KR102644990B1 - 구제역 바이러스에 대한 항바이러스 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스 조성물에 관한 것으로, 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자의 발현이 증가함에 따라 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현이 억제되고, 세포병변 효과가 감소되는 것을 확인함으로써, 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11)은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스제로 제공된다.
Description
본 발명은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스 조성물에 관한 것이다.
구제역바이러스(foot-and-mouth disease virus; FMDV)는 우리나라에서 거의 매년 소 또는 돼지에서 감염이 발생하여 살처분 등 막대한 경제적 피해를 입히고 있다. 구제역바이러스는 주로 소와 돼지에 감염되지만, 감염의 용이성과 바이러스의 전파 능력 등에 있어서 큰 차이를 보이고 있는데, 소에서의 감염이 더 잘 발생되지만, 바이러스의 복제와 전파능력은 돼지에서 훨씬 크다. FMDV 바이러스 유전자는 전체 8500여개의 RNA 염기로 구성되어 있고, 이 전체 바이러스 유전자는 몇 개의 기능적 단위로 구분될 수 있다. 이 유전자 구성 중에서 시스-작용 복제 인자(cis-Acting Replication Element; CRE) 이라고 불리는 55개 RNA 염기로 이루어진 영역이 FMDV 바이러스의 전체 게놈 유전자 복제를 조절하는 것으로 알려져 있다.
구제역 바이러스는 항원 변이성이 가장 높은 바이러스 중의 하나이며, 이는 복제 과정에서 3D 폴리머라제가 유전자 교정(3D pol gene proofreading) 및 복제 후 수리 활성이 결여되어 있기 때문이다. 또한 구제역 바이러스는 서로 다른 혈청형 간에는 교차방어가 일어나지 않는 특성이 있다.
구제역을 치료하기 위한 백신은 생독 백신이 사용되고 있지 않으며, 현재 사독백신이 전 세계적으로 널리 사용되고 있다. 국내에서도 2010년 11월 28일 구제역이 발생한 이후 독점적으로 공급되는 외국계 제약회사의 사독백신을 사용하고 있으나, 상기 백신은 단가가 높아 축산업자들에게 적지 않은 부담이 되고 있다. 따라서 백신 이외의 구제역을 치료할 수 있는 새로운 치료제의 개발이 요구되고 있다.
본 발명의 목적은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 복제 및 단백질 생성을 억제하는 항바이러스 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 포함하는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자의 발현이 증가함에 따라 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현이 억제되고, 세포병변 효과가 감소되는 것을 확인함으로써, 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11)은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스제로 제공될 수 있다.
도 1은 pFlag-CMV2/h.FGF11의 유전자 지도를 나타내는 그림이다.
도 2a은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현 변화를 분석하기 위한 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 모식도이다.
도 2b는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현 변화를 분석하기 위한 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)에서 5’UTR 유전자가 발현되는지 확인한 결과이다.
도 2c는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현 변화를 분석하기 위한 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)가 세포 내에서 작동하는지 확인한 결과이다.
도 3a는 항 바이러스제인 리바비린(rivabirin) 투여에 따른 세포 내에서 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 활성 영향을 평가한 결과이다.
도 3b는 CoCl2 투여에 따른 세포 내에서 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 활성 영향을 평가한 결과이다.
도 3c는 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 세포 내에서 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 활성 영향을 평가한 결과이다.
도 3d는 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 세포송상 정도를 평가한 결과이다.
도 4a는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 세포병변 효과 변화를 평가한 결과이다.
도 4b는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 세포병변 효과를 일으키는 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준을 검증한 결과이다.
도 5는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 FMDV의 유전자 복제 수의 변화를 평가한 결과이다.
도 2a은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현 변화를 분석하기 위한 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 모식도이다.
도 2b는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현 변화를 분석하기 위한 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)에서 5’UTR 유전자가 발현되는지 확인한 결과이다.
도 2c는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 발현 변화를 분석하기 위한 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)가 세포 내에서 작동하는지 확인한 결과이다.
도 3a는 항 바이러스제인 리바비린(rivabirin) 투여에 따른 세포 내에서 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 활성 영향을 평가한 결과이다.
도 3b는 CoCl2 투여에 따른 세포 내에서 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 활성 영향을 평가한 결과이다.
도 3c는 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 세포 내에서 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)의 활성 영향을 평가한 결과이다.
도 3d는 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 세포송상 정도를 평가한 결과이다.
도 4a는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 세포병변 효과 변화를 평가한 결과이다.
도 4b는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 세포병변 효과를 일으키는 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준을 검증한 결과이다.
도 5는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염된 숙주세포에서 FGF11(fibroblast growth factor 11) 발현 수준에 따른 FMDV의 유전자 복제 수의 변화를 평가한 결과이다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 포함하는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스 조성물을 제공한다. 상기 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11)은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 5’UTR 발현을 억제할 수 있다.
또한, 본 발명은 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 구제역 감염증에 대한 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 구제역 감염증은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 감염되어 발병되는 질환으로 소, 돼지, 물소, 낙타, 양, 염소 등의 가축동물의 입과 혀, 주둥이, 코, 젖꼭지, 발굽 및 기타 피부의 털이 없는 부분에서 수포가 생성되는 질환을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸 히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물에 포함되는 첨가제의 함량은 특별히 한정되는 것은 아니며 통상의 제제화에 사용되는 함량 범위 내에서 적절하게 조절될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립, 정제, 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 외용제 형태로 제형화될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 제형화를 위해 추가로 있는 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제를 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 전분, 당, 및 만니톨과 같은 부형제, 칼슘 포스페이트 등과 같은 충전제 및 증량제, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등과 같은 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 및 폴리비닐 피롤리돈 등과 같은 결합제, 활석, 스테아린산 칼슘, 수소화 피마자유 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 윤활제, 포비돈, 크로스포비돈과 같은 붕해제, 폴리소르베이트, 세틸알코올, 및 글리세롤 등과 같은 계면활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 대상체에게 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제의 예로는 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제(dispersion media)를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있다. 경구 투여일 경우, 정제, 트로키제 (troches), 로젠지 (lozenge), 수용성 현탁액, 유성 현탁액, 조제 분말, 과립, 에멀젼, 하드 캡슐, 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제 등으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여일 경우, 주사액, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 연고, 도포용 파우더, 오일, 크림 등으로 제형화 될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이 체질 특이성, 제제의 성질, 질병의 정도, 조성물의 투여시간, 투여방법, 투여기간 또는 간격, 배설율, 및 약물 형태에 따라 그 범위가 다양할 수 있으며, 이 분야 통상의 기술자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예컨대, 약 0.1 내지 10,000 mg/kg의 범위일 수 있으나 이제 제한되지 않으며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여되거나 비경구 투여(예를 들면, 정맥 내, 피하 내, 복강 내 또는 국소에 적용)될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수도 있다.
또한, 본 발명은 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 구제역 감염증에 대한 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.
상기 사료 조성물은 가축의 생명을 유지하고 젖, 고기, 알, 털가죽 등을 생산하는 데 필요한 유기 또는 무기 영양소를 공급하는 물질을 의미한다. 사료는 영양가, 주성분, 유통, 수분함량 배합상태 및 가공형태 등에 따라 여러 가지로 분류할 수 있으며 본 발명에서 사료는 조사료, 농후사료, 보충사료, 단백질사료, 녹말사료, 지방질사료, 섬유질사료을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실험예 및 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실험예 및 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실험예 및 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실험예 및 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실험예> 실험 재료 및 방법
하기의 실험예들은 본 발명에 따른 각각의 실시예에 공통적으로 적용되는 실험예를 제공하기 위한 것이다.
1. Cloning
구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV) 5’UTR 유전자 발현 조절을 정량적으로 분석하기 위해 재조합 리포터 컨스트럭트(recombinant reporter construct, FMDV 5’UTR-luc)를 구축하였다. R-shamir (JF739177.1)의 5‘UTR 부분과 pGL3B의 Luciferase gene을 주형으로 PCR을 진행하여 유전자를 확보하였다. 사용된 프라이머 세트는 하기 표 1과 같다. BamHI, EcoRI, XbaI을 통해 절단한 후 ligation을 통하여 pcDNA3 vector에 cloning을 진행하여 pcDNA3/5’UTR_Luc을 제작하였다(도 1).
| 유전자 | 염기서열 (5’- 3’) | 서열번호 | |
| pGL3 | F | GGATCCTTGAAAGGGGGCGCT | 1 |
| R | GCCTTTCTCCTTAACTACCACTTCTTAGAATTC | 2 | |
| R-shamir | F | GAATTCGCCACCATGGAAGACGC | 3 |
| R | GCGGAAAGATCGCCGTGTAATCTAGA | 4 | |
2. 세포독성 평가
IBRS-2 세포 5 X 103를 DMEM (5% FBS, 1% PS)를 포함하는 96 well plate에서 24 시간 동안 배양하였다. SMA를 농도별로 24시간 동안 처리하였다. Abbkine의 CCK-8을 사용하여 cell viability를 측정하였다.
3. 번역 효율 확인
IBRS-2 세포 6 x 104를 DMEM (5% FBS, 1% PS)를 포함하는 24 well plate에서 24 시간 동안 배양하였다. pcDNA3/5’UTR_Luc을 각 well당 100 ng씩, pFlag-CMV2/h.FGF11을 농도별로 polyplus의 jetPEI를 사용하여 transfection을 진행하였다. 24시간 후 promega의 5X cell lysis buffer를 1X로 희석하여 각 well 당 100 μl씩 분주하여 세포를 lysis하였다. 이후 원심분리를 하여 상층액만 사용하여 luminometer를 이용하여 luciferase assay를 진행하였다. 측정된 luciferase activity의 값을 기준값으로 나누어 상대적 비율을 확인하였다.
도 1과 같은 유전자 지도를 갖는 pFlag-CMV2/h.FGF11에 의해 FGF11을 과발현시켜 진행하였다. pFlag-CMV2/h.FGF11은 pFlag-CMV2 vector에 제한 효소인 Sal I, BamH I을 통하여 사람의 FGF11(h.FGF11)이 발현하도록 하는 플라스미드를 제작되었다. 이 플라스미드는 포유동물세포에서 상시 발현되도록 하는 CMV promoter의 조절에 의하여 h.FGF11이 발현하도록 하였다.
4. 세포변성효과 확인 (CPE, cytopathic effect)
IBRS-2 세포 1.5 x 105를 α-MEM (5% FBS, 1% AA)를 포함하는 6-well plate에서 24 시간 동안 배양하였다. polyplus의 jetPEI를 사용하여 pCMV-flag/h.FGF11을 농도별로 transfection을 진행하였다. 24 시간 후 free-FBS α-MEM으로 배지를 교체한 후, 구제역 바이러스 (R-shamir strain)을 103TCID50를 세포에 1 시간 동안 처리하였다. α-MEM (2% FBS, 1% AA)로 배지로 교체하고 24 시간 배양 후, 현미경으로 세포 변경 상태를 확인하여 정도에 따라 점수를 매겨 그래프로 작성하였다.
5. virus copy number 측정
세포 변성 효과를 확인한 후, Freezing and Thawing cycle을 2번 진행하여 상층액을 수집하였다. 수집된 상층액에서 Qiagen의 RNeasy mini kit를 사용하여 RNA를 추출하였다. 추출한 RNA를 사용하여 Bioneer사의 AccuPower FMDV Real-Time RT-PCR MasterMix kit를 사용하여 RT-qPCR을 진행하였고, stand를 통하여 copy number를 측정하였다.
실시예. 구제역 바이러스(FMDV)에 대한 FGF11의 항바이러스 효과 평가
FGF11(fibroblast growth factor 11)가 구제역 바이러스(FMDV)의 복제에 필요한 유전자 발현을 억제하는 항바이러스 활성을 나타내는 지 평가하였다. FGF11의 발현 여부가 구제역 바이러스(FMDV)의 복제 및 단백질 생성에 영향을 미치는지 정량적으로 비교 분석하기 위해, 도 2a와 같은 시스템을 제작하였다. FMDV 바이러스 변이주인 R-shamir의 5’UTR을 발광 유전자인 luciferase 앞부분에 삽입하여 FMDV 바이러스의 복제 및 번역이 조절됨을 luciferase의 발현에 의한 형광 생성으로 확인할 수 있도록 설계하였다. 도 2b에서 5’UTR 유전자가 잘 발현되고 있음을 확인하였다. 도 2c의 결과는 pcDNA3/5’UTR-Luc의 리포터 시스템이 세포 내에서 작동하는 것을 보여주었다.
FMDV 5’UTR-luci 시스템과 함께 FGF11 발현 플라스미드를 FMDV의 숙주세포인 돼지세포 IBRS-2 세포에 형질감염(transfection)시킨 후, FMDV 5’UTR 발현 조절 정도를 luciferase 활성을 측정하여 분석한 결과, 도 3a의 경우에서 FMDV가 속한 picornavirus에서 항바이러스 효과를 가진 것으로 알려진 리바비린(rivabirin)이 리포터 활성을 감소시킴을 확인하였으며, 도 3b에 나타난 바와 같이, 동시에 저산소증 효과를 가진 CoCl2 처리는 효과가 없음을 확인하였다. 이들 결과는 FMDV 5’UTR-luci 리포터 시스템의 활성 변화가 잘 기능함을 보여주었다. 도 3c에 나타난 바와 같이, FGF11의 발현양이 증가함에 따라 FMDV 유전자 발현이 감소하는 것으로 나타났다. 도 3d에 나타난 바와 같이, FGF11의 세포내 발현이 세포손상 효과가 없는 것으로 나타났다. 상기 결과는 FGF11이 FMDV 유전자 발현 조절 부위에 작용하여 FMDV 바이러스의 복제 및 단백질 생성을 감소시키는 항바이러스 효과를 나타냄을 입증한다.
또한, FGF11이 숙주세포 내에서 감염된 FMDV의 복제 및 방출에 대한 항바이러스 효과를 나타내는지 평가하였다. 도 4a에 나타난 바와 같이, FMDV에 의해 감염된 숙주세포인 돼지 IBRS-2 세포는 24 시간 이내에 세포병변 효과(CPE, cytopathic effect)를 나타냈으나, FGF11의 발현양이 증가함에 따라 세포병변 효과가 감소하는 것으로 나타났다. 도 4b에서 세포병변 효과를 일으키는 FGF11의 세포내 발현양의 검증 결과를 제시하였다.
또한, FGF11이 FMDV 복제에 따른 유전자 생성에 직접적으로 영향을 미치는지 real time-qPCR 분석으로 평가하였다. PCR 분석 유전자 타겟으로는 FMDV의 3D (RNA polymerase) 유전자의 발현을 이용하였다. FGF11 발현이 없는 상태에서 FMDV의 세포감염은 세포변성효과가 나타난 후에 뚜렷한 3D 유전자의 복제가 확인되었다. 도 5에 나타난 바와 같이, FGF11 발현은 같은 조건에서 FMDV의 3D 유전자 복제의 결과로 copy number가 negative control 수준으로 거의 측정되지 않을 수준으로 확인되었다. 상기 결과들은 FGF11이 실제로 구제역바이러스에 감염된 세포에서 항바이러스 효과를 나타냄을 입증한다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.
<110> Pusan National University Industry-University Cooperation Foundation
Korea Institute of Ocean Science & Technology
<120> Antiviral composition against foot-and-mouth disease virus
<130> ADP-2021-0385
<160> 4
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGL3-f
<400> 1
ggatccttga aagggggcgc t 21
<210> 2
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGL3-r
<400> 2
gcctttctcc ttaactacca cttcttagaa ttc 33
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> R-shamir-f
<400> 3
gaattcgcca ccatggaaga cgc 23
<210> 4
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> R-shamir-r
<400> 4
gcggaaagat cgccgtgtaa tctaga 26
Claims (7)
- 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 포함하는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11)은 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)의 5’UTR 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 항바이러스 조성물.
- 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 구제역 감염증에 대한 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11) 유전자를 포함하는 벡터를 유효성분으로 포함하는 구제역 감염증에 대한 예방 또는 개선용 사료 조성물.
- 섬유아세포 성장인자 11(fibroblast growth factor 11, FGF11)을 유효성분으로 포함하는 구제역 바이러스(foot-and-mouth disease virus, FMDV)에 대한 항바이러스 조성물.
- 제5항의 항바이러스 조성물을 포함하는 구제역 감염증에 대한 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제5항의 항바이러스 조성물을 포함하는 구제역 감염증에 대한 예방 또는 개선용 사료 조성물.
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2021
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Non-Patent Citations (1)
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|---|
| Oncotarget, 2018, Vol. 9, (No. 12), pp. 10417~10435 |
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| KR20230037823A (ko) | 2023-03-17 |
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