KR19990007711A - 항 콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성 발효유 제조 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 많은 유산균을 분리한 후 그 중에서 특히 콜레스테롤을 저하시키는 균주를 4종 분리하여 이들의 특성을 조사하였으며, 실험실내 조사와 동물 실험을 통하여 현재 사용하고 있는 상용 콜레스테롤 균주와 비교할 때 우수함이 입증된것으로서,생명공학 기술에 의한 항 콜레스테롤 유산균 개발과 이를 이용한 혈중 콜레스테롤 저하 신기능성 발효유 생산기술 개발 연구”를 진행한 결과로 혈중 콜레스테롤을 저하시키는 유산균을 4종 개발하였다. 또한 이들 균주를 현재 발효유에 사용하고 있는 상업용 콜레스테롤 저하 균주와 비교 실험한 결과 본 연구팀이 개발한 균주가 이들보다 우수함이 입증됨에 따라 이들 균주를 이용하여 혈당을 저하시키는 기능성 물질인 누에가루(silk powder)를 첨가해 새로운 기능성 발효유를 제조하는 방법을 제공하고자 함이 본 발명이 이루고자하는 기술적과제,즉 새로운 기능성을 갖는 발효유 즉,혈중 콜레스테롤과 혈당을 저하시키는 기능성발효유의 제조방법에 관한 것이다.
Description
발효유는 유산균을 주로 우유에 혼합 배양하고 발효에 의한 산미와 향미를 강화시킨 유제품으로 특유의 풍미와 생성된 유산에 의한 우수한 보존성, 단백질의 부분 분해에 의한 소화 흡수성 향상 등 기호성, 영양성을 나타내며 건강 장수식품으로 인식되어 최근 각광을 받고 있는 식품으로 전세계를 통하여 엄청난 시장규모를 형성하고 있고 우리 나라에도 거의 모든 유업체가 발효유를 생산하고 있고 그 소비도 해마다 증가하고 있으며 1997년 1인당 소비량은 12kg이었다.
유산균은 포도당, 유당과 같은 탄수화물을 분해 이용하여 젖산, 초산 등을 생성하는 미생물로 단백질을 분해하지만 부패시키는 능력이 없는 미생물로 지금까지 알려진 유산균은 300-400여종으로 이 중 20여종의 유산균이 발효유, 치즈 등의 낙농제품을 비롯하여 정장제, 사료첨가제, 유산균 식품 등에 폭넓게 사용되고 있어서 균주에 따라 그 기능도 다양하다.
현재 국내에서 생산되는 발효유(요구르트)중에는 혈 중 콜레스테롤 저하시킬 목적으로 생산되는 것이 몇 가지 있으나 대부분 외국에서 수입되고 있는 검증되지 않은 균주를 사용하고 있는 실정이다.
위와같은 발효유의 음용이 혈중 콜레스테롤의 저하효과를 가져올 수 있다는 연구결과는 많이 보고 되어있다. 즉, Hepner등(1979)은 사람에게 요구르트를 음용시킨 결과 콜레스테롤의 함량이 감소하였다고 보고하였고, Mitsuoka(1990)는 B.longump을 106cfu/g 첨가한 0.25% cholesterol 함유 사료를 토끼에게 몇 번 먹인 결과, 혈중 콜레스테롤 함량의 증가가 억제됨을 확인하였다. 그 외 많은 연구자들은 사람과 실험동물에 매일 상당량(100-200g)의 발효유를 섭취하게 함으로서 혈중 콜레스테롤 함량을 10-20% 감소시킬 수 있다고 보고하였다.
이에 본발명은 1996년부터 농림부의 특정 연구과제로서 “생명공학 기술에 의한 항 콜레스테롤 유산균 개발과 이를 이용한 혈중 콜레스테롤 저하 신기능성 발효유 생산기술 개발 연구”를 진행한 결과로 혈중 콜레스테롤을 저하시키는 유산균을 4종 개발하였다. 또한 이들 균주를 현재 발효유에 사용하고 있는 상업용 콜레스테롤 저하 균주와 비교 실험한 결과 본 연구팀이 개발한 균주가 이들보다 우수함이 입증됨에 따라 이들 균주를 이용하여 혈당을 저하시키는 기능성 물질인 누에가루(silk powder)를 첨가해 새로운 기능성 발효유를 제조하고자 함이 본 발명이 이루고자하는 기술적과제이다.
참고자료
1.Gilliland, S. E., C. R. Nelson, and C. Maxwell. 1985. Assimilation of cholesterol by Lactobacillus acidophilus. Appl. and Environ. Microbiol. 49:377.
2.Gilliland, S. E. and M. L. Speck. 1977. Deconjugation of bile acids by intestinal lactobacilli. Appl. and Environ. Microbiol. 33 : 15.
3.Hepner, G., R. S. St Jeer, L. and R. Morin. 1979. Hypocholesterolemic effect of yogurt and milk. Am. J. Clin. Nutr. 32:19.
4.Mitsuoka, T.1990.Bifidobacteria and their role in human health. J. Industrial Microbiology. 6:263-268.
5.Mitsuoka, T.1978. Intestinal Bacteria and Health. An Introductory Narrative. Harcourt Brace Jovanovich Japan
6.Chevalier, P., D. Roy, and L. Savoie. 1991. X-α-gal-based medium for simultaneous enumeration of bifidobacteria and bacteria in milk. J. Microbiol. Method. 13 : 75-84
7.Lee, Y.W. 1997. Effect of fermented milk on the blood cholesterol level of korean. J. Fd Hyg. Safety. 12(1) : 83-95
도 1은 발효유 대량 생산 공정 및 제조 조건도
도 2는 각 선발균주의 혈중콜레스테롤 저하능 비교그랩도
발효유 생산의 우수한 균주 개발을 위해 3년간의 실험실내 실험과 동물생체실험을 거쳐 확보한 유산균 스타터(starter) 4종을 확보하기 위한 제조방법에 있어서,
(1)유산균에서 항 콜레스테롤 유산균을 선발하기 위한 전 단계로 불가리아 스몰리안 지방과 조오지아코오커스 지바의 장수촌의 재래 발효유 26종과 국내 김치 및 젖갈류로부터 MRS, M17, CATC 등의 배지를 이용하여 618의 유산균을 분리해 당 발효능 및 CaCo3이용성을 우선 조사하여 동일한 균주를 배제한후 시판우유에 5%의 탈지 분유가 첨가된 우유용액에 접종하여 우유 응고력이 우수한 108주의 유산균주를 선발하는 단계;
(2)선발된 108주의 유산균에 대한 인공 위액 내에의 Pepsin이 1000unit/ml 첨가된 액체 배지를 pH1.5, 2.0, 3.0의 산성조건으로 조정한 후 37℃에서 1시간 배양한 후 균주의 생존율을 회석 평판법으로 계수해 66주의 내 산성 균주를 분리하는 단계;
(3)콜레스테롤의 함량조건을 위해 G.C 분석법 사용하는 단계;
(4)내 산성 균주 66주중에서 항 콜레스테롤 유산균을 분리하기 위해 0.3% Oxgal 및 cholestrol (polyoxyethanyl - cholestroly sebacate, sigma Co.이 첨가된 MRS-THIO broth MRS broth containly 0.2% thioglycolic acid, sigma Co. 와 0.004M taurocholic aid, Sigma Co.) 10ml에 균주 배양액 1%를 접종한 후 24시간 혐기 배양해 시험관내실험(in vitro)내에서 콜레스테롤 저하능 30%이상 4균주를 최종선발 시험균주로 선정하는 단계;
(5)콜레스테롤 저하능이 높은 4개의 선발균주에 대한 동정은 Bergeys mannual of pysmatic bacteriology, The prokaryots, Microbiological method 에 기술된 방법에 따라 형태학적, 생물학적 성질을 조사하였고, api 20 step과 api 50CH 동정kit (Bio Mereiecex Co.)를 이용하여,균의 형태를 Electron microscope (Model Hitachi S - 2400)로 관찰 분류 동정해 모두 운동성이 없으며 비 포자성인 Gram 양성 균인 Lactobacillus (Co.) rhamonosus, Lactobacillus(Co.), casli, Lactococcus, Lacto lactis, 그리고 Entrococcus (E.) faecium으로 동정되었으며 이들 균주를 L.rhamnosns 2084 (L.r 2084) L.casli 0781 (L.C 0781) Lacto. lactis spp. 204 (L.1 204), E,faecium 402 (E.f 402)로 명명하는 단계;
(7)시험균주를 MRS,M17등의 성장배지에 접종 배양시켜,M17배지에서 가장 잘 성장하는 L.acidopillus 145의 최적배양온도를 37℃로 선택하는 단계;
(8)대수증식말기에 시험균주의 세포를 회수하여 생리식염수로 세척 및 현탁하여,pepsin(Sigma Co.)이 1,000unit/㎖ 첨가된 pH 1.5,2.0,그리고 pH 3.0의 액체배지에서 접종한후 37℃에서 1시간 배양시켜, 균주의 생존율이 pH1.5에서는 L.r2084 8.06×10-4%가,그리고 pH3.0에서는 모든 균주의 내산상비가 유사하였으나,대조균주보다 시험균주가 대체적으로 더 강한 내산성을 형성하는 단계;
(9)Oxgal이 0.1,0.3,0.5%첨가된 0.005M 인산나트륨 완충용액(pH7.0)에 일정량의 균주배양액을 가하여 37℃에서 1.5시간 간격으로 처리한후,균주의 생존율이 6시간처리후 0.1%,0.3% OXGAL용액에서는 L.BULGARICUS 2084가 각각15.88,2.06%로 그리고 0.3% Oxgal용액에서는 Lacto.lactis spp.204가 1.98%로 내담즙성이 가장우수한 L.acidophillus 2084 균주를 채택하는 단계;
(10)5% 탈지분유가 첨가된 원유를 50∼55℃의 열교환기로 예열된 탱크에 저장하는 단계;
(11)상기 탱크의 원유를 스타터(starter)인 시험균주로 Raw milk 81.955%,Skim milk powder 2.700%,Glucose 1.800%,Fructose 0.600%,Isomalto-origo saccharide 2.900%,Green grape concentrate 9.000%,Pine fiber 1.000%,Maxilact LX500 0.0300%,Silk powder 0.0100%,Blue color k-8813 0.005%의 혼합비로 배양된 배양액이 믹싱되게 혼합탱크의 호퍼에 공급해 30분간 교반 용해하는 단계;
(12)혼합탱크내의 열교환기로 85℃까지 가열후 40℃까지 냉각해 균주 및 유당분해효소를 첨가해 30분간 교반해,37∼40℃에서 5∼6시간 pH4.6으로 정치배양하는 단계;
(13)발효탱크로 농축액탱크의 농축액주스 및 살균된 액당액을 혼합하는 단계;
(14)발효탱크의 유액을 1st 150bar,2nd 30bar(5ton/30min)의 균질기에 도입하는 단계;
(15)균질기를 열교환기로 4℃로 냉각하는 단계;
(16)균질기의 유액을 써지탱크에 도입해 4℃로 저장 교반하여 제조함을 특징으로하는 항콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성발효유 제조방법.
위와 같이 구성되는 본 발명에 사용된 대조 균주로는 협력연구기관에서 외국에서 수입해서 발효유 제조의 starter로 MRS broth(ph 6.5)에 배양한 후 glycerol 농도가 20%(w/v)되도록 첨가하여 -70。C에 냉동 보관하면서 필요에 따라 MRS 배지에 접종 배양하거나 15%탈지분유 배지에 배양한후 4℃에 보관하면서 실험에 이용하였다.이들에 대한 생리학적특성 및 탄수화물 발효성 균의 형태는 표1, 2와 도1, 2에 나타낸바와 같다.
본 발명에 따른 실험동물 실험단계
1)실험동물
초기 체중2㎏ 내외의 뉴질랜드산 흰색암컷을 사용.
2)실험사료는 애그리 브랜드 퓨리사 코리아(주)의 토끼사료로 펠렛형 실험사료의 성분표는 아래와 같다.
| Composion | Rate of composion |
| Crude protein | 15.0 |
| crudr fat | 2.0 |
| crude fiber | 15.0 |
| crude ash | 10.0 |
| prophate | 0.4 |
| calcium | 0.8 |
3)실험구의 배치
실험구는 발효유를 급여하지 않고 콜레스테롤만을 급여하는 균을 실험구로 하여 6구로 나눴으며 각 구당 5마리의 실험동물을 배치하였다.또한 일반사료와 물은 자유급여 하였고 콜레스테롤(cholesterol,Sigma co.)는 각 구를 동일하게 체중 1㎏당 0.3g,실험구는 발효유를 체중 ㎏당 10cc를 매일 급여 하였다.
4)혈액채취 및 혈장분리
혈액은 매주 간격으로 채취하여 혈액채취 12시간전에 절식시킨 토끼를 귀정맥으로부터 10㎖ 주사기로 약 10㎖채취한후 항 응고제가 들어있는 15㎖ olypropylene tube에 넣은 다음 3,000rpm에서 10분간 원심분리하여 혈장을 채취한후 -70℃에 냉동보관 하면서 콜레스테롤 측정시료로 사용하였다.
5)혈중 콜레스테롤측정
채취한 혈액으로부터 분리한 혈장을 혈액성분 자동분석기(J.hnson ＆ heson,EKTA chem DT 60Ⅱ,U.S.A)를 이용하여 total cholesterol,density lipoprotein cholesterol(LDL-C)은 Total cholesterol,HDLD-C로부터 공식으로 계산하여 측정하였다.
한편,발효유내의 혈중 콜레스테롤 저하능 조사에 따르면,발효유를 투여하지 않은구(대조구)와 투여구(실험구)의 혈액을 2주간격으로 채취한후 혈장을 분리하여 Toatal cholesterol,HDL-C,LDS-S,LDL-C의 농도를 측정한 결과는 Fig.2와 같다.즉 Toatal cholesterol의 대조구와 실험구의 유의성은 6주로부터 p＜0.05, 8주부터는 p＜0.01수준의 유의성을 나타내었고 ,대조균주(L.a145)와 실험균주간에는 유의성이 없었으며, LDL-C는 6주차에서, P＜0.05,10주차에서 P＜0.01 수준의 유의성을 나타내었다.이상을 종합해보면 2발효유 투여는 혈중 콜레스테롤을 저하시키는 효과가 있다는 것을 알수 있었다.
동맥경화증의 실험적유발과 발효유 투여효과로,동맥경화증은 사람에게도 빈번히 일어나는 중요한 혈관질환으로 심근경색,뇌경색 동맥류 및 기타 합병증을 일으키는 치명적인 질환이다.본 실험에 사용한 실험토끼를 대상으로 대동맥,관상동맥,간 등의 실질장기를 채취 포르말린으로 고정한후,통상적인 방법으로 표본을 제작 검사를 수행 하였다.실험결과 발효유를 급여하지 않은 군에서는 대동맥 ,관상동맥중에서 동맥경화증의 소견이 뚜렸이 관찰되였고,간에서도 지방침윤 소견이 관찰되였으며,이와는 대조적으로 발효유의 급여건 에서는 이러한 병변이 경미하게 관찰되였거나 전혀 관찰되지 않았다.따라서 유산균이 동맥경화증의 예방 및 치료에도 상당한 효과가 있는 것을 시사하고 있다.
위와같이 항콜레스테롤유산균을 이용한 기능성발효유의 제조방법에 의해 제조된 본 발명 균주에 대한 시험관내 실험(in vitro) 콜레스테롤 저하능은 표1, 표2와 같으며 생체실험관(in vivo)의 저하능은 그림1과 같이 본인이 개발한 균주로 제조한 발효유를 실험동물 (토끼)에 급여시 혈 중 콜레스테롤을 저하시키는 것이 확인 되었다. 또한 기능물질로 최근 혈당 저하기능에 탁월한 효과를 나타내는 것으로 알려진 실크파우더(누에가루)를 첨가하여 표 3과 같은 발효유 조성표를 작성하여 콜레스테롤 저하능과 더불어 혈당저하능을 갖는 발효유를 제조하였다.
| StrainsMedia | Control(ug/ml) | L.c 0781 | L.r 2084 | Lacto.l 204 | E.f 402 | L.a 145 | |
| Media A | Spent broth | 78.00±1.00a | 71.00±6.04a | 66.66±2.08b | 72.00±4.87a | 72.26±3.92a | 77.20±7.01a |
| rate(%) | 91.0 | 85.5 | 92.3 | 92.6 | 98.9 | ||
| Media B | Spent broth | 80.06 0.76a | 65.26±3.20b | 62.66±3.78b | 71.00±3.15b | 70.40±6.39a | 75.00±7.25a |
| rate(%) | 80.9 | 77.7 | 88.0 | 87.3 | 92.9 | ||
| Media C | Spent broth | 82.66±4.01a | 54.00±2.37b | 46.34±2.57b | 56.00±3.04b | 53.00±6.66a | 60.00±7.04b |
| rate(%) | 65.3 | 56.1 | 67.7 | 64.1 | 72.6 | ||
| Media D | Spent broth | 95.34±4.51a | 51.16±5.15b | 45.00±4.77b | 55.00±6.61b | 52.66±4.04b | 51.60±7.23b |
| rate(%) | 53.7 | 47.2 | 57.7 | 55.2 | 54.1 | ||
| Media E | Spent broth | 99.22±6.79a | 54.50±4.60b | 46.00±2.78b | 58.00±3.74b | 55.00±6.25b | 55.50±5.17b |
| rate(%) | 54.9 | 46.4 | 58.5 | 55.4 | 55.9 | ||
| Media F | Spent broth | 107.66±1.61a | 59.34±3.78b | 51.00±2.50b | 63.80±6.13b | 59.00±3.50b | 59.20±6.11b |
| rate(%) | 55.1 | 47.4 | 59.3 | 54.8 | 54.9 |
1. Cells were incubated for 24 hrs at 37℃ in MRS-THIO broth containing water soluble
cholesterol and oxgal (Media A: none,
Media B: 0.1%, Media C: 0.2%, Media D: 0.3%, Media E: 0.4%, Media F: 0.5%).
2. All numbers are the means of 6 trials: means with different superscripts
differ significantly(P.05).
| StrainsMedia | Control(ug/ml) | L.c781 | L.r2084 | Lacto.l204 | E.f402 | L.a145 | |
| Media A | Suspend cell | 78.00±1.00a | 7.10±0.65b | 11.00±3.00b | 6.17±1.44a | 6.12±0.95a | 1.40±0.75a |
| rate(%) | 9.1 | 14.1 | 7.91 | 7.8 | 1.8 | ||
| Media B | Suspend cell | 80.06 0.76a | 14.88±1.84b | 16.70±5.51b | 9.50±0.79b | 9.90±1.52a | 5.75±1.40a |
| rate(%) | 18.6 | 20.9 | 11.9 | 12.4 | 7.2 | ||
| Media C | Suspend cell | 82.66±4.01a | 29.08±3.21b | 35.70.±7.73b | 31.83±5.51b | 28.50±6.16a | 21.60±4.56b |
| rate(%) | 35.2 | 43.2 | 38.5 | 34.5 | 26.1 | ||
| Media D | Suspend cell | 95.34±4.51a | 43.83±4.23b | 49.83±4.51b | 39.83±3.33b | 41.17±4.01b | 43.20±3.99b |
| rate(%) | 46.0 | 52.3 | 41.8 | 43.2 | 45.3 | ||
| Media E | Suspend cell | 99.22±6.79a | 43.75±4.36b | 43.42±3.09b | 41.17±2.47b | 43.75±3.40b | 43.50±7.09b |
| rate(%) | 44.1 | 43.8 | 41.5 | 44.1 | 43.8 | ||
| Suspend cell | 107.66±1.61a | 47.83±6.42b | 47.41±7.52b | 44.10±4.44b | 47.67±2.93b | 47.60±8.56b | |
| Media F | rate(%) | 44.4 | 44.0 | 41.0 | 44.3 | 44.2 |
1. Cells were incubated for 24 hrs at 37℃ in MRS-THIO broth containing water soluble
cholesterol and oxgal (Media A: none,
Media B: 0.1%, Media C: 0.2%, Media D: 0.3%, Media E: 0.4%, Media F: 0.5%).
2. All numbers are the means of 6 trials: means with different superscripts
differ significantly(P.05).
| Composition | protein | fat | carbo-hydrate | T.S | water | |
| Matialials | Mix ratio | |||||
| Raw milk | 81.955 | 2.54 | 2.78 | 3.85 | 9.75 | 72.10 |
| Skim milk powder | 2.700 | 1.01 | 0.014 | 1.44 | 2.46 | 0.23 |
| Glucose | 1.800 | 0 | 0 | 1.66 | 1.66 | 0.144 |
| Fructose | 0.600 | 0 | 0 | 0.588 | 0.588 | 0.012 |
| Isomalto-origosaccharide | 2.900 | 0 | 0 | 2.17 | 2.17 | 0.725 |
| Green grapeconcentrate | 9.000 | 0 | 0 | 6.12 | 6.12 | 6.12 |
| Pine fiber | 1.000 | 0 | 0 | 0.955 | 0.955 | 0.045 |
| Maxilact LX500 | 0.0300 | 0.004 | 0.0015 | 0 | 0.019 | 0.010 |
| Silk powder | 0.0100 | 0.009 | 0 | 0 | 0.009 | 0.004 |
| Blue color k-8813 | 0.005 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Total | 100.000 | 3.603 | 2.809 | 16.783 | 23.731 | 76.146 |
위와같이 항콜레테롤유산균을 이용한 기능성발효유의 제조방법에 의해 제조된 본 발명에 따른 균주의 콜레스테롤 저하능인 표1, 표2와 생체실험관(in vivo)의 저하능 그림1과 같이 제조한 발효유를 실험동물인 토끼에 급여시 혈중 콜레스테롤을 저하시키는 것이 확인 되었다. 또한 기능물질로 최근 혈당 저하기능에 탁월한 효과를 나타내는 것으로 알려진 누에가루(silk podwer)를 첨가하여 표 3과 같은 발효유 조성표를 작성하여 콜레스테롤 저하능과 더불어 혈당저하능을 갖는 효과가 있음을 알수 있다.
이에 현재 국내에서 발효유제조에 사용되는 유산균 스타터(starter)를 대부분 수입해 사용하고 있는 실정임을 감안할때,본 발명의 제조방법에 의해 콜레스테롤 저하능과 기능성이 월등히 뛰어난 유산균스타터를 보급하거나,유산균 종균의 수출도 가능하며,본 발명에 따른 발효유는 곧바로 상품화 할수 있으며 고지혈증으로 인한 동맥경화증 및 당뇨병 등 성인병 예방에도 도움을 줌으로써 국민 건강에도 이바지함은 물론 낙농가와 양잠농가의 소득증대에도 크게 기여할수 있는 유용한 발명인것이다.
Claims (1)
- 발효유 생산의 우수한 균주 개발을 위해 3년간의 실험실내 실험과 동물생체실험을 거쳐 확보한 유산균 스타터(starter) 4종을 확보하기 위한 제조방법에 있어서,(1)유산균에서 항 콜레스테롤 유산균을 선발하기 위한 전 단계로 불가리아 스몰리안 지방과 조오지아코오커스 지바의 장수촌의 재래 발효유 26종과 국내 김치 및 젖갈류로부터 MRS, M17, CATC 등의 배지를 이용하여 618의 유산균을 분리해 당 발효능 및 CaCo3이용성을 우선 조사하여 동일한 균주를 배제한후 시판우유에 5%의 탈지 분유가 첨가된 우유용액에 접종하여 우유 응고력이 우수한 108주의 유산균주를 선발하는 단계;(2)선발된 108주의 유산균에 대한 인공 위액 내에의 Pepsin이 1000unit/ml 첨가된 액체 배지를 pH1.5, 2.0, 3.0의 산성조건으로 조정한 후 37℃에서 1시간 배양한 후 균주의 생존율을 회석 평판법으로 계수해 66주의 내 산성 균주를 분리하는 단계;(3)콜레스테롤의 함량조건을 위해 G.C 분석법 사용하는 단계;(4)내 산성 균주 66주중에서 항 콜레스테롤 유산균을 분리하기 위해 0.3% Oxgal 및 cholestrol (polyoxyethanyl - cholestroly sebacate, sigma Co.이 첨가된 MRS-THIO broth MRS broth containly 0.2% thioglycolic acid, sigma Co. 와 0.004M taurocholic aid, Sigma Co.) 10ml에 균주 배양액 1%를 접종한 후 24시간 혐기 배양해 시험관내실험(in vitro)내에서 콜레스테롤 저하능 30%이상 4균주를 최종선발 시험균주로 선정하는 단계;(5)콜레스테롤 저하능이 높은 4개의 선발균주에 대한 동정은 Bergeys mannual of pysmatic bacteriology, The prokaryots, Microbiological method 에 기술된 방법에 따라 형태학적, 생물학적 성질을 조사하였고, api 20 step과 api 50CH 동정kit (Bio Mereiecex Co.)를 이용하여,균의 형태를 Electron microscope (Model Hitachi S - 2400)로 관찰 분류 동정해 모두 운동성이 없으며 비 포자성인 Gram 양성 균인 Lactobacillus (Co.) rhamonosus, Lactobacillus(Co.), casli, Lactococcus, Lacto lactis, 그리고 Entrococcus (E.) faecium으로 동정되었으며 이들 균주를 L.rhamnosns 2084 (L.r 2084) L.casli 0781 (L.C 0781) Lacto. lactis spp. 204 (L.1 204), E,faecium 402 (E.f 402)로 명명하는 단계;(7)시험균주를 MRS,M17등의 성장배지에 접종 배양시켜,M17배지에서 가장 잘 성장하는 L.acidopillus 145의 최적배양온도를 37℃로 선택하는 단계;(8)대수증식말기에 시험균주의 세포를 회수하여 생리식염수로 세척 및 현탁하여,pepsin(Sigma Co.)이 1,000unit/㎖ 첨가된 pH 1.5,2.0,그리고 pH 3.0의 액체배지에서 접종한후 37℃에서 1시간 배양시켜,균주의 생존율이 pH1.5에서는 L.r2084 8.06×10-4%가,그리고 pH3.0에서는 모든 균주의 내산상비가 유사하였으나,대조균주보다 시험균주가 대체적으로 더 강한 내산성을 형성하는 단계;(9)Oxgal이 0.1,0.3,0.5%첨가된 0.005M 인산나트륨 완충용액(pH7.0)에 일정량의 균주배양액을 가하여 37℃에서 1.5시간 간격으로 처리한후,균주의 생존율이 6시간처리후 0.1%,0.3% OXGAL용액에서는 L.BULGARICUS 2084가 각각15.88,2.06%로 그리고 0.3% Oxgal용액에서는 Lacto.lactis spp.204가 1.98%로 내담즙성이 가장우수한 L.acidophillus 2084 균주를 채택하는 단계;(10)5% 탈지분유가 첨가된 원유를 50∼55℃의 열교환기로 예열된 탱크에 저장하는 단계;(11)상기 탱크의 원유를 스타터(starter)인 시험균주로 Raw milk 81.955%,Skim milk powder 2.700%,Glucose 1.800%,Fructose 0.600%,Isomalto-origo saccharide 2.900%,Green grape concentrate 9.000%,Pine fiber 1.000%,Maxilact LX500 0.0300%,Silk powder 0.0100%,Blue color k-8813 0.005%의 혼합비로 배양된 배양액이 믹싱되게 혼합탱크의 호퍼에 공급해 30분간 교반 용해하는 단계;(12)혼합탱크내의 열교환기로 85℃까지 가열후 40℃까지 냉각해 균주 및 유당분해효소를 첨가해 30분간 교반해,37∼40℃에서 5∼6시간 pH4.6으로 정치배양하는 단계;(13)발효탱크로 농축액탱크의 농축액주스 및 살균된 액당액을 혼합하는 단계;(14)발효탱크의 유액을 1st 150bar,2nd 30bar(5ton/30min)의 균질기에 도입하는 단계;(15)균질기를 열교환기로 4℃로 냉각하는 단계;(16)균질기의 유액을 써지탱크에 도입해 4℃로 저장 교반하여 제조함을 특징으로하는 항콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성발효유 제조방법.
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|---|---|---|---|
| KR1019980044692A KR19990007711A (ko) | 1998-10-22 | 1998-10-22 | 항 콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성 발효유 제조 방법 |
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| KR1019980044692A KR19990007711A (ko) | 1998-10-22 | 1998-10-22 | 항 콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성 발효유 제조 방법 |
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| Publication Number | Publication Date |
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| KR19990007711A true KR19990007711A (ko) | 1999-01-25 |
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ID=65894802
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| KR1019980044692A KR19990007711A (ko) | 1998-10-22 | 1998-10-22 | 항 콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성 발효유 제조 방법 |
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| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR19990007711A (ko) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100774969B1 (ko) * | 2006-01-25 | 2007-11-08 | 주식회사 알엔에이 | 콜레스테롤 흡수 억제 및 혈중 지질 개선을 통한 동맥경화예방 락토바실러스 플랜타럼 케이8 |
| KR100871904B1 (ko) * | 2007-02-12 | 2008-12-05 | 전남대학교산학협력단 | 락토바실러스 애시도필러스 ｋｃｎｕ |
| KR20160126605A (ko) * | 2015-04-24 | 2016-11-02 | 명지대학교 산학협력단 | 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도 |
-
1998
- 1998-10-22 KR KR1019980044692A patent/KR19990007711A/ko not_active Application Discontinuation
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR100871904B1 (ko) * | 2007-02-12 | 2008-12-05 | 전남대학교산학협력단 | 락토바실러스 애시도필러스 ｋｃｎｕ |
| KR20160126605A (ko) * | 2015-04-24 | 2016-11-02 | 명지대학교 산학협력단 | 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도 |
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