KR20010110316A - 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양방법 및 그의 포자낭과의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시(Cordyceps kyushuensis Y.kobayasi)의 인공 배양 방법 및 그의 포자낭과의 용도에 관한 것으로, 야생 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 단일 포자 또는 단일 콜로니를 정제하고, 이어서 클라니스 빌리네아타 워커(clanis Bilineata Walker)의 살아있는 유생이 주 성분인 배양 배지에 상기 세균 균주를 접종하는 것에 관한 것이다. 상기 클라니스 빌리네아타 워커는 무균 조건 하에서 배양한다. 적합한 조건 하에서, 상기가 자연적으로 감염되는 경우, 천연 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시 포자낭과와 유사한 포자낭과가 생산된다. 이러한 방법은 요즈음 기술의 상기 세균 종의 수확 능력의 손실을 극복한다. 상기 방법의 이점들은 다음과 같다: 상기 세균 종이 안정화되고; 생산 주기가 짧으며; 생산이 연속적이고 대량일 수 있으며; 영양 성분의 농도가 풍부하다. 정제된 포자낭과로 약물을 만들 수 있다. 상기를 캡슐, 정제로 제조할 수 있으며, 상기는 식사 약물, 건강 식품, 구강 세정액, 음료 및 이로운 알콜 음료의 주성분일 수 있다. 상기 물질들은 적게 사용되지만, 그 기능은 현저하다.

Description

코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법 및 그의 포자낭과의 용도{Artificial method to culture Cordyceps Kyushuensis Y.Kobayas and the application for its sporocarp}
본 발명은 일종의 미생물균의 인공적인 배양 방법, 특히 중국에서 처음으로 발견된 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시라 명명하는 신규 종의 인공 배양 방법 및 상기 포자낭과의 실제적인 용도에 관한 것이다.
코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시는 흔히 사용되는 진균의 한 종류이다. 야생 코르다이세프스 큐슈엔시스는 이미 전통적으로 신봉되어 온 중국의의약 물질이며 그의 많은 의학적 기능 및 자양 효과로 인해 소비자들에게 점점 더 인기를 끌고 있다. 그러나, 그의 증식을 위해 매우 특별한 환경이 필요하고, 양이 너무 제한적이라는 것과 같은 많은 이유들로 인해, 코르다이세프스의 자원을 구하기가 매우 힘들며 소비자의 욕구를 충족시킬 수가 없다. 현재, 많은 연구자들은 상기 미생물의 인공 배양 방법을 연구하고 자원 부족의 문제를 해결하고자 헌신하고 있다. 일부의 문헌 보고에 따르면, 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 몇몇 인공 배양 방법은 주로 하기와 같다: 특허 제 85107991 호(모충 진균 균사체의 산업적인 생산 방법) 및 특허 제 85102231 호(모충 진균 균주 814의 선별 및 발효 기법)는 균사체를 난해한 배양 및 발효 기법에 따라 순수한 진균 균주에 의해 수득함을 보고한다. 지금까지는, 영양 발생의 과정을 완성시켰으며 인공 배양은 수행할 수 없었다. 특허 제 87106987 호(코르다이세프스 밀리타리스(Cordyceps Militaris)의 인공 배양 방법)는 어느 정도 증식된 균사를 벌레에 넣어 고체 배양 배지를 사용함으로써 상기 벌레를 자연적으로 감염시켜 윤생체를 갖는 코르다이세프스를 공급함을 보고한다. 포자낭과를 형성시킨 후에, 상기 포자낭과와 벌레를 함께 의약품의 제조에 사용한다. 긴 배양 시간동안 포자낭과는 벌레 몸의 단지 1/5 만을 차지한다. 포자낭과로 형질전환되기 때문에 적용 효과가 변한다. 특허 제 90109380.7 호(브라질 모충 진균의 인공 배양 방법)는 시이딩에 의한 벌레와 진균의 결합에 관한 것으로, 상기는 단지 순수한 포자낭과만을 사용하는 것이 아니다. 문헌[Tianjin Pharmacology, Vol. 10(1), 1998]은 마우스의 비장 중량이 명백하게 보다 더 무거워졌으며 모충 진균의 유효 부분은 벌레의 몸이 아니라 분생자병욕임을 보고하고 있다. 특허 제 88103453 호(히르수텔라 시넨시스(Hirsutella sinensis) 포자 및 유성 단계의 완성 기법)는 히르수텔라 시넨시스 포자가 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 영양 포자이며, 진균 종자는 수 개월 후에 포자를 생산할 수 있음을 보고하였다. 이어서, 2 개월 간 10 ℃ 처리하고 18 ℃ 배양한 후에 기생 박쥐 유생을 감염시키는데 영양 포자를 사용하였다. 일부 포자들은 생산 능력을 상실하고 발아 효율이 낮기 때문에 시이딩(seeding) 후의 기생 효율이 낮다. 포자낭과 형성의 어려움으로 인해 이 방법이 널리 사용된다.
이 방법의 발명자는 특허 제 93105056.1 호(북부 모충 진균의 순수한 진균 균주의 선별), 제 941100618 호(코르다이세프스 밀리타리스의 순수한 진균 균주의 선별 및 고 생산성 배양 방법) 및 제 9710585310 호(코르다이세프스 밀리타리스의 고 생산성을 위한 배양 방법) 등의 특허 문헌에서 모충 진균에 대한 인공 배양 방법을 보고한 적이 있다. 이 방법에서는 마우스가 고체 배양 배지의 주 성분이다. 상기 마우스는 모충 진균의 배양에 성공적이었다. 그러나, 토대 물질이 단순하고, 신체의 자양 조건으로부터 벗어나며, 포자낭과의 생육 요건을 충분히 만족시킬 수 없다. 상기 진균 균주의 퇴화 및 약리 활성의 강하는 결국 드러날 것이다. 상기 모든 것은 타당한 자양 성분의 농도를 낮출것이다. 따라서, 상기 개시된 바와 같은 인공적인 방법들은 진균 균주의 안정성을 때때로 보장할 수 없으며, 계속적인 코르다이세프스 포자낭과의 배양 곤란성을 증가시킨다. 또한, 중국의 새로 보고된 진균 균주인 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시라칭해진 진균 시스템(Vol. 19(2)296, 2000)은 클라니스 빌리네아타 워커의 유생에서 기생적으로 살아간다. 그의 외적인 형상 및 특징들은 하기와 같이 기술된다: 포자낭과는 유생의 몸으로부터 백색 뿌리형태로 증식한다. 분생자병욕은 오렌지-황색이며, 길이가 1.7 내지 8.6 ㎝이고, 직경은 0.2 내지 0.6 ㎝이며, 자낭각은 반-내부적으로 달걀 형상이고, 367 내지 495 x 260 내지 316 ㎛이며; 분생자병욕은 기둥 형상이고, 직경은 3.5 내지 4.8 ㎛이다. 두 번째 포자는 짧은 기둥 형상으로, 3.9 내지 5.4 x 1.0 내지 1.2 ㎛이다. 그러나, 현재 본국 또는 해외의 문헌에 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법에 대한 보고는 없다.
본 발명은 기존의 문제점들, 예를 들어 인공적인 방식으로 배양할 수 없고; 배양 주기가 길며; 진균 균주의 퇴화 현상을 극복하는 것으로, 중국의 새로운 진균 균주인 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 배양 방법 및 그 포자의 용도를 제공하는 데 그 목적이 있다.
도 1은 야생 균주의 형태학적 모습을 나타낸 것이다.
도 2는 나방의 유생으로부터 제조된 배양 배지에서 배양된 균주의 형태학적 모습을 나타낸 것이다.
도 3은 혼합 배양 배지에서 배양된 균주의 형태학적 모습을 나타낸 것이다.
본 발명의 방법은 기존의 문제점들, 예를 들어 인공적인 방식으로 배양할 수 없고; 배양 주기가 길며; 진균 균주의 퇴화 현상을 극복한다. 이 방법은 많은 이점들이 존재한다, 즉 안정한 균주; 짧은 생산 주기; 및 연속적이고 대규모의 생산성; 상대적으로 높은 농도의 유효 성분을 갖는다. 의약 물질로서 정제된 포자낭과를 채택하는 것은 약제에 대해 명백하게 효과적인 몇 가지 물질을 갖게 한다.
본 발명의 목적은 하기와 같이 실현된다: 첫째로, 야생형의 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 단일포자 또는 콜로니를 정제하고; 둘째로, 상기 균주를 정제 후에 액체 종자로 만들고; 이어서 상기 종자를 표면 살균 처리된 클라니스 빌리네아타 워커 유생으로 주로 이루어진 배양 배지에 가하고; 마지막으로, 포자낭과가 형성될 때까지 편안한 배양 조건 하에서 자연적으로 감염시킨다.
상기 방법의 배양 배지는 무균 조건으로 공급되는 살아있는 클라니스 빌리네아타 워커 유생으로 구성되기 때문에, 상기 유생은 몸체가 크며, 충분한 자양물을 갖고 그의 몸에 다른 진균을 갖는다. 상기 진균을 정제 및 선별하는 동안, 본 발명자들은 순수한 유형을 확실히 선별할 수 있었을뿐만 아니라 인공 배양 조건 하에서 형성된 포자낭과가 야생형과 동일함을 확신할 수 있었다. 다른 인공 배양 방법들에 비해, 상기 방법은 많은 이점들을 갖는다. 즉, 생산 주기가 짧고; 진균 종들이 안정하며; 감염 효율이 명백히 증가하고; 생존율 및 포자낭과 형성율이 100% 이상이며; 형질전환율은 168.3% 이하이다. 상기 방법은 또한 연속적인 대규모 생산을 위한 우수한 토대를 만들 수 있다. 또한, 상기 방법은 약리학적 활성의 감소를 막을 수 있다. 쉔양 이콜로지 인스티튜트 오브 어플리케이션(ShenYang Ecology Institute of Application), CAS 및 리아오닝 프로빈스 차이니즈 신약 개발 센터(LiaoNing province Chinese new medicine DevelopCenter)에 의해 측정된 결과는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 외적인 형상이 야생형의 형상과 유사함을 나타낸다(표 1).
그러나, 상기 포자낭과의 자양 성분은 야생형의 것과 다르다(표 2).
상기 값들로부터, 유효 자양 성분의 농도가 높은 수준에 도달한다. 의약 물질로서 포자낭과를 사용하고 유익한 생성물을 생산하는 것은 폐에 양분을 제공하는 기능, 신장에 유익한 기능, 대량 출혈을 정지시키는 기능, 담을 용해시키는 기능 및 건강 상태를 개선시키는 기능, 약한 폐 및 신장에 의해 발병된 질병을 치유하는 기능을 강화시킬 수 있을 뿐만 아니라, 하기의 태양으로 사용될 수 있다: 로터스 종양 동물들의 직립(면역 조절 기능의 개선); 나쁜 생각을 몰아냄(종양의 증식을 억제하고 생명을 연장시킴); 독성을 완화시킴(화학적 치유 기능의 감소 및 대량 출혈 세포의 생산). 상기는 종양 세포 증식을 억제하고, 피로를 회복시키며 상기 물질에 대한 신체 면역 기능을 개선시킬 수 있다. 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과의 유효 자양 성분의 비교적 높은 수준 때문에, 약리학적 기능을 감소시키지 않으면서 보다 적은 양의 물질을 사용함으로써 비용을 낮출 수 있다. 바로 이 때문에, 상기 개시된 방법은 과학 기술부에 의해 연구되는 주요 방침 종목이었다. 상기는 또한 새로운 1 등급 의약품으로서 연구될 것이다. 상기 포자낭과를 캡슐 또는 정제로 제작할 수 있으며 식사 약물, 건강 식품, 구강 세정액, 음료 및 이로운 알콜 음료의 주성분일 수 있다. 상기 물질들은 적게 사용되지만, 그 기능은 현저하다.
도 1 및 2로부터 야생 균주와 배양 균주의 형태학적 모습이 유사함을 알 수 있다. 본 발명의 배양 방법은 다른 진균 배양 방법과 다르다. 본 발명 방법의 주요 특징들은 하기와 같다. 첫째로, 수거된 야생 균주의 조직 또는 포자를 분리시킨다. 이어서, 단일 진균 콜로니 또는 단일 포자를 정제하고 이를 배양한다. 셋째로, 현미경 하에서 균사를 관찰한다. 넷째로, 정제되고 코르다이세프스 K.Y.K.의 특징과 일치하는 균주를 사용하여 액체 진균을 제조한다. 이어서, 상기를 무균 조건 하에서 키운 나방의 살아있는 유생으로부터 제조된 배양 배지 또는 상기 언급한 방법으로부터 수득된 유생의 냉동 분말과 기장의 혼합물인 배양 배지에 접종한다. 이를 배양 배지가 균사로 가득할 때까지 자연적으로 감염시킨다. 적합한 조건 하에서 야생 균주와 동일한 포자낭과로 증식시킬 수 있다.
상기 언급한 방법들 중에서, 무균 조건 하에서 3 내지 5 단위(7 일이 1 단위임)로 키운 나방의 살아있는 유생을 액체 진균에 접종한다. 혼합 배양 배지의 조성은 살아있는 유생의 냉동 분말 3 내지 5%와 벼, 옥수수 분말 등과 같은 곡식 97 내지 95%이다. 1000 단위당 1 내지 1.5 단위의 포자낭과의 정제 분말, 2 내지 2.5 단위의 KH2PO4, 1 내지 1.5 단위의 K2HPO4, 1 내지 1.5 단위의 MgSO4및 물을 포함하는 영양 수는 상기 언급된 전체 물질의 1.4 배이다. 액체 진균은 정제된 균주가 접종된 액체 배양 배지(100 단위 당 살아있는 유생의 냉동 분말 3 내지 5 단위, 감자 10 내지 15 단위, 당 1 내지 2 단위, VB10.001 내지 0.002 단위 및 물 포함)로부터 발생한다.
상기 균주의 포자낭과에 대한 체계적인 연구를 수행한다. 결과는 하기와 같다: 의학적 유효성에 대한 연구는 하기의 것들을 지적한다. 배양된 균주 포자낭과를 300 ㎎/㎏, 600 ㎎/㎏의 투여량으로 위에 붓는다. 10 일 후에, 비장지수, 탄소 개략 지수, 연하 지수, 혈청의 용혈소 또는 비장 세포에 의해 도입된 SRBC 용혈소, Mcp 연하 지수 및 종양이 있는 S180마우스의 다른 면역 기준이 명백하게 증가되었으며, 종양 P<0.05 또는 0.01과 대조를 이루었다.
배양된 균주 포자낭과를 300 ㎎/㎏, 600 ㎎/㎏의 투여량으로 위에 붓는다. 10 일 후에, 종양이 있는 S180마우스의 TNF-β 및 IL-2가 명백히 증가되며 이는 버섯 폴리사카라이드와 배합된 중국의 대조 의약품에 비해 우수하다.
배양된 균주 포자낭과를 300 ㎎/㎏, 600 ㎎/㎏의 투여량으로 위에 붓는다. 10 일 후에, 종양 성장의 억제율은 각각 20.83% 및 30.72%이었으며; S180BALB/O 마우스에 관한 한, 장수율은 각각 193% 및 185%이었다. 이러한 기능은 사이클로포스파미드의 기능과 유사하다.
배양된 균주 포자낭과를 300 ㎎/㎏, 600 ㎎/㎏의 투여량으로 위에 붓는다. 10 일 후에, 상기는 사이클로포스파미드로부터 발생한 백혈구의 감소를 방지할 수 있다. 이는 대조군(P<0.05)과 대조를 이룬다.
또한, 배양된 균주의 포자낭과는 정상적인 마우스의 가슴선 및 비장과 같은 기관의 면역성을 증가시킬 뿐만 아니라, 가슴선의 중량, 흉선 의존성 림프구의 에스테라제 착색 속도, 및 근육내 적혈구의 연하 지수를 향상시킨다. 상기는 또한 저산소증의 시기를 연장시키고 냉수에서의 수영 시간을 연장시킨다.
임상적인 연구의 예비 결과:
상기 의약품을 1.2 g/일의 투여량으로 28일간 경구 투여한다. 이러는 동안 1 주기의 화학요법을 2 주 째부터 수행한다. 결과는 소화관의 부작용, 백혈구의 강하 및 NK 세포의 활동 상승이 스타필로콕신의 대조군보다 명백히 월등하다.
약리학적 연구는 배양 균주의 포자낭과가 마우스의 종양 성장을 억제하고 종양이 있는 동물의 생존 기간을 연장시킬 뿐만 아니라, 종양이 있는 동물의 면역 조절에 대해서도 뚜렷한 효과를 가짐을 나타낸다. 특히, TNF-β 및 IL-2의 면역 조절은 임상적인 실시에 널리 사용되는 식물 폴리사카라이드 조절에 비해 월등하다. 상기 의약품은 종양의 억제와 면역 조절의 증진을 모두 나타냄이 입증되었다.
화학적 연구는 배양 균주의 포자낭과가 동일한 종류의 진균 및 인공 산물을 초과하는 함량의 뉴클레오사이드 화합물이 풍부함을 지적한다. 벌레 균주의 10 배 함량으로 존재하는 상기 균주의 활성 성분들은 종양에 대한 명백한 억제 기능을 가지며 사이클로포스파미드와 협력한다. 배양 균주의 포자낭과는 현재 임상적인 실시에 투입되는 임상 제제 및 다른 배양된 진균 제품들, 예를 들어 소량(1.35 g/d)으로 국제 시장에 의해 쉽게 통제되고 승인되는 것들보다 더 유리하다.
예비적인 독물학적 연구는 배양 균주의 포자낭과가 거의 독성이 없으며 보다 안전함을 보인다.
급성 독성 시험은 마우스에서의 상기 포자낭과의 최대 허용 용량이 10 g/㎏으로, 이는 성인 1 일 복용량의 444 배에 해당함을 지적한다.
장기 독성 시험은 배양 균주의 포자낭과를 16 주 동안 1.2 g/㎏.d 및 0.6 g/㎏.d(임상적인 용량의 53.3 배 및 26.7 배에 해당한다)의 투여량으로 래트의 위장에 투여한다. 생화학적 시험 및 병리학적 시험, 예를 들어 신체 형태, 행동, 발병, 혈액 검사, 간 기능 및 신장 기능이 비정상적인 현상 없이 수행되며, 이는 상기 생성물의 장기적인 안전성을 나타낸다.
요컨대, 배양 균주의 포자낭과 및 그의 제제는 많은 특징들, 예를 들어 풍부한 자원, 명확한 기능, 명백한 활성 물질 및 적은 독성을 가지며, 이는 중국에서 현재 사용되는 요구 등에 부합되는 것이다. 따라서, 상기는 종양에 대한 유망한 보충 의약품이다. 상기 의약품의 성공적인 개발은 중국이 이 분야에서 계속해서 우위를 차지하게 할 뿐만 아니라, 상당한 사회적 및 경제적 이점들을 생성시킨다.
본 발명의 구체적인 실시예 및 용도는 하기와 같다:
실시예 1.
수거된 야생 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과를 표면 살균하고, 외피를 벗기고, 속을 드러내어 소독된 나이프로 0.2 내지 0.3 ㎝의 조직으로 절단하고, 이를 멸균 배지가 있는 배양 접시에 놓는다. 이를 적합한 온도하에서 7 일간 배양한 후에, 질긴 균사를 집어내고 이를 시험관의 경사면 위에 놓는다. 이어서 상기를 다시 7 내지 10 일간 배양하고, 대충 선택하여 균사 생육 조건에 의거한 배양 접시에 접종한다. 커버 글래스를 접종 플롯 내내 삽입한다. 균사 성장에 이어 약 5 일 후에, 상기 커버 글래스 상의 균사의 양상을 현미경으로 관찰한다. 상기 균주의 특징과 일치하는 균사를 유체 진균 종자로 하여 클라니스 빌리네아타 워커의 유생에 접종한다. 야생형의 포자낭과와 동일하게 생육할 수 있는 것이 순수한 진균 종자이다. 유체 진균 종자를 클라니스 빌리네아타 유생의 냉동 분말 3 내지 5 부, 감자 10 내지 15 부, 당 1 내지 2 부, VB1 0.001 내지 0.002 부 및 나머지 물을 포함하는 100 ㎖에 순수한 진균 10 ㎎으로 넣는다.
실시예 2.
1 ㎖의 순수한 진균 종자를 이미 표면 살균한 클라니스 빌리네아타 워커의 3 년 된 유생에게 접종한다. 상기를 약 30 일간 자발적으로 감염시킨다. 엽상체가 균사로 가득하면, 이를 그의 생활 환경이면서 살균시킨 토양으로 2 ㎝까지 덮는다. 약 20 일 후에, 유생은 오렌지-적색 내지 오렌지-황색의 색을 갖는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과를 생육시킬 수 있다.
실시예 3.
1.6 ㎖의 순수한 진균 종자를 이미 표면 살균한 클라니스 빌리네아타 워커의 4 년 된 유생에게 접종한다. 상기를 약 35 일간 자발적으로 감염시킨다. 엽상체가 균사로 가득하면, 이를 그의 생활 환경이면서 살균시킨 토양으로 2.5 ㎝까지 덮는다. 약 20 일 후에, 유생은 오렌지-적색 내지 오렌지-황색의 색을 갖는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과를 생육시킬 수 있다.
실시예 4.
2 ㎖의 순수한 진균 종자를 이미 표면 살균한 클라니스 빌리네아타 워커의 5 년 된 유생에게 접종한다. 상기를 약 30 일간 자발적으로 감염시킨다. 엽상체가 균사로 가득하면, 이를 그의 생활 환경이면서 살균시킨 토양으로 3 ㎝까지 덮는다. 약 40 일 후에, 유생은 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과를 생육시킬 수 있다.
실시예 5.
클라니스 빌리네아타 워커 유생의 냉동 분말 3 ㎏, 율무 10 ㎏, 분쇄 옥수수 12 ㎏, 쌀 75 ㎏을 고르게 혼합하고 캔(또는 플라스틱 병, 주머니)에 넣는다. 모든 병은 혼합 배지를 만들기 위해서 영양 수 42 ㎖ 및 혼합물 30 g을 포함한다. 살균 후에, 상기를 유체 진균 종자 2 ㎖로 접종하고 적합한 온도 하에서 약 20 일간 배양한다. 배지의 표면 상에 아래로 늘어진 균사가 가득하면, 산란 광(약 2500 Lux)을 가하고 통기시킨다(병 테두리의 필름을 바늘로 찌른다). 매일 3 내지 4 회, 매번 20 내지 30 분씩 창문을 엇갈리게 하고 문을 개방한다. 내부 습도는 85 내지 90%이다. 25 내지 30 일 후에 포자낭과를 얻을 수 있다.
실시예 6.
클라니스 빌리네아타 워커 유생의 냉동 분말 4 ㎏, 율무 9 ㎏, 분쇄 옥수수 11 ㎏, 쌀 76 ㎏을 고르게 혼합하고 병 또는 주머니에 넣는다. 모든 병은 영양수 56 ㎖ 및 혼합물 40 g을 포함한다. 살균 후에, 상기를 유체 진균 종자 3 ㎖로 접종하고 빛 없이 적합한 온도 하에서 약 23 일간 배양한다. 배지의 표면 상에 아래로 늘어진 균사가 가득하면, 산란 광을 가한다. 그 다음은 실시예 5와 동일하게 수행한다.
실시예 7.
클라니스 빌리네아타 워커 유생의 분말 5 ㎏, 율무 8 ㎏, 분쇄 옥수수 10 ㎏, 쌀 77 ㎏을 고르게 혼합하고 병 또는 주머니에 넣는다. 모든 병은 영양 수 70 ㎖ 및 혼합물 50 g을 포함한다. 살균 후에, 상기를 유체 진균 종자 4 ㎖로 접종하고 적합한 온도 하에서 약 25 일간 배양한다. 배지의 표면 상에 아래로 늘어진 균사가 가득하면, 산란 광을 가한다. 그 다음은 실시예 5에 따라 수행한다.
실시예 8.
코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과를 건조시키고 60 ℃하에서 분쇄하고, 6 번 메쉬로 반죽하고, 약 80% EtOH에 넣어 그레인을 얻는다. 60 ℃ 건조시키고, 그레인으로 만들고, Co60 살균하면서 캡슐에 넣어 포장 시, 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 캡슐이 생성된다. 그의 주요 조성은 표 4를 참조하시오.
실시예 9.
코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시 포자낭과의 순수 분말 300 g, 만니톨 분말 256.85 g, 스테아레이트(Mg) 2 g을 기계에서 고르게 혼합한다. 멘톨0.15 g을 적합한 연질 물질을 제조하기 위해서 의약 분말과 혼합되는 접착제로서 EtOH에 용해시킨다. 상기를 기계에서 적합한 그레인 형상으로 만들 수 있다. 50 ℃ 하에서 건조시키고, 6 시간 후에 그레인으로 만들고, 스칼라 양이 560 ㎎인 베개 형상의 정제로 압착시킨다. 표준물 까지 검사하고, 알루미늄 주형 포장기로 포장하고, Co60 소독한 후에 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 정제를 수득한다. 상기의 주요 조성은 표 5를 참조하시오.
코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 캡슐을 말기의 암 환자 30 명에게 사용한다. 처리 그룹에게 매일 1.2 g의 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시 캡슐을 3 회로 나누어 제공한다. 대조군에게는 2 일 마다 4 ㎎의 스타필로콕신을 한 달간 근육내 주입한다. 백혈구의 양이 40% 감소하며, 이는 대조군의 84%(P<0.005)에 비해 뚜렷하다. NK 세포의 활성이 향상된다. 처리 그룹은 대조군의 53%(P<0.025)에 비해 뚜렷하게 83% 향상된다. 소화관의 부작용은 대조군에 비해 뚜렷하며, 각각 33.3% 및 78.9%(P<0.005)이다.
코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 정제를 차이니즈 아카데미 오브 프리벤션 메디칼 사이언스 앤드 푸드 새니테이션 리써치 인스티튜트(Chinese Academy of Prevention Medical Sciences and Food Sanitation Research Institute)에 의해 검사하였다. 상기는 면역 및 혈청 지질 기능을 조절할 수 있다. 상기는 또한 피로억제 기능을 갖는다. 상기는 면역 기능이 열등하고 혈청 지질이 보다 높은 환자에 의해 사용된다. 상기는 또한 정신 및 육체적인 작업에 종사하는 대중에게 적용될 수 있으며, 운동 후 육체를 회복시킬 수 있다.매일 4 내지 6 개의 정제를 경구 복용하거나 삼킨다.
본 발명의 방법은 기존의 문제점들, 예를 들어 인공적인 방식으로 배양할 수 없고; 배양 주기가 길며; 진균 균주의 퇴화 현상을 극복한다. 이 방법은 많은이점들이 존재한다, 즉 안정한 균주; 짧은 생산 주기; 및 연속적이고 대규모의 생산성; 상대적으로 높은 농도의 유효 성분을 갖는다.

Claims (7)

  1. 재생성 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시(Cordyceps kyushuensis Y.kobayasi)의 단일 포자 또는 단일 콜로니를 정제하고, 이어서 상기 정제된 세균 균주를 유체 세균 종으로 만들고, 이를 무균 조건 하에서 배양되고 표면 살균된 클라니스 빌리네아타 워커(Clanis Bilineata Walker)의 살아있는 유생이 주 성분인 배양 배지에 접종하고, 적합한 조건 하에서 상기 세균 균주를 자연적으로 감염시키며, 이를 상기 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과가 생산될 때까지 계속해서 배양함을 특징으로 하는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 클라니스 빌리네아타 워커의 살아있는 유생이 무균 조건 하에서 배양된 3 내지 5 년된 유생이고 표면 살균되고 유체 세균 종으로 접종되며, 이를 균사체 전체가 2 내지 3 ㎝의 무균적인 생존 환경 토양 위에 균사체가 가득할 때 까지 20 내지 40 ℃에서 30 내지 40 일간 자연적으로 감염시키고, 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과가 생산될 때까지 계속해서 배양함을 특징으로 하는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 배양 배지가 혼합 배양 배지이고, 각 성분의 중량 비가 상기 혼합 배양 배지 100 부 당 클라니스 빌리네아타 워커의 무균적인 살아있는 유생의 냉동 건조 분말 3 내지 5 부, 그레인 97 내지 95 부이고, 배양 유체가 상기 물질의 1.4 배 정도로 많으며, 상기 유체 세균 종을 멸균 혼합 배양 배지에 접종시키고, 적합한 조건 하에서 배양 배지의 표면이 균사체로 가득하고 상기 균사체가 상기 표면 아래로 퍼질 때까지 자연스럽게 감염시키고, 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과가 생산될때까지 햇빛과 바람을 제공함을 특징으로 하는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 정제된 세균 균주를 유체 배양 배지에 접종시킴으로써 유체 세균 종을 얻고, 상기 배지 100 부 당 클라니스 빌리네에타 워커의 무균적인 살아있는 유생의 냉동 건조 분말이 3 내지 5 부이고, 토마토가 10 내지 15 부이고, 당이 1 내지 2 부이고, 비타민 B가 0.001 내지 0.002 부이고 나머지가 물임을 특징으로 하는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 영양 유체 1000 부 당 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과의 정제 분말이 1 내지 1.5 부이고, 비쿠안이 2 내지 2.5 부이고, 당이 10 내지 15 부이고, KH2PO4가 2 내지 2.5 부이고, K2HPO4가 1 내지 1.5 부이고, MgSO4가 1 내지 1.5 부이고, 나머지가 물임을 특징으로 하는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법.
  6. 제 1 항에 있어서, 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과를 건조시키고, 이를 100 포어의 분말로 분쇄시키고, 알콜을 사용하여 과립으로 만들어 건조시켜 규격의 과립으로 만들고, C060을 사용하여 멸균시키면서 60 ℃ 하에서 캡슐에 넣어 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 캡슐을 제조함을 특징으로 하는 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 인공 배양 방법.
  7. 주 성분이 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과이고, 추가적인 성분이 만니톨, 스테아레이트 Mg, 사카린 Na, 멘톨이며, 정제를 제조하기 위해서 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 포자낭과 300 부, 만니톨 256.85 부, 사카린 Na 1 부, 멘톨 0.15 부, 스테아레이트 Mg 2 부를 알콜을 사용하여 과립으로 만들고, 건조시키고, 정제로 제조함을 특징으로 하는, 제 1 항의 방법에 따른 코르다이세프스 큐슈엔시스 와이 코바야시의 용도.
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