KR102654944B1 - 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법, 이에 의해 제조되는 항산화용 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents
클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법, 이에 의해 제조되는 항산화용 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
식물 원물에 제1 용매로서 에탄올 또는 글리세린을 포함하는 용매를 가하여 식물 원물에서 클로로필을 제거하는 제1 추출단계; 및 상기 제1 추출단계의 추출 잔사에 제2 용매로서 알코올 또는 알코올 수용액을 가하여 추출하는 제2 추출단계를 포함하는 추출물의 제조방법에 관한 것으로, 일 양상에 따른 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법에 의하면, 폴리페놀, 플라보노이드를 포함한 유효성분의 함량이 증가된 추출물을 제공할 수 있고, 상기 추출물은 항산화 효능이 증대되는 효과가 있다.
Description
본 발명은 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
천연 항산화제(antioxidant)의 항산화 효과는 합성 항산화제와는 다르게 부작용이 거의 없어, 노화방지의 솔루션으로 부각되었으며, 각종 천연물로부터 얻은 추출물을 이용한 제품이 출시되면서, 기업들의 경쟁이 치열해지고 있다. 천연 항산화제는 식물에 많이 함유되어 있는 것으로 알려져 있고, 식물종에 따라 다양한 유효성분을 포함하고 있어, 유효성분의 종류와 함량에 따라 다양한 효능을 나타내는 것으로 알려져 있다. 이에 각종 식물종으로부터 유효성분이 다량 함유되어 있는 추출물을 얻기 위해 식품, 의약품, 화장품 등의 다양한 분야에서 유효성분을 얻기 위한 다양한 연구를 진행하고 있다.
화장품 및 식품 산업에서 요구되는 기능성 추출물을 얻기 위해 열수 추출과 유기용매 추출이 주로 이용되고 있다. 식물로부터 유효성분을 추출하기 위한 추출방법 중 가장 널리 사용되고 있는 유기용매 추출의 경우, 유기용매에 용해되는 거의 모든 물질들이 추출되기는 하나, 유효성분의 순도가 매우 낮고, 열수 추출의 경우 유효성분의 순도는 높일 수 있으나, 고온에서 추출하기 때문에 열 안정성이 낮은 유효성분이 파괴될 수 있고, 용매로 사용되는 물이 세포벽을 파괴하기 어려워 추출효율이 매우 낮은 문제점을 가지고 있다.
용매로 식물의 유효성분을 추출할 때 다량의 클로로필이 포함되어 함께 추출되며, 이로 인해 유효성분의 추출효율이 저하되는 것으로 알려져 있다. 따라서 식물 원물로부터 유효성분의 함량이 증가된 추출물을 수득하기 위한 클로로필 제거기술이 필요한 실정이다.
식물 원물에서 클로로필을 포함한 색소 성분을 제거하고자하는 다양한 방법들이 연구되어 왔다. 한국등록특허 10-1256222호는 방사선을 이용한 레드비트 추출물의 색소를 제거하는 방법에 관한 것으로서, 레드비트 추출물에 방사선을 조사해, 복잡한 색소 제조 과정 없이 레드비트 추출물의 색소를 제거할 수 있는 방법이 개시되어 있으나, 방사선을 사용하기 때문에 에너지가 많이 소비되고 이용이 제한적이며, 추출물 중의 유용성분의 화학적 구조나 함량이 변할 수 있다는 한계가 있다.
한국등록특허 10-1288303호에는 색소 및 향 성분이 제거된 진세노사이드 고함유 인삼액의 제조방법이 개시되어 있으나, 여과방법 중 규조토를 사용하는 단계를 포함하고 있어 천연물의 색소 및 향 성분뿐만 아니라 다른 유효성분도 제거되는 단점이 있다.
이에, 본 발명자들은 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법을 완성하였다.
일 양상은 식물 원물에 제1 용매로서 에탄올 또는 글리세린을 포함하는 용매를 가하여 식물 원물에서 클로로필을 제거하는 제1 추출단계; 및
상기 제1 추출단계의 추출 잔사에 제2 용매로서 알코올 또는 알코올 수용액을 가하여 추출하는 제2 추출단계를 포함하는 식물 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 제조방법에 의하여 제조된 식물 추출물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 식물 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 식물 원물에 제1 용매로서 에탄올 또는 글리세린을 포함하는 용매를 가하여 식물 원물에서 클로로필을 제거하는 제1 추출단계; 및
상기 제1 추출단계의 추출 잔사에 제2 용매로서 알코올 또는 알코올 수용액을 가하여 추출하는 제2 추출단계를 포함하는 식물 추출물의 제조방법을 제공한다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법은 추출물 내의 폴리페놀, 플라보노이드 또는 유효성분의 함량이 증가된 추출물을 제조하는 것일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 제1 용매는 에탄올 또는 글리세린을 단독으로 포함하거나 혼합된 형태로 포함할 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 제1 용매는 에탄올을 70 중량% 내지 99 중량% 및 글리세린을 1 중량% 내지 30 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
상기 제1 추출단계는 추출시, 추출 시간은 1시간 내지 7일일 수 있고, 바람직하게는 6시간 내지 5일일 수 있으며, 보다 바람직하게는 12시간 내지 3일일 수 있고, 보다 더 바람직하게는 24시간일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 제1 추출단계는 4℃ 내지 150℃, 10℃ 내지 100℃ 또는 15℃ 내지 50℃에서 수행될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 추출단계는 10℃ 내지 30℃에서 수행되는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 추출단계는 추출용매와 식물 원물을 포함한 총 중량을 기준으로 식물 원물을 1 내지 20 중량%, 5 내지 15 중량% 또는 5 중량%로 포함하여 수행될 수 있다.
본 발명에 있어서, 알코올은 하이드록시기가 탄소 원자에 결합된 유기 화합물을 의미하며, 1가 알코올 및 다가알코올을 포함한다.
예를 들어, 1가 알코올은 메탄올, 에탄올, 부탄올, 프로판올 및 이소프로판올 등을 포함할 수 있고, 다가알코올은 하이드록시기를 2개 이상 가지고 있는 알코올을 의미하며, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로판디올 및 폴리에틸렌글라이콜 등을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 알코올 수용액은 알코올과 물이 혼합된 용매를 의미한다.
일 실시양태에 있어서, 상기 제2 용매는 부틸렌글리콜, 글리세린, 프로판디올로 이루어진군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 제2 용매는 부틸렌글리콜을 1 중량% 내지 80 중량%, 10 중량% 내지 50 중량% 또는 35 중량% 내지 45 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
상기 제2 추출단계는 추출시, 추출 시간은 1시간 내지 7일일 수 있고, 바람직하게는 6시간 내지 5일일 수 있으며, 보다 바람직하게는 12시간 내지 3일일 수 있고, 보다 더 바람직하게는 24시간일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 제2 추출단계는 4℃ 내지 150℃, 10℃ 내지 100℃, 30℃ 내지 80℃ 또는 15℃ 내지 50℃에서 수행될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
일 구체예에 있어서, 상기 제2 추출단계는 40℃ 내지 60℃에서 수행되는 것일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 제2 추출단계는 초음파를 이용한 추출이 병행되는 것일 수 있다.
상기 초음파는 100 내지 3000 kHz, 300 내지 2000 kHz 또는 700 내지 1200kHz의 진동수를 갖는 것 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 초음파를 이용한 추출 시간은 5분 내지 24시간일 수 있고, 바람직하게는 30분 내지 12시간일 수 있으며, 보다 바람직하게는 45분 내지 6시간일 수 있고, 보다 더 바람직하게는 1시간일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 추출 잔사는 클로로필이 제거된 것일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 식물 원물은 녹차, 자소엽, 어성초, 및 쑥으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 식물 원물은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
일 양상은 상기 제조방법에 의하여 제조된 추출물을 제공한다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 녹차추출물의 추출물 내 폴리페놀 함량은 500 내지 1200 μg/mL, 600 내지 1100 μg/mL, 700 내지 1000 μg/mL 또는 900 내지 950 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 녹차추출물의 추출물 내 플라보노이드 함량은 250 내지 750 μg/mL, 350 내지 650 μg/mL 또는 450 내지 550 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 녹차추출물의 추출물 내 EGCG(Epigallocatechin Gallte) 함량은 250 내지 600 mg/kg, 300 내지 500 mg/kg 또는 350 내지 400 mg/kg 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 자소엽추출물의 추출물 내 폴리페놀 함량은 100 내지 250 μg/mL, 120 내지 230 μg/mL, 140 내지 210 μg/mL 또는 160 내지 200 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 자소엽추출물의 추출물 내 플라보노이드 함량은 200 내지 800 μg/mL, 300 내지 700 μg/mL, 400 내지 600 μg/mL 또는 450 내지 550 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 자소엽추출물의 추출물 내 Rosmarinic acid 함량은 5 내지 70 mg/kg, 15 내지 60 mg/kg, 25 내지 50 mg/kg 또는 35 내지 45 mg/kg 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 어성초추출물의 추출물 내 폴리페놀 함량은 100 내지 270 μg/mL, 130 내지 250 μg/mL, 160 내지 230 μg/mL 또는 190 내지 220 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 어성초추출물의 추출물 내 플라보노이드 함량은 200 내지 800 μg/mL, 250 내지 700 μg/mL, 300 내지 600 μg/mL 또는 350 내지 400 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 어성초추출물의 추출물 내 Isoquercitrin 함량은 5 내지 50 mg/kg, 10 내지 40 mg/kg, 15 내지 30 mg/kg 또는 20 내지 35 mg/kg 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 쑥추출물의 추출물 내 폴리페놀 함량은 100 내지 250 μg/mL, 130 내지 230 μg/mL, 160 내지 210 μg/mL 또는 180 내지 200 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 쑥추출물의 추출물 내 플라보노이드 함량은 300 내지 1000 μg/mL, 400 내지 900 μg/mL, 500 내지 800 μg/mL 또는 650 내지 750 μg/mL 일 수 있다.
일 실시양태에 있어서, 상기 방법으로 제조된 쑥추출물의 추출물 내 Isoquercitrin 함량은 0.2 내지 1 mg/kg, 0.3 내지 0.9 mg/kg, 0.4 내지 0.8 mg/kg 또는 0.6 내지 0.75 mg/kg 일 수 있다.
본 발명에 있어서, 용어 "추출물"은 목적하는 물질을 다양한 용매에 침지한 다음, 상온 또는 가온 상태에서 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물에 더하여, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 이들의 조정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다. 이에 따라, 본 발명에서 제공하는 추출물은 이를 추출 처리하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함하는 것으로 해석될 수 있다.
일 양상은 상기 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
일 구체예에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.0001 중량% 내지 99.0 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 1 중량% 내지 50 중량%, 1 중량% 내지 40 중량%, 2 중량% 내지 40 중량%, 3 중량% 내지 30 중량%, 3 중량% 내지 20 중량%, 3 중량% 내지 18 중량%, 3 중량% 내지 15 중량% 또는 3 중량% 내지 10 중량%로 포함되는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 상기 추출물을 조성물 전체 중량에 대하여 0.1 중량% 내지 10 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 유연화장수, 영양화장수, 유액, 로션, 크림, 페이스트, 젤, 용액, 현탁액, 오일, 왁스, 팩, 파우더, 파운데이션, 스프레이, 계면활성제-함유 클렌징 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 더욱 상세하게는, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 영양 크림, 마사지 크림, 밀크로션, 파우더, 에센스, 아이 크림, 선로션, 선크림, 메이크업 프라이머, 메이크업 베이스, 비비크림, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 비누, 팩, 스틱상 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 화장품에 통상 사용되는 추가 성분, 예컨대, 점증제, 분산제, 향료, 충전제, 보존제, 방부제, 중성화제, 감미료, 비타민, 자유-라디칼 스케빈저, 금속 이온 봉쇄제, 기능성 성분 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있는 임의의 통상적 미용 성분을 더 포함할 수 있다. 당업자는 본 명세서에 따른 조성물의 유리한 특성이 예상된 첨가에 의해 악영향을 받지 않거나 실질적으로 받지 않도록, 임의의 추가 성분 및/또는 이의 양을 선택할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 계면활성제-함유 클렌징 제형인 경우 담체 성분으로 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물이 크림 또는 젤 제형인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액 제형인 경우에는 용매, 용매화제 또는 유탁화제로, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 현탁액 제형인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이 제형인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더를 더 포함할 수 있고, 특히 스프레이 제형인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 단독 또는 중복으로 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
일 실시양태에 있어서 상기 화장료 조성물은 항산화용인 것일 수 있다.
다른 양상은 식물 원물에 제1 용매로서 에탄올 또는 글리세린을 포함하는 용매를 가하여 식물 원물에서 클로로필을 제거하는 제1 추출단계; 및
상기 제1 추출단계의 추출 잔사에 제2 용매로서 알코올 또는 알코올 수용액을 가하여 추출하는 제2 추출단계를 포함하는 식물 추출물의 클로로필을 제거하는 방법을 제공한다.
일 양상에 따른 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법에 의하면, 폴리페놀, 플라보노이드를 포함한 유효성분의 함량이 증가된 추출물을 제공할 수 있고, 상기 추출물은 항산화 효능이 증대되는 효과가 있다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 명세서 및 청구범위에 사용된 용어 또는 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정 해석되지 아니하며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
본 발명의 명세서 전체에 있어서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명의 명세서 전체에 있어서, "A 및/또는 B"는, A 또는 B, 또는 A 및 B를 의미한다.
실시예 1. 추출물의 제조
1.1. 클로로필(Chlorophyll) 제거 단계
식물 원물 5kg에 20배 중량의 제1 용매를 가한 후, 실온에서 24시간 침지하여 추출하였다. 그 후 상층액을 제거하고 실온에서 12시간 건조하고 이후 열풍건조기(55℃ 내지 65℃)를 이용하여 12시간 추가 건조하여 추출 잔사를 수득하였다.
1.2. 유효성분 추출단계
상기 클로로필 제거 단계에서 수득한 추출 잔사에 제2 용매를 가하여, 추출물을 수득하였다.
구체적으로, 클로로필 제거 전의 식물 원물 기준으로 1 g에 상응하는 양으로 추출하기 위하여, (추출 잔사 중량/식물 원물 중량) X 1 g의 추출 잔사에 100 g의 제2 용매를 가하였다. 그 후 50℃에서 24시간 추출을 수행하였고, 그 중 1시간은 초음파추출을 병행하였다.
제조예 1 및 비교제조예 1 내지 5의 제조에 사용한 제1 용매 및 제2 용매를 하기 표 1에 나타내었다.
| 단위: 중량% | 제조예 1 | 비교제조예 1 | 비교제조예 2 | 비교제조예 3 | 비교제조예 4 | 비교제조예 5 |
| 제1 용매 | 에탄올70% +글리세린30% | 에탄올70% +글리세린30% | 에탄올70% +글리세린30% | 물 | 물 | 물 |
| 제2 용매 | 부틸렌 글리콜40% | 부틸렌 글리콜30% + 글리세린5% | 프로판디올40% | 부틸렌 글리콜40% | 부틸렌 글리콜30% + 글리세린5% | 프로판디올40% |
녹차, 자소엽, 어성초 및 쑥 각각의 식물 원물에 대해 제조예 1 및 비교제조예 1 내지 5를 제조하였다.
제조예 1 및 비교제조예 1 내지 5에 대응하는 각 식물 원물에 따른 추출물 및 비교추출물을 하기의 표 2에 나타내었다.
| 제조예 1 | 비교제조예 1 | 비교제조예 2 | 비교제조예 3 | 비교제조예 4 | 비교제조예 5 | |
| 녹차 | 추출물1 | 비교추출물1 | 비교추출물2 | 비교추출물3 | 비교추출물4 | 비교추출물5 |
| 자소엽 | 추출물2 | 비교추출물6 | 비교추출물7 | 비교추출물8 | 비교추출물9 | 비교추출물10 |
| 어성초 | 추출물3 | 비교추출물11 | 비교추출물12 | 비교추출물13 | 비교추출물14 | 비교추출물15 |
| 쑥 | 추출물4 | 비교추출물16 | 비교추출물17 | 비교추출물18 | 비교추출물19 | 비교추출물20 |
실험예 1. 유효성분 함량의 측정
1.1. 폴리페놀
추출조건에 따른 유효성분의 함량의 차이를 알아보기 위하여, 각 추출물에 존재하는 총 폴리페놀 함량(Total polyphenol content)을 측정하였다.
총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법에 따라 추출조건에 따른 추출액 0.5 mL에 2N Folin-ciocalteau reagent(F9252, Sigma-Aldrich) 0.1 mL를 첨가하고 충분히 혼합한 다음 8.4 mL의 멸균 증류수를 가하여 실온에서 3분간 반응시킨 후 20% Na2CO3 1 mL를 첨가하고 실온에서 1시간 반응시킨 후 spectrophotometer(Ultraspec 2100pro, Amersham Co., Sweden)를 이용하여 725 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 총 폴리페놀의 함량은 Gallic acid를 정량하여 작성한 표준곡선으로부터 계산하였다.
1.2. 플라보노이드
추출조건에 따른 유효성분의 함량의 차이를 알아보기 위하여, 각 추출물에 존재하는 총 플라보노이드 함량(Total flavonoid content)을 측정하였다.
총 플라보노이드 함량 측정은 Davis방법에 따라 추출액 100 uL에 1 mL diethyl glycol(E4658,Sigma Co.,USA)을 혼합하여 실온에서 5분간 반응 시킨 후 1 N NaOH 100 uL와 혼합하여 37℃에서 30분간 반응 시킨 후 420nm에서 분광광도계(Ultraspec 2100pro, Amersham Co., Sweden)로 흡광도를 측정하였다. 총 플라보노이드 함량은 Quercetin을 정량하여 작성한 표준곡선으로부터 계산하였다.
1.3. 각 식물 원물별 주요 유효성분 함량의 측정
각 식물 원물별 주요 유효성분의 함량의 차이를 알아보기 위하여, 녹차의 경우 EGCG, 자소엽의 경우 Rosmarinic acid, 어성초 및 쑥의 경우 Isoquercitrin을 측정하였다.
- 표준용액 조제
표준원액(지표물질)를 각각 methanol로 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200 μg/kg의 농도로 제조 후 0.2-μm의 syringe filter로 여과하여 이를 표준용액으로 하였다.
- 시험용액 조제
Methanol로 시료를 단계희석법으로 희석 후 0.2-μm의 syringe filter(Hydrophobic PTFE)로 여과후 사용하였다.
- Rosmarinic acid의 HPLC-MS/MS 분석조건
·Instrument: QTRAP 4500 system, AB SCIEX, USA
·Column: Kinetex Polar C18 (2.1X150 mm, 2.6 μm)
·Column oven temperature: 30℃
·Injection volume: 2 μL
·Mobile phase
A: 0.1% Acetic acid in water 70%
B: 0.1% Acetic acid in acetonitrile 30%
·Flow rate: 0.30 mL/min
·LOQ(Limit of Quantitation): 0.01 mg/kg
- EGCG(Epigallocatechin gallate)의 HPLC-MS/MS 분석조건
·Instrument: Thermo Scientific TSQ ALTISTM, USA
·Column: Poroshell EC C18 (2.1X150 mm, 2.7 μm)
·Column oven temperature: 35℃
·Injection volume: 2 μL
·Mobile phase
A: 0.1% Acetic acid in water 95%
B: 0.1% Acetic acid in acetonitrile 5%
·Flow rate: 0.30 mL/min
·LOQ(Limit of Quantitation): 0.01 mg/kg
- Isoquercitrin의 HPLC-MS/MS 분석조건
·Instrument: QTRAP 4500 system, AB SCIEX, USA
·Column: Kinetex Polar C18 (2.1X150 mm, 2.6 μm)
·Column oven temperature: 30℃
·Injection volume: 2 μL
·Mobile phase
A: 0.1% Acetic acid in water 72%
B: 0.1% Acetic acid in acetonitrile 28%
·Flow rate: 0.30 mL/min
·LOQ(Limit of Quantitation): 0.01 mg/kg
각 식물 원물에 대해 유효성분 함량을 측정한 결과를 표 3 내지 6에 나타내었다.
| 추출물 1 | 비교추출물 1 | 비교추출물 2 | 비교추출물 3 | 비교추출물 4 | 비교추출물 5 | |
| 폴리페놀 (μg/mL) |
911.9 | 802.3 | 901.5 | 431.6 | 386.8 | 418.7 |
| 플라보노이드 (μg/mL) |
491.2 | 418.3 | 478.6 | 262.0 | 212.6 | 244.6 |
| EGCG (mg/kg) |
386.34 | 322.16 | 359.82 | 292.38 | 237.68 | 270.21 |
| 추출물 2 | 비교추출물 6 | 비교추출물 7 | 비교추출물 8 | 비교추출물 9 | 비교추출물 10 | |
| 폴리페놀 (μg/mL) |
194.2 | 151.1 | 185.6 | 84.5 | 59.6 | 81.2 |
| 플라보노이드 (μg/mL) |
482.1 | 396.7 | 412.8 | 186.3 | 112.8 | 176.1 |
| Rosmarinic acid (mg/kg) |
41.41 | 32.58 | 38.92 | 3.13 | 2.51 | 2.87 |
| 추출물 3 | 비교추출물 11 | 비교추출물 12 | 비교추출물 13 | 비교추출물 14 | 비교추출물 15 | |
| 폴리페놀 (μg/mL) |
214.3 | 182.6 | 192.7 | 137.6 | 98.8 | 118.1 |
| 플라보노이드 (μg/mL) |
362.2 | 321.4 | 340.1 | 176.9 | 132.7 | 160.1 |
| Isoquercitrin (mg/kg) |
26.09 | 21.98 | 25.14 | 5.22 | 3.81 | 4.88 |
| 추출물 4 | 비교추출물 16 | 비교추출물 17 | 비교추출물 18 | 비교추출물 19 | 비교추출물 20 | |
| 폴리페놀 (μg/mL) |
182.3 | 118.9 | 174.9 | 110.0 | 74.8 | 98.6 |
| 플라보노이드 (μg/mL) |
702.6 | 642.9 | 688.9 | 266.9 | 218.4 | 242.6 |
| Isoquercitrin (mg/kg) |
0.7 | 0.27 | 0.59 | 0.23 | 0.08 | 0.18 |
상기 표 3 내지 6에 나타낸 바와 같이, 제1 용매로서 에탄올 및 글리세린을 포함하는 용매를 사용하여 클로로필을 제거한 뒤 추출한 경우에 제1 용매로서 물을 사용한 경우와 비교하여 폴리페놀, 플라보노이드 및 각 식물 원물의 주요 유효성분의 함량이 증가하는 것을 확인하였다. 또한, 제2 용매로서 부틸렌 글리콜 40%를 포함하는 용매를 사용한 경우에 폴리페놀, 플라보노이드 및 각 식물 원물의 주요 유효성분의 함량이 가장 높은 것을 확인하였다.
상기 결과로부터, 식물 원물로부터 클로로필을 제거한 뒤 유효성분을 추출함으로써 유효성분의 함량이 증가된 추출물을 제조할 수 있는 것을 알 수 있었다.
실험예 2. 항산화 효능의 측정
추출 조건에 따라 추출물의 항산화 효능에 차이가 있는지 알아보았다.
Human Dermal Fibroblasts에 H2O2를 인위적으로 처리한 후 형광물질을 통해 ROS 억제효과가 있는지를 평가하였다. Black 96-well plate에 well당 1.5 Х 104 cell이 되도록 분주한 다음 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. Overnight 한 다음 새로운 배지로 교체해주고 추출물을 농도 별로 투여하여 1시간동안 배양하였다. 배양 후 PBS로 세척하고 H2O2와 DCFH-DA를 처리하여 37℃ microplate reader 485nm에서 excitation, 530nm에서 emission 파장을 측정하여 5분에 한 번씩 30분 동안 측정하고 그 결과를 표 7 내지 10에 나타내었다.
| Relative DCF intensity (% of control) |
Concentration (%, v/v) in test medium | ||||
| Blank | Control | 0.5 | 1.0 | 2.0 | |
| H2O2 (0.5 mM) | |||||
| 추출물 1 | 22.8 | 100 | 73.9 | 54.0 | 40.7 |
| 비교추출물 1 | 22.8 | 100 | 80.8 | 68.3 | 49.4 |
| 비교추출물 2 | 22.8 | 100 | 78.2 | 56.7 | 42.1 |
| 비교추출물 3 | 23.7 | 100 | 98.1 | 63.6 | 56.6 |
| 비교추출물 4 | 23.7 | 100 | 99.2 | 78.9 | 60.8 |
| 비교추출물 5 | 23.7 | 100 | 98.8 | 69.8 | 58.4 |
| Relative DCF intensity (% of control) |
Concentration (%, v/v) in test medium | ||||
| Blank | Control | 0.5 | 1.0 | 2.0 | |
| H2O2 (0.5 mM) | |||||
| 추출물 2 | 19.8 | 100 | 83.9 | 77.6 | 73.7 |
| 비교추출물 6 | 19.8 | 100 | 86.2 | 79.1 | 77.5 |
| 비교추출물 7 | 19.8 | 100 | 84.8 | 78.1 | 75.8 |
| 비교추출물 8 | 22.5 | 100 | 92.6 | 92.0 | 86.4 |
| 비교추출물 9 | 22.5 | 100 | 95.8 | 94.1 | 88.7 |
| 비교추출물 10 | 22.5 | 100 | 93.6 | 93.2 | 88.1 |
| Relative DCF intensity (% of control) |
Concentration (%, v/v) in test medium | ||||
| Blank | Control | 0.5 | 1.0 | 2.0 | |
| H2O2 (0.5 mM) | |||||
| 추출물 3 | 19.2 | 100 | 76.2 | 73.6 | 65.2 |
| 비교추출물 11 | 19.2 | 100 | 78.1 | 74.8 | 68.8 |
| 비교추출물 12 | 19.2 | 100 | 76.9 | 73.9 | 66.8 |
| 비교추출물 13 | 20.8 | 100 | 85.4 | 75.6 | 71.8 |
| 비교추출물 14 | 20.8 | 100 | 88.1 | 78.6 | 74.2 |
| 비교추출물 15 | 20.8 | 100 | 86.8 | 76.7 | 72.9 |
| Relative DCF intensity (% of control) |
Concentration (%, v/v) in test medium | ||||
| Blank | Control | 0.5 | 1.0 | 2.0 | |
| H2O2 (0.5 mM) | |||||
| 추출물 4 | 22.5 | 100 | 83.3 | 79.6 | 72.7 |
| 비교추출물 16 | 22.5 | 100 | 84.1 | 82.9 | 75.5 |
| 비교추출물 17 | 22.5 | 100 | 83.3 | 81.1 | 73.8 |
| 비교추출물 18 | 20.5 | 100 | 83.2 | 82.1 | 76.1 |
| 비교추출물 19 | 20.5 | 100 | 86.2 | 85.8 | 79.6 |
| 비교추출물 20 | 20.5 | 100 | 85.1 | 84.2 | 78.2 |
상기 표 7 내지 10에 나타낸 바와 같이, 제1 용매로서 에탄올 및 글리세린을 포함하는 용매를 사용하여 클로로필을 제거한 뒤 추출한 경우에 제1 용매로서 물을 사용한 경우와 비교하여 항산화 효능이 증가하는 것을 확인하였다. 또한, 제2 용매로서 부틸렌 글리콜 40%를 포함하는 용매를 사용한 경우에 항산화 효능이 가장 높은 것을 확인하였다.
상기 결과로부터, 식물 원물로부터 클로로필을 제거한 뒤 유효성분을 추출함으로써 항산화 효능이 증가된 추출물을 제조할 수 있는 것을 알 수 있었다.
Claims (15)
- 식물 원물에 제1 용매로서 에탄올 또는 글리세린을 포함하는 용매를 가하여 식물 원물에서 클로로필을 제거하는 제1 추출단계; 및
상기 제1 추출단계의 추출 잔사에 제2 용매로서 알코올 또는 알코올 수용액을 가하여 추출하는 제2 추출단계를 포함하는 식물 추출물의 제조방법. - 제1항에 있어서,
상기 방법은 추출물 내의 폴리페놀, 플라보노이드 또는 유효성분의 함량이 증가된 추출물을 제조하는 것인 제조방법. - 제1항에 있어서,
상기 제1 용매는 에탄올을 70 중량% 내지 99 중량% 및 글리세린을 1 중량% 내지 30 중량%로 포함하는 것인 제조방법. - 제1항에 있어서,
상기 제2 용매는 부틸렌글리콜을 10 중량% 내지 50 중량%로 포함하는 것인 제조방법. - 제1항에 있어서,
제1 추출단계는 10℃ 내지 30℃에서 수행되는 것인 제조방법. - 제1항에 있어서,
제2 추출단계는 30℃ 내지 80℃에서 수행되는 것인 제조방법. - 제1항에 있어서,
제2 추출단계는 초음파를 이용한 추출이 병행되는 것인 방법. - 제1항에 있어서,
상기 식물 원물은 녹차, 자소엽, 어성초, 및 쑥으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것인 방법. - 제1항의 제조방법에 의하여 제조되고, 추출물 내에 폴리페놀을 500 내지 1200 μg/mL, 플라보노이드를 250 내지 750 μg/mL 및 EGCG(Epigallocatechin Gallte)를 250 내지 600 mg/kg의 농도로 포함하는, 녹차추출물.
- 제1항의 제조방법에 의하여 제조되고, 추출물 내에 폴리페놀을 100 내지 250 μg/mL, 플라보노이드를 200 내지 800 μg/mL 및 Rosmarinic acid를 5 내지 70 mg/kg의 농도로 포함하는, 자소엽추출물.
- 제1항의 제조방법에 의하여 제조되고, 추출물 내에 폴리페놀을 100 내지 270 μg/mL, 플라보노이드를 200 내지 800 μg/mL 및 Isoquercitrin를 5 내지 50 mg/kg의 농도로 포함하는, 어성초추출물.
- 제1항의 제조방법에 의하여 제조되고, 추출물 내에 폴리페놀을 100 내지 250 μg/mL, 플라보노이드를 300 내지 1000 μg/mL 및 Isoquercitrin를 0.2 내지 1 mg/kg의 농도로 포함하는, 쑥추출물.
- 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항의 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
- 제13항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 항산화용인 것인 화장료 조성물. - 식물 원물에 제1 용매로서 에탄올 또는 글리세린을 포함하는 용매를 가하여 식물 원물에서 클로로필을 제거하는 제1 추출단계; 및
상기 제1 추출단계의 추출 잔사에 제2 용매로서 알코올 또는 알코올 수용액을 가하여 추출하는 제2 추출단계를 포함하는 식물 추출물의 클로로필을 제거하는 방법.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220093999A KR102654944B1 (ko) | 2022-07-28 | 2022-07-28 | 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법, 이에 의해 제조되는 항산화용 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220093999A KR102654944B1 (ko) | 2022-07-28 | 2022-07-28 | 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법, 이에 의해 제조되는 항산화용 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물 |
Publications (2)
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|---|---|
| KR20240016009A KR20240016009A (ko) | 2024-02-06 |
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Family
ID=89858622
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020220093999A KR102654944B1 (ko) | 2022-07-28 | 2022-07-28 | 클로로필 제거를 통해 유효성분 함량이 증가된 추출물의 제조방법, 이에 의해 제조되는 항산화용 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102654944B1 (ko) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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-
2022
- 2022-07-28 KR KR1020220093999A patent/KR102654944B1/ko active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20240016009A (ko) | 2024-02-06 |
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