 치환 패턴은 치환되지 않은 모 화합물과 비교하여 보다 현저하게 향상된 유효성을 나타낸다. 이러한 일반적인 경향의 특정한 양상으로는, 하나 이상의 고리가 치환된 유도체는 일반적으로 단지 하나의 고리만이 치환된 유도체보다 유효하다는 것이다. 예를 들어, 화합물 8은 단일 고리의 2-와 4-위치에 두개의 플루오로 치환체를 갖고 IC50은 34nM이다. 대조적으로 화합물 12는 하나의 고리상 2-위치 및 또다른 고리의 4'-위치에 플루오로 치환체를 가지며, IC50은 5nM이다. 이것은 8에 비해 12의 유효성이 거의 700% 개선된 것이다. 게다가, 화합물 12는 비-플루오르화 모 화합물 20보다 1000% 큰 유효성을 갖는다.
유효성을 증가시키는 경향에도 불구하고, 고리당 수많은 치환체에 의해 화합물의 유효성 개선 정도를 선험적으로 예측할 수 없다. 예를 들어, 화합물 9는 한 고리의 3-위치와 또다른 고리의 3'-위치에 플루오로 치환체를 가지며 IC50은 30nM이다. 유사한 화합물 11은 한 고리의 2-위치와 또다른 고리의 4'-위치에 플루오로 치환체를 가지며 IC50은 5nM이고, 11은 9보다 600% 증가된 유효성을 갖는다.
상술한대로, 가르도스 통로에 대한 플루오르화 트리페닐아세트아미드의 유효성은 플루오로 치환체의 수와 이들 화합물의 페닐 고리상 그 위치를 분별있게 선택함으로써 조작할 수 있다. 놀랍게도, 이들 화합물의 가르도스 통로에 대한 선택성에서도 유사한 결과가 관찰된다.
c. 선택성
유효성과 생체 이용성에 추가하여, 이온의 흐름을 억제함으로써 겸상 적혈구성 빈혈을 치료하는 약리적 약제는 그 목표인 이온 통로에 대해 선택성이 있어야 한다. 약제가 목표가 아닌 다른 통로와 상호작용 하게 되면 잠재적으로 위험할 수 있는 원하지 않는 부작용을 야기할 것이다. 예를 들어, 클로트리마졸과 그 몇몇 동족체는 근세포, IKs에서 흐르는 지연된 정류기 칼륨의 느린 성분과 상호작용한다고 알려져 있다. 이 흐름의 폐색은 심실의 섬유성 연축에 기인한 돌연사와 관계 있다(Turgeon 등,Circulation Research75:879-86(1994)). 따라서, IKs보다 가르도스 통로에 선택성이 있는 화합물이 보다 안전하고 보다 효과적인 약리제임이 입증된다.
가르도스 통로 저해제의 한가지 이상의 고리를 플루오르화시켜 얻은 또다른 소망하지 않은 결과는 그밖의 칼륨 통로와 비교할 때 가르도스 통로에 대한 이들 화합물의 선택성이 증가된 것이다. 본 발명의 수개의 플루오로 치환된 트리페닐아세트아미드는, 클로트리마졸 및 비-플루오르화 모 트리페닐아세트아미드에 비하여 IKs보다 가르도스 통로에 대하여 극적으로 증가된 선택성을 입증한다. 예를 들어, 화합물 3과 5는 클로트리마졸보다, 가르도스 통로 대 IKs에서 약 16배와 18배 선택적이다. 게다가, 이 두가지 화합물 모두는 비치환된 모 트리페닐아세트아미드 20보다 가르도스 통로에 대해 약 6배 선택적이다.
이제 플루오르-치환된 트리페닐메탄 유도체를 발견하였고, 이는 구체적으로 적혈구의 가르도스 통로를 효과적으로 저해하는 트리페닐아세트아미드와 같이 플루오르-치환된 질소 화합물이다. 게다가, 플루오르-치환된 화합물은 플루오르가 치환되지 않은 상응하는 화합물에 비하여 놀라울 정도로 향상된 생물학 배지네 분해 내성을 나타낸다.
본 발명의 화합물, 조성물과 방법을 후술하는 구체예에서 추가로 설명한다. 이들 구체예는 예를 들어 설명하는 것이며 본 발명을 제한하는 것이 아니다.
실시예 1은 본 화합물의 합성 방법 및 특성을 설명한다. 이 구체예에서 기술한 방법을 이용하여 본 화합물을 실질적으로 순수한 형태 및 우수한 수율로 분리하였다.
실시예 2는 생물학 배지내 분해 내성에 대하여 본 화합물을 분석한 것이다. 이 구체예에서, 인간의 간 마이크로솜으로 생물학 배지를 형성한다. 본 발명의 화합물이 비-플루오르화 트리페닐메틸 화합물에 비하여 마이크로솜 조제물에서 두드러진 분해 내성을 가짐을 확인하였다.
실시예 3은 당해 분야에서 본 화합물의 약물 동력학 연구를 설명한다. 본 발명의 플루오르화 화합물은 비-플루오르화 유도체보다 증가된 생체내 반감기를 갖는다.
실시예 4는 본 화합물의 칼륨 통로(가르도스 통로) 저해를 측정하기 위한 생물학적 정량을 기술한다.
실시예 1
이 구체예는 본 화합물의 합성 방법 및 특성에 관한 것이다. 후술하는 방법에 따라 본 화합물을 실질적으로 순수한 형태와 높은 수율로 분리하였다. 이 구체예는 구체적인 예시라기보다 본 화합물을 합성하는데 이용할 수 있는 일반적인 범위의 방법을 제공한다.
1.1 물질과 방법
다르게 언급하지 않는다면 용인된 시약을 이용한 것이다. 비-상업용 플루오로페닐리튬 시약과 플루오로벤조페논을 제조하기 위해 Franco 등,J.Chem.Soc. Perkins Trans. II,443(1988)을 이용하였다. 모든 수분-감응성 반응은 오븐 건조된 유리 제품을 이용하여 질소 대기하에 수행하였다. 하네시안스(Hanessian's) 염색으로 탄화(charring)시킴으로써 검출하며 실리카겔 60 F254상 TLC에 의해 반응을 모니터링하였다(Khadem 등, Anal.Chem., 1958, 30(1965)). 셀렉토(Selecto) 실리카겔(32-63ΓM)을 이용하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하였다. 용해점은 일렉트로써멀(Electrothermal) IA9000 유닛상에서 결정하였고 교정하지 않았다. CDCl3내 실온에서 배리언(Varian)(Gemini 2000) NMR 기계로1H(3000 MHz)와19F(282 MHz) 스펙트라를 기록하였다. 내부 참조로서 테트라메틸실란을 이용하였다. 화합물 1의 키랄 분리는 CHIRACEL≤OD-R 칼럼과, 용리제로서 아세토니트릴/물을 이용하여 키랄 테크놀로지(Chiral Technologies)에 의해 수행하였다.
1.2 화합물 1의 제조
시판되는 전구체로부터 네단계를 거쳐 28% 수율로 화합물 1을 제조하였다.
1.2a (2-플루오로페닐)-(4-플루오로페닐)페닐메탄올의 합성
실온("rt", ~25℃)에서 t-부틸메틸 에테르(12mL) 중 2,4'-디플루오로벤조페논(1.09g, 5.0mmol)의 교반시킨 용액에 페닐마그네슘 브로마이드(1.83mL, 5.5mmol)를 방울로 첨가하였다. 첨가가 완전히 이루어진 후 반응물을 3시간 동안 환류에서 가열하였다. 용액을 실온까지 냉각시키고 빙냉의 1.0M HCl(aq)(20mL)을 부었다. 유기체를 EtOAc(3 x 10mL)로 추출하고 건조(Na2SO4)시켰다. 감압하에 농축시켜, 옅은 갈색 오일로서 소망하는 생성물 (2-플루오로페닐)-(4-플루오로페닐)페닐메탄올을 얻었고 추가의 정제 없이 다음 반응에 이용하였다.
1.2b (2-플루오로페닐)-(4-플루오로페닐)페닐아세토니트릴의 합성
(2-플루오로페닐)-(4-플루오로페닐)페닐메탄올(1.47g, 5.0mmol)을 실온에서 디클로로메탄(10mL) 중 아세틸 클로라이드의 20% 용액에 첨가시켰다. 생성된 용액을 12시간 교반 후 증발에 의해 용매를 제거하였다. 이 잔사에 톨루엔(2 x 20mL)을 첨가 및 증발시켜 조(crude) 2-플루오로페닐-(4-플루오로페닐)페닐클로로메탄을 얻었고 정제 없이 다음 단계에 이용하였다.
이 잔사에 구리 시아나이드(0.50g, 5.5mmol)를 첨가 후 생성된 혼합물을 2.5시간 동안 130℃에서 가열시켰다. 반응물을 일단 약 110℃까지 냉각시키고 톨루엔(30mL) 첨가 후 혼합물을 10분간 강하게 교반시켰다. 혼합물을 여과시키고 감압하에 용매를 제거하였다. 뜨거운 헥산(30mL)을 조 물질에 첨가하고 그 혼합물을 30분간 강하게 교반하였다. 더 많은 헥산으로 여과 및 세척하여 백색의 고체로서 소망하는 시아노 생성물을 얻었고, 추가의 정제 없이 이용하였다.
1.2c (2-플루오로페닐)-(4-플루오로페닐)페닐아세트아미드(1)의 합성
농축 황산(10mL)과 빙초산(10mL)의 용액을 실온에서 조 (2-플루오로페닐)-(4-플루오로페닐)페닐아세토니트릴(1.48g, 5.0mmol)에 첨가시켰다. 생성된 오렌지빛 용액을 교반하고 130℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 0℃까지 냉각하고 암모늄 히드록사이드를 방울로 첨가시켜 중화시켰다. 물(30mL)을 첨가하고 유기체를 클로로포름(3 x 30mL)으로 추출하였다. 유기 분획을 합치고 물(2 x 10mL)과 브린(20mL)을 이용하여 차례로 세척하였다. 유기상을 건조(Na2SO4)하고 감압하에 농축시켰다. 침전을 개시하기 위해 생성된 밝은 갈색 오일에 헥산(30mL)을 첨가하였다. 침전물을 빻고 뜨거운 헥산(30mL)을 이용하여 연속으로 세척하였다. 헥산/디클로로메탄으로부터 결정화시켜 백색의 결정성 고체로서 소망하는 생성물 (2-플루오로페닐)-(4-플루오로페닐)페닐아세트아미드(0.45g, 1.4mmol, 28%, 4단계)를 얻었다.
1.3 화합물 3의 제조
시판되는 전구체로부터 세단계를 거쳐 58% 수율로 화합물 3을 제조하였다.
1.3a 비스(4-플루오로페닐)페닐메탄올의 합성
실온에서 t-부틸메틸 에테르(150mL) 중 4,4'-디플루오로벤조페논(20g, 0.092mol)의 교반시킨 용액에 페닐마그네슘 브로마이드(100mL, 0.1mol)를 방울로 첨가하였다. 첨가가 완전히 이루어진 후 반응물을 3시간 동안 환류에서 가열하였다. 용액을 실온까지 냉각시키고 빙냉의 수성 1.0M HCl(100mL)을 부었다. 유기체를 EtOAc(2 x 50mL)로 추출하고 건조(Na2SO4)시켰다. 감압하에 농축시켜, 옅은 갈색 오일로서 비스(4-플루오로페닐)페닐메탄올을 얻었다. 진공에서 두시간 건조 후, 추가의 정제 없이 조 물질을 다음 반응에 이용하였다.
1.3b 비스(4-플루오로페닐)페닐아세토니트릴의 합성
비스(4-플루오로페닐)페닐메탄올(0.092mol)을 실온에서 디클로로메탄(50mL) 중 아세틸 클로라이드의 20% 용액에 첨가시켰다. 생성된 용액을 12시간 교반 후 증발에 의해 용매를 제거하였다. 이 잔사에 톨루엔(100mL)을 첨가 및 증발시켜 조 비스(4-플루오로페닐)페닐클로로메탄을 얻었고 정제 없이 다음 단계에 이용하였다.
이 잔사에 구리 시아나이드(8.24g, 0.11mol)를 첨가 후 혼합물을 3시간 동안 140℃에서 가열시켰다. 반응물을 100℃까지 냉각시키고 톨루엔(100mL)을 첨가시켰다. 생성된 혼합물을 10분간 강하게 교반시키고, 실온까지 냉각시켰으며, 짧은 실리카 패드를 통해 여과시키고 감압하에 용매를 제거시켜 갈색의 고체를 얻었다. 뜨거운 헥산(100mL)을 분말의 조 물질에 첨가하고 이 혼합물을 4시간 동안 강하게 교반하였다. 헥산을 추가시켜 여과 및 세척함으로써 백색의 고체로서 소망하는 비스(4-플루오로페닐)페닐아세토니트릴(18.9g, 67%)을 얻었다.
1.3c 비스(4-플루오로페닐)페닐아세트아미드(3)의 합성
농축 황산(50mL)과 빙초산(50mL)의 용액을 실온에서 비스(4-플루오로페닐)페닐아세토니트릴(18.9g, 0.06mol)에 첨가시켰다. 생성된 오렌지빛 용액을 교반하고 130℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 0℃까지 냉각하고 냉수(150mL)에 부은 후, 암모늄 히드록사이드를 이용하여 중화시켰다. 유기체를 클로로포름(3 x 100mL)으로 추출하고, 합친 후 브린(2 x 50mL)을 이용하여 세척하였다. 유기체를 건조(Na2SO4)하고 감압하에 농축시켜 노란색-오렌지색 고체를 얻었다. 이 고체를 뜨거운 헥산(100mL)과 함께 30분간 교반하고 여과시켰다. 디클로로메탄/헥산으로부터 결정화시켜 백색의 결정성 고체로서 비스(4-플루오로페닐)페닐아세트아미드(3) (16.9g, 0.052mol, 87%)를 얻었다.
1.4 화합물 5의 제조
시판되는 전구체로부터 네단계를 거쳐 66% 수율로 화합물 5를 제조하였다.
1.4a 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐메탄올의 합성
실온에서 t-부틸메틸 에테르(100mL) 중 2,4'-디플루오로벤조페논(24.5g, 0.11mmol)의 교반시킨 용액에p-플루오로페닐마그네슘 브로마이드(124mL, 0.12mol)를 방울로 첨가하였다. 첨가가 완전히 이루어진 후 반응물을 3시간 동안 환류에서 가열하였다. 용액을 실온까지 냉각시키고 빙냉의 1.0M HCl(aq)(100mL)을 부었다. 유기체를 EtOAc(3 x 70mL)로 추출하고 건조(Na2SO4)시켰다. 감압하에 농축시켜, 옅은 노란색 오일로서 소망하는 생성물 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐메탄올을 얻었고 추가의 정제 없이 다음 반응에 이용하였다.
1.4b 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐아세토니트릴의 합성
조 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐메탄올을 실온에서 디클로로메탄(60mL) 중 아세틸 클로라이드의 20% 용액에 첨가시켰다. 생성된 용액을 12시간 교반 후 증발에 의해 용매를 제거하였다. 이 잔사에 톨루엔(100mL)을 첨가 및 증발시켜 조 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐클로로메탄을 얻었고 정제 없이 다음 단계에 이용하였다.
이 잔사에 구리 시아나이드(12g, 0.13mol)를 첨가 후 생성된 혼합물을 3시간 동안 160℃에서 가열시켰다. 반응물을 약 110℃까지 냉각시키고 톨루엔(100mL) 첨가 후 혼합물을 10분간 강하게 교반시켰다. 혼합물을 냉각시키고, 짧은 실리카 플러그를 통해 여과 후 감압하에 농축시켰다. 뜨거운 헥산(100mL)을 조 물질에 첨가하고 그 혼합물을 30분간 강하게 교반하였다. 더 많은 헥산으로 여과 및 세척하여백색의 고체로서 소망하는 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐아세토니트릴(25.3g, 70%)을 얻었다.
1.4c 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐아세트아미드(5)의 합성
농축 황산(10mL)과 빙초산(10mL)의 용액을 실온에서 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐아세토니트릴(5.0g, 0.015mmol)에 첨가시켰다. 생성된 오렌지빛 용액을 교반하고 130℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 0℃까지 냉각하고 얼음(50g)을 부었다. 생성된 혼합물에 암모늄 히드록사이드를 방울로 첨가시켜 중화하였다. CH2Cl2(100mL)을 첨가하고 유기체를 추가의 CH2Cl2(3 x 30mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 분획을 물(2 x 10mL)과 브린(20mL)을 이용하여 차례로 세척하였다. 유기상을 건조(Na2SO4)하고 감압하에 농축시켜 노란색/오렌지색 고체를 얻었다. 고체를 분말화한 후, 여과액내 착색이 명백히 사라질때까지 뜨거운 헥산(50mL)을 이용하여 반복적으로 세척하였다. 헥산/디클로로메탄으로부터 결정화시켜 백색의 결정성 고체로서 소망하는 생성물 비스(4-플루오로페닐)-2-플루오로페닐아세트아미드 5(4.98g, 0.0415mol, 94%)를 얻었다.
1.5 화합물 16의 제조
시판되는 전구체로부터 네단계를 거쳐 11% 수율로 화합물 16을 제조하였다.
1.5a 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐메탄올의 합성
78℃에서 THF(25mL) 중 브로모-3-플루오로벤젠(1.75g, 10mmol)의 교반시킨 용액에 n-부틸리튬(4mL, 10mmol)를 방울로 첨가하였다. 20분 후4,4'-벤조페논(1.96g, 9mmol)을 첨가하였다. 반응물을 30분에 걸쳐 0℃까지 가온시켰다. 포화된 NH4Cl(aq)(30mL)을 첨가하고 30분간 교반을 지속하였다. EtOAc(20mL)를 첨가하고 유기체를 분리한 후, 브린(20mL)으로 세척, 건조(Na2SO4) 및 감압하에 농축시켰다. 이 잔사를 칼럼 크로마토그래피(100% 헥산에서 100% CH2Cl2)로 정제시켜 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐메탄올(2.81g, 92%)을 얻었다.
1.5b 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐아세토니트릴의 합성
비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐메탄올(999mg, 3.18mmol)을 실온에서 디클로로메탄(10mL) 중 아세틸 클로라이드의 20% 용액에 첨가시켰다. 생성된 자줏빛 용액을 12시간 교반 후 증발에 의해 용매를 제거하였다. 이 잔사에 톨루엔(20mL)을 첨가 및 증발시켜 조 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐클로로메탄을 얻었고 정제 없이 다음 단계에 이용하였다.
이 조 물질에 구리 시아나이드(344mg, 3.82mmol) 첨가 후 생성된 혼합물을 3시간 동안 140℃에서 가열시켰다. 반응물을 약 110℃까지 냉각시키고 톨루엔(50mL) 첨가 후 혼합물을 10분간 강하게 교반시켰다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 짧은 실리카 패드를 통해 여과 후 감압하에 용매를 제거시켜 베이지색 고체를 얻었다. 뜨거운 헥산(100mL)을 분말화된 조 물질에 첨가하고 이 혼합물을 1시간 동안 강하게 교반하였다. 더 많은 헥산으로 여과 및 세척하여 백색의 고체로서 소망하는 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐아세토니트릴을 얻었고 추가의 정제 없이 이용하였다.
1.5c 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐아세트아미드(16)의 합성
농축 황산(10mL)과 빙초산(10mL)의 용액을 실온에서 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐아세토니트릴(3.18mmol)에 첨가시켰다. 생성된 오렌지빛 용액을 교반하고 130℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 0℃까지 냉각하고 냉수(50mL)를 부은 후 암모늄 히드록사이드를 이용하여 중화시켰다. 클로로포름(3 x 50mL)으로 유기체를 추출하였다. 유기 분획을 합하고 브린(2 x 20mL)으로 세척, 건조(Na2SO4) 및 감압하에 농축시켜 노란색/오렌지색 고체를 얻었다. 고체를 뜨거운 헥산(50mL)과 30분간 교반하고 여과시켰다. 디클로로메탄/헥산으로부터 결정화시켜 백색의 결정성 고체로서 소망하는 생성물 비스(4-플루오로페닐)-3-플루오로페닐아세트아미드 16(147mg, 0.43mmol, 11%, 4단계)을 얻었다.
1.6 1 H와 19 F NMR 분광기 및 용해점에 의한 화합물의 특성
1H와19F NMR 분광기를 결합시켜 본 화합물의 특성을 표시하고 화합물의 용해점을 측정하였다.
실시예 2
이 구체예는 생물학 배지에서 분해 내성에 대한 본 화합물의 분석을 설명한다. 이 구체예에서, 인간의 간 마이크로솜으로 생물학 배지를 형성한다. 본 발명의 화합물은 비-플루오르화 트리페닐메틸 화합물에 비하여 마이크로솜 조제물에서 주목할 만한 분해 내성을 나타내었다.
2.1 물질과 방법
인간의 간 마이크로솜의 반응 혼합물에서 시험관내 대사 안정성에 대하여 17개의 플루오르화 트리아릴메탄 화합물, 클로트리마졸 및 염화 트리아릴메탄 화합물 18을 시험하였다. 반응 혼합물은 1.0mg/ml의 인간의 간 마이크로솜 단백질, 100mM의 칼륨 포스페이트(pH 7.4), 10mM의 MgCl2및 NADPH-생산계를 포함한다. 이 화합물을 37θC에서 5ΓM의 농도로 시험하였고 두시간 배양 후 혼합물에 남아있는 완전한 화합물의 양을 남아있는 최초 투여량의 퍼센트로 계산하였다.
2.2 결과
연구 결과, 본 발명의 플루오르화 화합물은 생물제제 환경 중 분해에 대하여 유사한 비-플루오르화 화합물보다 개선된 내성을 가짐이 입증되었다. 이 결과를 상기 표 2에 나타내었다.
실시예 3
이 구체예는 래트에서 본 화합물의 약물 동력학 연구를 설명한다. 본 발명의 플루오르화 화합물이 비-플루오르화 유도체와 비교하여 개선된 생체내 반감기를 나타냄이 발견되었다.
3.1 물질과 방법
페닐 고리의 선택된 플루오로 치환이 시험관에서 대사 안정성을 증가시킨다는 발견을 생체내 연구에까지 확장하기 위하여 래트에서 약물 동력학 연구를 수행하였다. 화합물 1, 화합물 3과 화합물 18을 3 내지 5의 수컷, Sprague-Dawley 래트의 군에 1mg/kg(정맥내)과 10mg/kg(경구)의 분량으로 투여하고 T1/2과 경구의 생체 이용성을 측정하였다. 예비 투여로부터 9시간 시점에서 경구 투여후 24시간까지와 예비 투여로부터 11시간 시점에서 정맥내 투여 후 24시간까지의 혈액 샘플을 수집하였다. 샘플을 제조하고 LC-MS/MS를 이용하여 화합물의 혈장 농도를 분석하였다.
3.2 결과
시험관내 대사 수치에서 예견한대로, 화합물 18은 투여 후 0.25와 1시간 사이에 단지 매우 낮은 혈장내 수준(31 내지 65ng/mL)을 나타내면서 극히 불충분한 경구 생체 이용성을 가졌고, 투여 후 2시간이 지난 샘플에서는 전혀 탐지할 수 없었다. 정맥내 경로에서, 혈액 흐름으로부터 빨리 제거되었다. 경구 투여 이후의 샘플에서 그 혈장 수준이 매우 낮기 때문에, 화합물 18의 생체 이용성에 대한 퍼센트를 계산할 수 없었다.
화합물 18에서 얻은 결과와 상당히 대조적으로, 화합물은 1은 보다 우수한 경구 생체 이용성인 35%를 가졌고, 화합물 3의 경구 생체 이용성은 100%로 계산되었다.
이러한 약물 동력학의 실험 결과를 도 1에 그래프로 표시하였다.
실시예 4
실시예 4는 본 화합물의 적혈구에서 칼슘 활성화 칼륨 통로, 가르도스 통로의 저해 정도를 측정하는 생물학적 분석을 기술한다.
4.1 물질과 방법
완전한 헤파린 첨가혈을 변형된 유동 완충액(MFB:140mM NaCl; 5mM KCl; 10mM 트리스; 0.1mM EGTA; pH=7.4)으로 3회 세척하였다. 그리고 나서 세척된 세포를86Rb(5μCi/mL)로 3시간 동안 배양하였다. 배양 후, RBCs를 차가운 MFB로 3회 세척하였다. 세척된86Rb 부하의 RBCs를 본 발명의 시험 화합물을 이용하여 10분간 배양하였다. 그 다음에 10mM의 CaCl2와 100μM의 A23187, 칼슘 이온 투과 담체를 함유하는 20μL/mL의 MFB 용액을 첨가시켜86Rb 흐름을 개시하였다. 이렇게 200μM의 CaCl2와 2μM의 A23187 n의 최종 농도를 갖는 배양 배지를 생성하였다. 세포를 10분간 배양하고, 스펀을 가라앉힌 후(spun down) 상등액을 제거하였다. 크렌코브(Cerenkov) 방사에 의한 Wallace Microbeta liquid scintillation counter에서 샘플을 계수하였다. RBCs를 물로 용해시켜 총 RBC86Rb 함량을 측정하고 50:50의 에탄올:클로로포름 혼합물을 이용하여 단백질을 침전시켰다. 마이크로퓨즈 스핀 20분 후, 수성층과 유기층을 분리하고, 수성층을 제거시켜 계수하였다.86Rb의 초기 세포 계수에 대한 퍼센티지로 유출량을 표현하였다.
4.2 결과
상기 기술한 생물학적 분석으로 본 발명의 화합물이 가르도스 통로의 우수한 저해제임을 입증하였다. 저해 연구에 대한 수치적인 결과를 상기의 표 2에 나타내었다.
여기서 기술한 실시예와 구체예는 단지 예를 들기 위함이며, 그에 따른 다양한 변형 또는 변경이, 본 출원의 정신과 범위내에 포함되고 첨부된 청구 범위내에서 고려되는 한, 당업자에 의해 제안될 것이다. 여기서 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체로서 여기에 참조로써 관계한다.

Claims (25)

  1. 다음 구조를 갖는 화합물:
    화학식 1
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이며,
    m, n과 p가 모두 1일 때, 고리 1과 고리 2의 플루오로 치환체는 오르소(ortho)에서 아세트아미드 치환체, 메타(meta)에서 아세트아미드 치환체 및 파라(para)에서 아세트아미드 치환체 중에서 독립적으로 선택되는 위치에 존재하며, 고리 3의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체와 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되고,
    p는 0, m은 1이고 n은 1일 때, 고리 1의 플루오로 치환체는 파라에서 아세트아미드 치환체이고, 고리 2의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되는 위치에 존재한다.
  2. 제 1 항에 있어서, 다음 구조를 갖는 화합물:
    화학식 2
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다.
  3. 제 2 항에 있어서, 다음 구조를 갖는 화합물:
    화학식 3
    이 때, m은 0이거나 1이다.
  4. 제 1 항에 있어서, 다음에서 선택되는 구조를 갖는 화합물:
  5. 약리적으로 허용되는 부형제와 혼합시킨 화합물을 포함하고, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 약리적 조성물:
    화학식 1
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이며,
    m, n과 p가 모두 1일 때, 고리 1과 고리 2의 플루오로 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체, 메타에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 독립적으로 선택되는 위치에 존재하며, 고리 3의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체와 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되고,
    p는 0, m은 1이고 n은 1일 때, 고리 1의 플루오로 치환체는 파라에서 아세트아미드 치환체이고, 고리 2의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되는 위치에 존재한다.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 약리적 조성물:
    화학식 2
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 약리적 조성물:
    화학식 3
    이 때, m은 0이거나 1이다.
  8. 제 5 항에 있어서, 상기 화합물은 다음에서 선택되는 구조를 갖는 것이 특징인 약리적 조성물:
  9. 다음 구조를 갖는 화합물의 유효량과 세포를 접촉시키는 것으로 이루어지는, 세포의 칼륨 흐름을 억제하는 방법:
    화학식 1
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이며,
    m, n과 p가 모두 1일 때, 고리 1과 고리 2의 플루오로 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체, 메타에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 독립적으로 선택되는 위치에 존재하며, 고리 3의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체와 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되고,
    p는 0, m은 1이고 n은 1일 때, 고리 1의 플루오로 치환체는 파라에서 아세트아미드 치환체이고, 고리 2의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되는 위치에 존재한다.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
    화학식 2
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다.
  11. 제 8 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
    화학식 3
    이 때, m은 0이거나 1이다.
  12. 제 9 항에 있어서, 상기 화합물은 다음에서 선택되는 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
  13. 제 9 항에 있어서, 상기 세포는 적혈구인 방법.
  14. 탈수를 감소시키기에 유효한 양의 화합물을 적혈구와 접촉시키는 것으로 이루어지며, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인, 적혈구의 탈수를 감소시키는 방법:
    화학식 1
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이며,
    m, n과 p가 모두 1일 때, 고리 1과 고리 2의 플루오로 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체, 메타에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 독립적으로 선택되는 위치에 존재하며, 고리 3의 치환체는 오르소에서아세트아미드 치환체와 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되고,
    p는 0, m은 1이고 n은 1일 때, 고리 1의 플루오로 치환체는 파라에서 아세트아미드 치환체이고, 고리 2의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되는 위치에 존재한다.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
    화학식 2
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다.
  16. 제 15 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
    화학식 3
    이 때, m은 0이거나 1이다.
  17. 제 14 항에 있어서, 상기 화합물은 다음에서 선택되는 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
  18. 다음 구조를 갖는 화합물의 치료적 유효량을 겸상 적혈구병을 앓는 대상에세 투여하는 것으로 이루어지는, 겸상 적혈구병 사건을 치료하거나 예방하는 방법:
    화학식 1
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이며,
    m, n과 p가 모두 1일 때, 고리 1과 고리 2의 플루오로 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체, 메타에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 독립적으로 선택되는 위치에 존재하며, 고리 3의 치환체는 오르소에서아세트아미드 치환체와 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되고,
    p는 0, m은 1이고 n은 1일 때, 고리 1의 플루오로 치환체는 파라에서 아세트아미드 치환체이고, 고리 2의 치환체는 오르소에서 아세트아미드 치환체 및 파라에서 아세트아미드 치환체 중에서 선택되는 위치에 존재한다.
  19. 제 18 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
    화학식 2
    이 때, m, n과 p는 독립적으로 0과 1에서 선택되고, m, n과 p 중 한가지 이상은 1이다.
  20. 제 19 항에 있어서, 상기 화합물은 다음 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
    화학식 3
    이 때, m은 0이거나 1이다.
  21. 제 18 항에 있어서, 상기 화합물은 다음에서 선택되는 구조를 갖는 것이 특징인 방법:
  22. 저해제의 아릴 래디칼 상에서 수소 원자 대신에 플루오르 원자를 포함하는 래디칼을 치환시키는 것으로 이루어지는, 페닐 부분을 포함하는 칼륨 통로 저해제의 생물학 배지내 분해 내성을 증가시키는 방법.
  23. 제 22 항에 있어서, 상기 칼륨 통로는 IK1인 방법.
  24. 제 23 항에 있어서, 상기 칼륨 통로는 가르도스(Gardos) 통로인 방법.
  25. 제 22 항에 있어서, 상기 아릴 래디칼은 트리아릴메틸 래디칼의 구성 요소인 방법.
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