KR20010022237A - 리소스타핀을 단독 또는 항생제와의 조합으로 포함하는포도상구균 감염 치료용 약제학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

리소스타핀은 인간을 포함하는 포유류에 비경구 투여하기 적합한 효과적인 항-포도상 구균으로 증명된다. 0.5 - 45 mg/kg/일의 저용량으로 대부분의 포도상구균 감염을 충분히 치료할 수 있다. 리소스타핀은 또한, 페니실린 및 반코마이신과 같은 통상적인 항생제에 내성을 갖게 된 세균 형태에 대하여 효과적이다. 변형체 및 관련 효소와 같은 리소스타핀 유사체도 유사한 활성을 보인다.

Description

리소스타핀을 단독 또는 항생제와의 조합으로 포함하는 포도상구균 감염 치료용 약제학적 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING LYSOSTAPHIN ALONE OR IN COMBINATION WITH AN ANTIBIOTIC FOR THE TREATMENT OF STAPHYLOCOCCAL INFECTIONS}
리소스타핀은 Staphyloccus simulans(이전에는 S. staphylolyticus로 알려짐)에서 동정된 효소로서, 세균의 세포벽 펩티도글리칸 중의 글리신-함유 브릿지에 대한 단백분해 활성에 기인한 항미생물 활성을 가진다[Zygmunt 등, Progr. Drug Res. 16:309-333(1972)].
In vitro에서, 리소스타핀은 포도상구균속의 여타 다른 종에 대한 활성은 입증되지 않았으나, 세포벽 브릿지에서 글리신의 비율이 높기 때문에 Staphylococcus aureus에 대해서는 특히 활성이 있다(Ibid).
리소스타핀의 활성은 또한 동물 감염 모델에서 실험되었다. 복강내 감염 후 복강내 치료내 감염에 대한 연구들은 in vitro 실험과 유사하여, 본 명세서에서는 고려하지 않는다. 마우스를 복강내 감염시킨후 총량 약 1mg/kg의 리소스타핀 제제를 단독 또는 반복 피하투여한 경우, 치료한 마우스의 50%가 생존한다는 두개의 보고가 있었다[Schuhardt 등, J. Bacteriol. 88:815-816(1964); Harrison 등, Can. J. Microbiol. 13:93-97(1967)]. 이러한 연구 중 하나에서는 총투여량이 6mg/kg이면 100%의 마우스가 보호된다고 보고하였다[Harrison 등, Ibid]. 치료되지 않은 감염 마우스가 단기간 내에 모두 치사하지는 않았기 때문에, 두가지 연구 모두에서 사용된 세균 감염의 독력은 매우 낮은 것으로 보인다.
몇가지 실험에서 지오르지오(Giorgio)종 S. aureus로 감염시킨 후, 신장의 세균 로드를 측정하는 마우스 아급성 모델을 사용하였다[Dixon 등, Yale J. Biol. Med. 41:62-68(1968); Schaffner 등, Yale J. Biol. Med. 39:230-244(1967); Harrison 등, J. Bacteriol. 93:520-524(1967)]. 감염 후, 6시간 내에 리소스타핀 제제를 정맥투여한 경우, 투여량이 1.5mg/kg 이상인 경우 신장에서의 세균수가 상당히 감소되는 것으로 관찰되었다. 그러나, 감염이 확정된 경우에는 치료가 더 어려웠다; 24시간 이상 치료를 보류하는 경우, 리소스타핀 제제의 투여량이 125 또는 250mg/kg이어도 적은 수의 세균 감소만 관찰되었다. 반복 치료의 효과는 연구되지 않았다.
한 연구[Goldberg 등, Antimicrob. Ag. Chemother. 1967:45-53(1967)]에서 비정상적인 심내막염 모델로 제한된 수의 개를 사용하였다. 개 모델은 더 이상 개발되지 않았다. Goldberg 등의 실험은 상대적이지 않으므로, 리소스타핀의 투여량의 산정에 사용하는 것이 제한된다. 그러나, 리소스타핀의 투여량이 높은 경우에도(50mg/kg/치료 이상), 개의 건강 및 심장판막 및 신장에서의 세균수의 감소정도로 판단할때, 효능은 적당한 수준이었다.
따라서, 동물 모델을 사용한 본 기술분야의 종래 연구로부터 얻은 데이타로는 확정된 감염을 여러 기관으로부터 제거하려는 효과적이고 실제적인 접근인 리소스타핀의 용도를 교시하지는 않는다.
외비공으로 리소스타핀을 국소적용하여, S. aureus의 코 캐리지(nasal carriage)를 전멸시키려는 목적으로, 사람에 대하여 제한된 시험이 실시되었다[Martin 등, J. Lab. Clin. Med. 70:1-8(1967); Martin 등, J. Lab. Clin. Med. 71:791-797(1968); Quickel 등, Appl. Microbiol. 22:446-450(1971)]. 코 캐리지는 자체로는 질환상태가 아니나, 콜론화된(colonized) 건강관리 전문인에 의한 환자 감염이나, 콜론화된 환자의 자가감염에 대한 위험요소가 된다.
본 기술분야에서, 위독한 사람 환자에게 비경구적으로 리소스타핀을 단일 투여하여 치료한 다음, 3일 후에 항생제, 젠타마이신으로 치료한 것이 보고되었다. 환자는 사망하였으나, 균혈증의 감소가 나타났다[Stark 등, N. Engl. J. Md. 291:239-240(1974)].
동물 및 사람 연구 과정 동안에 발견된 면역원성 현상은 대단한 관심을 불러일으켰다. 외생물질에 의한 리소스타핀 제제의 오염이 이러한 현상에 상당히 기여한다.
전술한 연구들에서는 목적하는 효과를 얻을 수 없어, 치료제로서의 상기 효소에 대한 더이상의 개발은 진행되지 않았다. 이는 또한 리소스타핀을 생산 및 정제하기 어렵기 때문이었다.
리소스타핀에 대한 포도상구균 유전자는 현재 서열화되고, 클로닝된다[미국 특허 제4,931,390호]. 리소스타핀을 쉽게 정제해 낼 수 있는, Bacillus sphaericus의 비-병원성 재조합 종을 발효하여, 실험실 시약으로서 사용하기 위한 리소스타핀이 생산되고 있다.
본 기술분야의 당업자에게는 비경구적으로 투여할 수 있고, 포도상구균 감염의 치료에 일반적으로 사용할 수 있을 뿐아니라, 심내막염과 같은 특정 조직의 감염에 사용할 수 있는 치료제를 개발하는 과제가 남아있다.
본 발명은 사람을 포함하는 포유류에 있어서, 포도상구균(staphylococcus) 감염의 치료를 목적으로 리소스타핀을 투여하는 데에 관한 것이고, 또한, 이러한 치료에 사용되는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 포도상구균성 심내막염; 포도상구균성 균혈증; 및 신장, 폐, 피부, 뼈, 화상, 창상 및 인공삽입물의 포도상구균 감염을 포함하는, 특정한 질환의 상태를 어드레스하는 방법에 관한 것이다. 넓게는, 본 발명은 야생형 리소스타핀뿐아니라 재조합 리소스타핀; 유전적 돌연변이(치환, 첨가 또는 결실 등), 번역후 처리(post-translational processing), 키메라 융합 단백질의 유전공학처리 등에 의하여, 공개된 성숙한 펩티드의 '자연 서열'(미국 특허 제4,931,390호)로부터 변형된 아미노산 서열을 가지는 리소스타핀 변형체 또는 이러한 종류의 변형체의 조합물을 포함하는 리소스타핀의 용도를 포용한다.
도 1은 메티실린-내성 S. aureus 종에 대한 리소스타핀의 살균 활성을 반코마이신과 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 상이한 항미생물제 내성을 가지는 다양한 S. aureus 종들에 대한 리소스타핀의 살균 활성을 반영한 그래프이다.
용어 정의
본 명세서에 사용된 용어들은, 가능하면 정상적이고, 전형적인 의미로 사용된다. 특정 용어들은 한 부류의 작용 또는 화합물을 설명하기 위하여, 또는 논리적으로 함께 그룹핑되는 대상 또는 과학적 현상의 총칭적인 설명을 제공하기 위하여 사용된다.
리소스타핀 유사물 - 리소스타핀(야생형)을 포함하는 모든 효소, 리소스타핀 돌연변이체 또는 변형체, 모든 재조합체 또는 in vitro 및 in vivo에서, 포도상구균속의 세포벽 펩티도글리칸의 글리신-함유 브릿지에 대해 단백분해적 공격을 하는 단백분해능을 가지는 관련 효소. 변형체는 단백질의 번역후 처리에 의해 생성될 수 있으며(생산자 종에 존재하는 효소에 의해서 또는 처리의 어떤 단계에서 도입된 효소 또는 용제에 의해서), 또는 구조 유전자의 돌연변이에 의해서 생성될 수 있다. 돌연변이는 부위-결실, 삽입, 도메인 제거 또는 치환 돌연변이를 포함한다. 본 발명에서 의도하는 리소스타핀 유사물은 재조합적 방법으로 발현되거나, 그렇지 않을 수 있다.
비경구 - 정맥주사, 근육주사, 피하주사, 안와내 주사, 척수내 주사, 복강내 주사를 포함한 주사, 및 주사를 통한 기관 또는 조직으로의 직접적인 관류 또는 송달에 의한 투여.
발명의 상세한 설명
Staphylococcus aureus는 독력이 큰, 사람 병원체로, 국소 피부 감염에서부터 치명적인 균혈증 및 생체 기관의 감염에 이르는 다양한 사람 질환의 원인이 된다. S. aureus 감염은 신속히 처치하지 않으면, 처음의 감염부위로부터 다른 기관으로 신속히 퍼지게 된다. 감염병소는 분명하지 않지만, 감염에 특히 민감한 기관으로는 심장 판막, 신장, 폐, 뼈, 뇌척수막 및 화상환자의 피부가 포함된다. 외과적 또는 외상성 상처, 및 타인의 신체와 접촉하는 부위가 또한 종종 감염된다. 공동생활 또는 입원 중에 생길 수 있는 이러한 감염은, 가장 유용한 치료법을 사용한 경우에도, 어떤 인구집단에서는 중증 감염중 60% 정도로 높은 중대한 이환율 및 사망률의 원인이 된다. 포도상구균속의 다른 종들(S. epidermidis와 같은 코아굴라아제-음성 포도상구균속)은 독력이 더 작으나, 카테터 또는 인공삽입장치에 전이증식될 수 있다; 예를 들어, 이러한 장치가 심장판막에 이식되는 경우, 엄청난 결과를 초래할 수 있다.
S. areus에서 페니실린 내성을 필두로, 포도상구균속에서는 특히 유용한 항미생물제에 대한 내성이 나타나기 쉬운 것으로 보인다; 이러한 내성은 초창기 항생제 시대 직후에 나타났다. 실질적으로 페니실리나아제의 생성으로 인해, 공동생활 체 또는 병원에서 발생할 수 있는 모든 포도상구균 감염이 더이상 1세대 페니실린에 민감하지 않다; 현재 특히 병원내 감염에 있어서, 페니실리나아제-안정성 페니실린(메티실린 등)에 내성을 가진 종들이 또한 심각한 문제가 되고 있다[Centers for Disease Control and Prevention, 1997. Reduced susceptibility of Staphylococcus aureus to vancomycin -- Japan, 1996. Morbidity and Mortality weekly Report 46:624-626(1997)].
반코마이신은 특히 병원에서 포도상구균 감염에 대한 일차적인 치료에 사용된다. 그러나, 높은 사망률로부터 명백하듯이, 주로 혈류를 통해 감염이 전파되는 심장 및 다른 기관의 비가역적 손상을 방지하기 위하여 세균수의 신속한 감소가 요구되는, S.areus 심내막염 및 균혈증과 같은 특정질환에 대해 이상적으로 유용한 치료제는 현재 없다. 현재 유용한 치료제들이 실패하는 이유 중 하나는, 환자의 완전하고 신속한 회복을 위해, 감염부위의 신속한 멸균이 요구되는 경우, 특히, in vivo에서, 상대적으로 천천히 작용하기 때문이다. 치명적인 상황 및 다른 몇가지 감염(예를 들어, 골수염과 같이 치료 섭생이 매우 길고 지루한 치료)에 있어서, 신규한 치료법 또는 치료법의 새로운 조합은 환자의 치료결과를 크게 향상시킬 것이다.
적당한 투여량의 리소스타핀이 매우 활성이 큰 것을 알아내었다. 이것은 매우 심각한 잘-특징지워진 동물 감염 모델에서, 메티실린-내성 S. areus(MRSA)에 기인한 토끼의 심내막염에 의하여 하기에 입증한다. 특히, 투여섭생(regimen) 중 하나로 치료된 거의 모든 동물에 있어서, 심장판막 증식이 완전히 멸균되는, 현재 유용한 항미생물제로는 관찰할 수 없는 전례가 없는 결과를 입증한다. 또한, 본 명세서에서는 적은 1일 투여량의 리소스타핀과 표준 치료제와의 조합이 이러한 모델 시스템에서 성분들의 항미생물 활성을 강화시킨다(potentiate)는 것을 입증한다.
본 발명자들이 사용한 리소스타핀 투여량은, 동물 모델의 기관에서 세균을 제거하는 데만 제한된 효과를 나타내는 기존의 것들 보다 상당히 적다[Zygmunt 등, Progr. Drug. Res. 16:309-333(1972); Goldberg 등, Antimicrob. Ag. Chemother. 1967:45-53(1967)].
본 발명자들은 또한 in vitro 및 마우스 급성 감염모델에 있어서, 리소스타핀 유전자를 지닌 Bacillus sphaericus의 재조합 종을 돌연변이유발하여 생성된 변형 리소스타핀의 포도상구균에 대한 활성을 하기에 입증한다. 그러므로, 본 발명의 또 다른 실제적 면은 리소스타핀 유사물, 즉, 하나 내지 다섯개의 아미노산 치환체를 포함하는 효소; N-말단에서의 결실 또는 삽입을 포함하여, 10개 이하의 아미노산이 결실 또는 삽입된 효소; 또는 상이한 효소의 촉매 도메인과 결합 도메인의 융합으로 얻어진 키메라 효소 등 유전학적으로 변형된 효소를 포함하는, 리소스타핀 또는 펩티도글리칸 엔도펩티다아제 활성을 가지는 다른 효소의 약제학적 조성물을 사람 또는 동물의 감염 치료에 치료제로서 투여하는 것이다.
예를 들어, 또다른 글리실글리신 엔도펩티다아제(ALE-1, Staphylococcus capitis EPK1)를 설명한다. 두가지 효소는 상당한 아미노산 상동성을 가짐에도, ALE-1은 리소스타핀과 구분된다[Sugai 등, J. Bacteriol. 179:1193-1202(1997)]. 리소스타핀과는 상동성이 낮으나, 역시 엔도펩티다아제 활성을 가지는 또다른 펩티도글리칸 가수분해제로서, Streptococcus zooepidemicus 4881에 의해 생성되는 주신 A(zoocin A)가 있다[Simmonds 등, Applied and Environmental Microbiology 62:4536-4541(1996); Simmonds 등, Gene 189:255-261(1997)]. 이러한 효소 또는 이와 유사한 효소의 도메인을 리소스타핀 유사물의 도메인에 융합시켜 키메라 단백질을 융합하여 생성할 수 있다.
특정 많은 이전의 연구에서 관찰된 어떤 면역학적 부작용이 몇몇 상황(응급 또는 단기간 상황 등)에서 염려되나, 무해한 재조합 세균 종을 발효시켜 얻는 리소스타핀 유사물의 적당히 순수한 제제는 면역원성 또는 다른 부작용을 유발하는 경향이 더 적을 것으로 기대된다.
이러한 항미생물 효소의 효과적인 약제학적 조성물은 활성성분의 비경구적 송달에 적합한 수용액 또는 액체와의 재구성용 건조 조성물(예를 들어, 동결건조된, 결정질 또는 비결정질의, 삼투압 균형을 위해 용질이 첨가되거나 되지 않은 것)을 포함한다. 활성 성분의 최소 억제 농도(MIC)를 초과하는 혈액 및 조직 레벨이 달성되어, 감염을 치료하거나 완화시키기 위한 세균 역가의 감소 효과가 나타나도록, 정맥(i.v.), 근육(i.m.), 피하(s.c.), 또는 복강내 (i.p.) 경로로 또는 초내로 또는 흡입에 의해서 또는 감염부위로 직접 점적주입하여 송달하는 것이 바람직하다.
또한, 감염 질환을 더욱 효과적으로 치료하기 위해서, 활성 리소스타핀 유사물은 다른 항미생물제와 공동으로 동시에 또는 교대로 투여될 수 있다. 조성물은 순간(bolus) i.v. 또는 말초 주사(peripheral injction)에 적합한 소량의 액체 중에, 또는 다량의 i.v. 드립 용액을 첨가하여, 용해되거나, 재구성될 수 있고, 또는 저속 i.v. 주입으로 투여하기 위해서 다량에 용해 또는 재구성될 수 있다. 리소스타핀 또는 다른 항미생물 효소과 공동으로 투여하기 위한 용제는 상기한 효소와 함께 확정된 조합으로 조성되거나, 즉석에서 유용하고 실용적인 조성물로, 감염 부위에 이러한 성분의 적정 레벨을 제공할 수 있다고 알려진 어떤 투여경로로 사용할 수 있다.
리소스타핀의 적합한 투여량 및 섭생은 감염의 경중 및 감염 기관의 민감성에 따라 달라질 수 있고, 복합 치료의 경우, 함께 사용되는 특정 항미생물제(들)에 따라 달라진다. 투여량은 0.5 내지 200 mg/kg/일의 범위이고, 3 내지 25-50mg/kg/일이 바람직하며, 1회에 또는 나누어 투여할 수 있고, 연속 주입 또는 1일 2 내지 4회로 나누어 투여하는 것이 바람직하다.
발명의 요약
상대적으로 낮은 투여량의 리소스타핀(50mg/kg이하)을 비경구 투여하는 것은, 포도상구균 감염, 특히 치료에 내성이 있거나, 및/또는 전형적으로 상당한 이환율 및 사망률과 관련된 감염의 치료에 극적으로 효과적인 치료법이다. 또한, 리소스타핀은 페니실리나제-안정성 페니실린, 반코마이신 등을 포함하는 베타-락탐 항생제와 같은, 이용 가능한 항미생물제에 대하여 적어도 부분적으로 내성이 있는 포도상구균에 대하여 효과적인 것으로 입증되었다.
본 발명은 또한 리소스타핀과 하나 이상의 다른 항미생물제의 교대 또는 동시 투여를 포함하여 이루어지는 복합 치료법을 포함한다. 본 발명에 따른 리소스타핀과 함께 투여하기에 특히 바람직한 항생제로는 리파마이신류(리파핀 등, 미생물로부터 분리 또는 합성 또는 반-합성하여 생산) 및 글리코펩티드류(일반적으로, 헵타펩티드와 하나 이상의 당 잔기를 포함하는 천연 분자 그룹)로, 자연적으로 생성되어 분리되거나(반코마이신, 테이코플라닌 등) 또는 합성된 제제일 수 있다.
본 발명은 또한 이용 가능한 클론된, 재조합 및 변형 리소스타핀을 제공한다. 관련된 효소가 동정되어, 리소스타핀과 함께 또는 대신에 사용될 수 있다.
리소스타핀 유전자의 클로닝 및 서열화는 야생형 리소스타핀과 동일하거나 상이한 성질을 갖는 변형 효소의 분리를 가능하게 한다. 본 발명자들의 연구결과인, 하나의 아미노산이 변경된 변질 효소는 in vitro 및 동물 감염 모델에서 강력한 항-포도상구균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 것으로 나타났다.
리소스타핀과 상동인 서열을 가지며, 엔도펩티다아제 활성을 가지는 천연 효소를 포함한 다른 리소스타핀 유사물, 또는 한 효소의 결합 도메인을 다른 효소의 촉매적 도메인에 융합하여 얻어진 키메라 효소도, 포도상구균 또는 다른 병원성 세균으로 인한 난치성 세균 질환을 다룰 수 있는 강력한 약물이다.
모든 실험들은 Rescei(미국 특허 제4,931,390호)에 기재된 리소스타핀 유전자 또는 이의 돌연변이체를 포함하도록 조작된 재조합 B. sphaericus 종을 발효하여 생성한 리소스타핀 유사물을 사용하여 실시하였다. 특히, 리소스타핀 유사물은 N-말단에서 아미노산이 2개 더 적거나, 2이하의 부가적인 아미노산을 가지도록 하여, 공개된 서열에서 변형된 B. sphaericus를 발효하여 제조하였다.
특히, 본 명세서의 데이터는 재조합적으로 제조된 리소스타핀 유사물 제제(여기서, 주성분은 공개된 서열의 N-말단 아미노산 2개가 없다)를 사용한 연구로부터 얻은 것이다. 그러나, 조사결과가 이러한 제제에만 제한되는 것은 아니다. 적당한 순도 및 활성을 가지는 어떤 제제를 사용하여도 유사한 결과를 얻을 수 있다.
실시예 1
in vito에서 리소스타핀의 활성
표 1a에 나타낸 바와 같이, 리소스타핀 제제가 임상적 분리균 S. areus에 대하여 활성이 있으며, in vitro에서 살균성이 있음를 실험으로 입증하였다; 표준 브로스 미세희석법(standard broth microdilution methods)을 사용하여, 최소 억제 농도(MIC) 및 최소 살균 농도(MBC)가1.0㎍/㎖로 결정되었다[National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1993. Approved Standard M7-A3. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically-Third edition. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, PA; National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1992. Tentative Guideline M26-T. Methods for determining bactericidal activity of antimicrobial agents. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, PA].
또한, 리소스타핀은 시험된 13 임상적 분리균 중 11에 대하여 MIC가8㎍/㎖로서, 많은 Staphylococcus epidermidis (코아굴라아제-음성 종)분리균에 대해 활성이 있는 것으로 나타났다. MIC는 세균의 가시적 성장을 완전히 억제하는, 가장 낮은 시험농도로 정의하였고, MBC는 초기 접종물을 노출 24시간 내에 99.9% 사멸하는 가장 낮은 농도로 정의하였다. 표 1a에 나타낸 바와 같이, 리소스타핀에 대한 민감성은 내성이나, 메티실린 및/또는 반코마이신에 대한 저감된 민감성에 영향을 받지 않는다. 메티실린-내성이 있고, 또한 반코마이신에 대한 민감성이 단지 중간정도인 S. aureus종이 최근 미국에서 출현하였다[Centers for Disease Control and Prevention, Morbidity and Mortality Weekly Report 1997. 46:813-815].
리소스타핀에 대한 S. aureus의 in vitro 민감성에 대한 예비연구
종 MIC(㎍/㎖) MBC(㎍/㎖)
1573c,m 0.5 1
27619c,m 0.25 0.5
COLc,m 0.13 0.25
450Mc,m 0.25 0.5
402c 0.5 0.5
404c,m 0.5 0.5
414 0.25 0.25
412 0.25 0.25
27286c,m 0.25 0.5
27698c,m 0.25 0.5
27222c,m 0.25 0.25
27287c,m 0.25 0.25
27295c,m 0.13 0.25
29293c,m 0.06 0.25
27621c,m 0.06 0.25
27622c,m 0.06 0.25
27619VR* 0.5 0.5
HP5827c,m,v 0.5 0.5
HP5836c,m,v 0.5 1
c임상적 분리균;m메티실린-내성;vVISA 종(반코마이신에 대해 중간정도의 내성);*실험실에서, 메티실린-내성이 있는 임상 분리균으로부터 유도된, 반코마이신에 대해중간정도의 내성을 가지는 종
리소스타핀은 플라스틱 물질에 부착되어, 용액에서 손실될 수 있다; 이것이 외관상 활성에 영향을 미칠 수 있다. 그러므로, 몇몇 MIC는 희석물에 0.1% 소 혈청 앨범(BSA)을 첨가하여 결정하였다. 이외에 방법은 상기에 인용한 방법과 동일하였다. 표 1b에 나타낸 바와 같이, BSA의 존재하에 시험한 경우, 시험종에 대한 리소스타핀의 in vitro 활성은 8- 내지 64-배까지 향상되었다. 이러한 관찰결과는 플라스틱 물질에 대한 리소스타핀의 친화성과 관련되므로, 일반적으로, 이전에 관찰된 것 보다, 포도상구균 종이 리소스타핀에 대해 더욱 민감하다는 것을 예측할 수 있다.
BSA를 사용하거나 사용하지 않은 경우, S. aureus에 대한 리소스타핀의 활성
종 MIC(㎍/㎖)
BSA를 사용한 경우 BSA를 사용하지 않은 경우
417 0.03
414 0.03 0.25
404c,m 0.008 0.5
401c 0.015 0.5
27619c,m 0.008 0.25
27295c,m ≤0.004 0.13
27287c,m 0.03 0.25
25756c,m 0.008
c임상적 분리균;m메티실린-내성
이러한 데이타는 다중으로 항생제-내성이 있는 Staphylococcus aureus의 동시 임상 분리균에 대한 리소스타핀의 매우 강력한 활성을 입증한다.
S. aureus에 대한 리소스타핀의 살균 활성은 또한 시간소모적인 실험들에 의해서 연구되었다. 이러한 종류의 한 연구에서, 이탈리아, 제노아에서 얻은 메티실린-내성이 있는 임상 분리균, S. aureus 종 AG461를 뮬러-힌톤 브로스(Difco)중에 접종하고, 600nm에서 배양물의 흡광도로 측정한, ml 당 생존 세포수(CFU/㎖)가 약 108에 이를때까지, 37℃에서 약하게 흔들면서 배양하였다. 그리고나서, 배양물을 새로운 브로스로 약 106CFU/㎖까지 희석하고, 여러 농도의 항균제에 노출시키기 위해서, 5㎖ 분취량을 몇개의 다른 플라스크에 넣었다. 37℃에서 약하게 흔들면서 계속 배양하였고, 생존 세포수를 결정하기 위해서 일정간격으로 시료를 꺼내었다. 멸균 염수(증류수 중 0.9% NaCl)로, 시료의 10배 계열 희석물을 만들고, 아가 접종법을 사용하여, 적당한 희석물의 0.1㎖ 분취량을 중복으로 트립틱 소이 아가 플레이트(Remel)에 평판배양하였다(이러한 방법에서는, 평판배양될 분취량을 탑 아가 2.5ml에 가하여 혼합하고, 플래이트에 붓는다. 탑 아가는 Difco 트립틱 소이 브로스로 2배 희석하여 최종 아가 농도를 0.75%, w/v로 만든 용해 트립틱 소이 아가(Difco)로 구성된다). 플래이트를 36℃에서 24-48시간동안 배양하고, 손으로 콜로니 수를 세었다. 리소스타핀이 플라스틱 물질에 흡착하는 것을 방지하기 위해서, 리소스타핀 희석액은 모두 0.1-0.2% BSA의 존재하에 제조하였다. 반코마이신(Sigma Chemical Co.)은 멸균증류수로 희석하였다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 0.004 내지 0.032㎍/㎖ 농도의 리소스타핀은 99.9% 이상의 세균을 접촉 1시간 내에 사멸하는 신속한 살균성을 나타내었다. 이와 대조적으로, 반코마이신은 고농도의 반코마이신(2 내지 16㎍/㎖)을 사용한 경우에도, 접촉 3시간 후에 관찰된 세균이 거의 사멸되지 않는, 저감되고 매우 느린 살균작용을 나타내었다. 리소스타핀과 반코마이신의 다른 농도는 각각의 MIC의 한배 및 8배로 사용되었다.
다른 실험에서(도 2), 3개의 상이한 S. aureus의 메티실린-내성이 있는 임상 분리균 및 4번째종, 27619VR, 메티실린 내성이 있는 임상분리균에서 유도된 실험실-유도 'VISA'종(즉, 반코마이신에 대하여 중간정도의 내성을 가짐)을 양이온-조절된 뮬러-힌톤 브로스(Becton Dickinson) 중에 접종하고, 37℃에서 밤새 배양하였다. 그리고 나서, 새로운 브로스로 희석하고, 로그증식기에 다다른 것으로 추정될때까지 37℃에서 약하게 흔들면서 배양하였다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 이번의 세균역가는 2x106내지 9x107CFU/㎖의 범위이었다. 리소스타핀을 1㎍/㎖의 농도로 각각의 배양물에 가하였다. 일정 간격으로, 시료를 취하여, 0.9% NaCl로 계열희석하였고, 뮬러-힌톤 아가(Bcton Dickinson)에 펴발라 평판배양하였다. 아가 플래이트를 48시간 동안 37℃에서 배양하고, 손으로 콜로니 수를 세었다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 이러한 종들은 모두 리소스타핀에 의해 신속히 사멸되었다.
이러한 데이타는, 메티실린에 내성이 있는 종 및 메티실린에 대하여 내성이 있고, 반코마이신에 대해서도 중간정도의 내성이 있는 종을 포함한, S. aureus의 현 임상 분리균에 대하여 리소스타핀이 강력하고, 신속한 살균 활성을 가진다는 것을 입증한다.
동물 모델 연구
실시예 2
마우스 S. aureus 감염 모델에서 리소스타핀의 비교 효능
마우스 급성 감염 모델에서 리소스타핀의 효능을 반코마이신의 효능과 비교하였다. S. aureus smith를 약하게 흔들면서 비얼 주입 브로스(Veal Infusion broth, Difco)상에서 밤새 배양하고, 5% 돼지의 위 뮤신(Difco)을 포함하는 브로스로 희석하였다. 무처리 동물을 48시간내에 반복적으로 모두 치사시키는 접종량의 약 10배인, 살아있는 세포 105-106으로, 약 20그램의 마우스(Male Swiss-Webster mice: Taconic Farms, Germantown, NY)를 감염시켰다. 각 처리 그룹의 마우스는 6마리였다. 감염 10분내에 리소스타핀을 정맥(주사용 5% 덱스트로스 0.1㎖) 또는 피하(0.2㎖) 투여하였다. 반코마이신은 피하 투여하였다.
표 2에 나타낸 바와 같이, 리소스타핀을 0.16mg/kg의 양으로 정맥 투여하거나, 2.5mg/kg의 양으로 피하투여한 경우, 감염된 마우스 100%가 보호되었다. 반면, 마우스에서 피하투여시 완전히 생체 이용가능하고, 피하투여 또는 정맥투여의 경우 유사한 활성을 갖는 반코마이신은 2.5mg/kg의 양으로 투여시 100% 효과를 나타내었다. 모든 무처리 마우스는 24시간 내에 사망하였다.
마우스의 S. aureus 감염에 대한 리소스타핀의 효능
투여량(mg/kg) % 생존
리소스타핀 iv 리소스타핀 sc 반코마이신
0 0 0 0
0.08 33
0.16 100
0.31 100
0.63 100 0
1.25 67 83
2.5 100 100
5 100 100
10 100
20 100
이 실시예를 통하여, 독력이 매우 강한 투여량의 세균을 사용한 마우스 급성 감염 모델에서, S. aureus 감염에 대해서 리소스타핀이 효과적이라는 것이 입증된다. 정맥 투여된 경우, 극히 적은 양의 정제된 재조합 리소스타핀이 효과적이었다. 중량을 기준으로, 리소스타핀은 반코마이신에 비하여 16배 효과적이었고; 몰 기준으로, 리소스타핀은 반코마이신에 비하여 200배 효과적이었다.
실시예 3
변형 리소스타핀 효소의 in vitro 및 in vivo 활성
미국특허 제4,931,390호에 기재된 클론화된 리소스타핀 유전자를 포함하는 Bacillus spharicus 종을 N,N-니트로소구아니딘으로 돌연변이화하였다. 살아남은 콜로니를 S. aureus 종 RN4880의 열-사멸세포 론(lawn)상에 얇게 입히고, 32℃에서 밤새 배양하여 용해 활성의 존재를 스크린하였다. 상당한 클리어 존을 형성한 콜로니를 남겨 두었다.
이들 콜리니 중 하나에 대하여 특성을 더 조사하였다. 리소스타핀 유전자의 서열을 분석하여, 성숙 리소스타핀 단백질의 218번 위치에 대응하는 코오돈에서 G에서 A로의 변이가 생겨, 결과적으로 GGT(글라이신)로부터 GAT(아스파르산)으로의 코오돈 변화가 일어났음을 발견하였다. in vivo 및 in vitro 시험을 위하여, 이 돌연변이종을 발효시켜 충분한 시험물질을 생산하였다.
표 3에 나타난 바와 같이, 야생 리소스타핀 제제가 더 활성이 높기는 하였지만, 변형 효소도 in vitro에서 S. aureus에 대하여 높은 활성을 보였다. 이 실험에서 MIC는 유리 튜브에서 1㎖ 최종 용적으로 브로스 마크로-희석하여 결정하였다. 그외, 방법은 상기한 바와 같다.
in vitro에서 S. aureus에 대한 변형 리소스타핀의 활성
MIC (㎍/㎖)
AG417 AG404c,m AG402c AG414
Gly218Asp .03 .06 .06 .03
야생 리소스타핀 .004 .008 .008 .004
c임상분리체;m메티실린-내성
표 4에 나타난 바와 같이, 마우스 급성 감염 모델에서, 변형 리소스타핀 효소는 S. aureus에 대해서 효과가 크다. 변형 종은 야생 리소스타핀에 비하여 활성이 다소 떨어지지만, 반코마이신 보다는 활성이 크다.
마우스의 S. aureus 감염에 대한 변형 리소스타핀의 활성
투여량(mg/kg) % 생존
대조 리소스타핀 Gly218Asp 반코마이신
0 0
0.04 0
0.08 17 0
0.16 83 17
0.31 33
0.63 83 0
1.25 83
2.5 100
실시예 4
리소스타핀으로 처리된 토끼 혈청에서의 항미생물 활성
약 5kg 무게의 토끼(New Zealand white rabbit)에 125mg의 리소스타핀을 정맥주입하였다. 일정 시간 간격으로 4시간까지 혈액 샘플을 취하여 혈청을 만들었다; 2배 계열 희석하여, S. aureus의 메티실린 내성종(MRSA 27619)에 대한 혈청의 살균 역가를 측정하였다. 혈청 살균 역가는 24시간에 99%의 접종물을 사멸하는 최대 희석이다. 이 시험에서는, 미소적정 웰(microtiter well)에 농도가 다른 정제된 항미생물제 대신 희석률이 다른 혈청을 넣은 것 외에는 본질적으로 최소 살균 방법(the minimal bactericidal method)에 따라, 세균 생존을 결정하였다.
표 5에 나타낸 바와 같이, 혈청은 전 시간 범위에 걸쳐 고 살균성 농도의 리소스타핀을 함유하였다. 특히, 30분에서 120분의 시간 범위에서, 역가는 1:256(최대 희석분) 보다 커, 256배 이상의 희석물이 99.9%의 세균을 사멸시킬 수 있다는 것을 보여주었다. 최종 시간대인 240분에서, 역가는 1:64 이었다.
5-kg 토끼에 125mg 투여 후의 리소스타핀의 혈청 살균 역가
주입 시작 후 시간(분) 혈청 살균 역가
0306090120240 1:128〉1:256〉1:256〉1:256〉1:2561:64
이러한 실시예를 통하여, 리소스타핀은 토끼 혈청에서 살균 활성을 유지하며, 주입 후 4시간 이상 순환계에 남아 활성을 유지하는 것으로 증명되었다.
실시예 5
토끼의 실험적 심내막염에 대한 리소스타핀의 효능
약 3kg 무게의 토끼(New Zealand white rabbit)에 대동맥 판막 심내막염을 일으켰다. 토끼를 마취하고, 오른쪽 경동맥을 외과적으로 노출하여, 좌심실로 나아가는 폴리에틸렌 카테터를 삽관하였다. 24시간 이상이 지난 후, 토끼를 메티실린-내성 S. aureus 균주(MRSA 27619) 106내지 107세포로 정맥내 감염시켰다. 24시간 후, 동물을 무작위로 서로 다른 처리 그룹: 미처리 대조구(9마리); 양성 대조구, 반코마이신 30mg/kg 1일 2회(15); 리소스타핀 5mg/kg 1일 3회(11); 리소스타핀 5mg/kg 1일 1회(10); 리소스타핀 5mg/kg 1일 1회 + 반코마이신 1일 2회(11) 로 나누었다. 예비-처리 혈액 배양에 의하여 감염이 불확실한 토끼는 모두 제외시켰다. 또한, 분석을 실시한 토끼는 모두 부검하여, 진행중인 질환상태 또는 이전의 질환 상태의 대동맥 증식증 증세로 판단되는 바과 같이, 심내막염에 감염되었는지 확인하였다.
모든 처리는 정맥 내로, 3일동안 실시하였다. 간격을 두어 토끼의 건강 상태를 평가하였다. 토끼를 최종 처리 18 시간 후에 치사시켰다. 대동맥 증식물을 떼어내 무게를 달고, 생균수(log10CFU/그램으로 표시)를 측정하기 위하여 처리하였다. 검출 한계는 102CFU/g(log10CFU/g=2.0)였다. 그람 당 평균 세균 역가는 일방 편차 분석(one-way analysis of variance)으로 비교하였다. 다중 비교를 위하여 스튜던트-뉴먼-큐얼 시험(Student Newman Keuls test)을 사용하였다. 피쳐 시험(Fisher's exact test)을 사용하여 멸균 속도를 비교하였다. 통계적 유의성은 p값 ≤0.05으로 정의되었다.
표 6에서와 같이, 1일 3회 5mg/kg 리소스타핀 섭생법이 치료에 가장 효과적이었다. 통계에 따르면 놀랍게도, 이러한 치료를 통하여 한 마리를 제외하고는 모든 토끼에서 심장 판막 증식물이 멸균되었다. 이는, 이러한 감염 모델에서 양성 대조구로 사용된 표준 섭생법: 1일 2회 30mg/kg의 반코마이신 보다 훨씬 우수한 결과이다. 1일 1회 5mg/kg 리소스타핀 섭생법은 1일 3회 섭생법보다는 효과적이지 못하지만, 증식물 내의 세균 수를 감소시키는 면에서 거의 반코마이신만큼 우수하였다. 사실, 통계적으로 그 효과는 반코마이신 그룹과 그리 다르지 않았다. 1일 1회 리소스타핀 섭생법으로 또한, 몇마리의 동물에게서 증식물을 완전히 멸균할 수 있었다. 리소스타핀을 표준 반코마이신 섭생법에 1일 1회 추가하면, 평균 세균수가 현저히 낮아져, 거의 1일 3회 리소스타핀 치료시에 나타나는 수준에 이르렀다. 그러나, 완전 멸균된 증식물의 수를 볼 때, 1일 3회 리소스타핀 섭생법은 모든 다른 섭생법보다 훨씬 우수하였다.
토끼의 S. aureus 심내막염에 대한 리소스타핀의 효능
치료 평균 log10CFU/증식물의 그램 ±표준 편차 살균 증식물의 수/전체 치료 동물
미처리 대조구반코마이신 30mg/kg1일 2회리소스타핀 5mg/kg1일 1회리소스타핀 5mg/kg1일 3회리소스타핀 5mg/kg1일 1회+반코마이신 30mg/kg1일 2회 10.73 ±1.585.91 ±1.67a7.08 ±3.74a2.26 ±0.85a,b3.23 ±1.41a,b 0/90/152/1010/11c3/11
cp〈0.05 미처리 대조구와 비교bp〈0.05 반코마이신과 비교cp=0.008 vs 리소스타핀 1일 1회 + 반코마이신
신장 농양에 대해서도 포도상구균속이 존재하는지 평가하였다. 미처리 대조 그룹과 비교할 때, 리소스타핀 1일 3회 섭생법으로 세균이 현저히 감소하여, 대조구에서 108CFU/g 보다 약간 적은 것과 비교하여 리소스타핀 그룹에서는 조직 g당 102CFU/g을 넘는 정도였다.
동물을 관찰한 결과, 1일 3회 리소스타핀 섭생법으로 치료한 토끼는 치료 사시클 초기에 모두 건강하였다는 것이 증명되었다.
이는 종래 연구한 결과를 토대로는 예상될 수 없는 결과이다. 특히, 이전에는, 이러한 감염 모델에 어떤 항미생물제를 사용하여 실제로 증식물이 모두 멸균되는 것으로 보고되거나 관찰된 적은 없었다. 비교적 단기간(3일)의 치료 기간 내에 멸균이 가능하다는 사실을 통하여, 리소스타핀은 in vivo에서 매우 신속하게 작용한다는 것을 알 수 있으며, 항미생물 리소스타핀 유사체는 세균을 신속하게 감소시켜야 하는 심각한 포도상구균 감염 환자의 상태를 크게 개선할 수 있다는 것이 제시된다.
상기 데이터를 통하여, MRSA(메티실린-내성 S. aureus)를 포함하는 S. aureus에 대한 리소스타핀 유사체의 효능이 증명된다. 메티실린-내성 및 반코마이신 내성을 갖는 균주의 출현은 새로운 문제가 되고 있다. 이런 형태의 다양한 균주는 글리코펩티드-함유 배지에서의 성장 사이클 후에 선택되었다. 수득한 균주의 반코마이신 MIC는 8㎍/㎖였으며, 미국 및 일본 환자에서 분리된 자연 발생 VISA 균주에서 보고된 것과 같았다. (Centers for Disease Control and Prevention, Morbidity and Mortality Weekly Report 1997; 46: 813-815) 포도상구균 분리체는 MIC가 4㎍/㎖ 이하이면 반코마이신 감성을 가지며, MIC가 32㎍/㎖ 이상이면 완전한 반코마이신 내성을 갖는 것으로 간주된다. (National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1993. Approved Standard M2-A5. Performance Standards for antimicrobial disk susceptibility tests-Fifth edition. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, PA.)
표 7에서와 같이, 리소스타핀은 메티실린-내성 VISA 균주로 인하여 심내막염에 감염된 토끼를 치료하는 데 효과적이었다.
S. aureus 의 메티실린-내성 VISA 균주로 인한 토끼의 심내막염에 대한 리소스타핀의 효능
치료 CFU/g 증식물* 멸균/증식물 전체
대조구반코마이신1일 2회 30 mg/kg리소스타핀1일 3회 5 mg/kg리소스타핀1일 2회 15 mg/kg 10.36.956.294.0** 0/100/132/100/5
*평균의 log10으로 표시**반코마이신보다 훨씬 크거나 저용량의 리소스타핀(p<0.05)
VISA 균주에 대하여, 1일 3회 5㎎/㎏ 리소스타핀은 반코마이신만큼 효과적으로 대동맥 증식물의 세균을 감소시켰다. 1일 2회 리소스타핀 15㎎/㎏은 반코마이신 표준 용량 섭생법보다 더욱 효과적이었고(통계적으로 유의적임), 1일 3회 리소스타핀 5㎎/㎏보다 훨씬 효과적이었다. 또한, 반코마이신은 1일 2회 30㎎/㎏ 사용하여도 어떤 시험 동물에서도 심장 판막 증식물을 완전히 살균할 수 없었다. 한편, 리소스타핀 1일 3회 섭생법으로는 몇마리의 동물에서 완전한 살균이 가능하였다.
토끼 심내막염 모델은 현재 표준화가 매우 잘 되어 있으며, 인간의 심각한 감염을 치료하기 위한 항미생물제의 능력을 엄밀히 시험하기 위하여 사용된다. 감염에 리소스타핀을 사용한 이전 연구에서는, 마우스 모델의 신장 및 개의 심내막염 모델에서의 심장 판막 및 다른 기관에서, 50 내지 250㎎/㎏/치료의 투여량 범위에서 세균이 제한적으로 감소되는 것으로 나타났다. 이러한 종래의 연구에서 고용량이 사용되었음에도 불구하고, 심각한 포도상구균 감염을 치료하기 위한 효과적인 양은 관찰되지 않았다. 이전의 결과로는, 현재 토끼 심내막염 모델에서 매우 적당한 양의 리소스타핀을 사용하여 나타나는 것처럼, 실질적으로 심장 판막 증식물이 모두 신속하고 전체적으로 멸균될 것을 예견할 수 없었다.
본 명세서에 나타난 결과를 통하여, S. aureus 심내막염에 대한 리소스타핀의 기대 밖의 효과가 증명될 뿐 아니라, 이러한 효능이 표준 치료법에서보다 훨씬 우수하다는 것이 증명된다. 현재 이용가능한 치료법은, 비가역적 조직 손상을 일으키므로 이러한 손상 및 다른 생명 유지 기관으로의 감염 전이 확산을 막기 위하여 세균수를 신속하게 감소시켜야 하는, 생명을 위협하는 감염의 치료에는 효과적이지 못한 경우가 많다. 상기 결과를 통하여, 리소스타핀 유사체는, 다른 약물과 함께 조합하거나 단독으로 사용되어, 이러한 감염 치료에 잠재적인 효과를 갖는다는 것을 알 수 있다. 또한, 이들 결과 및 포도상구균에 대한 리소스타핀의 in vitro 활성을 기초하여, 리소스타핀 유사체가 단독 또는 다른 약물과 함께 조합하여 사용될 때, S. aureus 외의 포도상구균속의 종에 대해서도 유용할 것으로 기대된다. 리소스타핀과 병용하기 적당한 약물에는, 반코마이신 및 다른 글리코펩티드, 리팜핀 및 다른 리파마이신과, 포도상구균속에 대한 활성을 갖는 다른 항-감염제가 있다.
리소스타핀 유사체는 스타필로코커스 심내막염 치료 뿐 아니라, 균혈증과 같은 다른 치명적인 잠재적 포도상구균 질환, 및 신장, 폐, 피부 및 뼈와 같은 다른 생명 유지 기관의 감염 치료에 사용될 수 있다. 이 방법은 화상, 상처 및 인공삽입 장치의 감염 치료에도 적용할 수 있다. 이와 같은 방법은 특히, 현재 사용되는 항미생물제로 장기간의 치료를 요하는 형태의 감염 또는 심각도를 갖는 감염으로 인한 골수염과 같은 질환의 치료에 사용할 수 있다. 본 발명은 또한, 리소스타핀 유사체를, 통상 사용되는 항생제에 대하여 내성을 갖는 포도상구균으로 인한 감염 및 질환의 치료에 사용하는 데까지 확대될 수 있다.

Claims (31)

  1. 포유류에 하나 이상의 리소스타핀 유사체를 유효량 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 포유류의 스타필로코커스 감염의 치료 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 리소스타핀 유사체(들)를 하나 이상의 다른 항균제와 함께 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 2항에 있어서, 다른 항균제가 리파마이신 또는 글리코펩티드인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 심장 판막, 혈액, 신장, 폐, 뼈 및 수막으로 구성되는 그룹에서 선택되는 하나 이상의 기관 또는 조직의 스타필로코커스 감염의 치료 방법으로서,
    하나 이상의 상기 질환 상태를 갖는 포유류를 선택하고; 및 상기 포유류에 유효량의 리소스타핀 유사체를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는 방법.
  5. 카테터 또는 인공장기 장치와 관련되는 스타필로코커스 감염의 치료 방법으로서,
    이와 같이 감염된 포유류를 선택하고; 및 상기 포유류에 유효량의 리소스타핀 유사체를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는 방법.
  6. 제1항, 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 리소스타핀 유사체는, 스타필로코커스의 세포벽 펩티도글리칸에서 글리신-함유 브릿지에 대한 생물학적 프로테올리틱 공격 활성을 갖는 리소스타핀 또는 이의 변형체인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 감염이 심내막염인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 감염이 골수염인 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 감염이 균혈증인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 7항에 있어서, 상기 유사체가 리소스타핀인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 8항에 있어서, 상기 유사체가 리소스타핀인 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 9항에 있어서, 상기 유사체가 리소스타핀인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 1항, 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 포유류가 인간인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 1항, 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 스타필로코커스 감염은 리소스타핀 이외의 항균제에 대하여 적어도 일부 내성을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 14항에 있어서, 상기 항균제가 베타-락탐 항균제 EH는 반코마이신인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 베타-락탐이 메티실린인 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 1항, 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 리소스타핀 유사체가 재조합으로 제조되는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 17항에 있어서, 상기 유사체가 리소스타핀인 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 1항, 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 유사체(들)가 직접적인 주입, 흡입 또는 비경구 경로를 통하여 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 19항에 있어서, 상기 유사체(들)은 정맥내, 근육내, 피하내, 복막내 또는 외피내에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 리소스타핀 유사체는 하나 이상의 다른 항균제와 함께 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제 21항에 있어서, 다른 항균제는 리파마이신 또는 글리코펩티드인 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 1항, 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 유사체(들)은 투여 당 50mg/kg을 초과하지 않는 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제 23항에 있어서, 투여 유사체의 양은 0.5mg/kg/일 내지 200mg/kg/일인 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 24항에 있어서, 투여 유사체의 양은 3mg/kg/일 내지 50mg/kg/일인 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 25항에 있어서, 투여 유사체의 양은 3mg/kg/일 내지 25mg/kg/일인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 24항에 있어서, 투여 유사체의 양은 단지 45mg/kg/일인 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 리소스타핀 유사체는, 스타필로코커스의 세포벽 펩티도글리칸에서 글리신-함유 브릿지에 대한 생물학적 프로테올리틱 공격 활성을 갖는 리소스타핀 유사체 및 약제학적으로 허용가능한 운반체를 포함하여 이루어지는, 스타필로코커스 감염 치료를 위한 치료 조성물.
  29. 제 28항에 있어서, 상기 조성물은 인간에 비경구 투여하기에 적당한 것임을 특징으로 하는 치료 조성물.
  30. 제 28항에 있어서, 상기 조성물은 2차 항균제를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 치료 조성물.
  31. 제 28항에 있어서, 상기 리소스타핀 유사체는 재조합으로 제조되는 것을 특징으로 하는 치료 조성물.
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