KR102656934B1 - 항증식성 화합물 및 이의 사용 방법 - Google Patents

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혼-와 만
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Abstract

본원에는 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 상기 화합물을 사용하여 다발성 골수종을 치료, 예방 또는 관리하는 방법이 제공된다. 또한 상기 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 및 상기 조성물의 사용 방법이 제공된다.

Description

항증식성 화합물 및 이의 사용 방법
본원은 2017년 7월 10일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 제62/530,778호, 2017년 11월 30일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 제62/593,185호, 및 2018년 5월 23일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 제62/675,581호의 우선권을 주장하며, 이들 모두는 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본원에는 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 상기 화합물을 사용하여 다발성 골수종을 치료, 예방 또는 관리하는 방법이 제공된다. 또한, 상기 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 조합 처리를 포함하는 조성물의 사용 방법이 제공된다.
다발성 골수종 (MM)은 골수에서 형질 세포의 암이다. 정상적으로, 형질 세포는 항체를 생산하고 면역 기능에 주요 역할을 수행한다. 그러나, 이들 세포의 비제어된 성장은 골 통증 및 골절, 빈혈, 감염 및 다른 합병증을 유발한다. 다발성 골수종은 제2의 가장 통상적인 혈액학적 악성 종양이지만 다발성 골수종의 정확한 원인은 아직 알려져 있지 않다. 다발성 골수종은 혈액, 뇨 및 기관에서 고수준의 단백질을 유발하고 이는 M-단백질 및 다른 면역글로불린 (항체), 알부민, 및 베타-2-마이크로글로불린을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 단, 일부 환자 (1% 내지 5%로 추정)의 골수종 세포는 이들 단백질 (비-분비성 골수종으로 호칭됨)을 분비하지 않는다. 단클론성 단백질에 대한 약어이며 파라단백질로도 공지된 M-단백질은, 골수종 형질 세포에 의해 생산되는 특히 비정상적인 단백질이고 다발성 골수종을 갖는 거의 모든 환자의 혈액 또는 뇨에서 발견될 수 있고, 단, 비-분비성 골수종을 갖거나 이의 골수종 세포가 중쇄와 함께 면역글로불린 경쇄를 생성하는 환자는 제외한다.
골 통증을 포함하는 골격 증상은 다발성 골수종의 가장 임상적으로 유의적인 증상 중 하나이다. 악성 형질 세포는 파골세포 자극 인자 (IL-1, IL-6 및 TNF를 포함하는)를 방출하고 이들은 칼슘이 골로부터 침출되도록 하여 용해 병변을 유발하고; 고칼슘혈증은 또 다른 증상이다. 사이토카인으로도 지칭되는 골아세포 자극 인자는 아폽토시스 또는 골수종 세포의 사멸을 예방할 수 있다. 환자의 50%는 진단시에 방사선학적으로 검출 가능한 골수종-관련 골격 병변을 갖는다. 다발성 골수종에 대해 다른 통상의 임상적 증상은 다발성신경병증, 빈혈, 과다점성, 감염, 및 신장 부전증을 포함한다.
현재 다발성 골수종 치료요법은 수술, 줄기 세포 이식, 화학치료요법, 면역 치료요법, 및/또는 환자에서 다발성 골수종 세포를 박멸하기 위한 방사선 치료 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 현재 치료요법 접근법 전부는 환자에 대해 상당한 단점을 부과한다.
지난 10년간, 신규 치료제, 특히, 면역조절 약물, 예를 들어, 레날리도마이드 및 포말리도마이드는 다발성 골수종 환자에서 반응율 및 지속적 무진행 생존율 (PFS) 및 전체 생존율 (OS)을 상당히 증가시켰다. 그러나, 골수 (BM) 형태의 민감성 미만인 지속적 수준의 잔존 질환, 면역고정화와 함께 단백질 전기영동, 및 경쇄 정량은 이들 환자들이 완전한 반응 (CR)을 성취한 후에도 다발성 골수종을 갖는 많은 환자에 존재하고 궁극적으로 질환의 재발을 유발한다. 골수종에서 최소의 잔존 질환 (MRD)은 무진행 생존률 (PFS)의 독립적인 예측 변수이며, 특히 생존율 차이를 동정하기 위해 현재 5 내지 10년의 후속 처리를 요구하는 최전선 시험을 위해 효과적인 치료의 동정을 개선시키기 위한 대용물 시험 평가변수로서 고려 중에 있다. 다발성 골수종을 갖는 환자에서 최소 잔존 질환 (MRD)을 모니터링하는 것은 따라서 PFS 및 OS를 예측하고 치료 결정을 하는데 예후 값을 제공한다. 골수종에서 최소 잔존 질환 (MRD)의 검출은 치료 후 0.01% 역치 (10-4)를 사용할 수 있고, 즉, 총 골수 단핵 세포의 비율이 MRD-음성인 것으로 고려되는 10-4 세포 또는 그 이하의 골수종 세포를 갖고 10-4 세포 또는 보다 높은 MRD-양성을 갖는다. 10-4 MRD 역치는 본래에 기술적 능력을 기준으로 하지만 정량적 MRD 검출은 현재 유동 세포 측정에 의해 10-5에서 가능하고 고속 처리 서열분석에 의해 10-6에서 가능하다. (참조: Rawstron et al., Blood 2015;125(12):1932-1935). MRD를 측정하기 위한 방법은 VDJ, 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) (대립형질 특이적 PCR, ASO PCR을 포함하는) 및 다중파라미터 유동 세포측정 (MPF)의 DNA 서열분석을 포함한다. 예를 들어, 클론형 프로필 측정을 기초로 하는 MRD에 대한 검정은 또한 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,628,927호 (참조: Faham et al.)에 기재되어 있다.
통상적인 치료요법과 연관된 독성 및/또는 부작용을 감소시키거나 회피하면서, 다발성 골수종이 새롭게 진단되거나 표준 치료에 난치성인 환자에 대한 것을 포함하는 다발성 골수종을 치료, 예방 및 관리하기 위한 안전하고 효과적인 화합물 및 방법이 상당히 요구되고 있다.
본 출원의 섹션 2에서 임의의 참조문헌의 인용 또는 확인은 참조문헌이 본 출원에 대해 선행 기술임을 인정하는 것으로서 해석되지 말아야 한다.
본원에는 화합물, 상기 화합물을 함유하는 약제학적 조성물 및 다발성 골수종을 치료하는데 사용하기 위한 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 본원에 제공된 조성물 및 방법에 사용하기 위한 화합물은 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 화합물 (화합물 1):
1
또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
일 구현예에서, 본원에 제공된 조성물 및 방법에 사용하기 위한 화합물은 (S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 화합물 (화합물 2):
2
또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 조성물 및 방법에 사용하기 위한 화합물은 (R)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 화합물 (화합물 3):
3
또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
또한 본원에 제공된 유효 농도의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하고 임의로 적어도 하나의 약제학적 담체를 포함하는, 적절한 경로 및 수단에 의한 투여용으로 제형화된 약제학적 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 약제학적 조성물은 다발성 골수종의 치료를 위한 유효량을 전달한다. 일 구현예에서, 약제학적 조성물은 다발성 골수종의 예방을 위한 유효량을 전달한다. 일 구현예에서, 약제학적 조성물은 다발성 골수종의 개선을 위한 유효량을 전달한다.
또한 본원에는 본원에 제공된 화합물 또는 조성물, 또는 거울상이성질체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 치료요법, 예를 들어, 다발성 골수종 또는 이의 증상에 대한 활성을 갖는 또 다른 약제학적 제제와 병용하여 사용하는 조합 처리요법이 제공된다. 상기 방법의 범위내에서 치료요법의 예는 수술, 화학치료요법, 방사선 치료요법, 생물학적 치료요법, 줄기 세포 이식, 세포 치료요법, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 제공된 화합물 또는 조성물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 유도체는 상기 치료요법 중 하나 이상의 투여와 동시에, 투여 전에 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 본원에 제공된 화합물 및 상기 치료요법 중 하나 이상을 함유하는 약제학적 조성물이 또한 제공된다.
일 구현예에서, 유효량의 화합물 또는 치료학적 유효 농도의 화합물을 함유하는 조성물은 치료될 다발성 골수종의 증상을 나타내는 개체에게 투여된다. 상기 양은 다발성 골수종의 하나 이상의 증상을 개선시키거나 제거하기 위해 효과적이다. 치료 방법을 수행하는데 있어서, 유효량의 화합물 또는 치료학적 유효 농도의 화합물을 함유하는 조성물은 이를 필요로 하는 다발성 골수종 환자에게 투여된다.
추가로 약제학적 조성물의 성분들 중 하나 이상이 충전된 하나 이상의 컨테이너를 포함하는 약제학적 팩 또는 키트가 제공된다. 상기 컨테이너(들)에는 약제학적 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 처방된 형태의 공고문이 부착될 수 있고 상기 공고문은 인간 투여용으로의 제조, 사용 또는 판매 기관에 의한 승인을 반영한다. 팩 또는 키트는 투여 방식, 약물 투여 순서 (예를 들어, 별도로, 연속적으로 또는 동시에) 등에 관한 정보가 라벨링될 수 있다.
본원에 기재된 주요 요지의 이들 및 다른 양상은 하기의 발명의 상세한 설명을 참조로 명확해질 것이다.
B. 도면의 간단한 설명
도 1. (A) 레날리도마이드 저항성 H929-1051 세포에서 시간 경과에 따라 카스파제 3배 유도 (aka 아폽토시스 지수) 곡선하 면적에 의해 측정된, 아폽토시스 유도의 변화. 가로좌표: log nM (화합물), 세로좌표: 아폽토시스 지수. 가장 적합한 선은 GraphPad Prism에서 계산된 3개의 파라미터 로지스틱 방정식이다. (B) H929-1051 세포에서 화합물 1 및 화합물 A에 대한 농도-반응 곡선의 곡선하 면적을 사용하여 6시간 노출 후 화합물의 아폽토시스 유도 능력을 비교한 다음, 희석하여 화합물의 농도를 20배 감소시켰다.
도 2. 레날리도마이드-저항성 MM 세포 H929-1051에서 포말리도마이드-덱사메타손 조합 처리 및 단일 제제 화합물 2 (A), 및 화합물 2-덱사메타손 (B)과의 조합 처리와의 항-증식성 활성의 비교.120시간 처리 후 ATP 결정 검정 (CellTiter-Glo)을 사용하여 증식을 평가하였다. 백그라운드 빼고 DMSO 대조군 (100% 대조군)으로 정규화함으로써 백분율 대조군을 계산하였다. 각각의 데이터 포인트는 적어도 3개의 독립적 실험의 평균을 중복으로 나타낸다.
도 3. 72시간 동안 화합물 2로 처리된, (A) 자극되지 않은 PBMC 및 (B) THLE-2에 대한 항-증식 효과는 ATP 결정 검정 (CellTiter-Glo)을 사용하여 평가되었다. 백그라운드 빼고 DMSO 대조군 (100% 대조군)으로 정규화함으로써 백분율 대조군을 계산하였다.
도 4. 레날리도마이드-저항성 H929-1051 이종이식 모델에서 연속적 투약으로 화합물 2의 항종양 활성. 암컷 SCID 마우스에 10 x 106 H929-1051 종양 세포를 오른쪽 옆구리에 접종하였다. 처리 개시시 마우스를 처리 그룹 (n = 10/그룹)으로 무작위화 하였다. 시험 물품 처리는 종양이 대략 120 mm3일 때 14일 째에 개시되었다.
도 5: 염색체 전좌에 의해 분류된 다발성 골수종 세포주에서의 화합물 2 항증식 활성. 그래프는 MM에서 발견된 공통 전좌를 포함하는 15 MM 세포주에 대한 유세포분석법에 의해 생존 세포 수를 측정하는 농도-반응 성장 곡선의 곡선하 면적 (AUC)을 나타낸다. 보고된 AUC 값은 용량 반응 곡선하 면적에 해당하며, 여기서 0의 값은 모든 용량에서 증식/생존력의 완전한 감소에 해당하며, 10000의 값은 증식/생존력의 감소가 없음에 해당한다. 세포주는 첫째 발견된 염색체 전좌에 의해, 그리고 둘째 전좌가 위험성이 높은 것으로 공지되어 있는지 여부에 의해 그룹화된다.
도 6: 레날리도마이드- 및 포말리도마이드-저항성 다발성 골수종 세포주에서 화합물 2 및 포말리도마이드의 항증식 활성. IC50 = 화합물 2 및 포말리도마이드의 농도는 대조군과 비교하여 세포 성장의 50% 억제를 초래하였다. 화합물 2 및 포말리도마이드 항증식성 IC50 값 (바)의 비교를 보여주는 그래프는 표 11에 제시된 모계 (DF15, NCI-H929 및 OPM2), 레날리도마이드-저항성 (NCI-H929-1051), 또는 포말리도마이드-저항성 (NCI-H929-P01, OPM2-P01, OPM2-P1, OPM2-P10 및 DF15R) MM 세포주에서 CellTitre-글로우 검정을 사용하여 결정하였다.
도 7: 골수성 소집단에 대한 게이팅 전략.
도 8: 시험관내 호중구 선조체 분화의 마지막 단계 최대 3일 동안 짧은 1일 화합물 2 노출의 영향.건강한 공여자 골수로부터 유래된 CD34+ 세포를 각각 1, 2, 또는 3일 연속으로 1, 10, 및 100 nM의 농도로 화합물 2에 노출시켰다. 생존 세포만이 분석에 포함되었다. 데이터는 공여자 1 및 2에 대한 결과의 평균이며, 6시간 노출 후 각각 CD34-/CD33+/CD11b+ 및 CD34-/CD33-/ CD11b+로 정의된 단계 III 및 단계 IV 세포의 백분율의 예를 나타낸다.
도 9: 화합물 2에 3일 연속 6시간 노출 후 호중구 선조체의 후기 단계 성숙. 건강한 공여자 골수로부터 유래된 CD34+ 세포를 10일에 시작하여 3일 연속 각각에 1, 10, 또는 100 nM의 농도로 6시간 동안 화합물 2에 노출시켰다. 데이터는 공여자 1번 및 2번으로부터 CD34-/CD33+/CD11b+로 정의된 단계 III 세포의 평균 백분율 및 CD34-/CD33-/CD11b+로 정의된 단계 IV 세포의 백분율을 나타낸다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
도 10: 화합물 2에 5일 연속 6시간 노출 후 호중구 선조체의 후기 단계 성숙.건강한 공여자 골수로부터 유래된 CD34+ 세포를 10일에 시작하여 5일 연속 각각에 1, 10, 또는 100 nM의 농도로 6시간 동안 화합물 2에 노출시켰다. 데이터는 공여자 1번 및 2번으로부터 CD34-/CD33+/CD11b+로 정의된 단계 III 세포의 평균 백분율 및 CD34-/CD33-/CD11b+로 정의된 단계 IV 세포의 백분율을 나타낸다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
도 11: 단일 제제 덱사메타손 에 대한 치료 스케줄 다이어그램.
도 12: 상이한 농도로 덱사메타손 또는 화합물 2 단독 또는 조합하여 1회 노출한 후 골수성 분화 동안 성숙한 호중구의 백분율.건강한 공여자 골수로부터 유래된 CD34+ 세포를 13일 째에 1, 10, 또는 100 nM의 농도로 단독 (상단)으로 또는 조합 (하단)하여 화합물 2 (6시간 동안) 및 덱사메타손 (30시간 동안)에 노출시켰다. 각각의 하부 패널에서, 화합물 2의 농도를 변화시키고, 덱사메타손의 농도를 1 nM (좌측), 10 nM (중간), 또는 100 nM (우측)에서 일정하게 유지시켰다. 조합물의 경우, 배양물을 6시간 동안 두 제제에 대해 동시에 노출시켰다. 이어서, 세포를 세척하고, 다음 24시간 동안 덱사메타손과 재항온배양하였다. 이어서, 연구의 나머지 동안 세포를 세척하고, 화합물 2 또는 덱사메타손 없이 재항온배양하였다. 데이터는 공여자 3, 4, 및 5로부터 CD34/CD33+/CD11b+로 정의된 단계 IV 세포의 백분율을 나타낸다. 적색 선은 DMSO 대조군에서 단계 IV 세포 수준의 50%를 나타낸다.
도 13: 레날리도마이드-저항성 다발성 골수종 세포주에서 아폽토시스에 대한 덱사메타손 단독 또는 화합물 2, 레날리도마이드 및 포말리도마이드와 조합한 치료 효과. y-축은 DMSO로부터의 카스파제-3에 대한 배수 변화를 나타내며, x-축은 덱사메타손의 로그 농도이다.
도 14: 화합물 2는 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 직접 활성화시켜 K562 적혈구골수구성 백혈병 세포를 농도-의존적 방식으로 용해시켰다. (좌측) 화합물 2, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 또는 DMSO와 함께 사전 항온배양된 인간 PBMC와 공동배양된 K562 세포의 대표적인 형광-활성화된 세포 분류 플롯. (우측) 공동배양에서 생존 가능한 K562 세포의 농도-의존적 감소를 나타내는 PI 아넥신 V K562 세포의 백분율의 미가공 데이터.데이터는 평균의 표준 오차를 나타내는 오차 막대가 평균으로 제시된다.
도 15: 면역 세포는 레날리도마이드-민감한 및 레날리도마이드-저항성 다발성 골수종 세포주를 용해시키기 위해 화합물 2에 의해 직접 활성화된다. 말초 혈액 단핵 공여자 세포 (PBMC) (이펙터 세포)를 지시된 시험 물품 또는 화합물 2로 2시간 동안 전처리한 후에, 항-CD3 항체-코팅된 플레이트에서 72시간 동안 배양하였다. 미처리된 CFSE 표지된 다발성 골수종 세포주와 공동배양하기 전에, PBMC를 세척하고, 화합물이 존재하지 않는 배지에 배치한 다음, 다발성 골수종 세포주 (표적 세포)와 24시간 동안 공동배양하였다. 면역 세포-매개된 다발성 골수종 세포 사멸의 증가는 (A) NCI-H929 세포 또는 (B) H929-1051 세포와 공동배양된 화합물 2-처리된 PBMC (1:5의 표적:이펙터 비)에서 명백하였다.
도 16: 화합물-프라이밍된 면역 세포는 공동배양 전에 다발성 골수종 세포를 레날리도마이드, 포말리도마이드, 또는 화합물 2로 전처리할 때 향상된 종량 세포 사멸을 나타낸다. 말초 혈액 단핵 세포를 레날리도마이드, 포말리도마이드, 또는 화합물 2와 함께 2시간 동안 사전 항온배양한 후, 항-CD3 항체-코팅된 플레이트에서 72시간 동안 배양하였다. 동시에, 시험 물품을 함유하는 배지에서 4개의 다발성 골수종 (MM) 세포주를 배양하였다. 72시간 후, 세포를 24시간 동안 함께 공동배양하였다 (1:5의 표적:이펙터 [T:E] 비). 면역 세포 매개된 MM 사멸의 증가는 시험된 모든 세포 유형 (A) NCI-H929, (B) H929-1051, (C) OPM2, 및 (D) OPM2 P10 세포주에서 MM 단일 배양물 (각각의 행에서 좌측에 있는 그래프)과 비교하여 공동 배양물 (각각의 행에서 우측에 있는 그래프)에서 명백하였다. 화합물은 PBMC 생존력에 거의 영향을 미치지 않았다 (각각의 행에서 중간 그래프로 나타냄).
Figure　17: 화합물 2는 MM 세포주에서 CD38 발현을 상향조절한다. CD38의 세포 표면 발현은 화합물 2 또는 포말리도마이드로 전처리한 MM 세포에서 72시간 동안 평가하였다. 용량 반응 효과는 OPM-2 및 OPM-2.P10 세포주에 대해 나타낸다.
도 18: 화합물 2는 MM 세포의 다라투무맙-매개된 ADCC를 증가시킨다. 7개 MM 세포주는 ADCC 검정을 위해 10:1의 이펙터 대 표적 [E:T]에서 NK 세포와 공동배양하기 전에 치사량 이하 농도의 화합물 2 또는 포말리도마이드로 72시간 동안 처리하였다. 그래프는 7개 MM 세포주에 대해 얻어진 대표적인 데이터를 도시한다. 2개의 상이한 공여자로부터 NK 세포로 검정을 2회 수행하였다. DMSO 대조군은 미처리된 종양 세포를 갖는 기준선 NK 세포 활성이며; 이소형 및 Dara는 각각 미처리된 종양 세포를 갖는 이소형 대조군 및 다라투마맙의 존재하에 NK 세포 활성이며; 이소형 + 화합물 및 Dara + 화합물은 각각 처리된 종양 세포를 갖는 이소형 대조군 및 다라투마맙의 존재하에 NK 세포 활성이다.
Figure　19: 화합물 2는 MM 세포의 다라투마맙-매개된 ADCP를 향상시킨다. 식균작용 검정은 2:1의 이펙터 대 표적 비 [E:T]로 수행되었다. 6개의 MM 세포주 +/- 화합물 2 또는 포말리도마이드 전처리는 다라투마맙-매개된 ADCP에 적용되었다. A) OPM2 세포주를 갖는 ADCP의 대표적인 이미지.대식세포는 적색이며, OPM2 세포는 녹색이다. B) 유세포분석법에 의한 식균작용의 정량화. DMSO 대조군은 미처리된 종양 세포를 갖는 기준선 NK 세포 활성이며; 이소형 및 Dara는 각각 미처리된 종양 세포를 갖는 이소형 대조군 및 다라투마맙의 존재하에 NK 세포 활성이며; 이소형 + 화합물 및 Dara + 화합물은 각각 처리된 종양 세포를 갖는 이소형 대조군 및 다라투마맙의 존재하에 NK 세포 활성이다.
도 20: 화합물 2와 프로테아솜 억제제의 조합은 MM 세포 모델에서 증가된 아폽토시스를 초래한다. MM 세포주를 보르테조밉 또는 DMSO의 펄스로 1시간 동안 처리한 후 세척하였다. 전처리된 세포를 상이한 농도의 화합물 2와 함께 72시간 동안 항온배양한 후, 7-AAD 및 아넥신-V 용액으로 샘플을 염색하고, 유세포분석법으로 분석하였다. A) 화합물 2 단독 또는 보르테조밉 전처리된 생존 세포의 백분율. B) 다양한 처리 조건에서 OPM2-P10 세포의 산포도.
도 21: MM 세포에서 화합물 2와 보르테조밉 또는 카르필조밉의 조합. 4개의 MM 세포주를 보르테조밉 또는 DMSO의 펄스로 1시간 동안 처리한 후 세척하였다. 전처리된 세포를 상이한 농도의 화합물 2와 함께 72시간 동안 항온배양한 후, 7-AAD 및 아넥신-V 용액으로 샘플을 염색하고, 유세포분석법으로 분석하였다. A) 화합물 2 단독 또는 보르테조밉 전처리된 항증식 효과. B) 화합물 2 단독 또는 카르필조밉 전처리된 항증식 효과. DRC = 용량-반응 곡선
도 22. 히스톤 탈아세틸화효소 억제제, 화학요법 제제, Bcl-2 억제제, Mcl-1 억제제, BET 억제제, 또는 LSD-1 억제제와 조합하여 화합물 2로 MM 세포를 처리하는 것을 나타낸다. MM 세포주의 패널에 걸쳐 13개의 소분자 억제제와 조합하여 화합물 2로 처리하기 위해 상승작용 계산을 수행하였다. 청색 박스는 화합물 2와 조합될 때 상승적인 웰의 백분율을 도시한다. *는 널 (null) 모델로부터의 표면 반응 차이의 유의성을 나타낸다.
도 23: 단일 제제로서 및 레날리도마이드 저항성 H929-1051 이종이식 모델과 조합된 화합물 2 (0.1 mg/kg, qd) 및 덱사메타손 (0.5 mg/kg, qd)으로의 처리 효과.
도 24: 레날리도마이드-저항성 NCI-H929 (H929-1051) 다발성 골수종/형질세포종 이종이식 모델에서 화합물 2 단독 및 보르테조밉과 조합된 항종양 활성. 투약 일은 X 축에 화살표로 나타낸다.
A. 정의
달리 정의되지 않는 경우, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 모든 특허, 출원, 공개 출원 및 다른 공보는 이들의 전문이 참조로 인용된다. 본원에서 용어에 대한 다수의 용어가 있는 경우에, 본 섹션에서의 용어들이 달리 기재되지 않는다면 우선한다.
"IC50"은 본원에 기재된 임의의 시험관내 또는 세포 기반 검정을 통해 측정된 바와 같이, 수용체 결합, 수용체 활성, 세포 성장 또는 증식과 같은 최대 반응의 50% 억제를 성취하는 특정 시험 화합물의 양, 농도 또는 용량을 언급한다.
약제학적으로 허용되는 염은 아민 염, 예컨대 비제한적으로 N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 암모니아, 디에탄올아민 및 다른 하이드록시알킬아민, 에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 프로카인, N-벤질펜에틸아민, 1-파라-클로로벤질-2-피롤리딘-1'-일메틸- 벤즈이미다졸, 디에틸아민 및 다른 알킬아민, 피페라진 및 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄; 알칼리 금속 염, 예컨대 비제한적으로 리튬, 칼륨 및 나트륨; 알칼리 토금속 염, 예컨대 비제한적으로 바륨, 칼슘 및 마그네슘; 전이 금속 염, 예컨대 비제한적으로 아연; 및 다른 금속 염, 예컨대 비제한적으로 인산수소나트륨 및 인산이나트륨을 포함하고; 또한 비제한적으로, 무기산의 염, 예컨대 비제한적으로 하이드로클로라이드 및 설페이트; 및 유기 산의 염, 예컨대 비제한적으로 아세테이트, 락테이트, 말레이트, 타르트레이트, 시트레이트, 아스코르베이트, 석시네이트, 부티레이트, 발레레이트, 푸마레이트 및 유기 설포네이트를 포함한다.
달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 화합물이 대안적인 호변이성체, 위치이성체 및/또는 입체이성체 형태를 취할 수 있는 경우, 모든 대안적인 이성체는 청구된 요지의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 예를 들어, 화합물이 2개의 호변이성체 형태 중 하나를 가질 수 있는 경우, 두 호변이성체가 본원에 포함되는 것으로 의도된다.
따라서, 본원에 제공된 화합물은 거울상이성체적으로 순수하거나, 입체이성체 또는 부분입체이성체 혼합물일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이 그리고 달리 나타내지 않는 한, 용어 "입체이성체적으로 순수한"이란, 화합물의 하나의 입체이성체를 포함하고 그 화합물의 다른 입체이성체가 실질적으로 없는 조성물을 의미한다. 예를 들어, 하나의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체이성체적으로 순수한 조성물은 화합물의 반대 거울상이성체가 실질적으로 없을 것이다. 2개의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체이성체적으로 순수한 조성물은 화합물의 다른 부분입체이성체가 실질적으로 없을 것이다. 전형적인 입체이성체적으로 순수한 화합물은 약 80 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 20 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체, 더 바람직하게는 약 90 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 10 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체, 더욱 더 바람직하게는 약 95 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 5 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체, 및 가장 바람직하게는 약 97 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 3 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체를 포함한다. 본원에 사용된 입체이성체적으로 순수한 화합물은 약 80 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체, 더 바람직하게는 약 90 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체, 더욱 더 바람직하게는 약 95 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체, 및 가장 바람직하게는 약 97 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이 그리고 달리 나타내지 않는 한, 용어 "입체이성체적으로 농축된"이란, 약 60 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체, 바람직하게는 약 70 중량% 초과, 더 바람직하게는 약 80 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체를 포함하는 조성물을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이 그리고 달리 나타내지 않는 한, 용어 "거울상이성체로 순수한"이란, 하나의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체이성체적으로 순수한 조성물을 의미한다. 유사하게, 용어 "입체이성체적으로 농축된"이란, 하나의 키랄 중심을 갖는 화합물의 입체이성체적으로 순수한 조성물을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이, 입체이성체 또는 부분입체이성체 혼합물이란, 하나 초과의 화합물의 입체이성체를 포함하는 조성물을 의미한다. 화합물의 전형적인 입체이성체 혼합물은 약 50 중량%의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 50 중량%의 화합물의 다른 입체이성체를 포함하거나, 약 50 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 50 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체를 포함하거나, 약 45 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 55 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체를 포함하거나, 약 40 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 60 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체를 포함하거나, 약 35 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성체 및 약 65 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성체를 포함한다.
본원에 제공된 화합물이 키랄 중심을 함유할 수 있음을 이해해야 한다. 그러한 키랄 중심은 (R) 또는 (S) 배열일 수 있거나, 이들의 혼합물일 수 있다. 본원에 제공된 화합물의 키랄 중심은 생체내에서 에피머화될 수 있음을 이해해야 한다. 이와 같이, 당해 분야의 숙련가는 (R) 형태의 화합물의 투여가 생체내 에피머화를 겪는 화합물에 대해 (S) 형태의 화합물의 투여와 동등하다는 것을 인식할 것이다.
광학 활성 (+) 및 (-), (R)- 및 (S)-, 또는 (D)- 및 (L)-이성체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조되거나, 종래의 기술, 예컨대 키랄 정지상 상의 크로마토그래피를 사용하여 분해될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "동위이성체"란 동위원소적으로 농축된 화합물이다. 용어 "동위원소적으로 농축된"이란, 그 원자의 천연 동위 원소 조성 이외의 동위원소 조성을 갖는 원자를 지칭한다. 　"동위원소적으로 농축된"이란 또한, 그 원자의 천연 동위원소 조성 이외의 동위원조 조성을 갖는 적어도 하나의 원자를 함유하는 화합물을 지칭할 수 있다. 용어 "동위원소 조성"은 주어진 원자에 대해 존재하는 각각의 동위원소의 양을 지칭한다. 방사선표지된 및 동위원소적으로 농축된 화합물은 치료제, 예를 들어, 다발성 골수종 치료제, 연구 시약, 예를 들어, 결합 검정 시약, 및 진단제, 예를 들어, 생체내 영상화제로서 유용하다. 방사성이든 아니든, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 모든 동위원소 변형은 본원에 제공된 구현예의 범위 내에 포함되도록 의도된다. 일부 구현예에서, 화합물의 동위이성체가 제공되며, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 동위이성체는 중수소, 탄소-13, 또는 질소-15 농축 화합물이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 동위이성체는 중수소 농축 화합물이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 동위이성체는 중수소 농축 화합물이며, 여기서, 중수소 농축은 키랄 중심에서 발생한다.
본원의 설명에서, 화학명과 화학 구조 사이에 임의의 차이가 있는 경우, 구조는 제어된다.
본원에 사용된 바와 같이 "다발성 골수종"은 악성 형질 세포를 특징으로 하는 혈액학적 병태를 지징하며 하기 장애를 포함한다: 의미 불명 단클론성 감마글로불린병증 (MGUS); 저 위험, 중간 위험, 및 고 위험 다발성 골수종; 새로 진단된 다발성 골수종 (저 위험, 중간 위험, 및 고 위험으로 새로 진단된 다발성 골수종을 포함함); 이식 적격 및 이식 부적격 다발성 골수종; 무증상 (무통증) 다발성 골수종 (저 위험, 중간 위험, 및 고 위험 무증상 다발성 골수종을 포함함); 활성 다발성 골수종; 고립성 형질세포종; 골수외 형질세포종; 형질 세포 백혈병; 중추신경계 다발성 골수종; 경쇄 골수종; 비-분비성 골수종; 면역글로불린 D 골수종; 및 면역글로불린 E 골수종; 및 사이클린 D 전좌 (예를 들어, t(11;14)(q13;q32); t(6;14)(p21;32); t(12;14)(p13;q32); 또는 t(6;20);); MMSET 전좌 (예를 들어, t(4;14)(p16;q32)); MAF 전좌 (예를 들어, t(14;16)(q32;q32); t(20;22); t(16; 22)(q11;q13); 또는 t(14;20)(q32;q11)); 또는 다른 염색체 인자 (예를 들어, 17p13의 결실, 또는 염색체 13; del(17/17p), 비고이배성, 및 이득(1q))와 같은 유전적 비정상을 특징으로 하는 다발성 골수종.
본원에 사용된 바와 같이 그리고 달리 나타내지 않는 한, 용어들 "치료하다," "치료하는" 및 "치료"는 치료되는 질환 또는 병태, 예를 들어, 다발성 골수종과 연관된 증상의 중증도를 완화 또는 감소시키는 것을 지칭한다.
용어 "예방"은 특정한 질환 또는 장애, 예를 들어, 다발성 골수종의 증상의 억제를 포함한다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종 가족력이 있는 환자는 예방적 용법의 후보이다. 일반적으로, 용어 "예방하는"은 증상의 발병 전, 특히 다발성 골수종의 위험이 있는 환자에게 약물을 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이 그리고 달리 나타내지 않는 한, "관리하는"이란 용어는 특정한 질환 또는 장애, 예컨대 다발성 골수종을 겪고 있는 환자에서 이의 재발을 예방하고/하거나, 질환 또는 장애를 겪고 있는 환자가 여전히 완화된 상태로 시간을 연장시키고/시키거나, 환자의 사망률을 감소시키고/시키거나, 관리되는 질환 또는 병태와 연관된 증상의 중증도의 감소 또는 회피를 유지하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "대상체" 또는 "환자"는 동물, 전형적으로 인간, 예컨대 인간 환자를 포함하는 포유동물이다.
용어 "재발된"은 치료요법 후 다발성 골수종이 완화된 환자가 골수에서 골수종 세포의 복귀 및/또는 감소된 정상 세포를 갖는 상황을 지칭한다.
용어 "불응성 또는 저항성"은 환자가 집중적인 치료 후에도 골수에서 잔류 골수종 세포 및/또는 감소된 정상 세포를 갖는 상황을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "유도 치료요법"은 질환에 대해 제공된 제1 치료, 또는 질환, 예컨대 암에서 완전한 완화를 유도하기 위해 제공된 제1 치료를 지칭한다. 　 그것만으로 사용될 때, 유도 치료요법은 최상의 이용 가능한 치료법으로서 허용되는 치료요법이다. 잔류 암이 검출되면, 환자는 재유도라 불리는 또 다른 치료요법으로 치료받는다. 　 유도 치료요법 후 환자가 완전히 완화된 경우, 완화를 연장하거나 환자를 잠재적으로 치료하기 위해 추가의 공고 (consolidation) 및/또는 유지 치료요법이 제공된다.
본원에 사용된 바와 같이, "공고 치료요법"은 완화가 처음 달성된 후 질환에 대해 주어진 치료를 지칭한다. 　 예를 들어, 암에 대한 공고 치료요법은 초기 치료요법 후 암이 사라진 후에 주어진 치료법이다. 　 공고 치료요법은 방사선 치료요법, 줄기 세포 이식, 또는 암 약물 치료요법으로의 치료를 포함할 수 있다. 공고 치료요법은 강화 요법 및 완화 후 치료요법으로도 지칭된다.
본원에 사용된 바와 같이, "유지 치료요법"은 재발을 예방하거나 지연하기 위해 완화 또는 최상의 반응이 발성된 후 질환에 대해 주어진 치료를 지칭한다. 　 유지 치료요법은 화학요법, 호르몬 치료요법 또는 표적 치료요법을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "완화"는 암, 예를 들어, 다발성 골수종의 징후 및 증상의 감소 또는 사라짐이다. 부분 완화에서, 암의 징후 및 증상이 전부는 아니지만 일부 사라졌다. 완전한 완화에서, 암이 여전히 몸에 있을 수 있지만 암의 모든 징후 및 증상은 사라졌다.
본원에 사용된 바와 같이 "이식"은 줄기 세포 구조를 갖는 고용량 치료요법을 지칭한다. 조혈 (혈액) 또는 골수 줄기 세포는 치료로서가 아니라 고용량 요법, 예를 들어, 고용량 화학요법 및/또는 방사선 후 환자를 구제하기 위해 사용된다. 이식은 "자가" 줄기 세포 이식 (ASCT)을 포함하는데, 이는 수확되고 대체 세포로 사용되는 환자 자신의 줄기 세포의 사용을 지칭한다. 일부 구현예에서, 이식은 또한 연속 이식 (tandem transplant) 또는 다중 이중을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이 그리고 달리 명시되지 않는 한, 화합물의 "치료학적 유효량" 및 "유효량"이란 용어는 질환, 예를 들어, 다발성 골수종의 치료, 예방 및/또는 관리에 치료적 이점을 제공하거나, 치료된 질환 또는 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 지연 또는 최소화하기에 충분한 양을 지칭한다. 용어들 "치료학적 유효량" 및 "유효량"은 전체 치료요법을 개선하거나, 질환 또는 장애의 증상 또는 원인을 감소 또는 피하거나, 또 다른 치료제의 치료적 효능을 향상시키는 양을 포함할 수 있다.
용어들 "공-투여" 및 "와의 조합"은 하나 이상의 치료제 (예를 들어, 본원에 제공된 화합물 및 또 다른 항-다발성 골수종 제제, 암 제제 또는 지지 치료제)를 특정 시간 제한 없이 동시에, 동반하여 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 제제는 세포 또는 환자의 신체에서 동시에 존재하거나, 생물학적 또는 치료 효과를 동시에 발휘한다. 일 구현예에서, 치료제는 동일한 조성물 또는 단위 투여 형태이다. 또 다른 구현예에서, 치료제는 별도의 조성물 또는 단위 투여 형태이다.
용어 "지지적 치료제"는 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로 치료할 때 부작용을 치료, 예방 또는 관리하는 임의의 물질을 지칭한다.
용어 "생물학적 치료요법"은 생물학적 치료제, 예컨대 제대혈, 줄기 세포, 성장 인자 등의 투여를 지칭한다.
암, 예컨대 다발성 골수종의 맥락에서, 억제는 특히 질환 진행의 억제, 종양 성장의 억제, 일차 종양의 감소, 종양-관련된 증상의 완화, 종양 분비된 인자의 억제, 일차 또는 이차 종양의 출현 지연, 일차 또는 이차 종양의 발달 지연, 일차 또는 이차 종양의 발생 감소, 질환의 이차 효과의 중증도 지연 또는 감소, 저지된 종양 성장 및 종양 퇴행, 증가된 TTP (Time To Progression), 증가된 PFS (Progression Free Survival), 증가된 OS (Overall Survival)에 의해 평가될 수 있다. 본원에 사용된 OS는 처리 개시로부터 임의의 원인으로부터 사망까지의 시간을 의미한다. 본원에 사용된 TTP는 처리 개시로부터 종양 진행까지의 시간을 의미하며; TTP는 사망을 포함하지 않는다. 일 구현예에서, PFS는 처리 개시로부터 종양 진행 또는 사망까지의 시간을 의미한다. 일 구현예에서, PFS는 화합물의 제1 용량으로부터 임의의 원인으로부터 질환 진행 또는 사망의 첫 발생까지의 시간을 의미한다. 일 구현예에서, PFS 비율은 카플란-마이어 추정치를 사용하여 계산될 수 있다. 무사건 생존 (EFS)은 질환 진행, 임의의 이유로 인한 치료 중단 또는 사망을 포함하여 처리 개시로부터 임의의 치료 실패까지의 시간을 의미한다. 일 구현예에서, 전체 반응률 (ORR)은 반응을 달성한 환자의 백분율을 의미한다. 일 구현예에서, ORR은 완전한 및 부분 반응을 달성한 환자의 백분율의 합을 의미한다. 일 구현예에서, ORR은 IMWG 균일한 반응 기준에 따라 최상의 반응 ≥ 부분 반응 (PR)을 가진 환자의 백분율을 의미한다. 일 구현예에서, 반응 지속기간 (DoR)은 반응 달성부터 재발 또는 질환 진행까지의 시간이다. 일 구현예에서, DoR은 반응 ≥ 부분 반응 (PR) 달성으로부터 재발 또는 질환 진행까지의 시간이다. 일 구현예에서, DoR은 반응의 제1 기록으로부터 진행성 질환 또는 사망의 제1 기록까지의 시간이다. 일 구현예에서, DoR은 반응 ≥ 부분 반응 (PR)의 제1 기록으로부터 진행성 질환 또는 사망의 제1 기록까지의 시간이다. 일 구현예에서, TTR (time to response)은 화합물의 제1 용량으로부터 반응의 제1 기록까지의 시간을 의미한다. 일 구현예에서, TTR은 화합물의 제1 용량으로부터 반응 ≥ 부분 반응 (PR)의 제1 기록까지의 시간을 의미한다. 극단적으로, 완전한 억제는 본원에서 예방 또는 화학예방으로 지칭된다. 이와 관련하여, 용어 "예방"은 임상적으로 명백한 암의 발병을 완전히 예방하거나 암의 전임상적으로 명백한 단계의 발병을 예방하는 것을 포함한다. 또한 이 정의에 포함되는 것으로 의도되는 것은 악성 세포로의 형질전환의 예방 또는 악성 세포로의 전악성 세포의 진행을 정지 또는 역전시키는 것이다. 여기에는 암 발병 위험이 있는 사람들의 예방적 치료를 포함한다.
특정 구현예에서, 다발성 골수종의 치료는 다발성 골수종에 대한 국제 통일 반응 기준 (IURC)에 의해 평가될 수 있는데 (참고 Durie BGM, Harousseau J-L, Miguel JS, et al. International uniform response criteria for multiple myeloma. Leukemia , 2006; (10) 10:1-7), 상기 평가는 아래 나타낸 반응 및 포인트 정의를 사용한다:
본원에 사용된 바와 같이, ECOG 상태는 ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group) 성능 상태를 지칭하며 (참조: Oken M, et al Toxicity and response criteria of the Eastern Cooperative Oncology Group.Am J Clin Oncol 1982;5(6):649-655), 이는 아래에 나타낸 바와 같다:
달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "약"은 용어에 의해 변형된 위 또는 아래 10% 이하인 값을 지칭한다. 예를 들어, 용어 "약 10 mg/m2"는 9 mg/m2 내지 11 mg/m2의 범위를 의미한다.
C. 화합물
본원에 제공되는 것은 "화합물 1"로 지칭되는 화합물 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴:
1
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 조성물 및 방법에 사용하기 위한 화합물은 화합물 1, 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.
또한 본원에 제공되는 것은 "화합물 2"로 지칭되는 화합물 (S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴:
2
또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 조성물 및 방법에 사용하기 위한 화합물은 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.
또한 본원에 제공되는 것은 "화합물 3"으로 지칭되는 화합물 (R)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴:
3
또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 조성물 및 방법에 사용하기 위한 화합물은 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.
본원에는 화합물 1이 제공된다. 본원에는 화합물 1의 호변이성체가 제공된다. 본원에는 화합물 1의 거울상이성체가 제공된다. 본원에는 화합물 1의 거울상이성체의 혼합물이 제공된다. 본원에는 화합물 1의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
본원에는 화합물 2가 제공된다본원에는 화합물 2의 호변이성체가 제공된다. 본원에는 화합물 2의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
본원에는 화합물 3이 제공된다. 본원에는 화합물 3의 호변이성체가 제공된다. 본원에는 화합물 3의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
또한 본원에는 본원에 제공된 화합물의 동위원소적으로 농축된 유사체가 제공된다. 약동학 ("PK"), 약력학 ("PD"), 및 독성 프로파일을 개선하기 위한 의약품의 동위원소 농축 (예를 들어, 중수소화 또는 중수소 농축)은 일부 부류의 약물에서 이미 입증되었다. 참고, 예를 들어, Lijinsky et. al., Food Cosmet.Toxicol., 20:393 (1982); Lijinsky et. al., J. Nat. Cancer Inst., 69:1127 (1982); Mangold et. al., Mutation Res.308:33 (1994); Gordon et. al., Drug Metab.Dispos., 15:589 (1987); Zello et. al., Metabolism , 43:487 (1994); Gately et. al., J. Nucl.Med., 27:388 (1986); Wade D, Chem.Biol. Interact.117:191 (1999). 임의의 특정 이론에 제한되지 않으면서, 화합물의 동위원소 농축은, 예를 들어, (1) 원치 않는 대사물을 감소시키거나 제거하기 위해 및/또는 (2) 모 약물의 반감기를 증가시키기 위해 및/또는 (3) 원하는 효과를 달성하기 위해 필요한 용량의 수를 감소시키기 위해 및/또는 (4) 원하는 효과를 달성하기 위해 필요한 용량의 양을 감소시키기 위해 및/또는 (5) 임의로 형성되는 경우, 활성 대사물의 형성을 증가시키기 위해 및/또는 (6) 특이적 조직에서 유해한 대사물의 생산을 감소시키고/시키거나 조합 치료요법이 의도적이든 아니든, 조합 치료요법을 위한 더 효과적인 약물 및/또는 더 안전한 약물을 생성하기 위해 사용될 수 있다. 동위원소 중 하나에 대한 원자의 대체는 종종 화학 반응의 반응 속도의 변경을 초래할 것이다. 이 현상은 동역학 동위원소 효과 ("KIE")로서 공지되어 있다. 예를 들어, C-H 결합이 화학 반응에서 속도-결정 단계 (즉 최고 전이 상태 에너지를 갖는 단계) 동안 끊어지면, 이 수소를 중수소로 치환하면 반응 속도의 감소를 야기할 것이며 공정을 느려질 것이다. 이 현상은 중수소 동역학 동위원소 효과 ("DKIE")로 공지되어 있다. (참고, 예를 들어, Foster et al., Adv.Drug Res., vol. 14, pp. 1-36 (1985); Kushner et al., Can.J. Physiol. Pharmacol., vol. 77, pp. 79-88 (1999)). DKIE의 크기는 C-H 결합이 끓어진 주어진 반응의 속도와 중수소가 수소로 치환된 동일한 반응의 속도 사이의 비로 표현될 수 있다. DKIE는 약 1 (동위원소 효과 없음) 내지 매우 큰 수, 예컨대 50 이상의 범위일 수 있으며, 이는 중수소가 수소로 치환될 때 반응이 50배 이상 느릴 수 있음을 의미한다. 특정 이론에 제한되지 않으면서, 높은 DKIE 값은 부분적으로 터널링으로 알려진 현상으로 인한 것일 수 있으며, 이는 불확실성 원리의 결과이다. 터널링은 작은 질량의 수소 원자에 기인하며, 필요한 활성화 에너지의 부재시 양성자와 관련된 전이 상태가 종종 형성될 수 있기 때문에 발생한다. 중수소가 수소보다 질량이 크기 때문에, 통계적으로 이 현상을 겪을 확률이 훨씬 더 낮다.
삼중수소 ("T")는 연구, 핵융합로, 중성자 발생기 및 방사선 의약품에 사용되는 수소의 방사성 동위원소이다. 삼중수소는 핵에 2개의 중성자를 갖고 3에 가까운 원자량을 갖는 수소 원자이다. 그것은 매우 낮은 농도의 환경에서 자연적으로 발생하며, 가장 통상적으로 T2O으로 발견된다. 삼중수소는 천천히 붕괴하고 (반감기 = 12.3년), 인간 피부의 외층을 관통할 수 없는 낮은 에너지 베타 입자를 방출한다. 내부 노출은 이 동위원소와 연관된 주요 위험이지만, 상당한 건강 위험을 초래하기 위해 다량으로 섭취되어야 한다. 중수소와 비교하여, 위험한 수준에 도달하기 전에 더 적은 양의 삼중수소가 소비되어야 한다. 수소에 대한 삼중수소 ("T")의 치환은 중수소보다 더 강한 결합을 초래하며, 수치적으로 더 큰 동위원소 효과를 제공한다.
유사하게, 탄소의 경우 13C 또는 14C, 황의 경우 33S, 34S, 또는 36S, 질소의 경우 15N, 및 산소의 경우 17O 또는 18O를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 원소에 대한 동위원소의 치환은은 유사한 동역학 동위원소 효과를 제공할 것이다.
동물 신체는 그의 순환 시스템으로부터 치료제와 같은 이물질을 제거하기 위해 다양한 효소를 발현한다. 그러한 효소의 예는 신장 배설을 위해 이들 이물질과 반응하여 더 많은 극성 중간체 또는 대상물로 전환시키기 위한 사이토크롬 P450 효소 ("CYP"), 에스테라제, 프로테아제, 리덕타제, 데하이드로게나제, 및 모노아민 옥시다제를 포함한다. 약제학적 화합물의 가장 일반적인 대사 반응의 일부는 탄소-수소 (C-H) 결합을 탄소-산소 (C-O) 또는 탄소-탄소 (C-C) pi-결합으로 산화시키는 것을 포함한다. 생성된 대사물은 생리학적 조건하에 안정하거나 불안정할 수 있으며, 모 화합물과 비교하여 실질적으로 상이한 약동학적, 약력학적, 및 급성 및 장기간 독성 프로파일을 가질 수 있다. 많은 약물의 경우, 그러한 산화는 신속하다. 그 결과, 이들 약물은 종종 다중 또는 높은 일일 용량을 투여해야 한다.
본원에 제공된 화합물의 특정 위치에서 동위원소 농축은 천연 동위원소 조성물을 갖는 유사한 화합물과 비교하여 본원에 제공된 화합물의 약동학적, 약리학적 및/또는 독성학적 프로파일에 영향을 미치는 검출 가능한 KIE를 생성할 수 있다. 일 구현예에서, 중수소 농축은 대사 동안 C-H 결합 절단 부위에서 수행된다.
일 구현예에서, 본원에는 화합물 1의 동위이성체, 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 1의 동위이성체는 중수소 농축 화합물 1, 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다. 일부 구현예에서, 화합물 1의 동위이성체는 중수소 농축 화합물 1, 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이며, 여기서 중수소 농축은 키랄 중심에서 발생한다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 화합물 2의 동위이성체, 또는 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 2의 동위이성체는 중수소 농축 화합물 2, 또는 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다. 일부 구현예에서, 화합물 2의 동위이성체는 중수소 농축 화합물 2, 또는 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이며, 여기서 중수소 농축은 키랄 중심에서 발생한다.
특정 구현예에서, 본원에는 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴의 동위이성체, 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공되며, 여기서 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 분자의 하나 이상의 원자 위치는, 예를 들어, 중수소로 동위원소적으로 농축되어 있다. 본원의 특정 구현예는 하기 식의 화합물을 제공한다:
여기서 하나 이상의 Y 원자 (즉, Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7, Y8, Y9, Y10, Y11, Y12, Y13, Y14, Y15, Y16, Y17, Y18, Y19, Y20, Y21, Y22, Y23, Y24, Y25, Y26, Y27, Y28, Y29, 및 Y30)는 중수소로 동위원소적으로 농축된 수소(들)이며, 임의의 나머지 Y 원자(들)은 비-농축된 수소 원자(들)이다.
일 구현예에서, 화합물은 하기 식이다:
.
일 구현예에서, 화합물은 하기 식이다:
.
특정 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 21, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 모든 표시된 Y 원자는 중수소로 동위원소적으로 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자(들)는 비-농축된 수소(들)이다. 일 구현예에서, 표시된 Y 원자 중 하나는 중수소로 동위원소적으로 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y5는 중수소로 농축되어 있다.
특정 구현예에서, 화합물의 글루타르이미드 부분 (Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, 및 Y27) 상의 하나 이상의 Y 원자는 중수소-농축되어 있다. 특정 구현예에서, 화합물의 이소인돌리논 부분 (Y6, Y7, Y8, Y9, 및 Y10) 상의 하나 이상의 Y 원자는 중수소-농축되어 있다. 특정 구현예에서, 화합물의 페닐 알킬 부분 (Y11, Y12, Y13, Y14, Y15, Y16, Y17, 및 Y18) 상의 하나 이상의 Y 원자는 중수소-농축되어 있다. 특정 구현예에서, 화합물의 피페라진 부분 (Y19, Y20, Y21, Y22, Y23, Y24, Y25, 및 Y26) 상의 하나 이상의 Y 원자는 중수소-농축되어 있다. 특정 구현예에서, 화합물의 페닐 고리 부분 (Y28, Y29, 및 Y30) 상의 하나 이상의 Y 원자는 중수소- 농축되어 있다. 본원에 제공된 화합물은 본원에 개시된 바와 같이 중수소 농축의 임의의 조합일 수 있다. 즉, 중수소-농축된 글루타르이미드 부분, 중수소-농축된 이소인돌린 부분, 중수소-농축된 페닐 알킬 부분, 중수소-농축된 피페라진 부분, 및 중수소-농축된 원거리 페닐 고리 부분의 임의의 조합이 본원에 포함된다.
일 구현예에서, Y1 및 Y2는 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y3 및 Y4는 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y5는 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y1 내지 Y5는 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y3 내지 Y5는 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y6 및 Y7은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y8 내지 Y10은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y11 및 Y12는 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y13 내지 Y16은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y17 및 Y18은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y11 내지 Y18은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y19 내지 Y26은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y27은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다. 일 구현예에서, Y28 내지 Y30은 중수소가 농축되어 있으며, 임의의 나머지 Y 원자는 비-농축된 수소이다.
일 구현예에서, 화합물 1의 동위이성체는 화합물 1-D이다:
(1-D).
또 다른 구현예에서, 화합물 1의 동위이성체는 하기의 혼합물이다:
.
또 다른 구현예에서, 화합물 2의 동위이성체는 화합물 2-D이다:
(2-D).
또 다른 구현예에서, 화합물 3의 동위이성체는 화합물 3-D이다:
(3-D).
특정 구현예에서, 임의의 중수소 농축된 위치는 독립적으로 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 약 100%의 중수소가 풍부하다. 일 구현예에서, Y5는 중수소가 농축되어 있으며, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 약 100%의 중수소가 풍부하다.
일 구현예에서, 화합물 1-D에서 D (키랄 중심에서)는 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 약 100%의 중수소가 풍부하다. 일 구현예에서, D는 적어도 90%의 중수소가 풍부하다.
일 구현예에서, 화합물 2-D에서 D (키랄 중심에서)는 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 약 100%의 중수소가 풍부하다. 일 구현예에서, D는 적어도 90%의 중수소가 풍부하다.
일 구현예에서, 화합물 3-D에서 D (키랄 중심에서)는 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 약 100%의 중수소가 풍부하다. 일 구현예에서, D는 적어도 90%의 중수소가 풍부하다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 중수소 농축된 화합물은 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 거울상이성체 과량을 갖는다. 입체이성체 순도의 추가의 예는 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99%의 거울상이성체 과량을 포함한다.
일 구현예에서, 화합물 2-D는 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 거울상이성체 과량을 갖는다. 일 구현예에서, 화합물 2-D는 적어도 90%의 거울상이성체 과량을 갖는다.
일 구현예에서, 화합물 3-D는 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 거울상이성체 과량을 갖는다. 일 구현예에서, 화합물 3-D는 적어도 90%의 거울상이성체 과량을 갖는다.
중수소 풍부한 본원에 제공된 화합물은 본원에 제공된 합성식 및 실시예 따라 그러나 상응하는 중수소 농축된 출발 물질(들)을 사용하여 제조될 수 있다. 본원에 제공된 중수소 농축된 화합물은 또한, 이들의 전문이 본원에 참조로 포함된 WO 2014/039421 및 WO 2014/116573에 기술된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 중수소-농축된 이소인돌리논 및 글루타르이미드 화합물을 제조하기 위해 당해 분야의 숙련가에게 공지된 일반적인 화학에 따라 제조될 수 있다.
D. 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3의 제조
본원에 제공된 화합물은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 및 본원의 실시예 섹션에 기재될 것과 유사한 후속 절차 및 이의 일상적인 변형에 의해 제조될 수 있다. 화합물의 제조를 위한 예시적인 반응식은 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3에 대해 반응식 1로, 그리고 화합물 2에 대해 반응식 2로 하기에 예시되어 있다.
반응식 1에 나타낸 바와 같이, 3-하이드록시-2-메틸벤조산의 보호 (예를 들어, 메틸 에스테르 및 tert-부틸(디메틸)실릴에테르 형성에 의해)에 이어서, 예를 들어, N-브로모석신이미드 및 아조비스이소부티로니트릴을 사용하여 브롬화를 수행하였다. 염기 (예컨대, DIEA)의 존재하에 메틸-4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트 (H-D,L-Glu(OMe)-NH2로도 지칭됨)와의 반응은, 유도체화된 이소인돌린 형성을 초래한 후, 염기, 예컨대 탄산칼륨을 사용하여 TBS 탈보호를 수행하였다. 염기 (예컨대, 탄산칼륨)의 존재하에 유도체화된 이소인돌린과 1,4-비스(브로모메틸)벤젠의 반응에 이어서, 칼륨 tert-부톡사이드의 존재하에 글루타르이미드가 형성되었다. 마지막으로, 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴과의 반응은 표적 화합물 1을 제공하였다. 키랄 분리는 화합물 2 및 화합물 3을 제공한다.
반응식 1
대안적으로 반응식 2에 예시된 바와 같이, 염기 (예컨대, DIEA)의 존재하에 메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-벤조에이트 중간체와 키랄 tert-부틸 (4S)-4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트 (H-L-Glu(OtBu)-NH2로도 지칭됨; H-D-Glu(OtBu)-NH2와의 반응은 반대편 거울상이성체를 제공함)의 반응은 유도체화된 이소인돌린 형성을 초래하였으며, 이어서 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 사용하여 TBS 탈보호를 수행하였다. 염기 (예컨대, 탄산칼륨)의 존재하에 유도체화된 이소인돌린과 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴, 또는 이의 염의 반응에 이어서 탈보호 및 글루타르이미드 형성에 의해 표적 화합물 2를 제공하였다.
반응식 2.
당해 분야의 숙련가는 예시적 반응식 및 실시예에서 설명된 절차를 수정하여 원하는 생성물에 도달하는 방법을 알고 있을 것이다.
일 양태에서, 본원에 제공된 것은 하기를 제조하기 위한 방법으로: 화합물 1,
1,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체, 상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1a
1a,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체와 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 1 (여기서, X는 이탈기이다)을 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하기 위한 방법으로: 화합물 1, 예를 들어, 하기 화합물 2의 거울상이성체,
2,
상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1a, 예를 들어 하기 화합물 2a의 거울상이성체와
2a
3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 2 (여기서, X는 이탈기이다)를 제공하기에 적합한 조건 하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, X는 할로겐, 예를 들어 Br 또는 Cl이다. 또 다른 구현예에서, X는 메탄설포네이트 (-OMs로도 지칭됨). 일 구현예에서, 용매는 아세토니트릴, THF, 또는 DMSO이다. 또 다른 구현예에서, 염기는 DIEA 또는 TEA이다. 일부 구현예에서, 접촉은 고온에서, 예를 들어, 약 35℃ 내지 약 50℃에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하는 단계를 추가로 포함하는 것으로: 화합물 1a,
1a,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체, 상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1b
1b,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체와 칼륨 tert-부톡사이드를 유기 용매 중에서 화합물 1a를 제공하기에 적합한 조건 하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 상기 방법은 화합물 1a, 예를 들어, 하기 화합물 2a의 거울상이성체를 제조하는 방법이다:
2a,
상기 방법은 화합물 1b, 예를 들어 하기 화합물 2b의 거울상이성체와 접촉시킴을 포함한다:
2b
칼륨 tert-부톡사이드를 유기 용매 중에서 화합물 2a를 제공하기에 적합한 조건 하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, X는 Br이다. 일 구현예에서, 용매는 THF이다. 일부 구현예에서, 접촉은 감소된 온도, 예를 들어, 약 -70℃ 내지 약 -80℃에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하는 단계를 추가로 포함하는 것으로: 화합물 1b,
1b,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체, 상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1c
1c,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체와
,
유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 1b를 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하는 방법으로: 화합물 1b, 예를 들어, 화합물 2b의 거울상이성체,
2b,
상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1c, 예를 들어 화합물 2c의 거울상이성체와
2c
를
,
유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 1b를 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, X는 Br이다. 일 구현예에서, 용매는 아세토니트릴이다. 일부 구현예에서, 염기는 탄산칼륨이다. 일부 구현예에서, 접촉은 고온에서, 예를 들어, 약 50℃ 내지 약 70℃에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하는 단계를 추가로 포함한다: 화합물 1c,
1c,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체, 상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1d
1d,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체와, 염기를용매 중에서 화합물 1c를 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 상기 방법은 화합물 1c, 예를 들어, 하기 화합물 2c의 거울상이성체의 제조 방법으로,
2c,
상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1d, 예를 들어 화합물 2d의 거울상이성체와
2d
염기를 용매 중에서 화합물 2c를 제공하기에 적합한 조건 하에 접촉시킨다. 일 구현예에서, 용매는 물이다. 일부 구현예에서, 염기는 탄산칼륨이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하는 단계를 추가로 포함하는 것으로: 화합물 1d,
1d,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체, 상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1e
1e,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체와 메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시-벤조에이트를 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 1d를 제공하기에 적합한 조건 하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하기 위한 방법으로: 화합물 1d, 예를 들어, 화합물 2d의 거울상이성체,
2d,
상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1e, 예를 들어 화합물 2e의 거울상이성체와
2e
메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시-벤조에이트를 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 2d를 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 용매는 아세토니트릴이다. 일부 구현예에서, 염기는 DIEA이다. 일부 다른 구현예에서, 접촉은 고온에서, 예를 들어, 약 50℃ 내지 약 70℃에서 수행된다.
또 다른 양태에서, 본원에 제공된 것은 하기를 제조하기 위한 방법으로: 화합물 1,
1,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체, 상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1f
1f,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체와 산을 유기 용매 중에서 화합물 1을 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하기 위한 방법으로: 화합물 1, 예를 들어, 화합물 2의 거울상이성체,
2,
상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1f, 예를 들어 화합물 2f의 거울상이성체와
2f
산을 유기 용매 중에서 화합물 2를 제공하기에 적합한 조건 하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 용매는 아세토니트릴이다. 또 다른 구현예에서, 산은 벤젠 설폰산이다. 일부 구현예에서, 접촉은 고온에서, 예를 들어, 약 75℃ 내지 약 95℃에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하는 단계를 추가로 포함하는 것으로: 화합물 1f,
1f,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체, 상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1g
1g,
또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 동위이성체와 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴, 또는 이의 염을 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 1f를 제공하기에 적합한 조건 하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 상기 방법은 하기를 제조하기 위한 방법으로: 화합물 1f, 예를 들어, 화합물 2f의 거울상이성체,
2f,
상기 방법은 하기와 같이 접촉시킴을 포함한다: 화합물 1g, 예를 들어 화합물 2g의 거울상이성체와
2g
4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴, 또는 이의 염을 용매 중에서 염기의 존재 하에 화합물 2f를 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시킨다.
일 구현예에서, 용매는 DMF이다. 일 구현예에서, 용매는 DMSO이다. 또 다른 구현예에서, 염기는 탄산칼륨이다. 일부 구현예에서, 접촉은 고온에서, 예를 들어, 약 35℃ 내지 약 55℃에서 수행된다.
일부 구현예에서, 화합물 1f를 제조하기 위한 방법은 정제 방법을 추가로 포함하며, 상기 정제 방법은 (i) 화합물 1f (유리 염기)를 제1 용매 중에서 산과 접촉시키는 단계; (ii) 여과하여 화합물 1f의 산성 염을 제공하는 단계; 및 (iii) 상기 화합물 1f의 산성 염을 제2 용매 중에서 염기로 세척하여 화합물 1f (유리 염기)를 제공하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 산은 타르타르산 (예를 들어, L-타르타르산)이다. 일 구현예에서, 제1 용매는 메탄올이다. 일 구현예에서, 화합물 1f의 산 염은 화합물 1f의 타르트레이트 염 (예를 들어, L-타르타르산성 염)이다. 일 구현예에서, 제2 용매는 2-메틸테트라하이드로푸란이다. 일 구현예에서, 염기는 탄산칼륨이다.
일부 구현예에서, 화합물 1f, 예를 들어, 화합물 2f의 거울상이성체를 제조하기 위한 방법은 정제 방법을 추가로 포함하며, 상기 정제 방법은 (i) 화합물 2f (유리 염기)를 제1 용매 중에서 산과 접촉시키는 단계; (ii) 여과하여 상기 화합물 2f의 산성 염을 제공하는 단계; 및 (iii) 상기 화합물 2f의 산성 염을 제2 용매 중에서 염기로 세척하여 화합물 2f (유리 염기)를 제공하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 산은 타르타르산 (예를 들어, L-타르타르산)이다. 일 구현예에서, 제1 용매는 메탄올이다. 일 구현예에서, 화합물 2f의 산 염은 화합물 2f의 타르트레이트 염 (예를 들어, L-타르타르산성 염)이다. 일 구현예에서, 제2 용매는 2-메틸테트라하이드로푸란이다. 일 구현예에서, 염기는 탄산칼륨이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴, 또는 이의 염을 제조하는 것을 추가로 포함하며, 상기 방법은 4-(클로로메틸)벤즈알데하이드와 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴을 용매 중에서 환원제의 존재하에 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴을 제공하기에 적합한 조건하에 접촉시키는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 환원제는 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (NaBH(OAc)4)이다. 일 구현예에서, 용매는 톨루엔이다. 일 구현예에서, 접촉은 산의 존재 하에 수행된다. 일 구현예에서, 산은 아세트산이다.
일 구현예에서, 본원에 제공된 방법으로 제조되고 사용된 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴, 또는 이의 염은 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴의 HCl 염이다. 일 구현예에서, HCl 염은 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 유리 염기를 이소프로판올 중에서 염산과 접촉시킴으로써 제조된다.
E. 치료 및 예방 방법
놀랍게도, 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3은 정상 세포와 비교하여 다발성 골수종 세포의 선택적 세포 사멸, 표적 외 수용체에서의 감소된 활성, 및 감소된 CYP 효소 억제를 포함하여 개선된 안정성 프로파일과 같은 구별되는 특성을 갖는 매우 강력한 항-골수종 화합물로, 불리한 약물 상호작용에 대한 잠재력을 감소시키는 것으로 밝혀졌다,
일 구현예에서, 본원에는 화합물 1, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하여 다발성 골수종을 치료하는 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 본원에는 다발성 골수종을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 화합물 1, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공되며, 상기 방법은 상기 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본원에는 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하여 다발성 골수종을 치료하는 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 본원에는 다발성 골수종을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공되며, 상기 방법은 상기 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본원에는 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여함을 포함하여 다발성 골수종을 치료하는 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 본원에는 다발성 골수종을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공되며, 상기 방법은 상기 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본원에는 본원에 제공된 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하여 다발성 골수종을 예방하는 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 본원에는 다발성 골수종을 예방하는 방법에 사용하기 위한, 본원에 제공된 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공되며, 상기 방법은 상기 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 제공된 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하여 다발성 골수종을 관리하는 방법에 제공된다. 일 구현예에서, 본원에는 다발성 골수종을 관리하는 방법에 사용하기 위한, 본원에 제공된 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공되며, 상기 방법은 상기 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 또한 본원에는 환자의 다발성 골수종에 대한 국제 균일 반응 기준 (IURC)으로 평가된 치료적 반응을 유도하기 위한 방법이 제공되며 (참고 Durie BGM, Harousseau J-L, Miguel JS, et al. International uniform response criteria for multiple myeloma. Leukemia , 2006; (10) 10:1-7), 상기 방법은 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을, 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 다발성 골수종에 대한 국제 균일 반응 기준 (IURC)에 의해 결정된 바와 같이 엄격한 완전한 반응, 완전한 반응, 또는 매우 양호한 부분 반응을 달성하기 위한 방법이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 전체 생존, 무진행 생존, 무사건 생존, 진행 시간, 또는 무병 생존의 증가를 달성하기 위한 방법이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 전체 생존의 증가를 달성하기 위한 방법이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 무진행 생존의 증가를 달성하기 위한 방법이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 무사건 생존의 증가를 달성하기 위한 방법이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 진행 시간의 증가를 달성하기 위한 방법이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 본원에는 본원에 기재된 유효량의 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 환자에서 무병 생존의 증가를 달성하기 위한 방법이 제공된다.
또한 본원에는 다발성 골수종에 대해 이전에 치료를 받았지만 표준 치료요법에 반응하지 않은 환자뿐만 아니라 이전에 치료받지 않은 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 다발성 골수종을 치료하기 위해 수술을 받은 환자뿐만 아니라 그렇지 않은 환자를 치료하는 방법이 추가로 포함한다. 또한 본원에는 이전에 이식 요법을 받은 환자뿐만 아니라 그렇지 않은 환자를 치료하는 방법이 제공된다.
본원에 제공된 방법은 재발성, 불응성 또는 저항성인 다발성 골수종의 치료를 포함한다. 본원에 제공된 방법은 재발성, 불응성 또는 저항성인 다발성 골수종의 예방을 포함한다. 본원에 제공된 방법은 재발성, 불응성 또는 저항성인 다발성 골수종의 관리를 포함한다. 일부 그러한 구현예에서, 골수종은 1차, 2차, 3차, 4차 또는 5차 재발한 다발성 골수종이다. 일 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 최소 잔존 질환 (MRD)을 감소, 유지 또는 제거한다. 일 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 치료학적 유효량의 본원에 기재된 화합물을 투여함으로써 다양한 유형의 다발성 골수종, 예컨대 의미 불명 단클론성 감마글로불린병증 (MGUS), 저 위험, 중간 위험, 및 고 위험 다발성 골수종, 새로 진단된 다발성 골수종 (저 위험, 중간 위험, 및 고 위험으로 새로 진단된 다발성 골수종을 포함함), 이식 적격 및 이식 부적격 다발성 골수종, 무증상 (무통증) 다발성 골수종 (저 위험, 중간 위험, 및 고 위험 무증상 다발성 골수종을 포함함), 활성 다발성 골수종, 고립성 형질세포종, 골수외 형질세포종, 형질 세포 백혈병, 중추신경계 다발성 골수종, 경쇄 골수종, 비-분비성 골수종, 면역글로불린 D 골수종, 및 면역글로불린 E 골수종의 치료, 예방 또는 관리를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 치료학적 유효량의 본원에 기재된 화합물을 투여함으로써 유전적 비정상, 예컨대 사이클린 D 전좌 (예를 들어, t(11;14)(q13;q32); t(6;14)(p21;32); t(12;14)(p13;q32); 또는 t(6;20);); MMSET 전좌 (예를 들어, t(4;14)(p16;q32)); MAF 전좌 (예를 들어, t(14;16)(q32;q32); t(20;22); t(16;22)(q11;q13); 또는 t(14;20)(q32;q11)); 또는 다른 염색체 인자 (예를 들어, 17p13의 결실, 또는 염색체 13; del(17/17p), 비고이배성, 및 이득(1q))를 특징으로 하는 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관리를 포함한다.
일 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 공고 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 공고 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 공고 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유지 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유지 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유지 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다.
본원에 기재된 방법의 하나의 특정 구현예에서, 다발성 골수종은 형질 세포 백혈병이다.
본원에 기재된 방법의 일 구현예에서, 다발성 골수종은 고 위험 다발성 골수종이다. 일부 그러한 구현예에서, 고 위험 다발성 골수종은 재발성 또는 불응성이다. 일 구현예에서, 고 위험 다발성 골수종은 첫 치료 12개월 이내에 재발된 다발성 골수종이다. 또 다른 구현예에서, 고 위험 다발성 골수종은 유전적 비정상, 예를 들어, del(17/17p) 및 t(14;16)(q32;q32) 중 하나 이상을 특징으로 하는 다발성 골수종이다. 일부 그러한 구현예에서, 고 위험 다발성 골수종은 1, 2 또는 3회의 이전 치료에 대해 재발성 또는 불응성이다.
일 구현예에서, 다발성 골수종은 p53 돌연변이를 특징으로 한다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 Q331 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 R273H 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 K132 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 K132N 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 R337 돌연변이이다. 알 구현예에서, p53 돌연변이는 R337L 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 W146 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 S261 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 S261T 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 E286 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 E286K 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 R175 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 R175H 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 E258 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 E258K 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 A161 돌연변이이다. 일 구현예에서, p53 돌연변이는 A161T 돌연변이이다.
일 구현예에서, 다발성 골수종은 p53의 동종접합성 결실을 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 야생형 p53의 동종접합성 결실을 특징으로 한다.
일 구현예에서, 다발성 골수종은 야생형 p53을 특징으로 한다.
일 구현예에서, 다발성 골수종은 하나 이상의 종양발생 드라이버의 활성화를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 하나 이상의 종양발생 드라이버는 C-MAF, MAFB, FGFR3, MMset, 사이클린 D1, 및 사이클린 D로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 C-MAF의 활성화를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 MAFB의 활성화를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 FGFR3 및 MMset의 활성화를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 C-MAF, FGFR3, 및 MMset의 활성화를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 사이클린 D1의 활성화를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 MAFB 및 사이클린 D1의 활성화를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 사이클린 D의 활성화를 특징으로 한다.
일 구현예에서, 다발성 골수종은 하나 이상의 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(14;16)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(14;20)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(4;14)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(4;14) 및 t(14;16)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(11;14)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(6;20)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(20;22)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(6;20) 및 t(20;22)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(16;22)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(14;16) 및 t(16;22)이다. 일 구현예에서, 염색체 전좌는 t(14;20) 및 t(11;14)이다.
일 구현예에서, 다발성 골수종은 Q331 p53 돌연변이, C-MAF의 활성화, 및 t(14;16)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 p53의 동종접합성 결실, C-MAF의 활성화, 및 t(14;16)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 K132N p53 돌연변이, MAFB의 활성화, 및 t(14;20)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 야생형 p53, FGFR3 및 MMset의 활성화, 및 t(4;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 야생형 p53, C-MAF의 활성화, 및 t(14;16)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 p53의 동종접합성 결실, FGFR3, MMset, 및 C-MAF의 활성화, 및 t(4;14) 및 t(14;16)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 p53의 동종접합성 결실, 사이클린 D1의 활성화, 및 t(11;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 R337L p53 돌연변이, 사이클린 D1의 활성화, 및 t(11;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 W146 p53 돌연변이, FGFR3 및 MMset의 활성화, 및 t(4;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 S261T p53 돌연변이, MAFB의 활성화, 및 t(6;20) 및 t(20;22)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 E286K p53 돌연변이, FGFR3 및 MMset의 활성화, 및 t(4;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 R175H p53 돌연변이, FGFR3 및 MMset의 활성화, 및 t(4;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 E258K p53 돌연변이, C-MAF의 활성화, 및 t(14;16) 및 t(16;22)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 야생형 p53, MAFB 및 사이클린 D1의 활성화, 및 t(14;20) 및 t(11;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다. 일 구현예에서, 다발성 골수종은 A161T p53 돌연변이, 사이클린 D의 활성화, 및 t(11;14)에서 염색체 전좌를 특징으로 한다.
본원에 기재된 방법의 일부 구현예에서, 다발성 골수종은 이식 적격의 새로 진단된 다발성 골수종이다. 또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은 이식 부적격의 새로 진단된 다발성 골수종이다.
또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은 초기 치료 후 초기 진행 (예를 들어, 12개월 미만)을 특징으로 한다. 또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은 자가 줄기 세포 이식 후 초기 진행 (예를 들어, 12개월 미만)을 특징으로 한다. 또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은 레날리도마이드에 불응성이다. 또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은 포말리도마이드에 불응성이다. 일부 그러한 구현예에서, 다발성 골수종은 (예를 들어, 분자 특성규명에 의해) 포말리도마이드에 불응성이 되는 것으로 예측된다. 또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은 3회 이상의 치료에 대해 재발성 또는 불응성이며, 프로테아솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, 익사조밉, 오프로조밉, 또는 마리조밉) 및 면역조절 화합물 (예를 들어, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 이버도마이드, 또는 아바도마이드)에 노출되거나, 프로테아솜 억제제 및 면역조절 화합물에 이중 불응성이다. 또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은, 예를 들어, CD38 단클론 항체 (CD38 mAb, 예를 들어, 다라투무맙 또는 이사툭시맙), 프로테아솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, 익사조밉, 또는 마리조밉), 및 면역조절 화합물 (예를 들어 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 이버도마이드, 또는 아바도마이드)을 포함하는 3개 이상의 사전 치료요법으로 재발성 또는 불응성이거나, 프로테아솜 억제제 또는 면역조절 화합물 및 CD38 mAb에 이중 불응성이다. 또 다른 구현예에서, 다발성 골수종은 삼중 불응성인데, 예를 들어, 다발성 골수종은 프로테아솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, 익사조밉, 오프로조밉 또는 마리조밉), 면역조절 화합물 (예를 들어 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 이버도마이드, 또는 아바도마이드), 및 본원에 기재된 하나의 다른 활성제에 불응성이다.
일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 투여하는 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 신장 기능이 손상된 재발성/불응성 다발성 골수종을 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 손상된 신장 기능 또는 이의 증상이 있는 환자에서 재발성/불응성 다발성 골수종을 포함하는 다발성 골수종의 치료, 예방 및/또는 관리 방법이 제공된다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다발성 골수종을 갖는 허약한 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 허약한 환자에서의 재발성 또는 불응성 다발성 골수종 또는 이의 증상을 포함하는 다발성 골수종의 치료, 예방 및/또는 관리 방법이 제공된다. 일부 그러한 구현예에서, 허약한 환자는 유도 치료요법에 부적격, 또는 덱사메타손 치료에 불내성을 특징으로 한다. 일부 그러한 구현예에서, 허약한 환자는 노인, 예를 들어, 65세 이상이다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법에 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 4차 재발성/불응성 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관리 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 4차 재발성/불응성 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관리 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 4차 재발성/불응성 다발성 골수종이다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관리 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 유도 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다른 치료요법 또는 이식 후 유지 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 다른 치료요법 또는 이식 전에 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다른 치료요법 또는 이식 후 유지 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 다른 치료요법 또는 이식 전에 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다른 치료요법 또는 이식 후 유지 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 다른 치료요법 또는 이식 전에 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다른 치료요법 또는 이식 후 유지 치료요법으로서 환자에게 투여되는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종은 다른 치료요법 및/또는 이식 전에 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 이식 전의 다른 치료요법은 화학요법 또는 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3으로의 치료이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다른 치료요법 또는 이식 후 유지 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관리 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종은 다른 치료요법 및/또는 이식 전에 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 이식 전의 다른 치료요법은 화학요법 또는 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3으로의 치료이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다른 치료요법 또는 이식 후 유지 치료요법으로서 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관리 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종은 다른 치료요법 및/또는 이식 전에 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 이식 전의 다른 치료요법은 화학요법 또는 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3으로의 치료이다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 고 위험 다발성 골수종으로, 1, 2 또는 3회의 이전 치료에 재발성 또는 불응성이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 고 위험 다발성 골수종으로, 1, 2 또는 3회의 이전 치료에 재발성 또는 불응성이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 고 위험 다발성 골수종으로, 1, 2 또는 3회의 이전 치료에 재발성 또는 불응성이다.
특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 새로 진단된, 이식-부적격의 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 2, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 새로 진단된, 이식-부적격의 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 본원에는 치료학적 유효량의 화합물 3, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관린 방법이 제공되며, 여기서, 다발성 골수종은 새로 진단된, 이식-부적격의 다발성 골수종이다.
특정 구현예에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량의 화합물은 약 0.01 내지 약 25 mg/일, 약 0.01 내지 약 10 mg/일, 약 0.01 내지 약 5 mg/일, 약 0.01 내지 약 2 mg/일, 약 0.01 내지 약 1 mg/일, 약 0.01 내지 약 0.5 mg/일, 약 0.01 내지 약 0.25 mg/일, 약 0.1 내지 약 25 mg/일, 약 0.1 내지 약 10 mg/일, 약 0.1 내지 약 5 mg/일, 약 0.1 내지 약 2 mg/일, 약 0.1 내지 약 1 mg/일, 약 0.1 내지 약 0.5 mg/일, 약 0.1 내지 약 0.25 mg/일, 약 0.5 내지 약 25 mg/일, 약 0.5 내지 약 10 mg/일, 약 0.5 내지 약 5 mg/일, 약 0.5 내지 약 2 mg/일, 약 0.5 내지 약 1 mg/일, 약 1 내지 약 25 mg/일, 약 1 내지 약 10 mg/일, 약 1 내지 약 5 mg/일, 약 1 내지 약 2.5 mg/일, 또는 약 1 내지 약 2 mg/일이다. 일 구현예에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 약 0.1 mg/일 내지 약 0.4 mg/일이다.
특정 구현예에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 15, 약 20, 또는 약 25 mg/일이다. 일부 그러한 구현예에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6 또는 약 0.7 mg/일이다.
일 구현예에서, 본원에 기술된 조건에 대해 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 권장되는 1일 용량 범위는 약 0.1 mg 내지 약 25 mg/일, 바람직하게는 1일 1회 단일 용량으로, 또는 하루엘 걸쳐 분할 용량으로 제공되는 범위 내에 있다. 다른 구현예에서, 투여량은 약 0.1 내지 약 10 mg/일 범위이다. 특정한 일일 용량은 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25 mg/일을 포함한다. 보다 특정한 일일 용량은 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 또는 0.5 mg/일을 포함한다.
특정 구현예에서, 권장되는 개시 투여량은 0.1, 0.2, 0,3, 0.4, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 또는 25 mg/일일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 권장되는 개시 투여량은 0.1, 0.2, 0,3, 0.4, 또는 0.5 mg/일일 수 있다. 용량은 1, 2, 3, 4, 또는 5 mg/일로 증량될 수 있다.
특정 구현예에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 약 0.001 내지 약 5 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 4 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 3 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 2 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 1 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 0.05 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 0.04 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 0.03 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 0.02 mg/kg/일, 약 0.001 내지 약 0.01 mg/kg/일, 또는 약 0.001 내지 약 0.005 mg/kg/일이다.
투여된 용량은 또한 mg/kg/일 이외의 단위로 표현될 수 있다. 예를 들어 비경구 투여용 용량은 mg/m2/일로 표현될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 대상체의 키 또는 체중 둘 다를 고려하여 용량을 mg/kg/일에서 mg/m2/일로 변환하는 방법을 쉽게 알 것이다 (참고, www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm). 예를 들어, 65 kg 인간에 대한 1 mg/kg/일의 용량은 대략 38 mg/m2/일과 같다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법들 중 하나로 치료될 환자는 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 투여 전에 다발성 골수종 치료요법으로 치료받지 않았다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법들 중 하나로 치료될 환자는 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 투여 전에 다발성 골수종 치료요법으로 치료받았다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법들 중 하나로 치료될 환자는 항-다발성 골수종 치료요법에 대한 약물 내성을 나타냈다. 일부 그러한 구현예에서, 환자는 1, 2, 또는 3가지 항-다발성 골수종 치료요법에 대한 내성을 나타냈는데, 여기서, 상기 치료요법은 CD38 단클론 항체 (CD38 mAb, 예를 들어, 다라투무맙 또는 이사툭시맙), 프로테아솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, 익사조밉, 또는 마리조밉), 및 면역조절 화합물 (예를 들어 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 이버도마이드, 또는 아바도마이드)로부터 선택된다.
본원에 제공된 방법은 환자의 연령에 상관없이 환자를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 18세 이상이다. 다른 구현예에서, 상기 대상체는 18, 25, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 또는 70세 초과이다. 다른 구현예에서, 상기 대상체는 65세 미만이다. 다른 구현예에서, 상기 대상체는 65세 초과이다. 일 구현예에서, 상기 대상체는 노인 다발성 골수종 대상체, 예컨대 65세 초과의 대상체이다. 일 구현예에서, 상기 대상체는 노인 다발성 골수종 대상체, 예컨대 75세 초과의 대상체이다.
치료될 질환의 상태 및 대상체의 병태에 따라, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2, 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 경구, 비경구 (예를 들어, 근육내, 복강내, 정맥내, CIV, 피내 주사 또는 주입, 피하 주사, 또는 임플란트), 흡입, 비강, 질, 직장, 설하, 또는 국소 (예를 들어, 경피 또는 국소) 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 각각의 투여 경로에 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 아쥬반트 및 비히클과 함께 적합한 투여 단위로 단독으로 또는 함께 제형화될 수 있다.
일 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 경구로 투여된 다. 또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 화합물, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 비경구로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 화합물, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 정맥내로 투여된다.
본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은, 단일 용량 예컨대, 예를 들어, 단일 볼러스 주사, 또는 경구 정제 또는 환제; 또는 경시적으로, 예컨대, 예를 들어, 경시적 연속적 주입 또는 경시적 분할된 볼러스 투여로 전달될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 화합물은, 필요한 경우, 예를 들어, 환자가 안정한 질환 또는 퇴행을 경험할 때까지, 또는 환자가 질환 진행 또는 허용될 수 없는 독성을 경험할 때까지 반복적으로 투여될 수 있다. 안정한 질환 또는 이의 결핍은 당해 분야에서 공지된 방법, 예컨대 환자 증상의 평가, 물리적 시험, X-선, CAT, PET, 또는 MRI 스캔을 사용하여 이미지화된 종양의 시각화 및 다른 통상적으로 허용되는 평가 양식에 의해 결정된다.
본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 1일 1회 (QD 또는 qd) 투여되거나, 1일 2회 (BID 또는 bid), 1일 3회 (TID 또는 tid), 및 1일 4회 (QID 또는 qid)와 같은 다중 1일 용량으로 나눌 수 있다. 또한, 투여는 연속적 (즉, 연속일에 대해 매일 또는 매일), 간헐적, 예를 들어, 주기 (즉, 약물 없이 며칠, 몇 주 또는 몇 개월 휴식을 포함함)일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "매일"은 치료적 화합물, 예컨대 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이, 예를 들어, 일정 기간 동안 매일 1회 또는 1회 이상 투여되는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 용어 "연속적"은 치료적 화합물, 예컨대 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 적어도 7일 내지 52주의 중단 없는 기간 동안 매일 투여되는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "간헐적" 또는 "간헐적으로"는 규칙적 또는 불규칙적 간격으로 정지 및 개시하는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 간헐적 투여는 1주당 1 내지 6일 동안 투여하거나, 주기 (예를 들어, 2 내지 8주 연속하는 주 동안 매일 투여에 이어서, 최대 1주 동안 투여되지 않은 휴지기)로 투여하거나, 격일로 투여하는 것이다. 본원에 사용된 용어 "주기"는 치료적 화합물, 예컨대 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 매일 또는 연속적으로 그러나 휴지기가 있게 투여되는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 일부 그러한 구현예에서, 투여는 2일 내지 6일 동안 하루에 1회에 이어서, 5 내지 7일 동안 투여되지 않는 휴지기이다.
일부 구현예에서, 투여 빈도는 약 1일 용량 내지 약 1개월 용량 범위에 있다. 특정 구현예에서, 투여는 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회, 1일 4회, 격일에 1회, 1주에 2회, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 또는 4주에 1회이다. 일 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 1일 1회 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 1일 2회 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 1일 3회 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 1일 4회 투여된다.
일 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 최대 20의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함하는 치료 주기로 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 최대 15일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함하는 치료 주기로 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 최대 10일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함하는 치료 주기로 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 최대 7일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함하는 치료 주기로 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 최대 5일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함하는 치료 주기로 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 최대 4일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함하는 치료 주기로 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 최대 3일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함하는 치료 주기로 투여된다.
일 구현예에서, 치료 주기는 최대 14일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 10일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 7일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 5일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 4일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 3일의 투여 기간에 이어서 휴지기를 포함한다.
일 구현예에서, 휴지기는 약 2일에서 최대 약 11일이다. 일 구현예에서, 휴지기는 약 2일에서 최대 약 10일이다. 일 구현예에서, 휴지기는 약 2일이다. 일 구현예에서, 휴지기는 약 3일이다. 일 구현예에서, 휴지기는 약 4일이다. 일 구현예에서, 휴지기는 약 5일이다. 일 구현예에서, 휴지기는 약 6일이다. 또 다른 구현예에서, 휴지기는 약 7일이다. 또 다른 구현예에서, 휴지기는 약 8일이다. 또 다른 구현예에서, 휴지기는 약 9일이다. 또 다른 구현예에서, 휴지기는 약 10일이다. 또 다른 구현예에서, 휴지기는 약 11일이다.
일 구현예에서, 치료 주기는 최대 15일의 투여 기간에 이어서 약 2일에서 최대 약 10일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 10일의 투여 기간에 이어서 약 2일에서 최대 약 10일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 7일의 투여 기간에 이어서 약 2일에서 최대 약 10일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 5일의 투여 기간에 이어서 약 2일에서 최대 약 10일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 3일의 투여 기간에 이어서 약 10일에서 최대 약 15일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 3일의 투여 기간에 이어서 약 3일에서 최대 약 15일의 휴지기를 포함한다.
일 구현예에서, 치료 주기는 최대 15일의 투여 기간에 이어서 7일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 10일의 투여 기간에 이어서 5일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 10일의 투여 기간에 이어서 4일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 10일의 투여 기간에 이어서 3일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 10일의 투여 기간에 이어서 2일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 7일의 투여 기간에 이어서 7일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 5일의 투여 기간에 이어서 5일의 휴지기를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 최대 3일의 투여 기간에 이어서 11일의 휴지기를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 최대 5일의 투여 기간에 이어서 9일의 휴지기를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 최대 5일의 투여 기간에 이어서 2일의 휴지기를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 최대 3일의 투여 기간에 이어서 4일의 휴지기를 포함한다.
일 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1일 내지 5일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 10일에 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 21일에 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 7일 주기의 1 내지 5일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 7일 주기의 1 내지 7일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 10일 및 15 내지 24일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여 (여기서, 20/28 투약 주기로 지칭함)를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 3일 및 15 내지 18일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 7일 및 15 내지 21일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다 (여기서, 14/28 투약 주기로 지칭함). 일 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 5일 및 15 내지 19일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다 (여기서, 10/28 투약 주기로 지칭함). 일 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 3일 및 15 내지 17일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여 (여기서, 6/28 투약 주기로 지칭함)를 포함한다.
일 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 14일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 4일 및 8 내지 11일에 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 5일 및 8 내지 12일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 5일 및 11 내지 15일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 5일, 8 내지 12일 및 15 내지 19일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 4일, 8 내지 11일 및 15 내지 18일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 4일, 8 내지 10일 및 15 내지 17일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 3일, 및 8 내지 11일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료 주기는 21일 주기의 1 내지 3일 및 11 내지 13일에 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3의 투여를 포함한다.
본원에 기재된 임의의 치료 주기는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 이상의 주기 동안 반복될 수 있다. 특정 경우에, 본원에 기재된 치료 주기는 1 내지 약 24 주기, 약 2 내지 약 16 주기, 또는 약 2 내지 약 4 주기를 포함한다. 특정 경우에, 본원에 기재된 치료 주기는 1 내지 약 4 주기를 포함한다. 특정 구현예에서, 주기 1 내지 4는 모두 28일 주기이다. 일부 구현예에서, 치료학적 유효량의 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 28일의 1 내지 13 주기 동안 투여된다 (예를 들어 약 1년). 특정 예에서, 주기 치료요법은 주기의 수는 제한되지 않으며, 질환 진행까지 치료요법이 계속된다. 주기는 특정 경우에 본원에 기재된 투여 기간 및/또는 휴지기의 지속기간의 변화를 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 치료 주기는 1일 1회 투여되는 약 0.1 mg/일, 0.2 mg/일, 0.3 mg/일, 0.4 mg/일, 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 0.8 mg/일, 0.9 mg/일, 1.0 mg/일, 5.0 mg/일, 또는 10 mg/일의 투여량으로 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 치료 주기는 1일 1회 투여되는 약 0.1 mg/일, 0.2 mg/일, 0.3 mg/일, 0.4 mg/일, 0.5 mg/일, 0.6 mg/일, 0.7 mg/일, 또는 0.8 mg/일의 투여량으로 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 일부 그러한 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 10일에 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 또는 0.5 mg의 투여량으로 1일 1회 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 일부 그러한 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 10일 및 15 내지 24일에 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 또는 0.5 mg의 투여량으로 1일 1회 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 일부 그러한 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 10일 및 15 내지 24일에 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 또는 0.5 mg의 투여량으로 1일 1회 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 3일에 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 또는 0.5 mg의 투여량으로 1일 2회 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 3일 및 15 내지 19일에 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 또는 0.5 mg의 투여량으로 1일 2회 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 3일 및 15 내지 17일에 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 또는 0.5 mg의 투여량으로 1일 2회 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 치료 주기는 28일 주기의 1 내지 3일 및 15 내지 17일에 약 0.2 mg의 투여량으로 1일 2회 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 그러한 구현예에서, 화합물은, 예를 들어, 주기 1에서 28일 주기의 1 내지 3일 (아침 및 저녁), 14일 (저녁만), 15 및 16일 (아침 및 저녁), 및 17일 (아침만)에 투여된다.
F. 제2 활성제와의 조합 요법
본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 또한 다발성 골수종을 치료, 예방 또는 관리하기 위해 현재 사용되는 수술, 생물학적 요법 (예를 들어, 관문 억제제와 함께 면역요법을 포함함), 방사선 요법, 화학요법, 줄기 세포 이식, 세포 요법, 또는 다른 비약물 기반 치료요법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 종래의 치료요법과 함께 (예를 들어, 이전, 도중 또는 이후) 조합되거나 사용될 수 있다. 본원에 제공된 화합물 및 종래의 치료요법의 조합된 사용은 특정 환자에서 예상치 않은 효과적인 독특한 치료 용법을 제공할 수 있다. 이론에 의해 제한되지 않고, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 종래의 치료요법과 동시에 제공될 때 부가 또는 상승 효과를 제공할 수 있는 것으로 여겨진다.
본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이, 본원에는 수술, 화학요법, 방사선 요법, 생물학적 요법 및 면역요법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 종래의 치료요법과 관련된 부정적인 또는 바람직하지 않은 효과를 감소, 치료 및/또는 예방하는 방법이 포함된다. 본원에 제공된 화합물, 예를 들어, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 다른 활성 성분은 종래의 치료요법과 관련된 부작용의 발생 전에, 도중 또는 이후에 환자에게 투여될 수 있다.
본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 또한 본원에 기재된 다발성 골수종의 치료 및/또는 예방에 유용한 다른 치료제와 조합되거나 조합되어 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 본원에는 하나 이상의 제2 활성제와 조합하여 그리고 선택적으로 방사선 치료요법, 수혈 또는 수술과 조합하여, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 다발성 골수종의 치료, 예방 또는 관리 방법이 제공된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "과 조합하여"는 하나 초과의 치료요법 (예를 들어, 하나 이상의 예방제 및/또는 치료제)의 사용을 포함한다. 그러나, "조합하여"라는 용어의 사용은 치료요법 (예를 들어, 예방적 및/또는 치료제)이 질환 또는 장애를 가진 환자에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 제1 치료요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제, 예컨대 본원에 제공된 화합물, 예를 들어 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염)은 제2 치료요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)을 대상체에게 투여하기 전에 (예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전에), 투여와 동시에 또는 후속하여 (예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 투여될 수 있다. 사제 치료요법 (quadruple therapy)과 마찬가지로 삼제 치료요법 (triple therapy) 또한 본원에서 고려된다. 일 구현예에서, 제2 치료요법은 덱사메타손이다.
화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 제2 활성제의 환자로의 투여는 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 동시에 또는 순차적으로 일어날 수 있다. 특정 활성제에 사용되는 특정 투여 경로의 적합성은 활성제 자체 (예를 들어, 혈류에 들어가기 전에 분해되지 않고 경구로 투여될 수 있는지 여부)에 의존할 것이다.
화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 투여 경로는 제2 치료요법의 투여 경로와는 무관하다. 일 구현예에서, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 경구로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 정맥내로 투여된다. 따라서, 이들 구현예에 따르면, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 경구로 또는 정맥내로 투여되며, 제2 치료요법은 투여된 경구로, 비경구로, 복강내로, 정맥내로, 동맥내로, 경피로, 설하로, 근육내로, 직장으로, 경협으로, 비강내로, 리포좀으로, 흡입을 통해, 질로, 안구내로, 카테터 또는 스텐트에 의한 국소 전달을 통해, 피하로, 지방내로, 관절내로, 척추강내로, 또는 서방형 투여 형태로 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 제2 치료요법은 동일한 투여 방식으로 경구로 또는 IV로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 하나의 투여 방식, 예를 들어, IV에 의해 투여되는 반면에, 제2 제제 (항-다발성 골수종 제제)는 또 다른 투여 방식, 예를 들어, 경구로 투여된다.
일 구현예에서, 제2 활성제는 약 1 내지 약 1000 mg, 약 5 내지 약 500 mg, 약 10 내지 약 350 mg, 또는 약 50 내지 약 200 mg의 양으로 정맥내로 또는 피하로 그리고 1일 1회 또는 2회 투여된다. 제2 활성제의 특정 양은 사용되는 특정 제제, 치료 또는 관리되는 다발성 골수종의 유형, 질환의 중증도 및 단계, 및 본원에 제공된 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 환자에게 동시에 투여되는 임의의 선택적인 추가의 활성제의 양에 의존할 것이다.
하나 이상의 제2 활성 성분 또는 제제는 본원에 제공된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3과 함께 사용될 수 있다. 제2 활성제는 대분자 (예를 들어, 단백질), 소분자 (예를 들어, 합성 무기, 유기금속, 또는 유기 분자), 또는 세포 치료요법 (예를 들어, CAR 세포)일 수 있다.
본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용될 수 있는 제2 활성제의 예는 멜팔란, 빈크리스틴, 사이클로포스파마이드, 에토포사이드, 독소루비신, 벤다무스틴, 오비누투주맙, 프로테아솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, 익사조밉, 오프로조밉 또는 마리조밉), 히스톤 탈아세틸화효소 억제제 (예를 들어, 파노비노스타트, ACY241), BET 억제제 (예를 들어, GSK525762A, OTX015, BMS-986158, TEN-010, CPI-0610, INCB54329, BAY1238097, FT-1101, ABBV-075, BI 894999, GS-5829, GSK1210151A (I-BET-151), CPI-203, RVX-208, XD46, MS436, PFI-1, RVX2135, ZEN3365, XD14, ARV-771, MZ-1, PLX5117, 4-[2-(사이클로프로필메톡시)-5-(메탄설포닐)페닐]-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온, EP11313 및 EP11336), BCL2 억제제 (예를 들어, 베네토클락스 또는 나비토클락스), MCL-1 억제제 (예를 들어, AZD5991, AMG176, MIK665, S64315, 또는 S63845), LSD-1 억제제 (예를 들어, ORY-1001, ORY-2001, INCB-59872, IMG-7289, TAK-418, GSK-2879552, 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 또는 이의 염), 코르티코스테로이드 (예를 들어, 프레드니손), 덱사메타손; 항체 (예를 들어, CS1 항체, 예컨대 엘로투주맙; CD38 항체, 예컨대 다라투무맙 또는 이사툭시맙; 또는 BCMA 항체 또는 항체-콘주게이트, 예컨대 GSK2857916 또는 BI 836909), 관문 억제제 (본원서 기재된 바와 같이), 또는 CAR 세포 (본원에 기재된 바와 같이) 중 하나 이상을 포함한다.
일 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 덱사메타손이다.
일부 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1 및 8일에 4 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1, 4, 8 및 11일에 4 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 및 15일에 4 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 4, 8, 11, 15 및 18일에 4 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 15, 및 22일에 4 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 10, 15, 및 22일에 4 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 3, 15, 및 17일에 4 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 3, 14, 및 17일에 4 mg 용량으로 투여된다.
일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1 및 8일에 8 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1, 4, 8 및 11일에 8 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 및 15일에 8 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 4, 8, 11, 15 및 18일에 8 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 15, 및 22일에 8 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 10, 15, 및 22일에 8 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 3, 15, 및 17일에 8 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 3, 14, 및 17일에 8 mg 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1 및 8일에 10 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1, 4, 8 및 11일에 10 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 및 15일에 10 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 4, 8, 11, 15 및 18일에 10 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 15, 및 22일에 10 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 10, 15, 및 22일에 10 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 3, 15, 및 17일에 10 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 3, 14, 및 17일에 10 mg 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1 일 8일에 20 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1, 4, 8 및 11일에 20 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 및 15일에 20 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 4, 8, 11, 15 및 18일에 20 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 15, 및 22일에 20 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 10, 15, 및 22일에 20 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 3, 15, 및 17일에 20 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 3, 14, 및 17일에 20 mg 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1 및 8일에 40 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 21일 주기의 1, 4, 8 및 11일에 40 mg 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 및 15일에 40 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 10, 15, 및 22일에 40 mg 용량으로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 4, 8, 11, 15 및 18일에 40 mg 용량으로 투여된다. 다른 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 8, 15, 및 22일에 40 mg 용량으로 투여된다. 다른 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 28일 주기의 1, 3, 15, 및 17일에 40 mg 용량으로 투여된다. 하나의 그러한 구현예에서, 덱사메타손은 주기 1의 1, 3, 14, 및 17일에 40 mg 용량으로 투여된다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 보르테조밉이다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 다라투무맙이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본원에 기재된 바와 같은 프로테아솜 억제제, 본원에 기재된 바와 같은 CD38 억제제 및 본원에 기재된 바와 같은 코르티코스테로이드와 함께, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 투여를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 파노비노스타트이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 ACY241이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 빈크리스틴이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 사이클로포스파마이드이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 에토포사이드다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 독소루비신이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 베네토클락스이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 AMG176이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 MIK665이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 GSK525762A이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 OTX015이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 4-[2-(사이클로프로필메톡시)-5-(메탄설포닐)페닐]-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 사용되는 제2 활성제는 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴, 또는 이의 염 (예를 들어 베실레이트 염)이다. 일부 그러한 구현예에서, 상기 방법은 덱사메타손의 투여를 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 관문 억제제와 조합하여 투여된다. 일 구현예에서, 하나의 관문 억제제는 본원에 제공된 방법과 관련하여 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 조합되어 사용된다. 또 다른 구현예에서, 2개의 관문 억제제는 본원에 제공된 방법과 관련하여 화합물 1, 또는 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 조합되어 사용된다. 또 다른 구현예에서, 3개 이상의 관문 억제제는 본원에 제공된 방법과 관련하여 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3, 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 조합되어 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "면역 관문 억제제" 또는 "관문 억제제"는 하나 이상의 관문 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절하는 분자를 지칭한다. 특정한 이론에 의해 제한되지 않고, 관문 단백질은 T-세포 활성화 또는 기능을 조절한다. 다수의 관문 단백질, 예컨대 CTLA-4 및 그것의 리간드 CD80 및 CD86; 및 이의 리간드 PD-Ll 및 PD-L2를 갖는 PD-1 (Pardoll, Nature Reviews Cancer , 2012, 12, 252-264)이 공지되어 있다. 이들 단백질은 T-세포 반응의 공동 자극 또는 억제 상호작용을 담당하는 것으로 보인다. 면역 관문 단백질은 자기-내성과 생리적 면역 반응의 지속기간 및 크기를 조절 및 유지하는 것으로 보인다. 면역 관문 억제제는 항체를 포함하거나, 항체로부터 유래된다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 CTLA-4 억제제이다. 일 구현예에서, CTLA-4 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 항-CTLA-4 항체의 예는 하기 미국 특허에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 5,811,097; 5,811,097; 5,855,887; 6,051,227; 6,207,157; 6,682,736; 6,984,720; 및 7,605,238, 이들 모두는 본원에 그 전체가 포함된다. 일 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 트레멜리무맙 (티실리무맙 또는 CP-675,206으로도 공지되어 있음)이다. 또 다른 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙 (MDX-010 또는 MDX-101로도 공지되어 있음)이다. 이필리무맙은 CTLA-4에 결합하는 완전 인간 단클론성 IgG 항체이다. 이필리무맙은 상표명 Yervoy™로 시판된다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 PD-1/PD-L1 억제제이다. PD-l/PD-L1 억제제의 예는 미국 특허 번호 7,488,802; 7,943,743; 8,008,449; 8,168,757; 8,217,149, 및 PCT 특허 출원 공개 번호 WO2003042402, WO2008156712, WO2010089411, WO2010036959, WO2011066342, WO2011159877, WO2011082400, 및 WO2011161699에 기재된 것을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 상기 특허들 모두는 본원에 그 전체가 포함된다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 PD-1 억제제이다. 일 구현예에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체는 BGB-A317, 니볼루맙 (ONO-4538, BMS-936558, 또는 MDX1106으로도 공지되어 있음) 또는 펨브롤리주맙 (MK-3475, SCH 900475, 또는 람브롤리주맙으로도 공지되어 있음)이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 니볼루맙은 인간 IgG4 항-PD-1 단클론 항체며, 상표명 Opdivo™으로 시판된다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙은 인간화된 단클론성 IgG4 항체이며, 상표명 Keytruda™로 시판된다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간화된 항체인 CT-011이다. 단독으로 투여된 CT-011은 재발시 급성 골수성 백혈병 (AML) 치료에 반응을 보이지 않았다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 융합 단백질인 AMP-224이다. 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 BGB-A317이다. BGB-A317은 Fc 감마 수용체 I에 결합하는 능력이 특이적으로 조작되고 고친화도 및 우수한 표적 특이성을 갖는 PD-1에 대한 독특한 결합 신호를 갖는 단클론 항체이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 PD-L1 억제제이다. 일 구현예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체이다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736 (더발루맙)이다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-936559 (MDX-1105-01로도 공지되어 있음)이다. 또 다른 구현예에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙 (MPDL3280A 및 Tecentriq®로도 공지되어 있음)이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 PD-L2 억제제이다. 일 구현예에서, PD-L2 억제제는 항-PD-L2 항체이다. 일 구현예에서, 항-PD-L2 항체는 rHIgM12B7A이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 림프구 활성화 유전자-3 (LAG-3) 억제제이다. 일 구현예에서, LAG-3 억제제는 가용성 Ig 융합 단백질인 IMP321이다 (참조: Brignone et al., J. Immunol., 2007, 179, 4202-4211). 또 다른 구현예에서, LAG-3 억제제는 BMS-986016이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 B7 억제제이다. 일 구현예에서, B7 억제제는 B7-H3 억제제 또는 B7-H4 억제제이다. 일 구현예에서, B7-H3 억제제는 항-B7-H3 항체인 MGA271이다 (참조: Loo et al., Clin.Cancer Res., 2012, 3834).
일 구현예에서, 관문 억제제는 TIM3 (T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3) 억제제이다 (참조: Fourcade et al., J. Exp. Med., 2010, 207, 2175-86; Sakuishi et al., J. Exp. Med., 2010, 207, 2187-94).
일 구현예에서, 관문 억제제는 OX40 (CD134) 효능제이다. 일 구현예에서, 관문 억제제는 항-OX40 항체이다. 일 구현예에서, 항-OX40 항체는 항-OX-40이다. 또 다른 구현예에서, 항-OX40 항체는 MEDI6469이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 GITR 효능제이다. 일 구현예에서, 관문 억제제는 항-GITR 항체이다. 일 구현예에서, 항-GITR 항체는 TRX518이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 CD137 효능제이다. 일 구현예에서, 관문 억제제는 항-CD137 항체이다. 일 구현예에서, 항-CD137 항체는 우렐루맙이다. 또 다른 구현예에서, 항-CD137 항체는 PF-05082566이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 CD40 효능제이다. 일 구현예에서, 관문 억제제는 항-CD40 항체이다. 일 구현예에서, 항-CD40 항체는 CF-870,893이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 재조합 인간 인터류킨-15 (rhIL-15)이다.
일 구현예에서, 관문 억제제는 IDO 억제제이다. 일 구현예에서, IDO 억제제는 INCB024360이다. 또 다른 구현예에서, IDO 억제제는 인독시모드이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 조합 치료요법은 본원에 기재된 둘 이상의 관문 억제제를 포함한다 (동일하거나 상이한 부류의 관문 억제제를 포함함). 또한, 본원에 기재된 조합 치료요법은 본원에 기재되고 당해 분야에 이해되는 질환을 치료하기에 적절한 경우 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 제2 활성제와 조합하여 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 그 표면 상에 하나 이상의 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 하나 이상의 면역 세포 (예를 들어, 변형된 면역 세포)와 조합하여 사용될 수 있다. 일반적으로, CAR은 제1 단백질 (예를 들어, 항원-결합 단백질), 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인으로부터 세포외 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포외 도메인이 표적 단백질, 예컨대 종양-연관된 항원 (TAA) 또는 종양 특이적 항원 (TSA)에 결합되면, 신호는, 예를 들어, 표적 단백질을 발현하는 세포를 표적화하고 사멸시키기 위해 면역 세포를 활성화시키는 세포내 신호전달 도메인을 통해 생성된다.
세포외 도메인: CAR의 세포외 도메인은 관심 항원에 결합한다. 특정 구현예에서, CAR의 세포외 도메인은 상기 항원에 결합하는 수용체 또는 수용체의 일부를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포외 도메인은 항체 또는 이의 항원-결합 부분이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포외 도메인은 단일 사슬 Fv (scFv) 도메인이거나 이를 포함한다. 단일-사슬 Fv 도메인은, 예를 들어, 가요성 링커에 의해 VH에 연결된 VL을 포함할 수 있으며, 여기서, 상기 V L 및 V H 는 상기 항원에 결합하는 항체로부터 유래된다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 의해 인식되는 항원은 종양-연관된 항원 (TAA) 또는 종양-특이적 항원 (TSA)이다. 다양한 특정 구현예에서, 종양-연관된 항원 또는 종양 특이적 항원은, 비제한적으로, Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백 (AFP), 암종배아 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, B 세포 성숙 항원 (BCMA), 상피 막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-24 연관된 항원 (MAGE), CD19, CD22, CD27, CD30, CD34, CD45, CD70, CD99, CD117, EGFRvIII (표피 성장 인자 변이체 III), 메소텔린, PAP (전립선 산 포스파타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대체 판독 프레임 단백질), Trp-p8, STEAPI (전립선 1의 6-막관통 상피 항원), 크로모그라닌, 사이토케라틴, 데스민, 신경교 섬유성 산성 단백질 (GFAP), 육안 낭성 질환 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 단백질 멜란-A (T 림프구에 의해 인식된 흑색종 항원; MART-I), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경필라멘트, 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE), 태반 알칼리성 포스파타제, 시냅토피시스, 티로글로불린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 동종효소 유형 M2의 이량체 형태 (종양 M2-PK), 비정상적 ras 단백질, 또는 비정상적 p53 단백질이다. 특정 다른 구현예에서, CAR의 세포외 도메인에 의해 인식되는 TAA 또는 TSA는 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, 또는 Ral-B이다.
특정 구현예에서, CAR의 세포외 도메인에 의해 인식되는 TAA 또는 TSA는 암/고환 (CT) 항원, 예를 들어, BAGE, CAGE, CTAGE, FATE, GAGE, HCA661, HOM-TES-85, MAGEA, MAGEB, MAGEC, NA88, NY-ES0-1, NY-SAR-35, OY-TES-1, SPANXBI, SPA17, SSX, SYCPI, 또는 TPTE이다.
특정 다른 구현예에서, CAR의 세포외 도메인에 의해 인식되는 TAA 또는 TSA는 탄수화물 또는 강글리오사이드, 예를 들어, fuc-GMI, GM2 (종양태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3 등이다.
특정 다른 구현예에서, CAR의 세포외 도메인에 의해 인식되는 TAA 또는 TSA는 알파-악티닌-4, Bage-l, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 125, CA 15-3 (CA 27.29＼BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, CEA, coa-l, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바 바이러스 항원, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-All, hsp70-2, KIAA0205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, 네오-PAP, 미오신 부류 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, K-ras, N-ras, 트리오스포스페이트 이소머라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, gp100 (Pmel17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-l, MAGE-3, RAGE, GAGE-l, GAGE-2, p15(58), RAGE, SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, p53, HRas, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 파필로마바이러스 (HPV) 항원 E6 및 E7, TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로머라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, CD68\KP1, C0-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-C0-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, 또는 TPS이다.
다양한 특정 구현예에서, 종양-연관된 항원 또는 종양 특이적 항원은 AML-관련된 종양 항원으로 문헌에 기재된 바와 같다: S.Anguille et al, Leukemia (2012), 26, 2186-2196.
다른 종양-연관된 및 종양 특이적 항원은 당해 기술의 숙련가에게 공지되어 있다.
키메라 항원 수용체를 구성하는데 유용한 TSA 및 TAA에 결합하는 수용체, 항체, 및 scFv는 이들을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열로서 당해 기술에 공지되어 있다.
어떤 특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체의 세포외 도메인에 의해 인식되는 항원은 일반적으로 TSA 또는 TAA인 것으로 간주되지 않지만, 그럼에도 불구하고 종양 세포 또는 종양에 의해 야기된 손상과 관련이 있는 항원이다. 특정 구현예에서, 예를 들어, 항원은, 예를 들어, 성장 인자, 사이토카인 또는 인터류킨, 예를 들어, 혈관신생 또는 맥관형성과 연관된 성장 인자, 사이토카인, 또는 인터류킨이다. 그러한 성장 인자, 사이토카인, 또는 인터류킨은, 예를 들어, 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 염기성 섬유모세포 성장 인자 (bFGF), 혈소판-유래된 성장 인자 (PDGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 인터류킨-8 (IL-8)을 포함할 수 있다. 종양은 또한 종양에 국소적 저산소 환경을 만들 수 있다. 이와 같이, 다른 특정 구현예에서, 항원은 저산소증-연관된 인자, 예를 들어, HIF-1α, HIF-1β, HIF-2α, HIF-2β, HIF-3α, 또는 HIF-3β이다. 종양은 또한 정상 조직에 국소적 손상을 유발하여, 손상 연관된 분자 패턴 분자 (DAMP; 알라민으로도 공지되어 있음)로도 공지된 분자의 방출을 유발한다. 따라서, 특정 다른 구현예에서, 항원은 DAMP, 예를 들어, 열충격 단백질, 염색질-연관된 단백질 고 이동도 그룹 박스 1 (HMGB 1), S100A8 (MRP8, 칼그라눌린 A), S100A9 (MRP14, 칼그라눌린 B), 혈청 아밀로이드 A (SAA)이거나, 또는 데옥시리보핵산, 아데노신 삼인산, 요산, 또는 헤파린 설페이트일 수 있다.
막관통 도메인:특정 구현예에서, CAR의 세포외 도메인은 링커, 스페이서 또는 힌지 폴리펩타이드 서열, 예를 들어, CD28로부터의 서열 또는 CTLA4로부터의 서열.에 의해 폴리펩타이드의 막관통 도메인에 연결된다막관통 도메인은 임의의 막관통 단백질의 막관통 도메인으로부터 얻어지거나 유래될 수 있으며, 그러한 막관통 도메인 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 막관통 도메인은, 예를 들어, CD8, CD16, 사이토카인 수용체, 및 인터류킨 수용체, 또는 성장 인자 수용체 등으로부터 얻어지거나 유래될 수 있다.
세포내 신호전달 도메인: 특정 구현예에서, CAR의 세포내 도메인은 T 세포의 표면에서 발현되고 상기 T 세포의 활성화 및/또는 증식을 유발하는 단백질의 세포내 도메인 또는 모티프이거나 이를 포함한다. 그러한 도메인 또는 모티프는 CAR의 세포외 부분에 대한 항원 결합에 응답하여 T 림프구의 활성화에 필요한 1차 항원-결합 신호를 전달할 수 있다. 전형적으로, 이 도메인 또는 모티프는 ITAM (면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프)이거나 이를 포함한다. CAR에 적합한 ITAM-함유 폴리펩타이드는, 예를 들어, 제타 CD3 사슬 (CD3ζ) 또는 이의 ITAM-함유 부분을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포내 도메인은 CD3ζ 세포내 신호전달 도메인이다. 다른 특정 구현예에서, 세포내 도메인은 림프구 수용체 사슬, TCR/CD3 복합 단백질, Fe 수용체 서브유닛 또는 IL-2 수용체 서브유닛으로부터 유래된다. 특정 구현예에서, CAR은, 예를 들어, 폴리펩타이드의 세포내 도메인의 일부로서 하나 이상의 공동 자극 도메인 또는 모티프를 추가로 포함한다. 하나 이상의 공동 자극 도메인 또는 모티프는 공동 자극 CD27 폴리펩타이드 서열, 공동 자극 CD28 폴리펩타이드 서열, 공동 자극 OX40 (CD134) 폴리펩타이드 서열, 공동 자극 4-1BB (CD137) 폴리펩타이드 서열, 또는 공동 자극 유도성 T-세포 공동 자극 (ICOS) 폴리펩타이드 서열, 또는 다른 공동자극 도메인 또는 모티프, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있거나, 이들 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
CAR 또한 T 세포 생존 모티프를 포함할 수 있다. T 세포 생존 모티프는 항원에 의한 자극 후 T 림프구의 생존을 용이하게 하는 임의의 폴리펩타이드 서열 또는 모티프일 수 있다. 특정 구현예에서, T 세포 생존 모티프는 CD3, CD28, IL-7 수용체 (IL-7R)의 세포내 신호전달 도메인, IL-12 수용체의 세포내 신호전달 도메인, IL-15 수용체의 세포내 신호전달 도메인, IL-21 수용체의 세포내 신호전달 도메인, 또는 형질전환 성장 인자 β (TGFβ) 수용체의 세포내 신호전달 도메인이거나, 이들로부터 유래된다.
CAR을 발현하는 변형된 면역 세포는, 예를 들어, T 림프구 (T 세포, 예를 들어, CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포), 세포독성 림프구 (CTL) 또는 자연 살해 (NK) 세포일 수 있다. 본원에 제공된 조성물 및 방법에 사용된 T 림프구는 순수한 T 림프구 또는 MHC-제한된 T 림프구일 수 있다. 특정 구현예에서, T 림프구는 종양 침윤 림프구 (TIL)이다. 특정 구현예에서, T 림프구는 종양 생검으로부터 단리되거나, 종양 생검으로부터 단리된 T 림프구로부터 확장되었다. 특정 다른 구현예에서, T 세포는 말초 혈액, 제대혈, 또는 림프로부터 단리된 T 림프구로부터 단리되거나 이로부터 확장되었다. CAR를 발현하는 변형된 변역 세포를 생성하기 위해 사용될 면역 세포는 당해 분야에-허용되는 통상적인 방법, 예를 들어, 채혈 이어서 분리반출법 및 선택적으로 항체-매개된 세포 단리 또는 분류를 사용하여 단리될 수 있다.
변형된 면역 세포는 바람직하게는 변형된 면역 세포가 투여될 개체에 대해 자가조직이다. 특정 다른 구현예에서, 변형된 면역 세포는 변형된 면역 세포가 투여될 개체에 동종이계이다. 동종이계 T 림프구 또는 NK 세포가 변형된 T 림프구를 제고하기 위해 사용되는 경우, 개체에서 이식편 대 숙주 질환 (GVHD)의 가능성을 감소시킬 T 림프구 또는 NK 세포를 선택하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 바이러스-특이적 T 림프구는 변형된 T 림프구의 제조를 위해 선택되고; 그러한 림프구는 임의의 수용자 항원에 의해 결합하여 이에 의해 활성화될 수 있는 고유 능력이 크게 감소될 것으로 예상될 것이다. 특정 구현예에서, 동종이계 T 림프구의 수용자-매개된 거부는 하나 이상의 면역억제제, 예를 들어, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 시롤리무스, 사이클로포스파마이드 등의 숙주로의 공동-투여에 의해 감소될 수 있다.
CD3 및 CD28을 발현하거나, CD3ζ 신호전달 도메인 및 CD28 공동 자극 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 T 림프구, 예를 들어, 비변형된 T 림프구, 또는 T 림프구는 CD3 및 CD28에 대한 항체, 예를 들어, 비드에 부착된 항체를 사용하여 확장될 수 있다; 참고, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,948,893; 6,534,055; 6,352,694; 6,692,964; 6,887,466; 및 6,905,681.
변형된 면역 세포, 예를 들어, 변형된 T 림프구는, 경우에 따라, 실질적으로 모든 변형된 면역 세포를 사멸시킬 수 있는 "자살 유전자" 또는 "안전성 스위치"를 선택적으로 포함할 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 변형된 T 림프구는 간사이클로비르와의 접촉시 변형된 T 림프구의 사멸을 야기하는 HSV 티미딘 키나제 유전자 (HSV-TK)를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 변형된 T 림프구는 유도성 카스파제, 예를 들어, 유도성 카스파제 9 (이카스파제9), 예를 들어, 카스파제 9와 인간 FK506 결합 단백질 사이의 융합 단백질을 포함하여 특이적 소분자 제약을 사용하여 이량체화를 가능하게 한다. 참조: Straathof et al., Blood 1 05(11) :4247-4254 (2005).
특정 구현예에서, 본원 제공된 바와 같은 화합물 1, 화합물 2 또는 화합물 3은 키메라 항원 수용체 (CAR) T-세포와 조합하여 다양한 유형 또는 단계의 다발성 골수종을 가진 환자에게 투여된다. 특정 구현예에서, 조합 중의 CAR T 세포는 B 세포 성숙 항원 (BCMA)을 표적으로 하며, 보다 구체적인 구현예에서, CAR T 세포는 bb2121 또는 bb21217이다. 일부 구현예에서, CAR T 세포는 JCARH125이다.
G. 약제학적 조성물
본원에 제공된 약제학적 조성물은 치료학적 유효량의 본원에 제공된 하나이상의 화합물 및 선택적으로 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 함유한다.
화합물은 경구 투여를 위한 용액, 현탁액 또는 엘릭시르, 안과용 또는 비경구 투여를 위한 멸균 용액 또는 현탁액뿐만 아니라 경피 패치 제제 및 건조 분말 흡입제와 같은 적합한 약제학적 제제로 제형화될 수 있다. 전형적으로, 상기 기재된 화합물은 당해 분야에 공지된 기술 및 절차를 사용하여 제형화된다 (참고, 예를 들어, Ansel Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, Seventh Edition 1999).
상기 조성물에서, 하나 이상의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염의 유효 농도는 적합한 약제학적 담체 또는 비히클과 혼합된다. 특정 구현예에서, 조성물 중 화합물의 농도는 투여 시 다발성 골수종의 증상 및/또는 진행 중 하나 이상을 치료, 예방 또는 개선시키는 양의 전달에 효과적이다.
전형적으로, 조성물은 단일 용량 투여를 위해 제형화된다. 조성물을 제형화하기 위해, 화합물의 중량 분율은 처리된 병태가 완화 또는 개선되도록 유효 농도로 선택된 비히클에서 용해, 현탁, 분산 또는 달리 혼합된다. 본원에 제공된 화합물의 투여에 적합한 약제학적 담체 또는 비히클은 특정한 투여 방식에 적합한 것으로 당해 분야의 숙련가에게 공지된 임의의 그러한 담체를 포함한다.
또한, 상기 화합물은 조성물에서 유일한 약제학적 활성 성분으로서 제형화되거나 다른 활성 성분과 조합될 수 있다. 조직-표적화된 리포좀, 예컨대 종양-표적화된 리포좀을 포함하는 리포좀 현탁앤은 또한 약제학적으로 허용되는 담체로서 적합할 수 있다. 이들은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 리포좀 제형은 당해 분야에서 공지된 바와 같이 제조될 수 있다. 간단히, 리포좀, 예컨대 다중층 소포 (MLV)는 플라스크 내부에서 난 포스파티딜 콜린 및 뇌 포스파티딜 세린 (7:3 몰 비)을 건조시킴으로 형성될 수 있다 2가 양이온 이 없는 포스페이트 완충 식염수 (PBS)로 본원에 제공된 화합물의 용액을 첨가하고, 지질막이 분산될 때까지 플라스크를 진탕시켰다. 생성된 소포를 세척하여 비캡슐화된 화합물을 제거하고, 원심분리에 의해 펠릿화한 다음, PBS에 재현탁시켰다.
활성 화합물은 치료되는 환자에게 바람직하지 않은 부작용이 없는 경우 치료학적으로 유용한 효과를 발휘하기에 충분한 양으로 약제학적으로 허용되는 담체에 포함된다. 치료학적으로 유효한 농도는 본원에 기재된 시험관내 및 생체내 시스템에서 화합물을 시험함으로써 경험적으로 결정될 수 있으며, 이어서 인간을 위한 투여량에 대해 그로부터 외삽된다.
약제학적 조성물 중 활성 화합물의 농도는 활성 화합물의 흡수, 조직 분포, 불활성화, 대사 및 배설 속도, 화합물의 물리화학 특성, 투여 스케줄, 및 투여량 뿐만 아니라 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 인자에 좌우될 것이다. 예를 들어, 전달되는 양은 고형 종양 및 혈액 매개 종양을 포함하여 암의 증상 중 하나 이상을 개선하기에 충분하다.
비경구, 진피내, 피하 또는 국소 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 성분 중 어느 하나를 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 디메틸 아세트아미드 또는 다른 합성 용매; 항미생물제, 예컨대 벤질 알코올 및 메틸 파라벤; 산화방지제, 예컨대 아스코르브산 및 아황산수소나트륨; 킬레이트제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA); 완충액, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 및 포스페이트; 및 긴장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스.비경구 제제는 앰풀, 펜, 일회용 주사기 또는 유리, 플라스틱 또는 다른 적합한 재료로 제저된 단일 또는다중 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
화합물이 불충분한 용해도를 나타내는 경우, 방법 화합물을 가용화하는 방법이 사용될 수 있다. 그러한 방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있으며, 보조용매, 예컨대 디메틸설폭사이드 (DMSO)를 사용하거나, 계면활성제, 예컨대 TWEEN®를 사용하거나, 수성 중탄산나트륨에 용해시키는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
화합물(들)의 혼합 또는 첨가시, 생성된 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있다. 생성된 혼합물의 형태는 의도된 투여 방식 및 선택된 담체 또는 비히클에서의 화합물의 용해도를 포함한 다수의 인자에 의존한다. 유효 농도는 치료되는 질환, 장애 또는 병태의 증상을 개선하기에 충분하며, 실험적으로 결정될 수 있다.
약제학적 조성물은 단위 투여 형태, 예컨대 정제, 캡슐, 환제, 분말, 과립, 멸균 비경구 용액 또는 현탁액, 및 경구 용액 또는 현탁액, 및 적합한 양의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 유수 에멀젼으로 인간 및 동물에게 투여하기 위해 제공된다. 약제학적으로 치료학적 활성 화합물 및 이의 염은 단위 투여 형태 또는 다중 투여 형태로 제형화되고 투여된다. 본원에 사용된 바와 같은 단위 투여 형태는 인간 및 동물 대상체에 적합하고 당해 기술에 공지된바와 같이 개별적으로 패키징된 물리적으로 별개의 단위를 지칭한다. 각각의 단위 용량은 요구되는 약제학적 담체, 비히클 또는 희석제와 관련하여 원하는 치료적 효과를 생성하기에 충분한 사전 결정된 양의 치료적으로 활성인 화합물을 함유한다. 단위 용량 형태의 예는 앰풀 및 주사기 및 개별적으로 패키징된 정제 또는 캡슐을 포함한다. 단위 용량 형태는 분획 또는 이의 배수로 투여될 수 있다. 다중 용량 형태는 분리된 단위 용량 형태로 투여될 단일 용기에 패키징된 복수의 동일한 단위 투여 형태이다. 다중 용량 형태의 예는 바이알, 정제 또는 캡슐의 병 또는 파인트 또는 갤런의 병을 포함한다. 따라서, 다중 용량 형태는 패키징에서 분리되지 않은 다수의 단위 용량이다.
잔량이 무독성 담체로 이루어진 0.005% 내지 100% 범위의 활성 성분을 함유하는 투여 형태 또는 조성물이 제조될 수 있다. 경구 투여의 경우, 약제학적으로 허용되는 비독성 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 예컨대, 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 활석, 셀룰로스 유도체, 나트륨 크로스카라멜로스, 글루코스, 수크로스, 탄산마그네슘 또는 나트륨 사카린 중 어느 하나의 혼입에 의해 형성된다. 그러한 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 분말 및 지속 방출 제형, 예컨대, 비제한적으로, 이식물 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템, 및 생분해성, 생체적합성 폴리머, 예컨대 콜라겐, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산 및 기타를 포함한다. 이들 조성물의 제조 방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다.
활성 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염은 신체로부터 화합물이 빠르게 제거되는 것을 방지하는 담체, 예컨대 경시적 방출 제형 또는 코팅으로 제조될 수 있다.
조성물은 원하는 특성의 조합을 얻기 위해 다른 활성 화합물을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 본원에 제공된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 또한, 산화 스트레스와 관련된 질환과 같은 상기 언급된 질환 또는 의학적 병태 중 하나 이상을 치료하는데 있어서 가치가 있는 것으로 일반적인 기술 분야에 공지된 또 다른 약리학적 제제와 함께 치료적 또는 예방적 목적을 위해 유리하게 투여될 수 있다. 그러한 조합 치료요법은 본원에 제공된 조성물 및 치료 방법의 추가의 양태를 구성하는 것으로 이해되어야 한다.
H. 화합물의 활성 및 성질의 평가
항-다발성 골수종 증식성 활성 및 적절한 안전성 프로파일을 포함하여, 원하는 성질을 갖는 것들을 식별하기 위해 화합물을 시험하기 위해 표준 생리학적, 약리학적 및 생화학적 절차를 이용할 수 있다.
그러한 검정은, 예를 들어, 생화학적 검정 예컨대 결합 검정, 방사능 혼입 검정뿐만 아니라 다양한 세포 기반 검정을 포함한다.
이소인돌리논 유도체 및 이들의 치료 용도는, 예를 들어, 하기에 기재되어 있다: 미국특허 번호 8,518,972. 놀랍게도, 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3은 실시예 섹션에서와 같이 예기치 못한 유리한 성질을 나타낸다. 이들 유익한 성질은 α1 아드레날린 및 D2 도파민 수용체에서 감소된 기능적 활성 (시험관내뿐만 아니라 생체내), 개선된 세포 사멸 선택성 (비골수종 세포의 감소된 사멸에 의해 나타냄), 및 감소된 CYP3A4 억제에 의해 나타낸 바와 같이, 유의적으로 증가된 항-다발성 골수종 효력, 증가된 수준의 아폽토시스, 및 덱사메타손과의 더 강하고 효과적인 조합 반응, 및 놀랍게도 개선된 안전성 프로파일을 포함한다.
전술한 상세한 설명 및 첨부된 실시예는 단지 예시적인 것이며, 주제의 범위를 제한하는 것으로 간주되지 않는 것으로 이해된다. 개시된 구현예에 대한 다양한 변화 및 변형은 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 본원에 제공된 화학 구조, 치환체, 유도체, 중간체, 합성, 제형 및/또는 사용 방법에 관한 것들을 제한 없이 포함하는 그러한 변화 및 변형은 그 사상 및 범위로부터 벗어나지 않고 이루어질 수 있다. 본원에 언급된 미국 특허 및 공보는 참조로 포함된다.
6. 실시예
본 발명의 특정 구현예들은 하기 비제한적인 예로 설명된다. .
약어:
AcN/ACN 아세토니트릴
AIBN 아조비스이소부티로니트릴
Boc tert-부틸옥시카보닐
Boc2O 디-tert-부틸 디카보네이트
tBuOK 칼륨 tert-부톡사이드
DIEA 디이소프로필에틸아민
DMF N,N'-디메틸포름아미드
DMSO 디메틸설폭사이드
EtOAc 에틸 아세테이트
IPA 이소프로판올 또는 2-프로판올
MeOH 메탄올
MM 다발성 골수종
NBS N-브로모석신이미드,
NMR 핵 자기 공명
PBMC 인간 말초 혈액 단핵 세포
i-PrOAc 이소프로필 아세테이트
TBS tert-부틸 디메틸실릴
TBSCl tert-부틸 디메틸실릴클로라이드
THF 테트라하이드로푸란
TLC 박층 크로마토그래피
TMSCl 트리메틸실릴 클로라이드
실시예 1: 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 (화합물 1)의 합성.
2-아미노-5-메톡시-5-옥소펜탄산. 질소 하에 무수 메탄올 (2.5 L) 중 2-아미노펜탄이산 (250 g, 1.70 mol)의 현탁액에 트리메틸실릴 클로라이드 (277 g, 2.55 mol)를 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 투명한 용액을 실온 (20℃)에서 30분 동안 교반하였다. 1H NMR은 출발 물질이 완전히 소비되었음을 나타내었다. 반응 혼합물은 추가의 후처리 없이 다음 단계에서 사용하였다. 1H NMR:400 MHz CD3OD δ:4.17-4.15 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.70-2.60 (m, 2H), 2.33-2.25 (m, 2H).
2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-5-메톡시-5-옥소펜탄산.상기 용액에 트리에틸아민 (275 g, 2.72 mol) 및 디-tert-부틸 디카보네이트 (447.35 g, 2.05 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 농축 건조시킨 다음, 물 (2.5 L)을 첨가하여 잔류물을 용해시켰다. 생성된 수용액을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 세척한 다음, HCl (1 N)로 pH = 3으로 산성화하고, 에틸 아세테이트 (1 L × 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (800 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 2-(tert-부톡시카보닐아미노)-5-메톡시-5-옥소-펜탄산 (250 g 56% 수율, 2단계)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR: 400 MHz CD3OD δ:4.18-4.11 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.48-2.43 (m, 2H), 2.21-2.15 (m, 1H), 1.95-1.91 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
메틸 5-아미노-4-(tert-부톡시카보닐 아미노)-5-옥소-펜타노에이트.1,4-디옥산 (1.5 L) 중 2-(tert-부톡시카보닐아미노)-5-메톡시-5-옥소-펜탄산 (200 g, 765 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 디카보네이트 (267 g, 1.22 mol) 및 피리딘 (121 g, 1.53 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반한 후, 탄산암모늄 (182 g, 2.30 mol)을 혼합물에 첨가하고, 25℃에서 추가의 16시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 회전식 증발로 제거하고, 잔류물을 HCl (6 M)로 pH = 3으로 산성화한 다음, 에틸 아세테이트 (800 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기상을 염수 (800 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 휘발성 유기물을 감압 하에 제거하여 메틸 5-아미노-4-(tert-부톡시카보닐 아미노)-5-옥소-펜타노에이트 (180 g, 90% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 1H　NMR:400 MHz CDCl3 δ:6.51 (s, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.21 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.59-2.40 (m, 2H), 2.15-2.11 (m, 1H), 1.94-1.90 (m, 1H), 1.42 (s, 9H).
메틸 4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트 하이드로클로라이드. 메틸 5-아미노-4-(tert-부톡시카보닐아미노)-5-옥소-펜타노에이트 (180 g, 692 mmol)와 HCl/에틸 아세테이트 (300 mL, 4 M)의 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 진공 여과로 수집하고 에틸 아세테이트 (500 mL)로 세척하여 메틸 4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트 하이드로클로라이드 (130 g, 95% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H　NMR:400 MHz CD3OD δ:4.00-3.96 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.59-2.52 (m, 2H), 2.22-2.13 (m, 2H).
메틸 3-하이드록시-2-메틸-벤조에이트. 4개의 배치 (각각 200 g)를 병렬로 진행시켰다. 메탄올 (4.0 L) 중 3-하이드록시-2-메틸-벤조산 (200 g, 1.31 mol)의 용액에 진한 황산 (47.7 g, 486 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 17시간 동안 교반하고, 800 mL로 농축시켰다. 생성된 혼합물을 냉각시키고 20℃로 냉각시키고, 30분에 걸쳐 물 (400 mL)에 천천히 부어넣었다. 물 (1200 mL)을 20℃에서 3시간에 걸쳐 첨가하고, 생성된 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 진공 여과로 수집하고 (4개의 배치를 합함), 물/메탄올 (1000 mL, 9:1)로 또는 여액이 pH > 3일 될 때까지 3회 세척하였다. 고체를 진공 하에 45℃에서 건조시켜 메틸 3-하이드록시-2-메틸-벤조에이트 (700 g, 80.4% 수율)를 회색 고체로서 수득하였다. 1H NMR:400 MHz DMSO-d 6 δ:9.70 (s,　1H), 7.18 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.00 (t, J = 6.8　Hz, 1H), 3.81 (s,　3H), 2.29 (s, 3H).
메틸 3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-메틸-벤조에이트. 2개 배치 (각각 240 g)를 병렬로 진행시켰다. DMF (1.40 L) 중 메틸 3-하이드록시-2-메틸-벤조에이트 (240 g, 1.44 mol)의 용액에 이미다졸 (246 g, 3.61 mol) 및 tert-부틸 디메틸실릴 클로라이드 (238 g, 1.58 mol)를 5℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 20℃로 가온하고, 6시간 동안 교반하였다. 이소프로필 아세테이트 (1700 mL)를 첨가한 다음, 온도를 30℃ 이하로 유지하면서 물 (2000 mL)을 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고, 유기상을 분리하였다. 합한 유기상 (2개의 배치를 합함)을 물 (1700 mL x 3)로 세척하고, ~1500 mL (KF<0.05%)로 농축시켰다. 생성물을 이소프로필 아세테이트 용액으로 저장하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-벤조에이트.2개의 배치 (각각 ~375 g)를 병렬로 진행시켰다. 메틸 3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-메틸-벤조에이트 (~375 g, 1.34 mol)의 이소프로필 아세테이트 용액에 N-브로모석신이미드 (274 g, 1.54 mol) 및 아조비스이소부티로니트릴 (4.40 g, 26.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 적어도 1시간에 걸쳐 70℃로 가열하고, 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 20℃에서 적어도 1시간 동안 유지시켰다. 2개 배치의 고체 (석신이미드)를 여과로 제거하고, 이소프로필 아세테이트 (700 mL)로 세척하였다. 여액을 물 (6000 mL) 중 아황산나트륨 (700 g)의 용액에 이어서 물 (1500 mL)로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 45℃에서 증류 건조시켜 메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-벤조에이트 (920 g, 95.5% 수율)를 진한 오렌지색 오일로서 수득하였다. 1H NMR:400　MHz DMSO-d 6 δ:7.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 1.02 (s, 9H), 0.29 (s, 6H).
메틸 5-아미노-4-[4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트. 아세토니트릴 (2.50 L) 중 메틸 4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트 하이드로클로라이드 (74.5 g, 379 mmol)의 교반된 용액에 메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시-벤조에이트 (125 g, 348 mmol)를 첨가하였다. 현탁액에 투입 깔때기를 통해 디이소프로필에틸아민 (89.9 g, 696 mmol)을 10분에 걸쳐 첨가한 다음, 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (1.0 L)로 희석하고, HCl (1N, 1.0 L), 중탄산나트륨 (포화1.0 L) 및 염수 (1.0 L)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 농축시켜 조악한 메틸 5-아미노-4-[4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트 (108 g, 조물질)를 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: m/z 407.3 [M+1]+.
메틸 5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소-이소인돌린-2-일)-5-옥소-펜타노에이트. N,N-디메틸포름아미드 (350 mL) 중 메틸 5-아미노-4-[4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트 (108 g, 266 mmol)의 교반된 차가운 용액에 물 (40 mL) 중 탄산칼륨 (14.7 g, 106 mmol)을 5분에 걸쳐 나누어 첨가하였다. 수득한 반응 혼합물을 15℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을빙욕에서 냉각시키고, HCl (12 M, 15 mL)을 0-5℃에서 천천히 첨가하였다. 아세토니트릴 (200 mL)을 혼합물에 첨가하고, 침전물이 형성되었다. 현탁액을 실온에서 10분 동안 교반하고, 여과하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (200 mL x 5)로 세척하여 생성물 (55 g)을 수득하였다. 여액을 고진공 하에 농축시켜 조 생성물 (100 g)을 수득하고, 이것을 디클로로메탄 (1.0 L)에 용해시키고, 15℃에서 16시간 동안 방치하였다. 백색 고체가 형성되었고, 이를 여과하여 5 g의 생성물을 수득하였다. 고체를 합하여 메틸 5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소-이소인돌린-2-일)-5-옥소-펜타노에이트 (60 g, 77% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR:400　MHz DMSO-d 6 δ:7.58 (s, 1H), 7.31 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.19--7.14 (m, 2H), 7.01 (d, J　= 7.6 Hz, 1H), 4.75-4.71 (m, 1H), 4.50 (d, J　= 17.6 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.51 (s, 3H), 2.29-2.18 (m, 3H), 2.09-1.99 (m, 1H).
메틸 5-아미노-4-[4-[[4-(브로모메틸)페닐]메톡시]-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트. 2개의 반응 (25 g, 85.5 mmol)을 병렬로 진행시켰다. 아세토니트릴 (1 L) 중 1,4-비스(브로모메틸)벤젠 (67.7g, 257 mmol), 탄산칼륨 (11.8 g, 85.5 mmol) 및 메틸 5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소-이소인돌린-2-일)-5-옥소-펜타노에이트 (25 g, 85.5 mmol)의 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 2개 배치를 합하고, 혼합물을 15℃로 냉각시키고 여과하였다. 여액을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 중50 % 석유 에테르에서 100% 에틸 아세테이트로 용출됨)로 정제하여 메틸 5-아미노-4-[4-[[4-(브로모메틸)페닐]메톡시]-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트 (52 g, 63% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR:400 MHz DMSO-d 6 δ:7.59 (s, 1H), 7.50-7.44 (m, 5H), 7.32-7.28 (m, 2H), 7.19 (s, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.79-4.71 (m, 3H), 4.55 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.52 (s, 3H), 2.30-2.19 (m, 3H), 2.10-2.08 (m, 1H).
3-[4-[[4-(브로모메틸)페닐]메톡시]-1-옥소-이소인돌린-2-일]피페리딘-2,6-디온. 2개의 반응 (28.5 g, 60.0 mmol)을 병렬로 진행시켰다. 메틸 5-아미노-4-[4-[[4-(브로모메틸)페닐]메톡시]-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트 (28.5 g, 60.0 mmol)를 테트라하이드로푸란 (720 mL)에 용해시키고, 상기 용액을 드라이아이스/아세톤 욕에서 -70℃로 냉각시켰다. 교반하면서, 칼륨 tert-부톡사이드 (7.4 g, 66.0 mmol)를 투명한 용액에 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물이 담황색으로 변하고, -70℃에서 추가의 2시간 동안 교반을 계속하였다. -70℃의 온도를 유지하면서 HCl의 냉각된 용액 (1N, 260 mL)을 반응 혼합물로 빠르게 옮겼다. 혼합물이 즉시 유백색으로 변하고, 드라이아이스/아세톤 욕을 제거하였다. 혼합물을 농축시켜 대부분의 테트라하이드로푸란을 제거하였다. 반응 혼합물의 농축시, 백색 고체가 침전되었다. 백색 슬러리를 물 (500 mL)로 희석한 다음, 여과하였다. 필터 케이크를 물 (500 mL)로 세척하고, 40℃에서 12시간 동안 진공 오븐에서 건조시킨 다음, 에틸 아세테이트 (500 mL)로 세척하였다. 배치를 합하여 3-[4-[[4-(브로모메틸)페닐]메톡시]-1-옥소-이소인돌린-2-일]피페리딘-2,6-디온 (49.85 g, 93%)을 담황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR:400 MHz DMSO-d 6 δ:10.95 (s, 1H), 7.51-7.41 (m., 5H), 7.35-7.28 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 5.12-5.07 (m, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.41 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 2.90-2.84 (m, 1H), 2.58-2.53 (m, 1H), 2.44-2.41 (m, 1H), 1.98-1.95 (m, 1H).
4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴..3-(4-((4-(브로모메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (5.0 g, 11.28 mmol)을 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴 (2.315 g, 11.28 mmol), 디이소프로필에틸아민 (5.91 ml, 33.8 mmol), 및 아세토니트릴 (100 ml)이 있는 플라스크에 넣었다. 반응 혼합물을 40℃에서 18시간 동안 교반하였다. 휘발성 유기물을 감압 하에 제거하고, 표준 방법으로 정제하여 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴을 제공하였다. 1H　NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.97 (s, 1H), 7.68 (dd, J=1.96, 13.45 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=1.77, 8.38 Hz, 1H), 7.43-7.52 (m, 3H), 7.30-7.38 (m, 4H), 7.11 (t, J=8.80 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.11 (dd, J=5.14, 13.33 Hz, 1H), 4.37-4.46 (m, 1H), 4.22-4.30 (m, 1H), 3.54 (s, 2H), 3.12-3.23 (m, 4H), 2.84-2.98 (m, 1H), 2.52-2.62 (m, 5H), 2.36-2.48 (m, 1H), 1.92-2.04 (m, 1H). MS (ESI) m/z 568.2 [M+1]+. 하기에 대한 분석:계산치 C32H30FN5O4:C, 67.71; H, 5.33; N, 12.34.실측치;C, 67.50; H, 5.44; N 12.34.
실시예 2:(S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 (화합물 2)의 합성
tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-(벤질옥시카보닐아미노)-5-옥소-펜타노에이트. 1,4-디옥산 (1.50 L) 중 (2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-5-t-부톡시-5-옥소-펜탄산 (150 g, 445 mmol)의 용액에 디-t-부틸 디카보네이트 (155 g, 711 mmol), 피리딘 (70.3 g, 889 mmol) 및 중탄산암모늄 (105 g, 1.33 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (5.0 L) 및 물 (5.0 L)에 용해시키고, 유기층을 분리하고, HCl (3.0 mL, 1 N), 포화된 중탄산나트륨 (3.0 L), 염수 (3.0 L)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조악한 tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-(벤질옥시카보닐아미노)-5-옥소-펜타노에이트 (450 g, 조물질)를 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. 1H NMR 400 MHz DMSO-d 6 δ:7.35-7.30 (m, 5H), 7.02 (s, 1H), 5.01 (d, J　=　3.2 Hz, 1H), 3.93-3.90 (m, 1H), 2.20 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.88-1.84 (m, 1H), 1.72-1.69 (m, 1H), 1.35 (s, 9H).
tert-부틸 (4S)-4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트.메탄올 (1.0 L) 중 tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-(벤질옥시카보닐아미노)-5-옥소-펜타노에이트 (112 g, 333 mmol)의 용액에 질소 하에 10% 탄소상 팔라듐 (15 g)을 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기시키고, 수소로 수회 퍼징하였다. 혼합물을 수소 가스 (40 psi) 하에 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액을 농축시켜 조악한 tert-부틸 (4S)-4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR 400 MHz DMSO-d 6 δ:7.30 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 3.10-3.07 (m, 1H), 2.27-2.23 (m, 2H), 1.69-1.78 (m, 1H), 1.59-1.55 (m, 1H), 1.38 (s, 9H).
메틸 3-하이드록시-2-메틸-벤조에이트.4개의 배치 (각각 200 g)를 병렬로 진행시켰다. 메탄올 (4.0 L) 중 3-하이드록시-2-메틸-벤조산 (200 g, 1.31 mol)의 용액에 진한 황산 (47.7 g, 486 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 800 mL로 농축시켰다. 생성된 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 30분에 걸쳐 물 (400 mL)에 천천히 부어넣었다. 물 (1200 mL)을 20℃에서 3시간에 걸쳐 첨가하고, 생성된 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 진공 여과로 수집하고 (4개 배치를 합함) 물/메탄올 (1000 mL, 9:1)로 또는 여액이 pH > 3을 가질 때까지 3회 세적하였다. 고체를 진공 하에 45℃에서 건조시켜 메틸 3-하이드록시-2-메틸-벤조에이트 (700 g, 80.4% 수율)를 회색 고체로서 수득하였다. 1H NMR:400 MHz DMSO-d 6 δ:9.70 (s, 1H), 7.18 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.00 (t, J　=　6.8　Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.29 (s, 3H).
메틸 3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-메틸-벤조에이트.. 2개 배치 (각각 240 g)를 병렬로 진행시켰다. N,N-디메틸포름아미드 (1.40 L) 중 메틸 3-하이드록시-2-메틸-벤조에이트 (240 g, 1.44 mol)의 용액에 5℃에서 이미다졸 (246 g, 3.61 mol) 및 tert-부틸 디메틸실릴 클로라이드 (238 g, 1.58 mol)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 최대 20℃로 가온하고, 6시간 동안 교반하였다. 이소프로필 아세테이트 (1700 mL)를 첨가한 다음, 온도를 30℃ 이하로 유지하면서 물 (2000 mL)을 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 교반에 이어서 유기상을 분리하였다. 합한 유기물 (2개 배치를 합함)을 물 (1700 mL x 3)로 세척하고, ~1500 mL (KF<0.05%)로 농축시켰다. 생성물을 이소프로필 아세테이트 용액으로 저장하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-벤조에이트.2개의 배치 (각각 ~375 g)를 병렬로 진행시켰다. 메틸 3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-메틸-벤조에이트 (~375 g, 1.34 mol)의 이소프로필 아세테이트 용액에 N-브로모석신이미드 (274 g, 1.54 mol) 및 아조비스이소부티로니트릴 (4.40 g, 26.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 적어도 1시간에 걸쳐 70℃로 가열하고, 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 20℃에서 적어도 1시간 동안 유지시켰다. 2개 배치의 고체 (석신이미드)를 여과로 제거하고, 이소프로필 아세테이트 (700 mL)로 세척하였다. 여액을 물 (6000 mL) 중 아황산나트륨 (700 g)으로 세척함에 이어서 물 (1500 mL)로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 45℃에서 증류 건조시켜 메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-벤조에이트 (920 g, 95.5% 수율)를 진한 오렌지색 오일로서 수득하였다. 1H NMR:400　MHz DMSO-d 6 δ:7.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 1.02 (s, 9H), 0.29 (s, 6H).
tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-[4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트. 아세토니트릴 (4.0 L) 중 tert-부틸 (4S)-4,5-디아미노-5-옥소-펜타노에이트 (130 g, 643 mmol)의 용액에 메틸 2-(브로모메틸)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-벤조에이트 (210 g, 584 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (113 g, 877 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 대부분의 아세토니트릴을 제거하고, 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르 (2.0 L) 및 물 (1.5 L)에 용해시키고, 유기층을 포화 인산일칼륨 (1.0 L x 2), 염수 (1.0 L)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조악한 tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-[4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-옥소-이소인돌린-2-일]-5-옥소-펜타노에이트 (524 g)를 수득하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소-이소인돌린-2-일)-5-옥소-펜타노에이트. 메탄올 (2.0 L) 중 tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-[4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-옥소-이소인돌린 -2-일]-5-옥소-펜타노에이트 (275 g, 613 mmol)의 용액에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 3수화물 (38.7 g, 123 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 대부분의 메탄올을 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄/물 (3 L/2 L)에 용해시키고, 유기층을 분리하고, 염수 (1.0 L)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조악한 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 생성물 (260 g)을 수득하였다. 생성물을 아세토니트릴 (750 mL)에 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하고, 18℃로 냉각시키고, 추가로 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 케이크를 건조시켜 tert-부틸 (4S)-5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소-이소인돌린-2-일)-5-옥소-펜타노에이트 (248 g, 60.5% 수율)를 회색 고체로서 수득하였다. 1H NMR 400 MHz DMSO-d 6 δ:　10.00 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.29 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.72-4.68 (m, 1H), 4.49-4.28 (m, 2H), 2.17-1.97 (m, 4H), 1.31 (s, 9H).
4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴.1,4-비스(클로로메틸)벤젠 (51.2 g, 292 mmol)을 아세토니트릴 (195 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드 (195 mL)가 있는 플라스크에 넣었다. 반응 혼합물을l 모든 고체가 용해될 때까지 주위 온도에서 교반하였다. 이어서, 디이소프로필아민 (51.1 mL, 292 mmol)을 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴(20 g, 97 mmol)과 함께 첨가하였다. 반응을 1시간 동안 60℃로 가열하였다. 아세토니트릴을 감압하에 제거하였다. 나머지 혼합물을 에틸 아세테이트 (1.0 L), 물 (700 mL), 및 염수 (300 mL) 사이에 분배시켰다유기층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 휘발성 유기물을 감압 하에 합하고 제거하였다. 고체를 최소의 디클로로메탄에 용해시키고, 실리카 겔 컬럼 (3 L 초과의 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트) 상에서 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 휘발성 유기물을 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 최소의 디클로로메탄에 용해시키고, 실리카 겔 컬럼 (800 mL 초과의 헥산 중 10% 등용매 에틸 아세테이트에 이어서 4 L 초과의 헥산 중 20-80% 에틸 아세테이트) 상에서 2회 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 휘발성 유기물을 감압 하에 제거하여 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 (22.7 g, 66.0 mmol, 67.7% 수율)을 황백색 고체로서 수득하였다. 1H　NMR (400 MHz, CDCl3) δ　ppm 7.33 - 7.39 (m, 5 H) 7.29 (d, J=1.96 Hz, 1 H) 7.25 (d, J=1.96 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=8.56 Hz, 1 H) 4.60 (s, 2 H) 3.58 (s, 2 H) 3.19 - 3.27 (m, 4 H) 2.58 - 2.66 (m, 4 H). MS　(ESI) m/z 344.2 [M+1]+.
(S)-tert-부틸 5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트.. (S)-tert-부틸 5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (22.05 g, 65.9 mmol)를 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 (22.67 g, 65.9 mmol), 탄산칼륨 (18.23 g, 132 mmol), 및 N,N-디메틸포름아미드 (330 mL)가 있는 플라스크에 넣었다. 반응 혼합물을 16시간 동안 45℃로 가열하였다. 반응을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하여 여과하였다. 여액을 에틸 아세테이트 (900 mL) 및 물 (600 mL) 및 염수 (200 mL)로 분배하였다. 유기층을 단리하고 물 (600 mL)로 세정하였다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 휘발물을 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 처리하고, 휘발물을 감압 하에 제거하여 (S)-tert-부틸 5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (44.02 g, 68.6 mmol, 104% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. 일부 DMF가 남아 있기 때문에 수율은 약간 정량 이상이었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.43 - 7.49 (m, 2 H) 7.40 (s, 4 H) 7.36 (dd, J=8.38, 1.28 Hz, 1 H) 7.29 (d, J=1.96 Hz, 1 H) 7.26 (d, J=1.83 Hz, 1 H) 7.11 (dd, J=7.64, 1.16 Hz, 1 H) 6.92 (t, J=8.50 Hz, 1 H) 6.23 (br s, 1 H) 5.24 - 5.32 (m, 1 H) 5.15 (s, 2 H) 4.86 - 4.94 (m, 1 H) 4.38 - 4.55 (m, 2 H) 3.61 (s, 2 H) 3.18 - 3.32 (m, 4 H) 2.58 - 2.70 (m, 4 H) 2.09 - 2.47 (m, 4 H) 1.43 (s, 8 H). MS (ESI) m/z 642.4 [M+1]+.
(S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴..(S)-tert-부틸 5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (12.1 g, 18.86 mmol)를 아세토니트릴 (189 mL) 및 벤젠설폰산 (3.96 g, 24.51 mmol)이 있는 바이알에 넣었다. 반응 혼합물을 진공 하에 배치하고 질소로 퍼징하였다. 이를 한번 더 반복하고, 혼합물을 이어서 질소 대기하에 밤새 85℃로 가열하였다. 따뜻한 반응 혼합물을 디클로로메탄 (1000 mL) 및 에틸 아세테이트 (300 mL)를 함유하는 2개의 분별 깔때기에 직접 부어넣었다. 이러한 혼합물에 중탄산나트륨 (900 mL), 물 (100 mL), 및 염수 (450 mL)의 포화 용액을 첨가하였다. 유기층을 단리하고, 수성층을 디클로로메탄 (800 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축하였다. 표준 방법으로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H　NMR (400　MHz, DMSO-d 6) δ ppm 10.96 (s, 1 H) 7.68 (dd, J=13.45, 1.83 Hz, 1 H) 7.56 (dd, J=8.44, 1.83 Hz, 1 H) 7.43 - 7.52 (m, 3 H) 7.29 - 7.39 (m, 4 H) 7.11 (t, J=8.80 Hz, 1　H) 5.24 (s, 2 H) 5.11 (dd, J=13.20, 5.14 Hz, 1 H) 4.22 - 4.46 (m, 2 H) 3.54 (s, 2 H) 3.12 - 3.22 (m, 4 H) 2.85 - 2.97 (m, 1 H) 2.53 - 2.62 (m, 2 H) 2.38 - 2.48 (m, 2 H) 1.93 - 2.03 (m, 1 H). MS (ESI) m/z 568.2 [M+1]+.
실시예 3: (S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 (화합물 2)의 합성
4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드. 톨루엔 (1400 mL) 중 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴 (100 g)의 용액에 25℃에서 아세트산 (28 mL)으로 충전하고, 반응 혼합물을 30분 동안 유지하였다. 4-(클로로메틸)벤즈알데하이드 (79 g)을 25℃에서 충전하고, 혼합물을 2시간 동안 유지하였다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (각각 52 g)를 30분마다 3회 25℃에서 충전하였다. 혼합물을 25℃에서 약 10시간 동안 진탕하였다. 배치 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 물 (600 mL)을 1 시간에 걸쳐 충전하였다. 대부분의 하부층을 분리하였다. 혼합물을 여과하고, 하부층을 분리하였다. 유기층을 물 (200 mL)로 세정하였다. 유기층에 IPA (75 mL), IPA (8 ml) 중 5-6 N HCl에 이어서 톨루엔 (20 ml) 중 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드 씨드 (2 g)의 슬러리를 충전하였다. 상기 혼합물에 25℃에서 2시간에 걸쳐 IPA (115 ml) 중 5-6 N HCl을 충전하였다. 혼합물을 약 10시간 동안 유지한 다음, 여과하여 조악한 고체를 수득하였다. 고체를 톨루엔 (400 ml)으로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드를 담황색 고체 (152 g, 82% 수율)로서 수득하였다. 1H　NMR (300　MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.82 (s, 1H), 7.50-7.79 (m, 6H), 7.18-7.24 (m, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.38-4.39 (m, 2H), 3.44-3.70 (m, 2H), 3.14-3.44 (m, 6H).
tert -부틸 (S)-5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 타르트레이트. DMF (600 ml) 중 (4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드 (100 g)와 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (97 g)의 혼합물에 탄산칼륨 (K2CO3) (75 g)을 35℃에서 충전하고, 반응 혼합물을 24시간 동안 유지하였다. 상기 혼합물에 트리에틸아민 (11 ml)을 충전하고, 혼합물을 45℃에서 약 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 EtOAc (1 L) 및 수성 탄산칼륨 용액 (5%, 500 mL)을 충전하였다. 유기층을 수성 염화나트륨 용액 (5%, 500 mL)으로 세척하였다. 상기 혼합물에 Ecosorb C948 E-pak (30 g)을 충전하고, 혼합물을 2시간 동안 유지하였다. 혼합물을 여과하였다. 혼합물에 메탄올 (850 mL) 중 L-타르타르산 (47 g)의 용액을 45℃에서 충전하고, 혼합물을 2시간 동안 유지하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시켰다. 고체를 여과하여 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트의 타르트레이트 염을 수득하였다. (145 g, 70% 수율). 1H　NMR (300　MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.31 (s, 9H), 1.87 - 2.27 (m, 4H), 2.55 (br s, 4H), 3.18 (br s, 4H), 4.29 (s, 2H), 4.36 - 4.62 (m, 2H), 4.71 (dd, J = 4.2, 10.0 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 7.10 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.29 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.33 - 7.40 (m, 2H), 7.40 - 7.51 (m, 3H), 7.51 - 7.63 (m, 2H).
(S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴.. 2-메틸테트라하이드로푸란 (1 L) 중 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (100 g)의 타르트레이트 염의 용액을 수성 탄산칼륨 용액 (10%, 85 mL)으로 세척하였다. 하부층을 분리하였다. 용매 2-메틸테트라하이드로푸란을 아세토니트릴로 교환하여 용액을 수득하였다. 상기 용액에 아세토니트릴 (200 ml) 중 벤젠설폰산 (60 g)을 2시간에 걸쳐 70℃에서 첨가하였다. 표준 방법으로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H　NMR (400　MHz, DMSO-d 6) δ ppm 10.96 (s, 1 H) 7.68 (dd, J=13.45, 1.83 Hz, 1 H) 7.56 (dd, J=8.44, 1.83 Hz, 1 H) 7.43 - 7.52 (m, 3 H) 7.29 - 7.39 (m, 4 H) 7.11 (t, J=8.80 Hz, 1　H) 5.24 (s, 2 H) 5.11 (dd, J=13.20, 5.14 Hz, 1 H) 4.22 - 4.46 (m, 2 H) 3.54 (s, 2 H) 3.12 - 3.22 (m, 4 H) 2.85 - 2.97 (m, 1 H) 2.53 - 2.62 (m, 2 H) 2.38 - 2.48 (m, 2 H) 1.93 - 2.03 (m, 1 H). MS (ESI) m/z 568.2 [M+1]+.
실시예 4: (S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 (화합물 2)의 합성
4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드. 톨루엔 (1400 mL) 중 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴 (100 g)의 용액에 아세트산 (28 mL)을 25℃에서 충전하고, 혼합물을 30분 동안 유지하였다. 4-(클로로메틸)벤즈알데하이드 (79 g)를 25℃에서 충전하고, 혼합물을 2시간 동안 유지하였다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (각각 52 g)를 30분마다 3회 25℃에서 충전하였다. 혼합물을 25℃에서 약 10시간 동안 진탕하였다. 배치 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 물 (600 mL)을 1 시간에 걸쳐 충전하였다. 대부분의 하부층을 분리하였다. 혼합물을 여과하고, 하부층을 분리하였다. 유기층을 물 (200 mL)로 세정하였다. 유기층에 IPA (75 mL), IPA (8 mL) 중 5-6 N HCl에 이어서 톨루엔 (20 mL) 중 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드 씨드 (2 g)의 슬러리를 충전하였다. 상기 혼합물에 IPA (115 mL) 중 5-6 N HCl을 2시간에 걸쳐 25℃에서 충전하였다. 혼합물을 약 10시간 동안 유지한 다음, 여과하여 조악한 고체를 수득하였다. 고체를 톨루엔 (400 mL)으로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드를 백색 고체 (152 g, 82% 수율)로서 수득하였다. 1H　NMR (300　MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.82 (s, 1H), 7.50-7.79 (m, 6H), 7.18-7.24 (m, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.38-4.39 (m, 2H), 3.44-3.70 (m, 2H), 3.14-3.44 (m, 6H).
tert -부틸 (S)-5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트. 디메틸설폭사이드 (DMSO) (700 mL) 중 4-(4-(4-(클로로메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴 하이드로클로라이드 (100 g)와 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(4-하이드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (88 g)의 혼합물에 탄산칼륨 (K2CO3) (73 g)을 35℃에서 충전하고, 혼합물을 24시간 동안 유지하였다. 상기 혼합물에 EtOAc (1.2 L) 및 물 (1.1 L)을 충전하였다. 유기층을 수성 염화나트륨 용액 (5%, 1 L)으로 세척하였다. 상기 혼합물에 n-헵탄 (200 mL)을 충전하였다. 혼합물을 수성 아세트산 (3%, 1 L), 물 (1 L), 수성 K3PO4 용액 (20%, 10 L), 및 물 (10 L)로 세척하였다. 용매를 약 1.2 L로 증류시켰다. 혼합물을 n-헵탄으로 결정화하여 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (143 g, 85% 수율)를 수득하였다. 1H　NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.43 - 7.49 (m, 2 H) 7.40 (s, 4 H) 7.36 (dd, J=8.38, 1.28 Hz, 1 H) 7.29 (d, J=1.96 Hz, 1 H) 7.26 (d, J=1.83 Hz, 1 H) 7.11 (dd, J=7.64, 1.16 Hz, 1 H) 6.92 (t, J=8.50 Hz, 1 H) 6.23 (br s, 1 H) 5.24 - 5.32 (m, 1 H) 5.15 (s, 2 H) 4.86 - 4.94 (m, 1 H) 4.38 - 4.55 (m, 2 H) 3.61 (s, 2 H) 3.18 - 3.32 (m, 4 H) 2.58 - 2.70 (m, 4 H) 2.09 - 2.47 (m, 4 H) 1.43 (s, 8 H).
(S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일)-3-플루오로벤조니트릴.. 아세토니트릴 (1 L) 중 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(4-((4-((4-(4-시아노-2-플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (100 g)의 용액을 70℃로 유지하였다. 상기 용액에 아세토니트릴 (200 mL) 중 벤젠설폰산 (74 g)을 70℃에서 2시간에 걸쳐 첨가하였다. 표준 방법으로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H　NMR (400　MHz, DMSO-d 6) δ ppm 10.96 (s, 1 H) 7.68 (dd, J=13.45, 1.83 Hz, 1 H) 7.56 (dd, J=8.44, 1.83　Hz, 1 H) 7.43 - 7.52 (m, 3 H) 7.29 - 7.39 (m, 4 H) 7.11 (t, J=8.80 Hz, 1　H) 5.24 (s, 2　H) 5.11 (dd, J=13.20, 5.14 Hz, 1 H) 4.22 - 4.46 (m, 2 H) 3.54 (s, 2 H) 3.12 - 3.22 (m, 4　H) 2.85 - 2.97 (m, 1 H) 2.53 - 2.62 (m, 2 H) 2.38 - 2.48 (m, 2 H) 1.93 - 2.03 (m, 1 H). MS (ESI) m/z 568.2 [M+1]+.
실시예 5: 4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일-2,2,3,3,5,5,6,6-d 8 )-3-플루오로벤조니트릴
3-플루오로-4-(피페라진-1-일-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)벤조니트릴..무수 DMA (6 mL) 중 3,4-디플루오로벤조니트릴 (278 mg, 2.00 mmol) 및 피페라진-2,2,3,3,5,5,6,6-d8 (942 mg, 10.0 mmol)의 용액을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 혼합하면서 H2O (60 mL)에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 EtOAc (3X)로 추출하고, 유기 부분을 합하고, 포화 NaCl (3X)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류 무색 시럽을 진공 하에 건조시켜 조 생성물을 백색 고체 (599 mg)로서 수득하였다. 고체를 EtOAc에 용해시키고, 용액을 H2O (3X), 포화 수성 NaCl (3X)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 건조된 용액을 여과하고, 농축시키고, 잔류물을 진공에서 건조시켜 표제 화합물 (447 mg, 105%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI) m/z 214.2 [M+H]+.
4-(4-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페라진-1-일-2,2,3,3,5,5,6,6-d 8 )-3-플루오로벤조니트릴. 무수 DMF (5.0 mL) 중 3-[4-[[4-(브로모메틸)페닐]메톡시]-1-옥소-이소인돌린-2-일]피페리딘-2,6-디온 (736 mg, 1.66 mmol) 및 3-플루오로-4-(피페라진-1-일-2,2,3,3,5,5,6,6-d8)벤조니트릴 (425 mg, 1.99 mmol)의 용액에 DIEA (0.870 mL, 4.99 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 (0.45 μm 나일론 막), 용액을 표준 방법으로 정제하여 표제 생성물 (532 mg, 56%)을 수득하였다. LCMS (ESI) m/z 576.4 [M+H]+.
실시예 6: 다발성 골수종에 대한 항증식 및 아폽토시스 촉진 효과.
세포 배양 재료:인간 다발성 골수종 세포주는 판매자로부터 구입하였고 표 1에 지적된 바와 같은 배지에서 5% CO2와 함께 37℃에서 배양하였다. 레날리도마이드 및 포말리도마이드 내성 세포주는 이전에 일반적으로 기재된 바와 같은 방법에 의해 수득하였다(참조: Lopez-Girona et al Leukemia 2012; 26(11):2335)). 모든 세포주는 로그 단계에 유지시키고, 세포 밀도 및 생존능은 Vi­세포 XR 세포 생존능 분석기(Beckman Coulter, Brea, CA)를 사용한 트립판 블루 배척에 의해 모니터링하였다.
시험된 다발성 골수종 세포주
MM 세포주 판매자/공급원 카탈로그 번호 배양 조건
NCI-H929 ATCC (Manassas, VA) CRL-9068 RPMI-1640, 10% FBS
NCI-H929-1051 사내에서 개발되고 레날리도마이드에 저항성이도록 하였음 NA RPMI-1640, 10% FBS
OPM2 DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-50 RPMI-1640, 10% FBS
OPM2-P10 사내에서 개발되고 10 μM의 포말리도마이드에 저항성이도록 하였음 NA RPMI-1640, 10% FBS
시험 제품 용액의 제조: 화합물을 검정 384-웰 플레이트 (Corning Inc.)에 50 μL의 최대 용적으로 하였을 때 0.1%의 최종 DMSO 용적이 되도록 플레이팅하였다. 1:3의 희석과 함께 10 μM에서 개시하는 10-포인트 용량 반응은 EDC ATS-100 플랫폼을 사용한 어쿠스틱 디스펜스 (acoustic dispense)에 의해 2회 프린팅하였다. 대안적으로, 1:10 희석과 함께 10 μM에서 개시하거나 1:3 희석과 함께 100 nM에서 개시하는 10-포인트 용량 반응을 사용하였다.
세포 증식 검정: 혈액학적 세포주의 증식/생존능에 대한 화합물의 효과 (표 1)는 제조업자의 지침에 따라 CTG (Promega)를 사용하여 120시간 항온배양 후 평가하였다. 혈액학적 세포주는 멀티드롭 콤비 시약 디스펜서(Multidrop Combi Reagent Dispenser) (Thermo Scientific, Waltham, MA)에 의해 총 50 μL 용적 중 mL 당 0.1 x 106 세포의 농도로 화합물 플레이트에 분주하였다. 120 시간에, CTG의 웰 당 25 μL를 멀티드롭 콤비 시약 디스펜서에 의해 분주하고 생존 세포에 의한 아데노신 트리포스페이트(ATP) 방출은 엔비젼 플랫폼 (Envision platform)을 사용하여 30분 후 상대적 발광 단위로서 측정하였다.
세포 아폽토시스 검정: 화합물이 아폽토시스를 유도하는능력은 지정된 시점 및 화합물 농도에서 선택된 MM 세포주에서 평가하였다. 아폽토시스의 마커로서, 카스파제-3 활성 수준은 생존 세포 이미지화를 사용하여 MM 세포에서 측정하였다. 현탁 세포를 이미지화하기 위해, 96-웰 플레이트는 피브로텍틴으로 코팅하여 세포가 접착하여 플레이트 바닥 상에 편평한 상태로 있도록 하였다. 세포를 화합물 첨가 전날 밤에 멀티드롭 콤비 시약 디스펜서 (Thermo Scientific, Waltham, MA)를 사용하여 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 화합물을 Hewlett-Packard D300 디지탈 디스펜서 (Tecan, Mannedorf, Switzerland))를 사용하여 96-웰 플레이트의 적당한 웰내로 세포의 상부에 점적하였다. MM 세포주는 화합물로 처리하고 6시간 째에 배지를 생체내 화합물 턴오버를 모방하기 위해 변화시켜 화합물 농도의 약 20-배 희석을 유도한다. 세포는 NucView 488 카스파제-3 효소 기질 (Biotium)의 존재하에 성장시키고 표준 항온배양이기에 내장된 IncuCyte ZOOM 생존-세포 분석 시스템 (Essen Bioscience, Ann Arbor, MI)에서 항온배양하였다. 각각의 웰에서 카스파제-3 효소 기질의 절단 및 세포 컨플루언스는 5일 동안 4-6시간 마다 IncuCyte ZOOM 시스템 상에서 10x로 이미지화함에 의해 검출하였다. 각각의 웰/조건은 동일한 플레이트 상에서 중복으로 전개하고 각각의 조건은 각각의 시점에서 포착된 4개의 10x 이미지의 평균이었다.
결과. 화합물 1 및 화합물 2는 MM 세포주에 대한 항증식 활성을 입증한다. 본 연구를 위해 선택된 MM 세포주는 계통 민감성이고 클리닉에서 골수종 환자를 치료하기 위해 사용되는 2개의 제제인 레날리도마이드 및/또는 포말리도마이드 (표 1)에 저항성이었다. 증식은 CellTitre-Glo® 검정을 사용하여 평가하였다. 화합물로 항온배양된 배양물에 대한 결과는 각각의 세포주에 대한 대조군 배양물에 대한 결과로 정규화하였다. 화합물에 의한 세포 성장의 억제를 위한 IC50은 ActivityBase 소프트웨어를 사용하여 각각의 세포주에 대해 결정하였다. 화합물 1 및 화합물 2는 120시간 후 배지에 존재하는 ATP 수준의 정량적 평가에 의해 결정된 바와 같이 4개의 세포주에서 세포 증식을 강력하게 억제하였다. 화합물 1 및 화합물 2의 항증식 IC50 값은 0.07 nM 내지 19 nM의 범위였다 (표 2). 화합물 1 및 화합물 2는 레날리도마이드- 및/또는 포말리도마이드-내성인 세포주에 대해서도 매우 강한 다발성 골수종 항-증식 활성을 보여주었다.
액체 배양물 중 MM 세포주에서 화합물 1 및 화합물 2에 의한 세포 성장의 억제
화합물번호 NCI-H929
120h
IC50 		NCI-H929.1051
120h
IC50 		OPM-2
120h
IC50 		OPM-2.P10
120h
IC50
1 <0.5 nM 2.5 nM <0.5 nM 19 nM
2 0.07 nM 1.0 nM 0.07 nM 4.3 nM
화합물 1은 다발성 골수종 세포주에서 아폽토시스를 유도하였다. MM 세포주에서 아폽토시스에 대한 화합물의 효과를 조사하였다. 아폽토시스를 유도하는 화합물의 능력을 결정하고 상기 프로세스의 개시를 동력학적으로 특징 분석하기 위해, 카스파제-3 유도는 레날리도마이드-내성 H929-1051 세포에서 시간 경과에 따라 측정하였다(도 1). H929-1051 세포는 1 nM, 10 nM, 100 nM 및 1000 nM의 농도에서 화합물로 항온배양하고 아폽토시스는 시간 경과에 따라 평가하였다. 결과는 H929-1051 세포에 대해, 모든 농도의 화합물 1이 약 48시간의 항온배양에 시작하고 ~72시간의 항온배양에 최대 유도 근처에 도달하는 아폽토시스를 유도함을 보여주었다. 이어서, 곡선하 면적 (AUC)은 각각의 농도에 대해 계산하였고 각각의 화합물에 대한 농도-반응 곡선을 작성하기 위해 사용하였다. 이것은 H929-1051에서 아폽토시스를 유도하는 화합물 1의 능력의 정량적 증거를 제공하였다. 놀랍게도, 화합물 1에 의한 아폽토시스 유도는 이전에 보고된 화합물 3-(4-((4-((4-(2,4-디플루오로페닐)피페라진-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (미국 특허 제8,518,972호에서 실시예 5.285) (화합물 A)에 대해 관찰된 아폽토시스 유도보다 상당히 높았다. 도 1b에 나타낸 바와 같이, 화합물 1에 의한 아폽토시스 유도 (총 AUC에 의해 측정된 바와 같이)는 화합물 A에 의한 아폽토시스 유도와 비교하여 거의 30% (126%)까지 증가하였다.
덱사메타손과의 조합. 화합물 2 단독 또는 덱사메타손과의 조합 활성과 함께 포말리도마이드의 활성은 MM 세포주의 패널에 걸쳐 평가하였다. 도 2는 레날리도마이드-내성 H929-1051 세포주에서 용량-반응 곡선의 대표적 세트이고, 이는 단일 제제 화합물 2가 포말리도마이드-덱사메타손 조합 보다 10배 더 강력하고 거의 효과적었음을 입증한다(도 2, 패널 A). 놀랍게도, 화합물 2가 덱사메타손과 조합되는 경우, 이것은 보다 강력한 반응을 생성시킬 뿐만 아니라 상기 효능은 또한 급격히 개선되어 (도 2, 패널 B); 거의 완전한 세포 사멸이 성취된다. 표 3은 H929-1051 세포주에서 수행되는 단일 제제 및 덱사메타손 조합 연구의 효능 (IC50)을 요약한다. 레날리도마이드-내성 세포 (H929-1051)에서 단일 제제 포말리도마이드 또는 화합물 2 중 어느 하나, 및 1, 0.1, 또는 0.01 μM의 덱사메타손 (Dex)과의 조합의 IC50을 열거한다. 각각의 IC50은 적어도 3개의 독립적 실험으로부터의 평균 값이다. 증식은 세포 역가-Glo를 사용하여 5일 째에 모니터링하였다. 일관되게, 덱사메타손과 조합된 화합물 2는 덱사메타손과 조합된 포말리도마이드보다 더 급격히 활성이었고 상기 증가된 활성은 덱사메타손의 10 내지 100배 보다 낮은 농도에서 성취되었다. 상기 데이터는 함께 효능 및 상승작용을 유지하면서 보다 낮은 용량의 덱사메타손이 사용되도록 함에 의해 화합물 2와 덱사메타손의 조합 치료의 증가된 안전성에 대한 잠재력을 지적한다.
레날리도마이드-내성 H929-1051 세포주에서 단일 제제로서 또는 덱사메타손과 조합된 화합물 2 및 포말리도마이드에 대한 항-증식 IC50 값의 비교
단일 제제 IC50
μM		 1 M Dex 콤보 IC50 0.1 M Dex 콤보 IC50 0.01 M Dex 콤보 IC50
포말리도마이드 >10 μM 0.01884 μM 0.11824 μM 3.837 μM
화합물 2 0.00098 μM 0.000018 μM 0.0000429 μM 0.00041 μM
정상 세포에 대한 항-증식 선택에 의해 평가된 바와 같은 시험관내 안전성 평가. 화합물 2가 일반적으로 세포독성이 아님을 입증하기 위해, 불멸화된 (그러나 비-종양원성) 사람 간세포-유래된 세포주 THLE-2에 대한 역-스크린 (Pfeifer et al, Proc Natl Acad Sci USA.1993; 90(11):5123-7)을 수행하고 1차 건강한 인간 PBMC (도 3)에 대한 것을 수행하였다. 화합물 2는 상기 나타낸 MM 세포주와 비교하여 THLE-2 세포 (IC50 > 10 μM)에 대한 또는 비자극된 1차 인간 PBMC (IC50 > 10 μM)에 대한 항-증식 효과가 거의 없었다.
레날리도마이드-내성 다발성 골수종 이종이식체 모델에서 화합물 2의 항종양 활성. 상기 연구의 목적은 1, 3, 10, 및 30 mg/kg의 하루 1회 용량 (QD)과 함께 H929-1051 이종이식체 모델에서 화합물 2의 단일 제제 항종양 활성을 시험하는 것이다. 유의적 (p < 0.0001) 항종양 활성은 모든 용량 수준에서 관찰되었고 종양 용적 감소는 1, 3, 10, 및 30 mg/kg 각각에서 75%, 86%, 84%, 및 85%였다(도 4).
결론: 상기 데이터를 함께 고려하면, 화합물 1 및 화합물 2가 이전에 보고된 화합물 A와 포말리도마이드와 비교하여 매우 강력한 항-다발성 골수종 활성을 나타내고 놀랍게도 아폽토시스의 유의적으로 증가된 수준을 나타냄을 보여준다. 추가로, 덱사메타손과 조합된 화합물 2는 보다 강력한 반응을 생성하고 효능이 또한 급격히 개선된다. 추가로, 정상 세포와 비교하여 다발성 골수종의 선택적 세포 사멸을 나타냈다.
실시예 7: 화합물 1/화합물 2의 오프-표적 효과 및 영향.
α1 아드레날린 작용성 및 도파민 D2 수용체. 방법: α1 아드레날린 작용성 및 도파민 D2 수용체에 대한 결합 및 기능 검정은 이들의 방법에 따라 유로핀 세렙 (Eurofins Cerep)에 의해 수행하였다.
α1 아드레날린 작용성 수용체. 10 μM에서 결합. 결합 검정은 래트 대뇌 피질에서 비-선택적 1 아드레날린 작용성 수용체에 대한 시험 제품의 친화성을 평가하였다. 대뇌 피질의 막 파쇄물은 10 μM에서 시험 제품의 부재 또는 존재하에 0.25 nM [3H]프라조신으로 실온에서 60분 동안 2회 항온배양하였다. 항온배양 기간 후, 샘플은 유리 섬유 필터를 통해 여과하였고, 상기 필터를 건조시키고 이어서 섬광 계수를 사용하여 방사능활성에 대해 계수하였다. 결과는 대조군 방사성리간드 결합의 평균 퍼센트 억제로서 표현한다.
결합 IC 50 . 비-선택적 1 아드레날린 작용 수용체 대한 결합 IC50을 결정하기 위해, 다양한 농도의 시험 제품을 0.25 nM [3H]프라조신과 2회 항온배양하였다. 화합물 A는 0.01-30 μM에서 시험하였다. 화합물 A의 S-에난티오머인 화합물 B는 0.0003-10 μM에서 시험하였다. 화합물 1 및 화합물 1의 S-에난티오머인 화합물 2를 0.03-100 μM에서 검정하였다. 방사능활성은 상기된 바와 같이 측정하였다. IC50은 조절 특이적 결합의 최대 절반 억제를 유발하는 농도로서 정의하였다.
길항제 활성. α1A　및 α1B 아드레날린 작용성 수용체에 대한 시험 화합물의 길항성 효과는 인간 수용체-형질감염된 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포를 사용하여 측정하였다. 길항제 활성은 α1A 수용체 검정에서 효능제 (에피네프린)-유도된 칼슘 대사 또는 α1B 수용체 검정에서 cAMP 수준에 대한 화합물 효과를 측정함에 의해 결정하였다. 이들 실험에서, CHO 세포는 α1A 수용체 검정에서 3 nM로 또는 α1B 수용체 검정에서 3000 nM에서 시험 제품 및 에피네프린으로 실온에서 2회 항온배양하였다. 화합물 A는 0.01-30 μM에서 α1A 수용체 검정에서 시험하였다. 화합물 B는 0.0003-30 μM에서 α1A 및 α1B 수용체 검정에서 시험하였다. 화합물 1 및 화합물 2는 α1A 수용체 검정에서 0.03 내지 30 μM로 그리고 α1B 수용체 검정에서 0.03 내지 100 μM로 검정하였다. α1A 수용체 검정에서, 시토졸 칼슘 수준을 형광성 프로브, Fluo4 다이렉트를 사용하여 형광측정으로 측정하였다. α1B 아드레날린 작용성 수용체 검정에서 세포내 cAMP 수준은 균일한 시간-분리능 형광성 (HTRF)에 의해 측정하였다. 길항작용 IC50은 조절 효능제 반응의 최대 절반 억제를 유발하는 농도로서 정의하였다.
도파민 D2 수용체. 10 μM에서 결합. 결합 검정은 형질감염된 인간 배아 신장 (HEK)-293 세포에서 도파민 D2 수용체 대한 시험 제품의 친화성을 평가하였다. D2S 수용체 검정에서 결합을 결정하기 위해, 시험 제품은 0.3 nM [3H] 메틸스피페론 또는 1 nM [3H] 7-하이드록시-2-N,N-디프로필아미노테트랄린 (7-OH-DPAT)으로 항온배양하였다. 0.3 nM에서 [3H] 메틸스피페론은 또한 D2L 결합 검정에서 조절 리간드로서 사용하였다. 세포막 파쇄물은 10 μM에서 시험 제품의 부재 또는 존재하에 리간드로 60분 동안 실온에서 2회 항온배양하였다. 항온배양 기간 후, 샘플은 유리 섬유 필터를 통해 여과하였고, 상기 필터를 건조시키고 이어서 섬광 계수를 사용하여 방사능활성에 대해 계수하였다. 결과는 대조군 방사성리간드 결합의 평균 퍼센트 억제로서 표현한다.
결합 IC 50 . D2 수용체 검정에서 결합 IC50을 결정하기 위해, HEK-293은 상기된 바와 같지만 다양한 농도의 시험 제품을 사용하여 시험하였다. 화합물 A는 D2S 방사성리간드 결합 검정에서 0.01-30 μM로 시험하였다. 화합물 B는 D2S 및 D2L 결합 검정 둘 다에서 0.0003-10 μM로 시험하였다. 화합물 1은 D2S 및 D2L 검정 둘 다에서 0.03-100 μM로 검정하고, 화합물 2는 D2S 검정에서 0.03-100 μM 및 D2L 검정에서 0.01-100 μM로 시험하였다. IC50은 조절 특이적 결합의 최대 절반 억제를 유발하는 농도로서 정의하였다.
효능제 활성 도파민 D2S 수용체에 대한 시험 화합물의 효능작용은 인간 수용체-형질감염된 HEK-293 세포를 사용하여 평가하였다. 효능제 활성은 임피던스 조절에 대한 화합물 효과를 측정함에 의해 결정하였다. 이들 실험에서, HEK-293 세포는 시험 제품을 사용하여 28 ℃에서 2회 항온배양하였다. 화합물 A는 0.01-30 μM에서 시험하였다. 화합물 B는 0.0003-10 μM에서 시험하였고, 화합물 1 및 화합물 2는 0.01-10 μM에서 시험하였다. 도파민 (3 μM)은 효능제 대조군으로서 사용하였다. 임피던스 측정은 세포성 유전성 분광측정을 사용하여 리간드 첨가 후 10분 동안 모니터링하였다. EC50는 대조군 효능제 (도파민) 반응과 비교하여 최대 절반 반응을 유발하는 농도로서 정의하였다.
결과. α1 아드레날린 작용성 및 도파민 D2 수용체에서 10 μM에서 결합은 화합물 1, 화합물 2, 화합물 A, 화합물 B 및 미국 특허 제8,518,972호에 예시된 다수의 화합물 (표 4)에 대해 평가하였다. 이전에 기재된 화합물들은 수용체 둘 다에서 리간드의 결합을 완전히 억제한 반면, 놀랍게도, 화합물 1 및 화합물 2는 리간드 결합을 억제하는 크게 감소된 능력을 보여하였고 각각 리간드 결합의 단지 67/62% (α1 아드레날린 작용성 수용체) 및 55/52% (도파민 D2S)의 억제를 보여준다. 따라서 1　아드레날린 작용성 및 도파민 D2 수용체에서 화합물 A 및 화합물 B와 비교하여 화합물 1 및 화합물 2의 차별화된 효과를 추가로 분석하였다.
[표 4]
α1 아드레날린 작용 수용체에 대한 화합물 A, 화합물 B, 화합물 1 및 화합물 2의 상세한 효과는 표 5에 요약한다. 화합물 A는 리간드의 α1 아드레날린 작용성 수용체로의 결합을 102%까지 억제하였다. 화합물 A의 수용체로의 결합 IC50은 0.064 μM이었다. 화합물 A는 α1A 아드레날린 작용성 수용체의 강한 효능제인 것으로 나타났고 IC50은 0.014 μM이다. 유사하게, 화합물 B는 10 νM에서 리간드의 1 아드레날린 수용체로의 결합을 98-100%까지 억제하였고 0.024 μM의 결합 IC50을 가졌다. 1 아드레날린 작용성 수용체의 강한 길항작용은 화합물 B와 함께 관찰되었고, α1A 및 α1B 수용체 각각에 대한 IC50 값은 0.0064 및 0.078 μM이었다. 놀랍게도, 대조적으로, 화합물 1 및 화합물 2 둘 다는 α1 아드레날린 작용성 수용체에 대해 약한 활성을 갖는 것으로 나타났다. 화합물 1에 의한 수용체 길항작용에 대한 IC50 값은 α1A 및 α1B 수용체 각각에 대해 0.98 μM 및 6.9 μM이었다. 비교 결과는 화합물 2에 대해서 관찰되었다.
α1 아드레날린 작용성수용체에 대한 화합물 A, 화합물 B, 화합물 1 및 화합물 2의 효과

화합물 		α1 (비-선택적)
% 억제
(10 μM) 		α1 (비-선택적)
결합 IC 50 (μM) 		길항작용 IC 50
(μM)
α1A α1B
화합물 A. 102 0.064 0.014 ND
화합물 B 98, 100a 0.024 0.0064 0.078
화합물 1 67 3.9 0.98 6.9
화합물 2 62 1.3 (추정됨) 0.58 2.4
a 독립적 실험.
ND, 결정되지 않음
도파민 D2 수용체. 도파민 D2 수용체에 대한 화합물 A, 화합물 B, 화합물 1 및 화합물 2의 효과는 표 6에 요약한다. 화합물 A는 리간드의 도파민 D2S 수용체로의 결합을 99%까지 억제하였다. 화합물 A의 D2S 수용체로의 결합 IC50은 0.15 μM이었다. 화합물 A는 도파민 D2S 수용체의 부분 효능제인 것으로 나타났고, EC50은 0.016 μM이다. 유사하게, 화합물 B는 10 μM에서 99%까지 D2S 수용체를 억제하였고 D2L 및 D2S 수용체 각각에 대한 결합 IC50은 0.084 및 0.016-0.047 μM이다. 놀랍게도 대조적으로 화합물 1 및 화합물 2 둘 다는 도파민 D2 수용체에 대해 약한 활성을 갖는 것으로 나타났고 10 μM에서 억제는 ≤ 55%이고 결합 IC50 값은 ≥ 2 μM이다. 3개의 독립적 연구에서 도파민 D2S 수용체에서 화합물 B의 기능성 효능작용(EC50)은 >10, 2.7 및 1.9 μM이었다. D2S 수용체에 대한 화합물 B에 의한 효능작용 정도가 화합물 A에 대해 관찰된 것 미만이지만, 화합물 1 및 화합물 2와 비교하여 화합물 1 및 화합물 2와 비교하여 화합물 B에 의해 보다 큰 효능작용이 되는 경향이 있었다. 이를 종합해 보면, 10 μM에서 결합의 % 억제, 결합 IC50 및 효능작용 IC50 데이터는 화합물 1 및 화합물 2와 비교하여 도파민 D2 수용체 대한 화합물 A 및 화합물 B의 보다 강한 활성을 입증하였다. 이러한 관찰은 화합물 A를 사용한 래트에서의 도파민 D2 효능작용의 증거 (즉, 감소된 위 운동/공복화)와 일치하지만 화합물 1과는 일치하지 않는다(하기에 논의된 바와 같이).
도파민 D2 수용체에 대한 화합물 A, 화합물 B, 화합물 1 및 화합물 2의 효과

화합물 		% 억제
(10 μM) 		결합 IC 50
(μM)
D 2S 효능작용
EC 50 (μM)
D 2L D 2S D 2L D 2S
화합물 A ND 99 ND 0.15 0.016
화합물 B 103 99, 99a 0.084 0.016, 0.021, 0.047a >10, 2.7, 1.9a
화합물 1 55 55 2.3 7.4 음성
화합물 2 ND 52 3 (추정됨) 2 (추정됨) >10
a 독립적 실험들; ND, 결정되지 않음
수컷 래트에서 7-일 탐색 독성학 연구. 방법. 수컷 CD-IGS 래트 (독성학적 평가에 대해 n=5/그룹; 독성동력학적 평가에 대한 n=4/그룹)에게 경구 위관영양법 (10 mL/kg)에 의해 연속 7일 동안 비히클 (50 mM 시트레이트 중 0.5% HPMC/0.25% Tween-80, pH 2.6-2.8) 또는 100, 300 또는 1000 mg/kg/일로 시험 제품 (화합물 A 또는 화합물 1)을 하루 1회 투여하였다. 독성동력학을 위한 혈액 샘플은 1일 및 7일 째에 수거하였다. 모든 래트는 투여 전에, 1일 내지 7일 째에 투여 후 대략 1시간에 및 8일째 부검 전에 독성의 임상적 징후에 대해 관찰하였다. 체중은 1일 내지 7일 째에 투여 전 및 부검 전에 무작위화시 기록하였다. 혈액학 및 혈청 화학 분석을 위한 샘플은 8일 째에 마지막 투여 후 대략 24시간에 수거하였다. 래트는 부검을 위해 8일 째에 안락사시켰다. 해부학적 병리학 평가는 선택된 조직의 총체적 관찰, 기관 중량 및 조직병리학적 조사로 이루어졌다.
결과. 연속 7일 동안 화합물 A의 하루 경구 투여 후, 전신 노출 (AUC0-t)을 용량-의존성 방식으로 100에서 1000 mg/kg으로 증가시켰다. 7일째 노출은 대략 1일째 보다 대략 3 내지 7배 컸다. 7일째 AUC는 각각 100, 300, 및 1000 mg/kg에서 441, 1230 및 1760 μM·시간이었다. 독성의 임상적 징후 (구부러진 자세, 입모 및 감소된 활성) 및 감소된 체중은 ≥ 300 mg/kg에서 관찰되었다. 어떠한 체중 획득도 100 mg/kg에서 보이지 않았다. 비정상적 위 내용물 (무수, 공급재)은 ≥ 100 mg/kg에서 총체적으로 관찰되었고, 어떠한 미시적 상호관련이 없었다. 이 발견은 감소된 위 운동/공복화를 시사하고 이는 도파민 D2 수용체에 대한 효능 활성과 일치한다. 시험 제품-관련된 미시적 발견은 모든 투여 수준에서 래트의 심장 내 최소 다초점 심근 괴사 및 혼합 세포 침윤으로 제한되었다. 상기 심장 병변의 정확한 원인은 아직 결정되어야 하지만, 상기 발견은 도파민 D2 수용체에 대한 효능작용 및/또는 α1-아드레날린 작용성수용체의 길항작용과 일치한다. 이들 수용체의 변화는 혈관확장을 유도할 수 있고, 혈류를 감소시키고 저혈압 및 반사성 빈맥을 유도한다. 심장 병변의 위치 (심실의 정점, 심내막 표면)는 추가로 허혈 기전을 지지한다. 화합물 1에 대해, 노출 (AUC0-t)은 또한 용량-의존성 방식으로 100에서 1000 mg/kg으로 증가시키고 7일째 노출은 1일째 보다 대략 2 내지 6배 크다. 7일 째에, 100, 300, 및 1000 mg/kg에서의 AUC는 각각 143, 514, 및 1220 μM·hr이었다. 시험 제품 관련 임상적 관찰이 없었다. 체중 획득에서의 최소 감소는 ≥ 300 mg/kg에서 관찰되었다. 놀랍게도, 화합물 A와는 대조적으로, 위 또는 심장에 대한 어떠한 효과도 화합물 1을 투여받은 래트에서 관찰되지 않았고, 이는 상기된 유로핀 세렙 (Eurofins Cerep)에 의해 관찰된 α1 아드레날린 작용성 및 도파민 D2 수용체에 대한 감소된 활성과 일치하였다.
인간 시토크롬 p450 효소의 억제제로서 화합물 2 및 화합물 B의 시험관내 평가. 목적은 풀링된 인간 간 마이크로좀에서 시토크롬 P450 (CYP) 활성의 직접적이거나 시간-의존적 억제제로서 작용하는 화합물 B 및 화합물 2의 잠재력을 평가하는 것이다. 이 연구에서, 9개 인간 시토크롬 P450 효소, 즉, CYP1A2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1 및 CYP3A4/5 (2개의 기질을 사용하는)의 억제가 조사되었다.
방법. CYP 효소들의 직접적인 억제제로서 작용하는 화합물의 잠재력을 조사하기 위해, 풀링된 인간 간 마이크로좀은 화합물 B (0.03 내지 30 μM) 또는 화합물 2 (0.03 내지 30 μM) 및 NADPH (1 mM)의 부재 또는 존재하에 이들의 겉보기 Km과 대략적으로 동일한 농도에서 프로브 기질과 항온배양하였다. 추가로, 화합물은 상기 언급된 동일한 농도에서 시간-의존적 억제제로서 작용하는 이들의 잠재력에 대해 평가하였다. 시간-의존성 억제를 평가하는 경우, 화합물은 프로브 기질의 첨가 전 30분 동안 인간 간 마이크로좀 및 NADPH (1 mM)와 예비 항온배양하였다. 적당한 비히클 대조군에 추가로, CYP 이소형의 공지된 직접적인 억제제 및 시간-의존적 억제제는 양성 대조군으로서 포함되었다. 항온배양 후, 프로브 기질 대사물의 농도는 확립된 LC/MS/MS 방법을 사용하여 정량하였다. 억제 정도는 대조군 활성의 퍼센트로서 표현하였다.
결과. 화합물 B. 직접적인 억제를 조사하기 위해 사용되는 실험 조건 하에서, 화합물 B (최대 30 μM)는 CYP1A2, CYP2A6, CYP2C8, CYP2D6, CYP2E1 및 CYP3A4/5 (미다졸람)에 대해 거의 (≤ 30%) 내지 어떠한 억제 효과를 나타내지 않았다. 30 μM에서, 화합물 B는 CYP2B6, CYP2C9 및 CYP2C19 활성을 각각 59, 38 및 45%까지 억제하였다. 화합물 B는 CYP3A4/5 (테스토스테론)를 억제하였고 IC50 값은 2.92 μM이다. 시간-의존적 억제를 시험하기 위해 사용되는 조건하에서, 화합물 B (최대 30 μM)는 NADPH의 존재 또는 부재하에 30분 예비 항온배양 후 CYP1A2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 및 CYP2E1에 대해 거의 내지 어떠한 시간-의존적 억제를 나타내지 않았다. 화합물 B는 시간-의존적 방식으로 CYP3A4/5를 억제하였다. 상기 이동된 IC50 값 (NADPH의 존재)은 각각 기질로서 미다졸람 및 테스토스테론에 대해 2.23 및 1.93 μM이었다.
화합물 2. 직접적인 억제를 조사하기 위해 사용되는 실험 조건 하에서, 화합물 2 (최대 30 μM)는 CYP1A2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2D6, CYP2E1 및 CYP3A4/5(미다졸람)에 대해 거의 (≤ 30%) 내지 어떠한 억제 효과를 나타내지 않았다. 30 μM에서, 화합물 2는 CYP2C19 및 CYP3A4/5 (테스토스테론) 활성을 각각 41 및 46%까지 억제하였다. 시간-의존적 억제를 시험하기 위해 사용되는 조건하에서, 화합물 2 (최대 30 μM)는 NADPH의 존재 또는 부재하에 30분 예비 항온배양 후 CYP1A2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1 및 CYP3A4/5 (미다졸람)에 대해 거의 내지 어떠한 시간-의존적 억제를 나타내지 않았다. 화합물 2 (30 μM에서)는 CYP3A4/5 (테스토스테론) 활성을 59% (NADPH의 존재) 및 23% (NADPH의 부재)까지 억제하였고, 이는 화합물 2가 CYP3A4/5의 약한 시간-의존적 억제제임을 지적했다.
결론. 요약하면, 화합물 B (최대 30 μM)는 CYP1A2, CYP2A6, CYP2C8, CYP2D6, CYP2E1 및 CYP3A4/5 (미다졸람)에 대해 거의 (≤ 30%) 내지 어떠한 직접적인 억제 효과를 나타내지 않았다. 화합물 B는 CYP3A4/5 (테스토스테론)를 억제하였고 IC50 값은 2.92 μM이다. 화합물 B는 30 μM에서 CYP2B6, CYP2C9 및 CYP2C19 활성을 각각 59, 38 및 45%까지 억제하였다. 화합물 B (최대 30 μM)는 CYP1A2, CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 및 CYP2E1에 대해 시간-의존적 억제제가 아니지만 CYP3A4/5에 대해 시간-의존적 억제제이다.
놀랍게도, 대조적으로 화합물 2 (최대 30 μM)는 시험된 임의의 CYP 효소에 대해 거의 (≤ 30%) 내지 어떠한 억제 효과를 나타내지 않았고, 30 μM에서, 화합물 2는 CYP2C19 및 CYP3A4/5 (테스토스테론) 활성을 각각 단지 41 및 46% (즉,　IC50 > 30 μM)까지 억제하였다. 화합물 2 (최대 30 μM)는 또한 CYP3A4/5의 단지 약한 시간-의존적 억제제이다. CYP2C19 및 CYP3A4/5에 대해 감소된 억제 활성은 다른 약물에 대한 것을 포함하는 대사에 대해 감소된 효과 및 따라서 역 약물 상호작용에 대해 감소된 잠재력을 유도한다.
개요: 정상 세포를 유지하면서 강력한 항-대사물 골수종 활성의 조합, 아폽토시스의 상당히 증가된 수준 및 덱사메타손과 보다 강력하고 효능적인 조합 반응은 화합물 1 및 화합물 2가 다발성 골수종의 치료에 유용함을 지적한다. 추가로, 저용량의 덱사메타손을 사용하기 위한 잠재력과 조합된, 놀랍게도 개선된 시험관내 및 생체내 오프-표적 및 CYP 프로필 발견은 화합물 1 및 화합물 2가 이전에 보고된 화합물에 상대적으로 개선된 안전성 프로필을 가져야만 한다.
실시예 8: 발암성 드라이버, 염색체 전좌 및 p53 돌연변이를 특징으로 하는, 다발성 골수종 세포주에서 화합물 2-유도된 아폽토시스.
방법. MM 환자에서 발견되는 고도로 위험한 전좌 또는 돌연변이인 것으로 고려되는 것들을 포함하는 통상의 발암성 돌연변이 및 염색체 전좌를 갖는 대표적인 MM 세포주의 아폽토시스의 증식 및 유도에 대한 화합물의 효과는 화합물과 항온배양 120시간 후 96-웰 플레이트 유동 세포측정 검정을 사용하여 평가하였다. 20개 MM 세포주 (표 7 및 8) (혈장 세포 백혈병 (PCL) 세포주 L363, JJN-3, ARH-77, 및 SKMM-2를 포함하는)는 0.015 내지 100 nM 범위의 상승하는 농도의 화합물 2 또는 포말리도마이드로 2회 처리하였다. 5 mM 스톡을 사용하여, 화합물은 Hewlett-Packard D300 디지탈 분배기를 사용하여 96-웰 플레이트의 적당한 웰에 예비 점적하였다. 세포는 다중드롭 콤비 시약 분배기를 사용하여 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 처리 5일 후, 유동 세포측정 분석을 사용하여 생존하거나, 죽었거나 아폽토시스성인 세포의 수를 결정하였다. 처리 5일 후, 세포는 어넥신 V와 항온배양하여 노출된 포스파티딜세린, 아폽토시스 세포-표면 마커, 및 온전한 세포막을 갖는 세포로부터 배제된 필수 염료 7-AAD를 염색하고 유동 세포측정(Attune®, Thermo Fisher)에 의해 분석하였다. 이어서, 분석을 수행하여 생존 세포 (어넥신 V 및 7-AAD 이중 음성 염색 세포)의 수를 결정하고 처리된 DMSO 대조군에 상대적으로 각각의 조건에 대한 아폽토시스 세포 (어넥신 V 양성 세포)의 퍼센트를 계산하였다. 모든 기재된 값은 DMSO-단독 처리된 세포로 정규화하였다. 모든 증식 및 아폽토시스 유도 곡선을 프로세싱하고 XLFit (IDBS, Alameda, CA) 및 GraphPad Prism 7.03 (GraphPad Software, La Jolla, CA)을 사용하여 대조군의 퍼센트로서 그래프화하였다. 모든 농도에 대한 생존 세포 계수는 Microsoft Excel에서 DMSO 대조군 (100%로서 고려되는)으로 정규화하여 증식 곡선을 생성하였다. IC50 (50% 억제를 성취하는 화합물 농도) 값은 이어서 로그 (억제제) 대 정규화된 반응-변수 기울기 분석을 수행함에 의해 계산하였고, 곡선하 면적 (AUC) 값은 GraphPad Prism 7.03 상에서 곡선하 면적 분석을 수행함에 의해 계산하였다. 유사하게, 아폽토시스 분석을 위해, 약물-유도된 아폽토시스의 퍼센트는 "어얼리" (어넥신 V　양성 및 7-AAD 음성) 및 "레이트" 아폽토시스 (어넥신 V 및 7-AAD 양성) 값 둘 다를 조합하고 배경 값 (비히클 대조군 DMSO로 처리된 세포)을 공제함에 의해 모든 용량에 대해 계산하였다. 아폽토시스 곡선에 대한 AUC 값은 GraphPad Prism 7.03 상에서 곡선하 면적 분석을 수행함에 의해 계산하였다. 용량-반응 곡선하 면적 (AUC)은 이것이 아폽토시스를 단일 파라미터로 나타내도록 약물의 효능 및 효험을 통합하기 때문에 계산하였다. 유동 세포측정 검정에서 화합물 2 및 포말리도마이드에 대한 IC50 값은 표 9에 제공된다. 표 10 은 용량-반응 곡선하 면적 (AUC)을 보여주고 MM 세포주에서 유동 세포측정 검정을 사용하여 화합물 2 및 포말리도마이드의 활성을 비교한다.
다발성 골수종 세포주
MM 세포주 판매자/공급원 카탈로그 번호 배양 조건
ANBL-6 Jelinek, Ahmann et al. Cancer Res (1993) 53(21):5320-5327 NA RPMI-1640, 10% FBS, IL-6
ARH-77 ATCC (Manassas, VA) CRL-1621 RPMI-1640, 10% FBS
CAG Borset, et al. Blood (2000) 96(7):2528-2536 NA RPMI-1640, 10% FBS
DF15 Shaughnessy, et al. US20070027175 NA RPMI-1640, 10% FBS
EJM DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-560 RPMI-1640, 10% FBS
NCI-H929 ATCC (Manassas, VA) CRL-9068 RPMI-1640, 10% FBS
H929-1051 사내에서 개발되고, 10 μM 레날리도마이드에 저항성이 되도록 하였다. RPMI-1640, 10% FBS
IM-9 ATCC (Manassas, VA) CCL-159 RPMI-1640, 10% FBS, IL-6
JJN-3 DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-541 RPMI-1640, 10% FBS
KMS-11 Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank (Osaka, Japan) JRCB-1179 RPMI-1640, 10% FBS
KMS-12-PE DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-606 RPMI-1640, 10% FBS
KMS-34 Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank (Osaka, Japan) JRCB-1195 RPMI-1640, 10% FBS
L363 DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-49 RPMI-1640, 10% FBS
LP-1 DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-41 RPMI-1640, 10% FBS
MM.1S ATCC (Manassas, VA) CRL-2174 RPMI-1640, 10% FBS
OPM2 DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-50 RPMI-1640, 10% FBS
OPM2-P10 사내에서 개발되고, 10 μM 포말리도 마이드에 저항성이 되도록 하였다. RPMI-1640, 10% FBS
RPMI-8226 ATCC (Manassas, VA) CCL-155 RPMI-1640, 10% FBS
SKMM-2 DSMZ (Braunschweig, Germany) ACC-430 RPMI-1640, 10% FBS
U266 ATCC (Manassas, VA) TIB-196 RPMI-1640, 10% FBS
ATCC = 아메리칸 타입 조직 콜렉션; DSMZ = 미생물 및 세포 배양물의 독일 콜렉션 (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures); FBS = 태아 소 혈청; IL-6 = 인터류킨 6; JCRB = 연구 생물자원 세포 뱅크의 일본 콜렉션 (Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank); MM = 다발성 골수종; N/A = 적용될 수 없음.
발암성 드라이버, 염색체 전좌, 및 다발성 골수종 세포주에서 발견되는 p53 돌연변이
MM 세포주 p53 상태 발암성 드라이버 전좌
ANBL-6 mut (Q331)a C-MAF t(14;16)
ARH-77 mut (R273H) - -
CAG wt HD C-MAF t(14;16)
DF15 wt - -
EJM mut (K132N) MAFB t(14;20)
NCI-H929 wt FGFR3 및 MMset t(4;14)
H929-1051 wt FGFR3 및 MMset t(4;14)
IM-9 wt - -
JJN-3 wt C-MAF t(14;16)
KMS-11 wt, HD FGFR3/MMSET, C-MAF t(4;14),t(14;16)
KMS-12-PE wt HD/mut (R337L)b 사이클린 D1 t(11;14)
KMS-34 mut (W146a) FGFR3 & MMset t(4;14)
L363 mut (S261T) MAFB t(6;20), t(20;22)
LP-1 mut (E286K) FGFR3 및 MMset t(4;14)
MM.1S wt C-MAF t(14;16)
OPM2 mut (R175H) FGFR3 및 MMset t(4;14)
OPM2-P10 mut (R175H) FGFR3 및 MMset t(4;14)
RPMI-8226 mut (E258K) C-MAF t(14;16), t(16;22)
SKMM-2 wt MAFB, 사이클린 D1 t(14;20), t(20;14)
U266 mut (A161T) 사이클린 D t(11;14)
HD = 동종접합성 결실; mut = 돌연변이; wt = 야생형; - = 가용하지 않음. a = 넌센스 돌연변이. b = wt p53가 단지 1개의 카피물 또는 돌연변이를 갖는지 여부에 대해 문헌에서 모순된 보고.공급원: Bergsagel, et al. Oncogene (2001);20:5611-5622; Berglind, et al. Cancer Biology Therapeutics (2008);5:699-708; Keats, J. Common Genetics of Myeloma Cell Lines [Internet].Jonathan Keats Laboratory.해독 게놈 연구 기관 (Translational Genomics Research Institute) (TGen) - 통합된 암 게놈 분열(Integrated Cancer Genomics Division). 2012 - [2017년 1월 5일에 인용].
결과. 화합물 2의 항증식 활성은 MM 환자에서 발견되는 고위험의 전좌 또는 돌연변이인 것으로 고려되는 것들을 포함하는 통상의 발암성 돌연변이 및 염색체 전좌 (표 8)를 갖는 대표적인 MM 세포주의 패널에 걸쳐 평가하였다(참조: Johnson, et al. Int J Hematol.(2011);94:321-333; Zhou, et al. Leukemia (2009);23:1941-1956; Terpos, et al. Leuk　Lymphoma (2006);47:803-814; Tonon, Hematol Oncol Clin North Am. (2007);21:985-1006). 농도-반응 곡선은 유동 세포측정을 사용하여 수득하여 생존 세포수를 측정함으로써 포말리도마이드와 비교하여 화합물 2의 항증식 활성을 입증하기 위해 생존 세포 수를 측정하였다. 화합물 2 및 포말리도마이드에 대한 IC50 값은 표 9에 제공된다.
다발성 골수종 세포주에서 화합물 2 항증식 활성
항증식 활성(유동 세포측정)
IC 50 (nM)
세포주 화합물 2 포말리도마이드
MM1-S 0.04 33.74
DF15 0.05 40.98
OPM2 0.05 69.68
ANBL-6 0.06 60.61
NCI-H929 0.05 63.10
KMS-12-PE 0.09 83.79
LP-1 0.14 175.77
JJN-3 0.10 365.84
CAG 0.12 1084.88
U266 0.19 380.67
EJM 0.43 2843.08
NCI-H929-1051 0.45 1949.67
KMS34 0.45 >10000
KMS-11 1.41 5290.11
RPMI-8226 0.75 >10000
OPM2-P10 1.81 >10000
SK-MM-2 0.82 >10000
L363 0.16 >10000
ARH-77 >10000 >10000
IM-9 5569.43 >10000
화합물 2의 아폽토시스 유도 효과는 치료 120시간 후 유동 세포측정을 사용하여 평가하고 포말리도마이드 치료와 비교하였다. 대조군의 퍼센트는 DMSO 대조군 (대조군 100%)으로 정규화함에 의해 계산하여 용량 반응 곡선을 생성하고 상기 곡선하 면적 (AUC)을 계산하였다. 보고된 AUC 값은 용량 반응 곡선하 면적에 상응하고, 여기서, 10000의 값은 모든 용량에서 아폽토시스의 완전한 유도에 상응하고 0의 값은 아폽토시스의 유도 부재에 상응한다. 각각의 데이터 포인트는 각각의 실험에서 적어도 2개의 샘플과 함게 2개의 독리적 실험을 나타낸다. (표 10). 표 10:다발성 골수종 세포주에서 화합물 2-유도된 아폽토시스
다발성 골수종 세포주에서 화합물 2-유도된 아폽토시스
AUC
세포주 화합물 2 포말리도마이드
CAG 5804 1561
DF15 6002 3707
NCI-H929 6089 2115
SKMM-2 3204 1033
OPM2 5620 3298
MM1.S 5701 3525
RPMI-8226 3245 1369
ANBL-6 4751 2580
H929-1051 3968 423
EJM 2591 900
KMS-12-PE 2017 1069
KMS-11 1270 234.4
JJN-3 (DSMZ) 1125 199.1
KMS-34 1614 429.7
IM-9 323.9 25.4
U266 927.8 373
OPM2-P10 1768 108.7
ARH-77 709 28.16
LP-1 630.7 174
L363 347 293
결론. 화합물 2는 대부분의 MM 세포주에 걸쳐 광범위하게 활성이고 중간체 포말리도마이드 민감성을 갖는 세포주에서 및 포말리도마이드에 저항성인 세포주에서 강한 활성을 보여줌에 의해 포말리도마이드로부터 차별화되었다. 화합물 2는 다양한 p53 상태, 발암성 드라이버 또는 염색체 전좌를 갖는 MM 세포주의 상기 범위에 걸쳐 광범위하게 활성이었다. 예를 들어, OPM2, LP-1, EJM, U266, 및 RPMI-8226 세포는 돌연변이체 p53을 갖고 화합물 2에 민감성이었다. 추가로, NCI-H929, KMS-11, KMS 34, OPM2, 및 LP-1 세포주 모두는 t(4;14) "고 위험" MM 염색체 전좌를 함유하고 화합물 2에 민감성이었다. SK-MM-2 및 EJM 세포는 또한 화합물 2에 민감성이었고 또 다른 "고 위험" MM 염색체 전좌, t(14;20)를 함유한다. (도 5) 짧은 정의된 노출 후 아폽토시스를 유도하는 화합물 2의 능력은 집중적이고 간헐적 스케줄을 사용하여 질환 제어가 성취되도록 할 수 있다. 상기 스케줄은 또한 현재 MM 화합물의 보다 연속 투여에 대해서 관찰된 혈구감소증을 유도하는 화합물 2의 잠재력을 감소시킴에 의해 치료학적 지수를 개선시킬 수 있다.
실시예 9: 화합물 2는 레날리도마이드 또는 포말리도마이드에 대해 후천적 내성을 갖는 다발성 골수종 세포주에서 활성을 갖는다
화합물 2 활성은 화합물 중 어느 하나에 대한 연속된 노출로 인해 레날리도마이드 또는 포말리도마이드에 대한 후천적 내성을 갖고 상기 프로세스에서 하향조절된 세레브론 수준을 갖는 세포에서 시험하였다(표 11). 세포는 5일 동안 처리하고 이어서 ATP 결정 검정 (CellTiter-Glo)을 사용하여 평가하였다. 대조군의 퍼센트는 배경을 공제하고 DMSO 대조군 (대조군 100%)으로 정규화함에 의해 계산하였다. 레날리도마이드 또는 포말리도마이드에 대해 후천적 내성을 갖는 세포주에서 세레브론의 상대적 퍼센트는 웨스턴 블롯에 의해 결정하였고 100%로서 지정된 모계 세포주에서의 양과 함께 제공된다.
결과. 도 6 은 농도 반응 곡선의 IC50을 보여주고 이는 화합물 2와 포말리도마이드의 활성을 비교하여 모계 세포주 (DF15, NCI-H929 및 OPM2), 레날리도마이드-내성 세포주(NCI-H929-1051), 또는 5개의 포말리도마이드-내성 세포주 (NCI-H929-P01, OPM2-P01, OPM2-P1, OPM2-P10 및 DF15R)에서의 증식을 측정하였다.
다발성 골수종 세포주에서 약물 내성을 나타내도록 하기 위해 사용되는 화합물 및 화합물의 농도 및 세레브론 단백질 발현에서 획득된 변화
세포주 내성 세레브론 (%)
(하기로 정규화된
모계 세포주)
DF15 N/A 100
DF15R 100 μM Pom 14*
NCI-H929 N/A 100
NCI-H929-1051 10 μM Len 50
NCI-H929-P01 100 nM Pom 35
OPM2 N/A 100
OPM2-P01 100 nM Pom 61
OPM2-P1 1 μM Pom 33
OPM2-P10 10 μM Pom 31
N/A = 적용될 수 없음; Pom = 포말리도마이드; * 배경 수준, 실제 CRBN이 아니고, 이는 상기 세포주에서 부재이다.
결론: 화합물 2의 가장 현저한 효과는 MM 세포주에 걸쳐 광범위하고 강력한 항증식 활성이지만 비-종양원성 세포에 대해서는 아니다. 화합물 2는 고위험 전좌, 예를 들어, t(4;14), t(14;16) 및 기타를 함유하는 MM 세포주에서 강력한 항증식 활성을 갖는다. 레날리도마이드와 포말리도마이드와 비교하여, 화합물 2는 대부분의 MM 세포주를 사멸시키는데 유의적으로 보다 강력하다. 추가로, 화합물 2는 레날리도마이드 및 포말리도마이드에 후천적 내성을 갖는 MM 세포주에서 카스파제-3 활성의 유도에 의해 측정된 바와 같이 아폽토시스를 유도하였다.
실시예 10: 골수 선조체의 성인 호중구로의 성숙화에 대한 화합물 2의 생체외 효과
방법: 건강한 공여자 (HD)로부터 골수 (BM) CD34+ 세포의 생체외 배양물은 호중구-특이적 생체외 성숙화를 조사하기 위해 사용하였다. 호중구 선조체의 시험관내 분화는 줄기 세포 인자 (SCF), fms-관련된 티로신 키나제 3 리간드(Flt3-L), 및 과립구 콜로니 자극 인자 (G-CSF)를 배양 배지에 첨가함에 의해 유도하였다. 세포 분화는 5개 서브집단 중 세포의 퍼센트로서 유동 세포측정에 의해 평가하였다: 도 7에 나타낸 바와 같이, 조혈 줄기 세포(HSC, CD34+/CD33-/CD11b-) 및 단계 I (CD34+/CD33+/CD11b-), 단계 II (CD34-/CD33+/CD11b-), 단계 III (CD34-/CD33+/ CD11b+), 및 단계 IV (CD34-/CD33-/CD11b+)(미성숙한 것으로부터 성숙한 것으로). 호중구 선조체의 성숙화에 대한 화합물 2의 효과를 평가하고 상이한 투여 스케줄을 평가하여 이들 사건들의 스케줄 의존성에 대한 통찰을 획득하였다.
결과. 화합물 2의 짧은 하루 노출.호중구 선조체의 성숙화에 대한 최대 연속 3일 동안 화합물 2의 1, 10, 및 100 nM에서 상이한 노출기간 (2, 4, 및 6시간)의 효과는 유동 세포측정을 사용하여 사전 특정된 시점에서 평가하였다. 결과는 호중구 선조체의 후기-단계 성숙화가 화합물 2에 의해 차단됨을 보여주었고, 성숙한 세포는 1일 이상의 노출 후 보다 높은 농도에서 수에서 유의적으로 감소하였다. 성숙 정지는 단계 III 세포 표면 면역표현형을 갖는 세포의 축적 및 단계 IV 세포 표면 면역표현형을 갖는 세포 (성숙한 호중구)의 집단에서의 감소에 의해 입증된 바와 같이 단계 III 호중구 선조체 발육에서 주로 일어나는 것으로 나타난다. 도 8에 나타낸 바와 같이, 6시간 항온배양의 예에서, 상기 성숙화 효과는 농도 의존성이고 노출 일수와 함께 증가하였지만 개별 노출의 지속 시간 (2, 4 또는 6시간)에 의해 변화되지 않았다. 중요하게, 화합물 2에 노출된 호중구 선조체 및 성숙한 호중구의 생존능은 죽은 세포에서 축적되는 어넥신 V 또는 7-아미노악티노마이신 D에 양성인 세포 집단에서의 임의의 검출 가능한 증가 부재에 의해 입증되는 바와 같이 영향받지 않았다.
화합물 2 노출 후 성숙한 호중구의 회복은 또한 상기 시스템에서 평가하였다. 본 연구에서 사용된 검정 시스템에서 성숙한 호중구 수준의 비처리된 대조군 수준의 적어도 50%까지의 회복은 임상적으로 유의적인 호중구감소증의 유도의 부재 또는 이로부터의 회복과 상호 관련된다. 실제로, 화합물 2 없이 1주 기간 후, 단계 IV 세포의 비율은 이의 나디르 (nadir)로부터 적어도 50%까지 회복하였고 (도 8, 보다 하부 패널) 보다 낮은 농도에서 보다 신속하고 완전한 회복에 대한 경향을 갖는다.
결론: 상기 결과는 화합물 2로 치료받은 MM 환자에서 호중구감소증의 성공적인 관리가 적당한 투여 스케줄의 사용으로 가능할 수 있음을 지적한다.
보다 긴 하루 화합물 2 노출. 호중구 선조체 성숙화 및 후속적 회복의 정지에 대한 상이한 스케줄의 잠재적 영향을 추가로 특징 분석하기 위해, 성인 호중구로의 골수 선조체 성숙화 각각의 상대적 비율에서의 변화는 매일 마다 6 또는 24시간 동안 1, 10, 또는 100 nM 화합물 2로의 연속 노출 3 또는 5일 후 유동 세포측정에 의해 평가하였다. 건강한 공여자로부터 유래된 CD34+ BM 세포는 매일 마다 6시간 (공여자 번호 1 및 2) 또는 24시간 (공여자 번호 3 및 4) 동안 10일째 개시하는 연속 3 또는 5일 상에서 화합물 2에 노출시켰다 (공여자 번호 3 및 4). 최종 노출의 완료 후, 세포를 세척하고 22일때까지 화합물 2의 부재하에 재항온배양하였다. 연속 3 내지 5일 동안 화합물 2로의 6- 및 24-시간 노출은 단계 IV 집단에서 상응하는 감소와 함께 호중구의 단계 III 집단을 증강시켰고, 이는 단계 III로부터 단계 IV로의 성숙화에서의 차단과 일치한다. 도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, 각각 3 및 5일 동안 6시간 노출을 위한 예에서, 성숙 정지로부터 회복 속도는 농도-의존적이었고 매일 노출 횟수에 의해 영향을 받고, 화합물 2의 보다 높은 농도에서 및 노출 5 대 3일 후 보다 연장되지만 매일 노출의 지속 기간 (6 대 24시간)에서의 변화는 회복의 겉보기 속도에 대해 거의 영향을 주지 않았다
연속 3일 동안 화합물 2로의 노출 후, 정상 성숙화의 50% 이상의 회복은 시험된 모든 조건에서 8 내지 10일의 약물 휴일 후 관찰하였다(도 10, 우측 패널). 대조적으로 연속 5일 동안 화합물 2로의 노출 후, 정상 성숙화의 50% 이상의 회복은 단지 1- 및 10-nM 농도에 대해 8 내지 10일의 약물 휴일 후 관찰하였다. 화합물 2의 최고 농도 (100 nM)와 함께, 보다 긴 약물-부재 기간은 호중구 선조체의 성숙화 회복을 위해 요구될 수 있다. 그러나, 성숙화의 이러한 불완전 회복에도 불구하고, 생존능의 상실은 최대 5일의 연속 (24-시간) 노출을 포함하는, 시험된 임의의 조건하에서 관찰되지 않았다. 상기 관찰은 6시간 보다 긴 기간 동안 화합물 2로의 연속 노출에 의해 최적화된 골수종 세포에서 아폽토시스의 유도와는 대조적이다.
5일 스케줄에서 마지막 노출후 6 내지 8일 동안에, 단계 IV의 개시 단계 (성숙한 호중구) 회복의 초기 단계는 단지 10 nM 농도에서 화합물 2로의 노출 후 관찰되었고, 반면, 어떠한 회복도 5일 동안 100 nM 화합물 2에 노출된 배양물 중에서 상기 시간표 내에서 관찰되었다. 이들 데이터는 전조에서 증가하는 연속 일수의 기간 동안 화합물 2의 보다 높은 농도로의 노출이 호중구 전구체의 성숙 정지 (및 호중구감소증)를 보다 연장하였고 회복 속도는 매일 노출의 지속 기간 (6 대 24시간)과는 무관함을 시사한다.
결론: 함께 종합하면, 상기 데이터는 환자에서 호중구감소증의 유도 및 이로부터의 회복이 하루 1회 투여와 비교하여 화합물 2의 보다 집중 투여 (하루 당 다중 투여)에 의해 역 영향을 받지 않을 수 있다.
실시예 11: 단일 제제로서 및 화합물 2와 조합하여 호중구 선조체의 시험관내 성숙에 대한 덱사메타손의 효과
방법. 호중구감소증에 대한 덱사메타손의 효과를 이해하기 위해, 건강한 공여자로부터 BM CD34+ 세포의 시험관내 배양물을 사용하여 단일 제제로서 및 화합물 2와 조합하여 덱사메타손에 의해 매개된 호중구감소증 사건을 평가하였다. 상기 모델에서 덱사메타손 단독치료요법의 효과를 정의하기 위해, 1, 10, 또는 100 nM 덱사메타손 노출은 30시간 동안 유지하고 7개 상이한 투여 스케줄을 비교한다(도 11). 조합 연구를 위해, 단일 노출 화합물 2 (1, 10, 또는 100 nM) 및 덱사메타손은 배양 13일째 개시하여 각각 6 및 30시간 동안 유지하였다.
결과. 결과는 호중구 선조체의 성숙이 임의의 시험된 스케줄 하에 단일 제제 덱사메타손으로의 노출에 의해 영향받지 않음을 보여주었고 반면에 후기 단계 호중구 전구체의 성숙은 화합물 2에 의해 차단되었고(도 12), 성숙 세포의 수는 1회 노출 후 모든 시험된 농도에서 감소하였다. 이러한 성숙 정지는 또한 화합물 2가 덱사메타손과 조합된 경우 관찰되었다. 성숙 차단은 화합물 2의 농도에 의존하지만 덱사메타손의 농도를 변화시킴에 의해서는 변화되지 않았다. 미성숙 및 성숙 호중구의 새존능은 단독으로 또는 조합하여 덱사메타손 또는 화합물 2에 의해 영향받지 않았다. 약물 세척 제거 후, 정상 성숙의 완전한 회복은 1주 약물 휴일 후 모든 시험된 조건에서 관찰되었다.
결론. 이들 데이터는 화합물에 2에 의해 유발된 호중구감소증이 투여 스케줄을 변형시킴에 의해 관리가 가능할 수 있음을 지적하지만 동시 덱사메타손 치료에 의해 완화되거나 악화되지 않을 것으로 예측된다.
실시예 12: 레날리도마이드-내성 다발성 골수종에 대한 단독 및 덱사메타손과 조합된 화합물 2의 효과.
방법: 덱사메타손은 단일 제제로서 또는 화합물 2, 포말리도마이드 또는 레날리도마이드와 조합되어 아폽토시스를 유도하는 이의 능력에 대해 평가하였다. 아폽토시스의 유도는 레날리도마이드-내성 다발성 골수종 세포 (H929-1051)에서 카스파제-Glo를 사용하여 측정하였다. 덱사메타손은 어쿠스틱 디스펜서를 사용하여 20개 농도로 분배하였다. 시험 제품은 Hewlett-Packard D300 디지탈 디스펜서를 사용하여 덱사메타손 웰 상으로 단일 농도로서 첨가하였다. 검정을 위한 화합물의 최종농도는 다음과 같았다: 덱사메타손 (0.8 μM 내지 0.00002 μM), 레날리도마이드 (1 μM), 포말리도마이드 (0.1 μM), 및 화합물 2 (0.001, 0.01, 또는 0.1 μM). 세포는 멀티드롭 디스펜서를 사용하여 검정 플레이트로 분주하고 검정을 위해 중복 플레이트를 만들었다. 아폽토시스 판독은 카스파제-Glo 3/7 및 CellTiter-Glo 검정을 사용한 화합물 치료 후 72시간 째에 수행하였다. 카스파제-Glo 3/7 발광성은 CellTiter-Glo 발광성으로 정규화하여 세포 수에서의 차이를 해명한다. 처리된 샘플의 배수 변화는 다음과 같이 계산하였다: 처리된 샘플의 정규화된 카스파제/정규화된 DMSO 대조군의 평균.
결과: 단독의 또는 레날리도마이드, 포말리도마이드 또는 화합물 2와 조합된 덱사메타손의 아폽토시스 활성은 카스파제-3 유도에 의해 측정하였다. 화합물 2는 세포 생존능을 감소시키기 위해 덱사메타손과 상승작용하였고 농도-의존성 방식으로 덱사메타손의 아폽토시스 능력을 강화하였다. 덱사메타손 활성의 개시는 화합물 2의 존재하에 1 로그까지 전환되었다.
결론: 화합물 2는 덱사메타손의 아폽토시스 활성을 강화하고, 클리닉에서 화합물 2와 조합하여 사용되는 경우 덱사메타손의 용량을 감소시키기 위한 잠재력을 지적한다.
도 13에 나타낸 바와 같이, 급격한 양방향 상승작용은 덱사메타손과 조합된 화합물 2를 사용한 치료 후 관찰된다. 10 nM 만큼 적은 덱사메타손은 화합물 2의 세포 사멸 능력을 증진시키고 화합물 2의 낮은 농도 내지 서브-나노몰 농도는 덱사메타손의 아폽토시스 효과를 강화한다.
실시예 13: 화합물 2는 건강한 인간 공여자로부터 면역 세포의 항종양 활성을 증진시킨다
말초 혈액 단핵 세포 및 K562 세포를 사용한 동시배양 실험. 방법: 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 제조: 건강한 공여자로부터 단리된 PBMC는 1 x 106 세포/mL의 밀도로 10% FBS를 갖는 RPMI 1640 배지에서 배양하였다.
세포 배양물 K562 세포는 로그 단계에 유지시키고, 세포 밀도 및 생존능은 Vi- CELL® XR 세포 생존능 분석기(Beckman Coulter, Brea, CA)를 사용한 트립판 블루 배척에 의해 모니터링하였다.
검정 과정들: 새롭게 단리된 인간 PBMC는 72시간 동안 20 유닛/mL의 농도에서 재조합 IL-2와 함께 배양하였다. 말초 혈액 단핵 세포를 이어서 회전 하강시키고 새로운 RPMI 완전 배지에서 2x106 세포/mL로 재현탁시켰다. 이어서, 세포는 지정된 농도에서 DMSO 또는 화합물로 처리하고 추가로 72시간 동안 항온배양하였다. 이어서, PBMC는 동시 배양 전 새로운 RPMI 완전 배지에서 2회 세척하였다. K562 세포는 1 x 106/mL의 세포 밀도로 재현탁시키고 제조업자의 지침에 따라 1 μM CellTrace CFSE로 염색하였다. 표지된 K562 세포는 이어서 1 x 105 세포/웰에서 96-웰 환저 플레이트에 씨딩하였다. 말초 혈액 단핵 세포는 이어서 1:15 비율, 3회로 동일한 96-웰 플레이트로 전달하였고 37℃에서 4시간 동안 항온배양하였다. PBMC 세포에 의한 특이적 표적 세포 용해는 제조업자의 지침에 따라 어넥신　V-플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC) 및 프로피듐 요오다이드(PI)를 사용하여 측정하였고 샘플은 FACS 어레이 스캔 상에서 전개하였다. 비-표지된 K562 세포, CellTrace CFSE-표지된 K562 세포, 및 어넥신 V-FITC- 및 PI 표지된 비처리된 K562 세포는 대조군으로서 각각의 검정에 포함되었다.
화합물 처리된 인간 말초 혈액 단핵 세포 및 비처리된 골수종 세포주를 사용한 동시 배양 검정. 방법: 세포 배양. 모든 골수종 세포주는 로그 단계에 유지시키고, 세포 밀도 및 생존능은 Vi- CELL XR 세포 생존능 분석기를 사용한 트립판 블루 배척에 의해 모니터링하였다.
PBMC 처리 검정 과정. 96웰 디쉬는 항-CD3 항체 (OKT3, 3 μg/mL)로 예비 코팅시키고 실험 개시 전 밤새 4℃에서 항온배양하였다. 동결된 PBMC 공여자는 10% FBS를 갖는 RPMI 배지에서 2분 동안 37℃에서 해동시키고 세포 계수 및 생존능은 Vi-CELL®(Beckman Coulter) 상에서 측정하였다. 말초 혈액 단핵 세포는 세척하고 1 x 106 세포/mL로 희석하고 200 μL의 총 용적에서 화합물 처리된 플레이트에 분주하였다. 세포는 항-CD3-코팅된 플레이트에 전달 전 2시간 동안 화합물로 항온배양하고 37℃에서 추가로 72시간 동안 항온배양하였다. 72시간 후, PBMC는 원심분리하고 세포는 RPMI 배지 + 10% FBS에서 2회 세척하였다. 비처리된 MM 세포주 (H929 및 H929-1051)는 제조업자의 지침에 따라 CellTrace CFSE로 표지시키고 100 μL의 총 용적으로 U 바닥 96-웰 플레이트에 0.1x106 세포/mL의 총 농도로 재현탁시켰다. 말초 혈액 단핵 세포를 계수하고 1:5의 표적:이펙터 (T:E)로 MM 세포에 첨가하였다. 24시간 동시 배양 후, PBMC에 의한 특정 표적 세포 용해는 제조업자의 지침에 따라 어넥신 V-AF647 및 7-AAD를 사용하여 측정하였고 샘플은 Attune NxT 세포측정기 (Thermo Fisher) 상에서 전개하였다.
PBMC 및 MM 세포 처리 검정 과정. 96웰 디쉬는 항-CD3 항체 (OKT3, 3 μg/mL)로 예비 코팅시키고 실험 개시 전 밤새 4℃에서 항온배양하였다. 동결된 PBMC 공여자 세포는 10% FBS를 갖는 RPMI 배지에서 2분 동안 37℃에서 해동시키고 세포 계수 및 생존능은 Vi- CELL 분석기 상에서 측정하였다. 말초 혈액 단핵 세포는 세척하고 1x106 세포/mL로 희석하고 200 μL의 총 용적에서 화합물 처리된 플레이트에 분주하였다. 세포는 항-CD3-코팅된 플레이트 상으로 전달하기 전 2시간 동안 화합물로 항온배양하고 추가로 72시간 동안 항온배양하였다. 동시에, MM 세포주 (NCI-H929, H929-1051, OPM2, OPM2-P10)는 0.1 x 106 세포/mL의 최종 농도로 희석하고 제조업자의 지침에 따라 CellTrace CFSE로 표지하였다. 다발성 골수종 세포주는 이어서 200 μL의 총 용적에서 화합물 처리된 플레이트에 분배하고 72시간 동안 항온배양하였다. 72시간 후, PBMC 및 MM 세포를 계수하고 1:5의 최종 T:E 비로 U-바닥 96웰 플레이트에 전달하였다. 24시간 동시 배양 후, PBMC에 의한 특정 표적 세포 용해는 제조업자의 지침에 따라 어넥신 V-AF647 및 7-AAD를 사용하여 측정하였고 샘플은 Attune NxT 세포측정기 상에서 전개하였다.
결과. 동시 배양 모델을 사용하여 건강한 공여자로부터 취한 PBMC의 항-종양 활성에 대한 화합물 2의 직접적인 효과를 결정하였다. IL-2 활성화된 PBMC의 화합물 2 처리는 농도-의존적 방식으로 비처리된 K562 세포의 사멸을 유도하였다(도 14, 우측 패널). 화합물 2-처리된 PBMC　(IC50 = 5.9 pM)는 말리도미드-처리된 (POM; IC50 = 0.004 μM) 것보다 ~600-배 더 강력하였고 50% 직접적인 K562 세포 사멸을 성취하는데 레날리도마이드-처리된 (LEN; IC50 = 0.02 μM) PBMC 보다 ~2600-배 더 강력하다. 화합물 2는 레날리도마이드 및 포말리도마이드 보다 더 강력하지만, 반응 정도는 화합물 중에서 유사하였다(도 14, 우측 패널).
화합물 2로 항온배양된 PBMC의 항-MM 세포 활성에 대한 화합물 2의 효과는 민감성 세포에서의 반응과 비교하기 위해 내성 표현형을 나타내는 세포주에서 추가로 조사하였다. 상이한 동시 배양 모델에서, PBMC 공여자 세포는 항-CD3 항체 코팅된 플레이트 상에서 72시간동안 배양하기 전 2시간 동안 화합물 2, 레날리도마이드 또는 포말리도마이드로 전처리하였다. 화합물 2로 처리된 항-CD3 항체-활성화된 PBMC는 비처리된 레날리도마이드-민감성 (NCI-H929; IC50 = 0.005 μM) 및 레날리도마이드-내성(H929-1051; IC50 = 0.0002 μM) MM 세포주의 종양 세포 용해에서 유사한 정도로 농도-의존적 증가를 입증하였다(도 15). 화합물 2는 생존 MM 세포의 퍼센트를 감소시키는 것과 관련하여 레날리도마이드 및 포말리도마이드 보다 더 강력하였다. PBMC에 의한 종양 세포 사멸의 유사한 수준은 레날리도마이드-민감성 및 레날리도마이드-내성 동시-배양된 종양 세포에 대항하는 것으로 나타났고 이는 PBMC가 이들의 내성 표현형과 무관하게 종양 세포를 사멸시키도록 프라이밍됨을 보여준다.
화합물 2를 사용한 면역 세포의 예비 항온배양은 MM 세포의 표적화 및 용해를 증진시키기 때문에, 면역-매개된 사멸에 대한 이들의 민감성에 대한 MM 세포와 화합물 2의 예비 항온배양 효과를 또한 탐구하였다(도16, 표 12). 4개의 MM 세포주 및 항-CD3 항체-활성화된 PBMC는 72시간 동안 화합물 2, 레날리도마이드 또는 포말리도마이드를 사용하여 별도로 예비 항온배양하였다. 항-CD3 항체-활성화된 PBMC 및 MM 세포주 둘 다가 화합물 2, 레날리도마이드, 또는 포말리도마이드로 전처리되고 이어서 동시 배양하는 경우, PBMC-유도된 MM 세포 용해에 대한 효과는 사멸 반응의 효능 및 정도 둘 다에서 증진되었다. 면역 및 종양 세포 동시 배양물 대비 단일 MM 세포 배양물로부터의 IC50 값들을 비교하여, 화합물 2는 ~7000-배까지 NCI-H929 세포의 사멸을 증진시켰고, 이것은 H929-1051 세포의 사멸을 ~6000-배까지 증진시켰다. 포말리도마이드-내성 OPM2-P10 세포주에 대하여, MM 세포의 화합물 2 처리는 면역-매개된 사멸을 ~3000-배까지 증진시켰다(표 12).
동시 배양에 비해 단일 배양에서 다발성 골수종 세포주에서 면역 매개된 세포 사멸
다발성 골수종 세포주 배양 조건 면역-매개된 세포 사멸IC 50 (μM)
레날리도마이드 포말리도마이드 화합물 2
NCI-H929 단일 >10 >10 0.5810
동시 배양 0.3173 0.0444 8.702e-005
H929-1051 단일 >10 >10 0.5753
동시 배양 0.8782 0.0713 0.0001
OPM2 단일 >10 0.6273 0.0003
동시 배양 1.722 0.1685 9.361e-005
OPM2-P10 단일 >10 >10 >10
동시 배양 8.094 1.181 0.0031
RPMI-8226 단일 >10 >10 0.0134
동시 배양 0.1245 0.0676 8.387e/-005
IC50 = 50% 세포 사멸을 유도하는 농도.
결론: 화합물 2-처리된 PBMC는 비처리된 K562 및 MM 세포주의 종양 용해를 레날리도마이드 및 포말리도마이드를 사용하여 나타난 바와 동일한 정도로 유도하였지만 많은 큰 효능을 갖는다. 더욱이, 종양 세포 사멸은 PBMC 및 MM 세포주 둘 다가 화합물 2로 전처리되는 경우 크게 증진되었고, 이는 이의 강력한 세포 자율 효과에 추가로, 화합물 2가 또한 MM 세포주의 면역원성을 증진시킬 수 있음을 지적한다. 이의 면역조절 성질에 추가로 MM 세포에 대한 강력한 세포-자율 및 면역원성 효과의 조합은 화합물 2가 클리닉을 위해 잠재적 후보물이도록 하였다.
실시예 14: 다발성 골수종에 대한 다라투무맙과 조합된 화합물 2의 효과
다발성 골수종의 치료를 위해 승인된 항-CD38 항체인 다라투무맙은 항체-의존적 세포 세포독성(ADCC), 항체-의존적 세포 식세포작용 (ADCP), 및 보체-의존적 세포독성 (CDC)을 통한 이의 항-골수종 활성을 나타낸다. 다라투무맙과 조합된 화합물 2 또는 포말리도마이드의 효과는 MM 세포주에서 평가하였다.
ADCC 검정: 다라투무맙-매개된 ADCC에 대한 화합물 2 또는 포말리도마이드의 효과는 MM 세포주의 패널에서 유동 세포측정에 의해 시험관내 평가하였다. NK 세포는 검정 개시 전에 10 U/mL의 재조합 인간 IL-2를 함유하는 NK 배양 배지에서 밤새 배양하였다. NK 세포를 세척하고 3.75 x 106 세포/mL로 NK 세포 배양 배지에 다시 재현탁시켰다. MM 세포는 ADCC 검정에서 사용하기 전에 72시간 동안 화합물 2 또는 포말리도마이드의 준-치사 농도로 전처리하였다. MM 세포를 세척하고 제조업자의 지침에 따라 Tag-it VioletTM 증식 및 세포 추적 안료 (Cell Tracking Dye)로 표지시킴에 이어서 0.75 x 106 세포/mL의 농도로 NK 배양 배지에서 재현탁시켰다. ADCC 검정은 96웰 플레이트에서 10:1의 이펙터 대 종양 비율로 3회 수행하였다. MM 세포 (10 μL)는 20 μL의 NK 세포를 첨가하기 전에 웰에서 2x 농도의 10 μL의 다라투무맙과 혼합하였다. 동시-배양물은 3시간 동안 37℃에서 항온배양함에 이어서 실온에서 15분 동안 50 μL의 7-AAD 용액을 첨가하였다. 상기 분석은 BD Celesta 유동 세포측정기 상에서 수행하였다.
ADCP 검정: 다라투무맙-매개된 ADCP에 대한 화합물 2 또는 포말리도마이드의 효과는 MM 세포주의 패널에서 결정하였다. 단핵구는 50 ng/mL의 M-CSF를 함유하는 100 μL 용적의 완전 AIM-V 배지에서 웰당 40,000 세포로 96웰 플레이트에 분주하였다. 세포는 대식세포로 분화되도록 하기 위해 9일 동안 37℃, 5% CO2 항온배양이기에 위치시키기 전 실온에서 15분 동안 플레이트 상에 침강되도록 하였다. 배양 배지는 3 내지 4일 마다 새로운 완전 배지로 보충되었다. ADCP 검정날 아침에, 대식세포는 MM 세포와 동시 배양하기 전 37℃, 5% CO2에서 2 내지 4시간 동안 혈청 고갈시켰다. MM 세포는 72시간 동안 화합물 2 또는 포말리도마이드의 준-치사 농도로 전처리하였다. 검정 날에, MM 세포를 PBS로 세척하고 15분 동안 CSEF로 표지시켰다. 반응은 동등한 용적의 20% FBS로 종료시켰다. 세포를 PBS로 2회 세척하고 1.6 x 106 세포/mL로 AIM-V 배지에 재현탁시켰다. 이어서 50 μL의 MM 세포는 혈청 고갈된 대식세포로 첨가하기 전에 실온에서 10분 동안 50 μL의 2 μg/mL 다라투무맙과 혼합하였다. 각각의 조건은 3회 검정하였다. 검정의 최종 용적은 2:1의 이펙터 대 표적 비와 함께 10% 인간 혈청을 함유하는 200 μL였다. 상기 플레이트는 1분 동안 500 rpm에서 회전시킴에 이어서 3시간 동안 37℃, 5% CO2에서 항온배양하였다. 항온배양 말기에, 플레이트는 100 μL의 PBS로 세척하고 나머지 세포는 항-CD14 및 항-CD138로 염색시켜 각각 대식세포 및 MM 세포를 동정하였다. 플레이트는 세척하고 웰에 100 μL의 PBS를 충전시켰다. 대식세포는 50 μL의 0.25% 트립판의 첨가와 함께 웰의 바닥으로부터 탈착시켰다. 샘플은 50 μL의 완전 AIM-V 배지의 첨가로 중화시켰다. 샘플은 유동 세포측정 상에서 분석하였다. 퍼센트 식세포작용은 CSFE/CD14 이중 양성 세포를 CD14+ 세포 총수로 나누고 여기에 100을 곱하여 결정하였다.
결과: 화합물 2 및 포말리도마이드를 사용한 MM 세포의 처리는 CD38 발현의 용량-의존적 증가를 유도하였다(도 17). CD38 발현의 정도는 화합물 2를 사용하여 보다 컸고 포말리도마이드와 비교하여 보다 낮은 농도에서 일어났다. MM 세포 +/- 화합물 2 또는 포말리도마이드 전처리는 다라투무맙을 사용한 ADCC 검정에서 평가하였다. 화합물 2 처리된 MM 세포는 비처리된 세포와 비교하여 다라투무맙을 사용한 보다 높은 정도의 종양 용해를 입증하였다(도 18). 화합물 2 처리된 세포는 또한 포말리도마이드 처리된 세포와 비교하여 다라투무맙-매개된 ADCC에 보다 민감하였다. 다라투무맙-매개된 ADCP를 조절하는 화합물 2 및 포말리도마이드의 능력을 또한 시험하였다. 화합물 2 처리된 MM 세포는 비처리되고 포말리도마이드 처리된 세포와 비교하여 다라투무맙-매개된 ADCP에 보다 민감하였다(도 19). 시험된 단지 하나의 세포주, ARH-77는 화합물 2 또는 포말리도마이드 중 하나를 사용하여 증진된 ADCP를 보여주지 않았지만 화합물 2를 사용한 증진된 ADCC를 입증하였다.
결론: 화합물 2는 MM 세포에서 CD38 발현을 상향조절하고 포말리도마이드 또는 비처리된 세포와 비교하여 증가된 다라투무맙-매개된 ADCC 및 ADCP를 유도한다. 이 데이터는 다라투무맙과 화합물 2의 조합이 포말리도마이드 또는 다라투무맙 단독의 조합과 비교하여 MM의 치료에서 보다 효과적일 수 있음을 시사한다.
실시예 15: 다발성 골수종에 대한 프로테아좀 억제제와 조합된 화합물 2의 효과
프로테아좀 억제제 및 시험 화합물을 사용한 치료 24시간 전에, 적당한 수의 세포는 새로운 배지에서 0.2x106/mL의 농도로 분할하여 대수증식 성장을 가능하게 한다. 치료일에, 화합물은 DMSO 중에서 새롭게 용매화하였다. 프로테아좀 억제제 보르테조밉 또는 카필조밉을 희석하고 보르테조밉에 대해 150 nM 또는 300 nM 및 카필조밉에 대해서는 300 nM 또는 550 nM의 최종 작동 농도로 예비 가온된 배양 배지에 첨가하였다. 프로테아좀 억제제 농도는 특정 양의 β5 프로테아좀 활성을 억제하기 위해 요구되는 PI의 지속기간 및 농도를 결정하는 각각의 세포주에서 이전의 연구뿐만 아니라 임상적 Cmax 농도를 기준으로 결정하였다. 세포를 계수하고 적당한 수를 프로테아좀 억제제를 함유하는 배지에 위치시키고 완전히 혼합하였다. 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 항온배양한 후, 세포는 40 mL의 완전 배지로 2회 세척하여 프로테아좀 억제제를 제거하였다. 각각의 프로테아좀 처리 분취액을 검정하여 β5, β2, 및 β1 서브유닛 억제 정도를 확인하였다. 세포는 0.1x106/mL로 재현탁시키고 화합물 2 또는 포말리도마이드의 3회 적정액을 함유하는 새로운 배양-웨어에 100 μL/웰로 분주하였다. 분주된 세포는 최대 72시간까지 나머지 실험 동안 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 24시간 마다, 프로테아좀 억제는 세포-기반 프로테아좀-Glo 검정에 의해 모니터링하였다. 증식 및 아폽토시스는 유동 세포측정에 의해 72시간 째에 측정하였다. 세포는 APC 어넥신-V 및 7-AAD로 염색하여 배양물에 잔류하는 생존 세포의 수를 계수하였다.
결과. 시험관내 세포 검정은 프로테아좀 억제제 보르테조밉 및 카필조밉으로의 노출에 대한 임상적 약동학 (PK) 및 약력학 (PD)을 모방하기 위해 확립하였다. 상기 모델은 프로테아좀 억제제의 짧은 노출에 이어서 화합물의 완전한 세척 제거를 사용하여 세포에 임상적 관련 농도의 프로테아좀 억제제를 투여하고, 생체내 관찰된 신속한 제거를 성취한다. 더우기, β5 프로테아좀 억제의 비교 가능한 수준은 모든 세포주에 걸쳐 성취될 수 있다. 상기 모델을 사용하여 다발성 골수종 및 혈장 세포 백혈병 세포주 (포말리도마이드 내성 OPM2.P10, RPMI.8226, 및 혈장 세포 백혈병 세포주 L363 및 JJN-3)의 패널에서 보르테조밉 또는 카필조밉과 조합된 화합물 2의 조합 효과를 평가하였다.
보르테조밉 및 화합물 2는 혈장 세포 백혈병 세포주 JJN-3의 하나에서뿐만 아니라 시험된 2개의 MM 세포주, OPM2.P10 및 RPMI.8226에서 조합 효과를 입증하였다. L363 세포주에서 조합 효과는 보르테조밉이 상기 시험관내 검정의 조건하에서 세포 생존능에 대한 단일 제제 활성을 갖지 않기 때문에 평가될 수 없다(도 20 및 도 21a).
실험 간에 카필조밉 처리가 세포 이들이 1시간 처리 과정 동안에 성취하는 세포 사멸 퍼센트에서 가변적이지만, 화합물 2와의 조합 효과는 모든 4개의 세포주에서 결정되었다(도 21b).
결론: 놀랍게도, 화합물 2는 프로테아좀 억제의 임상적 관련 수준에서 세포 사멸 능력을 유지한다. 보르테조밉 또는 카필조밉과 화합물 2의 조합은 MM 세포에 대한 아폽토시스 및 항증식 활성에서의 증가를 입증하였다.
실시예 16: 히스톤 데아세틸라제 억제제, 화학치료요법제, Bcl-2 억제제, Mcl-1 억제제, BET 억제제 또는 LSD-1 억제제와 조합된 화합물 2의 효과.
화합물 2와 다양한 기전을 갖는 소분자 억제제를 사용한 조합 처리 효과는 MM 세포주의 패널에서 평가하였다. 13개의 소분자 억제제들은 이들의 전임상 및/또는 MM에 대한 이들의 활성을 기준으로 화합물 2를 사용한 조합 연구를 위해 선택하였다. 세포주 H929-1051, KMS11, KMS-12PE, L363, OPM-P10, 및 RPMI8226은 MM 세포주에 걸쳐 상이한 유전학적 클러스터링 그룹을 나타내기 위한 상기 연구를 위해 선택하였다. 조합 치료를 위한 화합물 농도는 단일 제제의 IC50 미만의 1 로그 초과 및 2 로그 미만의 범위에서 선택하였다. 조합 제제는 1:3 희석에서 6 포인트 용량 반응 곡선 (DRC)에서 투여하였고, 화합물 2는 또한 1:3 희석에서 10 포인트 DRC에서 투여하였다. 조합 실험은 2회 수행하고 매번 별도의 플레이트 상에서 중복 데이터를 수득한다. 화합물은 어쿠스틱 디스펜서를 사용하여 384-웰 플레이트의 적당한 웰에 예비 점적하였다. 모든 MM 세포주는 1x 페니실린-스트렙토마이신을 함유하는 지정된 세포 배양 배지를 사용하여 5% CO2와 함께 37℃에서 항온배양기에서 배양하였다. 세포는 멀티드롭 콤비 시약 디스펜서를 사용하여 384-웰 플레이트를 함유하는 화합물에 첨가하고 5% CO2와 함께 37℃에서 3일 동안 항온배양되도록 하였다. 3일 후, 세포는 발광 검출기 (PerkinElmer Envision) 상에서 측정된 세포 역가-Glo를 통해 ATP 함량의 이들 수준에 대해 평가하였다.
최고 단일 제제 (HAS) 방법을 사용하여 용량 반응 곡선 데이터에서 상승작용을 검출하였다. 조합은 반응 표면 관점으로부터 분석하였다. 통계학적 프레임워크 (참조: Van Der Borght, K., et al., BIGL:Biochemically Intuitive Generalized Loewe null model for prediction of the expected combined effect compatible with partial agonism and antagonism; Scientific Reports, 7 (1), 17935-1-17935-9 (2017))는 2개의 통계학적 시험을 사용하여 HAS 널 모델에 대한 분석으로 혼입하였다:1) 완전한 반응 표면은 널 모델과 상이하고, 2) 단일 웰은 널 모델과 상이하다.
결과: 화합물 2와 다양한 기전을 갖는 소분자 억제제를 사용한 조합 처리 효과는 다발성 골수종 세포주의 패널에서 평가하였다. 화합물 2는 14개 화합물과 조합하여 스크리닝하였고 상승작용은 6개 세포주에 대한 모든 웰에 걸쳐 계산하였다. 덱사메타손 및 에토포시드는 시험된 6개 세포주 중 5개 세포에서 화합물 2와 조합된 유의적 상승작용을 보여주었다(도 22). 화합물 2와 BET 억제제 (4-[2-(사이클로프로필메톡시)-5-(메탄설포닐)페닐]-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온(화합물 D), 비라브레십, 및 GSK525762A)의 조합은 또한 MM 세포에서 상승작용 활성을 입증하였고, 3개의 억제제 간에는 상이한 상승작용 정도를 갖는다. 화합물 2와 AMG176 (MCL-1 억제제)의 조합은 3개의 세포주 (KMS11, KMS12-PE, L363)에서 상승작용 활성을 보여주었고 화합물 2와 ACY241 및 파노비노스태트 (히스톤 데아세틸라제 억제제)의 조합은 각각 L363/OPM2-P10 및 L363/H929-1051에서 상승작용적이었다. 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 (화합물 E)과 조합된 화합물 2는 L363 및 KMS12-PE 세포에서 상승작용적이었다. MCL-1 억제제인 MIK665는 시험된 6MM 세포주에서 유의적 상승작용을 보여주지 않은 유일한 화합물이었다.
결론: 14개 소분자 중 12개와 조합된 화합물 2를 사용한 치료는 시험된 MM 세포주 중 적어도 하나 이상에서 상승작용 활성을 입증하였다. 6개 화합물의 조합은 시험된 적어도 3MM 세포주에서 상승작용을 보여주었다(도 22). 상기 데이터는 시험된 소분자 억제제와 화합물 2의 조합 치료가 상승작용 활성을 갖는 일부를 포함하는, MM에 대한 잠재적 치료 패러다임을 나타냄을 시사한다.
실시예 17: 단독의 화합물 2 및 덱사메타손과 조합된 화합물 2의 생체내 항종양 활성.
방법: 이종이식체 연구는 레날리도마이드-내성 NCI-H929 (H929-1051) 다발성 골수종/형질세포종 종양을 함유하는 암컷 SCID 마우스를 사용하여 수행하였다. 암컷 SCID 마우스는 우측 뒷다리에서 H929-1051 세포를 피하 접종하였다. 동물 접종 후, 종양은 무작위화전 대략 100 mm3으로 성장하도록 하였다. 종양 세포 접종 후 13일 째에, 79 내지 157 mm3 범위의 H929-1051을 함유하는 마우스를 함께 풀링하고 다양한 처리 그룹으로 무작위화하였다. 화합물 2는 물 중 2% HPMC (현탁액으로서) 중에 제형화하였다. 덱사메타손은 탈이온수 중에 0.5% CMC/0.25% Tween 80에 제형화하였다. 화합물 2 (0.1 mg/kg) 및 덱사메타손 (0.5 mg/kg)은 종양 세포 접종 후 13일로부터 개시한 연구의 지속 기간 동안 하루 1회 경구적으로 투여하였다. 조합 그룹에서, 동물에게 화합물 2 (0.1 mg/kg/일) 및 덱사메타손 (0.5 mg/kg/일)을 종양 세포 접종 후 13일째로부터 개시하는 연구의 지속 기간 동안 동시에 투여하였다. 종양은 캘리퍼를 사용하여 주당 2회 측정하였고 종양 용적은 화학식 W2 x L/2를 사용하여 계산하였다. 통계학적 분석은 분산 (variance)의 원-웨이 또는 2-웨이 분석 (ANOVA)을 사용하여 수행하였다. 상승작용 계산은 분획 생성물 방법을 사용하여 수행하였다.
결과: 단일 제제 화합물 2를 사용한 치료는 (-34%) H929-1051 다발성 골수종 종양 성장을 유의적으로 (p<0.01) 억제 (-34%)하였다. 단일 제제로서 덱사메타손을 사용한 치료는 H929-1051 이종이식체 종양 성장을 매우 약간 억제 (-20%)하였다. 0.5 mg/kg에서 덱사메타손과 조합하여 투여된 0.1 mg/kg에서 화합물 2를 사용한 치료는 비히클 대조군과 비교하는 경우 종양 용적에서 유의적 (p < 0.0001) 감소를 생성하고, 84%의 종양 용적 감소를 나타낸다. 본페로니 포스트-시험을 사용한 2-웨이 ANOVA에서, 상기 조합 항종양 활성은 단독의 화합물 2 (84% 대 34% TVR; p < 0.0001) 또는 단독의 덱사메타손 (84% 대 20% TVR; p < 0.0001)보다 유의적으로 우수하였다. 분획적 생성물 방법을 사용하여, 0.1 mg/kg에서 화합물 2 및 0.5 mg/kg에서 덱사메타손의 조합은 종양 용적을 감소시키는데 상승작용하는 것으로 결정되었다. (도 23)
결론: 덱사메타손과 조합된 화합물 2는 NCI-H929 다발성 골수종/형질세포종 종양 모델에서 종양 용적을 감소시키는데 상승작용을 나타냈고, 이는 화합물 2 및 덱사메타손의 조합 치료가 레날리도마이드-내성 MM 모델에서 상승작용 항종양 활성을 보여주었음을 지적한다. 화합물 2는 덱사메타손의 아폽토시스 활성을 강화하고, 클리닉에서 화합물 2와 조합하여 사용되는 경우 덱사메타손의 용량을 감소시키기 위한 잠재력을 지적한다.
실시예 18: 단독의 화합물 2 및 보르테조밉과 조합된 화합물 2의 생체내 항종양 활성.
방법: 이종이식체 연구는 레날리도마이드-내성 NCI-H929 (H929-1051) 다발성 골수종/형질세포종 종양을 함유하는 암컷 SCID 마우스를 사용하여 수행하였다. 암컷 SCID 마우스는 우측 뒷다리에서 H929-1051 세포를 피하 접종하였다. 동물 접종 후, 종양은 무작위화전 대략 500 mm3으로 성장하도록 하였다. 종양 세포 접종 후 31일 째에, 366 내지 535 mm3 범위의 H929-1051을 함유하느 마우스를 함께 풀링하고 다양한 처리 그룹으로 무작위화하였다. 화합물 2는 물 중 2% HPMC (현탁액으로서) 중에 제형화하였다. 보르테조밉은 식염수 중 1% DMSO (현탁액으로서) 중에 제형화하였다. 화합물 2 (1 mg/kg)는 종양 세포 접종 후 31일로부터 개시한 연속 3일 동안 하루 1회 경구적으로 투여하였다. 보르테조밉 (1 mg/kg)은 종양 세포 접종 후 31일 째에 단일 용량으로 정맥내 투여하였다. 조합 그룹에서, 동물에게 31 내지 33일에 화합물 2 (1 mg/kg/일)를 경구적으로 투여하였고 보르테조밉은 31일 째에 단일 용량으로서 정맥내 투여하였다. 31일 째에 보르테조밉은 화합물 2의 제1 투여 전 1시간에 투여하였다. 종양은 캘리퍼를 사용하여 주당 2회 측정하였고 종양 용적은 화학식 W2 x L/2를 사용하여 계산하였다. 동물은 종양 용적이 대략 2000 mm3의 예비 결정된 평가변수에 도달한 경우 안락사시켰다. 통계학적 분석은 분산 (variance)의 원-웨이 또는 2-웨이 분석 (ANOVA)을 사용하여 최대 50일까지 수행하였다. 상승작용 계산은 분획 생성물 방법을 사용하여 수행하였다.
결과: 종양 세포 접종 후 31 내지 33일 째에 연속 3일 동안 (qdx3) 하루 1회 투여하는 경우 단일 제제 화합물 2를 사용한 치료는 50일 째에 H929-1051 다발성 골수종 종양 성장을 유의적으로(p<0.0001) 억제 (-44%)하였다. 시간 경과에 따라, 화합물 2 (1 mg/kg)-처리된 동물 종양은 성장하였고 58일까지 대략 2000 mm3에 도달하였다. 31일 째에 단일 용량으로 투여되는 경우 보르테조밉을 사용한 치료는 50일 째에 H929-1051 이종이식체 종양 성장을 유의적으로 (p<0.0001) 억제 (-60%)하였다. 시간 경과에 따라, 보르테조밉 (1 mg/kg)-처리된 동물 종양은 성장하였고 66일까지 대략 2000 mmmm3에 도달하였다. 1 mg/kg (단일 용량)에서 보르테조밉과 조합하여 투여된 경우 1 mg/kg (qdx3)에서 화합물 2를 사용한 치료는 비히클 대조군과 비교하는 경우 종양 용적에서 유의적 (p < 0.0001) 감소를 생성하고, 50일까지 98%의 종양 용적 감소를 나타낸다. 본페로니 포스트-시험을 사용한 2-웨이 ANOVA에서, 상기 조합 항종양 활성은 단독의 화합물 2 (98% 대 44% TVR; p < 0.0001) 또는 단독의 보르테조밉 (98% 대 60% TVR; p < 0.0001)보다 유의적으로 우수하였다. 분획적 생성물 방법을 사용하여, 1 mg/kg에서 화합물 2 및 1 mg/kg에서 덱사메타손의 조합은 종양 용적을 감소시키는데 상승작용하는 것으로 결정되었다. 놀랍게도, 종양 세포 접종 53일까지, 화합물 2와 보르테조밉의 조합으로 치료된 9마리의 동물 중 7마리는 종양 부재가 되었고 종양 부재로 남아있다. (도 24)
결론: 보르테조밉과 조합된 화합물 2는 레날리도마이드-내성 NCI-H929 형질세포종 종양 모델에서 종양 용적을 감소시키는데 상승작용을 나타냈고 놀랍게도 종양 부재 동물을 생성하였다.
실시예 19: 단계 1 임상 연구 - 재발성 및 난치성 다발성 골수종
단계 1 멀티센터, 개방-표지 연구는 재발성 및 난치성 다발성 골수종 (RRMM)을 갖는 대상체에서 덱사메타손과 조합된 화합물 2의 안전성, 약동학 및 예비 효능을 평가하기 위해 수행한다.
목적: 연구의 1차 목적은 약동학 (PK), 안전성/관용성을 평가하고 최소의 2개의 화합물 2 투여 스케줄과 함께 덱사메타손과 조합된 화합물 2의 최대 관용성 용량 (MTD)/추천된 파트 2 용량 (RP2D)을 정의하는 것이다. 2차 목적은 덱사메타손과 조합된 화합물 2의 예비 효능을 평가하는 것이다.
연구 디자인: 이것은 RRMM을 갖는 대상체에서 덱사메타손과 조합된 화합물 2의 안전성, PK/PD 및 예비 효능을 평가하기 위한 개방-표지, 멀티-센터, 국제, 단계 1 연구이다. 모든 적격의 대상체는 실패하거나, 비관용성이거나 다르게는 RRMM에서 임상적 이득을 부여하는 것으로 공지된 가용한 치료요법을 위한 후보물이 아니다.
상기 연구는 2개의 파트로 수행한다: 파트 1은 동시, 표준 용량의 덱사메타손과의 상승하는 용량의 화합물 2의 PK/PD 및 안전성을 평가하고 최소의 2개의 상이한 투여 스케줄에 따라 투여되는 경우 조합을 위한 MTD/RP2D를 결정한다. 파트 2는 RP2D에서 화합물 2 + 2개의 투여 스케줄에 대한 덱사메타손의 단일 아암 확장 코호트(들)로 이루어진다. 안전성, PK 및 PD 평가에 추가로, 모든 대상체는 국제 골수종 연구 그룹 (Myeloma Working Group) (IMWG) 균일 반응 표준 (Uniform Response Criteria) (Rajkumar et al., 임상적 시험을 위한 컨센서스 추천 (Consensus recommendations for the uniform reporting of clinical trials): 국제 골수종 워크샵 컨센서스 패널 1의 보고 (report of the International Myeloma Workshop Consensus Panel 1). Blood, 2011, 117(18):4691-5; Kumar et al., International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma, Lancet Oncology, 2016, 17:e328-46) 에 따라 매월 반응 평가를 진행하고, 질환 진행, 비관용성 독성 또는 연구 치료를 중단하기 위한 담당의 또는 대상체 결정때까지 연구 치료를 계속할 수 있다.
상기 연구는 인체 사용/우수한 임상 실습 (GCP)을 위한 ICH ((International Council on Harmonisation) 기술 요구사항 및 해당 규제 요구사항을 준주하여 수행된다.
파트 1 (용량 상승): RRMM을 갖는 대상체의 코호트는 상승 용량의 화합물 2 + 고정된 용량의 덱사메타손(≥75세 이상의 대상체에서 40 mg/용량; 20 mg/용량)을 투여받고 이의 안전성, MTD/RP2D 및 PK/PD 프로필을 평가한다.
최소 2개의 상이한 투여 스케줄은 파트 1에서 평가하고, 첫번째 스케줄은 먼저 연속 10일의 하루 1회 (QD) 투여에 이어서 무치료 4일 x 2 각각 28일 주기 (20/28 스케줄로서 언급됨)로 이루어진다. 2번째 스케줄은 연속 3일 동안 하루 2회 (BID) 투여에 이어서 연구치료 부재 11일 x 2 각각의 주기 (6/28 스케줄로서 언급됨)로 이루어진다. 초기 용량 코호트는 20/28 스케줄 상에서 0.1 mg/일 화합물 2 QD 및 6/28 스케줄 상에서 0.2 mg BID를 투여받는다. 대상체 할당은 1개 또는 2개 스케줄에 대한 대상체 슬롯의 가용성에 따라 스폰서에 의해 할당한다. 투여 스케줄 간의 전환은 허용되지 않는다. 추가의 투여 스케줄 (예를 들어, 화합물 2 투여 5일에 이어서 무치료 9일 x 2 또는 투여 7일에 이어서 무치료 7일 x 28일 주기당 2)는 20/28 및 6/28 스케줄과 함께 초기 안전성의 결과 및 PK/PD 결과에 따른 프로토콜 보정 항목하에 연구될 수 있다.
모든 스케줄에 대해, 주기 1, 1-28일은 MTD를 결정할 목적을 위해 용량-제한 독성 (DLT) 평가 기간을 구성한다. 대상체는 이들이 20/28 스케줄 상에서 20회 투여 일수의 적어도 16일 상에서 및 주기 1에서 6/28 스케줄 상에서 6회 투여 일수(10회 투여)의 적어도 5일 상에서 화합물 2의 처방된 용량을 투여받거나 DLT를 경험한 경우 DLT에 대해 평가할 수 있다. 비-DLT 평가할 수 있는 대상체는 대체한다.
각각의 스케줄에서, 3명 이상의 대상체의 코호트는 외래 원인으로 명확하고 논란의 여지가 없는 2개의 2 등급 치료로 인한 부작용 발생 때까지 연속 코호트에서 100% 증분에서 증가하는 용량에서 화합물 2를 투여받는다. 이후, 50%를 초과하지 않는 용량 증분은 제1 DLT의 발생 때까지 계속한다. 로지스틱 회귀를 사용한 베이에시안 (Bayesian) 용량 상승 방법은 투여 스케줄에서 제1 DLT의 발생 후 사용되고, 화합물 2의 할당된 용량, 하루 당 투여 수 (QD 대 BID) 및 공변수로서 각각의 스케줄 (3 대 10)에 대해 연속 3일 투여 횟수를 갖는다. 화합물 2 + 덱사메타손의 조합을 위한 표적 독성 비율은 모든 스케줄에 대해 20%이다.
대상체내 용량 상승은 DLT 평가 기간 동안에 그러나 주기 2 및 그 이상에서 허용되지 않고, 화합물 2의 이들의 할당된 용량에 관용성인 질환 진행 증거가 없는 대상체 (조사자의 판단에서 및 연구 의학적 모니터와의 협의)는 할당된 투여 스케줄 내에서 대상체의 적어도 하나의 코호트에 의해 적당히 관용성인 것으로 나타난 최고 용량 수준으로 상승시킬 수 있다.
파트 2 (코호트 확장): 파트 1의 완료시, 화합물 2 + 덱사메타손의 단일-아암 확장 연구는 RP2D 및 스케줄에서 이의 안전성, PD 및 효능을 추가로 평가하기 위한 투여 스케줄에 따라 20명의 대상체에서 수행한다.
화합물 2 + 덱사메타손에 대한 RP2D의 결정 시, 상이한 사전 치료 병력 및/또는 예후적 특성을 갖는 하나 이상의 대상체 코호트에서 관심 대상의 다른 항-골수종 제제, 예를 들어, 항-CD38과 조합된 화합물 2/덱사메타손의 안전성/관용성, PK 및 예비 효능의 평가는 또한 상기 프로토콜의 일부로서 병행하여 개시될 수 있다.
연구 집단: 이들의 마지막 치료 라인에 난치성이거나, 재발성 및 난치성 질환을 갖는 대상체에 임상적 이득을 제공하는 것으로 공지된 가용한 치료요법에 실패하거나 이에 비관용성이거나 다르게는 후보물이 아니고, 동부 협력 암학 그룹 수행능 상태 (Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) (ECOG PS) 0-2, 측정가능한 질환, 및 적당한 골수, 신장 및 심장 기능을 갖는 MM을 갖는 ≥18세 이상의 대상체는 등록할 수 있다. 동종이계 이식 병력, 비- 또는 올리고분비 MM, 형질 세포 백혈병 또는 1차 난치성 MM의 병력을 갖는 대상체 (즉, 사전 치료 용법에 대해 적어도 최소의 반응 병력을 갖지 않는)는 배제된다.
포함 기준: 대상체는 연구에 등록하기 위해서는 하기의 기준을 충족해야만 한다:
1. 대상체는 통보된 동의서 (ICF)에 서명 시점에 ≥18세 이상이다.
2. 대상체는 임의의 연구-관련 평가/과정들을 수행하기 전에 ICF를 이해하고 자발적으로 이에 서명해야만 한다.
3. 대상체는 연구 방문 스케줄 및 다른 프로토콜 요건을 고수할 의지가 있고 고수할 수 있다.
4. 0, 1 또는 2의 동부 협력 암학 그룹 (ECOG) 수행능 상태 스코어.
5. 대상체는 등록시에 MM 및 측정가능한 질환의 보고된 진단을 가져야만 한다. 측정 가능한 질환은 하기에 정의된 바와 같다:
a. M-단백질은 다음과 같이 정량한다: sPEP 에 의해 ≥ 0.5 g/dL 또는
b. uPEP에 의해 ≥200 mg/24 h 뇨 수거 또는
c. 혈청 FLC 수준 > 100 mg/L (밀리그램/리터)는 검출 가능한 혈청 또는 뇨 M-단백질이 없는 대상체에서 경쇄 및 비정상 카파/람다(κ/λ) 비율을 포함하거나
d. 면역글로불린 부류 A (IgA)를 갖는 대상체에 대해, 이의 질환이 단지 정량적 면역글로불린 측정, 혈청 IgA 수준 ≥0.50 g/dL에 의해 단지 신뢰할 수 있게 측정될 수 있는 골수종.
6. 모든 대상체는 다음과 같아야 한다:
a. 이들의 마지막 골수종 치료요법의 마지막 투여로부터 60일 째에 또는 60일 이내에 보고된 질환 진행을 가져야만 하고,
b. RRMM을 갖는 대상체에 임상적 이득을 부여하는 것으로 공지된 가용한 치료요법을 사용한 치료에 실패하거나, 이에 비관용성이거나 다르게는 이에 대한 후보물이 아니어야 한다.
주지사항: 사전 치료요법 라인은 개별적으로 (임의의 순서로) 투여되거나 함께 투여되는 프로테아좀 억제제 및 세레브론 조절제를 (최소로) 포함해야만 한다.
7. 대상체는 하기의 연구 값을 가져야만 한다:
·≥7일 이상 동안 (페그필그라스팀에 대해 ≥14일 이상) 성장 인자 지지가 없는 절대 호중구 계수 (ANC) ≥ 1.25 x 109/L.
·헤모글로빈 (Hgb) ≥ 8 g/dL.
·≥7일 이상 (골수에서 >50% 혈장 세포를 갖는 대상체에 대해 ≥ 50 x 109/L) 동안 수혈 없이 혈소판 (plt) ≥ 75 x 109/L.
·올바른 혈청 칼슘 ≤ 13.5 mg/dL (≤ 3.4 mmol/L).
·24-시간 크레아티닌 소거율 (CrCl) ≥ 45 mL/분.
·AST/SGOT 및 ALT/SGPT ≤ 3.0 x 정상의 상한치 (ULN).
·혈청 빌리루빈 ≤ 1.5 x ULN.
·뇨산 ≤ 7.5 mg/dL (446 μmol/L).
·PT/INR < 1.5 x ULN 및 부분 트롬보플라스틴 시간 (PTT) < 1.5 x ULN, (치료학적 항응고를 투여받지 않은 대상체에 대해).
주지사항: 등록 >3개월 초과 전에 발생한 혈전색전증에 대해 치료요법을 받은 대상체는 이들이 와파린, 저분자량의 헤파린 또는 다른 승인된 치료학적 항응고 용법과 함께 항응고의 안정한 용법 상에 있는 한 적격이다.
8. 가임 여성 (FCBP)은 다음과 같아야 한다:
a. 연구 치료요법을 개시학 전 연구자에 의해 입증된 바와 같은 2개의 음성 임신 시험을 가져야만 한다. 여성은 연구 과정 동안에 및 화합물 2의 중단 후 계속적인 임신 시험에 동의해야만 한다. 이것은 대상체가 심지어 이성애자 접촉으로부터 진정한 절제*를 수행한 경우라도 적용한다.
b. 어느 하나는 이성애자 접촉 (매월 기준 및 보고된 소스 상에서 검토되어야만 한다)으로부터의 진정한 절제*를 해야만 하거나 사용에 동의해야만 하고, 연구 치료요법 동안에 (투여 중단 동안을 포함하는) 화합물 2를 개시하기 전 28일 및 연구 치료요법의 중단 후 28일 동안 중단 없이 2개의 신뢰할 수 있는 형태의 피임을 준수할 수 있다.
주지사항: 가임 여성 (FCBP) 은 다음과 같은 여성이다:1) 일부 시점에서 초경을 성취하고 2) 자궁절제술 또는 양쪽 난소적출술을 진행하지 않았거나, 3) 적어도 연속 24개월 동안 (즉, 이전의 연속 24개월에서 임의의 시점에 월경이 있었다) 자연적으로 폐경후 (암 치료요법 후 무월경은 가임 가능성을 배제하지 않는다)가 아니었다.
9. 여성 대상체는 다음과 같아야 한다:
a. 연구에 참여하는 동안 (심지어 투여 중단 동안에도) 및 성공적인 정관 수술을 받은 경우라도 화합물 2 중단 후 적어도 3개월 동안 진정한 절제* (매월 기준으로 검토되어야만 하는)를 수행하거나 임신 여성 또는 가임 여성과의 성적 접촉 동안에 콘돔 사용에 동의한다.
* 진정한 절제는 이것이 대상체의 바람직하고 통상적인 생활양식에 있는 경우 허용될 수 있다. 주기적 절제 (예를 들어, 칼렌더, 배란, 증상체온, 배란 후 방법) 및 성교 중단 (철회)은 피임의 허용될 수 있는 방법이 아니다.
10. 남성은 화합물 2에 대해 치료중이거나 이의 중단 후 90일 동안 정자를 기증하지 않는 것에 동의해야만 한다.
11. 모든 대상체는 화합물 2에 대해 치료중이거나 이의 중단 후 28일 동안 헌혈을 자제하는 것에 동의해야만 한다.
배제 기준: 임의의 하기의 존재는 대상체를 등록으로부터 배제한다:
1. 대상체는 대상체가 연구에 참여하지 못하도록 하는 유의적인 의학적 병태, 비정상 또는 정신병을 갖는다.
2. 대상체는 연구 비정상의 존재를 포함하여 임의의 병태를 가지며, 이는 대상체를 남성/여성이 연구에 참여하는 경우 허용될 수 없는 위험에 처하게 한다.
3. 대상체는 연구로부터의 데이터를 해석하는 능력을 혼동시키는 임의의 병태를 갖는다.
4. 대상체는 비- 또는 올리고분비 다발성 골수종을 갖는다.
5. 대상체는 혈장 세포 백혈병 또는 활성 연수막 골수종증을 갖는다.
6. 대상체는 전신 경쇄 아밀로이드증 또는 다중 신경 병증, 유기 거대증, 내분비 병증, 모노클로날 감마 병증 및 피부 변화 (POEMS) 증후군을 보고하였다.
7. 대상체는 면역글로불린 부류 M (IgM) 골수종을 갖는다.
8. 대상체는 동종이계 골수 이식의 병력을 갖는다.
9. 대상체는 투석을 받고 있다.
10. 말초 신경병증 ≥ 등급 2를 갖는 대상체.
11. 화합물 2의 흡수를 유의적으로 변화시킬 수 있는 위장 질환을 갖는 대상체.
12. 대상체는 하기 중 어느 하나를 포함하는 손상된 심장 기능 또는 임상적으로 유의적인 심장 질환을 갖는다:
·스크리닝 시에 ECHO 또는 MUGA 스캔에 의해 결정된 바와 같이 LVEF < 45%.
·스크리닝 시에 완전한 좌측 번들 브랜치 (bundle branch), 두다발 차단 또는 다른 임상적으로 유의적인 비정상적 심전도 (ECG) 발견.
·프레데리시아 QT 보정 화학식 (Fredericia’s QT correction formula)을 사용한 Qtc 간격 >480 밀리초 (ms)의 반복된 입증에 의해 정의된 바와 같은 스크리닝 ECG 상에 QT 간격의 연장; 토르사데스 드 포인트 (Torsades de Pointe) (예를 들어, 심부전증, 저칼륨혈증의 병력 또는 현재 위험 인자, 긴 QT 증후군의 가계 병력); 및 QT/QTc 간격을 연장시키는 의약의 동시 투여.
·울혈성 심부전증 (뉴욕 심장 연합 부류 III 또는 IV (New York Heart Association Class III 또는 IV)).
·화합물 2를 개시하기 전 ≤ 6개월 심근경색.
·협심증의 프린츠메탈 변형체를 포함하는 불안정하거나 불량하게 제어된 협심증.
13. 강한 CYP3A 조절제의 동시 투여.
14. 대상체는 어느 것이 보다 짧든 간에 화합물 2를 개시하기 전 ≤ 5 반감기 또는 4주 째에 사전에 전신 골수종 치료 (승인되거나 연구중인)를 갖는다.
15. 대상체는 화합물 2를 개시하기 전 주요 수술 ≤ 2주를 가졌다. 주지사항:대상체는 최근 수술의 임의의 임상적으로 유의적인 효과로부터 회복되었어야 한다.
16. 대상체는 임신 또는 수유중인 여성이거나 연구에 참여 동안에 임신하게 되는 경향이 있다.
17. 대상체는 공지된 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 감염을 갖는다.
18. 대상체는 공지된 활성 만성 간염 B 또는 C형 바이러스 (HBV/HCV) 감염을 갖는다.
19. 대상체는 계속적인 전신 치료를 요구하는 동시 제2 암의 병력을 갖는다.
20. 대상체는 대상체가 치유적 의도로 치료된 하기의 비침습성 악성 종양을 제외하고 ≥3년 동안 질환이 없었던 경우가 아니라면 MM 이외의 다른 사전 악성 종양 병력을 갖는다:
·피부의 기본 또는 편평 세포 암종.
·자궁경관 또는 유방에 대한 동일계 암종.
·단계 1 방광암.
·치유적 의도로 치료받은 악성 종양 또는 전립선 암의 종양/결절/전이 (TNM) 분류를 사용한 종양 단계 1a 또는 1b (T1a 또는 T1b)와 같은 국부 전립선 암의 우연한 조직학적 발견
21. 대상체는 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드 또는 덱사메타손에 대한 아나필락시스의 병력을 갖는다.
22. 대상체는 화합물 2 또는 덱사메타손의 제형에 함유된 부형제에 공지된 또는 의심되는 과민성을 갖는다.
23. 대상체는 화합물 2를 개시하는 14일 이내에 하기 중 어느 하나를 착수하였다:
·혈장반출
·MM 연합된 골 병변의 증상적 경감을 위한 국부 치료요법을 제외한 방사선 치료요법.
24. 대상체는 화합물 2의 제1 투여 전 14일 이내에 면역억제 의약을 투여받았다. 하기는 상기 표준에 예외이다:
·비강내, 흡입된, 국소 또는 국부 코르티코스테로이드 주사 (예를 들어, 관절내 주사).
·10Mg/일의 프레드니손 또는 등가물을 초과하지 않는 용량에서 전신 코르티코스테로이드.
·과민성 반응 (예를 들어, 컴퓨터 단층촬영 (CT) 스캔 사전의약)에 대한 사전의약으로서 스테로이드.
25. 대상체는 프로토콜 요구되는 정맥 혈전색전증 (VTE) 예방을 진행핼 수 없거나 진행할 의지가 없다.
연구 기간: 연구 참여의 대상체 지속기간 당 평균은 대략 6개월인 것으로 예상된다. 완전한 등록은 완전히 하기 위해 대략 21개월이 걸린다 (파트 1에 대해 18 개월 및 파트 2에 대해 3개월). 활성 치료 및 치료 후 후속 완성은 추가의 6 내지 12개월 걸리는 것으로 예상된다. 전체 연구는 대략 33개월 동안 계속될 것으로 예상된다.
시험 종료는 치료 후 후속을 완전화하기 위해 마지막 대상체의 마지막 방문 일자, 또는 어느 것이 이후 날자인지 상관없이 프로토콜에 탐구 분석을 위해 요구되는 마지막 대상체 기원의 마지막 날자의 수령 일자로서 정의된다.
연구 치료: 화합물 2는 20/28 스케줄에 등록된 대상체에 대해 하루 1회 또는 6/28 스케줄에 등록된 대상체에 대해 하루 2회 경구적으로 투여된다. 20/28 투여 스케줄에 등록된 대상체에 대해, 화합물 2는 적어도 6시간 지속하는 밤새 단식 후 적어도 240 mL의 물을 아침에 투여한다. 대상체는 각각 아침 용량 후 적어도 2h 동안 음식 또는 다른 의약 섭취를 하지 말아야 한다. 6/28 스케줄에 등록된 대상체는 각각의 투여 일의 제1 투여 동안 20/28 스케줄에 대해 명시된 바와 같이 상기 언급된 지침에 따른다. 제2 용량은 아침 투여 후 12 ± 2시간에 투여되고, 음식 섭취 후 적어도 4h 및 음식 섭취 전 2h에 투여된다. 예를 들어, 6/28 투여 스케줄에 등록된 대상체는 예상컨대 오전 7:00시에 화합물 2의 초기 용량에 이어서 아침 오전 9:00시에, 점심 정오, 2시간 이후 저녁 식사 섭취 (즉, 오후 7:00 보다 더 이른 시간이 아닌)와 함께 오후 5:00로서 일찍이 화합물 2의 이들의 제2 용량.단지 주기 1에서, 화합물 2는 1일 내지 3일째 (아침 및 저녁), 14일째 (저녁에만), 15일 및 16일째 (아침 및 저녁) 및 17일째 (단지 아침에)에 투여됨을 주지한다.
투여 스케줄 둘 다에 대해, 덱사메타손은 단식 상태에서 화합물 2와 함께 투여되거나 음식과 함께 화합물 2 적어도 2시간 후 (둘 다가 동시에 투여되어야만 하는 경우, PK 평가일을 제외하고) 투여된다. 각각 20/28 또는 6/28 투여 스케줄 상에서 1일 8일 (주기 1에서만 10일), 15 및 22일, 또는 1, 3, 15일 (주기 1에서만 14일) 및 각각의 주기의 17일 째에 주어지는 덱사메타손은 화합물 2와 동시에 단식된 상태로 투여될 수 있다. 대안적으로 (덱사메타손 유도된 위 자극의 병력을 갖는 환자에서), 이것은 둘 다가 모든 환자에게 동시에 투여되어야만 하는 경우의 PK 평가일을 제외하고는 화합물 2의 적어도 2시간 후 음식과 함께 투여될 수 있다. 모든 대상체에 대해, 덱사메타손의 각각의 용량은 < 75세 대상체에 대해 40 mg 및 ≥ 75세 대상체들에 대해서는 20 mg이다.
주요 효능 평가의 검토: 1차 효능 변수는 최상의 반응이 IMWG 균일 반응 기준 (Rajkumar et al Blood 2011; 117(18):4691-5)에 의해 결정된 바와 같이 ≥ PR인 대상체의 퍼센트로서 정의되는 최상의 전체 반응율 (ORR)이다. 대상체는 매월 반응 평가를 진행한다. 골수종 반응은 센트럴 참조 연구에서 평가된 연구 조사 (혈청 단백질 전기영동 (sPEP), 뇨 단백질 전기영동 (uPEP), 면역고정 전기영동 (IFE), 무혈청 경쇄(sFLC) 수준, 정량적 면역글로불린 A (IgA), 혈장 세포 정량을 위한 골수, 적절한 경우) (즉, 보정된 혈청 칼슘, 양전자 방출 단층촬영/컴퓨터 스캔 (PET/CT) 또는 골 병변 평가를 위한 형질세포종 평가 및/또는 CT 또는 골격 조사를 위한 자기 공명 이미지화 (MRI) 연구 현자 조사자에 의해 결정된다. 추가의 효능 변수는 반응까지의 시간 (화합물 2의 제1 투여로부터 반응 ≥ PR의 제1 보고까지의 시간), 반응의 지속 기간 (반응의 제1 보고 (≥ PR)에서 PD 또는 사망의 제1 보고까지의 시간) 및 진행 부재 생존 (화합물 2의 제1 용량으로부터 질환 진행의 1차 발생 또는 임의의 원인으로부터 사망까지의 시간)을 포함한다.
유효한 기준선 및 적어도 하나의 기준선 후 반응 평가를 갖는 모든 안전성 대상체는 효능 분석에 포함된다. 치료가 질환 진행 이외의 다른 이유로 중단되는 경우, 대상체는 진행, 동의 철회, 사망 또는 새로운 전신 항-골수종 치료요법의 개시 때까지 어느 것이 가장 먼저 이든 상관없이 특정된 평가 스케줄에 따른 반응 평가를 계속할 것이 요구된다.
주요 안전성 평가의 개요: 본 연구를 위한 안전성 변수는 치료 신생 부작용 (TEAE) 및 물리적 발견/활력 징후, 선택된 연구 분석물 및 12-리드 심전도 (ECG)에서 기준선으로부터의 변화를 포함한다. 추가의 안전성 측정기준은 연구 치료 (화합물 2 및 덱사메타손 둘 다)로의 노출 정도, 동시 의약 용도의 평가 및 가임기 여성 (FCBP)에 대한 임신 시험을 포함한다.
약동학 평가의 개요: PK 프로필 (초기 용량 및 안정성 상태)은 화합물 2, 이의 R-에난티오머 (화합물 3) 및 덱사메타손에 대해 평가한다. 노출-반응 분석은 적당히 화합물 2 RP2D의 동정을 원조하기 위해 수행될 수 있다.
상기된 구현예는 단지 예시를 위한 것으로 의도되고 당업자는 단지 통상의 실험, 특정 화합물의 수개의 등가물, 재료 및 과정들을 사용하여 인지하거나 확인할 수 있다. 모든 상기 등가물은 본 발명의 범위 이내에 있는 것으로 고려되고 첨부된 청구항에 의해 보호된다.

Claims (42)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 1 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 동위이성체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염인, 화합물:

    1.
  2. 하기 화학식 2의 화합물 2 또는 호변이성체, 동위이성체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염인, 화합물:

    2.
  3. 제1항에 있어서,
    하기 화학식 1의 화합물 1인, 화합물:

    1.
  4. 제1항에 있어서,
    화합물 1의 약제학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  5. 제2항에 있어서,
    하기 화학식 2의 화합물 2인, 화합물:

    2.
  6. 제2항에 있어서,
    화합물 2의 약제학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는, 다발성 골수종을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    다발성 골수종을 치료하는 방법에 사용되고, 상기 방법은 치료학적 유효량의 상기 화합물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 화합물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 다발성 골수종이 재발성, 불응성 또는 저항성인, 화합물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 다발성 골수종이 레날리도마이드에 불응성 또는 저항성인, 화합물.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 다발성 골수종이 포말리도마이드에 불응성 또는 저항성인, 화합물.
  12. 제9항에 있어서,
    상기 다발성 골수종이 1, 2, 또는 3가지 항-다발성 골수종 치료요법에 불응성 또는 저항성인, 화합물.
  13. 제8항에 있어서,
    상기 다발성 골수종이 p53 돌연변이, p53의 동종접합성 결실, 하나 이상의 종양발생 드라이버의 활성화, 또는 하나 이상의 염색체 전좌를 특징으로 하는, 화합물.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 p53 돌연변이가 Q331, R273H, K132N, R337L, W146, S261T, E286K, R175H, E258K 또는 A161T 돌연변이이고; 상기 하나 이상의 종양발생 드라이버가 C-MAF, MAFB, FGFR3, MMset, 사이클린 D1 및 사이클린 D로 이루어진 군으로부터 선택되고; 상기 염색체 전좌가 t(14;16), t(14;20), t(4;14), t(11;14), t(6;20), t(20;22) 또는 t(16;22)인, 화합물.
  15. 제8항에 있어서,
    상기 다발성 골수종이 새로 진단된 다발성 골수종인, 화합물.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 다발성 골수종이 새로 진단된, 이식-적격의 다발성 골수종인, 화합물.
  17. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 유도 치료요법으로서 투여되는, 화합물.
  18. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 공고 치료요법으로서 투여되는, 화합물.
  19. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 유지 치료요법으로서 투여되는, 화합물.
  20. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 0.1 내지 2 mg/일의 양으로 투여되는, 화합물.
  21. 제20항에 있어서,
    상기 화합물이 1 mg/일의 양으로 투여되는, 화합물.
  22. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 28일 주기의 1 내지 10일 및 15 내지 24일에 투여되는, 화합물.
  23. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 28일 주기의 1 내지 3일 및 15 내지 18일에 투여되는, 화합물.
  24. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 28일 주기의 1 내지 7일 및 15 내지 21일에 투여되는, 화합물.
  25. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 21일 주기의 1 내지 14일에 투여되는, 화합물.
  26. 제8항에 있어서,
    상기 화합물이 28일 주기의 1 내지 21일에 투여되는, 화합물.
  27. 제8항에 있어서,
    상기 방법이 제2 활성제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 화합물.
  28. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 덱사메타손, 다라투무맙, 프로테아솜 억제제, 히스톤 탈아세틸화효소 억제제, 화학요법 제제, Bcl-2 억제제, Mcl-1 억제제, BET 억제제, 또는 LSD-1 억제제 또는 이들의 조합인, 화합물.
  29. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 ACY241, AMG176, 비라브레십, 4-[2-(사이클로프로필메톡시)-5-(메탄설포닐)페닐]-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온, 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴, 사이클로포스파마이드, 덱사메타손, 독소루비신, 에토포사이드, GSK525762A, MIK665, 파노비노스타트, 베네토클락스 또는 빈크리스틴인, 화합물.
  30. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 덱사메타손인, 화합물.
  31. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 보르테조밉인, 화합물.
  32. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 카르필조밉인, 화합물.
  33. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 다라투무맙인, 화합물.
  34. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 덱사메타손 및 보르테조밉의 조합인, 화합물.
  35. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 덱사메타손 및 다라투무맙의 조합인, 화합물.
  36. 제27항에 있어서,
    상기 제2 활성제가 덱사메타손 및 카르필조밉의 조합인, 화합물.
  37. 하기 화학식 2의 화합물 2를 제조하기 위한 방법으로서,

    2
    하기 화학식 2f의 화합물 2f를, 유기 용매 중에서 산과 접촉시켜, 화합물 2를 제공하는 것을 포함하는 것인, 방법:

    2f.
  38. 하기 화학식 1의 화합물 1 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체 또는 이의 동위이성체를 제조하는 방법으로서,

    1
    하기 화학식 1a의 화합물 1a 또는 거울상이성체 또는 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체 또는 이의 동위이성체를 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 3-플루오로-4-(피페라진-1-일)벤조니트릴과 접촉시키켜, 화합물 1을 제공하는 것을 포함하는 것인, 방법:

    1a
    여기서, X는 이탈기이다.
  39. 하기 화학식의 화합물 또는 거울상이성체, 거울상이성체들의 혼합물, 호변이성체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:

    여기서, 하나 이상의 Y 원자는 중수소로 동위원소적으로 농축된 수소(들)이며, 임의의 나머지 Y 원자(들)은 비-농축된 수소 원자(들)이다.
  40. 제39항에 있어서,

    인, 화합물.
  41. 제39항에 있어서,

    인, 화합물.
  42. 삭제
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