KR20000038058A - 겨우살이를 발효시키는 신규 유산균인 락토바실러스 카제이 케이 와이 22713 - Google Patents

겨우살이를 발효시키는 신규 유산균인 락토바실러스 카제이 케이 와이 22713 Download PDF

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Abstract

본 발명은 겨우살이를 발효시키는 새로운 유산균인 락토바실러스 카제이 KY 22713 (Lactobacillus casei KY 22713)(기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061)에 관한 것으로, 특히 겨우살이를 발효시켜 정상세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 감소시키면서 암세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 그대로 유지시키는 새로운 유산균에 관한 것이다. 본 발명에 따른 락토바실러스 카제이 KY 22713은 리보스, 갈락토오스, 글루코오스, 프럭토오스, 만노스, 만니톨, 솔비톨, 알부틴, 에스쿨린, 살리신, 말토오스, 락토오스, 슈크로오스, 트레할로스, 이눌린, 타가토스로부터 산을 생성하며; 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 활성을 나타내지 않고; 1∼7% 겨우살이 추출액에 104∼107cfu/㎖로 접종하여 배양 24시간 후부터 108cfu/㎖ 이상의 생균수를 나타내며; 발효에 의해 겨우살이의 단백질 함량을 약 25% 정도 감소시키고; 발효에 의해 암세포에 대한 겨우살이의 독성은 유지시키면서 정상세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 약 50∼100배 정도 약독화시키는 것을 특징으로 한다.

Description

겨우살이를 발효시키는 신규 유산균인 락토바실러스 카제이 케이와이 22713
본 발명은 겨우살이를 발효시키는 새로운 유산균인 락토바실러스 카제이 KY 22713 (Lactobacillus casei KY 22713)(기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061)에 관한 것으로, 특히 겨우살이를 발효시켜 정상세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 감소시키면서 암세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 그대로 유지시키는 새로운 유산균에 관한 것이다.
겨우살이(Mistletoe, Viscum album)는 겨우살이과에 속하는 식물로서 세계 전역에 30속 1,500 여종이 있는 것으로 알려져 있다. 여러 종의 겨우살이 중에서 약제로 사용되는 겨우살이는 비스쿰(Viscum) 속의 겨우살이며, 특히 유럽산 겨우살이인 비스쿰 알붐 로란타체아(Viscum album loranthacea)는 유럽에서 이미 항암 및 항암보조제로 인가되어 사용되고 있다. 한국산 겨우살이는 유럽산 겨우살이와는 아종이 다른 비스쿰 알붐 콜로라툼 (Viscum album coloratum)으로 참나무, 배나무, 오리나무, 사과나무, 팽나무, 소나무, 가문비나무 등 다양한 나무들을 숙주로 하는 반기생 식물이다. 한방에서는 상기생이라는 약초명으로 진정(鎭靜), 통경(痛經), 요통, 고혈압, 소종(消腫), 유산(流産)방지, 치통, 자통(刺痛) 등에 이용되어 왔다.
겨우살이는 종양에 대한 직접적인 살세포 효과와 면역 활성 증가 효과를 모두 나타내는 것으로 보고되어 있으며, 종양세포에 대해 증식억제 효과를 보이는 성분으로는 렉틴(lectin) 성분이 지목되고 있다. 유럽산 겨우살이는 D-갈락토오스와 N-아세틸갈락토사민에 대한 결합 특이성에 따라 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ의 세 가지 형태가 존재한다. Ⅰ의 구조를 살펴보면, A 체인과 B 체인이 디설파이드 결합에 의해 연결되어 분자량 60,000 달톤(dalton) 정도의 서브유니트를 구성하고 두 개의 서브유니트가 이량체(dimer)를 형성하고 있다. B 체인은 세포 표면의 당과 결합이 가능하여 A 체인의 식세포작용(endocytosis)을 도와주고 A 체인은 다시 세포질 내의 리보솜을 불활성화시켜 단백질 합성을 저해함으로써 세포 독성을 나타내는 것으로 알려져 있다.
한국산 겨우살이 (Viscum album coloratum)에 대해서는 과야(Khwaja) 등이 항종양 효과를 조사하였으며 (Experimentia, 36, p599, 1980)(Oncology, 43:suppl. 1, p42, 1986), 윤 등이 한국산 겨우살이가 유럽의 시판제품인 헬릭서(Helixor)에 비하여 종양괴사인자 (tumor necrosis factor-α: TNF-α)와 인터로이킨-1 (interleukin-1: IL-1)의 유도능이 우수하다는 실험결과와 이들 사이토킨(cytokines)을 유도하는 활성물질은 렉틴에 의한 결과임을 시사하였으며 (생약학회지, 25, p132, 1994), 박 등은 한국산 겨우살이로부터 렉틴성분을 분리하였다 (약학회지, 38, p687, 1994). 겨우살이에 관한 특허출원으로는 겨우살이를 이용한 항종양 효과(대한민국 특허공개 94-13525), 항암제(대한민국 특허공개 96-40366), 면역증강제(대한민국 특허공개 97-64612), 유산균 발효물의 제조방법(대한민국 특허공개 97-64384) 등이 있다.
현재까지 겨우살이의 독성에 관한 연구결과, 겨우살이의 대표적인 독성물질은 렉틴(lectins), 독성단백(toxic proteins), 세포독성 알칼로이드(cytotoxic alkaloids) 등으로 알려져 있으며 (Cancer Res., 50, p3322, 1990 ; Arzneim-Forsch/Drug Res., 39, p1580, 1989 ; Cancer Letters, 66, p123, 1992), 특히 유럽산의 경우는 렉틴이 가장 강력한 독성물질로 인정되고 있다 (J. Biol. Regul. ＆ Honeo Agents, 7, pl, 1994). 한국산 겨우살이 역시 세포독성 효과를 가지고 있고, 여기에는 알칼로이드 성분과 렉틴이 관여하는 것으로 알려져 있다 (Experimentia, 36, p599, 1980). 반면, 겨우살이 이용제품으로 유럽에서 시판되고 있는 헬릭서(Helixor) 등은 세포독성 효과가 거의 나타나지 않는데 이는 제조과정에서 렉틴과 같은 세포독성 물질이 불활성화된 때문인 것으로 생각된다.
한편, 겨우살이를 발효시키는 유산균으로는 유럽에서 락토바실러스 프란타룸(Lactobacillus plantarum)이 알려져 있는데, 이 유산균으로 발효시킨 겨우살이가 체액성 및 세포성 면역체계를 자극하는 면역증강 효과가 있는 것으로 보고되어 있다. 유산균에 의한 겨우살이의 발효는 세포에 대한 겨우살이의 직접적인 독성 효과는 줄이고 반면 겨우살이의 면역증강 활성은 유지시키는 것으로 알려져 있으며, 이는 유산균 발효에 의하여 렉틴 A, B 체인이 분리되거나 더 작은 분자량을 가지는 펩타이드로 바뀌어 독성과 관련된 부위가 변형된 때문인 것으로 추정된다.
본 발명자들은 종양세포에 대한 겨우살이의 독성은 그대로 유지시키면서 정상세포에 대한 겨우살이의 독성은 약화시키는 새로운 유산균에 관해 연구하던 중 유제품으로부터 새로운 유산균인 락토바실러스 카제이 KY 22713 (기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061)를 분리함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명은 한국산 겨우살이 (Viscum album coloratum)를 발효시킴으로써 종양세포에 대한 겨우살이의 독성은 유지시키고 반면 정상세포에 대한 겨우살이의 독성은 약독화시키는 새로운 유산균인 락토바실러스 카제이 KY 22713 (기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061)를 제공하는 것을 목적으로 한다.
도 1은 락토바실러스 카제이 KY 22713에 의한 겨우살이 발효물의 생균수 및 pH 변화에 대한 그래프,
도 2는 락토바실러스 카제이 KY 22713에 의한 겨우살이 발효물의 총 당량 변화에 대한 그래프,
도 3은 락토바실러스 카제이 KY 22713에 의한 겨우살이 발효물의 단백질 함량 변화에 대한 그래프,
도 4는 락토바실러스 카제이 KY 22713에 의한 겨우살이 발효물의 단백질 성분 변화에 대한 전기영동 사진,
도 5는 락토바실러스 카제이 KY 22713 로 발효된 겨우살이 발효물의 3T3 정상세포에 대한 세포독성 그래프,
도 6은 락토바실러스 카제이 KY 22713 로 발효된 겨우살이 발효물의 3T3 암세포에 대한 세포독성 그래프이다.
본 발명에 따른 락토바실러스 카제이 KY 22713 (기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061)는 유제품으로부터 분리· 동정한 락토바실러스 속의 새로운 균주이다.
균주의 분리 및 동정
시판 발효유제품으로부터 분리한 각각의 유산균을 겨우살이 추출물에 접종하여 발효시킨 후, 이 겨우살이 발효물을 가지고 3T3 암세포와 정상세포에 대한 독성실험을 실시하여, 암세포에 대해서는 강한 독성을 나타내면서 정상세포에 대해서는 독성을 나타내지 않는 균주를 최종 선발하였다. 선발된 균주를 버기스 매뉴얼(Bergey's manual)과 탄수화물 분해실험을 통해 동정한 결과, 분리된 균주가 지금까지 겨우살이 발효용 균주로 공지되어 있는 락토바실러스 프란타룸과는 다른 새로운 균주임을 확인하였으며, 이 새로운 균주를 락토바실러스 카제이 KY 22713으로 명명하였다. 균주특성은 다음과 같다.
균주특성
(1) 균의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 48시간 배양했을 때의 균의 활성
1) 세포의 형상 : 막대형
2) 그람염색 : 양성
3) 운동성 : 없음
4) 포자형성능 : 없음
(2) 집락의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 48시간 배양했을 때의 균의 형태
1) 집락의 형상 : 원형
2) 집락의 크기 : 직경 0.3∼2.8㎜
3) 집락의 색조 : 회백색
(3) 생리학적 성질
1) 생육온도 : 생육범위 : 20∼40℃
최적온도 : 30∼37℃
2) 생육 pH : 생육범위 : pH 3.0∼8.0
최적pH : pH 6.5∼7.2
3) 산소의 영향 : 통성 혐기성
4) 우유 응고성 : +
5) 카탈라제 : -
6) 베타-갈락토오스 분해효소 : +
7) 알파-글루코오스 분해효소 : +
8) 당이용성 : 에리스리톨 : -
리보스 : +
아도니톨 : -
갈락토오스 : +
글루코오스 : +
프럭토오스 : +
만노스 : +
람노스 : -
만니톨 : +
솔비톨 : +
아미그달린 : -
알부틴 : +
에스쿨린 : +
살리신 : +
세로비오스 : +
말토오스 : +
락토오스 : +
멜리비오스 : -
슈크로오스 : +
트레할로스 : +
이눌린 : +
아미돈 : -
타가토스 : +
효소활성
API ZYME 키트를 이용하여 락토바실러스 카제이 KY 22713의 효소활성을 측정한 결과, 발암효소의 하나로 알려진 베타-글루쿠로니다제에 대해서는 활성이 전혀 없음이 확인되었다.
겨우살이 발효물
락토바실러스 카제이 KY 22713을 이용하여 겨우살이 발효물을 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저 한국산 겨우살이를 세절한 후, 증류수를 가하고 믹서기로 분쇄· 교반한 다음, 원심분리하고 그 상층액을 취하여 여과한 후, 이 여과액을 동결건조하여 분말화함으로써 분말화된 겨우살이 추출물(이하 "겨우살이 추출물"이라 한다)을 얻고, 이 겨우살이 추출물을 증류수에 용해시켜 겨우살이 추출액(이하 "겨우살이 추출액"이라 한다)을 만든다. 이때 바람직하게는 겨우살이 추출물을 1∼7 중량%로 증류수에 용해시켜 겨우살이 추출액을 만든다.
상기와 같은 방법으로 얻은 1∼7% 겨우살이 추출액에 락토바실러스 카제이 KY 22713을 104∼107cfu/㎖로 접종한 후 30∼37℃에서 48∼72시간 배양하여 겨우살이의 유산균 발효물(이하 "겨우살이 발효물"이라 한다)을 얻는다. 겨우살이 발효물은 접종후 배양 24시간 후부터 108cfu/㎖ 이상의 생균수를 나타내었고, 배양 48시간에 7.0×108cfu/㎖로 최대 생균수를 나타내었으며, pH 변화는 배양 24시간 후부터 pH 4.0 정도로 낮아졌다.
상기 겨우살이 발효물에 대해 단백질 변화를 분석한 결과, 렉틴에 해당하는 밴드가 배양시간의 경과에 따라 현저히 약해지는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 락토바실러스 카제이 KY 22713으로 발효시킨 겨우살이 발효물과 발효시키지 않은 겨우살이 추출액에 대해 정상세포와 암세포에 대한 세포독성을 XTT 방법으로 비교한 결과, 3T3 암세포에 대해서는 비슷한 수준으로 독성효과를 나타내었으나, 3T3 정상세포에 대해서는 겨우살이 발효물이 겨우살이 추출물에 비해 독성이 약화되어 있음을 확인할 수 있었다. 실험결과에 따르면, 겨우살이 발효물이 겨우살이 추출액과 같은 수준으로 3T3 정상세포에 대해 독성을 나타내도록 하기 위해서는 50∼100배의 농도로 투여하는 것이 필요했다.
이하, 다음의 비제한적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
실시예 1
락토바실러스 카제이 KY 22713의 분리 및 동정
1) 국내외 시판 발효유제품 10종을 10배 희석법에 의해 희석하고 희석액 100㎕를 미리 준비된 LBS 한천평판배지와 M17 한천평판배지에 각각 접종하여 도말한 후, 37℃에서 48시간 배양하였다. 배양 후 나타난 집락이 그람양성, 카탈라제 음성, 무포자형성임을 확인하고 유산균으로 선발하였다.
2) 겨우살이를 세절한 후 증류수를 첨가하여 믹서기로 분쇄하고 4℃에서 16시간 교반한 다음, 원심분리하여 상층액을 취했다. 이 상층액을 여과하여 얻은 여과액을 동결건조함으로써 갈색 분말의 겨우살이 추출물을 얻었다. 이 겨우살이 추출물을 4 중량%로 증류수에 용해시켜 4% 겨우살이 추출액을 만들었다.
3) 1)에서 선발된 유산균을 계대배양하여 활력을 증진시킨 후, 2)에서 얻은 4% 겨우살이 추출액에 105 cfu/㎖로 접종하여 37℃에서 24시간 발효시켰다. 이렇게 얻은 겨우살이 발효물을 가지고 XTT 방법 (Skehan, P., Storeng, R., Scudiero, D., Monks, A., McMahon, J., Vistica, D., Warren, J. T., Bokesch, H., Kenney, S. and Boyd, M. R. (1990) J. Natl. Cancer Inst., 82, 1107-1112) 에 의해 3T3 암세포와 정상세포에 대한 독성실험을 실시하여, 암세포에 대한 독성은 가장 강하게 나타나면서 정상세포에 대해서는 독성을 나타내지 않는 유산균을 최종 선발하였다. 선발된 유산균을 버기스 매뉴얼(Bergey's manual)과 탄수화물 분해실험을 통해 동정한 결과, 종래에 겨우살이 발효 유산균주로 공지된 락토바실러스 프란타룸과는 다른 새로운 균주임을 확인하고 이를 락토바실러스 카제이 KY 22713으로 명명하였다.
실시예 2
겨우살이 발효물의 제조
실시예 1과 같은 방법으로 제조한 4% 겨우살이 추출액을 살균처리한 후 여기에 락토바실러스 카제이 KY 22713을 105cfu/㎖로 접종하고 37℃에서 72시간 배양하여 겨우살이 발효물을 얻었다. 균주의 접종후 배양액내의 생균수 및 pH 변화를 측정하여 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1로부터 알 수 있는 바와 같이, 락토바실러스 카제이 KY 22713은 배양 24시간 후부터 108cfu/㎖ 이상의 생균수를 나타내었고, 배양 48시간에 7.0×108cfu/㎖로 최대 생균수를 나타내었으며, pH 변화는 배양 24시간 후 배양액내의 pH가 4.0 정도로 낮아졌다.
실시예 3
당 성분 변화
먼저 실시예 1과 같은 방법으로 제조한 4% 겨우살이 추출액의 당 성분을 분석하였다. 분석은 HPX-87H 칼럼을 이용하여 다음의 표 1과 같은 조건으로 하였으며, 그 결과 글루코오스(Rt. 8.753), 프럭토오스(Rt. 9.406), 아라비노오스(Rt. 10.165)로 동정하였다. 실시예 2와 같은 방법으로 락토바실러스 카제이 KY 22713을 이용하여 겨우살이 발효물을 제조하고, 발효시간에 따른 발효물내의 당 성분의 변화를 측정하여 그 결과를 다음의 표 2에 나타내었다. 당 성분의 변화는 HPLC 크로마토그램에 나타난 글루코오스와 아라비노오스의 피크 면적의 변화를 통해 확인하였다. 글루코오스의 경우, 시간이 경과함에 따라 함량이 감소되므로 락토바실러스 카제이 KY 22713이 글루코오스를 이용하여 증식한다는 것을 확인할 수 있었다. 아라비노오스의 경우는 배양시간의 경과와 관계없이, 함량이 거의 일정하게 유지되었다.
실시예 4
총 당량 변화
실시예 2와 같은 방법으로 제조한 겨우살이 발효물의 배양시간에 따른 총 당량변화를 측정하여 그 결과를 도 2에 나타내었다. 발효물의 총 당량은 페놀유황법(phenol sulfuric method: Anal. Chem., 38, p 350, 1956)을 사용하여 측정하였다. 배양 초기 겨우살이 발효물의 총 당량은 5.7㎎/㎖ 이었으며, 배양 24시간 후에는 5.40㎎/㎖, 48시간 후에는 3.12㎎/㎖, 배양 72시간 후에는 2.33㎎/㎖이었다.
실시예 5
단백질 함량 변화
실시예 2와 같은 방법으로 제조한 겨우살이 발효물의 배양시간에 따른 총 단백질 함량 변화를 측정하여 그 결과를 도 3에 나타내었으며, 발효물내의 단백질 성분변화에 대해 전기영동을 실시하여 그 결과를 도 4에 나타내었다. 발효물의 총 단백질 함량 변화는 BCA 방법 (Smith, P. K., Krohn, R. L., Hermanson, G, T., Mallia, A. K. and Gartner, F. H. (1985) Measurement of Protein Using Bicinchoninic Acid., Anal. Biochem., 150, 76-85; Wiechelman, K., Braun, R. and Fitzpatrick, J. (1988) Investigation of the bicinchoninic Acid Protein Assay: Identification of the Groups Responsible for Color Formation., Anal. Biochem., 175, 231-237) 을 사용하여 확인하였으며, 전기영동은 4∼20% 트리스-글리신 SDS 겔(Tris-Glycine SDS gel)을 사용하여 실시하였다.
배양 초기의 단백질 함량 9.4㎎/㎖에 비해 배양 72시간 후에는 약 7.0㎎/㎖로 단백질 함량이 약 25% 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 발효에 의해 겨우살이의 세포독성이 감소된다는 사실과 관련할 때, 이러한 단백질 함량의 감소는 락토바실러스 카제이 KY 22713을 이용한 발효에 의해 겨우살이의 단백질 성분 가운데 렉틴이나 비스코톡신과 같은 강한 세포독성을 나타내는 단백질 성분이 분해되는 것으로 해석할 수 있다.
이 점을 확인하기 위해, 다시 한 번 실시예 2와 같은 방법으로 제조한 겨우살이 발효물을 배양시간에 따라 전기영동하여 단백질 변화를 분석하였으며, 그 결과는 도 4와 같다. 도 4에 나타난 바와 같이 겨우살이의 단백질 성분 중 렉틴에 해당하는 밴드가 배양시간의 경과에 따라 현저히 약해지는 것을 확인할 수 있었다. 이는 락토바실러스 카제이 KY 22713으로 겨우살이를 발효시킬 경우, 세포독성을 나타내는 렉틴성분의 상당 부분이 분해되어 독성을 경감시킬 수 있음을 의미하는 것으로 볼 수 있다.
실시예 6
정상세포 및 암세포에 대한 독성효과의 비교
락토바실러스 카제이 KY 22713으로 발효시킨 겨우살이 발효물과 발효시키지 않은 겨우살이 추출액에 대해 정상세포에 대한 세포독성 및 암세포에 대한 세포독성을 XTT 방법 (Skehan, P., Storeng, R., Scudiero, D., Monks, A., McMahon, J., Vistica, D., Warren, J. T., Bokesch, H., Kenney, S. and Boyd, M. R. (1990) J. Natl. Cancer Inst., 82, 1107-1112) 으로 비교 측정하였으며, 그 결과를 도 5 및 도 6에 나타내었다.
겨우살이 발효물은 실시예 2와 같은 방법으로 제조하여 사용하였으며, 발효시키지 않은 겨우살이 추출액은 실시예 1과 같은 방법으로 제조한 4% 겨우살이 추출액을 사용하였다. 세포독성 효과의 측정은, 96 웰 플레이트 (well plaree)에 RPMI 배지를 50㎕씩 분주하고, 여기에 겨우살이 추출액과 겨우살이 발효물을 최고농도 50㎍/well 부터 5배 희석법으로 희석하였다. 각 웰에 3T3 정상세포와 암세포를 105cells/well의 세포농도로 접종하여 5% CO2, 37℃에서 24시간 배양하였다. 여기에 XTT 혼합액(5㎖ XTT와 0.1㎖ 엘렉트론 커플링 시약)을 75㎕씩 분주하여 5% CO2, 37℃로 18시간 반응시켰다. 반응 후 흡광도(A492nm-A690nm)를 측정하여 겨우살이 추출액과 겨우살이 발효물이 첨가되지 않은 대조군과의 흡광도 차이를 통해 세포독성을 확인하였다.
도 5 및 6에 나타난 바와 같이 3T3 암세포에 대해서는 겨우살이 추출액과 겨우살이 발효물이 비슷한 수준으로 독성효과를 나타냈으나, 3T3 정상세포에 대해서는 겨우살이 발효물이 겨우살이 추출액에 비해 독성이 약화되어 있음을 확인할 수 있었다. 실험결과에 의하면, 락토바실러스 카제이 KY 22713으로 발효시킨 겨우살이 발효물이 겨우살이 추출액과 같은 수준으로 3T3 정상세포에 대해 독성을 나타내도록 하기 위해서는 약 100배의 농도로 투여하는 것이 필요하다는 것을 알 수 있다. 이는 락토바실러스 카제이 KY 22713을 이용한 발효에 의해 정상세포에 대한 겨우살이의 독성은 경감되면서 암세포에 대한 겨우살이의 독성은 그대로 유지되어 겨우살이의 이용면에서 안전성을 보다 증가시킬 수 있는 것으로 해석된다.
실시예 7
효소활성 테스트
API ZYME 키트를 이용하여 락토바실러스 카제이 KY 22713의 효소활성을 측정하였으며, 그 결과를 다음의 표 3에 나타내었다.
표 3
효 소 명 효소 활성도(nmol)
알파-갈락토시다제(α-galactosidase)베타-갈락토시다제(β-galactosidase)베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)베타-글루코시다제(β-glucosidase) ≥ 10≥ 500≥ 10
표 3으로부터 알 수 있는 바와 같이, 락토바실러스 카제이 KY 22713은 발암효소의 하나로 알려진 베타-글루쿠로니다제에 대해서는 전혀 활성을 나타내지 않았다.
상기 실시예로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 락토바실러스 카제이 KY 22713으로 겨우살이를 발효시킬 경우 암세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 그대로 유지되면서 정상세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 약 50∼100배 정도로 약화되어 겨우살이의 안전성을 크게 증가시킬 수 있게 된다.

Claims (3)

  1. 다음의 특성을 가지며, 겨우살이를 발효시켜 암세포에 대한 겨우살이의 독성은 그대로 유지시키면서 정상세포에 대한 겨우살이의 독성은 경감시키는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 카제이 KY 22713 (기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061).
    1) 리보스, 갈락토오스, 글루코오스, 프럭토오스, 만노스, 만니톨, 솔비톨, 알부틴, 에스쿨린, 살리신, 말토오스, 락토오스, 슈크로오스, 트레할로스, 이눌린, 타가토스로부터 산을 생성함
    2) 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 활성이 없음
    3) 1∼7% 겨우살이 추출액에 104∼107cfu/㎖로 접종하여 배양 24시간 후부터 108cfu/㎖ 이상의 생균수를 나타냄
    4) 발효에 의해 겨우살이의 단백질 함량을 25% 정도 감소시킴
    5) 발효에 의해 암세포에 대한 겨우살이의 독성은 유지시키면서 정상세포에 대한 겨우살이의 세포독성은 약 50∼100배 정도 약독화시킴
  2. 락토바실러스 카제이 KY 22713 (기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061)를 발효균주로 이용하여 겨우살이를 발효시키는 것을 특징으로 하는 겨우살이 발효물의 제조방법.
  3. 겨우살이와 함께 락토바실러스 카제이 KY 22713 (기탁기관: 한국종균협회, 기탁일: 1998년 11월 18일, 수탁번호: KFCC-11061)을 함유하는 것을 특징으로 하는 겨우살이 제제.
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