KR20000022882A

KR20000022882A - 공역리놀레인산 유도체 및 그의 합성방법

Info

Publication number: KR20000022882A
Application number: KR1019990037151A
Authority: KR
Inventors: 하영래
Original assignee: 하영래
Priority date: 1998-09-02
Filing date: 1999-09-02
Publication date: 2000-04-25
Also published as: KR100350430B1; KR100350428B1; KR20020019509A; KR20020022742A; KR100350431B1; KR20020022743A; KR100350432B1; KR20020019508A; KR100350429B1; KR100350427B1; KR20020019507A

Abstract

본 발명은 고기능성 물질인 공역리놀레인산의 유도체 및 그의 합성방법에 관한 발명으로서 본 발명에 의해 공역리놀레인산의 트리글리세리드 유도체, 아스코르브산 유도체, D-글루코스 유도체, 시클로덱스트린 미세캡슐, 인지질 유도체, 및 공역리놀레인산 함유 동, 식물성 유지와 그 합성 방법을 제공할 수 있다.

Description

공역리놀레인산 유도체 및 그의 합성방법 {Derivatives of conjugated linoleic acid and method for synthesizing thereof}

본 발명은 공역리놀레인산 유도체의 합성방법에 관한 것이다.

반추위를 갖는 동물에서 유래되는 공역리놀레인산은 천연의 다기능성 지방산으로서 항암성, 면역증강성, 항산화성, 항콜레스테롤성, 항곰팡이성, 동물체지방 감소 효과 및 동물생장촉진 등의 효용성을 갖는다.

그러나 공역리놀레인산이 유리지방산이기 때문에 동, 식물성 유지에 첨가되는 경우 이들 유지의 품질저하가 우려된다. 따라서 이러한 문제를 해결하기 위해서 공역리놀레인산의 중성지방 유도체를 합성하여 식품에 첨가할 수 있다. 공역리놀레인산의 중성지방 유도체는 더불어 유리공역리놀레인산보다 체내 흡수율이 좋으며, 카르복실기가 제거되기 때문에 카르복실기에서 나타나는 독성을 없앨 수 있는 효과가 있다.

공역리놀레인산은 지용성이므로 수용성 식품에 첨가하는 경우 그 첨가방법 및 첨가량에는 한계가 있게 된다. 이러한 문제를 극복하기 위해서 공역리놀레인산의 당지질 유도체, 인지질 유도체를 합성하여 식품에 첨가하는 방법을 생각할 수 있다. 또한 이러한 공역리놀레인산 유도체는 기능성 물질인 아스코르브산, 글루코스, 인지질 등과 결합되어 있기 때문에 공역리놀레인산보다 기능성이 더 높아지는 효과가 있게 된다.

따라서 본 발명은 공역리놀레인산의 중성지방 유도체의 합성방법을 제공하여 공역리놀레인산이 좀더 효과적으로 유지에 첨가될 수 있도록 함을 그 목적으로 한다. 또한 공역리놀레인산의 인지질 유도체 및 당지질 유도체와 그의 합성방법을 제공하여 공역리놀레인산이 식품에 용이하게 첨가되도록 함과 동시에 공역리놀레인산의 기능성을 더욱 높이는 방법을 제공함을 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 공역리놀레인산의 트리글리세리드 유도체, 아스코르브산 유도체, 글루코스 유도체, 시클로덱스트린 미세캡슐, 인지질 유도체 및 공역리놀레인산을 함유하는 동, 식물성유지와 그 합성방법을 제공한다.

공역리놀레인산(이하 CLA라 함)은 아래 화학식 1에서 보듯이 리놀레인산에서 알카리 이성화법(alkaline isormerization)에 의해 합성될 수 있으며, 보는 바와 같이 c9,t11-CLA와 t10,c12-CLA의 두 종류가 합성된다.

본원 발명에서는 CLA의 기능성을 높이기 위하여 CLA의 말단 카르복실기에 여러 관능기를 부착하는 방법에 의하여 CLA 유도체 및 CLA 유도체의 합성 방법을 제공하고 있다.

CLA의 중성지질 유도체를 합성하는 방법에는 CLA가 부가된 트리글리세리드를 합성하는 방법과 기존의 면실유, 옥수수유, 대두유, 참깨유, 들깨유, 어유, 우유지방, 라드 등의 중성지질에 포함된 일부 지방산을 CLA로 치환하여 CLA를 포함시키는 방법이 있다.

먼저 본 발명은 글리세롤의 수산화기가 CLA 말단의 카르복실기와 에스테르 결합된 공역리놀레인산의 트리글리세리드 유도체(이하 CLA-TG라 칭함)를 합성하는 방법을 제공한다. CLA-TG를 합성하는 방법에는 화학적 방법과 효소적 방법, 생물학적 방법이 있다.

화학적 방법을 사용하여 CLA-TG를 합성하는 방법은 다음과 같다.

먼저 CLA 2.8 중량부를 둥근 바닥 플라스크 기타 반응기에 투입하여 건조시킨다. 다음 건조된 벤젠 35.2 중량부를 첨가하여 N₂하에서 교반하여 CLA를 용해시킨다. 이 반응기의 온도를 0℃로 낮추어 준 다음 건조된 피리딘(pyridine) 1.3 중량부와 염화옥사릴(oxalyl chloride) 1.8 중량부를 첨가하여 2-4시간 동안 교반시켜서 CLA 말단 카르복실기의 수소가 염소로 치환된 공역리놀레인산 클로라이드(이하 CLA-Cl이라 함)을 합성하였다. 이때 합성된 CLA-Cl의 rf치는 핵산:에틸아세테이트 = 5:1 시스템에서 0.8이었다. 그러나 CLA-Cl은 이미 공지된 물질로 다른 방법에 의해 합성된 CLA-Cl을 사용할 수 있다. 다음 단계로 합성된 CLA-Cl 3중량부에 건조 글리세롤 0.2 - 0.5 중량부와 피리딘 0.5 -1.5 중량부를 첨가하여 상온에서 8-15시간 반응시킨 다음 포화 탄산나트륨을 첨가하여 반응을 정지시킨다. 에스테르화된 화합물들을 에테르로 추출하여 용매를 제거하여 농축한 후 실리카겔 칼럼(핵산:에틸아세테이트=24:1 부피비)을 이용하거나 약 20mmHg의 진공에 의하여 CLA-TG를 공역리놀레인산의 모노글리세리드(CLA-MG) 및 공역리놀레인산의 디글리세리드(CLA-DG)로부터 분리할 수 있다.

생성된 물질은 글리세롤의 수산화기가 CLA의 카르복실기와 에스테르 결합하여 CLA가 부가된 것이며, 글리세롤에 존재하는 수산화기가 모두 CLA와 반응한 경우 CLA-TG가 생성되며, 그 중 일부만이 반응된 경우 CLA-DG 및 CLA-MG가 생성된다. 생성물 중 CLA-TG를 분리하여 CLA-TG를 얻을 수 있다.

다음으로 효소적 방법을 사용하여 CLA-TG를 합성하는 방법은 다음과 같다.

삼각 플라스크 기타 반응기에 글리세롤 3 중량부 및 CLA 1 중량부와 글리세롤양의 1-10 중량% 양의 혼합용매(증류수:이소옥탄을 1:1 부피비로 혼합)와 글리세롤 양의 5-30 중량% 양의 리포자임 (lipozyme)을 첨가하여 질소분위기내에서 50℃, 250rpm의 조건으로 1-10시간 반응시켰다. 다음으로 아세톤과 에탄올을 1:1 부피비로 섞은 용매 7.9중량부를 첨가하여 반응을 중단시키고, 용매를 제거시켜 농축 후 실리카겔 칼럼(헥산:에틸아세테이트=24:1)을 이용하여 공역리놀레인산, 공역리놀레인산의 모노글리세리드, 공역리놀레인산의 디글리세리드로 부터 CLA-TG를 분리할 수 있다.

생물학적 방법을 사용하여 CLA-TG를 생산하는 방법은 다음과 같다.

공역리놀레인산 또는 공역리놀레인산 메틸에스테르(이하 CLA-Me라 함)를 잉어사료에 0.1-10 중량% 첨가하여 잉어를 1-10주간 양식한다. 다음으로 양식된 잉어 근육을 채취하여 클로로포름과 메탄올의 혼합용매(2:1의 부피비로 혼합)로 지질을 분리하였다. 이 지질성분을 5-8배의 아세톤에 녹여 상등액과 침전액을 분리한다. 이중 상등액에는 CLA 함유 중성지질이 포함되어 있으며, 침전액에는 CLA 함유 인지질이 포함되어 있다. 상등액을 농축한 다음 규산과 셀라이트(celite)의 혼합 용매(1:1의 무게비로 혼합)를 사용하여 중성지질을 순수 분리할 수 있다. 분리된 중성지질에서 실리카겔 칼럼 기타의 방법으로 CLA-TG를 분리할 수 있다. 그 분리된 CLA-TG의 순도는 96%였고 중성지질 중 CLA의 함량은 5-30%였다.

기존의 면실유, 옥수수유, 대두유, 참깨유, 들깨유, 어유, 우유지방, 라드 등의 중성지질에 포함된 일부 지방산을 CLA로 치환하여 CLA의 기능성을 높이고 CLA의 체내 흡수율을 높일 수 있다. 이러한 CLA를 함유하는 동, 식물성 유지를 합성하는 방법을 살펴보기로 한다. CLA 함유 동, 식물성 유지의 합성은 주로 전환에스테르화 방법으로 합성하였으며, 화학적 방법과 효소적 방법이 있다.

화학적 방법으로 CLA 함유 동, 식물성 유지를 합성하는 방법은 다음과 같다.

첫번째 단계로 공역리놀레인산 메틸에스테르(이하 CLA-Me)를 합성하여야 하는데 CLA-Me의 합성방법은 다음과 같다. 0.05N 농도로 염산이 용해된 메탄올 300ml와 CLA 5g을 반응기에 투입하여 30초간 혼합한 다음 이 반응기에 환류냉각기를 연결하여 끓는 수조에서 120분간 환류한 다음 실온으로 냉각한다. 여기에 증류수 50ml와 핵산 30ml를 가하여 CLA-Me를 핵산층으로 추출한다. 다음 핵산층을 분리하여 증류수 20ml로 수회 세척하고 무수 황산나트륨 기타의 방법을 사용하여 건조시켜서 여과하여 헥산층을 회수하고 농축하여 CLA-Me를 합성할 수 있다. 그러나 CLA-Me는 이미 공지된 물질이므로 다른 방법에 의해 합성된 CLA-Me를 사용할 수 있다. 다음으로 CLA-Me와 면실유, 대두유, 옥수수유 등의 식물성유지 또는 라드, 우유지방 등의 동물성유지를 2:1- 6:1의 무게비로 첨가한다. 감압, 90℃ 조건에서 소듐 메톡사이드를 유지 몰수의 1-2배수 몰(유지 1몰은 840으로 계산함)을 첨가하여 1-10시간 동안 반응시켰다. 그런 다음 반응물을 물로 세척하고 무수 황산나트륨 기타의 방법으로 물을 제거한 다음 농축후 실리카겔 칼럼(헥산:에틸아세테이트 = 24:1)을 이용하여 CLA 함유 동, 식물성 유지를 분리하였다. 이러한 방법으로 합성된 CLA 함유 동, 식물성 유지 중의 CLA의 함량을 GC로 측정한 결과 그 양은 약 10-70%로 지질의 종류에 따라서 상이하였다.

CLA 함유 동, 식물성 유지의 효소적 합성방법은 다음과 같다.

CLA-Me와 중성지질을 1:1-6:1 무게비로 혼합한 후 리포자임을 지질 전체무게의 10% 중량을 첨가하였다. 여기에 이소옥탄, 헥산, 펜탄과 같은 유기용매를 전체무게의 200% 중량을 첨가하여 40-70℃에서 24시간 동안 진탕반응시켰다. 그 후 반응물에 핵산을 전체무게의 10배 정도 가하여 지질을 용해한 다음 여과후 여액을 농축하고 실리카겔 칼럼(핵산:에틸아세테이트 = 24:1 부피비)이나 진공법을 이용하여 CLA 함유 중성지질을 분리할 수 있다. 이러한 방법에 의해 합성된 CLA 함유 동, 식물성 유지중의 CLA의 함량은 10-70%에 달하였다. CLA의 함량은 GC로 측정하였다.

본 발명에 의해 CLA의 당지질 유도체와 그의 합성방법을 제공할 수 있는데 그 종류로는 CLA의 아스코르브산 유도체(이하 CLA-Asc라 함), CLA의 D-글루코스 유도체(이하 CLA-Glc라 함), CLA의 시클로덱스트린 미세캡슐(이하 CLA-CD라 함)가 있다. 본 발명에서 의한 CLA 당지질 유도체는 CLA 자체의 기능성에 더불어 부가되는 물질의 기능성이 더해져서 기능성이 높은 물질이다. 이하에서 상기의 CLA의 당지질유도체의 합성방법을 차례로 살펴보기로 한다.

CLA-Asc는 화학식 2과 같은 아스코르브 산의 수산기에 CLA가 에스테르 결합된 물질로서 그 합성방법은 다음과 같다. 이때 CLA는 아스코르브 산에 존재한는 모든 수산기의 위치에 부가될 수 있다.

CLA-TG의 화학적 합성에서 사용된 방법과 같은 방법으로 CLA-Cl을 먼저 합성한다. CLA-Cl은 이미 공지된 물질이므로 다른 방법에 의해 합성된 CLA-Cl도 사용될 수 있다. L-아스코르브산 2 중량부를 아세톤 31.5 중량부에 녹인 다음 여기에 CLA-Cl 1-3 중량부, 피리딘 1.6 중량부를 첨가하고 25℃에서 2-3시간 동안 교반시킨다. 이후 메탄올 39중량부를 첨가하여 10-20분 교반한 이후 용매를 증발시키고 남은 잔사를 에테르로 추출한다. 에테르층을 물로 세척한 후 무수 황산나트륨으로 수분을 제거하고 진공으로 에테르를 제거하여 CLA-Asc를 얻었다. 합성된 CLA-Asc는 위치이성체의 혼합물이다.

본 발명에 의해 제공되는 CLA-Glc는 CLA 말단의 카르복실기와 화학식 3와 같은 알데히드형 D-글루코스가 에스테르 결합된 것으로 D-글루코스에 존재하는 각각의 수산기 중 표시된 1, 2, 3의 위치에 CLA가 결합될 수 있으나 주로 3의 위치에 결합된다.

본 발명에 의해 제공되는 CLA-Glc의 합성방법은 다음과 같다.

1,2-이소프로필리딘-D-글루코피라노스(1,2-isopropylidene-D-glucofuranos)) 220 중량부와 건조된 피리딘 20 중량부를 반응기에 첨가하여 1/2 부피가 되게 농축한다. 여기에 CLA-C1을 372 중량부를 첨가하여 상온에서 6시간 반응시킨 후 포화탄산나트륨으로 반응을 정지시켰다. 이 혼합물을 에틸에테르와 클로로포름을 이용하여 추출하여 농축한 후 피리딘은 공비 증류방법(azeotropic distillation)으로 제거하고 남은 잔사를 헥산과 에틸아세테이트의 혼합용매(2:1 부피비)로 분리하였다. 순수분리한 1,2-이소프로필리딘-D-글루코피라노스 CLA (1,2-isopropylidene-D-glucofuranose-CLA) 240 중량부에 70% 아세트산 10.7 중량부를 첨가하고 60-80℃에서 60-90시간 교반하여 CLA-Glc를 합성할 수 있다.

본 발명에 의해 제공되는 CLA-CD는 CLA가 α-시클로덱스트린, β-시클로덱스트린 및 γ-시클로덱스트린에 의해 미세캡슐화 되는 것으로 CLA의 산화를 억제하는데 탁월한 효과가 있다.

본 발명에 의한 CLA-CD의 합성방법은 다음과 같다.

CLA 1.4 중량부를 에탄올 40 중량부에 녹인 후 여기에 증류수 10-40 중량부를 가한다. 다음으로 α-시클로덱스트린을 1-4 중량부 가하고 60-80℃ 항온조에서 1-10분간 교반하여 반응시킨 이후 계속하여 교반하면서 0.5-5 시간에 걸쳐 4-20℃로 냉각하였다. 이 반응물을 진공냉동건조, 또는 분무건조에 의해 용매를 날려보낸 후 CLA의 α-CD 미세캡슐을 얻을 수 있다. β-시클로덱스트린 및 γ-시클로덱스트린에 대해서도 α-CD 미세캡슐과 동일한 방법으로 CLA의 β-CD 미세캡슐 및 γ-CD 미세캡슐을 합성할 수 있다.

본 발명에 의해 제공되는 CLA-Pl는 인지질에 결합된 지방산기가 CLA로 치환된 것으로 화학식 4와 같은 구조를 가진다.

본 발명에 의해 제공되는 CLA-Pl의 합성방법은 화학적 방법과 효소적 방법, 생물학적 방법이 있다.

CLA-Pl의 화학적 합성방법은 다음과 같다.

먼저 레시틴 5 중량부와 CLA-Me 5 중량부를 가하여 20mmHg, 상온 조건에서 1-3시간 동안 교반한 후 온도를 60℃로 높여서 소듐메톡사이드를 총 무게의 0.2%-1%가 되게 첨가하고 계속하여 2-5시간 교반시킨다. 다음 Na-CLA를 제거하기 위하여 수회에 걸쳐 뜨거운 물로 세척, 원심분리하였다. 원심분리한 후 180℃, 20mmHg 조건에서 30분 가량 증기증류하여 CLA-Pl을 얻을 수 있다.

다음으로 CLA-Pl의 효소적 합성방법은 다음과 같다.

레시틴 2 중량부와 CLA-Me 2 중량부를 가한 후 상온, 20 mmHg 감압조건하에서 1-3시간 가량 교반시킨다. 그 후 반응온도를 60℃로 증가시켜 리포자임을 총 무게의 5-30 % 양으로 첨가하여 3-10시간 반응시켰다. 그 후 NA-CLA를 제거하기 위하여 수회에 걸쳐 뜨거운 물로 세척하여 원심분리하였다. 그후 180℃, 20 mmHg 감압하에서 30분 가량 증기증류하여 CLA-Pl를 얻을 수 있었다.

다음으로 CLA-Pl의 생물학적 합성방법은 다음과 같다.

CLA 또는 CLA-Me를 잉어사료에 0.1-10% 처리하여 잉어를 1-10주간 양식한 다음 잉어 근육중의 총 지질을 클로로포름과 메탄올의 혼합용매(2:1 부피비)로 분리하여 이 지질을 5-8배 부피의 아세톤에 녹여 CLA 함유 중성지질을 포함하는 상등액과 CLA 함유 인지질을 포함하는 침전액을 분리하였다. 분리된 침전액에서 규산과 셀라이트 혼합용액(1:1 무게비)를 사용하여 인지질을 순수분리하여 CLA-Pl를 얻을 수 있었으며, 이 인지질 중 CLA의 함량은 4-28%에 달했다.

상기에서 제공되는 CLA 유도체에 의해 CLA 자체의 기능성에 부가된 관능기의 기능성이 결합되어 더욱 기능성이 높은 물질을 제공할 수 있을 뿐 아니라 CLA 말단의 카르복실기에서 오는 독성을 줄일 수 있다. 또한 식품 첨가제로서의 CLA의 효용성을 높일 수 있다할 것이다. 또한 CLA-CD의 경유 CLA를 미세캡슐화하여 CLA의 산화를 방지하는데 탁월한 효과가 있다.

Claims

글리세롤의 수산기가 CLA 말단의 카르복실기와 에스테르 형성된 CLA의 트리글리세리드 유도체.
제1항에 의한 CLA의 트리글리세리드 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) CLA-Cl 3 중량부에 글리세롤 0.2-0.5 중량부와 피리딘 0.5-1.5 중량부를 첨가하여 25℃에서 8-15시간 반응시키는 단계; 2) 반응을 정지시킨 후 CLA의 트리글리세리드 유도체를 추출하는 단계를 거치는 CLA의 트리글리세리드 유도체의 화학적 합성 방법.
제1항에 의한 CLA의 트리글리세리드 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) 글리세롤 3 중량부, 공역리놀레인산 1 중량부, 0.03-0.3 중량부의 증류수와 이소옥탄 1:1 부피비 혼합용매 및 0.15-0.9 중량부 리포자임을 첨가하여 질소가스 내, 50℃, 250rpm의 조건으로 1-10시간 반응시키는 단계; 2) 반응을 중단시키고 CLA의 트리글리세리드 유도체를 추출하는 단계;로 이루어지는 CLA의 트리글리세리드 유도체의 효소적 합성 방법.
제1항에 의한 CLA의 트리글리세리드 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) CLA 또는 CLA-Me가 0.1-10 중량% 포함된 사료를 잉어에 급여하여 1-10주간 양식하는 단계; 2) 양식된 잉어 근육을 채취하여 클로로포름과 메틴올이 2:1 부피비로 혼합된 용매로 지질을 분리하는 단계; 3) 분리된 지질성분을 아세톤에 녹여 상등액과 침전액으로 분리하는 단계; 4) 상기 상등액에서 CLA함유 중성지질을 분리하는 단계; 5) 분리된 CLA함유 중성지질에서 CLA의 트리글리세리드 유도체를 분리하는 단계;로 이루어지는 CLA의 트리글리세리드 유도체의 생물학적 합성 방법.
동, 식물성 유지에 결합된 지방산이 CLA로 치환되어 생성되는 CLA 함유 동, 식물성 유지.
제5항에 의한 CLA 함유 동, 식물성 유지를 합성하는 방법에 있어서,

1) CLA-Me와 동, 식물성 유지를 2:1 내지 6:1의 무게비로 첨가하여 20mmHg, 90℃ 조건으로 만들어 유지 1몰을 840g으로 볼때 계산된 유지몰수의 1-2배수 몰의 소듐 메톡사이드를 첨가하여 1-10시간 반응시키는 단계; 2) 반응물을 물로 세척한 후 수분을 제거하고 실리카겔 칼럼을 이용하여 CLA 함유 중성지질을 분리하는 단계로 이루어지는 CLA 함유 동, 식물성 유지의 화학적 합성방법.
제5항에 의한 CLA 함유 동, 식물성 유지를 합성하는 방법에 있어서,

1) CLA-Me와 중성지질을 1:1 내지 6:1의 무게비로 혼합한 후 리포자임을 지질무게의 10 중량% 첨가하여 다시 유기용매를 전체무게의 200 중량% 첨가하여 40-70℃로 24시간 동안 진탕반응시키는 단계; 2) 핵산을 사용하여 반응물의 지질을 용해, 추출한 다음 CLA 함유 동, 식물성 유지를 분리하는 단계;를 거치는 CLA 함유 동, 식물성 유지의 효소적 합성방법.
CLA 말단의 카르복실기가 아스코르브산에 포함된 수산화기와 에스테르결합하여 형성된 CLA의 아스코르브산 유도체.
청구항 제8항에 의한 CLA의 아스코르브산 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) L-아스코르브산 2 중량부를 아세톤 31.5 중량부에 녹인 다음, CLA-Cl 1-3중량부, 피리딘 1.6 중량부를 첨가하여 25℃에서 2-3시간 교반시키는 단계; 2) 여기에 메탄올 39 중량부를 첨가하여 10-20분 교반하는 단계; 3) 남은 잔사를 에테르로 추출하여 에테르에서 CLA의 아스코르브산 유도체를 분리하는 단계;로 이루어지는 CLA의 아스코르브산 유도체의 화학적 합성방법.
CLA 말단의 카르복실기가 D-글루코스에 존재하는 수산화기와 에스테르결합하여 형성된 CLA의 D-글루코스 유도체.
제10항에 의한 CLA의 D-글루코스 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) 1,2-이소프로필리딘-D-글루코피라노스 220 중량부와 건조된 피리딘 20 중량부를 반응기에 첨가하여 부피가 반이 되도록 농축하는 단계; 2) 여기에 CLA-C1을 372 중량부 첨가하여 상온에서 6시간 반응시키는 단계; 3) 반응을 정지시켜 혼합물을 에틸에테르와 클로로포름을 이용하여 추출하여 농축한 후 피리딘을 공비 증류방법으로 제거하고 남은 잔사를 헥산과 에틸아세테이트가 2:1 부피비로 혼합된 혼합용매로 분리하는 단계, 4) 1,2-이소피로필리딘-D-글루코피라노스-CLA 240 중량부에 70% 아세트산 10.7 중량부를 첨가하고 60-80℃에서 60-90시간 교반하는 단계;로 이루어지는 CLA의 D-글루코스 유도체의 화학적 합성 방법.
CLA가 시클로덱스트린에 결합하여 생성되는 CLA의 시클로덱스트린 미세캡슐.
제12항에 의한 CLA의 시클로덱스트린 미세캡슐을 합성하는 방법에 있어서,

1) CLA 1.4 중량부를 에탄올 40 중량부에 녹인 후 여기에 증류수 10-40 중량부, 시클로덱스트린 1-4중량부를 가하여 60-80℃ 항온조에서 1-10분간 교반하여 반응시키는 단계; 2) 다음으로 0.5-5시간에 걸쳐 4-20℃로 서서히 냉각하는 단계; 3) 용매를 제거하는 단계;로 이루어지는 CLA의 시클로덱스트린 미세캡슐의 화학적 합성 방법.
인지질 속에 존재하는 지방산이 CLA로 치환되어 형성되는 CLA의 인지질 유도체.
제14항에 의한 CLA의 인지질 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) 레시틴 5중량부와 CLA-Me 5 중량부를 가하여 20mmHg, 실온 조건에서 1-3시간 교반하는 단계; 2) 온도를 60℃로 높여서 총 무게의 0.2-1% 중량의 소듐메톡사이드를 첨가하고 2-5시간 교반하는 단계; 3) 뜨거운 물을 사용하여 Na-CLA를 제거하는 단계; 4) 증기증류를 통하여 CLA의 인지질 유도체를 분리하는 단계;로 이루어지는 CLA의 인지질 유도체의 화학적 합성방법.
제14항에 의한 CLA의 인지질 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) 레시틴 2 중량부와 CLA-Me 2 중량부를 가한 후 상온, 20mmHg 조건하에서 1-3시간 교반시키는 단계; 2) 반응온도를 60℃로 증가시켜 총 무게의 5-30% 중량의 리포자임을 첨가하여 3-10시간 반응하는 단계; 3) 뜨거운 물을 사용하여 Na-CLA를 제거하는 단계; 4) 증기증류를 통하여 CLA의 인지질 유도체를 분리하는 단계;로 이루어지는 CLA의 인지질 유도체의 효소적 합성방법.
제14항에 의한 CLA의 인지질 유도체를 합성하는 방법에 있어서,

1) CLA 또는 CLA-Me를0.1-10% 함유하는 잉어사료를 사용하여 잉어를 양식하는 단계; 2) 잉어 근육을 채취하여 지질을 클로로포름과 메탄올의 2:1 부피비 혼합용매로 분리하는 단계; 3) 지질을 아세톤에 녹여 상등액과 침전액으로 분리하는 단계; 4) 분리된 하등액에서 규산과 셀라이트 1:1 무게비 혼합용매를 사용하여 CLA의 인지질 유도체를 분리하는 단계;로 이루어지는 CLA의 인지질 유도체의 생물학적 합성방법.