JPH09501057A

JPH09501057A - 新規のオリゴヌクレオチド相互作用による血管細胞接着分子の発現の調節

Info

Publication number: JPH09501057A
Application number: JP7513458A
Authority: JP
Inventors: メドフォード，ラッセル・エム; ベネット，クラレンス・フランク
Original assignee: Isis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1993-11-05
Filing date: 1994-11-07
Publication date: 1997-02-04
Also published as: AU8133194A; US6399376B1; WO1995012415A1; CA2175902A1; EP0732941A4; EP0732941A1; US6713621B1

Abstract

(57)【要約】血管細胞接着分子、特にＶＣＡＭ−１をコードする遺伝子を、該遺伝子に対して結合する転写調節因子とオリゴヌクレオチドとの相互作用によって調節する。転写調節因子と相互作用してそれらの遺伝子との相互作用を減少させ且つそれらの機能を下方制御する特異的且つ有効なオリゴヌクレオチドを提供する。更に、転写調節因子とも別の態様の遺伝子機能とも相互作用する多様式オリゴヌクレオチドを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】新規のオリゴヌクレオチド相互作用による血管細胞接着分子の発現の調節発明の分野本発明は、オリゴヌクレオチド治療組成物および方法の分野に関する。疾患状態に関係した遺伝子または遺伝子部分の調節、特にダウンレギュレーションは、本発明の独特の目的である。本発明は、ある種の転写調節因子と相互作用して血管細胞接着分子遺伝子の転写を調節する治療的および研究用組成物を提供する。更に、スプライシングまたは翻訳並びに転写を妨げることによって多数の遺伝子機能に影響を及ぼすことができる多様式のキメラ組成物を提供する。炎症性疾患および血管疾患の治療は、本発明の好ましい実施態様である。発明の背景ある種の細胞接着分子は、炎症性疾患および血管疾患に関係していると考えられてきた。一例として、アテローム硬化症経過の主要メディエイタは、血管内皮細胞表面上の特定の接着分子タンパク質の発現である。これらの接着分子は、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）と称する免疫細胞に対して結合し、そしてアテローム硬化症でも血管形成術後再狭窄でも中心的であると考えられる炎症反応を開始し且つ拡大させる。これらの血管細胞接着分子の一つであるＶＣＡＭ−１は、単核白血球と称する特定のクラスの白血球を結合することによってアテローム硬化症において特に重要な役割を果たしている。多数のシグナルがＶＣＡＭ−１の発現を誘導する。ＩＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンは、他の態様の一般的な炎症反応を媒介する他の誘導性血管細胞接着分子である。細胞による血管細胞接着分子生産の変調を通して、炎症性疾患、アテローム硬化症、再狭窄および他の疾患の一時的緩和、診断および治療法を達成することが大いに望まれる。このような療法の特異性もまた大いに望まれる。最近になって、オリゴヌクレオチドは、動物およびヒトの疾患状態の治療における治療的成分として認められるようになってきた。例えば、当業者は、現在、ウイルス性、真菌性および代謝性疾患に関係した遺伝子の発現を調節することができるアンチセンス、トリプレックスおよび他のオリゴヌクレオチド治療組成物を同定している。例えば、１９９０年１２月３日出願のＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９０／０７０６７号明細書；１９９１年２月２５日出願の第ＵＳ９１／０１３２７号明細書；および１９９１年８月１４日出願の第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５８１５号明細書は、乳頭腫ウイルス、ヘルペスウイルスおよびサイトメガロウイルス感染それぞれの治療用の治療的オリゴヌクレオチドを開示している。１９９１年８月１５日出願のＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５８０２号明細書は、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）感染の治療用のオリゴヌクレオチドを開示している。１９９１年４月１７日出願のＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０２６２８号明細書および１９９１年７月２３日出願の第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５２０９号明細書は、治療薬としてオリゴヌクレオチドを用いて脂質代謝および細胞接着をそれぞれ調節する遺伝子の調節に関している。１９９３年１月２１日出願の米国特許第００７，９９７号明細書、１９９３年５月１７日出願の米国特許第０６３，１６７号明細書およびＰＣＴ特許出願第ＵＳ９３／０８１０１号明細書もまた、細胞接着分子に関係したオリゴヌクレオチド治療法に関する。ゲヴィルツ（Ｇｅｗｉｒｔｚ）らの名義の米国特許第５，０９８，８９０号明細書は、ある種の癌症状に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド療法に関し、１９９２年１１月２４日発行の米国特許第５，１６６，１９５号明細書は、ＨＩＶのオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。このように、オリゴヌクレオチドは有用な治療的手段でありうるということおよびそれらは細胞および動物、特にヒトの治療のための治療法において有用であるように作成することができるということが確かめられた。オリゴヌクレオチド治療法が疾患の治療のために認められた様式であることは明らかである。治療的に有意の滞留を可能にする薬剤供給法および修飾法は現在知られている。オリゴヌクレオチド治療法が容認されたにもかかわらず、オリゴヌクレオチドを用いる遺伝子調節、特にダウンレギュレーションに対する更に別の有効なアプローチは大いに望まれる。更に、古典的なアンチセンスおよびトリプレックス機序とは異なるオリゴヌクレオチド治療法の作用機序もまた大いに望まれる。転写調節因子（転写因子）は、細胞外シグナルを核調節シグナルに伝達するＤＮＡ結合タンパク質である。通常、転写調節因子は活性化されるかまたは合成され、細胞の核に転移し、そしてエンハンサーまたは調節要素と称する特定のＤＮＡ配列に対して結合する。いったん結合したら、転写調節因子は遺伝子転写を調節する。ウー（Ｗｕ）ら、「特定の二本鎖オリゴデオキシリボヌクレオチドによるインビトロ転写の阻害（ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｉｎＶｉｔｒｏＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｂｙＳｐｅｃｉｆｉｃＤｏｕｂｌｅ−ＳｔｒａｎｄｅｄＯｌｉｇｏｄｅｏｘｙ−ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅs）」，Ｇｅｎｅ８９２０３〜２０９（１９９０）は、二本鎖デオキシオリゴヌクレオチドを用いて、特定のプロモーターおよびエンハンサー要素に対する核因子の結合について競合させた。著者らは、アデノウイルスのインビトロ転写に対するオリゴヌクレオチド長さ、配列および核因子結合部位の数の効果を調べ、可能な治療法を論及した。ホルセンバーグ（Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇ）およびウー、この文脈中においてホスホロチオエート誘導体も開示しているＷＯ９１／１１５３５号明細書も参照されたい。チュー（Ｃｈｕ）ら、「転写因子に対するヘアピンおよびダンベルＤＮＡの結合（ＢｉｎｄｉｎｇｏｆＨａｉｒｐｉｎａｎｄＤｕｍｂｂｅｌｌＤＮＡｔｏＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒｓ）」，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１９６９５８（１９９１）は、転写因子に対して結合するためにヘアピンループおよび連結された円形（ダンベル）の形の一本鎖ＤＮＡの使用を開示している。チューおよびオーゲル（Ｏｒｇｅｌ）、ＷＯ９２／１８５２２号明細書も参照されたい。その他の者は、転写調節因子とのオリゴヌクレオチド相互作用による治療法に着手した。タニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ），Ｔ．、１９９２年１０月２０日発行の米国特許第５，１５７，１１５号明細書は、ＩＬ−２またはＩＬ−２ａ遺伝子をそれらのそれぞれの転写因子に対して競合的に結合することによって阻害するまたは制御する核酸組成物を開示している。ブルーメンフェルド（Ｂｌｕｍｅｎｆｅｌｄ）らは、ＷＯ９２／１９７３２号明細書およびＷＯ９１／１５１１４号明細書において、タンパク質結合配列を有することができるアンチセンスまたはセンスオリゴヌクレオチドを開示している。アンドロフィー（Ａｎｄｒｏｐｈｙ）らは、欧州特許出願第３０２，７５８号明細書において、乳頭腫ウイルスなどのウイルスのＤＮＡによってコードされた剌激性タンパク質（このタンパク質は、結合した場合、ウイルス転写を促進すると考えられる）の該ウイルスＤＮＡに対する結合を妨げることによって該ウイルスの増殖を阻害する核酸またはタンパク質を開示している。乳頭腫ウイルスの転写活性化活性の阻害剤に関するアンドロフィーら、Ｎａｔｕｒｅ３２５：７０〜７３（１９８７）およびアンドロフィーら、ＷＯ９１／１４７９０号明細書も参照されたい。クルセル（Ｃｌｕｓｅｌ）ら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ２１：３４０５〜３４１１（１９９３）は、ナノモル濃度の肝核因子−１結合部位含有二本鎖ダンベルオリゴヌクレオチドによる特定の遺伝子発現のエクスビボ（ｅｘｖｉｖｏ）調節を開示している。ビエリンスカ（Ｂｉｅｌｉｎｓｋａ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５０：９９７〜１０００（１９９０）は、二本鎖ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを用いて遺伝子発現を調節した。八量体またはｋＢ共通配列を含むオリゴヌクレオチドによる、八量体転写因子かまたはＮＦ−ｋＢを特異的に結合する配列特異的ＤＮＡ結合タンパク質の阻害は、ＨＩＶエンハンサー活性化またはＩＬ−２分泌を阻害することが開示された。エック（Ｅｃｋ）ら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ１３：６５３０〜６５３６（１９９３）は、ＮＦ−ｋＢ共通結合配列の三縦列反復を含む高用量（＞２０μＭ）の二本鎖３８量体ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを用いて、培養中のヒト内皮細胞におけるＩＣＡＭ−１および白血球インテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）ＣＤ１１ｂ両方の発現を阻害した。ＤＮＡオリゴヌクレオチドによる転写調節因子との相互作用はこれまでに知られているが、そして療法は可能であると予想されているが、血管細胞接着分子、特にＶＣＡＭ−１を、およびこのような分子が関係している疾患を有効に且つ特異的に標的とすることができる転写調節因子と相互作用する、特異的なオリゴヌクレオチドも、オリゴヌクレオチドを用いる有効な方法も存在していない。このような材料および方法が大いに望まれる。本発明の目的は、血管細胞接着分子、特にＶＣＡＭ−１に関係した疾患状態に関与する遺伝子の発現を調節するオリゴヌクレオチド、診断用および治療用組成物および方法を提供することである。もう一つの目的は、１種類またはそれ以上の転写因子と相互作用してこのような調節を行うオリゴヌクレオチドを提供することである。血管細胞接着分子が関係している炎症性疾患および血管疾患並びに他の疾患状態の治療用の組成物および方法もまた本発明の目的である。更にもう一つの目的は、多様式治療法において多数の遺伝子部分に向けられているオリゴヌクレオチド治療組成物および治療法を提供することである。他の目的は、本明細書の論及から明らかになるであろう。発明の概要本発明は、血管細胞接着分子に関係した遺伝子発現を調節するための組成物および方法に関する。選択された遺伝子の発現は、新規のオリゴヌクレオチドと、該遺伝子に関係した転写調節因子との相互作用によって調節される。本発明は、更に、予め選択された遺伝子の調節のための多様式オリゴヌクレオチドおよびそれらの使用方法に関する。このような多様式オリゴヌクレオチドは、該遺伝子を、ｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシングまたはｍＲＮＡの翻訳などの、好ましくは少なくとも一つの転写調節因子との相互作用を含む多数のレベルで下方制御するかまたは他の方法で調節するように作用することができる。本発明は、更に、血管細胞接着分子をコードしている遺伝子の発現または過発現が関係している疾患または生体状態を、細胞または哺乳動物、好ましくはヒトに対する本発明のオリゴヌクレオチドの投与によって診断し、一時的に緩和しまたは治療することができるように、これらのオリゴヌクレオチドを用いる診断および治療の方法を提供する。本発明の実施態様により、血管細胞接着分子をコードしている遺伝子の発現を調節する方法であって、該遺伝子の一部分を選択することを含む上記方法が提供される。該遺伝子は、転写調節因子のファミリーのメンバーを結合するＤＮＡ配列を有するものである。次に、該遺伝子を含む細胞を、該遺伝子の該結合配列の少なくとも一部分と配列が実質的に同一のオリゴヌクレオチド部分と接触させる。該オリゴヌクレオチド部分は、好ましくは、ＤＮＡの二本の相補鎖かまたは自己相補的である一本鎖のＤＮＡを含む。オリゴヌクレオチドが細胞中のヌクレアーゼによって速やかに分解されないため、オリゴヌクレオチドを修飾することが好ましい。例えば、通常はホスホジエステルであるヌクレオチド間結合基の少なくともいくつかを修飾することが好ましい。当該核酸技術分野の当業者にそれ自体知られているホスホロチオエート修飾が好ましい。当業者に知られている結合に対する他の修飾および糖または塩基修飾を含むオリゴヌクレオチドに対する他の修飾もまた用いることができる。理論に拘束されたくはないが、本発明による遺伝子の発現の調節は、遺伝子の転写の阻害によって行われると考えられる。これは、遺伝子に対する転写調節因子の正常な作用が妨げられることによって起こると考えられる。血管細胞接着分子、特に、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンをコードする遺伝子を調節することは可能であることが分っている。いくつかの実施態様において、好ましくは、転写調節因子は、転写調節因子の核因子ｋＢ（ＮＦ−ｋＢ）ファミリーのメンバーである。血管細胞接着分子の遺伝子のプロモーター領域の特定のＤＮＡ配列を更に結合する他の因子による妨害もまた、本発明の一つまたはそれ以上の態様の実施において有効であると考えられる。好ましい実施態様において、これらの他の因子としては、ＧＡＴＡ、ＡＰ−１、Ｓｐ− １、ＡＰ−２、ＡＰ−３、インターフェロン反応因子、八量体転写因子およびＮＦ−ＥＬＡＭ１がある。具体的なＤＮＡ配列としては、ｅｔｓ結合配列、ＴＡＴＡボックス、逆方向ＣＣＡＡＴ配列、ＡＰ−１結合部位、ＮＦ−ＥＬＡＭ１結合部位、ＫＲ、ＫＬ、ＣＡＴ配列、Ｓｐ−１結合部位、ＡＰ−２結合部位、ＡＰ− ３結合部位、インターフェロン反応要素、八量体結合配列およびＧＡＴＡ結合部位がある。本発明の他の態様により、血管細胞接着分子、特に、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ −１またはＥ−セレクチンをコードしている遺伝子の転写調節因子結合配列の少なくとも一部分の配列と実質的に同一であるヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド部分が提供される。遺伝子発現の調節のための多様式オリゴヌクレオチドもまた本発明によって意図される。これらの実施態様によるオリゴヌクレオチド部分は多数の領域を含み、すなわち、それらはキメラである。第一領域は、遺伝子の配列の少なくとも一部分と実質的に同一である配列を有し、その遺伝子配列は転写調節因子を結合する。オリゴヌクレオチド部分の第二領域は、遺伝子に由来するｍＲＮＡまたは遺伝子に由来するｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシング領域と特異的にハイブリッド形成しうるように構築される。第一および第二領域は、細胞中に入る際にキメラオリゴヌクレオチドが第一および第二領域を表すいくつかの独立した有効なサブユニットに分離するように、好ましくは細胞性過程において一方と他方とが遊離されうることが好ましい。これは、第一および第二領域をオリゴヌクレオチド中の連結領域に隣接（ｆｌａｎｋ）させることによって行うことができ、この連結領域は細胞代謝過程の基質である。例えば、連結領域がＲＮＡｓｅＨの基質である場合、細胞内に入る際に、多様式キメラオリゴヌクレオチドが開裂することにより第一および第二領域が遊離する。これを目的として、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）または他の修飾された形のヌクレオチドの使用などにより、ヌクレアーゼ分解および他の形の分解に対して第一および第二領域を安定化させることが好ましい。本発明の文脈中の「ハイブリッド形成」とは、通常は対向している核酸鎖のまたは一つの核酸鎖の二つの部分上の相補的塩基間の、ワトソン・クリック塩基対としても知られる水素結合を意味する。グアニンおよびシトシンは、それらの間に３個の水素結合を形成することが知られている相補的塩基の例である。アデニンおよびチミンは、それらの間に２個の水素結合を形成することが知られている相補的塩基の例である。「特異的にハイブリッド形成しうる」とは、非標的配列に対するオリゴヌクレオチドの非特異的結合を避けるのに十分な程度の相補性を示す。オリゴヌクレオチドが、特異的にハイブリッド形成しうるその標的核酸配列に対して１００％相補的である必要はないことは理解される。他の好ましい実施態様によれば、本発明のキメラオリゴヌクレオチドは、異なる転写調節因子を結合する遺伝子プロモーター領域配列と実質的に同一のＤＮＡ配列をそれぞれ有する少なくとも第一および第二領域を含み、例えば、第一領域に対して結合する調節因子は、第二領域に対して結合する因子とは異なる。第一および第二領域は、ホスホロチオエート結合のような安定化されたヌクレオチド間結合によって連結することができる。他の実施態様において、第一および第二領域は、細胞代謝過程の基質である連結領域によって連結されて、細胞中に入る際に第一および第二領域の遊離を引き起こす。更に他の好ましい実施態様によれば、本発明のキメラオリゴヌクレオチドは３つまたはそれ以上の領域を含み、その少なくとも一つは、調節されるべき遺伝子上の転写調節結合配列の少なくとも一部分と実質的に同一の配列を有することが好ましい。オリゴヌクレオチドの第二、第三および他の領域は同じであっても異なっていてもよく、そして更に別の転写因子結合部位を含んでいてもよく、またはｐｒｅ−ｍＲＮＡ上のスプライシング部位との相互作用若しくはｍＲＮＡ自体に向けられることができる。このようなオリゴヌクレオチド領域とｐｒｅ−ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡとの相互作用は、アンチセンス様式で、すなわちｍＲＮＡまたはｐｒｅ−ｍＲＮＡとの特異的ハイブリッド形成によって生じるらしいことが理解されるであろう。したがって、本発明のキメラオリゴヌクレオチドは、好ましい実施態様によれば、明らかに異なる機序によって機能しうる。一つの機序は、ｐｒｅ−ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡに対して向けられたアンチセンス機序でありうるが、もう一方の機序は、転写調節因子が遺伝子と相互作用してその転写を引き起こすことを妨げるように該因子を掃去すると考えられる。全体の効果は、選択された遺伝子の発現を多様式で、すなわち、多数の異なる機序の作用によって調節することである。本発明の他の実施態様によれば、ある選択された遺伝子の発現が関与する疾患を有すると疑われる哺乳動物、特にヒトを治療する方法が提供される。本発明によるオリゴヌクレオチド部分を含む組成物は、該哺乳動物に対して、通常は薬学的に許容しうる担体または希釈剤中でおよび該疾患の一時的緩和または治療を行う治療法にしたがって投与される。一つの実施態様によれば、哺乳動物、特にヒトにおける炎症性疾患、例えばアテローム硬化症、再狭窄および他の炎症性疾患を治療することができる。このような場合、相互作用が望まれる一つの転写調節因子は、ＮＦ−ｋＢファミリーの調節因子のメンバーである。炎症は、損傷、感染または組織破壊に対して反応して組織によって引き起こされる限局性防御反応であり、感染物質または有害物質の破壊および損傷組織の隔離を生じる。典型的な炎症反応は以下のように進行する。すなわち、異物としての抗原の認識または組織損傷の認識、可溶性炎症メディエイタの合成および放出、感染または組織損傷部位への炎症細胞の補充、侵入生物または損傷組織の破壊および除去、そして侵入生物または損傷がいったん消散した系の失活。炎症性成分を伴う多数のヒト疾患においては、炎症反応を弱化する正常なホメオスタシス機序に欠陥があり、正常組織の損傷および破壊を引き起こす。細胞−細胞相互作用は、上記の段階のそれぞれにおいて免疫応答の活性化に関与している。正常な炎症反応において最初に認められる現象の一つは、血管内皮に対する白血球の接着、続いて血管系から感染または損傷部位への白血球の移動である。血管内皮に対するこれらの白血球（すなわち、ｗｈｉｔｅｂｌｏｏｄｃｅｌｌ）の接着は、血管系から外への移動において不可欠の段階である。ハーラン（Ｈａｒｌａｎ），Ｊ．Ｍ．、Ｂｌｏｏｄ１９８５年，６５，５１３〜５２５。概して、炎症部位に現れる最初の炎症性細胞は好中球であり、続いて単核白血球、そしてリンパ球が現れる。細胞−細胞相互作用は、更に、Ｂ−リンパ球およびＴ−リンパ球両方の増殖に必須であり、増強された体液性および細胞性免疫応答をそれぞれ引き起こす。血管内皮および他のタイプの細胞に対する白血球の接着は、白血球および血管内皮両方の原形質膜上に存在する「接着分子」と称される特定のタンパク質間の相互作用によって媒介される。これらの血管細胞接着分子は、白血球と称される免疫細胞に対して結合し、そしてアテローム硬化症および血管形成術後再狭窄両方に中心的であると考えられる炎症反応を開始し且つ拡大する。血管細胞接着分子は、血管内皮に対する白血球の接着および引続きの血管系からの移動に関与している。これまでに同定された血管細胞接着分子としては、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）、細胞間接着分子２（ＩＣＡＭ−２）、細胞間接着分子３（ＩＣＡＭ−３）、Ｅ−セレクチン［内皮白血球接着分子−１（ＥＬＡＭ−１）として従来知られている］、血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）、Ｌ−セレクチン（ＭＥＬ−１４）およびＰ−セレクチン（顆粒膜タンパク質− １４０、ＧＭＰ−１４０）並びにそれらのそれぞれの受容体がある。血管内皮に対する白血球の接着は、全体としてでない場合は一部分が、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、Ｅ−セレクチン、ＶＣＡＭ−１およびＰ−セレクチンによって媒介されると考えられる。ダスティン（Ｄｕｓｔｉｎ）およびスプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１９８７年，１０７，３２１〜３３１。Ｐ−セレクチンおよびＥ−セレクチンは、主として、血管内皮細胞に対する好中球の接着に関与している。ＶＣＡＭ−１は、主としてＴおよびＢリンパ球を結合する。ＶＣＡＭ−１は、単核白血球と称される特定のクラスの白血球を結合することによってアテローム硬化症において特に重要な役割を果たしている。更に、ＶＣＡＭ−１は、黒色腫およびおそらくは他の癌の転移においてある役割を果たすかもしれない。ＩＣＡＭ−１は、血管内皮に対する好中球の接着、並びに血管内皮、組織繊維芽細胞および表皮ケラチノサイトに対する単核白血球およびリンパ球の接着においてある役割を果たす。ＩＣＡＭ−１は、更に、抗原提示細胞のＴ細胞認識、ナチュラルキラー細胞による標的細胞の溶解、リンパ球活性化および増殖並びに胸腺におけるＴ細胞の成熟においてある役割を果たす。更に、最近のデータは、ＩＣＡＭ−１が、５０％を越える感冒の原因であるライノウイルスの主血清型の細胞受容体であることを実証した。スタントン（Ｓｔａｕｎｔｏｎ）ら、Ｃｅｌｌ１９８９年，５６，８４９〜８５３；グレーブ（Ｇｒｅｖｅ）ら、Ｃｅｌｌ１９８９年，５６，８３９〜８４７。ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチンおよびＶＣＡＭ−１の発現は、種々の炎症性皮膚疾患、例えば、アレルギー性接触皮膚炎、固定薬疹、偏平苔癬および乾癬に関係している。ホー（Ｈｏ）ら、Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９０年，２２，６４〜６８；グリフィス（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ）およびニコロフ（Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ）、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ１９８９年，１３５，１０４５〜１０５３；リスビー（Ｌｉｓｂｙ）ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８９年，１２０，４７９〜４８４；シオハラ（Ｓｈｉｏｈａｒａ）ら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８９年，１２５，１３７１〜１３７６。更に、ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチンおよびＶＣＡＭ−１発現は、慢性関節リウマチ患者の滑膜において検出されており；ヘイル（Ｈａｌｅ）ら、Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．１９８９年，３２，２２〜３０；ＩＣＡＭ−１発現は、糖尿病の膵臓Ｂ細胞；カンプベル（Ｃａｍｐｂｅｌｌ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９８９年，８６，４２８２〜４２８６；グレーヴズ病患者の甲状腺小胞細胞；ウィートマン（Ｗｅｅｔｍａｎ）ら、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９８９年，１２２，１８５〜１９１において検出されており；そしてＩＣＡＭ− １およびＶＣＡＭ−１の発現は、心臓、腎臓および肝臓同種移植片拒絶並びに初期アテローム硬化症病変に関係していた；フォール（Ｆａｕｌｌ）およびラス（Ｒｕｓｓ）、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ１９８９年，４８，２２６〜２３０；アダムス（Ａｄａｍｓ）ら、Ｌａｎｃｅｔ１９８９年，１１２２〜１１２５；オーブリーン（Ｏ′ｂｒｉｅｎ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９３年，９２，９４５〜９５１；リビー（Ｌｉｂｂｙ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９３年，９２，５３８〜５３９。ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥ−セレクチン発現の阻害剤は、種々の炎症性疾患または炎症性成分を伴う疾患、例えば、喘息、慢性関節リウマチ、アテローム硬化症および再狭窄、移植片拒絶、種々の皮膚症状並びに乾癬に対して活性を有する新規の治療的クラスの抗炎症薬を提供するであろうと期待されてきた。更に、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンの阻害剤はまた、ライノウイルス感染による感冒、エイズ（ＡＩＤＳ）並びにいくつかの癌およびそれらの転移の治療において有効でありうる。これまでのところ、細胞接着分子Ｅ −セレクチン、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の発現を効果的に防止する治療薬は知られていない。動物モデルにおける接着分子に対する中和単クローン性抗体の使用は、このような阻害剤が同定された場合、喘息に対して（ウェグナー（Ｗｅｇｎｅｒ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９０年，２４７，４５６〜４５９）、並びに腎臓および心臓同種移植片に対して（コシミ（Ｃｏｓｉｍｉ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０年，１４４，４６０４〜４６１２）、治療的に有益であると考えられる結果を与える。可溶性型のＩＣＡＭ−１分子の使用もまた、培養中の細胞のライノウイルス感染を防止するのに有効であった。マーリン（Ｍａｒｌｉｎ）ら、Ｎａｔｕｒｅ１９９０年，３４４，７０〜７２。細胞間接着分子に影響を与える現行の物質としては、合成ペプチド、単クローン性抗体および可溶性型接着分子がある。単クローン性抗体は、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンの発現による急性炎症反応の治療に有用であると示すことができる。しかしながら、長期にわたる治療によって宿主動物は単クローン性抗体に対する抗体を生じ、それによってそれらの有用性は制限される。更に、単クローン性抗体は、炎症部位に接近し難いことがある大型のタンパク質である。可溶性型の細胞接着分子は、それらの製造費用に加えて、単クローン性抗体と同様の限界が多数ある。したがって、血管細胞接着分子を効果的に阻害する分子が長い間要求されている。特に、ＶＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチンおよびＩＣＡＭ−１発現を特異的に阻害する分子が長い間要求されている。治療的オリゴヌクレオチドは、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンの作用を阻止するのに用いられている現行の物質の多数の落とし穴を避けることができる。この要求は、上記に論及され且つ本明細書中に援用される本発明の譲受人所有の特許出願に反映されているように、アンチセンスオリゴヌクレオチドと細胞接着分子をコードするｍＲＮＡとの相互作用の使用によって一部分は満たされた。しかしながら、細胞接着分子に関係した生体状態および疾患に対する別のオリゴヌクレオチド治療法に対する大きな要求がまだ残っている。ヒトＩＣＡＭ−１は、本明細書にそのまま援用される５５，２１９ダルトンのタンパク質の合成をもたらす３．３−ｋｂｍＲＮＡによってコードされている。ＩＣＡＭ−１は、Ｎ結合グリコシル化部位によって重くグリコシル化されている。スタントンら、Ｃｅｌｌ１９８８年，５２，９２５〜９３３。ＩＣＡＭ− １は、アミノ末端に５個の免疫グロブリン様ドメイン、続いて貫膜ドメインおよび細胞質ドメインを有する、免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーのメンバーである。ＬＦＡ−１およびライノウイルスの主要結合部位は、最初の免疫グロブリン様ドメイン中に見出される。しかしながら、これらの結合部位は別個であると考えられる。スタントンら、Ｃｅｌｌ１９９０年，６１，２４３〜３５４。ＩＣＡＭ−１は、広範な組織および細胞分布を示し、そして白血球、内皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイトおよび他の上皮細胞上で見出されうる。ＩＣＡＭ −１の発現は、血管内皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、星状細胞およびいくつかの細胞系において、細菌リポ多糖並びにサイトカイン、例えばインターロイキン−１、腫瘍壊死因子、γ−インターフェロンおよびリンホトキシンによる処理によって調節されうる。例えば、フローマン（Ｆｒｏｈｍａｎ）ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９年，２３，１１７〜１２４を参照されたい。サイトカイン処理後に増加したＩＣＡＭ−１発現の分子機序は、十分に特性決定されていない。Ｅ−セレクチンは、セレクチンファミリーの膜糖タンパク質のメンバーである１１５−Ｋｄａ膜糖タンパク質である。本明細書にそのまま援用されるベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８９年，２４３，１１６０〜１１６５。Ｅ−セレクチンのアミノ末端部分は、レクチン様タンパク質のメンバーに対して相同性を有する配列を有し、その後に表皮成長因子と類似のドメイン、続いて補体受容体１および２で見出されるものと類似の６縦列６０アミノ酸反復を有する。これらの特徴は、リンパ球ホーミング抗原であるＰ−セレクチンおよびＬ−セレクチン抗原によっても共有されている。Ｅ−セレクチンは３．９−ｋｂｍＲＮＡによってコードされている。Ｅ−セレクチンｍＲＮＡの３′ 非翻訳領域は、いくつかの配列モチーフＡＴＴＴＡを有し、これはＥ−セレクチン発現の過渡的性状と一致する細胞ｍＲＮＡの急速代謝回転の原因である。Ｅ−セレクチンは、それが血管内皮細胞上でしか同定されていないという限定された細胞分布を示す。ＩＣＡＭ−１と同様に、Ｅ−セレクチンは、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１およびリンホトキシンを含む多数のサイトカイン並びに細菌リポ多糖によって誘導可能である。ＩＣＡＭ−１とは対照的に、Ｅ−セレクチンはγ−インターフェロンによって誘導されない。ベビラッカら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１９８７年，８４，９２３８〜９２４２；ウェリカム（Ｗｅｌｌｉｃｏｍｅ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０年，１４４，２５５８〜２５６５。ヒト臍静脈内皮細胞におけるＥ−セレクチンｍＲＮＡの誘導および消失の速度論は、細胞表面上のＥ−セレクチンの出現および消失に先行する。ＶＣＡＭ−１は、３．２−ｋｂｍＲＮＡによってコードされた１１０−Ｋｄａ膜糖タンパク質である（図３）。ＶＣＡＭ−１は、単コピー遺伝子によってコードされると考えられる。本明細書にそのまま援用されるオズボーン（Ｏｓｂｏｒｎ）ら、Ｃｅｌｌ１９８９年，５９，１２０３〜１２１１。ＩＣＡＭ−１と同様に、ＶＣＡＭ−１は、７つのＨ型免疫グロブリン様ドメインを含む免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーのメンバーである。ＶＣＡＭ−１の受容体は、ＶＬＡ４に対する単クローン性抗体がＶＣＡＭ−１に対するラモス（Ｒａｍｏｓ）細胞の接着を阻止する能力によって実証されるように、ＶＬＡ４インテグリンであると提案されている。ＶＣＡＭ−１は、活性化された血管内皮細胞および非内皮細胞上で発現される。ＩＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンと同様に、血管内皮でのＶＣＡＭ−１の発現は、サイトカインによる処理によって調節される。ライス（Ｒｉｃｅ）およびベビラッカ、Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８９年，２４６，１３０３〜１３０６；ライスら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９０年，１７１，１３６９〜１３７４。増加した発現は、ｍＲＮＡの誘導によると考えられる。転写因子としても知られる転写調節因子は、細胞外シグナルを核調節シグナルに伝達するタンパク質であり、それ自体知られており且ついくつかの論及の主題であった。例えば、いずれも本明細書に援用されて、核因子ｋＢ（ＮＦ−ｋＢ）ファミリーである転写調節因子および前者と核酸との相互作用に関する開示を提供する、パボ（Ｐａｂｏ），Ｃ．Ｏ．およびサウア（Ｓａｕｅｒ），Ｒ．Ｔ．、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ：ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＦａｍｉｌｉｅｓａｎｄＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＤＮＡＲｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎＡｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：１０５３〜１０９５（１９９２）；モリモト（Ｍｏｒｉｍｏｔｏ），Ｒ．Ｉ．、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ：ＰｏｓｉｔｉｖｅａｎｄＮｅｇａｔｉｖｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆＣｅｌｌＧｒｏｗｔｈａｎｄＤｉｓｅａｅ，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ４：４８０〜４８７（１９９２）；並びにハヤシ（Ｈａｙａｓｈｉ），Ｔ．、ウエノ（Ｕｅｎｏ），Ｙ．およびオカモト（Ｏｋａｍｏｔｏ），Ｔ．、ＯｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＮｕｃｌｅａｒＦａｃｔｏｒｋＢ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１１３８０〜１１３８８（１９９３）を参照されたい。ＮＦ−ｋＢは、真核性転写調節因子のファミリーの一例である。ＮＦ−ｋＢは、セン（Ｓｅｎ）およびバルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）、Ｃｅｌｌ１９８６年，４６，７０５〜７１６によって発見され、そして免疫グロブリン遺伝子のエンハンサー中のシス調節要素を認識するＢ細胞特異的ＤＮＡ結合タンパク質であることが分った。続いて、ＮＦ−ｋＢはＢ細胞に限定されず、種々の細胞中で誘導可能であることが分った。潜伏性ＮＦ−ｋＢは、ＩｋＢ（ｋＢの細胞質ゾル阻害剤）および少なくとも二つの異なるＤＮＡ結合タンパク質から成る三量体タンパク質である。潜伏性ＮＦ−ｋＢは、二量体ＮＦ−ｋＢに対するＩｋＢ結合を欠いた時に活性化されるようになる。ＩｋＢは、ＤＮＡ結合二量体の核転移の阻害剤である。これまでのところ、ホモ二量体およびヘテロ二量体の両方を生成しうる少なくとも３種類の形のＤＮＡ結合タンパク質、ｐ５０、ｐ６５およびｒｅｌが同定されている。他の近縁の遺伝子産物も同様に同定されると考えられる。したがって、類似の構造または作用を有するＮＦ−ｋＢおよびタンパク質は、一つのファミリーのタンパク質として記載することができるであろう。転写調節因子の他の例は、ＧＡＴＡ、ＡＰ−１、Ｓｐ−１、ＡＰ−２、ＡＰ−３、インターフェロン、八量体転写因子およびＮＦ−ＥＬＡＭ１である。ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチンおよびＶＣＡＭ−１遺伝子のプロモーター領域は記載されており、いずれも多数の調節要素を有する。これらの内のいくつかは十分に定義されており、その他は、推定上の転写因子結合部位または共通結合配列である。ヒトＩＣＡＭ−１遺伝子の５′領域に存在する調節要素は、塩基−７０および −３５２位（すなわち、翻訳開始部位の上流すなわち５′末端方向に７０塩基および３５２塩基）に位置した２個のＴＡＴＡボックス並びに−３９７位のＣＡＴ様配列を含む。計算機分析は、−２４６位および−９９位に位置した２個のＳｐ −１結合部位並びに−１２９４位および−３２４位の共通ＡＰ−１／ＴＲＥ結合部位に対して相同性の２個の配列を示した。フォラベルガー（Ｖｏｒａｂｅｒｇｅｒ）ら、（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：２７７７〜２７８６；デジツ（Ｄｅｇｉｔｚ）ら、（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１４０２４〜１４０３０。更に、−８８位にはＡＰ−２結合部位と相同の配列および −４１４位にはＡＰ−３様共通結合部位がある。潜在的ＮＦ−ｋＢ結合部位は− ５４０位に見出され且つ潜在的インターフェロン反応要素（ＩＲＥ）は−１０９位である。ＩＣＡＭ−１遺伝子のサイトカイン応答性に部分的に関与しているシス調節要素は、−３００位と−１２０５位との間にある。コルネリウス（Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ）ら、（１９９３）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１００：７５３〜７５８。この領域の配列を結合する同定された転写調節因子としては、ＮＦ−ｋＢおよびＡＰ−１がある。更に別のＤＮＡ結合タンパク質がこの領域の配列と相互作用することは可能である。Ｅ−セレクチン遺伝子は、既知のＤＮＡ結合タンパク質のいくつかの共通配列を有する。転写開始部位の９７塩基上流に位置するのは、逆方向ＣＣＡＡＴ共通配列である（ＡＴＴＧＧ；このプロモーター要素は、どちらの配向でも機能することが知られている）。推定上のＴＡＴＡボックスは、転写開始部位の３０塩基上流にある。コリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９１年，２６６，２４６６〜２４７３。推定上のＮＦ−ｋＢ結合要素は−９４位に存在し且つ推定上のＡＰ−１結合部位は−４９５位に存在する。Ｔ細胞エンハンサーと共通のＤＮＡ配列を認識するＤＮＡ結合因子（ＮＦ−ＥＬＡＭ１）は−１５０位に見出され、そしてＥ−セレクチンと結合したＮＦ−ｋＢ配列は、内皮細胞にトランスフェクトされたリポーター遺伝子構築物に対してサイトカイン誘導性を与えるのに十分であることが分った。フフト・ヴァン・ヒュイスデュイネン（ＨｏｏｆｔｖａｎＨｕｉｊｓｄｕｉｊｎｅｎ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２年，２６７，２２３８５〜２２３９１。多数の調節要素がＶＣＡＭ−１遺伝子について記載されている。ＴＡＴＡボックスは、転写開始部位の２９塩基上流で見出される。ＮＦ−ｋＢまたはＮＦ−ｋＢ様タンパク質の二つの潜在的結合部位は、−６３位および−７７位で見出される。イアデマルコ（Ｉａｄｅｍａｒｃｏ）ら、１９９２年，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，１６３２３〜１６３２９。潜在的ＡＰ−１結合部位は−４９５位に見出され且つ共通ｅｔｓ結合部位は−２２１位、−９８１位および−１０３３位に存在する。ＧＡＴＡ結合配列は−２４５位および−２５９位に見出され、そして３個の潜在的八量体結合部位は−７２９位、−１１８０位および−１５５４位に見出される。サイトカインであるＴＮＦα、ＩＬ−１ｂおよびＩＬ−４、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、並びに合成二本鎖オリゴヌクレオチド［ポリ（Ｉ：Ｃ）］を含む多数のシグナルがＶＣＡＭ−１の発現を誘導する。これらは、ＫＬおよびＫＲと称する２個の隣接したＫＢ様結合部位を有する、ヒトＶＣＡＭ−１遺伝子の−７５位と −３５位との間に位置する３６塩基対エンハンサー要素によって少なくとも一部分は媒介されると考えられる。これらの要素は、両者ともＮＦ−ｋＢファミリーの転写調節因子の一部分である二つの異なる転写調節因子を結合すると考えられる。転写因子のＧＡＴＡ、ｅｔｓ、ＫＬおよびＫＲ結合部位を含む多数のＶＣＡＭ −１遺伝子調節要素がここで同定された。下記の配列においては、ＫＬすなわち「左」結合部位およびＫＲすなわち「右」結合部位に下線および標識が施されている。ＫＬおよびＫＲ部位は配列が僅かに異なり、そしてゲルシフト実験は、それらが、両方ともＮＦ−ｋＢファミリーの転写調節因子のメンバーであると考えられる別々の転写因子を結合するらしいことを示した。両方の部位が必要であるが、ＶＣＡＭ−１発現のＴＮＦ剌激に対してどちらも単独では十分でない。二つの結合部位はそれぞれ、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバーを結合する別個の先に記載された部位と一緒に特性を共有する。理論に拘束されたくはないが、二つの部位の異なる特徴は、ＶＣＡＭ−１プロモーターの特異性の原因であることが提案されている。イアデマルコら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９２年，２６７，１６３２３〜１６３２９。ＮＦ−ｋＢ様およびＡＰ−１様部位は、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンによって共有されていることが分かる。これらの配列の一方または両方を包含するオリゴヌクレオチドは、３種類全部の血管細胞接着分子の転写に影響を与えると考えられる。対照的に、特定の遺伝子に独特の調節要素を包含するオリゴヌクレオチドは、その遺伝子に対する特異的作用を有すると考えられる。例えば、ＧＡＴＡおよび八量体結合配列は、ＶＣＡＭ−１には見出されるが、ＩＣＡＭ−１にもＥ−セレクチンにも見出されないと考えられる。これらの要素の一つまたはそれ以上を包含するオリゴヌクレオチドは、ＶＣＡＭ−１を特異的に阻害すると考えられる。他の例として、ＩＲＥ配列を含むオリゴヌクレオチドは、ＩＣＡＭ−１を示差的に阻害すると考えられ且つＮＦ− ＥＬＡＭ−１配列を含むオリゴヌクレオチドは、Ｅ−セレクチンを特異的に阻害すると考えられる。遺伝子転写を調節する場合に有用であるためには、オリゴヌクレオチドが遺伝子の転写調節因子結合部位を完全な長さで含む必要はない。治療的オリゴヌクレオチドは、転写調節因子の結合に対して効果的に競合するように遺伝子の結合領域または配列の十分な部分と実質的に同一であるということが唯一必要である。当業者は、特定の転写因子との相互作用に最適なオリゴヌクレオチド長さを容易に決定することができる。一本鎖の核酸を本発明にしたがって用いて遺伝子発現を調節することができることも分った。例えば、自己相補的単分子オリゴヌクレオチド配列は二本鎖ＤＮＡ「のよう」でありうるので、転写調節因子は、遺伝子のダウンレギュレーションを伴ってそれに対して結合することができる。いくつかの実施態様において、二本鎖オリゴヌクレオチドの二つの鎖は、共有結合によって互いに架橋している。同様に、自己相補的オリゴヌクレオチドが共有結合によって架橋して塩基対部分を安定化させるのは望ましいことがある。オリゴヌクレオチドの架橋は、本明細書中にそのまま援用されるＰＣＴ公開ＷＯ９３／１８０５２号明細書に開示されている。治療法に対しては、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンの発現を低下させることによって治療されうる疾患を有すると疑われる動物を、本発明によるオリゴヌクレオチドを投与することによって治療する。オリゴヌクレオチドは、担体、粘稠化剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤、界面活性剤等をオリゴヌクレオチドの他に含んでいてよい薬剤組成物に処方することができる。薬剤組成物は、更に、抗微生物薬、抗炎症薬、麻酔薬等のような１種類またはそれ以上の活性成分をオリゴヌクレオチドの他に含んでいてよい。薬剤組成物は、局所または全身処置が望まれるかどうかおよび治療される領域に応じて多数の方法で投与することができる。投与は、局所による（点眼による、腟による、肛門による、鼻内によるを含む）、経口による、吸入によるまたは非経口による、例えば静脈内点滴、皮下、腹腔内若しくは筋肉内注射によることができる。局所投与用製剤としては、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、噴霧剤、液剤および散剤を挙げることができる。慣用的な薬剤担体、水性、粉末若しくは油性基剤、粘稠化剤等は必要でありうるしまたは望ましいことがある。コーティングコンドームまたはグローブもまた有用でありうる。経口投与用組成物としては、散剤若しくは顆粒剤、水若しくは非水性媒質中の懸濁剤若しくは水剤、カプセル剤、サシェ剤または錠剤がある。粘稠化剤、着香剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤も望ましいことがある。非経口投与用製剤としては、緩衝剤、希釈剤および他の適当な添加剤を含んでいてもよい滅菌水溶液を挙げることができる。投薬は、治療される症状の重篤度および応答性によるが、通常、数日〜数か月持続する治療経過に伴ってまたは治癒するまで若しくは疾患状態の軽減が達成されるまで、一日１回またはそれ以上の用量である。当業者は、最適の投与量、投薬方法論および反復率を容易に決定することができる。本発明は、炎症性細胞接着を調節することができるタンパク質の発現の阻害において用いるためのオリゴヌクレオチドを用いる。本発明の文脈中において、「オリゴヌクレオチド」という用語は、リボ核酸またはデオキシリボ核酸のオリゴマーまたはポリマーを意味する。この用語は、天然に存在する塩基、糖および糖間（主鎖）結合から成るオリゴマー並びに同様に機能する天然に存在しない部分を有するオリゴマーを含む。このような修飾されたまたは置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば、増加した細胞取込みおよびヌクレアーゼ存在下の増加した安定性などの性質ゆえに、しばしば天然型よりも好ましい。本発明のために考えられた若干の好ましいオリゴヌクレオチドの具体的な例は、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、短鎖アルキル若しくはシクロアルキル糖間結合または短鎖ヘテロ芳香族若しくは複素環式糖間結合を含むことができる。最も好ましいのは、主鎖ＣＨ₂−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｎ（ＣＨ₃）−Ｏ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｎ（ＣＨ₃）−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₂およびＯ−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₂−ＣＨ₂（但し、ホスホジエステルはＯ−Ｐ−Ｏ−ＣＨ₂である）を有するものである。更に好ましいのは、モルホリノ主鎖構造を有するオリゴヌクレオチドである。サマートン（Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ），Ｊ．Ｅ．およびウェラー（Ｗｅｌｌｅｒ），Ｄ．Ｄ．、米国特許第５，０３４，５０６号明細書。ペプチド−核酸（ＰＮＡ）主鎖のような他の好ましい実施態様においては、オリゴヌクレオチドのホスホジエステル主鎖は、ポリアミド主鎖によって置換えることができ、塩基は、ポリアミド主鎖のアザ窒素原子に対して直接的にまたは間接的に結合する。Ｐ．Ｅ．ニールセン（Ｎｉｅｌｓｅｎ）、Ｍ．エグホルム（Ｅｇｈｏｌｍ）、Ｒ．Ｈ．ベルグ（Ｂｅｒｇ）、Ｏ．ブカルト（Ｂｕｃｈａｒｄｔ）、Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９１年，２５４，１４９７。他の好ましいオリゴヌクレオチドは、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ₃、Ｆ、ＯＣＮ、Ｏ（ＣＨ₂）_nＮＨ₂またはＯ（ＣＨ₂）_nＣＨ₃（式中、ｎは１〜約１０である）；Ｃ₁〜Ｃ₁₀低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリルまたはアラルキル；Ｃｌ；Ｂｒ；ＣＮ；ＣＦ₃；ＯＣＦ₃；Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ₃；ＳＯ₂ＣＨ₃；ＯＮＯ₂；ＮＯ₂；Ｎ₃；ＮＨ₂；ヘテロシクロアルキル；ヘテロシクロアルカリル；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ；置換シリル；ＲＮＡ開裂基；コンジュゲート；リポーター基；インターカレーター；オリゴヌクレオチドの薬動学的性質を改良するための基；或いはオリゴヌクレオチドの薬力学的性質を改良するための基、および同様の性質を有する他の置換基の内の一つを２′位に含む糖残基を含んでいてもよい。オリゴヌクレオチドはまた、ペントフラノシル基の代わりにシクロブチルなどの糖模倣物を有していてもよい。修飾された塩基および万能塩基、特にイノシンもまた本発明において用いることができる。本発明によるオリゴヌクレオチドは、好ましくは、約１０〜約８０核酸塩基単位を含む。このようなオリゴヌクレオチドは、約１２〜５０核酸塩基単位を含むのが更に好ましく、約１８〜３５核酸塩基単位を有するのがなお一層好ましい。理解されるように、核酸塩基単位は、隣接する核酸塩基単位に対してホスホジエステルまたは他の結合によって適当に結合した塩基−糖の組合せである。本発明によって用いられるオリゴヌクレオチドは、便利にかつ日常的に、周知の固相合成技術によって製造することができる。このような合成用の装置は、アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を含むいくつかの販売者によって販売されている。このような合成のための他の手段はいずれも用いることができるが、オリゴヌクレオチドの実際の合成は、十分に日常的作業者の技術の範囲内である。同様の技術を用いて、ホスホロチオエートおよびアルキル化誘導体などの他のオリゴヌクレオチドを製造することも周知である。本発明をいくつかのその好ましい実施態様にしたがって具体的に記載してきたが、以下の実施例は本発明を単に例証するのに役立ち且つ本発明を制限するためのものではない。実施例実施例１オリゴヌクレオチド合成：非修飾ＤＮＡオリゴヌクレオチドを、自動ＤＮＡ合成機（アプライド・バイオシステムズ３８０Ｂ型）において、ヨウ素による酸化を用いる標準的なホスホルアミダイト化学を用いて合成した。β−シアノエチルジイソプロピルホスホルアミダイトは、アプライド・バイオシステムズ（フォスターシティー、ＣＡ）から購入された。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドに対しては、標準的な酸化反応ボトルを、亜リン酸結合の段階的チオ化（ｔｈｉａｔｉｏｎ）のために、３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン−１，１−ジオキシドのアセトニトリル中０．２Ｍ溶液で置換えた。チオ化サイクル待ち工程を６８秒間まで増加させ、続いてキャッピング工程を行った。２′−Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、２′−Ｏ−メチルβ−シアノエチルジイソプロピルホスホルアミダイト（ケムジーンズ（Ｃｈｅｍｇｅｎｅｓ）、ニーダムＭＡ）を用い且つテトラゾールおよび塩基のパルス供給後の待ち工程を３６０秒間まで増加させた以外は非修飾オリゴヌクレオチドの標準的なサイクルを用いて合成された。合成を開始するのに用いられた３′− 塩基は２′−デオキシリボヌクレオチドであった。制御細孔ガラスカラム（アプライド・バイオシステムズ）から切断し且つ濃水酸化アンモニウム中において５５℃で１８時間脱保護した後、オリゴヌクレオチドを２．５容量のエタノールによって０．５ＭＮａＣｌから２回沈澱させることによって精製した。分析ゲル電気泳動は、２０％アクリルアミド、８Ｍ尿素、４５ｍＭトリス−ホウ酸緩衝液、ｐＨ７．０中で行われた。オリゴデオキシヌクレオチドおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、電気泳動により、８０％以上が完全長さ材料であると判定された。実施例２ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１発現についてのＶＣＡＭ−１ＫＦおよびＫＬ結合部位を含む二本鎖オリゴヌクレオチドの評価：ＫＬ結合部位によるか若しくはＫＲ結合部位によるかまたは両方の結合部位による妨害は、遺伝子の転写を妨げて、ＶＣＡＭ−１の生産を低下させることが分った。ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有する下記の二本鎖デオキシオリゴヌクレオチドは、個々の鎖の固相オリゴヌクレオチド合成によって製造された。このオリゴヌクレオチドは、５′および３′末端それぞれの５個のヌクレオチドが切断されていることを除き、ＶＣＡＭ−１プロモーター領域（配列番号１）に対応する。ＫＬおよびＫＲ部位に下線を施している。実際の「天然」ＫＬおよびＫＲ部位は、共通配列よりも天然調節要素をより近く模擬していると考えられるのでこれらを用いた。等モル濃度の２本の鎖を混合し且つ６５℃まで５分間加熱した。鎖を２５℃まで徐々に冷却することによってアニーリングさせた。得られた二本鎖オリゴヌクレオチドをヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＥＣ）と一緒に３７℃で１５時間インキュベートした。ＶＣＡＭ−１発現は、細胞を腫瘍壊疽因子（ＴＮＦ−α、１００ｕ／ｍｌ）と一緒に４時間インキュベートすることによって誘導された。両方ともＮＦ−ｋＢファミリーの転写因子のメンバーの結合部位を有するＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の発現は、ノーザンブロット分析によって確認された。表１に示された結果は、二本鎖ホスホロチオエートＶＣＡＭ−１ｋＢ結合部位が、その遺伝子もまたｋＢ結合部位を有するＩＣＡＭ−１と比較して、ＶＣＡＭ−１に対する少なくとも１００倍の選択性を示すことを実証している。したがって、ＶＣＡＭ−１遺伝子上の１個または複数のｋＢ結合部位は、ＩＣＡＭ−１遺伝子上のｋＢ結合部位とは異なると考えられる。実施例３ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１発現についてのＶＣＡＭ−１ＫＦおよびＫＬ結合部位を含む二本鎖および一本鎖（自己相補的）オリゴヌクレオチドの評価：ＶＣＡＭ−１遺伝子のプロモーター領域の左（ＫＬ）または右（ＫＲ）転写因子結合部位のみに対応する下記のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを合成した。該左部位のオリゴヌクレオチドは、を含み、該右部位のオリゴヌクレオチドは、を含んでいた。予備データは、配列番号：３および配列番号：４両方が内皮細胞および平滑筋細胞中でＶＣＡＭ−１発現を阻害することができ、より長い配列（配列番号：２）よりも一層高い活性を示したことを示している。したがって、調節因子を結合する遺伝子配列の完全な長さかまたは有効なより短い部分を本発明の治療的オリゴヌクレオチドの配列に用いることができる。ＫＬ結合部位を含み、若干の追加の複雑性を有する更に別のオリゴヌクレオチドは、以下の配列を有する。自己相補的単分子オリゴヌクレオチド配列もまた用いることができる。下記の一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを固相合成によって構築した。それらは、ＶＣＡＭ−１遺伝子のＫＬおよびＫＲ部位由来の配列を有するように設計された。複雑性の若干少ないホスホロチオエート主鎖を有する更に別の自己相補的ＤＮＡ配列を、更に、遺伝子の結合領域の左部位に基いて合成した。配列番号：５を６５℃まで加熱し且つ前記のように徐々に冷却することによってアニーリングして二本鎖（自己相補型）にした。オリゴヌクレオチド１００ｎＭを、コンフルエントのヒト初代臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）と一緒に９６ウェルプレート中において３７℃で１８時間インキュベートした。ＴＮＦ−α（１００ｕ／ｍｌ）またはＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）を細胞に加え且つ更に１８時間インキュベートした。細胞表面ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１発現を、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ、ミネアポリスＭＮ）を用いてＥＬＩＳＡによって判定した。ＶＣＡＭ−１のｋＢ結合部位の部分を含む自己相補的ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、ＩＣＡＭ−１発現と比べてＶＣＡＭ−１発現を選択的に下方制御する。これを表２に示す。配列番号：５を更に、ホスホジエステル主鎖を有するもの、およびヌクレオチド糖の２′位にメトキシ（２′−Ｏ−メチル）基を有するホスホロチオエートとして合成した。これらを、ホスホロチオエートデオキシ配列と比較した。オリゴヌクレオチドを６５℃まで加熱し且つ徐々に冷却して鎖をアニーリングさせた。オリゴヌクレオチド（１００ｎＭ）を９６ウェルプレート中においてＤＯＴＭＡ／ＤＯＰＥ混合物７μｇ／ｍｌ存在下でＨＭＥＣと一緒に４時間インキュベートした。ＴＮＦ−α（１００ｕ／ｍｌ）を細胞に加え且つ更に１８時間インキュベートした。細胞表面ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１発現を、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１抗体を用いるＥＬＩＳＡによって判定した。結果を表３に示す。実施例４ＶＣＡＭ転写のオリゴヌクレオチド妨害：転写因子結合に対する競合：ＴＮＦ−α処理されたＨＵＶＥＣ細胞において、ＶＣＡＭ−１ＫＬ配列に対して選択的に結合するタンパク質が誘導されることが示されている。配列番号：５は、ゲルシフト検定により、この転写調節タンパク質の結合に対してＶＣＡＭ −１遺伝子上の天然ＫＬ配列と競合することが分った。オリゴヌクレオチド処理後のＶＣＡＭ−１転写活性のＣＡＴ検定：クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子に対してインフレームで融合したＶＣＡＭ−１転写開始部位の上流の２８８ヌクレオチドを包含するＣＡＴリポータープラスミドを、配列番号：５または変更されたＫＬ結合領域を有するこのオリゴヌクレオチドの突然変異型の存在下または不存在下において、標準的なリン酸カルシウムトランスフェクション技術を用いてヒトＨＭＥＣ細胞中にトランスフェクトした。細胞をＴＮＦ−α（１００ｕ／ｍｌ）によって約４８時間処理し、そして細胞質ゾル抽出物を調製した。ＣＡＴ活性は、薄層クロマトグラフィーによって判定し且つクロラムフェニコールのそのアセチル化型への変換の百分率として表わされた。結果を表４に示す。これらの結果は、配列番号：５が、ＴＮＦ−αによるＶＣＡＭ−１転写の誘導を阻害することを示唆している。実施例５ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＥ−セレクチン発現に対するキメラ多様式オリゴヌクレオチドの作用：多様式の典型的なキメラオリゴヌクレオチドを更に製造した。キメラオリゴヌクレオチドの第一領域は、転写調節因子を結合するＶＣＡＭ−１コーディング遺伝子の左部位からの配列を有する二本鎖ＤＮＡである。オリゴヌクレオチドの第二領域は、ＶＣＡＭ−１に対する有意の伝統的アンチセンス活性を有することが発明者らの一人に知られている配列を有するＤＮＡを含む。本明細書中にそのまま援用される１９９１年７月２３日出願のＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５２０９号明細書および１９９３年１月２１日出願の米国特許出願第００７，９９７号明細書を参照されたい。オリゴヌクレオチドの二つの領域を連結領域によって互いに結合する。下記のオリゴヌクレオチド（配列番号：８）を製造した。肉太活字は、転写調節因子を結合する二本鎖ホスホロチオエートＤＮＡを示し、下線部分は、ＶＣＡＭ−１ｍＲＮＡとのアンチセンス相互作用のための配列を有するホスホロチオエートＤＮＡを意味し、そして普通活字は、連結領域かまたは安定性のために含まれた治療的に無効の配列であるＤＮＡかまたはＲＮＡを示す。この実施態様において、二本鎖調節因子結合領域（肉太活字）およびアンチセンス鎖の領域（下線）は、ホスホロチオエート主鎖を有するように合成された。連結領域およびアンチセンス領域のセンス鎖を含む残りのヌクレオチドは、野生型ホスホジエステルヌクレオチド間結合を有した。この多様式オリゴヌクレオチドを予備実験において評価して、ＨＵＶＥＣ細胞におけるＴＮＦ−α誘導ＶＣＡＭ−１発現に対する１０ｎＭオリゴヌクレオチドの作用を比較した。オリゴヌクレオチドを６５℃まで加熱し且つ徐々に冷却して鎖をアニーリングさせた。オリゴヌクレオチド［多様式（配列番号：８）、自己相補的単分子（配列番号：５）および突然変異ＫＬ部位を有する配列番号：５の突然変異型］１０ｎＭおよびリポフェクチン７μｌ／ｍｌを、９６ウェルプレート中においてＯＰＴＩＭＥＡＭで洗浄されたコンフルエントの初期継代初代ＨＵＶＥ細胞に対して加えた。５時間後、ウェルを洗浄し、そして２０％ＦＣＳ／ＤＭＥＭを２時間加えた。次に、ＴＮＦ−α １００ｕ／ｍｌを加えた。更に１８時間後、ＶＣＡＭ −１またはＩＣＡＭ−１の細胞表面発現を、商業的に入手可能なＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１に対する抗体を用いる生細胞でのＥＬＩＳＡ検定によって判定した。表５に示された結果は、それぞれの点についての三重反復検定の平均である。この予備実験は、ＶＣＡＭ−１転写因子ＫＬ結合部位を含む自己相補的オリゴヌクレオチド（配列番号：５）がＶＣＡＭ−１発現を阻害しなかった極めて低い濃度において、該ＫＬ部位およびＶＣＡＭ−１を標的としたアンチセンス領域の両方を含む多様式オリゴヌクレオチド（配列番号：８）は、ＶＣＡＭ−１発現を約２７％阻害したことを実証した。これは、多様式オリゴヌクレオチドが、転写因子結合部位のみを含むオリゴヌクレオチドよりもなお一層有効でありうることを示唆している。実施例６他のＶＣＡＭ−１調節配列を含むオリゴヌクレオチド：ヒトＶＣＡＭ−１からのＧＡＴＡ配列要素を含む二本鎖オリゴヌクレオチドをホスホロチオエートとして合成した。配列は以下の通りである。同一のＧＡＴＡ配列を含む単分子自己相補的オリゴヌクレオチドを更に合成した。更に、ヒトＶＣＡＭ−１から近いｅｔｓ配列を含む二本鎖オリゴヌクレオチドを合成した。これらのオリゴヌクレオチドを最適条件下（ＨＵＶＥ細胞が７５％コンフルエントであったこと以外は前の実施例と同様）において調べた。結果をＴＮＦ−α誘導後の発現の阻害の百分率として表６に表わす。更に、この実験において、配列番号：５が最適条件下においてＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびＥ−セレクチン発現を阻害する能力について１ｎＭ〜１００ｎＭの濃度で調べた。その結果もまた表６に示す。これらのデータは、１００ｎＭにおいて配列番号：５がＶＣＡＭ−１およびＥ−セレクチン誘導の両方を完全に阻止し、ＩＣＡＭ−１の阻害は僅か３７％であることを示している。更に低い濃度では、ＶＣＡＭ−１はなお５０％より大きく阻止されるが、Ｅ−セレクチンにもＩＣＡＭ−１にも効果はない。二分子ｅｔｓ若しくはＧＡＴＡオリゴヌクレオチドまたは単分子自己相補的ＧＡＴＡオリゴヌクレオチドのいずれの濃度においても、ＶＣＡＭ−１発現は７０％より大きく阻害され、Ｅ−セレクチンまたはＩＣＡＭ−１のどちらの阻害も０〜４０％である。したがって、「天然」ＶＣＡＭ−１エンハンサー要素を含むオリゴヌクレオチドは、共通調節配列を有するオリゴヌクレオチドなどによって予期されなかった特異性および選択性を伴ってＶＣＡＭ−１発現を調節することができる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年６月１日【補正内容】差し替え用紙第３８／１頁の翻訳文８．血管細胞接着分子がＥ−セレクチンである請求項１に記載の方法。【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年１１月１７日【補正内容】差し替え用紙第４０頁の翻訳文１８．アテローム硬化症、再狭窄または炎症性疾患を治療する方法であって、アテローム硬化症、再狭窄または炎症性疾患を有する動物に対して、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２の内の一つを有するオリゴヌクレオチド部分の治療的有効量を投与することを含む方法。１９．転写調節因子を結合する遺伝子のＤＮＡ配列の少なくとも一部分の配列と同一の配列を含むオリゴヌクレオチド部分であって、該遺伝子が血管細胞接着分子をコードすることを特徴とするオリゴヌクレオチド部分。２０．血管細胞接着分子がＶＣＡＭ−１である請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。２１．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１およびＧＡＴＡから成る群より選択される請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド部分。２２．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ｋＢ結合部位、ＫＬ、ＫＲ、ＡＰ−１結合部位、ｅｔｓ結合部位、ＧＡＴＡ結合部位および八量体結合部位から成る群より選択される請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド部分。２３．血管細胞接着分子がＩＣＡＭ−１である請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。２４．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１、Ｓｐ− １、ＡＰ−２、ＡＰ−３およびインターフェロンから成る群より選択される請求項２３に記載のオリゴヌクレオチド部分。２５．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ＣＡＴ配列、ｋＢ結合部位、ＡＰ−１結合部位、Ｓｐ−１結合部位、ＡＰ−２結合部位、ＡＰ−３結合部位およびインターフェロン反応要素から成る群より選択される請求項２３に記載のオリゴヌクレオチド部分。【手続補正書】【提出日】１９９６年５月７日【補正内容】請求の範囲１．転写調節因子を結合する遺伝子のＤＮＡ配列の少なくとも一部分の配列と実質的に同一の配列を含むオリゴヌクレオチド部分であって、該遺伝子が血管細胞接着分子をコードすることを特徴とするオリゴヌクレオチド部分。２．血管細胞接着分子がＶＣＡＭ−１である請求項１に記載のオリゴヌクレオチド部分。３．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１およびＧＡＴＡから成る群より選択される請求項２に記載のオリゴヌクレオチド部分。４．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ｋＢ結合部位、ＫＬ、ＫＲ、ＡＰ−１結合部位、ｅｔｓ結合部位、ＧＡＴＡ結合部位および八量体結合部位から成る群より選択される請求項２に記載のオリゴヌクレオチド部分。５．血管細胞接着分子がＩＣＡＭ−１である請求項１に記載のオリゴヌクレオチド部分。６．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１、Ｓｐ−１、ＡＰ−２、ＡＰ−３およびインターフェロンから成る群より選択される請求項５に記載のオリゴヌクレオチド部分。７．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ＣＡＴ配列、ｋＢ結合部位、ＡＰ−１結合部位、Ｓｐ−１結合部位、ＡＰ−２結合部位、ＡＰ −３結合部位およびインターフェロン反応要素から成る群より選択される請求項５に記載のオリゴヌクレオチド部分。８．血管細胞接着分子がＥ−セレクチンである請求項１に記載のオリゴヌクレオチド部分。９．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１およびＮＦ −ＥＬＡＭ１から成る群より選択される請求項８に記載のオリゴヌクレオチド部分。１０．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ｋＢ結合部位、逆方向ＣＣＡＡＴ配列、ＡＰ−１結合部位およびＮＦ−ＥＬＡＭ１結合部位から成る群より選択される請求項８に記載のオリゴヌクレオチド部分。１１．オリゴヌクレオチド部分のヌクレオチド単位間の結合基の少なくとも一つがホスホロチオエート結合基である請求項１に記載のオリゴヌクレオチド部分。１２．配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：7、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１および配列番号：１２から成る群より選択される請求項１に記載のオリゴヌクレオチド部分。１３．遺伝子の発現を調節するためのキメラオリゴヌクレオチドであって、該遺伝子の配列が転写調節因子を結合する該遺伝子配列の少なくとも一部分と実質的に同一である配列を有する第一領域、および該遺伝子に由来するｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシング領域または該遺伝子に由来するｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうる第二領域を含むことを特徴とするキメラオリゴヌクレオチド。１４．遺伝子の発現を調節するためのキメラオリゴヌクレオチドであって、該遺伝子の配列が転写調節因子を結合する該遺伝子配列の少なくとも一部分と実質的に同一である配列を有する第一領域、および該遺伝子に由来するｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシング領域と特異的にハイブリッド形成しうる第二領域を含むことを特徴とするキメラオリゴヌクレオチド。１５．前記キメラオリゴヌクレオチドの少なくとも一部がヌクレアーゼ分解に対して安定化されている請求項１３または１４に記載のキメラオリゴヌクレオチド。１６．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の結合基の少なくとも一つがホスホロチオエート結合基である請求項１５記載のキメラオリゴヌクレオチド。１７．血管細胞接着分子をコードする遺伝子の発現を調節する方法であって、転写調節因子を結合する結合配列を有する該遺伝子の一部分を選択し；そして該遺伝子を含む細胞を、請求項１−１６のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド部分と接触させることを含む方法。１８．ある選択された遺伝子の発現に関与する疾患を有すると疑われる哺乳動物を治療する方法であって、該哺乳動物に対して薬学的に許容しうる担体または希釈剤中の、請求項１−１６のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド部分を投与することを含む方法。１９．細胞中のＶＣＡＭ−１の発現を調節する方法であって、該細胞を、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２の内の一つを有するオリゴヌクレオチド部分のＶＣＡＭ−１阻害量と接触させることを含む方法。２０．アテローム硬化症、再狭窄または炎症性疾患を治療する方法であって、アテローム硬化症、再狭窄または炎症性疾患を有する動物に対して、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２の内の一つを有するオリゴヌクレオチド部分の治療的有効量を投与することを含む方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 48/00 9051−4ＣＡ６１Ｋ 48/00 Ｃ０７Ｈ 21/04 8615−4ＣＣ０７Ｈ 21/04 ＢＣ１２Ｎ 5/06 9637−4ＢＣ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 9281−4ＢＣ１２Ｎ 5/00 Ｅ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ベネット，クラレンス・フランクアメリカ合衆国カリフォルニア州92008, カールズバッド，ベールウッド・アベニュー 2613

Claims

【特許請求の範囲】１．血管細胞接着分子をコードする遺伝子の発現を調節する方法であって、転写調節因子を結合する結合配列を有する該遺伝子の一部分を選択し；そして該遺伝子を含む細胞を、該遺伝子の該結合配列の少なくとも一部分と配列が実質的に同一であるオリゴヌクレオチド部分と接触させることを含む方法。２．血管細胞接着分子がＶＣＡＭ−１である請求項１に記載の方法。３．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１およびＧＡＴＡから成る群より選択される請求項２に記載の方法。４．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ｋＢ結合部位、ＫＬ、ＫＲ、ＡＰ−１結合部位、ｅｔｓ結合部位、ＧＡＴＡ結合部位および八量体結合部位から成る群より選択される請求項２に記載の方法。５．血管細胞接着分子がＩＣＡＭ−１である請求項１に記載の方法。６．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１、Ｓｐ− １、ＡＰ−２、ＡＰ−３およびインターフェロンから成る群より選択される請求項５に記載の方法。７．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ＣＡＴ配列、ｋＢ結合部位、ＡＰ−１結合部位、Ｓｐ−１結合部位、ＡＰ−２結合部位、ＡＰ−３結合部位およびインターフェロン反応要素から成る群より選択される請求項５に記載の方法。９．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１およびＮＦ−ＥＬＡＭ１から成る群より選択される請求項８に記載の方法。１０．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ｋＢ結合部位、逆方向ＣＣＡＡＴ配列、ＡＰ−１結合部位およびＮＦ−ＥＬＡＭ１結合部位から成る群より選択される請求項８に記載の方法。１１．前記オリゴヌクレオチド部分がＤＮＡの二本の相補鎖を含む請求項１に記載の方法。１２．ＤＮＡの二本の相補鎖が共有結合によって架橋されている請求項１１に記載の方法。１３．前記オリゴヌクレオチド部分が一本鎖の自己相補的核酸を含む請求項１に記載の方法。１４．自己相補的核酸鎖が共有結合によって架橋されている請求項１３に記載の方法。１５．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の結合基の少なくとも一つがホスホロチオエート結合基である請求項１に記載の方法。１６．前記調節を遺伝子の転写の阻害によって行う請求項１に記載の方法。１７．細胞中のＶＣＡＭ−１の発現を調節する方法であって、該細胞を、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２の内の一つを有するオリゴヌクレオチド部分のＶＣＡＭ−１阻害量と接触させることを含む方法。１８．アテローム硬化症、再狭窄または炎症性疾患を治療する方法であって、アテローム硬化症、再狭窄または炎症性疾患を有する動物に対して、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２の内の一つを有するオリゴヌクレオチド部分の治療的有効量を投与することを含む方法。１９．転写調節因子を結合する遺伝子のＤＮＡ配列の少なくとも一部分の配列と実質的に同一の配列を含むオリゴヌクレオチド部分であって、該遺伝子が血管細胞接着分子をコードすることを特徴とするオリゴヌクレオチド部分。２０．血管細胞接着分子がＶＣＡＭ−１である請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。２１．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１およびＧＡＴＡから成る群より選択される請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド部分。２２．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ｋＢ結合部位、ＫＬ、ＫＲ、ＡＰ−１結合部位、ｅｔｓ結合部位、ＧＡＴＡ結合部位および八量体結合部位から成る群より選択される請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド部分。２３．血管細胞接着分子がＩＣＡＭ−１である請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。２４．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１、Ｓｐ− １、ＡＰ−２、ＡＰ−３およびインターフェロンから成る群より選択される請求項２３に記載のオリゴヌクレオチド部分。２５．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ＣＡＴ配列、ｋＢ結合部位、ＡＰ−１結合部位、Ｓｐ−１結合部位、ＡＰ−２結合部位、ＡＰ−３結合部位およびインターフェロン反応要素から成る群より選択される請求項２３に記載のオリゴヌクレオチド部分。２６．血管細胞接着分子がＥ−セレクチンである請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。２７．転写調節因子が、ＮＦ−ｋＢファミリーのメンバー、ＡＰ−１およびＮＦ−ＥＬＡＭ１から成る群より選択される請求項２６に記載のオリゴヌクレオチド部分。２８．転写調節因子を結合するＤＮＡ配列が、ＴＡＴＡボックス、ｋＢ結合部位、逆方向ＣＣＡＡＴ配列、ＡＰ−１結合部位およびＮＦ−ＥＬＡＭ１結合部位から成る群より選択される請求項２６に記載のオリゴヌクレオチド部分。２９．ＤＮＡの二本の相補鎖を含む請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。３０．ＤＮＡの二本の相補鎖が共有結合によって架橋されている請求項２９に記載のオリゴヌクレオチド部分。３１．一本鎖の自己相補的核酸を含む請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。３２．自己相補的核酸鎖が共有結合によって架橋されている請求項３１に記載のオリゴヌクレオチド部分。３３．オリゴヌクレオチド部分のヌクレオチド単位間の結合基の少なくとも一つがホスホロチオエート結合基である請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。３４．配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１および配列番号：１２から成る群より選択される請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド部分。３５．遺伝子の発現を調節するためのキメラオリゴヌクレオチドであって、該遺伝子の配列が転写調節因子を結合する該遺伝子配列の少なくとも一部分と実質的に同一である配列を有する第一領域、および該遺伝子に由来するｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシング領域または該遺伝子に由来するｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうる第二領域を含むことを特徴とするキメラオリゴヌクレオチド。３６．前記第一および第二領域がヌクレアーゼ分解に対して安定化されている請求項３５に記載のキメラオリゴヌクレオチド。３７．前記第一および第二領域が、細胞性ヌクレアーゼの基質である連結領域に隣接している請求項３５に記載のキメラオリゴヌクレオチド。３８．前記細胞性ヌクレアーゼがＲＮＡｓｅＨまたはＤＮＡｓｅである請求項３７に記載のキメラオリゴヌクレオチド。３９．前記第一および第二領域が、細胞性ヌクレアーゼの基質である連結領域に隣接し且つ該第一および第二領域がヌクレアーゼ分解に対して安定化されている請求項３６に記載のキメラオリゴヌクレオチド。４０．前記細胞性ヌクレアーゼがＲＮＡｓｅＨまたはＤＮＡｓｅである請求項３９に記載のキメラオリゴヌクレオチド。４１．前記第一および第二領域が、該領域のヌクレオチド単位間のホスホロチオエート結合基によって安定化されている請求項３９に記載のキメラオリゴヌクレオチド。４２．遺伝子の発現を調節するためのキメラオリゴヌクレオチドであって、該遺伝子の配列が転写調節因子を結合する該遺伝子配列の少なくとも一部分と実質的に同一である配列を有する第一領域、該遺伝子に由来するｐｒｅ−ｍＲＮＡのスプライシング領域と特異的にハイブリッド形成しうる第二領域、および該遺伝子に由来するｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうる第三領域を含むキメラオリゴヌクレオチド。４３．前記第一、第二および第三領域のそれぞれが、代謝分解に対して安定化されており且つ代謝分解に対して不安定な連結領域に隣接している請求項４２に記載のキメラオリゴヌクレオチド。４４．ある選択された遺伝子の発現に関与する疾患を有すると疑われる哺乳動物を治療する方法であって、該哺乳動物に対して薬学的に許容しうる担体または希釈剤中のオリゴヌクレオチド部分を投与することを含み、該オリゴヌクレオチド部分は、転写調節因子を結合する該遺伝子の配列の少なくとも一部分の配列と実質的に同一のヌクレオチド配列を含むことを特徴とする方法。