KR20000065204A - Cd14에 대한 안티센스 화합물 - Google Patents

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모치다 에이
모치다 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은 인간 CDl4를 코드하는 유전자의 일부와 하이브리다이즈하는, 또는 상보적인배열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 및 유도체에 관한 것이며, 또한, 해당 올리고뉴클레오티드 또는 그 유도체를 유효 성분으로 하는 의약 조성물에 관한 것으로, 이 의약 조성물을 이용하여 전신성 염증반응 증후군 등의 질환의 치료에 유용하다.

Description

ＣＤ14에 대한 안티센스 화합물
세균 감염에 따라 발증하는 패혈증(敗血症)은 미국에서는 50 만명이 걸려서 17만5천명이 사망하는 치사성이 높은 질환이며 또 유효한 치료법이 확립되지 않은 질환이다(Science, 264권, 365페이지, l994년). 그리고, 그 원인은 세균으로부터의 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, 이하 LPS라고 부른다, LPS는 엔도톡신과 거의 같은 의미이다)에 의한 직접 작용이라고 생각되어져 왔다. 1985년에 Beutler등이 항 TNF 항체를 투여한 마우스는 치사량의 엔도톡신에 내성을 나타내는 것을 보고하였고(Science, 229권, 869페이지, 1995년), 한편 Tracy 등은 조환 TNFα를 투여한 동물에게서 엔도톡신 유사의 쇼크와 장기 장해가 발생하는 것(Science, 234권, 470페이지, l996년)을 밝히고, 패혈증성 쇼크가 LPS에 의한 직접 작용이 아니라, LPS의 자극에 의해 활성화된 마크로파지(macrophage)의 과잉한 사이토카인 생산, 즉 고(高)사이토카인 혈증에 의한 것이 판명되었다. 이것이 계기가 되어, LPS의 자극에 의해 과잉 생산되는 TNFα를 표적으로 한 치료법이 시도되었다. 그러나, 1990년대 전반에 행하여진 TNFα를 표적으로 한 임상 시험은 28일후의 생존율 개선 등의 지표에서 양호한 결과를 얻을 수 없어 실망스러운 결과로 끝났다(Nature Medicine, 3권, 1l93페이지, l997년).
현재, 세균 감염을 방어하는 목적에서는 항생 물질이 사용되고 있지만, 한편으로 이것들의 항생 물질에 의해 균체가 파괴되어 다량의 LPS가 혈중에 방출되는 것도 보고되어져 있다(Scand. J. Infect. Dis., 101권, 3페이지, 1996년). 이것은 항생제의 사용이 오히려 패혈증성 쇼크 또는 엔도톡신 쇼크를 일으키는 원인이 될 지도 모른다는 것을 의미한다. 따라서, 쇼크를 예방하기 위해서는 항생 물질의 투여와 함께 LPS의 자극을 차단하는 것이 중요하다.
CD14는 골수 세포가 분화 성숙함에 따라서 발현하는 분자량 55kd의 포스파티딜이노시톨 결합형 당단백질이고, 인간 말초혈 단핵구의 표면 항원으로서 Todd 등에 의해 보고되었다(NewYork, Springer-Verlag, 424-433페이지, l984년). 현재로는 CD14는 마크로파지, 단구, 쿠퍼세포 및 호중구막상(好中球膜上)에 존재하는 것을 알 수 있다.
인간 CD14의 DNA 배열은 Goyert 등에 의해 l988년에 보고되어(Nucleic Acid Research, 16권, 9호, 4l73페이지, l988년) 또한 마우스 CDl4 DNA 배열은, 야마모토 등에 의해 l988년에 보고되었다(Somat. Cell Mol. Genet., 14권, 427페이지, 1988년). CDl4 유전자는 제 5번 염색체의 IL-3이나 GM-CSF, G-CSF등의 조혈조직의 분화증식 인자군이 존재하는 유전자 클러스터의 속에 존재하고 조혈조직의 분화성숙에 관여하는 것이 시사되어 있었지만, 그 기능의 상세한 것은 명확하지 않다.
1990년, Wright 등에 의해 CD14가 그램음성 간(杆)균 내독소의 LPS의 수용체라는 것이 보고되었고(Wright 등, Science, 249권, 1431페이지, 1990년), 또한 최근의 연구에서 CD14는 LPS 뿐만아니라 프로테오글리칸과도 결합하는 것이 분명하게 되었다(Gupta 등, J. Bio1. Chem. 271권 38호 23310페이지 l996년). 또한 그램음성세균 및 그램양성 세균의 균체 성분이 CD14를 통해 세포를 활성화하는 것도 보고되어져 있다(Jerome 등, Immunity 1권 509페이지 l994년). 즉, 생체가 세균 감염을 받은 경우에는, CD14이 균체 성분과 결합함으로써, CD14를 발현하고 있는 마크로파지나 단구가 활성화되어, 여러 가지의 염증성 인자(염증성 사이토카인, 예를 들어 TNFα, IL-1, IL-6, IL-8, PAI-2, MCP-l등, 또는 아라키돈 대사물, PAF 및 1산화질소등)이 방출, 유도됨에 따라서, 감염 초기에는 세균감염 방어에 기여하고 있다고 생각된다(N1atthew등, J. Biol. Chem. 60권 728페이지 1996년). 한편으로, 패혈증과 같은 병적 상태에서는, 세균으로부터의 대량의 LPS에 의한 마크로파지의 활성화가, 혈중에의 대량의 TNFα방출로 연결되어, 쇼크가 야기된다고도 생각된다(Fearn. S. 등, J. Exp. Med., 181권, 857페이지, l995년).
현재, CDl4를 통한, LPS에 의한 사이토카인 생산 기구에 대해서는, 이하와 같이 생각된다. 즉, 균체 유래의 LPS 응집물이 혈중에서 LPS 결합 단백질(LBP)와 복합체를 형성함에 따라서 단체 LPS로서 효율적으로 마크로파지상의 CDl4 분자와 l대1로 결합할 수 있게 된다. 세포 표면상에서 결합한 LPS는 세라미드와 유사한 아직 미동정의 경로로 신호가 세포내에 전해져, 세포내에서 전사 인자인 NFκB가 활성화하여, TNFα를 포함하는 여러 가지 사이토카인의 생산이 유도된다 (Ulevith 등 Annual Review of Immuno1ogy, 13, 437, l995). 이들의 경우는, 세균 감염에서는 숙주의 1차 응답이 단구/마크로파지상의 CDl4가 LPS 또는 그램양성균 균체 성분에 응답하는 것으로부터 반응이 시작되는 것을 뜻하고 있다.
그런데, CD14분자에는 막결합형과 가용형의 2종의 분자가 존재한다.
가용형 CD14의 생성은 막결합형 CD14가 프로테아제에 의해 절단되어 가용형이 된다고 생각된다(Philip 등, Eur. J. Immunol. 25권 604페이지 1995년).
그리고, 가용형 분자는 혈중의 LPS분자와 결합하여 이것을 HDL로 수송함으로써 LPS의 클리어란스에 도움이 되고 있다는 보고가 있다(Wurfel등, J. Exp. Med. 186권 l743페이지 1995년). 한편, 막결합형 분자는 LPS와 결합하여 시그날을 세포내에 전달시켜 염증성 사이토카인을 유도한다고 생각된다. 즉, CDl4에는 LPS를 제거하는 작용과 염증성 인자를 유도하는 작용과의 상반하는 기능이 존재한다고 생각된다.
특허공개 제5-501399호 공보는 항 CD14 항체를 이용한 패혈증의 치료 방법을 개시하고 있다. 항 CD14항체는 CD14과 LPS의 결합을 저해하여, CD14를 통한 시그날을 차단하는 것을 가능하게 하고, 염증성 시토킨의 발현을 억제하여, 그 결과 패혈증을 치료하는 것이다. 또한 WO 93/19772, WO 96/2057에는, 가용형의 CD14를 사용한 패혈증의 치료가 개시되어 있다.
그러나, 패혈증성 쇼크의 고사망율, 환자수를 생각하면, 보다 효과가 높은 의약품을 제공하는 것이 요망되고 있다.
<발명의 전개>
본 발명자등은 패혈증성 쇼크에 대하여 보다 효과가 높은 의약 조성물을 제공하기 위해 연구를 거듭해 왔다. 패혈증성 쇼크의 발증에는, LPS자극에 의해서 간장의 쿠퍼세포로부터 생산되는 염증성 사이토카인이 중요한 역할을 하고 있다고 예견하고, LPS의 제거에 관여하고 있는 가용성 CDl4나, 각각의 부위에서 세균감염방어에 기여하고 있는 폐포 마크로파지나 복강 마크로파지, 그 밖의 마크로파지상의 CD14에는 영향을 주지 않은 방법으로, 쿠퍼세포상의 CDl4와 LPS의 결합을 특이적으로 차단하는 것이 치료상 유효할 것이라고 생각하였다. 그리고 간장에 축적성이 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하면, 간쿠퍼세포상의 CD14에 높은 선택성으로 작용한다고 생각하였다.
마우스의 간쿠퍼 세포는, 평상시에는 CDl4를 극히 약하게 발현하고 있을뿐이지만, LPS에 의해서 자극되면, CDl4를 강하게 발현하게 되는 것이 알려졌다. 한편, 간장은 쇼크에 의해 가장 영향을 받기 쉬운 장기이고, 간기능의 저하가 전신 증상에 큰 영향을 주는 것도 알려졌다. 본 발명자등은 LPS자극에 의해 발현이 유도되는 간쿠퍼 세포의 CD14를 선택적으로 억제하여, 주로 쿠퍼 세포로부터의 염증성 사이토카인의 생산을 억제한다고 하는 새로운 관점에 근거하는, 패혈증 또는 패혈증성 쇼크에 유효한 치료약을 제공한다. 즉, 본 발명자등은 CD14에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드를, 패혈증 또는 패혈증성 쇼크에 유효한 의약품으로서 제공한다.
CD14의 안티센스 올리고뉴클레오티드가, 의약품으로서 이용가능한 정도로 CD14의 발현을 억제하여, 패혈증의 치료에 응용가능한지에 대해서는 전혀 불명이었지만, 본 발명자등은 예의연구를 행한 결과 CDl4에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드가 의약품으로서 사용가능하다는 것을 확인하였다. 또한, 본 발명자등은 이하 방법에 의해서, CDl4를 코드하는 약 l.4 kb의 유전자중에서도 안티센스 올리고뉴클레오티드의 표적으로서 특히 효과가 높은 영역을 결정하는 것에 성공하였다.
즉, 5' 비번역영역 및 번역개시영역에 대해서는, 인간 CD14 루시페라제융합단백발현계를 이용한 번역저해실험, 조환HeLa세포에 의한 CDl4 단백발현저해활성 및 인간 마크로파지양(樣) 배양세포에 의한 TNFα 생산저해활성을 조합시킴으로써 활성영역을 특정하였다. 또한, 용이하게는 활성영역을 특정할 수 없는 번역영역 및 3' 비번역영역에 있어서는, 표적 RNA와 안티센스 올리고뉴클레오티드의 결합을 특이적으로 절단하는 RNaseH를 이용하는 스크리닝을 도입함으로써, 활성영역을 특정함에 성공하였다. 다음으로 이것들의 활성영역의 효과와 독성을, 배양세포 또는 동물을 사용한 계(系)에서 확인하고 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은 인간 CDl4를 코드하는 유전자의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 이 중, 인간 CD14을 코드하는 유전자가 적어도 일부와 상보적인 배열을 포함하는 올리고뉴클레오티드가 바람직하다.
또한, 인간 CD14mRNA의 5' 비번역영역, 번역개시영역, 번역영역 또는 3' 비번역영역의 각각 또는 그 적어도 일부와 상보적인 배열을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
또한, 배열번호 l의 염기 배열의
(1) 염기위치 23번의 시토신으로부터 62번의 아데닌까지의 40 염기의 염기 배열
(2) 염기위치 93번의 구아닌으로부터 131번의 시토신까지의 39 염기의 염기 배열
(3) 염기위치 117번의 구아닌으로부터 145번의 우리딘까지의 29 염기의 염기 배열
(4) 염기위치 1241번의 아데닌으로부터 1280번의 구아닌까지의 40 염기의 염기 배열
(5) 염기위치 1264번의 구아닌으로부터 1285번의 시토신까지의 22 염기의 염기 배열
(6) 염기위치 1267번의 시토신으로부터 1320번의 아데닌까지의 54 염기의 염기 배열
(7) 염기위치 1301번의 구아닌으로부터 1350번의 아데닌까지의 50 염기의 염기 배열
(8) 염기위치 184번의 시토신으로부터 203번의 아데닌까지의 20 염기의 염기 배열
(9) 염기위치 324번의 아데닌으로부터 343번의 시토신까지의 20 염기의 염기 배열
(10) 염기위치 394번의 우리딘으로부터 413번의 구아닌까지의 20 염기의 염기 배열
(11) 염기위치 444번의 시토신으로부터 489번의 시토신까지의 46 염기의 염기 배열
(12) 염기위치 534번의 구아닌으로부터 553번의 우리딘까지의 20 염기의 염기 배열
(13) 염기위치 644번의 우리딘으로부터 668번의 우리딘까지의 25 염기의 염기 배열
(14) 염기위치 684번의 시토신으로부터 758번의 우리딘까지의 75 염기의 염기 배열
(15) 염기위치 794번의 아데닌으로부터 828번의 구아닌까지의 35 염기의 염기 배열
(16) 염기위치 864번의 시토신으로부터 918번의 구아닌까지의 55 염기의 염기 배열
(17) 염기위치 994번의 구아닌으로부터 1048번의 시토신까지의 55 염기의 염기 배열
(18) 염기위치 1064번의 구아닌으로부터 1108번의 우리딘까지의 45 염기의 염기 배열, 및
(19) 염기위치 1194번의 구아닌으로부터 1223번의 구아닌까지의 30 염기의 염기 배열 염기
로부터 선택되는 어느 하나의 1개의 배열 또는 어느 하나의 배열의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드, 또는 그것들과 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
이들중, 인간 CD14의 발현을 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드가 바람직하다. 예를 들면, 또한 RNase 절단실험에서 인간 CD14 유전자와의 결합활성이 높은 올리고뉴클레오티드나 번역저해실험에서 인간 CD14의 발현을 30% 이상 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드가 바람직하다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드의 염기수는, 바람직하게는 10에서 50의 어느 하나이고, 특히 바람직하게는 15에서 30의 어느 하나이다.
본 발명은 또한, 뉴클레오티드간의 결합기의 적어도 1개가 황원자를 포함하는 올리고뉴클레오티드도 제공한다.
또한, 본 발명은 배열번호 l0, 1l, 12, 13, l6, 19. 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 61, 62, 63, 64. 70, 7l, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 81, 83, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 102, 103, 109, l23, l24, 125, l30, 135, 136, 137, 138, l44, l55, l56, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 170, 171, l72. 177, 178, 179, l80, 181, l90, 191, l92, l93. l94, l96, l97, l98, 199, 209, 210. 215, 216, 220, 221, 224. 225, 226, 227, 228. 229. 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237. 238. 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 염기 배열을 포함하며, 30 염기이하의 염기로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
또한, 본 발명은 CDl4를 코드하는 유전자에 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드를 유효 성분으로 하는 의약 조성물을 제공한다. 당해 의약 조성물은 CDl4를 코드하는 유전자에 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드에 가하여, 필요에 따라서 의학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하는 것이다. 당해 의약 조성물은 바람직하게는 패혈증 또는 패혈증성 쇼크 혹은 CD14를 통해 유도되는 염증성 인자에 의해서 야기되는 질환의 예방/치료약이다.
본 발명은 인간 CD14를 코드하는 유전자의 일부와 상보적인 배열을 포함하는 올리고뉴클레오티드에 관한 것이다. 또한, 해당 올리고뉴클레오티드 및 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함하는 의약 조성물에 관한 것이다.
제 1도는 인간 CDl4를 코드하는 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 CD14 번역저해활성을 나타내는 도면이다.
제 2도는 인간 CD14를 코드하는 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 염기길이에 의한 효과를 나타내는 도면이다.
제 3도는 인간 CD14에 대한 mRNA의 5' 비번역영역 및 AUG 근방영역에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 인간 TNFα 생산억제활성을 나타내는 도면이다.
제 4도는 인간 CDl4에 대한 mRNA의 3' 비번역영역에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 인간 TNFα의 생산억제활성을 나타내는 도면이다.
제 5도는 마우스 CDl4에 대한 mRNA의 5' 비번역영역 및 AUC 근방영역에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 마우스 TNFα 생산억제활성을 나타내는 도면이다.
제 6도는 엔도톡신 쇼크 모델에 있어서의 올리고뉴클레오티드 SM0105A의 효과를 나타내는 도면이다.
제 7도는 엔도톡신 쇼크 모델에 있어서의 올리고뉴클레오티드 SM0105A의 간기능에 대한 효과를 나타내는 도면이다.
제 8도는 인간 CDl4를 코드하는 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드 인간 CDl4 루시페라제융합 단백발현 저해 활성을 나타내는 도면이다.
제 9도는 인간 CD14에 대한 mRNA의 번역 영역에 대한 안티센스 올리고 누클레도티드의 인간 TNFα 생산억제활성을 나타내는 도면이다.
제 10도는 번역개시영역근방에 대한 인간 안티센스 올리고뉴클레오티드와 마우스 안티센스 올리고뉴클레오티드의 염기 배열을 비교한 도면이다.
제 11도는 콘센서스 올리고뉴클레오티드의 인간 CD14 루시페라제융합 단백발현저해활성을 나타내는 도면이다.
제 12도는 콘센서스 올리고뉴클레오티드 의 마우스 TNFα 생산억제활성을 나타내는 도면이다.
<발명의 개요>
이하에 본 발명을 자세히 설명한다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 인간 CD14를 코드하는 유전자의 적어도 일부와 하이브리다이즈한다. 이 중, 인간 CD14를 코드하는 유전자의 적어도 일부와 상보적인 배열을 포함하는 올리고뉴클레오티드가 바람직하다.
본 발명의 설명에 있어서, 「올리고뉴클레오티드」란 염기, 인산, 당으로 이루어지는 뉴클레오티드가 복수 결합한 올리고뉴클레오티드와 그 유도체의 모두가 포함된다. 올리고뉴클레오티드의 대표적인 것이 DNA와 RNA이다. 올리고뉴클레오티드 유도체에는, 그 입체구조나 기능이 올리고뉴클레오티드와 유사한 것은 모두가 포함된다. 예를 들면, 올리고뉴클레오티드의 3' 말단 혹는 5' 말단에 다른 물질이 결합한 것이나, 올리고뉴클레오티드의 염기, 당, 인산의 적어도 어느 것이든 1개에 있어서, 치환이나 수식이 생기는 물질, 천연으로는 존재하지 않는 것과 같은 염기, 당, 인산을 갖는 것이나 당-인산 골격이외의 골격(backbone)을 갖는 것등을 들 수 있다.
본 발명의 설명에 있어서 「유전자」란, 염색체 DNA 또는 그 전사물(mRNA 및 그 전구체)를 의미하여, 「CDl4를 코드하는 유전자」란 CDl4의 아미노산배열을 규정하고 있는 구조유전자, 구조유전자의 도중에 존재하는 개재배열(인트론), 및 CD14의 발현에 관여하는, 구조유전자 상류의 염기 배열(프로모터나 오퍼레이터등)이나 구조유전자 하류의 염기 배열을 의미한다. 인간 CD14를 코드하는 유전자의 대표적인 배열을 배열표의 배열번호 1 및 2에 나타낸다.
본 발명의 설명에 있어서「하이브리다이즈한다」란 DNA 또는 RNA 에 대해 염기간에서 특이적 결합을 형성하는 것을 말한다. 하이브리다이즈의 세기로서는 0.15M 인산 완충액으로, 45℃ 이상의 Tm 치를 갖는 것이라면 좋고, 55℃ 이상의 Tm 치를 갖는 것이 보다 바람직하다. 특이적결합은, 일반적으로는 상보적 결합에 의해 형성되지만 여기서는, 그 결합양식은 묻지 않는다. 요컨대, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 인간 CD14를 코드하는 유전자의 적어도 일부에 특이적으로 결합하는 것이라면 반드시 표적배열에 완전하게 상보적 배열을 가질 필요는 없고, 또한 이노신이나 5-니트로인돌로 대표되는 유니버설베이스를 포함하고 있어도 좋으며, 그 일부에 상보적 배열이 아닌 염기 혹은 배열을 포함하고 있어도 좋다. 또한, Watson Crick형, 혹은 Hoogsteen형 또는 그 양쪽의 결합양식으로, 2중쇄 혹은 3중쇄를 형성하는 것과 같은 경우도, 본 발명의 「하이브리다이즈한다」에 포함된다. 또한 「상보적인 배열」이란, DNA나 RNA의 염기 배열에 대해서 염기 특이적인 상보적 염기대(對)를 형성하는 것과 같은 염기대를 말한다. 일반적으로 C(시토신)과 G(구아닌)의 사이, T(티민)과 A(아데닌)의 사이, 및 U(우라실)와 A(아데닌)과의 사이에서 상보적 염기대가 형성된다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 인간 CD14 mRNA 또는 mRNA 전구체의 적어도 일부분에 하이브리다이즈하는 것이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 그 길이는 특히 한정되지 않는다. 일반적으로는, l0 염기 이상의 염기를 포함하는 염기 배열이라면, 특이적 배열이라고 생각된다. 따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 l0 염기 이상으로 이루어지는 염기 배열을 포함하는 것이라면, 인간 CD14를 코드하는 유전자에 특이적으로 하이브리다이즈하는 것이 기대된다.
한편, 올리고뉴클레오티드를 세포내에 넣기에는, 그 길이가 너무 길어도 부적당하다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 어떠한 길이의 것이라도 좋으나, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 세포내에 넣어, 인간 CD14의 발현을 억제하는 것을 고려하면, 인간 CD14를 코드하는 유전자에 하이브리다이즈하고, 10 염기 이상 50 염기 이하, 바람직하게는 15 염기 이상 30 염기 이하의 염기수로부터 이루어지는 것이 바람직하다. 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어, 배열번호 1 또는 2의 배열의 n번으로부터 n+10번, n번으로부터 n+11번, n번으로부터 n+12번, n번으로부터 n+13번, n번으로부터 n+14번, n번으로부터 n+15번, n번으로부터 n+16번, n번으로부터 n+17번, n번으로부터 n+18번, n번으로부터 n+19번, n번으로부터 n+20번, n번으로부터 n+21번, n번으로부터 n+22번, n번으로부터 n+23번, …n번으로부터 n+50번(n=1∼1341)번까지의 각각의 배열에 하이브리다이즈한다. 또는 상보적인 올리고뉴클레오티드이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는, 인간 CDl4를 코드하는 유전자, 바람직하게는 인간 CD14를 코드하는 mRNA 또는 그 전구체의 어떠한 부위를 표적으로 하는 것이어도 좋다. 즉, 본 발명의 올리고뉴클레오티드가 결합하는 부위는 특별하게는 한정되는 않는다. 그렇지만, 당해 올리고뉴클레오티드는 mRNA 혹은 mRNA전구체의 번역개시영역, 번역영역, 5' 비번역영역, 3' 비번역영역, 리보솜결합영역, 캡핑영역, 스플라이싱영역, 헤어핀 구조를 형성하는 루프 부분의 어딘가에 결합하는 것이 바람직하다. 그 중에서도, 인간 CD14 mRNA의 번역개시영역은, 그 효과의 면에서 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 표적으로서 걸맞고, 또, 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 핵내에 축적시키는 것을 상정하면 번역 영역이 바람직하다.
구체적으로는, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는, 배열번호 l에서 표시되는 인간 CD14에 대한 mRNA 중의, 하기 (l)부터 (l9)에서 선택되는, 어느 하나의 배열로부터 이루어지는 영역을 표적으로서 설계하는 것이 바람직하다.
(1) 염기위치 23번의 시토신으로부터 62번의 아데닌까지의 40 염기의 염기 배열,
(2) 염기위치 93번의 구아닌으로부터 131번의 시토신까지의 39 염기의 염기 배열,
(3) 염기위치 117번의 구아닌으로부터 145번의 우리딘까지의 29 염기의 염기 배열,
(4) 염기위치 1241번의 아데닌으로부터 1280번의 구아닌까지의 40 염기의 염기 배열,
(5) 염기위치 1264번의 구아닌으로부터 1285번의 시토신까지의 22 염기의 염기 배열,
(6) 염기위치 1267번의 시토신으로부터 1320번의 아데닌까지의 54 염기의 염기 배열,
(7) 염기위치 1301번의 구아닌으로부터 1350번의 아데닌까지의 50 염기의 염기 배열,
(8) 염기위치 184번의 시토신으로부터 203번의 아데닌까지의 20 염기의 염기 배열,
(9) 염기위치 324번의 아데닌으로부터 343번의 시토신까지의 20 염기의 염기 배열,
(10) 염기위치 394번의 우리딘으로부터 413번의 구아닌까지의 20 염기의 염기 배열,
(11) 염기위치 444번의 시토신으로부터 489번의 시토신까지의 46 염기의 염기 배열,
(12) 염기위치 534번의 구아닌으로부터 553번의 우리딘까지의 20 염기의 염기 배열,
(13) 염기위치 644번의 우리딘으로부터 668번의 우리딘까지의 25 염기의 염기 배열,
(14) 염기위치 684번의 시토신으로부터 758번의 우리딘까지의 75 염기의 염기 배열,
(15) 염기위치 794번의 아데닌으로부터 828번의 구아닌까지의 35 염기의 염기 배열,
(16) 염기위치 864번의 시토신으로부터 918번의 구아닌까지의 55 염기의 염기 배열,
(17) 염기위치 994번의 구아닌으로부터 1048번의 시토신까지의 55 염기의 염기 배열,
(18) 염기위치 1064번의 구아닌으로부터 1108번의 우리딘까지의 45 염기의 염기 배열, 및
(19) 염기위치 1194번의 구아닌으로부터 1223번의 구아닌까지의 30 염기의 염기 배열 염기.
상기 (1) 내지 (19)의 염기 배열 중에서도, (l), (2), (4), (5), (7), (8), (11), (l6), (19)의 염기 배열로 이루어지는 영역은, 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 표적으로서 특히 유효하다고 생각된다.
따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 바람직한 예는, 상기 (l) 내지 (l9)에서 선택되는 어느 하나의 배열과 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드, 또는 상기 (1) 내지 (19)에서 선택되는 어느 하나의 배열의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드이며, 바람직하게는 (l), (2), (4), (5), (7), (8), (11), (16), (19)의 염기 배열에서 선택되는 어느 하나의 배열과 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드, (1), (2), (4), (5), (7), (8), (1l), (l6), (19)에서 선택되는 어느 하나의 배열의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드이다. 보다 바람직하게는, 상기 (1) 내지 (19)에서 선택되는 어는 것인가의 배열과 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드, 또는 (l) 내지 (19)에서 선택되는 어느 하나의 배열의 적어도 일부와 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드이며, 바람직하게는 (1), (2), (4), (5), (7), (8), (11), (16), (l9)의 염기 배열로부터 선택되는 어느 하나의 배열과 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드, 상기 (l), (2), (4), (5), (7), (8), (11), (l6), (19)로부터 선택되는 어느 하나의 배열의 적어도 적어도 일부와 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드이다. 이것들의 올리고뉴클레오티드는 10 이상 50 이하의 염기로부터 이루어지는 올리고뉴클레오티드인 것이 바람직하다. 예를 들면 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 바람직한 예는 상기 (1) 내지 (19)의 어느 하나의 염기 배열중의 10 이상의 일련의 염기 배열에 하이브리다이즈한다. 또한 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드이다.
또, 상기배열중, (1)부터 (3)은, 인간 CD14에 대한 mRNA의 5' 비번역영역에서 번역개시부위에 걸쳐서의 영역내에 위치하며, (8)부터 (19)는 번역영역내에, (4)부터 (7)은 3' 비번역영역내에 위치하는 배열이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는, 인간 CD14의 발현을 억제하는 활성을 갖는 것이 바람직하다. 본 발명자등은, 실시예 13에서 보이는 바와 같이 RNasceH 절단실험이, CD14의 발현을 억제함에 더하여 보다 효과적인 올리고뉴클레오티드를 선택하기 위한 지표로서 유효하다는 것을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는, 인간 CD14의 mRNA의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는, 또는 상보적인 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드중에서, RNaseH 절단실험에서 스코어 1 이상, 바람직하게는 2 이상인 것도 바람직하다. 또, 인간 CDl4 루시페라제융합 단백질 발현저해실험에서, 인간 CDl4의 발현을 20% 이상, 바람직하게는 40% 이상 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드, TNFα 생산 저지실험에서, TNFα의 생산을 저지할 수 있는 올리고뉴클레오티드, in vitro translation 반응에 의한 CDl4 번역저해실험에서 CD14의 번역을 30% 이상 저해할 수 있는 올리고뉴클레오티드가 바람직하다.
또한, 본 발명은 배열번호 10, 11, 12, l3, l6, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 39, 40, 4l, 42, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 61, 62, 63, 64, 70, 7l, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 8l, 83, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 102, l03, 109, l23, l24, 125, 130, 135, l36, 137, 138, 144, 155, 156, l59, l60, 161, 162, l63, l64. 165, l70, l71, l72, 177, 178, l79, 180, l81, 190, 191, 192, 193, 194, 196, l97, 198, 199, 209, 210, 2l5, 216, 220, 221, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234. 235, 236, 237, 238, 239, 240, 24l, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 또, 상기 배열표에는 P = S체, P = 0체의 올리고뉴클레오티드가 혼재하지만, 수식의 유무, 유도체의 종류에 관계없이, 여기에서는 상기 배열번호에 표시된 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 당해 올리고뉴클레오티드는, 상기 염기 배열을 갖고 바람직하게는 염기수 30 이하의 올리고뉴클레오티드이다.
안티센스 기술의 진보와 함께, 올리고뉴클레오티드의 의약품으로서의 효과를 높이는 것을 목적으로 하여 여러가지 유도체가 발견되어 왔다. 현재, 목적의 DNA나 mRNA와의 결합력, 조직선택성, 세포투과성, 누클레아제내성, 세포내 안정성이 높은, 여러가지 올리고뉴클레오티드유도체를 얻을 수 있다. 상술한 바와 같이, 본 발명의 올리고뉴클레오티드에는, 천연에는 존재하지 않은 것과 같은 염기, 당, 인산, 백본구조로 이루어지는 것도 포함하여, 모든 종류의 유도체가 포함된다. 본 발명에 포함되는 유도체의 예로서는, 백본 구조로서, 그 전부 또는 포스포디에스터(phosphodiester)결합, 포스포로시오에이트(phosphorothioate)결합, 메틸포스포네이트(methy1phosphonate)결합, 포스포로아미데이트(phosphoroamidate)결합, 포스포로디시오에이트(phosphorodithloate)결합, 모르폴리노기를 갖는 유도체등(쇼오지 요코등, 암과 화학요법, 20권, 1899-l907페이지, 1993년)을 들 수 있다.
또한, 데옥시리보뉴클레오티드구아니딘(DNG)(Robert P 등, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 92권, 6097페이지, 1995년)이나, 당의 2' 위(位)가, 다른 원자 혹은 치환기로 치환된 것이나α-리보스등, 당 부분을 수식한 것도 유도체의 예로서 들 수 있다(Bertrand JR. Biochem. Biophys. Res. Commun. 164권, 311페이지, 1989년).
또한, 당 부분이 다른 물질로 치환된 것, 일부의 염기가 이노신이나 유니버설베이스(A, T, C, G의 어느 것으로든 결합하는 염기)로 치환된 것, 올리고뉴클레오티드의 5' 말단 또는 3' 말단 혹은 내부에 콜레스테롤이나 아크리딘, 폴리-L-리딘, 소라렌(psoralen), 장쇄알킬등이 결합한 것 등의 올리고뉴클레오티드유도체도 본 발명에 포함된다(G. Degols 등, Nucleic Acid Research. l7권, 9341페이지, l989년 A. McConnaghie 등, J. Med. Chem. 38권, 3488페이지, l993년 G. Godard등 Eur. J. Biochem. 232권, 404페이지, 1995년).
본 발명에서는 상기 유도체의 바람직한 일례로서 포스포로티오에이트 결합을 백본 구조로서 갖는 유도체, 즉, 뉴클레오티드간의 결합기가 적어도 1개가 유황원자를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
이와 같은 올리고뉴클레오티드의 바람직한 예는, 배열번호 l0, 11, 12, l3, 16, l9, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 225, 226, 227, 228. 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 244, 245, 246, 247, 248로부터 선택되는 어는 하나의 올리고뉴클레오티드(즉, 상기 배열번호로부터 선택되든 어느 하나의 배열을 갖고, P = S체인 올리고뉴클레오티드)이다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는, 상기의 표적배열에 대해서 하이브리다이즈하는 것이라면, 표적이 되는 영역의 일부의 염기 배열과 완전하게 상보적인 배열을 포함하고 있을 필요가 없다. 역으로, 의약품개발에 동물실험이 불가결한 것을 고려하면, 인간 CD14를 코드하는 유전자에 하이브리다이즈하고, 또한, 모델동물의 CD14를 코드하는 유전자에도 하이브리다이즈하는 것과 같은 올리고뉴클레오티드가 유용하게 된다. 이러한 올리고뉴클레오티드는, 인간과 모델동물의 CD14를 코드하는 유전자의 염기 배열중, 상동성이 높은 영역을 표적으로서 작성하는 것이 가능하다. 예를 들어, 마우스의 CD14를 코드하는 유전자의 염기 배열을 배열표의 배열번호 3 및 4에 나타냈지만, 인간과 마우스로 상동성이 높은 부분을 조사하여, 인간과 마우스에서 일치하는 부분에 대해서는, 그것에 상보적인 염기 배열을, 일치하지 않는 부분에 대해서는, 이노신이나 5-니트로인돌로 대표되는 유니버설베이스를 사용함으로써, 마우스 CD14를 코드하는 유전자에도, 인간 CDl4를 코드하는 유전자에도 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드를 작성하는 것이 가능하다. 동일한 방법으로, 인간 및 인간 이외의 임의의 2종 이상의 동물의 CD14를 코드하는 유전자중 어디에든 하이브리다이즈하는 것과 같은 올리고뉴클레오티드를 작성할 수가 있다. 물론, 필요에 따라서, 백본에 포스포로시오에이트결합을 도입하여도 좋다. 이러한 올리고뉴클레오티드중, CD14의 발현을 억제하는 활성을 기대할 수 있는 바람직한 것은, 하기의 (1) 내지 (9)의 염기 배열로 이루어지는 영역을 표적으로 하여 설계하는 것이 가능하다. 단, 올리고뉴클레오티드의, 인간 및 인간 이외의 동물의 CD14에 대한 상보성을 높이는 목적으로, 이것들의 영역보다도 수(數) 염기 하류, 수 염기 상류까지를 포함하여 표적으로 하여도 좋다. 이과 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드의 구체예로서는, 하기의 (1) 내지 (9)의 염기 배열로부터 선택되는 어느 하나의 염기 배열에 상보적인 염기 배열에 있어서, 그 중의 적어도 1개 이상의 염기가 유니버설 염기로 치환된 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 들 수 있다. 혹은 하기 (l) 내지 (9)로부터 선택되는 어느 하나의 염기 배열중의, l0 이상의 일련의 염기 배열로 이루어지는 임의의 부분에 상보적인 염기 배열에 있어서, 그 중의 1개 이상의 염기가 유니버설베이스로 치환된 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 들 수 있다.
(1) 염기번호 1의 103번의 아데닌으로부터 131번의 시토신까지의 29 염기,
(2) 염기번호 1의 184번의 시토신으로부터 203번의 아데닌까지의 20 염기,
(3) 염기번호 1의 324번의 아데닌으로부터 343번의 시토신까지의 20 염기,
(4) 염기번호 1의 444번의 시토신으로부터 489번의 시토신까지의 46 염기,
(5) 염기번호 1의 684번의 시토신으로부터 758번의 우리딘까지의 75 염기,
(6) 염기번호 1의 794번의 아데닌으로부터 828번의 구아닌까지의 35 염기,
(7) 염기번호 1의 864번의 시토신으로부터 908번의 아데닌까지의 45 염기,
(8) 염기번호 1의 994번의 구아닌으로부터 1046번의 구아닌까지의 53 염기,
(9) 염기번호 1의 1064번의 구아닌으로부터 1108번의 우리딘까지의 45 염기,
보다 구체적으로는, 하기의 (10)부터 (18)로부터 선택되는 염기 배열의 전부,
혹은 그 중의 10 이상의 일련의 염기로 이루어지는 임의의 부분 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드이다. 이 들 배열은 인간, 마우스, 원숭이의 CDl4 mRNA의 모두에게 하이브리다이즈하도록 설계된 것이다.
(10)CAA CAA GCX XXX XXC XCG CTC CAT GGT CGX TAX XT
(11) TTC XTC GTC XAG CTC XCA XGG
(12)ACT GCC XCX GXT CXG CXT CXG XXT CXA CXC GCX TTA GAA
(13)AGX TXX TCX AGX GTC AGT TCC TXG AGG CXG GAX XXC XCX AGX ACA CGC
AXG GC
(14) GCX GXX ATC AGT CCX CXX TCG CCC AXT XCA GGA TTG TCA GAC AGG TCT
AXG XTG GXX AGG GCX GGG AAX XCG CG
(15)GCA CAC GCC XXT GGG CGT CTC CAT XCC XGX GTT XCG CAG CGC TA
(16)TXC XGX XXC XCG CAG XGA XTT GTG XCT XAG GTC TAG XCX XTG
(17)CTG TTG XAX CTG AGA TCX AGC ACX CTG AGC TTG GCX GGC AGX CCT TTA GG
(18)CCA XXA AGG GAT TXC CXT XXA GTG XCA GGT TXX CCA CXT XGG GCA GCT C
(단, 상기 (10)부터 (18)에 있어서 X는, 유니버설베이스 염기를 나타낸다)
보다 구체적으로는 배열번호 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256 및 257 에 나타난 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 들 수 있다.
이하, 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 제조방법을 설명한다.
올리고뉴클레오티드나 그 유도체는, 공지의 방법으로 제조하는 것이 가능하다(예를 들어, S. Agrawa1 등 Protocol for oligonucleotides and Analogs. Method in Molecular Biology series 20권, Humana Press, S. Agrawa1등 Antisense Research and Development 4권, 185페이지, 1994년).
천연의 DNA나 RNA라면, 화학합성기(機)를 사용하여 합성하거나, 인간 CD14를 코드하는 유전자를 주형으로 하여 PCR법에 의해 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 얻을 수 있다. 또한, 메틸포스포네이트형(型)이나 포스포로시오에이트형등, 유도체중에는, 화학합성기(예를들면 퍼킨엘마 재팬(주) 제조, 394형)을 사용하여 합성할 수 있는 것도 있다. 이 경우에는, 화학합성기에 첨부된 매뉴얼에 따라서 조작을 행하여, 얻어진 합성산물을 역상크로마토그래피 등을 이용하여 HPLC법에 의해 정제함으로써도, 목적의 올리고뉴클레오티드유도체를 얻을 수 있다.
인간 CD14를 코드하는 유전자의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드는 상술의 방법으로 합성한 올리고뉴클레오티드를 인간 CDI4 루시페라제융합 단백발현계를 이용한 번역저해 실험으로 그 효과를 확인하는 것이 가능하다. 또 인간 CD14를 통해 유도되는 염증성 인자의 발현을 억제하는 효과를 세포평가계를 이용하여 확인하는 것이 가능하다. 이 세포 평가계는, THP-1 세포를 PMA 및 비타민D로 처리함으로써 마크로파지양 세포로 분화 유도하여, LPS의 자극에 의해 TNFα를 생산 유도하고, 각종 올리고뉴클레오티드를 첨가하여 TNFα 생산이 저해되는가를 지표로 올리고뉴클레오티드의 유효성을 평가한다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는, 또 인간 CDl4를 발현하는 것과 같은 조환세포를 사용하여, 인간 CD14의 발현을 저지하는 활성을 지표로 평가, 선택한다. 혹은, RNaseH 절단실험에 있어서의 결합활성치를 지표로서 평가, 선택한다.
다음으로, 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 이용방법에 관해서 설명한다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 인간 CD14와 코드하는 유전자에 결합하는 것을 특징으로 하기 때문에, 검체중의 인간 CD14 유전자의 검출을 목적으로 하는 진단용 프로브로서 사용할 수 있다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 진단용의 프로브로서 사용하는 경우에는, 그것들을, 공지의 방법에 따라서, 라디오아이소토프나, 효소, 형광물질, 발광물질 등으로 표식한다. 다음으로, CD14의 발현을 조사하고 싶은 환자의 세포로부터 DNA 혹은 mRNA를 공지의 방법으로 조제하여, 이것을 피검물질로서, 표식프로브를 가하여 반응시킨 후, 세정하여 미반응의 표식프로브를 제거한다. 피검물질중에, 인간 CD14 DNA 혹은 RNA가 포함되어 있으면, 표식프로브는 그들과 결합한다. 결합 형성의 유무는 표식한 효소, 형광물질, 발광물질, 혹은 방사성동위원소등에 의한 발광, 형광, 방사능등을 지표로 하여 알 수가 있다.
따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 진단용 프로브로서, 외계로부터의 자극에 대한 각조직이나 세포의 CD14의 발현량의 증감을 검출하기도 하고, CD14를 통해 생기는 염증성 인자에 의해 야기되는 질환, 구체적으로는 전신성 염증반응증후군, 패혈증 및 쇼크, 궤양성대장염, 클론병, 자기면역반응 및 질환, 알레르기환자, 암, 이식편대숙주병, 치주병 또는 골다공증등의 진단에 이용하는 것이 가능하다. 또한, 염증의 정도나 치료 방법, 예후를 결정하기 위한 진단에도 사용하는 것이 가능하다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드를 의약용도에 사용하는 경우에는, 의약품으로서 사용하기에 알맞은 순도의 것을, 필요에 따라서, 약리학적으로 허용될 수 있는 첨가물과 함께, 인체에의 투여에 알맞은 제형으로 사용한다. 그 상세한 것은, 본 발명의 의약 조성물의 란에서 설명한다.
이하에, 본 발명의 의약 조성물을 설명한다. 본 발명의 의약 조성물은, 상술한 바와 같은 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 유효 성분으로 한다. 본 발명의 의약 조성물은, 또는, 인간 CDl4를 코드하는 유전자에 결합하여, 인간 CD14의 발현을 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드를 유효 성분으로 한다. 당해 의약 조성물은, 의약품으로서 사용하기에 알맞은 순도의 올리고뉴클레오티드를 직접 적당한 용매에 용해 혹은 현탁해서 사용하여도 좋다. 리보솜 중에 봉입하거나, 적당한 벡터로 짠 형태으로 하여 사용하여도 좋다. 또한, 필요에 따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드에 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 첨가하여, 주사제, 정제, 캡슐제, 점안제, 크림제, 좌제, 분무제, 파프제등 적당한 제형으로 하여 사용하여도 좋다. 약학적으로 허용될 수 있는 담체에는, 용매, 기제, 안정화제, 방부제, 용해제, 부형제, 완충제등이 포함된다.
이미 상술한 바와 같이 CD14는, 마크로파지, 단구, 쿠퍼세포 및 호중구막상에 존재하는 LPS 수용체이다. 세균이 감염하면 CD14를 통해 마크로파지나 호중구가 활성화되어, 염증성 인자를 유발한다고 생각되어져 있다. 따라서, 인간 CD14의 발현을 억제하는 올리고뉴클레오티드를 유효 성분으로 하는 본 발명의 의약 조성물은, CD14를 통해 생기는 염증성 인자에 의해서 야기되는 질환, 구체적으로는 전신성 염증반응증후군, 패혈증 또는 엔도톡신혈증, 패혈증성 쇼크 또는 엔도톡신 쇼크, 궤양성 재장염, 클론병, 자기면역반응 및 질환, 알레르기질환, 암, 복막염, 이식편대숙주병, 치주병 또는 골다공증 등의 예방 또는 치료약으로서 사용하는 것이 가능하다. 본 발명의 의약 조성물은 간쿠퍼 세포 상의 CD14에, 보다 선택적으로 작용한다고 생각되어지기 때문에, 특히, 패혈증 및 패혈증성 쇼크 또는, 그것들에 기인하는 전신증상 이나 장기부전의 예방/치료약으로서 높은 효과를 기대할 수 있다.
상기의 질환중, 전신성염증반응 증후군(SIRS)은, 균혈증, 외상, 열상, 췌(膵)염 및 수술침습이 원인이 되어 생기는 상태이고, 중독화하면 다장기상해 나아가 다장기부전에 빠져 사망에 이른다. SIRS에서 감염이 분명한 것이 패혈증이며, 그 대표적인 것이 엔도톡신혈증이다. 단, 외상, 열상, 수술침습으로도 외인성에 LPS가 진입하는 이외에 장내세균총으로부터 장관점막의 투과성이 항진하여 내인성 LPS가 진입하는 경우도 있다.(Ravin A. 등, Fed. Proc. 21권, 65페이지, 1962년). 예를 들어 감염이 인정되지 않더라도 외상후의 쇼크에 의해 장관막동맥의 혈유량이 감소하여 장관의 생리적 배리어가 파탄하여, 세균성 트랜스로케이션이 내인성 LPS에 기인하는 엔도톡신혈증을 일으키는 것이 보고되어 있다(Surgery 110권, 154페이지, 1991년). 현저하게 간장능이 저하하고 있는 모든 간염, 예를 들면 알콜성 간염, 극증간염 또는 간염경변에서는, 내인성의 LPS가 장관에서 문파에 들어가 간기능의 저하에 따라서 간장의 쿠퍼세포에 충분히 처리되지 않고 대순환에 들어 갔을 경우, DIC나 다장기부전이 생기는 것이 사망의 원이 되는 것이 보고되어져 있다(타니가와 큐이치등, 간담췌 27권, 381페이지, l993년). 열상에서는 열상부위에서 감염을 합병하여, 혈중 LPS가 상승하여 TNF에 대표되는 염증성 사이토카인이 생산되어 병태를 형성하는 것이 보고되고 있다(엔도 시게아쯔등, Burns, l9권, l24페이지, l993년). 복막염은, 그램음성균이 대부분을 차지하지만 장관내상재균에 유래하는 것도 있다. 이식편대숙주병은 골수이식에 있어서는 가장 높은 빈도로 생기는 질환이다. 이식편대숙주병에서는, 이식한 임파구가 숙주조직을 공격하여 특히 소화관에서 현저하게 나타나 장관으로부터 LPS가 대순환에 진입하여 엔도톡신혈증을 생기게 하는 것이 보고되고 있다(Moore K H. 등, Transplantation 44권, 249페이지, l987년). 그 밖의 엔도톡신혈증에 의한 중독한 질환으로서는, 성인성 호흡기 궁박증후군(ARDS)이나, 급성화농성 담관염, 범발성 복막염, 술후복강내농종등의 중증감염증등이 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는, 상술과 같은 제형으로 한 경우, 환자의 연령이나, 성별, 질환의 종류, 정도에 따라서, 그 투여방법, 그 투여량을 설정하여 사용하는 것이 가능하다. 즉, CD14의 발현을 조절하여, 병태를 개선하기에 알맞은 양을, 경구투여 또는 비경구투여한다. 예를 들면, 연속적으로 또는 1일당 1회 혹은 수회로 나눠서, 0.001∼2000 mg/kg이 투여된다. 정맥주사의 경우는 O.O1∼1OO mg/kg이 바람직하다. 또한, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 상기투여량에 있어서는 충분하게 안전하다. 경구투여에는 설하(舌下)투여를 포함한다. 비경구투여는, 흡입, 경피투여, 점안, 질내투여, 관절내투여, 직장투여, 동맥내투여, 정맥내투여, 국소투여, 근육내투여, 피하투여, 복강내투여등에서 적당한 방법을 선택하여 투여하면 된다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다. 이것들은 일예로서 나타내는 것으로, 본 발명은 이것들에 의해 조금도 한정되는 것이 아니다. 또한, 이하의 기재에 있어서 이용하는 약호는, 해당 분야에 있어서의 관용약호에 근거하는 것이다. 또, 실시예의 모든 조작은 주로, Molecular Cloning, A Laboratory Manual 2nd ed. (Sambrook J. et al., Cold Spring Harbor Laboratory, 1989년)를 참고로 하여 행하였다. 이것들을 인용하여 본 명세서의 내용으로 한다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.
실시예 1 인간 CDl4 유전자의 클로닝
THp-1 세포를 7.1×l05cells/well로 2웰, 6웰로 끼워 넣어 하룻밤낮 37℃로 인큐베이션하였다. 종농도 0.1μM이 되도록 1α,25-DihydroxyvitaminD3(BIOMOL 리서치사 제조)를 가하여 더욱 하룻밤낮 배양하였다. THP-1 세포를 회수하여 lml의 ISOGEN(TELTEST사 제조)를 이용하여 프로토콜에 따라서 RNA를 추출하였다. 다음으로 Super Script Preamplification System(GlBCO사 제조)에 따라서 올리고 dT 프라이머를 사용하여 추출한 RNA를 주형으로 하여 cDNA 라이브러리를 작제하였다.
작제한 cDNA 라이브러리 1.5㎍, 센스프라이머(5' ACGCGTCGACGAGTTCACAAGTGTGAAGCCTG 3': 배열번호 5), 안티센스 프라이머(5' ACATGCATGCTTAATAAAGGTGGGGCAAAGGG 3' : 배열번호 6)을 이용하여 PfuDNA 합성효소(Stratagene사 제조)에 의해서 94℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 180초의 사이클을 30회 반복하여 PCR 반응을 행하였다. 증폭돈 DNA 단편과 pUC118 플라스미드를 SalI 제한효소에 의해서 각각 처리하여, 1% 아가로스전기영동에 의해 정제하였다. 다음으로 pUC118 절단단편과 PCR 증폭 DNA 단편을 2 대 1의 비율로 혼합하여 Ligation kit(Takara사 제조)를 이용하여 라이게이션반응을 하였다. 다음으로 이 반응액을 JM109 세포에 트랜스펙트하고, 아가플레이트에 파종하여 밤새 37℃로 인큐베이션하였다. 생성한 프러그를 채취하여 PCR에 의해 목적의 조환체(pUCH14P-4 plasmid)인 것을 확인하였다.
실시예 2 인간 CD14 루시페라제융합 단백발현플라스미드의 구축
in vitro translation에 이용하는 RNA를 합성하기 위해서 필요한 발현 벡터를 얻기 위해서, pUCHl4P-4 플라스미드의 HindIII 및 BamHI 부위에서 절단한 유전자단편을 발현 벡터(pGEMluc 플라스미드)에 도입하여 글로닝하고 pGEMlucH14-9를 얻는다. 다음에 pGEMlucHl4-9 플라스미드를 주형으로 하여, 센스프라이머(5' CCCAAGCTTAAGTGTGAAGCCTGAAGCCGCCGG 3': 배열번호 7), 안티센스 프라이머(5' ATGGCGCCGGGCCTTTC TTTATGTTTTTGGCGTCTTCCAGTTGG' 3': 배열번호 8)를 사용하여 PCR 반응을 행하였다.
반응 산물을 에탄올 침전하여 BbeI 제한효소 및 HindIII 제한효소로 각각 소화하였다. 미리 양 제한효소로 처리한 pGEMlucDNA 단편과 PCR 증폭산물을 상법에 따라서 라이게이션하여 HB101 세포를 이용하여 클로닝하고 pGEMluc(ctg)Hl4-3을 얻었다.
실시예 3: 올리고뉴클레오티드의 합성
이하의 실시예에서 사용한 포스포디에스테르 올리고뉴클레오티드 및 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드는, 0PC 칼럼으로 정제한 조제물을 (주) 사와데·테크놀로지에 합성 위탁하여 입수하였다. 또한, 실시예 10, 11에서 사용한 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드는 마이크로본다스페아 C8(300 옹스트롬)로 정제한 조제물을 (주) 닛신보에 합성 위탁하여 입수하였다.
각각 인간 CD14에 대한 올리고뉴클레오티드 및 마우스 CD14에 대한 올리고뉴클레오티드를 표 l, 2, 3, 5, 6에 나타내었다. 또, 표1, 2, 3, 5, 6에 있어서 P = S란, 포스포디에스테르결합에 있어서 1원자의 탄소 (O)이 유황원자 (S)로 치환하고 있는 것을 나타내며, P = 0은 치환을 행하고 있는 않음을 나타낸다.
또한, 이하의 실시예에서 이용한 콘트롤 올리고뉴클레오티드에는, 배열을 지정하지 않고, 4 종류의 아미다이드를 혼합하여, 무작위한 DNA 합성을 행하여 얻은 무질서한 배열의 포스포디에스테르 올리고뉴클레오티드의 혼합물 또는 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드의 혼합물을 이용하였다.
인간 CD14를 코드하는 유전자에 대한 올리고뉴클레오티드(1)
인간 CD14를 코드하는 유전자에 대한 올리고뉴클레오티드(2)
인간 CD14를 코드하는 유전자에 대한 올리고뉴클레오티드(3)
인간 CD14를 코드하는 유전자에 대한 올리고뉴클레오티드(4)
마우스 CD14를 코드하는 유전자에 대한 올리고뉴클레오티드
실시예 4 인간 CD14 RNA의 합성
In vitro transcription반응은, Ribo max system(프로메가사 제조)를 이용하여 첨부의 방법에 준하여 행하였다. pGEMluc(ctg)H14-3플라스미드를 XhoI로 소화하여 Klenow fragment에서 말단을 평활화하였다. 다음으로 20㎍의 pGEM1uc(ctg) H14-3을 템플레이트로 하여 7-메틸구아닌 존재하에서 SP6 폴리메가제를 이용하여, 37℃에서 4시간 인큐베이트함으로써 in vitro transcription 반응을 행하였다. DNase에서 반응물을 처리하여 페놀로 추출하였다. 그 반응액을 에탄올 침전하여, 생긴 RNA 펠렛트를 풍건후, 증류수에 용해하였다. 합성한 RNA는 변성 아가로스전기영동에 의해 l.4 kb의 단일 밴드인 것을 확인하였다.
실시예 5 인간 비번역영역에 상보적인 올리고뉴클레오티드에 의한 CD14 번역저해 활성의 검출
시험관내 번역(in vitro translation) 반응은 프로메가사 Rabbit Reticulocyte Lysate System을 이용하여 첨부의 방법에 준하여 행하였다. 즉, 합성한 pGEMluc(ctg) H14-3 RNA와 피험(被驗) 미수식 올리고뉴클레오티드를 1 대 l0으로 혼합하여 60℃에서 2분간 가열하였다. 그 후, 혼합액에 아미노산, Rabbit Reticulocyte Lysate를 가하여, 30℃에서 2시간 인큐베이트하였다. 10㎕의 반응혼합액과 당량의 발광기질액(luciferase assay system : 프로메가사)을 혼합하고 5초동안 실온에서 반응시키고 반응액의 발광강도를 발광측정기(lumatLB96P)를 이용하여 측정하였다. 그 결과를 도 1에 나타낸다. 번역저해활성은 콘트롤 올리고뉴클레오티드(무작위 배열을 갖는 20mer의 포스포디에스테르 올리고뉴클레오티드) 처리시의 형광량을 100%로 하여 산출하였다. 30% 이상의 저해활성을 나타내는 배열은, OH0013A, OH0023A, OH0033A, OH0043A, OH0053A, OH0099A, OH0102A, OH0103A, OH0104A, OH0105A, OH0106A, OH0107A, OH0108A, OH0109A, OH0110A,OH0112A 및 OH0114이었다. 특히 번역개시부위의 근방에 강한 번역저해활성이 발견되었다.
실시예 6 다른 염기길이의 올리고뉴클레오티드의 CD14 번역저해활성
염기길이가 다른 8 종류의 안티센스 올리고뉴클레오티드(OH0102A-l5mer, OH0l02A-18mer, OH0102A-19mer, OH0102A, OHOl02A-21mer, OH0102A-22mer, OH0102A-25mer, OH0102A-30mer 각각의 염기 길이는 15mer, 18mer, 19mer, 20mer, 2lmer, 22mer, 25mer, 30mer) 및 콘트롤 올리고뉴클레오티드를 이용하여 실시예 5의 방법으로 번역저지활성을 검토하였다. 그 결과, 염기 길이에 상관없이 이용한 모든 올리고뉴클레오티드에서 번역저해활성이 검출되었다.(도 2)
실시예 7 인간 TNFα 생산 저해 활성의 측정(5' 비번역영역 및 번역개시부위근방)
THP-l 세포를 10% 비동화 소태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지에 부유하고, 1×1O5cel1s/wel1로 24웰 플레이트에 끼워 넣고 lOng/㎖의 Phorbol 12-Myristate 13-Acetate(SIGMA사 제조) 존재하에서 24시간 배양하였다. 배지를 교환하고, 종농도 100nM이 되도록 올리고뉴클레오티드 용액을 배양액에 가하였다. 4시간 인큐베이션후, 배양 상청을 제거하고 세포를 세정하였다. 세포를 재차 40ng/㎖의 lα, 25-DihydroxyvitaminD3(BIOMOL리서치사 제조) 존재하에서 l0% 비동화소태아혈청을 포함하는 RPMI1640 배지에서 20시간 배양하였다. 세포를 세정후, 1ng/㎖의 리포다당(LPS)(E.coli O55 : B5, Difco사 제조)를 첨가한 2% 인간혈청을 포함하는 RPMI1640로 치환하였다. 4시간 인큐베이션하고, 배양상청을 채취하였다. 배양상청중의 TNFα는, 인간 TNFα ELISA SYSTEM (아머샴사 제조)로 측정하였다.
TNFα의 측정은 인간 TNFα ELlSA SYSTEM 첨부의 프로토콜에 따라서 행하였다. 즉, 적절히 희석한 배양상청 50㎕을 반응플레이트에 옮겨 50㎕의 비오틴화 항체용액을 가하여 실온에서 2시간 방치하였다. 반응액을 제거하여 400㎕/well의 세정액으로 3회 각 웰을 세정하였다. 적절히 희석한 페르옥시다제를 표식한 스트레프토아비딘용액을 100㎕ 가하고, 다시 30분 방치하였다. 세정후, 발색기질 100㎕를 첨가하여 15분간 반응시켰다. 정지액 100㎕를 가하여 반응을 정지하고, 450㎚의 파장의 흡광도를 측정하여, 샘플 중의 TNFα 치를 산출하였다. 그 결과를 도 3에 나타낸다.
TNFα 생산저해활성은, SHO023A, SHO033A, SHO038A, SHO043A, SHO063A , SHO093A, SHO096A, SHO099A, SHOl02A, SHO104A, SHO105A, SH0106A, SH0107A, SHl0108A, SHO109A ,SH0l12A, SH0117A, SHO118A, SH0120A, SHO122A, SH0124A 및 SH0126A에서 검출되었따. 그 결과는 실시예 4의 번역저해활성을 나타낸 올리고뉴클레오티드의 결과와 잘 상관되어 있었다.
또한, 활성을 나타내는 배열은 크게 나눠서 인간 CD14 mRNA의 5' 비번역영역 및 번역개시부위근방 3개의 영역에 상보적인 것이 발견되었다. 활성영역 1은 CUGGAAGCCGCCGGGUGCCGCUGUGUAGGAAAGAAGCUAAA의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드에 의해 표시되었다. 활성영역 2는 GGUUCGGAAGACUUAUCGACCAUGG AGCGCGCGUCCUGC의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드에 의해 표시되었다. 또한 활성영역 3은 활성영역 2와 중복되게 존재하여 GAGCGCGCGUCCUGC UUGUUGCUGCUGCU의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드에 의해 표시되었다.
실시예 8 인간 TNFα 생산저해활성의 측정(3' 비번역영역)
실시예 7과 동일한 방법으로 인간 CD14 mRNA의 3' 비번역영역에 대한 올리고뉴클레오티드의 TNFα 생산저해실험의 결과를 도 4에 나타낸다.
TNFα 생산저해활성은, SH1241A, SHl256A, SHl259A, SHl261A, SHl264A, SH1265A, SHl266A, SH1267A, SH1268A, SH1269A, SH1270A, SH1271A, SH1273A, SHl276A, SH1281A, SH129lA, SH130lA, SHl31lA 및 SH133lA에서 검출되었다. 또한, 활성을 나타내는 배열은 크게 나눠 4개의 영역에 상보적인 것을 발견하였다. 활성영역 4는 AGAUCCAAGACAGAAUAAUGAAUGGACUCAAACUGCCUUG의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드에 의해 표시되었다. 활성영역 5는 GGACUCAAACUGCCU UGGCUU의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드에 의해 표시되었다. 또한 활성영역 6은 활성영역 5와 중복되게 존재하여 CUCAAACUGCCUUGGCUUCAGGG GAGUCCCGUCAGGACGUUGAGGACUUUUCGA의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드에 의해 표시되었다. 또한 활성영역 7은 GGACGUUGAGGACUUUUCGACCAAUUC AACCCUUUGCCCCACCUUUAUUA의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드에 의해 표시되었다.
실시예 9 마우스 TNFα 생산저해활성의 측정(5' 비번역영역 및 번역개시부위근방)
J774A.1 세포를 10% 비동화 소태아 혈청을 포함하는 DMEM 배지에 부유하여, 0.5×105cells/well로 24웰플레이트에 끼워 넣어 24시간 배양하였다. 배지교환하고 종농도 100nM이 되도록 올리고뉴클레오티드용액을 배양액에 가하였다. 4시간 인큐베이션한 후, 배양상청을 제거하여 세포를 세정하였다. 10% 비동화소태아혈청을 포함하는 RPM1640 배지에서 20시간 배양하였다. 세포를 세정후, 리포다당(LPS)(E. coli O111 : B4, DIFC0사 제조)를 종농도 10Ong/㎖이 되도록 첨가하였다. 2% 마우스혈청을 포함하는 DMEM으로 치환하였다. 4시간 인큐베이션하여, 배양상청을 채취하였다. 배양상청중의 TNFα는, 마우스 TNFα ELlSA SYSTEM (아머샴사 제조)로 측정하였다.
TNFα의 측정은 마우스 TNFα ELISA SYSTEM 첨부의 프로토콜에 따라서 행하였다. 즉, 적절히 희석한 배양상청 50㎕를 반응플레이트에 옮겨 50㎕의 비오틴화 항체용액을 가하여 실온에서 2시간 방치하였다. 반응액을 제거하고 400㎕/well의 세정액으로 3회 각 웰을 세정하였따. 적절하게 희석한 페르옥시다제를 표식한 스트레프토아비딘용액을 100㎕ 가하고, 다시 30분 방치하였다. 세정후, 발색기질 100㎕를 첨가하여 15분간 반응시켰다. 정지액 100㎕를 가하여 반응을 정지하고, 450㎚의 파장의 흡광도를 측정하여, TNFα 치를 산출하였다. 그 결과를 도 5에 나타냈다.
마우스 TNFα 생산저해활성은, 마우스 CD14 mRNA의 번역개시영역근방에 상보적 배열을 갖는 안티센스화합물, 예를 들면, SM1010-0220A, SM0102A-25mer, SM0103A-25mer, SM0104A-25mer, SM0105A-25mer, SM0106A-25mer, SM0107-0226A-25 mer 및 SM0109-25mer으로 강한 활성이 검출되었다.
실시예 10 마우스 쇼크 모델에 있어서의 SM0105A의 효과
마우스 CD14를 코드하는 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드 SM01015A-21mer을 사용하여, 이하의 실험을 행하였다.
(1) 치사성 엔도톡신 쇼크모델에 있어서의 효과
생후 6주령의 Balb/c 수컷 마우스(일본촬즈리버사 제조)를 체중을 기초로 7군(각군 l0마리)로 나눴다. 그 후, SM0105A 올리고뉴클레오티드를 3 ㎎/㎏에서 0.3 mg/kg, 콘트롤 올리고뉴클레오티드(무작위한 배열을 갖는 21mer의 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드)를 3 mg/kg ∼ 0.3 mg/kg 또는 생리식염액 10 ㎖/㎏(음성대조용, 오츠카제약)을 꼬리정맥에 단회 투여하였다.
피험약물투여의 24시간 후에, LPS(E. coli O55 : B5, Difco사 제조) 5 ㎍/㎏ 및 갈락토사민(D-Galactosamine hydrochloride, 와코쥰야큐사 제조) 700 ㎎/㎏을 꼬리 정맥에서 투여하여, 쇼크를 유발하였다. 메틸프레드니졸론 0.3 ㎎/㎏은 LPS 투여직전에 투여하였다. 쇼크유발후 24시간째까지 경시(經時)적으로 생존율을 판정하였다.
결과를 도 6에 나타냈다. 음성대조군인 생리식염액 투여군에서는 쇼크 유발후 9시간 경과 전에 전열이 사망하였다. 또한, 콘트롤 올리고뉴클레오티드를 투여한 군에서는 어떠한 투여량에 있어서도 쇼크유발후 10시간 경과 전에 전열 사망하였다. 한편 SM01015A 올리고뉴클레오티드 투여군에서는, 3㎎/㎏ 투여군에서는 24시간후에도 전열 생존하였고, 1㎎/㎏ 투여군에서는 9열, 0.3㎎/㎏ 투여군에서도 2열 생존이 확인되었다. SM0105A를 0.3㎎/㎏ 투여한 때의 생존율은, 동 용량의 메틸프레도니졸론을 투여한 때의 생존율과 동일하였다. 이 결과로부터 SM0105A의 용량의존적인 생존율 개선작용이 확인되었다.
(2) 치사성 엔드톡신 프레 쇼크 모델에 있어서의 SM0105A의 효과
Matsumoto, T.등의 방법(FEMS Immunology and Medical Microbio1ogy l7, 171-178 (l997))의 방법에 준해서 행하였다. 자유섭수(攝水)·섭이한 6주령의 수컷 Balb/c 마우스에게 시클로포스파미드(cyclophosphamide ; 이하 CPA)를 200 mg/kg의 용량으로 꼬리정맥에 투여하였다. CPA 투여후 7일째에, 생리식염수에 용해한 이타카라게닌(Iota carrageenan (Sigma사 제조))를 5 ㎎ 복강내 투여하였다. 이타가라게닌의 투여후 12시간째에 LPS(E. coli l27 : B8, Difco사 제조)를 30㎍/kg의 용량으로 꼬리정맥에 투여하여, LPS 투여후 l 및 24시간째에, 헤파린용액(1000 IU/㎖, 모찌다제약)으로 처리해 놓은 유리모세관(Drumlnond Scientific Company)을 이용하여, 50㎕ 안저동맥에서 채취한 혈액을 원심분리하여 혈장을 채취하여, GPT 활성을 혈중 GPT 활성 측정용 슬라이드 GPT/ALT-P(후지필름)및 후지 DRI-CHEM 5000(후지필름)을 이용하여 측정하였다. 용매(생리식염수), 콘트롤 올리고뉴클레오티드 및 SM0105A는, LPS 투여전 24시간째에 10 ㎖/㎏의 용량으로 꼬리정맥에 투여하여, 수용성 프레드니졸론(prednisolone)은 LPS 투여 직전에 동일하게 해서 투여하였다.
그 결과, 용매 투여군에서 50%의 생존율로 비교하여 SM0105A 투여군 및 프레드니졸론 투여군에서는 100%의 생존율을 나타냈다. SM0105A 투여군에서는 간장에 있어서 GTP의 현저한 상승의 억제가 발견되었지만, 이와 같은 효과는 프레드니졸론 투여군에서는 확인되지 않았다(도 7).
실시예 11 마우스에 있어서의 급성 독성
SM0105A-21mer을 사용하여 이하의 실험을 행하였다.
생후 6주령의 Balb/c 수컷 마우스(일본촬즈리버사 제조)를, 체중을 기초로 2군(각군 4마리)로 나눴다. 그 후, SM0105A, 콘트롤 올리고뉴클레오티드(무작위한 배열을 갖는 21mer의 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드)를 각각 30 mg/kg, 또는 생리식염액 10 ㎖/㎏(음성대조용, 오츠카제약)을 꼬리정맥에 단회 투여하였다. 그 후, 7일째 전까지 경시적으로 생존율 또는 혈중 GOT 치를 측정하였다.
생리식염수 투여군 및 올리고뉴클레오티드 투여군 모두 전열 생존한 혈중 GOT 치도 정상역내이며, 양군에서 차는 없었다.
실시예 12 인간 CD14 루시페라제 융합 단백질 발현 저해활성의 측정
(1) 인간 CD14 루시페라제 융합 단백질을 발현하는 HeLa 조환세포주의 수립
인간 CD14 루시페라제 융합 단백발현 저해실험에 이용하는 HeLa 조환세포주를 수립하기 위해서, 인간 CD14 루시페라제 융합 단백질 발현 플라스미드(pM16451)의 구조를 행하였다. 즉 실시예 2에서 작제한 pGEMluc H14-9에서 HindIII 및 Xhol로 절단한 유전자 단편을 pcDNA 3.1(+)(Invitrogen사)의 HindIII/XhoI 사이트에 상법에 따라서 삽입하고, JM109 세포를 이용하여 클로닝하여 pM1651을 얻었다.
인간 자궁경암유래세포인 HeLa 세포에 pM1651을 도입하여, 인간 CD14 루시페라제융합 단백질을 발현하는 HeLa 조환 세포주의 수립을 행하였다. 즉 직경 100㎜의 dish에 5×105개의 HeLa 세포를 끼워 넣고, 하룻밤 배양한 후에 10㎍의 pM1651을 인산칼슘법으로 도입하였다. 10% 소태아 혈청을 포함하는 DMEM 배지에서 하룻밤 배양하였다. 세포를 96웰 플레이트에 100 또는 500개/웰씩 파종하여, 그 다음 날부터 G-418을 포함하는 배지에서 조환세포주의 선택을 행하였다. 얻어진 G-418내성주중에서 루시페라제활성을 나타낸 He1651d3-20 클론을 이용하여 안티센스 올리고에 의한 단백질 발현 저해 실험을 행하였다.
(2) 인간 CDl4 루시페라제융합 단백 발현저해활성의 측정(5' 비번역영역, 번역개시 부위 근방 영역 및 번역영역)
(l)에서 준비한 HeLa 조환 세포(Hel651d3-20)를 10% 소태아혈청, 0.6 mg/mLG-418을 포함하는 DMEM 배지에 부유하여, 1×105cells/well에서 24웰 플레이트에 끼워 넣고 하룻밤 배양하였다. 오쯔카사 제조 생리식염수로 2회 세정한 후, Opti-MEM 배지(GibcoBRL 사 제조)를 450㎕/well 첨가하였다. 계속해서, GibcoBRL 사의 매뉴얼에 따라서, 리포펙틴과 배열번호 9, 10, 11, 12, 13, 14, l5, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 32, 33, 35, 37의 올리고뉴클레오티드 종농도 100nM이 되도록 첨가하여, 37℃에서 6시간 인큐베이션하여 배양상청을 제거하여 세정하였다. 세포를 재차 10% 소태아혈청, 0.6 ㎎/mLG-418을 포함하는 DMEM 배지에서 더욱 하룻밤 배양하였다. 세포를 세정한 후, Passive Lysis Buffer(Promega사 제조)에 세포를 용해하였다. 그 중, 20㎕을 이용하여, 세포용해액중의 루시페라제활성을 측정하였다. 루시페라제활성 측정은 Promega사의 모트콜에 따라서 행하였다. 즉, 형광측정용 플레이트(DYNEX사, Microlite2 plate)중에서 세포용해액과 Luciferase Assay Reagent II(Promega사)를 혼합하고 반응을 개시하여, 10초간의 발광강도를 측정하였다. 측정에는 verthold사의 루미노메타(LB96P)를 이용하였다. 각 올리고뉴클레오티드의 단백 발현저해활성은 올리고뉴클레오티드를 첨가하지 않은 샘플의 발광강도를 100%로 하여 계산하였다. 그 결과를, 도 8에 나타낸다. 5' 비번역영역에서 40% 이상의 저지활성을 나타낸 안티센스 올리고뉴클레오티드는 SH0023A, SHO033A, SHO038A 및 SHO043A였다. 한편, 번역시작영역에서 40% 이상의 저지활성을 나타낸 안티센스 올리고뉴클레오티드는, SH0102A, SH0104A, SH0105A, SH0106A, SH0107A, SH0l08A, SH0l09A, SHO1l2A, SH0114A, SHO117A, SHO118A, SH0122A 및 SH10126A였다. 이 들 세포를 사용한 단백발현억제활성의 결과는, 실시예 5의 in vitro translation 반응에 의한 CD14 번역저해활성의 결과와 잘 일치하고 있었다.
실시예 13 RNaseH 절단 실험에 의한 안티센스 올리고 결합측정
2㎍의 실시예 4로 얻은 인간 CD14에 대한 RNA와 표 3에 나타낸 피험미수식 올리고뉴클레오티드를 1 : 1의 mol비로 혼합하여, 5배 농도의 RNascH 완충액 1㎕ 및 적량의 증류수를 가하여 4㎕의 혼합액을 조정하였다. 이 혼합액을 75℃에서 가열한 후, 냉각하여, O.05 U의 RNaseH를 가하여 37℃에서 15분간 반응하였다. 10㎍의 2배 농도의 정지용액(95% 포름아미드, 0.5 mM EDTA pH8.0, O.025% SDS, O.025% Xylene Cyano1, O.025% BPB)를 가하고 반응을 정지하였다. 4㎕의 피험물을 65℃에서 전처리하고, 6M 요소변성 5% 폴리아크릴아미드 46겔(폭 l60 mm, 높이 330 mm, 두께 0.35 mm)로 15 mA/플레이트로 전기영동하였다. 5000배로 희석한 SYBER Green Ⅱ(와코쥰야코 제조)로 염색하여 생긴 밴드를 Fluor Imager SI(몰리큘러다이나믹스사 제조)로 측정하였다. 결합활성의 스코어는 이하의 식에 의해서 산정하였다.
결과를 표 4에 정리하였다.
결합치 = (피험 올리고뉴클레오티드 형광치 - 콘트롤 올리고뉴클레오티드 형광치) / (SH0102A 형광치 - 콘트롤 올리고뉴클레오티드 형광치)
스코어 결합치
0 0.5 ＞ X
1 0.9 ＞ X ≥ 0.5
2 1.3 ＞ X ≥ 0.9
3 X ≥ 1.3
절단 활성을 나타낸 안티센스 올리고뉴클레오티드중 번역개시영역에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 0HOl02A-15mer, 0H0l04A-15mer, 0HO114A-l5mer이며, 3' 비번역영역에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 0Hl254A-l5mer, OH1264A-l5mer, OH1304A-15mer, 및 OH1314A-15mer 이었다. 이것들의 올리고뉴클레오티드는, 실시예 7 및 8의 인간 TNFα 생산저해활성의 측정결과로부터, TNFα 생산저해에 유효하다고 생각된 활성영역 2, 4, 7의 일부에 상보적인 배열을 갖는 것이다. 따라서, RNaseH 절단실험의 결과는 TNFα 생산저해활성의 결과와 잘 일치하였다.
실시예 14: 인간 TNFα 생산저해활성의 측정(번역영역)
실시예 l3에서 분명해진 안티센스 올리고뉴클레오티드 결합영역에 관해서 각 영역에서 대표적인 안티센스 올리고뉴클레오티드(표 5 참조)를 실시예 3의 방법으로 합성하여 실시예 7에 기재된 방법에 따라서 평가하였다. 즉, SHOl08A, SHO184A , SH0324A, SHO394A, SHO444A, SHO457A, SHO470A, SHO534A, SHO649A, SHO71A, SHO720A, SHO809A, SHO864A, SHO899A, SHl014A, SHl074A, SHl199A, SH1204A, SH1259A, SH131lA 및 콘크롤 올리고뉴클레오티드를 종농도 30 nM으로 THP-1세포에 처리하였다. 4시간 인큐베이션하고, 배양상청을 채취하였다. 배양상청중의 TNFα는, 인간 TNFα ELISA SYSTEM(아마샴사 제조)로 측정하였다.
결과를 도 9에 나타낸다. 이 것에 의해서, 이하에 나타낸 12의 영역에서 저지활성을 확인할 수 있었다.
활성영역 8은 CUUGUGAGCUGGACGA의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SHO184A에 따라서 표시되었다.
활성영역 9는 AAGCGCGUCGAUGCGGACGCCGACCCGCGGCAGUA의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SH0324A에 따라서 표시되었다.
활성영역 lO은 UCACAGUGGGAGCCG의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SHO394A에 따라서 표시되었다.
활성영역 ll은 CGUGUGCUAGCGUACUCCCGCCUCAAGCAACUGACGCUCGAGGAC의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SH0444A, SH0457A 및 SHO470A에 따라서 표시되었다.
활성영역 12는 GGACUUGCACUUUCC의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SHO534A에 따라서 표시되었다.
활성영역 l3은 UACUGAGCAUUGCCCAAGCACACUCGCCUGCCUUU의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SH0649A에 따라서 표시되었다.
활성영역 14는 CGCGCCUUCCCGGCCCUUACCAGCCUAGACCUGUCUGACAAUCCUGGACUGGG CGAACGCGGACUGAUGGCGGCU의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SH0714A 및 SH0720A에 따라서 표시되었다.
활성영역 15는 UCCAGAAUCUAGCGCUGCGCAACACAGGAAUGGAGACGCCCACAG의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SH0809A에 따라서 표시되었다.
활성영역 16은 CCCACAGCCUAGACCUCAGCCACAACUCGCUGCGCGCCACCGUAAACCCUAGCG의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SH0899A에 따라서 나타내었다.
활성영역 l7은 GACUGCCAGCCAAGCUCAGAGUGCUCGAUCUCAGCUGCAACAGACUGAACAGGGC의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SHl014A에 따라서 나타냈었다.
활성영역 18은 GCUGCCCGAGGUGGAUAACCUGACACUGGACGGGAAUCCCUUCCU의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 SHl074A, 활성영역 19는 GUGUCGGCAACCCUGGUGCUGCUCC의 배열의 일부에 상보적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 SHl199A 및 SH1204A에 따라서 나타내었다.
실시예 15 콘센서스 올리고뉴클레오티드 설계와 CDl4 발현 저지 활성 측정
(l) 콘센서스 올리고뉴클레오티드의 설계
인간 CD14를 코드하는 유전자와 인간이외의 동물의 CDl4를 코드하는 유전자의 양쪽에 결합하는 바와 같은 올리고뉴클레오티드(이하, 콘센서스 올리고뉴클레오티드라고 부른다)를 이하 방법으로 작성하였다. 우선, 결합영역으로서 유효하다고 생각되는 배열번호 1의 93번 구아닌으로부터 145번 우리딘까지의 영역에 착목하여, 인간과 마우스의 배열을 비교하였다. 그 영역중, 실시예 8 및 실시예 12에서 강한 활성을 보인 103번의 우리딘으로부터 137번의 우리딘까지의 배열에 상보적인 종류의 21Mer의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 설계한 결과, 인간과 마우스에서 배열이 일치한지 않은 염기(도 10중 X로 기대한 염기)는 모두, 시토신 또는 우리딘의 피리미딘 치환이었다. 거기서, X로 기재한 염기를 피리미딘염기와 결합한 염기인 이노신으로 치환한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 설계하여, 실시예 3에 기재된 방법으로 합성하였다. 합성한 콘센서스 올리고뉴클레오티드를 표 6에 나타냈다.
(2) 콘센서스 올리고뉴클레오티드에 의한 인간 CD14 루시페라제융합 단백발현저해활성 및 마우스 TNFα 생산저해활성의 측정
실시예 12기재의 인간 CD14 루시페라제융합 단백질을 발현하는 HeLa 조환세포에 의한 CDl4 루시페라제융합 단백발현저해활성을, SU0103A-2mer, SUO104A-2 lmer, SU0l05A-21mer, SUO106A-21mer, SUO107A-21mer, SU01081A-2lmer, SU0l09A-21mer, SU0llOA-21mer, SUO11lA-21mer, SUO112A-21mer, SUOl13A-21mer, SU01l4A-21mer, SUO115A-2lmer, SUO1l6A-21mer, SU0117A-2lmer 및 SU0118A-21mer에서 활성비교하였다. 그 결과를 도 10에 나타내었다. 40% 이상의 저지활성을 보인 consensus 올리고뉴클레오티드는, SUO103A-2lmer, SU0104A-21mer, SUOl05A-21mer, SUOl06A-21mer, SUO107A-21mer, SU0108A-2lmer, SU0109A-21mer 이었다.
다음으로 SUOl04A-21mer, SUO105A-21mer, SUO106A-21mer 및 SU0108A-21mer 에 대해서 마우스 TNFα 생산저해활성을 측정하였다. 측정은, J774A.1 세포 대신 RAW 264.7 세포를 이용하여, 실시예 9의 방법에 준하여 행해서, 배양상청중의 TNFα는, 마우스 TNFα ELISA SYSTEM(아마샴사 제조)로 측정하였다. 결과를 도 11에 나타낸다.
SU0l04A-21mer, SU0105A-21mer, SUO106A-21mer 및 SUO108A-21mer의 마우스 TNFα 생산 억제 활성은 각각 24%, 33%, 54%, 69% 였다. 또한 콘트롤 올리고뉴클레오티드는 3%의 저해였다. 이 결과로부터, SUO10lA-21mer, SU0105A-21mer, SUO106A-21mer, SUO108A-21mer는, 마우스에게도 사람에게도 작용을 나타내는 올리고뉴클레오티드인 것을 알 수 있었다.
본 발명에 의해서, 인간 CDl4를 코드하는 유전자의 일부와 하이브리다이즈하는 배열을 포함하는 올리고뉴클레오티드가 제공되며, 또한, 해당 올리고뉴클레오티드 및 의학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하는 의약 조성물이 제공된다. 이에 따라서 효과적으로 염증성 인자를 억제하는 것이 가능하다. 즉, 인간 CD14의 발현을 억제하는 올리고뉴클레오티드는, CDl4을 통해 생기는 염증성 인자에 의해서 야기되는 질환, 구체적으로는 전신성 염증반응증후군, 엔도톡신 혈증 및 쇼크, 궤성성 대장염, 클론병, 자기면역반응, 알레르기질환, 암, 이식편대숙주병, 치주병 또는 골다공증등의 예방 또는 치료약으로서 사용하는 것이 가능하다.
<서열 표>
배열 번호: 1
배열의 길이: 1351
배열의 형태: 핵산
쇄의 수: 1 본쇄
토폴로지: 직쇄상
배열의 종류: mRNA
기원
생물명: 인간
배열:
GAAGAGUUCA CAAGUGUGAA GCCUGGAAGC CGCCGGGUGC CGCUGUGUAG GAAAGAAGCU 60
AAAGCACUUC CAGAGCCUGU CCGGAGCUCA GAGGUUCGGA AGACUUAUCG ACCAUGGAGC 120
GCGCGUCCUG CUUGUUGCUG CUGCUGCUGC CGCUGGUGCA CGUCUCUGCG ACCACGCCAG 180
AACCUUGUGA GCUGGACGAU GAAGAUUUCC GCUGCGUCUG CAACUUCUCC GAACCUCAGC 240
CCGACUGGUC CGAAGCCUUC CAGUGUGUGU CUGCAGUAGA GGUGGAGAUC CAUGCCGGCG 300
GUCUCAACCU AGAGCCGUUU CUAAAGCGCG UCGAUGCGGA CGCCGACCCG CGGCAGUAUG 360
CUGACACGGU CAAGGCUCUC CGCGUGCGGC GGCUCACAGU GGGAGCCGCA CAGGUUCCUG 420
CUCAGCUACU GGUAGGCGCC CUGCGUGUGC UAGCGUACUC CCGCCUCAAG GAACUGACGC 480
UCGAGGACCU AAAGAUAACC GGCACCAUGC CUCCGCUGCC UCUGGAAGCC ACAGGACUUG 540
CACUUUCCAG CUUGCGCCUA CGCAACGUGU CGUGGGCGAC AGGGCGUUCU UGGCUCGCCG 600
AGCUGCAGCA GUGGCUCAAG CCAGGCCUCA AGGUACUGAG CAUUGCCCAA GCACACUCGC 660
CUGCCUUUUC CUACGAACAG GUUCGCGCCU UCCCGGCCCU UACCAGCCUA GACCUGUCUG 720
ACAAUCCUGG ACUGGGCGAA CGCGGACUGA UGGCGGCUCU CUGUCCCCAC AAGUUCCCGG 780
CCAUCCAGAA UCUAGCGCUG CGCAACACAG GAAUGGAGAC GCCCACAGGC GUGUGCGCCG 840
CACUGGCGGC GGCAGGUGUG CAGCCCCACA GCCUAGACCU CAGCCACAAC UCGCUGCGCG 900
CCACCGUAAA CCCUAGCGCU CCGAGAUGCA UGUGGUCCAG CGCCCUGAAC UCCCUCAAUC 960
UGUCGUUCGC UGGGCUGGAA CAGGUGCCUA AAGGACUGCC AGCCAAGCUC AGAGUGCUCG 1020
AUCUCAGCUG CAACAGACUG AACAGGGCGC CGCAGCCUGA CGAGCUGCCC GAGGUGGAUA 1080
ACCUGACACU GGACGGGAAU CCCUUCCUGG UCCCUGGAAC UGCCCUCCCC CACGAGGGCU 1140
CAAUGAACUC CGGCGUGGUC CCAGCCUGUG CACGUUCGAC CCUGUCGGUG GGGGUGUCGG 1200
GAACCCUGGU GCUGCUCCAA GGGGCCCGGG GCUUUGCCUA AGAUCCAAGA CAGAAUAAUG 1260
AAUGGACUCA AACUGCCUUG GCUUCAGGGG AGUCCCGUCA GGACGUUGAG GACUUUUCGA 1320
CCAAUUCAAC CCUUUGCCCC ACCUUUAUUA A 1351
배열 번호 2
배열의 길이: 1570
배열의 형태: 핵산
쇄의 수: 2 본쇄
토폴로지: 직쇄상
배열의 종류: 게놈 DNA
기원
생물명: 인간
배열:
CAGAATGACA TCCCAGGATT ACATAAACTG TCAGAGGCAG CCGAAGAGTT CACAAGTGTG 60
AAGCCTGGAA GCCGCCGGGT GCCGCTGTGT AGGAAAGAAG CTAAAGCACT TCCAGAGCCT 120
GTCCGGAGCT CAGAGGTTCG GAAGACTTAT CGACCATGGT GAGTGTAGGG TCTTGGGGTC 180
GAACGCGTGC CACTCGGGAG CCACAGGGGT TGGATGGGGC CTCCTAGACC TCTGCTCTCT 240
CCCCAGGAGC GCGCGTCCTG CTTGTTGCTG CTGCTGCTGC CGCTGGTGCA CGTCTCTGCG 300
ACCACGCCAG AACCTTGTGA GCTGGACGAT GAAGATTTCC GCTGCGTCTG CAACTTCTCC 360
GAACCTCAGC CCGACTGGTC CGAAGCCTTC CAGTGTGTGT CTGCAGTAGA GGTGGAGATC 420
CATGCCGGCG GTCTCAACCT AGAGCCGTTT CTAAAGCGCG TCGATGCGGA CGCCGACCCG 480
CGGCAGTATG CTGACACGGT CAAGGCTCTC CGCGTGCGGC GGCTCACAGT GGGAGCCGCA 540
CAGGTTCCTG CTCAGCTACT GGTAGGCGCC CTGCGTGTGC TAGCGTACTC CCGCCTCAAG 600
GAACTGACGC TCGAGGACCT AAAGATAACC GGCACCATGC CTCCGCTGCC TCTGGAAGCC 660
ACAGGACTTG CACTTTCCAG CTTGCGCCTA CGCAACGTGT CGTGGGCGAC AGGGCGTTCT 720
TGGCTCGCCG AGCTGCAGCA GTGGCTCAAG CCAGGCCTCA AGGTACTGAG CATTGCCCAA 780
GCACACTCGC CTGCCTTTTC CTACGAACAG GTTCGCGCCT TCCCGGCCCT TACCAGCCTA 840
GACCTGTCTG ACAATCCTGG ACTGGGCGAA CGCGGACTGA TGGCGGCTCT CTGTCCCCAC 900
AAGTTCCCGG CCATCCAGAA TCTAGCGCTG CGCAACACAG GAATGGAGAC GCCCACAGGC 960
GTGTGCGCCG CACTGGCGGC GGCAGGTGTG CAGCCCCACA GCCTAGACCT CAGCCACAAC 1020
TCGCTGCGCG CCACCGTAAA CCCTAGCGCT CCGAGATGCA TGTGGTCCAG CGCCCTGAAC 1080
TCCCTCAATC TGTCGTTCGC TGGGCTGGAA CAGGTGCCTA AAGGACTGCC AGCCAAGCTC 1140
AGAGTGCTCG ATCTCAGCTG CAACAGACTG AACAGGGCGC CGCAGCCTGA CGAGCTGCCC 1200
GAGGTGGATA ACCTGACACT GGACGGGAAT CCCTTCCTGG TCCCTGGAAC TGCCCTCCCC 1260
CACGAGGGCT CAATGAACTC CGGCGTGGTC CCAGCCTGTG CACGTTCGAC CCTGTCGGTG 1320
GGGGTGTCGG GAACCCTGGT GCTGCTCCAA GGGGCCCGGG GCTTTGCCTA AGATCCAAGA 1380
CAGAATAATG AATGGACTCA AACTGCCTTG GCTTCAGGGG AGTCCCGTCA GGACGTTGAG 1440
GACTTTTCGA CCAATTCAAC CCTTTGCCCC ACCTTTATTA AAATCTTAAA CAACGGTTCC 1500
GTGTCATTCA TTTAACAGAC CTTTATTGGA TGTCTGCTAT GTGCTGGGCA CAGTACTGGA 1560
TGGGGAATTC 1570
배열번호: 3
배열의 길이: 1447
배열의 형태: 핵산
쇄의 수: 1 본쇄
토폴로지: 직쇄상
배열의 종류: mRNA
기원
생물명: 마우스
배열:
CGAACAAGCC CGUGGAACCU GGAAGCCAGA GAACACCACC GCUGUAAAGG AAAGAAACUG 60
AAGCCUUUCU CGGAGCCUAU CUGGGCUGCU CAAACUUUCA GAAUCUACCG ACCAUGGAGC 120
GUGUGCUUGG CUUGUUGCUG UUGCUUCUGG UGCACGCCUC UCCCGCCCCA CCAGAGCCCU 180
GCGAGCUAGA CGAGGAAAGU UGUUCCUGCA ACUUCUCAGA UCCGAAGCCA GAUUGGUCCA 240
GCGCUUUCAA UUGUUUGGGG GCGGCAGAUG UGGAAUUGUA CGGCGGCGGC CGCAGCCUGG 300
AAUACCUUCU AAAGCGUGUG GACACGGAAG CAGAUCUGGG GCAGUUCACU GAUAUUAUCA 360
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UCGGAGCCCU GCGUGUGCUC GGGAUUUCCG GCCUCCAGGA ACUGACUCUU GAAAAUCUCG 480
AGGUAACCGG CACCGCGCCG CCACCGCUUC UGGAAGCCAC CGGACCCGAU CUCAACAUCU 540
UGAACCUCCG CAACGUGUCG UGGGCAACAA GGGAUGCCUG GCUCGCAGAA CUGCAGCAGU 600
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GAGCUCCAUC AUCCCAAGCA GUGGCCUUGU CAGGAACUCU GGCUUUGCUC CUAGGAGAUC 1200
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CCUCUGCUUU AAAUUUAUUA AAAUCUUAAU CCACGAUGUA AGGAAAGAAA GGCAGUCAAG 1320
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배열의 형태: 핵산
쇄의 수: 1 본쇄
토폴로지: 직쇄상
배열의 종류: 기타의 핵산 합성 DNA
배열:
CACACGCTCC ATGGTCGGTA G 21

Claims (22)

  1. 인간 CDl4를 코드하는 유전자의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드.
  2. 제 1항에 있어서, 인간 CD14을 코드하는 유전자의 적어도 일부와 상보적인 배열을 포함하는 올리고뉴클레오티드.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 인간 CD14mRNA의 5' 비번역영역, 번역개시영역, 번역영역 또는 3' 비번역영역의 각각 또는 그 적어도 일부와 상보적인 배열을 적어도 하나를 포함하는 올리고뉴클레오티드.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한항에 있어서, 배열번호 l의 염기 배열의
    (1) 염기위치 23번의 시토신으로부터 62번의 아데닌까지의 40 염기의 염기 배열,
    (2) 염기위치 93번의 구아닌으로부터 131번의 시토신까지의 39 염기의 염기 배열,
    (3) 염기위치 117번의 구아닌으로부터 145번의 우리딘까지의 29 염기의 염기 배열,
    (4) 염기위치 1241번의 아데닌으로부터 1280번의 구아닌까지의 40 염기의 염기 배열,
    (5) 염기위치 1264번의 구아닌으로부터 1285번의 시토신까지의 22 염기의 염기 배열,
    (6) 염기위치 1267번의 시토신으로부터 1320번의 아데닌까지의 54 염기의 염기 배열,
    (7) 염기위치 1301번의 구아닌으로부터 1350번의 아데닌까지의 50 염기의 염기 배열,
    (8) 염기위치 184번의 시토신으로부터 203번의 아데닌까지의 20 염기의 염기 배열,
    (9) 염기위치 324번의 아데닌으로부터 343번의 시토신까지의 20 염기의 염기 배열,
    (10) 염기위치 394번의 우리딘으로부터 413번의 구아닌까지의 20 염기의 염기배,열
    (11) 염기위치 444번의 시토신으로부터 489번의 시토신까지의 46 염기의 염기 배열,
    (12) 염기위치 534번의 구아닌으로부터 553번의 우리딘까지의 20 염기의 염기 배열,
    (13) 염기위치 644번의 우리딘으로부터 668번의 우리딘까지의 25 염기의 염기 배열,
    (14) 염기위치 684번의 시토신으로부터 758번의 우리딘까지의 75 염기의 염기 배열,
    (15) 염기위치 794번의 아데닌으로부터 828번의 구아닌까지의 35 염기의 염기 배열,
    (16) 염기위치 864번의 시토신으로부터 918번의 구아닌까지의 55 염기의 염기 배열,
    (17) 염기위치 994번의 구아닌으로부터 1048번의 시토신까지의 55 염기의 염기 배열,
    (18) 염기위치 1064번의 구아닌으로부터 1108번의 우리딘까지의 45 염기의 염기 배열, 및
    (19) 염기위치 1194번의 구아닌으로부터 1223번의 구아닌까지의 30 염기의 염기 배열 염기
    로부터 선택되는 어느 하나의 염기 배열과 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드, 또는 어느 하나의 염기 배열의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드.
  5. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한항에 있어서, 배열번호 l의 염기 배열의
    (1) 염기위치 23번의 시토신으로부터 62번의 아데닌까지의 40 염기의 염기 배열,
    (2) 염기위치 93번의 구아닌으로부터 131번의 시토신까지의 39 염기의 염기 배열,
    (3) 염기위치 117번의 구아닌으로부터 145번의 우리딘까지의 29 염기의 염기 배열,
    (4) 염기위치 1241번의 아데닌으로부터 1280번의 구아닌까지의 40 염기의 염기 배열,
    (5) 염기위치 1264번의 구아닌으로부터 1285번의 시토신까지의 22 염기의 염기 배열,
    (6) 염기위치 1267번의 시토신으로부터 1320번의 아데닌까지의 54 염기의 염기 배열,
    (7) 염기위치 1301번의 구아닌으로부터 1350번의 아데닌까지의 50 염기의 염기 배열,
    (8) 염기위치 184번의 시토신으로부터 203번의 아데닌까지의 20 염기의 염기 배열,
    (9) 염기위치 324번의 아데닌으로부터 343번의 시토신까지의 20 염기의 염기 배열,
    (10) 염기위치 394번의 우리딘으로부터 413번의 구아닌까지의 20 염기의 염기 배열,
    (11) 염기위치 444번의 시토신으로부터 489번의 시토신까지의 46 염기의 염기 배열,
    (12) 염기위치 534번의 구아닌으로부터 553번의 우리딘까지의 20 염기의 염기 배열,
    (13) 염기위치 644번의 우리딘으로부터 668번의 우리딘까지의 25 염기의 염기 배열,
    (14) 염기위치 684번의 시토신으로부터 758번의 우리딘까지의 75 염기의 염기 배열,
    (15) 염기위치 794번의 아데닌으로부터 828번의 구아닌까지의 35 염기의 염기 배열,
    (16) 염기위치 864번의 시토신으로부터 918번의 구아닌까지의 55 염기의 염기 배열,
    (17) 염기위치 994번의 구아닌으로부터 1048번의 시토신까지의 55 염기의 염기 배열,
    (18) 염기위치 1064번의 구아닌으로부터 1108번의 우리딘까지의 45 염기의 염기 배열, 및
    (19) 염기위치 1194번의 구아닌으로부터 1223번의 구아닌까지의 30 염기의 염기 배열 염기
    로부터 선택되는 어느 하나의 염기 배열과 상보적인 염기 배열, 또는 어느 하나의 염기 배열의 적어도 일부에 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드.
  6. 제 4항에 있어서, 염기 배열중, (l), (2), (4), (5), (7), (8), (11), (16), (19)에서 선택되는 어느 하나의 염기 배열과 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드, 또는 (1), (2), (4), (5), (7), (8), (1l), (l6), (19)에서 선택되는 어느 하나의 염기 배열의 적어도 일부와 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드.
  7. 제 5항에 있어서, (1), (2), (4), (5), (7), (8), (11), (16), (l9)에서 선택되는 어느 하나의 염기 배열과 상보적인 염기 배열, 또는 (l), (2), (4), (5), (7), (8), (11), (l6), (19)에서 선택되는 어느 하나의 염기 배열의 적어도 일부와 상보적인 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드.
  8. 제 1 내지 제 7항중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD14의 발현을 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드.
  9. 제 8항에 있어서, 번역저해실험에서 인간 CD14의 발현을 30% 이상 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드.
  10. 제 8항에 있어서, RNaseH 절단실험에서 인간 CD14의 mRNA와의 결합활성이 스코어 1 이상인 올리 뉴클레오티드.
  11. 제 1 내지 10항에 있어서, 염기수가 l0 ∼ 50의 어느 하나인 올리고뉴클레오티드.
  12. 제 11항에 있어서, 염기수가 l5 ∼ 30의 어느 하나인 올리고뉴클레오티드.
  13. 제 1항 내지 12항에 있어서, 뉴클레오티드간의 결합기의 적어도 1개가 황원자를 포함하는 올리고뉴클레오티드.
  14. 배열번호 l0, 1l, 12, 13, l6, 19. 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 61, 62, 63, 64. 70, 7l, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 81, 83, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 102, 103, 109, l23, l24, 125, l30, 135, 136, 137, 138, l44, l55, l56, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 170, 171, l72. 177, 178, 179, l80, 181, l90, 191, l92, l93. l94, l96, l97, l98, 199, 209, 210. 215, 216, 220, 221, 224. 225, 226, 227, 228. 229. 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237. 238. 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 염기 배열을 포함하며, 30 염기 이하의 염기로 이루어지는 올리고뉴클레오티드.
  15. 제 1항 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 이외의 동물의 CD14를 코드하는 유전자에도 하이브리다이즈시켜 얻은 수 있는 올리고뉴클레오티드.
  16. 제 15항에 있어서, 인간 이외의 동물이 마우스 및(또는) 원숭이인 올리고뉴클레오티드.
  17. 제 15항 또는 16항 중 어느 항에 있어서, 배열번호 1의 염기 배열의
    (1) 염기위치 103번의 아데닌으로부터 131번의 시토신까지의 29 염기 배열,
    (2) 염기위치 184번의 시토신으로부터 203번의 아데닌까지의 20 염기 배열,
    (3) 염기위치 324번의 아데닌으로부터 343번의 시토신까지의 20 염기 배열,
    (4) 염기위치 444번의 시토신으로부터 489번의 시토신까지의 46 염기 배열,
    (5) 염기위치 684번의 시토신으로부터 758번의 우리딘까지의 75 염기 배열,
    (6) 염기위치 794번의 아데닌으로부터 828번의 구아닌까지의 35 염기 배열,
    (7) 염기위치 864번의 시토신으로부터 908번의 아데닌까지의 45 염기 배열,
    (8) 염기위치 994번의 구아닌으로부터 1046번의 구아닌까지의 53 염기 배열, 및
    (9) 염기위치 1064번의 구아닌으로부터 1108번의 우리딘까지의 45 염기의 염기 배열
    로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 염기 배열과 성보적인 염기 배열에 있어서, 또는 어느 하나의 염기 배열의 적어도 일부와 상보적인 염기 배열에 있어서, 임의 1개 이상의 염기가 유니버설 베이스로 치환된 염기 배열을 갖는 올리고뉴클레오티드.
  18. 제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 기재된 올리고뉴클레오티드 및 필요에 따라서 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 포함하는 의약 조성물.
  19. 제 18항에 있어서, 인간 CD14를 통해서 생기는 염증성 인자에 의해서 야기되는 질환을 치료하기 위한 의약 조성물.
  20. 제 19항에 있어서, 상기 질환이 패혈증 또는 엔도톡신혈증, 또는 패혈증성 쇼크 또는 엔도톡신쇼크인 의약 조성물.
  21. 인간 CD14를 코드하는 유전자에 결합하여, 인간 CD14의 발현을 억제할 수 있는 올리고뉴클레오티드를 유효 성분으로 하는, 패혈증 또는 엔도톡신혈증, 또는 패혈증성 쇼크 또는 엔도톡신쇼크의 예방/치료에 사용하는 의약 조성물.
  22. 제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 기재된 올리고뉴클레오티드 및 필요에 따라서 약학적으로 허용될 수 있는 담체를 투여하는 인간 CD14를 통해서 생기는 염증성 인자에 의해서 야기되는 질환의 예방/치료 방법.
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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6368855B1 (en) * 1996-06-11 2002-04-09 Antigen Express, Inc. MHC class II antigen presenting cells containing oligonucleotides which inhibit Ii protein expression
EP1213586A4 (en) 1999-09-17 2003-02-05 Mochida Pharm Co Ltd METHOD FOR FRACTIONAL MEASUREMENT OF SOLUBLE CD14 PROTEIN
JPWO2002042333A1 (ja) 2000-11-22 2004-03-25 持田製薬株式会社 Ｃｄ１４／ｔｌｒ結合阻害作用を有する抗ｃｄ１４モノクローナル抗体
US20030031655A1 (en) * 2001-02-08 2003-02-13 Sequitur, Inc. Methods of light activated release of ligands from endosomes
DE10118446A1 (de) * 2001-04-12 2002-10-17 Thomas Hartung Prüfverfahren zur Untersuchung fließfähiger Medien auf Gehalte an mikrobiellen Toxinen
US20060009409A1 (en) 2002-02-01 2006-01-12 Woolf Tod M Double-stranded oligonucleotides
US20030166282A1 (en) 2002-02-01 2003-09-04 David Brown High potency siRNAS for reducing the expression of target genes
EP2221377B2 (en) 2002-02-01 2017-05-17 Life Technologies Corporation Oligonucleotide compositions with enhanced efficiency
CA2513072A1 (en) * 2003-01-09 2004-07-29 Invitrogen Corporation Cellular delivery and activation polypeptide-nucleic acid complexes
US7399853B2 (en) * 2003-04-28 2008-07-15 Isis Pharmaceuticals Modulation of glucagon receptor expression
US7750142B2 (en) * 2003-04-28 2010-07-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucagon receptor expression
AU2004241069B2 (en) 2003-05-15 2010-09-09 Genentech, Inc. Methods and compositions for the prevention and treatment of sepsis
ES2406266T3 (es) 2004-05-11 2013-06-06 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Antígeno CD14 soluble novedoso
US20100152280A1 (en) * 2004-05-24 2010-06-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of sid-1 expression
US20110293635A1 (en) * 2008-09-16 2011-12-01 O'neill Luke Anthony John Composition and methods for modulating toll-like receptor activity
ES2673721T3 (es) 2011-09-20 2018-06-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulación antisentido de la expresión de GCGR
TWI429910B (zh) * 2011-10-17 2014-03-11 Univ Kaohsiung Medical 預測食道癌存活及癒後狀態之方法及其套組及微陣列晶片

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5543303A (en) 1988-11-28 1996-08-06 Goyert; Sanna M. Recombinant myelomonocytic differentiation antigen CD14
CA2133758A1 (en) 1992-04-06 1993-10-14 Sanna M. Goyert A novel therapy for treating sepsis using a soluble form of recombinant cd14 myelomonocytic antigen
US5585479A (en) * 1992-07-24 1996-12-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Antisense oligonucleotides directed against human ELAM-I RNA
WO1996020957A1 (en) 1994-12-30 1996-07-11 Amgen Inc. Anti-inflammatory cd14 polypeptides

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EP0911400A1 (en) 1999-04-28
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WO1998039438A1 (fr) 1998-09-11

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