KR102623104B1

KR102623104B1 - A cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing botulinum toxin conjugates and stem cell exosome complexes as active ingredients, and a method of manufacturing the same

Info

Publication number: KR102623104B1
Application number: KR1020230110349A
Authority: KR
Inventors: 박의훈
Original assignee: 에프아이씨씨주식회사
Priority date: 2023-08-23
Filing date: 2023-08-23
Publication date: 2024-01-11

Abstract

본 발명은 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체와 줄기세포 엑소좀(Exosome) 복합체를 유효성분으로 함유하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법에 관한 것으로, 화장료 조성물은, 보툴리눔톡신 결합체 0.01∼0.05중량%, 줄기세포 엑소좀 복합체 5∼10중량%, 콜린알포세레이트 1∼5중량%, 글라이코사미노글리칸 5∼10중량%, 히아루론산 5∼10중량%, 아데노신 5∼10중량%, 나이아신아마이드 5∼10중량부, 팔미토일올리고펩타이드 5∼10중량% 및 전체 중량 중 나머지 중량 비율을 갖는 에탄올 수용액을 포함하는 제1혼합물; 산양삼 추출물 10중량%, 상황버섯 10중량%, 흰목이버섯 10중량%, 보리지오일 10중량%, 마치현 20중량%, 당드릅나무 추출물 20중량% 및 동백오일 20중량%의 중량 비율로 제조된 제2혼합물; 및 상기 제1혼합물과 상기 제2혼합물을 1:0.2∼0.8 중량비로 제조된 제3혼합물;을 포함하며, 상기 제3혼합물 100중량부에 대하여, 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose) 1∼10중량부, 로즈마린산(Rosemarinic Acid) 1∼5중량부 및 하이드로라이즈드콜라겐 5∼10중량부를 포함한다.The present invention relates to a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing a botulinum toxin conjugate and a stem cell exosome complex as active ingredients, and a method for producing the same. The cosmetic composition contains botulinum toxin conjugate 0.01 to 0.01. 0.05% by weight, stem cell exosome complex 5-10% by weight, choline alfoscerate 1-5% by weight, glycosaminoglycan 5-10% by weight, hyaluronic acid 5-10% by weight, adenosine 5-10% by weight , a first mixture containing 5 to 10 parts by weight of niacinamide, 5 to 10% by weight of palmitoyl oligopeptide, and an aqueous ethanol solution with the remaining weight percentage of the total weight; Manufactured with a weight ratio of 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, 20% by weight of sycamore extract, and 20% by weight of camellia oil. second mixture; And a third mixture prepared from the first mixture and the second mixture at a weight ratio of 1:0.2 to 0.8, wherein, based on 100 parts by weight of the third mixture, 1 to 10 parts by weight of bio cellulose, It contains 1 to 5 parts by weight of Rosmarinic Acid and 5 to 10 parts by weight of Hydrolyzed Collagen.

Description

Cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing botulinum toxin conjugates and stem cell exosome complexes as active ingredients and method for manufacturing the same {A cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing botulinum toxin conjugates and stem cell exosome complexes as active ingredients, and a method of manufacturing the same}

본 발명은 화장료 조성물 및 그의 제조 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체와 줄기세포 엑소좀(Exosome) 복합체를 유효성분으로 함유하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition and a method for producing the same, and more specifically, to a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing a botulinum toxin conjugate and a stem cell exosome complex as active ingredients, and its production. It's about method.

피부 미백과 주름 방지는 아름다움의 상징으로써 꾸준한 관심의 대상이 되어 왔다. 이러한 관심으로 피부 미백과 주름 방지용 제품에 대한 수요는 꾸준히 증가하고 있고, 관련 화장품 산업은 고부가 가치 산업으로 성장하고 있다.Skin whitening and anti-wrinkle have been the subject of constant interest as symbols of beauty. Due to this interest, demand for skin whitening and anti-wrinkle products is steadily increasing, and the related cosmetics industry is growing into a high value-added industry.

한편, 사람의 피부는 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하조직(subcutis)의 3층 구조로 이루어져 있다. 표피층에는 각질층(stratum corneum), 과립층(stratum granulosum), 유극층(stratum spinosum), 기저층(basal layer)이 존재한다.Meanwhile, human skin is composed of three layers: epidermis, dermis, and subcutis. The epidermal layer includes stratum corneum, stratum granulosum, stratum spinosum, and basal layer.

주름과 가장 밀접하게 연관되어 있는 것은 피부 세포의 노화이다. 일반적으로 피부 노화의 원인은 고령화에 따라 나타나는 자연 노화와 외부환경에 의해 나타나는 내적인 노화로 분류될 수 있다. 자연 노화는 유전자적 요인 등이 많이 관여되기 때문에 제어가 어렵다. 따라서 자외선，산화，건조 등과 같은 환경적 요인을 제어하기 위해 많은 연구가 진행되고 있다.What is most closely related to wrinkles is the aging of skin cells. In general, the causes of skin aging can be classified into natural aging caused by aging and internal aging caused by the external environment. Natural aging is difficult to control because many genetic factors are involved. Therefore, much research is being conducted to control environmental factors such as ultraviolet rays, oxidation, and drying.

환경적 요인은 주로 진피층에 포함된 콜라겐 단백질, 엘라스틴(elastin) 단백질 등을 파괴하거나 변성을 일으켜 주름을 유발한다. 특히, 태양의 자외선은 피부세포(섬유아세포)를 산화시키고 엘라스틴의 생성저하 및 파괴를 일으키는데, 자외선 등에 의해 피부 내에 엘라스틴 분해효소(elastase)가 발현되며 이 효소가 피부 내의 정상적인 엘라스틴을 분해하여 피부 탄력 저하를 가져 온다.Environmental factors mainly cause wrinkles by destroying or denaturing collagen and elastin proteins contained in the dermal layer. In particular, ultraviolet rays from the sun oxidize skin cells (fibroblasts) and cause a decrease in the production and destruction of elastin. Elastase is expressed in the skin by ultraviolet rays, and this enzyme decomposes normal elastin in the skin, thereby improving skin elasticity. leads to degradation

환경적 요인에 의해 양산된 활성 산소는 산화 작용에 의해 피부 세포 내의 단백질 파괴, 당의 산화, 유전자 변형 등을 일으켜 피부에 노화 및 주름을 유발할 수 있다.Active oxygen mass-produced by environmental factors can cause protein destruction within skin cells, sugar oxidation, and genetic modification through oxidation, causing aging and wrinkles in the skin.

이에 따라, 상기의 부작용은 최소화하면서도 피부 미백과 산화 방지 및 주름 방지 효과를 모두 극대화할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 또한, 피부 자극, 세포 독성 등의 위해 요소가 적어 함량의 제한 없이 사용할 수 있는 화장료 조성물에 대한 요구도 증가하고 있다.Accordingly, there is a need for the development of substances that can maximize both skin whitening, anti-oxidation, and anti-wrinkle effects while minimizing the above side effects. In addition, there is an increasing demand for cosmetic compositions that can be used without limitation in content due to low risk factors such as skin irritation and cytotoxicity.

한편, 보툴리눔 독소는 썩은 통조림이나 상한 고기에서 자라는 그람 양성 혐기성 박테리아인 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)이 만들어내는 신경독소이다. 이는 8가지 신경독소로 분류되며, 이중 7종(A, B, C, D, E, F, G)은 신경의 마비를 유발할 수 있다. 크기는 약 150 kDa으로, 보툴리눔 독소 단백질 이외에 비독소 단백질(non-toxin)의 복합체로 구성되어 각 복합체의 크기는 신경독소의 종류에 따라 최대 900 kDa까지 생성된다. 보툴리눔 독소형에 따라 작용 형태와 대상, 활성기간 등이 달라지는데 그 중 보툴리눔 독소 A형의 경우 치명적인 생물학적 작용제 중 하나로 알려져 있다.Meanwhile, botulinum toxin is a neurotoxin produced by Clostridium botulinum, a gram-positive anaerobic bacterium that grows in rotten canned food or spoiled meat. It is classified into eight types of neurotoxins, seven of which (A, B, C, D, E, F, G) can cause nerve paralysis. The size is about 150 kDa, and it is composed of a complex of non-toxin proteins in addition to the botulinum toxin protein. The size of each complex can be up to 900 kDa depending on the type of neurotoxin. Depending on the type of botulinum toxin, the form of action, target, and period of activity vary. Among them, botulinum toxin type A is known to be one of the fatal biological agents.

보툴리눔 독소는 근육의 경련 또는 수축을 유발하는 신호를 차단하여 마비를 초래하는 작용을 하는데, 이러한 기능으로 1989년 미국 FDA 승인 이후, 치료 또는 미용 목적으로 사용되고 있다. 치료 목적으로는 사시(strabismus), 사경(torticollis) 또는 안면 경련(blepharospasm)과 같은 신경근육질환에, 미용 목적으로는 주름, 찌푸린 주름 제거 및 사각턱 치료, 다한증(hyperhidrosis) 또는 편두통(migraine) 치료에 주사제로 사용되고 있다. 부작용으로는 연하곤란(dysphagia), 목소리 변화(voice change), 구강건조 (dry mouth) 및 몽롱(blurred vision) 등과 같은 사례들이 보고되었으나, 아직 보툴리눔 독소로 인한 직접적인 사망사고가 없어 적절하게 사용하면 매우 안전한 약품으로 평가받고 있다. 다만, 약물에 대한 과민증이 있거나, 근골격계통 질환이 있는 경우, 임산부나 수유부의 경우에는 적용에 제한이 있다.Botulinum toxin acts to cause paralysis by blocking signals that cause muscle spasm or contraction. With this function, it has been used for treatment or cosmetic purposes since its approval by the U.S. FDA in 1989. For therapeutic purposes, neuromuscular diseases such as strabismus, torticollis or blepharospasm, and for cosmetic purposes, to remove wrinkles, frown lines, square jaw, hyperhidrosis or migraine. It is used as an injection. Side effects such as dysphagia, voice change, dry mouth, and blurred vision have been reported, but there have been no direct deaths due to botulinum toxin, so it is very effective when used appropriately. It is evaluated as a safe drug. However, there are limitations to its application in cases of hypersensitivity to the drug, musculoskeletal disorders, or pregnant or lactating women.

현재의 보툴리눔 독소의 활용에 있어서, 피부 조직에 주사된 보툴리눔 독소의 지속 시간은 3~6개월 이내이며, 보툴리눔 독소에 의해 신경과 근육 사이의 신호전달이 차단되면 새로운 신경가지가 만들어져 보툴리눔 독소에 의한 신경의 마비 효과를 경감시키므로, 정기적인 처치가 필요하다. 또한, 보툴리눔 독소를 반복해서 투여할 경우 생체 내 보툴리눔 독소에 대한 항체가 형성되어 효과가 감소하는 한계가 있다. 이러한 보툴리눔 독소의 근육 마비 효과는 대부분 주사제를 통해서만 활용되고 있기에, 이용 대상자에 대한 편의성을 제공할 수 있는 다른 효과적인 전달 수단을 찾기 위해 많은 연구가 이루어지고 있으나, 아직 미비한 실정이다.In the current use of botulinum toxin, the duration of botulinum toxin injected into skin tissue is within 3 to 6 months, and when signal transmission between nerves and muscles is blocked by botulinum toxin, new nerve branches are created, causing damage caused by botulinum toxin. Since it reduces the paralyzing effect of the nerves, regular treatment is necessary. In addition, when botulinum toxin is administered repeatedly, antibodies to the botulinum toxin are formed in vivo, which limits its effectiveness. Since the muscle paralyzing effect of botulinum toxin is mostly used only through injections, much research is being done to find other effective delivery methods that can provide convenience to users, but it is still insufficient.

최근에는 줄기세포에 대한 관심이 높아지면서, 분화능을 갖는 줄기세포 또는 그의 추출물이 피부노화를 억제할 수 있음이 보도되었고, 이에 따라 줄기세포를 이용하여 피부노화를 억제하는 방법에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 그러나 줄기세포 배양액에는 무수하게 많은 성분이 포함되어 있기 때문에, 실질적인 주름개선 효과를 나타내는 성분이 무엇인지 아직까지는 확인되지 않았다. 만일, 이러한 주름개선 효과를 나타낼 수 있는 유효성분이 규명되면, 보다 효과적으로 주름을 개선할 수 있는 제품이 개발될 것으로 예상되고 있으나, 아직까지는 별다른 성과가 없는 실정이다.Recently, as interest in stem cells has increased, it has been reported that stem cells with differentiation ability or their extracts can suppress skin aging, and accordingly, research on methods to suppress skin aging using stem cells is actively underway. It is becoming. However, because stem cell culture media contains countless ingredients, it has not yet been confirmed which ingredients have the actual wrinkle improvement effect. If an active ingredient capable of producing this wrinkle-improving effect is identified, it is expected that products that can improve wrinkles more effectively will be developed, but no significant results have been achieved so far.

엑소좀은 미생물에서부터 인간에 이르는 모든 세포에서 세포 밖으로 분비되는 세포간 의사소통 물질로서 세포밖 소포체(extracellular vesicles) 중 50~200nm 나노 크기의 물질이다. 이러한 나노 크기의 엑소좀은 물에 녹지 않는 막 단백질을 수송할 수 있다. 막 단백질이란 인지질 이중막에 있는 단백질로 소수성이기 때문에Exosomes are intercellular communication substances secreted from all cells, from microorganisms to humans, and are nano-sized substances of 50 to 200 nm among extracellular vesicles. These nano-sized exosomes can transport membrane proteins that are insoluble in water. Membrane proteins are proteins in the phospholipid bilayer and are hydrophobic.

기본적으로는 혈액에 의한 세포간 전달이 어렵다. 이에 반해 엑소좀은 인지질 이중막으로 이루어져 있어 막 단백질을 수송할 수 있다. 인지질 이중막으로 내용물을 둘러쌈으로서 엑소좀은 외부의 분해 물질로부터 그 내용물을 보호할 수 있는 것이다. 대표적인 예로 RNA 수송 기전을 들 수 있다. 세포 밖에 존재하는 RNA는 분해되는 반면에 엑소좀 안에 존재하는 RNA는 이들 물질로부터 보호되어 표적 세포로 원활하게 전달될 수 있다. 또한, 엑소좀은 국소적으로 높은 농도를 유지할 수 있다. 세포는 단순히 적은 단백질을 신호로 인지하지 않고, 일정 수준 이상의 양을 가진 단백질이 한번에 전달되어야 신호로 인지한다. 해당 신호 전달을 용이하게 하기 위하여 세포는 엑소좀을 이용하여 해당 단백질을 한정된 공간에 모아 한번에 수송함으로써, 표적 세포에 신호전달을 효율적으로 할 수 있게 된다. 호르몬류와 같이 혈류 전체를 다 순환해야만 특정 세포에 전달되는 방식이 아니라, 엑소좀 내용물은 포장되어 특정 목표에만 제한적으로 수송이 될 수 있기 때문에 적은 양의 내용물만으로도 효율적인 전달이 가능하다. 또한, 엑소좀은 관련된 물질을 한번에 수송함으로써 복합적으로 신호를 전달할 수 있다. 세포 성장을 위해서 한 종류의 단백질을 전달하는 것보다는 서로 시너지 효과를 낼 수 있는 단백질 집단이나 다른 물질(핵산, 지질)을 한꺼번에 수송함으로써 신호를 효율적으로 전달할 수 있다.Basically, intercellular transmission through blood is difficult. In contrast, exosomes are composed of a phospholipid bilayer and can transport membrane proteins. By surrounding the contents with a phospholipid double membrane, exosomes can protect the contents from external decomposition substances. A representative example is the RNA transport mechanism. While RNA existing outside the cell is decomposed, RNA existing within exosomes is protected from these substances and can be smoothly delivered to target cells. Additionally, exosomes can maintain high concentrations locally. Cells do not simply recognize a small amount of protein as a signal, but only when a certain amount of protein or more is delivered at once as a signal. In order to facilitate the signal transmission, cells use exosomes to collect the relevant proteins in a limited space and transport them at once, thereby enabling efficient signal transmission to target cells. Unlike hormones, which must circulate throughout the entire bloodstream to be delivered to specific cells, exosome contents can be packaged and transported limited to specific targets, allowing efficient delivery with only a small amount of contents. Additionally, exosomes can transmit signals complexly by transporting related substances at once. Rather than delivering one type of protein for cell growth, signals can be transmitted efficiently by transporting a group of proteins or other substances (nucleic acids, lipids) that can have a synergistic effect with each other at the same time.

즉, 엑소좀은 유래된 세포의 성질 및 상태에 따라 특이적인 유전물질과 생체활성 인자들이 포함되어 있는데, 동물의 줄기세포에서 분리되는 엑소좀은 포함된 인자가 목적 이외의 효과를 나타낼 수 있으며, 엑소좀의 분리에 있어 줄기세포가 포함될 수 있다는 점에서 안전성의 문제가 될 수도 있다. 그러나, 동물세포 유래 엑소좀의 안전성 문제는 식물세포의 엑소좀을 이용하는 것으로 해결될 수 있다. 이에, 식물세포의 엑소좀에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으나 아직 미진한 상태이다.In other words, exosomes contain specific genetic material and bioactive factors depending on the nature and state of the cell from which they were derived. In exosomes isolated from animal stem cells, the factors contained may have effects other than those intended. This may be a safety issue because stem cells may be included in the isolation of exosomes. However, the safety issue of exosomes derived from animal cells can be solved by using exosomes from plant cells. Accordingly, research on exosomes from plant cells is actively underway, but is still in an inadequate state.

대한민국 등록특허 제10-2341375호Republic of Korea Patent No. 10-2341375 대한민국 등록특허 제10-1981016호Republic of Korea Patent No. 10-1981016

전술한 문제점을 해결하기 위하여 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는, 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체와 줄기세포 엑소좀(Exosome) 복합체를 유효성분으로 함유하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법을 제시하는데 그 목적이 있다.In order to solve the above-mentioned problems, the technical problem to be achieved by the present invention is to provide a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing a botulinum toxin conjugate and a stem cell exosome complex as active ingredients, and a method for producing the same. The purpose is to present .

또한, 본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는, 보툴리눔톡신 결합체와 줄기세포 엑소좀 복합체를 유효성분으로 함유함으로써, 피부 재생 및 주름 개선 효과가 있는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법을 제시하는데 그 목적이 있다.In addition, another technical problem to be achieved by the present invention is to present a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement that contains botulinum toxin conjugate and stem cell exosome complex as active ingredients, and a method for producing the same. There is a purpose to doing so.

또한, 본 발명이 이루고자 하는 또 다른 기술적 과제는, 피부 내 콜라겐 합성을 촉진하고, 모공을 축소시켜서 피부 주름 개선 및 피부 탄력을 개선할 수 있는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법을 제시하는데 그 목적이 있다.In addition, another technical problem to be achieved by the present invention is to provide a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement that can improve skin wrinkles and skin elasticity by promoting collagen synthesis in the skin and shrinking pores, and a method for producing the same. There is a purpose to doing so.

또한, 본 발명이 이루고자 하는 또 다른 기술적 과제는, 콜라겐 분해 효소(MMP-1) 발현을 저해하여 피부 재생과 피부 보습 및 주름 개선 효과를 발휘할 수 있는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법을 제시하는데 그 목적이 있다.In addition, another technical problem to be achieved by the present invention is a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement that can exert skin regeneration, skin moisturizing, and wrinkle improvement effects by inhibiting the expression of collagen degrading enzyme (MMP-1), and a method for producing the same. The purpose is to present .

또한, 본 발명이 이루고자 하는 또 다른 기술적 과제는, 자외선 차단, 주름 개선, 미백, 피부 탄력 및 항산화 활성이 우수하고 피부의 건강을 향상시킬 수 있는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법을 제시하는데 그 목적이 있다.In addition, another technical problem to be achieved by the present invention is to provide a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement that has excellent UV protection, wrinkle improvement, whitening, skin elasticity and antioxidant activity and can improve skin health, and a method for producing the same. The purpose is to present.

또한, 본 발명이 이루고자 하는 또 다른 기술적 과제는, 면역반응을 일으키지않고 피부내로의 침투성 및 피부흡수율이 우수한 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조 방법을 제시하는데 그 목적이 있다.In addition, another technical problem to be achieved by the present invention is to provide a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement that does not cause an immune response and has excellent penetration into the skin and skin absorption rate, and a method for producing the same.

전술한 기술적 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명에 의한 화장료 조성물은, 청구항 1에 기재된 바와 같이, 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체와 줄기세포 엑소좀 복합체를 유효성분으로 함유하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물에 있어서, 보툴리눔톡신 결합체 0.01∼0.05중량%, 줄기세포 엑소좀 복합체 5∼10중량%, 콜린알포세레이트 1∼5중량%, 글라이코사미노글리칸 5∼10중량%, 히아루론산 5∼10중량%, 아데노신 5∼10중량%, 나이아신아마이드 5∼10중량부, 팔미토일올리고펩타이드 5∼10중량% 및 전체 중량 중 나머지 중량 비율을 갖는 에탄올 수용액을 포함하는 제1혼합물; 산양삼 추출물 10중량%, 상황버섯 10중량%, 흰목이버섯 10중량%, 보리지오일 10중량%, 마치현 20중량%, 당드릅나무 추출물 20중량% 및 동백오일 20중량%의 중량 비율로 제조된 제2혼합물; 및 상기 제1혼합물과 상기 제2혼합물을 1:0.2∼0.8 중량비로 제조된 제3혼합물;을 포함하며, 상기 제3혼합물 100중량부에 대하여, 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose) 1∼10중량부, 로즈마린산(Rosemarinic Acid) 1∼5중량부 및 하이드로라이즈드콜라겐 5∼10중량부를 포함하는 화장료 조성물을 특징으로 한다.As a means to solve the above-mentioned technical problem, the cosmetic composition according to the present invention contains botulinum toxin conjugate and stem cell exosome complex as active ingredients, as described in claim 1, for skin regeneration and wrinkle improvement. In the cosmetic composition for use, 0.01 to 0.05% by weight of botulinum toxin conjugate, 5 to 10% by weight of stem cell exosome complex, 1 to 5% by weight of choline alfoscerate, 5 to 10% by weight of glycosaminoglycan, hyaluronic acid 5 A first mixture comprising an aqueous ethanol solution having -10% by weight, 5-10% by weight of adenosine, 5-10% by weight of niacinamide, 5-10% by weight of palmitoyl oligopeptide, and the remaining weight percentage of the total weight; Manufactured with a weight ratio of 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, 20% by weight of sycamore extract, and 20% by weight of camellia oil. second mixture; And a third mixture prepared from the first mixture and the second mixture at a weight ratio of 1:0.2 to 0.8, wherein, based on 100 parts by weight of the third mixture, 1 to 10 parts by weight of bio cellulose, It is characterized by a cosmetic composition containing 1 to 5 parts by weight of Rosmarinic Acid and 5 to 10 parts by weight of hydrolyzed collagen.

상기 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체는, 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인 보툴리눔톡신; 및 세포 내로 활성 분자의 운반을 매개할 수 있는 펩타이드로서, 상기 펩타이드는 아미노산 서열로 이루어진 세포 투과성 펩타이드;를 포함하며, 상기 보툴리눔톡신의 경쇄 부분에 포함된 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포 투과성 펩타이드가 결합된 화장료 조성물을 특징으로 한다.The botulinum toxin conjugate is a botulinum toxin selected from the group consisting of serotypes A, B, C, D, E, F and G; and a peptide capable of mediating the transport of an active molecule into a cell, wherein the peptide comprises a cell-penetrating peptide consisting of an amino acid sequence, and is attached to the carboxy terminus, amino terminus, or both contained in the light chain portion of the botulinum toxin to the cell. It is characterized by a cosmetic composition combined with a penetrating peptide.

상기 줄기세포 엑소좀 복합체는, 줄기세포 유래 엑소좀과 폴리데옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide)를 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물을 특징으로 한다.The stem cell exosome complex is characterized by a cosmetic composition containing stem cell-derived exosomes and polydeoxyribonucleotide as active ingredients.

전술한 기술적 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명에 의한 화장료 조성물의 제조 방법은, 청구항 4에 기재된 바와 같이, 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체와 줄기세포 엑소좀 복합체를 유효성분으로 함유하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물의 제조 방법에 있어서, 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 복합체 0.01∼0.05중량%, 줄기세포 엑소좀 복합체 5∼10중량%, 콜린알포세레이트 1∼5중량%, 글라이코사미노글리칸 5∼10중량%, 히아루론산 5∼10중량%, 아데노신 5∼10중량%, 나이아신아마이드 5∼10중량부, 팔미토일올리고펩타이드 5∼10중량% 및 전체 중량 중 나머지 중량 비율을 갖는 에탄올 수용액을 포함하는 제1혼합물을 제조하는 단계; 산양삼 추출물 10중량%, 상황버섯 10중량%, 흰목이버섯 10중량%, 보리지오일 10중량%, 마치현 20중량%, 당드릅나무 추출물 20중량% 및 동백오일 20중량%의 중량 비율로 제2혼합물을 제조하는 단계; 상기 제1혼합물과 상기 제2혼합물을 1:0.2∼0.8 중량비로 제3혼합물;을 제조하는 단계; 및 상기 제3혼합물 100중량부에 대하여, 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose) 1∼10중량부, 로즈마린산(Rosemarinic Acid) 1∼5중량부 및 하이드로라이즈드콜라겐 5∼10중량부를 혼합하여 제조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 한다.As a means to solve the above-mentioned technical problem, the method for producing a cosmetic composition according to the present invention is, as described in claim 4, a skin regeneration method containing a botulinum toxin conjugate and a stem cell exosome complex as active ingredients. And in the method of producing a cosmetic composition for wrinkle improvement, 0.01 to 0.05% by weight of botulinum toxin complex, 5 to 10% by weight of stem cell exosome complex, 1 to 5% by weight of choline alfoscerate, and glycosamino. An aqueous ethanol solution containing 5 to 10% by weight of glycans, 5 to 10% by weight of hyaluronic acid, 5 to 10% by weight of adenosine, 5 to 10 parts by weight of niacinamide, 5 to 10% by weight of palmitoyl oligopeptide, and the remaining weight percentage of the total weight. Preparing a first mixture comprising; The second weight ratio is 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, 20% by weight of sycamore extract, and 20% by weight of camellia oil. preparing a mixture; Preparing a third mixture of the first mixture and the second mixture at a weight ratio of 1:0.2 to 0.8; And preparing by mixing 1 to 10 parts by weight of bio cellulose, 1 to 5 parts by weight of rosmarinic acid, and 5 to 10 parts by weight of hydrolyzed collagen with respect to 100 parts by weight of the third mixture; It is characterized by including.

본 발명에 따르면, 피부 재생과 피부 보습 및 주름 개선 효과가 있고, 특히 피부 수분 손실을 방지하여 자외선에 의하여 유발된 피부 조직 손상을 억제하여 주름이 생기는 것을 효과적으로 막고 주름 형성을 완화하는 효과가 있다.According to the present invention, it has the effect of skin regeneration, skin moisturizing, and wrinkle improvement, and in particular, prevents skin moisture loss and suppresses skin tissue damage caused by ultraviolet rays, effectively preventing wrinkles from forming and alleviating wrinkle formation.

보툴리눔 독소는 근육 경련 또는 수축을 유발하는 신호들을 차단하여 마비를 초래하는 작용을 한다. 이러한 보툴리눔 독소의 근육 마비 효과는 오늘날 안면 경련, 근긴장, 편두통, 악관절 장애, 다한증 등의 치료와 주름개선, 모공 축소, 여드름, 탄력 부여, 사각턱 완화 등의 심미적, 미용학적 분야에서 활용되고 있다. 그러나, 현재까지는 경피전달을 위한 효과적인 수단이 없어, 상기의 원하는 효과를 얻기 위해서는 주사를 통한 시술 방법에만 의존해온 것이 대부분이다. 따라서, 주사를 요구하지 않는 보툴리눔 독소의 국소 적용이 가능하다면 보다 안전하고 바람직한 치료적 대안이 될 수 있을 것이다. 이에, 본 발명의 세포 투과성 펩타이드-보툴리눔 독소 재조합 단백질에 따르면, 피부 복합층과 신경세포를 통과하여 신경세포의 스네어 단백질(SNARE protein)을 절단하여 활성을 나타낼 수 있으며, 일반 보툴리눔 독소에 비해 분자량이 현저히 작아 항체 생성의 가능성을 현저히 감소시킬 수 있어, 중화항체 형성에 따른 효능저하를 감소시킬 수 있다.Botulinum toxin works by blocking signals that cause muscle spasms or contractions, resulting in paralysis. The muscle paralyzing effect of botulinum toxin is used today in aesthetic and cosmetic fields such as treatment of facial spasms, muscle tension, migraines, temporomandibular joint disorders, hyperhidrosis, etc., and improvement of wrinkles, reduction of pores, acne, elasticity, and relief of square jaw. However, to date, there is no effective means for transdermal delivery, and most people have relied only on injection methods to achieve the desired effect. Therefore, if topical application of botulinum toxin without requiring injection is possible, it may be a safer and more desirable therapeutic alternative. Accordingly, according to the cell-penetrating peptide-botulinum toxin recombinant protein of the present invention, it can pass through the skin complex layer and nerve cells and show activity by cutting the SNARE protein of nerve cells, and its molecular weight is lower than that of general botulinum toxin. It is significantly small and can significantly reduce the possibility of antibody production, thereby reducing the decrease in efficacy due to the formation of neutralizing antibodies.

본 발명의 효과는 이상에서 언급된 것들에 한정되지 않으며, 언급되지 아니한 다른 효과들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해되어 질 수 있을 것이다.The effects of the present invention are not limited to those mentioned above, and other effects not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the description below.

도 1은 본 발명의 실시예에 의한 화장료 조성물의 제조방법을 나타낸 흐름도이다.
도 2는 본 발명에 의한 화장료 조성물의 콜라겐 분해 효소(MMP-1) 발현 저해 효과를 보여주는 시험 결과 그래프이다.
도 3 내지 도 8은 본 발명에 의한 화장료 조성물을 이용한 제품 사진으로,
도 3 및 도 4는 보툴리눔 유래성분 함유된 고농축 기능성 앰플의 제품 사진이고,
도 4는 보툴리눔 유래성분 함유된 고농축 기능성 마스크팩의 제품 사진이고,
도 6 내지 도 8은 본 발명의 화장료 조성물로 제조된 크림의 제품 사진이다.
1 is a flowchart showing a method for producing a cosmetic composition according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a graph of test results showing the effect of the cosmetic composition according to the present invention on inhibiting collagen degrading enzyme (MMP-1) expression.
Figures 3 to 8 are photos of products using the cosmetic composition according to the present invention.
Figures 3 and 4 are product photos of highly concentrated functional ampoule containing botulinum-derived ingredients,
Figure 4 is a product photo of a highly concentrated functional mask pack containing botulinum-derived ingredients,
Figures 6 to 8 are product photos of creams prepared with the cosmetic composition of the present invention.

아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시 예를 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명되는 실시 예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 발명의 설명 전체를 통하여 유사한 부분에 대해서는 유사한 도면 부호를 붙여 설명하기로 한다.Below, with reference to the attached drawings, embodiments of the present invention will be described in detail so that those skilled in the art can easily implement the present invention. However, the present invention may be implemented in many different forms and is not limited to the embodiments described herein. In order to clearly explain the present invention in the drawings, parts unrelated to the description have been omitted, and similar parts will be described with similar reference numerals throughout the description of the invention.

본 발명에 있어서, "피부 주름"이란, 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미하는데, 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐과 엘라스틴의 감소, 외부환경 등에 의해 유발될 수 있다. 본 발명에서 "피부 주름개선"이란, 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.In the present invention, “skin wrinkles” refer to fine lines caused by aging of the skin, which can be caused by genes, reduction of collagen and elastin present in the skin dermis, external environment, etc. In the present invention, “skin wrinkle improvement” refers to suppressing or inhibiting the formation of wrinkles on the skin or alleviating wrinkles that have already formed.

본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "improvement" refers to any action that results in at least a reduction in the severity of a parameter, such as a symptom, associated with the condition being treated.

이하, 본 발명에서 실시하고자 하는 구체적인 기술내용에 대해 첨부도면을 참조하여 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, specific technical details to be implemented in the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

화장료 조성물의 실시예Examples of cosmetic compositions

본 발명에 의한 화장료 조성물은, 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체 0.01∼0.05중량%, 줄기세포 엑소좀 복합체 5∼10중량%, 콜린알포세레이트 1∼5중량%, 글라이코사미노글리칸 5∼10중량%, 히아루론산 5∼10중량%, 아데노신 5∼10중량%, 나이아신아마이드 5∼10중량부, 팔미토일올리고펩타이드 5∼10중량% 및 전체 중량 중 나머지 중량 비율을 갖는 에탄올 수용액을 포함하는 제1혼합물; 산양삼 추출물 10중량%, 상황버섯 10중량%, 흰목이버섯 10중량%, 보리지오일 10중량%, 마치현 20중량%, 당드릅나무 추출물 20중량% 및 동백오일 20중량%의 중량 비율로 제조된 제2혼합물; 및 상기 제1혼합물과 상기 제2혼합물을 1:0.2∼0.8 중량비로 제조된 제3혼합물;을 포함하며, 상기 제3혼합물 100중량부에 대하여, 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose) 1∼10중량부, 로즈마린산(Rosemarinic Acid) 1∼5중량부 및 하이드로라이즈드콜라겐 5∼10중량부를 포함하여 구성될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention contains 0.01 to 0.05% by weight of botulinum toxin conjugate, 5 to 10% by weight of stem cell exosome complex, 1 to 5% by weight of choline alposcerate, and 5 to 5% by weight of glycosaminoglycan. A preparation comprising an aqueous ethanol solution having 10% by weight, 5 to 10% by weight of hyaluronic acid, 5 to 10% by weight of adenosine, 5 to 10 parts by weight of niacinamide, 5 to 10% by weight of palmitoyl oligopeptide, and the remaining weight percentage of the total weight. 1Mixture; Manufactured with a weight ratio of 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, 20% by weight of sycamore extract, and 20% by weight of camellia oil. second mixture; And a third mixture prepared from the first mixture and the second mixture at a weight ratio of 1:0.2 to 0.8, wherein, based on 100 parts by weight of the third mixture, 1 to 10 parts by weight of bio cellulose, It may include 1 to 5 parts by weight of Rosmarinic Acid and 5 to 10 parts by weight of hydrolyzed collagen.

상기 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체는, 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인 보툴리눔톡신; 및 세포 내로 활성 분자의 운반을 매개할 수 있는 펩타이드로서, 상기 펩타이드는 아미노산 서열로 이루어진 세포 투과성 펩타이드;를 포함하며, 상기 보툴리눔톡신의 경쇄 부분에 포함된 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포 투과성 펩타이드가 결합될 수 있다.The botulinum toxin conjugate is a botulinum toxin selected from the group consisting of serotypes A, B, C, D, E, F and G; and a peptide capable of mediating the transport of an active molecule into a cell, wherein the peptide comprises a cell-penetrating peptide consisting of an amino acid sequence, and is attached to the carboxy terminus, amino terminus, or both contained in the light chain portion of the botulinum toxin to the cell. A penetrating peptide may be bound.

여기서, 상기 보툴리눔톡신(botulinum toxin)은 클로스트리디움 보툴리눔균이 생산하는 신경 독소의 하나로서, 보툴리눔톡신을 희석해 보톡스를 만든다, 이렇게 만들어진 보톡스는 근육이 수축하지 않고 일시적으로 마비시켜 수축된 근육이 이완되면서 주름이 펴지게 된다. 마비된 신경세포 옆에 새로운 신경세표가 생성되며 마비된 세포도 3∼4개월가량 지나면 다시 정상적으로 활동하게 된다.Here, the botulinum toxin is one of the nerve toxins produced by the Clostridium botulinum bacterium. Botox is made by diluting botulinum toxin. Botox produced in this way does not contract the muscles but temporarily paralyzes them, causing the contracted muscles to contract. As it relaxes, wrinkles smooth out. New nerve cells are created next to the paralyzed nerve cells, and the paralyzed cells become normally active again after about 3 to 4 months.

상기 보툴리눔톡신(botulinum toxin)은 섬유아세포의 증식촉진을 통한 피부재생 촉진, 주름개선 촉진, 창상 치료촉진 등의 효과를 나타낼 수 있으므로, 이들 효과를 나나내는 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.Since the botulinum toxin can exhibit effects such as promoting skin regeneration, promoting wrinkle improvement, and promoting wound healing by promoting the proliferation of fibroblasts, it can be used as an active ingredient in a composition that exhibits these effects.

상기 세포 투과성 펩타이드는 세포 내로 활성 분자의 운반을 매개할 수 있는 펩타이드로서, 상기 펩타이드는 아미노산 서열로 이루어진 세포 투과성 펩타이드를 포함할 수 있다.The cell-penetrating peptide is a peptide that can mediate the transport of active molecules into cells, and the peptide may include a cell-penetrating peptide consisting of an amino acid sequence.

본 발명에서, 세포투과성 펩타이드는 신규의 세포투과성 펩타이드 TD1과 보툴리눔톡소 경쇄(light chain)를 포함하며, 이들의 펩타이드 결합이나 공유결합과 같은 화학적 결합으로 형성된 결합체를 의미한다. 즉, 세포투과성 펩타이드는 세포 내로의 도입이 용이하지 않은 거대분자인 보툴리눔 독소 경쇄에 특정한 세포투과성 펩타이드를 융합시켜 세포투과성을 부여함으로써 보툴리눔 독소 경쇄를 세포 내로 고효율로 전달하는 것이다. 이때 상기 융합은 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포투과성 펩타이드가 융합될 수 있다.In the present invention, the cell-penetrating peptide includes the novel cell-penetrating peptide TD1 and the botulinum toxin light chain, and refers to a conjugate formed by chemical bonds such as peptide bonds or covalent bonds. In other words, the cell-permeable peptide delivers the botulinum toxin light chain into cells with high efficiency by fusing a specific cell-permeable peptide to the botulinum toxin light chain, which is a macromolecule that is not easy to introduce into cells, thereby providing cell permeability. At this time, the cell-penetrating peptide may be fused to the carboxy terminus, amino terminus, or both of the botulinum toxin light chain.

상기 줄기세포 엑소좀 복합체는, 줄기세포 유래 엑소좀과 폴리데옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide)를 유효 성분으로 포함하고 있다.The stem cell exosome complex contains stem cell-derived exosomes and polydeoxyribonucleotide as active ingredients.

"줄기세포(stem cell)"란 여러 종류의 조직 세포로 분화할 수 있는 능력, 즉, 줄기세포성(stemness)을 가진 미분화 세포를 총칭하는 광의의 개념을 말하며, 신경, 혈액, 연골 등 생물체를 구성하는 모든 종류의 세포로 분화할 수 있는 전분화능(pluripotency) 뿐만 아니라 다분화능(multipotency), 단일분화능(unipotency)을 모두 포함한다. 이러한 줄기세포는 크게 배아를 이용하여 제조할 수 있는 배아줄기세포(embryonic stem cell), 성체줄기세포(adult stem cell), 생식세포(gamete), 암 줄기세포(cancer stem cell) 등으로 나뉘며, 배아줄기세포는 수정 후 14일이 안된 상태의 구체적 장기를 형성하기 이전의 세포 덩어리 단계를 말한다. 최근에는 역분화를 통하여 정상세포로부터 배아줄기세포를 제조하기도 한다. 따라서, 신체를 이루는 모든 세포와 조직으로 분화할 수 있는 세포라면 이에 제한되지 않는다. 성체줄기세포는 제대혈, 골수, 지방, 혈액 등으로부터 추출해 낸 것으로서 뼈, 간, 혈액 등 구체적 장기의 세포로 분화되기 직전의 원시세포를 의미한다. 생식세포란, 생식을 통해서 유전 정보를 다음 세대로 전달하는 세포로서, 인간에게는 정자와 난자가 있으나, 이에 제한되지 않는다.“Stem cell” refers to a broad concept that collectively refers to undifferentiated cells with stemness, that is, the ability to differentiate into various types of tissue cells. It includes not only pluripotency, which can differentiate into all types of cells, but also multipotency and unipotency. These stem cells are largely divided into embryonic stem cells, adult stem cells, gametes, and cancer stem cells, which can be produced using embryos. Stem cells refer to the cell mass stage before forming specific organs, less than 14 days after fertilization. Recently, embryonic stem cells have been produced from normal cells through dedifferentiation. Therefore, any cell that can differentiate into all cells and tissues that make up the body is not limited thereto. Adult stem cells are extracted from umbilical cord blood, bone marrow, fat, blood, etc. and refer to primitive cells just before differentiation into cells of specific organs such as bone, liver, and blood. Germ cells are cells that transmit genetic information to the next generation through reproduction. Humans include, but are not limited to, sperm and eggs.

또한, 줄기세포는 클론을 형성하여 세포의 군집을 이루는 과정에서 자기 복제를 하여 군집 내에 새로운 하나의 줄기세포를 유지할 수 있으며, 분화를 통해 한 가지 이상의 특징적인 세포 형태를 형성할 수 있는 능력이 있는 세포이다.In addition, stem cells can self-replicate in the process of forming clones and forming cell colonies, maintaining a new stem cell within the colony, and have the ability to form one or more characteristic cell types through differentiation. It's a cell.

본 발명에 있어서,“엑소좀(exosome)”이란 다양한 세포들로부터 분비되는 막 구조의 작은 소낭을 말한다. 엑소좀은 전자 현미경을 통한 연구에서 원형질막으로부터 직접 떨어져 나가는 것이 아니라 다낭체(multivesicular bodies, MVBs)라고 불리는 세포 내 특정 구획에서 기원하며 세포 밖으로 방출, 분비되는 것으로 관찰되었다. 즉, 다낭체와 원형질막의 융합이 일어나면, 소낭들은 세포 밖 환경으로 방출되는데, 이것을 엑소좀이라고 부른다. 이러한 엑소좀이 어떤 분자적 기작에 의해 만들어지는지 확실히 밝혀진 바가 없으나, 적혈구 세포뿐만 아니라, B-림프구, T-림프구, 수지상 세포, 혈소판, 대식 세포 등을 포함한 다양한 종류의 면역 세포들과 종양세포, 줄기세포 등도 살아 있는 상태에서 엑소좀을 생산하여 분비한다고 알려져 있다. 상기 엑소좀은 자연적으로 분비된 것이거나, 혹은 인공적으로 분비된 것을 포함한다.In the present invention, “exosome” refers to a small vesicle with a membrane structure secreted from various cells. In a study using an electron microscope, exosomes were observed not to separate directly from the plasma membrane, but to originate from specific intracellular compartments called multivesicular bodies (MVBs) and to be released and secreted outside the cell. In other words, when fusion of the multivesicular body and the plasma membrane occurs, the vesicles are released into the extracellular environment, which are called exosomes. Although it is not clear by what molecular mechanism these exosomes are created, not only red blood cells, but also various types of immune cells including B-lymphocytes, T-lymphocytes, dendritic cells, platelets, macrophages, tumor cells, Stem cells are also known to produce and secrete exosomes while alive. The exosomes include those secreted naturally or artificially.

상기 엑소좀(Exosome)은 세포가 분비하는 지름 50∼200나노미터(nm) 크기의 물질로서, 혈액, 소변, 침, 모유, 뇌척수액 등에 있다. 단백질, 지방, 리보핵산(RNA) 등 특정 세포의 정보를 다른 세포에 전달하는 역할을 한다. 상기 엑소좀(Exosome)은 세포 간 신호전달 매개체로서 이를 통해 전달된 다양한 세포 신호는 표적 세포의 활성화, 성장, 이동, 분화, 탈분화, 사멸, 괴사 등을 조절한다. 또한, 엑소좀은 유래된 세포의 성질 및 상태에 따라 특이적인 유전물질과 생체활성 인자들이 포함되어 있다.The exosome is a substance with a diameter of 50 to 200 nanometers (nm) secreted by cells and is found in blood, urine, saliva, breast milk, cerebrospinal fluid, etc. It serves to transmit information from a specific cell, such as proteins, fats, and ribonucleic acid (RNA), to other cells. The exosome is a signaling mediator between cells, and various cell signals transmitted through it regulate the activation, growth, migration, differentiation, dedifferentiation, death, necrosis, etc. of target cells. In addition, exosomes contain specific genetic materials and bioactive factors depending on the nature and state of the cell from which they are derived.

특히, 줄기세포 엑소좀은 줄기세포의 특성에 따라 줄기세포의 세포증식, 분화, 재생과 관련된 유전자, 단백질, 성장인자 등을 함유하고 있어, 조직 재생에서 중요한 역할을 한다.In particular, stem cell exosomes play an important role in tissue regeneration because they contain genes, proteins, and growth factors related to cell proliferation, differentiation, and regeneration of stem cells, depending on the characteristics of stem cells.

상기 엑소좀(Exosome)은 몸에서 생성된 물질인 만큼 거부반응을 일으킬 가능성이 적어 엑소좀에 태울 약물만 바꾸면 암이나 감염성질환 치료제로 변신시킬 수도 있다.As the exosome is a substance produced in the body, it is unlikely to cause a rejection reaction, so it can be transformed into a treatment for cancer or infectious diseases by simply changing the drug to be loaded into the exosome.

상기 엑소좀(Exosome)은 줄기세포를 배양 배지에 배양한 다음 무혈청 및 무항생제 배지에서 계대 배양한 다음, 세포 배양 상층액을 회수한 다음, 회수한 세포 배양 상층액을 원심분리한 후 엑소좀을 분리 및 정제하여 추출할 수 있다.The exosome is made by culturing stem cells in a culture medium, subculturing them in a serum-free and antibiotic-free medium, recovering the cell culture supernatant, centrifuging the recovered cell culture supernatant, and then exosomes. It can be separated, purified and extracted.

본 발명에서 상기 엑소좀(Exosome)은 인체 지방유래 줄기세포를 계대배양하는 과정에서 추출될 수 있다.In the present invention, the exosome can be extracted during subculture of human adipose-derived stem cells.

예를 들어, 인체 지방유래 줄기세포를(passage 3 ~ 7) 일반 배양배지(Dulbecco Modified Eagle Medium, DMEM containing 10% fetal bovine serum, 1% penicillin/streptomycin)에서 배양한 다음, 엑소좀을 추출하기 24시간 전에 무혈청, 무항생제 배지이면서 페놀 레드(phenol red)가 없는 DMEM 배지로 교체하여 24시간 동안 유지하였다. 24시간 후, 세포 배양 상층액을 회수하였다. 회수한 세포배양 상층액은 300 xg에서 10분간 원심분리하여 세포를 제거하였으며, 그 후 2,000 xg에서 30분간 원심분리하여 세포 분비물을 제거해주었다. 이후, 분자량 3,000의 필터가 장착된 원심분리 튜브를 이용하여 5,000 xg에서 60분간 원심분리를 하여 농축하였다. 농축 후 수득한 상층액은 엑소좀 분리 시약과 1:0.5 비율로 혼합하고 4 ℃에서 하루 동안 보관하였다. 10,000 xg에서 60분간 원심분리를 통해 엑소좀 침전물을 얻은 후, 0.22 μm 필터를 통해 여과하였고 인산완충식염수(Phosphate-buffered saline, PBS)로 세척하였다. 세척한 엑소좀 침전물은 10,000 xg에서 60분간 원심분리한 후 PBS에 재현탁하였다.For example, human adipose-derived stem cells (passages 3 to 7) were cultured in general culture medium (Dulbecco Modified Eagle Medium, DMEM containing 10% fetal bovine serum, 1% penicillin/streptomycin), and then exosomes were extracted 24 Before time, the medium was replaced with serum-free, antibiotic-free DMEM medium without phenol red and maintained for 24 hours. After 24 hours, the cell culture supernatant was recovered. The recovered cell culture supernatant was centrifuged at 300 xg for 10 minutes to remove cells, and then centrifuged at 2,000 xg for 30 minutes to remove cell secretions. Afterwards, it was concentrated by centrifugation at 5,000 xg for 60 minutes using a centrifuge tube equipped with a filter with a molecular weight of 3,000. The supernatant obtained after concentration was mixed with exosome isolation reagent at a ratio of 1:0.5 and stored at 4°C for one day. Exosome precipitates were obtained by centrifugation at 10,000 xg for 60 minutes, then filtered through a 0.22 μm filter and washed with phosphate-buffered saline (PBS). The washed exosome sediment was centrifuged at 10,000 xg for 60 minutes and then resuspended in PBS.

상층액을 회수한 이후 다시 일반 배양배지를 줄기세포에 첨가하여 배양하였으며, 이러한 과정은 줄기세포 계대 7까지 반복하였다. 이렇게 줄기세포를 계대 7까지 증식시키는 과정에서 추출한 엑소좀을 이용하여 화장료 조성물을 제조할 수 있다After collecting the supernatant, regular culture medium was added to the stem cells and cultured, and this process was repeated until stem cell passage 7. A cosmetic composition can be manufactured using exosomes extracted during the process of proliferating stem cells up to passage 7.

상기 폴리데옥시리보뉴클레오티드(Polydeoxyribonucleotide; PDRN)는 데옥시리보뉴클레오티드 중합체가 포함된 물질로서, 특별히 다르게 정의하지 않는 한 DNA 중합체 단편 혼합물을 포함하는 의미로 사용된다. 상기 폴리데옥시리보뉴클레오티드(PDRN)는 일반적으로 연어 정액으로부터 추출하여 제조되는데, 이외에도 연어, 송어, 청어, 참치 등의 어류의 정액, 정소, 이리(milt) 및/또는 알 등으로부터 추출되어 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 폴리데옥시리보뉴클레오티드(PDRN)는 정자(spermatozoa)에서 추출하여 고열 처리함으로써 제조될 수 있다.Polydeoxyribonucleotide (PDRN) is a substance containing a deoxyribonucleotide polymer and, unless specifically defined otherwise, is used to include a mixture of DNA polymer fragments. The polydeoxyribonucleotide (PDRN) is generally manufactured by extracting from salmon semen. In addition, it can be manufactured by extracting from semen, testes, milt, and/or eggs of fish such as salmon, trout, herring, and tuna. You can. For example, the polydeoxyribonucleotide (PDRN) can be produced by extracting spermatozoa and treating it at high heat.

상기 폴리데옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide, 이하 'PDRN'이라 한다.)는 연어 정액으로부터 추출한 DNA로 제조하고 있으며, 50~2000 염기쌍의 데옥시리보뉴클레오티드폴리머를 함유하고 있다. 상기 폴리데옥시리보뉴클레오타이드(PDRN)은 주로 피부이식으로 인한 상처의 치료 및 조직 수복에 사용하고 있지만, 마땅한 치료법이 없는 일부 조직재생이나 염증치료에도 의료진 판단에 따라 사용되고 있으며, 당뇨병성 발 궤양, 흉터, 혈관 부전 및 여성 패턴 탈모와 같은 광범위한 장애의 치료에 사용되는 것으로 알려져 있다.The polydeoxyribonucleotide (hereinafter referred to as 'PDRN') is manufactured from DNA extracted from salmon semen and contains deoxyribonucleotide polymer of 50 to 2000 base pairs. The polydeoxyribonucleotide (PDRN) is mainly used for the treatment of wounds and tissue repair due to skin transplantation, but is also used at the discretion of medical staff for some tissue regeneration or inflammation treatment for which there is no appropriate treatment, and for diabetic foot ulcers and scars. , it is known to be used in the treatment of a wide range of disorders such as vascular insufficiency and female pattern hair loss.

또한, 피부재생 신호전달체인 A2 수용체를 자극해 각종성장인자 분비촉진, VEGF(혈관내피세포증식인자)에 의한 모세혈관의 생성, 혈액순환 개선, 항염증 작용 및 모세혈관 누출 방지 기능을 하는 성분으로 알려져 있다.In addition, it is an ingredient that stimulates the A2 receptor, a skin regeneration signal transducer, to promote the secretion of various growth factors, to create capillaries by VEGF (vascular endothelial growth factor), to improve blood circulation, to have anti-inflammatory effects, and to prevent capillary leakage. It is known.

상기 폴리데옥시리보뉴클레오타이드(PDRN)는 여드름 흉터, 사고 흉터, 튼살 개선, 피부위축, 잔주름 개선, 여드름피부, 기미 및 잡티 제거 등의 효과가 있다.The polydeoxyribonucleotide (PDRN) is effective in improving acne scars, accident scars, stretch marks, skin atrophy, improving fine wrinkles, acne skin, and removing freckles and blemishes.

상기 콜린알포세레이트(choline alfoscerate)는 뇌의 신경전달 물질인 콜린계 전구물질로서 원래의 주효과는 치매 증상 개선 및 집중력 향상이지만 지방세포를 파괴시키는 기능도 부가적으로 수행한다.Choline alfoscerate is a choline precursor, a neurotransmitter in the brain. Its main effect is to improve dementia symptoms and improve concentration, but it additionally performs the function of destroying fat cells.

상기 콜린알포세레이트(choline alfoscerate)는 혈관뇌장벽을 통과하여 뇌 내로 유입되어 콜린과 인산글리세릴탈수소효소란 물질로 분리된다. 콜린은 기억과 학습의 중추적 역할을 하는 뇌신경전달물질인 아세틸콜린(acetylcholine, ACh)의 앞 단계의 물질로, 뇌기능 장애 환자에서 부족한 아세틸콜린을 보충한다. 아세틸콜린은 뇌신경 손상으로 저하된 신경전달 기능을 정상화시킨다. 또한, 인산글리세릴탈수소효소는 세포막의 구성 성분인 인지질로 대사되어 손상된 신경세포 기능을 정상화시킨다.The choline alfoscerate passes through the blood-brain barrier and enters the brain, where it is separated into choline and a substance called glyceryl phosphate dehydrogenase. Choline is a precursor to acetylcholine (ACh), a brain neurotransmitter that plays a central role in memory and learning, and supplements the acetylcholine that is lacking in patients with brain dysfunction. Acetylcholine normalizes neurotransmission functions that have deteriorated due to cranial nerve damage. In addition, glyceryl phosphate dehydrogenase is metabolized into phospholipids, a component of cell membranes, and normalizes damaged nerve cell function.

상기 글라이코사미노글리칸(Glycosaminoglycans, GAG)은 뮤코다당류로도 불리며 길고 가지가 없는 다당류이다. 황산기가 추가된 이당류의 반복된 구조로 이루어져 있으며, 반복단위는 케라틴을 제외하고 아미노당과 우론당 또는 갈락토스로 구성되어 있다. 아미노당은 N-아세틸글루코오스아민 또는 N-아세틸갈락토스아민이며, 우론당은 글루쿠론산 또는 이두론산으로 이루어져 있다. 글라이코사미노글리칸은 피부 진피층에 존재하는 성분으로 히알루론산을 만드는데 도움을 주고 피부 탄력에 영향을 주는 콜라겐 및 엘라스틴을 이어주는 역할을 한다. 또한, 글라이코사미노글리칸은 장시간 보습 유지에 도움을 주며 다른 활성 성분의 피부전달속도 및 침투량을 늘려주는 효과가 있다.Glycosaminoglycans (GAG), also called mucopolysaccharides, are long, unbranched polysaccharides. It is composed of a repeated structure of disaccharides with added sulfate groups, and the repeating units are composed of amino sugars, uron sugars, or galactose, excluding keratin. The amino sugar is N-acetylglucosamine or N-acetylgalactosamine, and the uron sugar is made of glucuronic acid or iduronic acid. Glycosaminoglycan is a component present in the dermal layer of the skin, helps create hyaluronic acid, and plays a role in connecting collagen and elastin, which affect skin elasticity. In addition, glycosaminoglycan helps maintain moisture for a long time and has the effect of increasing the skin delivery speed and penetration of other active ingredients.

콜라겐은 대부분의 동물, 특히 포유동물에서 많이 발견되는 섬유 단백질로, 피부와 연골 등 체내의 모든 결합조직의 대부분을 차지한다. 콜라겐은 폴리펩타이드 세 분자가 서로 삼중나선으로 꼬인 밧줄과 같은 형태를 이루고 있다. 각각의 폴리펩타이드 사슬은 글라이신과 프롤린이 서로 번갈아가면서 배치되고 중간에 여러 다른 아미노산이 군데군데 삽입되어 있다. 대표적으로 라이신과 프롤린에서 각각 유도된 하이드록시라이신과 하이드록시프롤린이 있다. 이 둘은 수소결합을 통해 사슬끼리 서로 단단히 연결되는 4차 구조 형성에 중요한 역할을 한다. 이러한 구조 덕분에 콜라겐은 매우 강하여 장력에 잘 견디고 장기간 분해되지 않으나, 섭씨 약 37도 이상의 온도에서는 폴리펩타이드 간 연결이 약해지는 경향을 보인다. 특히, 저분자 콜라겐은 콜라겐 중에서도 분자량이 적은 콜라겐을 의미하며, 크기가 적어 세포 투과성이 높아 피부미용과 관련된 분야에서 주로 사용되고 있다.Collagen is a fibrous protein found in most animals, especially mammals, and makes up most of all connective tissues in the body, including skin and cartilage. Collagen is made up of three polypeptide molecules twisted into a triple helix, forming a rope-like structure. Each polypeptide chain consists of glycine and proline alternating with each other, and various other amino acids are inserted here and there in the middle. Representative examples include hydroxylysine and hydroxyproline, which are derived from lysine and proline, respectively. These two play an important role in forming a quaternary structure in which chains are tightly connected to each other through hydrogen bonds. Thanks to this structure, collagen is very strong and can withstand tension well and does not decompose for a long time. However, at temperatures above about 37 degrees Celsius, the links between polypeptides tend to weaken. In particular, low-molecular-weight collagen refers to collagen with a low molecular weight among collagens, and is mainly used in fields related to skin care due to its small size and high cell permeability.

상기 콜라겐은 대부분 피부의 진피층에 존재하며, 피부 전체 건조중량의 약 70~80%를 차지하고 있으며, 세포 외 기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분인 collagen은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질이다. 콜라겐의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 자외선 조사에 의해 콜라겐의 분해 효소인 collagenase의 발현이 촉진되며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다.The collagen is mostly present in the dermal layer of the skin, accounting for about 70-80% of the total dry weight of the skin, and collagen, a major component of the extracellular matrix, is a major matrix protein produced by fibroblasts of the skin. . The synthesis and decomposition of collagen are properly regulated, but as aging progresses, the synthesis decreases, and the expression of collagenase, a collagen decomposition enzyme, is promoted by ultraviolet irradiation, which is known to be closely related to the formation of skin wrinkles.

또한, 기질 단백질의 결핍은 광노화에 있어 중요한 인자중 하나이며, 자외선에 의해 세포 사이를 채우는 성분인 교원질과 탄력질의 합성이 감소하게 되면 다양한 기질 단백질 분해 효소의 발현이 증가 하게 된다. 따라서, 피부 노화의 주된 원인인 콜라겐과 엘라스틴 분해효소인 콜라게나제와 엘라스타제에 의해 분해되며, 진피 층은 피부의 물리 화학적인 성질을 결정하여 모세혈관과 표피에 영양을 공급해주는 중요한 역할을 하므로 피부의 노화와 밀접한 관련이 있다.In addition, deficiency of matrix proteins is one of the important factors in photoaging, and when the synthesis of collagen and elasticity, which are components that fill between cells, decreases due to ultraviolet rays, the expression of various matrix protein decomposition enzymes increases. Therefore, collagen and elastin, which are the main causes of skin aging, are decomposed by collagenase and elastase, which are decomposition enzymes, and the dermal layer plays an important role in determining the physical and chemical properties of the skin and supplying nutrients to the capillaries and epidermis. Therefore, it is closely related to skin aging.

상기 콜라겐과 히알루론산(Hyaluronic Acid)은 많은 생물학적기능을 가진 세포외기질 물질들로 널리 알려져 있다, 상기 콜라겐은 상처치유과정에서 후기 단계뿐만 아니라 초기 단계에서도 크게 영향을 미치는 인자이다. 크로트(Clot) 형성은 순환하는 혈소판이 손상에 의해 혈관벽에 노출된 콜라겐에 부착되면서 이루어진다. 히알루론산은 비결합 상태로 존재하는 특이한 비황산화 다당류로서 모든 생물유기체에 존재하여 기질구조, 수분평형, 윤활작용, 세포이동 및 분화 등 다양한 주요작용에 있어서 중요한 역할을 담당한다.Collagen and hyaluronic acid are widely known as extracellular matrix substances with many biological functions. Collagen is a factor that greatly influences the wound healing process not only in the later stages but also in the early stages. Clot formation occurs when circulating platelets attach to collagen exposed on the blood vessel wall due to damage. Hyaluronic acid is a unique non-sulfated polysaccharide that exists in an unbound state and is present in all biological organisms, playing an important role in various major functions such as matrix structure, water balance, lubrication, cell migration and differentiation.

이들 생물학적 성질때문에 히알루론산(Hyaluronic Acid)은 콜라겐과 같은 다른세포외기질 성분과 함께 생체지지 재료로서 조직공학적 응용을 위해 사용되어 왔다. 실험에서 9.6%의 히알루론산을 함유한 콜라겐막은 폴리우레탄 막이나 세포배양 접시표면과 비교햇을 때 섬유아세포의 증식을 촉진하는 것으로 관찰되었다.Because of these biological properties, hyaluronic acid has been used as a biosupport material for tissue engineering applications along with other extracellular matrix components such as collagen. In experiments, it was observed that a collagen membrane containing 9.6% hyaluronic acid promoted the proliferation of fibroblasts compared to a polyurethane membrane or cell culture dish surface.

또한, 5.4% 혹은 9.6% 히알루론산을 포함하는 매트릭스에서 세포의 이주능이 증가하는것을 관찰하였다. 그러므로 콜라겐과 히알루론산을 함유하는 매트릭스 제조의 주된 이유는 상처 회복에 있어서의 이들의 구조적 기능적 주요 역할때문이라고 보여진다.Additionally, it was observed that the migration ability of cells increased in matrices containing 5.4% or 9.6% hyaluronic acid. Therefore, it appears that the main reason for preparing matrices containing collagen and hyaluronic acid is their key structural and functional role in wound healing.

상기 콜라겐은 피부의 구조적 기초성분이며 노화가 진행됨에 따라 양이 감소하고 제1형과 제3형의 비율이 달라지게 된다. 특히, 햇빛, 흡연, 오염물질 등은 콜라겐 분해효소인 콜라게네이즈를 증가시키고 피부 노화를 가속화시킨다. 따라서 콜라겐을 주성분으로 하는 조직수복용 필러는 노화에 의해 감소된 진피 구조물을 대체할 수 있으며 여전히 다른 모든 진피 이식재에 대한 기준이 되고 있다.The collagen is a basic structural component of the skin, and as aging progresses, the amount decreases and the ratio of type 1 and type 3 changes. In particular, sunlight, smoking, and pollutants increase collagenase, an enzyme that breaks down collagen, and accelerate skin aging. Therefore, fillers for tissue repair with collagen as a main ingredient can replace dermal structures reduced by aging and still serve as the standard for all other dermal graft materials.

상기 콜라겐은 화장품이나 식품에 콜라겐을 첨가할 때 피부에 잘 흡수되거나 면역반응을 일으키는 부분제거 등을 위해 콜라겐의 형태를 약간변형시켜야 한다.When adding collagen to cosmetics or food, the form of the collagen must be slightly modified to ensure better absorption into the skin or to remove parts that cause an immune response.

상기 콜라겐은 천연콜라겐(Native Collagen)을 효소(펩신)처리하여 콜라겐의 양단에 존재하는 테로펩타이드(Telo-petide)를 제거시킨 아테로 콜라겐 표면이 전기적으로 음이온상태가 되도록 변형시킨 콜라겐을 포함할 수 있다.The collagen may include collagen that has been modified by treating native collagen with enzymes (pepsin) to remove telopeptides present at both ends of the collagen, so that the surface of the atelocollagen is in an electrically negative ion state. there is.

상기 콜라겐에 음이온이 형성되도록 함으로써 산성용액에서 녹는 콜라겐이 중성용액에서 녹을 수 있는데, 이것은 화장품을 만들때 매우 중요한 부분이다. 화장품은 인체에 바르는 것이므로 그것의 산성도가 중성에 가깝게 제조해야 되기 때문이다. 따라서 음이온이 형성된 콜라겐은 중성의 용액에서도 제조가 가능 하다는 장점이 있다. 또한 피부와의 이온결합을 형성하여 피부속으로의 침투력을 높인다는 장점도 가지고 있다.By forming anions in the collagen, collagen, which is soluble in an acidic solution, can be dissolved in a neutral solution, which is a very important part when making cosmetics. This is because cosmetics are applied to the human body, so their acidity must be close to neutral. Therefore, collagen formed with anions has the advantage of being able to be manufactured even in a neutral solution. It also has the advantage of increasing penetration into the skin by forming an ionic bond with the skin.

상기 히알루론산(Hyaluronic Acid)은 주름개선 및 노화방지의 기능을 갖고 있는 콜라겐(Collagen)과 관련하여 또다른 대표적인 물질이 히알루론산이다.Hyaluronic acid is another representative substance related to collagen, which has the function of improving wrinkles and preventing aging.

상기 히알루론산은 콜라겐, 콘드로이틴황산과 함께 결합조직을 구성하는 대표적인 물질이다. 이것은 콜라겐 성분과 유사한 물질로 실제부피보다 수십 배의 수분을 함유해 피부탄력을 유지하는데 중요한 역할을 한다. 그리고 분자구조가 커서 진피를 더 유연하게 해주고 피부에 적용되었을 때 탄력있는 막을 형성한다. 이 성분이 줄어들면 수분이 급격히 줄어들고 피부의 탄력이 떨어져 주름이 생기게 된다. 피부과나 성형외과에서 팔자주름 같은 깊은 주름치료에 쓰이는 필러(Filler) 시술도 대부분 히알루론산으로 만든 레스틸렌, 쥬비덤 등의 보충물을 사용하고 있다.The hyaluronic acid is a representative substance that constitutes connective tissue along with collagen and chondroitin sulfate. This is a substance similar to collagen and contains dozens of times more moisture than its actual volume, playing an important role in maintaining skin elasticity. And its large molecular structure makes the dermis more flexible and forms an elastic film when applied to the skin. When this ingredient decreases, moisture decreases rapidly and skin loses elasticity, causing wrinkles to form. Most filler treatments used in dermatology and plastic surgery to treat deep wrinkles such as nasolabial folds also use supplements such as Restylane and Juvederm made of hyaluronic acid.

상기 히알루론산은 B-D-N-아세틸글루코사민과 B-D-글루쿠론산이 교대로 결합된 직쇄상의 고분자로 분자량이 50,000~10,000,000Da 또는 그 이상인 다당류이다.The hyaluronic acid is a linear polymer composed of B-D-N-acetylglucosamine and B-D-glucuronic acid linked alternately, and is a polysaccharide with a molecular weight of 50,000 to 10,000,000 Da or more.

상기 히알루론산은 자기 무게의 100~1,000배의 수분을 흡수하며 피부에 가장 많이 분포되어 있으며 피부생명유지에 중요한 역할을 한다. 아기 피부에는 히알루론산이 많이 존재하기 때문에 매우 부드럽고 탄력 있으며 촉촉하고 나이가 들면서 히알루론산이 감소하게 되어 피부 건조나 잔주름, 탄력저하 현상이 나타나게 된다.The hyaluronic acid absorbs 100 to 1,000 times its weight in moisture, is most widely distributed in the skin, and plays an important role in maintaining skin life. Because there is a lot of hyaluronic acid in baby skin, it is very soft, elastic, and moist. As we age, hyaluronic acid decreases, causing skin dryness, fine wrinkles, and loss of elasticity.

상기 히알루론산의 화학 구조식은 다음과 같다.The chemical structural formula of the hyaluronic acid is as follows.

상기 히알루론산은 생체 결합조직의 기본물질로 주로 포유동물의 피부, 관절의 활액(synovial fiuid), 눈의 초자체액(vitreous humor), 탯줄(umbilical cord), 혈청(serum), 닭 벼슬(cock's comb) 등에 분포해 있으며, 연쇄구균이나 간균류의 협막 등에도 존재하는 것이 알려져 있다. 히알루론산을 얻기 위한 일반적인 방법으로는 닭 벼슬, 탯줄 등에서 추출하는 방법과 연쇄구균, 간균을 배양한 후 이것으로부터 추출 제정하는 방법 등이 있다.The hyaluronic acid is a basic material of living connective tissue and is mainly used in mammalian skin, synovial fluid of joints, vitreous humor of the eye, umbilical cord, serum, and cock's comb. ), etc., and is known to exist in the capillaries of streptococci and bacilli. Common methods for obtaining hyaluronic acid include extracting it from chicken combs and umbilical cords, and cultivating streptococci and bacilli and extracting them from them.

상기 히알루론산은 진피 결체조직 매트릭스의 주요성분으로 콜라겐과 엘라스틴 섬유들을 감싸고 있는 점탄성 액체의 형태로 존재한다. 콜라겐과는 달리 모든 종(species)간의 화학구조가 동일하여 면역반응을 일으키지 않는다.The hyaluronic acid is a major component of the dermal connective tissue matrix and exists in the form of a viscoelastic liquid surrounding collagen and elastin fibers. Unlike collagen, the chemical structure is the same across all species, so it does not cause an immune response.

상기 히알루론산의 친수성은 세포외기질 공간 내에 수분을 끌어들이고 유지시켜 조직의 부피와 압력에 영향을 준다. 노화된 피부의 경우 히알루론산의 양이 줄어들고 이에 따라 수분이 손실되어 결국 노화된 피부의 특징인 콜라겐과 엘라스틴 섬유가 분해된다.The hydrophilic nature of hyaluronic acid attracts and retains moisture in the extracellular matrix space, affecting the volume and pressure of the tissue. In aged skin, the amount of hyaluronic acid decreases, resulting in moisture loss, which ultimately leads to the breakdown of collagen and elastin fibers, which are the characteristics of aged skin.

조직복원 물질로서 히알루론산의 사용이 매우 이상적이나 천연구조 상태에서 유지기간이 약 1~2일 정도이다. 따라서 지속력을 높이기 위해서는 가교화시키는 방법을 사용한다. Hylan 혹은 히알루론산 젤이하고 불리우는 가교화된 히알루론산은 물에서 팽윤하며 점성을 유지하고 작은 주사바늘을 통과할 수 있다.The use of hyaluronic acid as a tissue restoration material is ideal, but its maintenance period in its natural structure is about 1 to 2 days. Therefore, to increase durability, a cross-linking method is used. Cross-linked hyaluronic acid, also called Hylan or hyaluronic acid gel, swells in water, retains its viscosity and can pass through a small needle.

히알루론산 젤의 다른 특징으로는 항부피성 분해특성이 있다. 히알루론산 각각의 분자들이 분해 되면서 남아있는 분자가 더 많은 수분을 유지시켜 전체수분의 양은 변하지 않은 채 유지되는 것이다.Other features of hyaluronic acid gel include anti-volumetric decomposition properties. As each hyaluronic acid molecule decomposes, the remaining molecules retain more moisture and the total amount of moisture remains unchanged.

상기 아데노신은 레티놀, 레티닐 팔미테이트, 폴리에톡실화 레틴아마이드와 함께 식품의약품안정청 주름개선 고시원료이다. 이 물질은 생물이 활동하는데 있어서 필수적인 APT를 구성하는 성분으로 세포 내로 쉽게 흡수되어 생체내에서 합성되며 각종 대사를 조절하는 중요한 물질로, 미국 메사추세스 의과대학의 연구결과를 통해 이것의 효과가 확인된바 있다.The adenosine, along with retinol, retinyl palmitate, and polyethoxylated retinamide, is a raw material notified by the Food and Drug Safety Administration for wrinkle improvement. This substance is a component of APT, which is essential for the activity of living things. It is easily absorbed into cells, synthesized in vivo, and is an important substance that regulates various metabolisms. Its effectiveness was confirmed through research results from the University of Massachusetts Medical School in the United States. It has been done.

상기 아데노신은 피부 섬유아세포의 DNA합성을 촉진하고 단백질 합성을 증가시키며, 세포의 크기를 증가시키는 역할을 한다. 핵산의 합성을 증가시키고 단백질 대사를 활발히 하여 죽거나 기능저하가 일어나는 피부세포의 항장성 유지에 도움을 주고, 세포기능을 향상시키며, 세포크기를 팽창시켜 진피 세포의 파괴와 노화로 인해 주름을 개선하는 효과를 나타내며 또한 피부에 활력까지 부여하여 피부탄력을 높여준다. 안전성이 높다는 장점도 가지고 있으며 콜라겐 합성을 촉진하는 역할도 한다.The adenosine promotes DNA synthesis in skin fibroblasts, increases protein synthesis, and increases cell size. By increasing the synthesis of nucleic acids and activating protein metabolism, it helps maintain the tonic properties of dead or dysfunctional skin cells, improves cell function, and improves wrinkles caused by destruction of dermal cells and aging by expanding cell size. It is effective and also provides vitality to the skin, increasing skin elasticity. It also has the advantage of high safety and also plays a role in promoting collagen synthesis.

본 발명에서는 콜라겐뿐만 아니라 아데노신도 포함되어 있어, 주름개선에 상승효과를 가진다. 콜라겐의 피부로의 높은 흡수뿐만 아니라 아데노신의 기능이 더해져 주름을 더 효과적으로 개선하는 것이다.In the present invention, not only collagen but also adenosine is included, which has a synergistic effect on wrinkle improvement. In addition to the high absorption of collagen into the skin, the function of adenosine is added to improve wrinkles more effectively.

상기 아데노신(Adenosine)의 일반적인 특성은 다음과 같다.The general characteristics of the adenosine are as follows.

상기 아데노신은 특정 이중결합이 존재하지 않은 구조로 열등에 비교적 안정한 물질이기 때문에 기능성 화장품 허가상 사용기한 설정 등이 필요하지 않은 물질이다. 그러나 아데닌에 당이 붙어있어서 염기에 매우 취약하고 열에도 일부 취약한 것으로 판명되어 장기 역가를 보존하기 위한 안정화가 필요한 물질이다.The adenosine has a structure in which no specific double bond exists and is a relatively stable substance against heat, so it is a substance that does not require an expiration date for functional cosmetics approval. However, because a sugar is attached to adenine, it is found to be very vulnerable to bases and to some extent to heat, so it is a material that requires stabilization to preserve long-term potency.

피부투과력 면에서 아데노신의 구조는 아데닌에 당이 붙어 있는 구조로 수용성이기 때문에 피부투과률이 낮은 물질이다. 특히 식품의약품안전청에서 정한 기능성효과치가 0.04%로 매우 낮기 때문에 피부투과에 의한 진피층 도달은 아데노신의 효능을 기대하기 위한 필수사항이다. 따라서 낮은 농도로 원하는 정도의 주름개선효과를 얻기 위해서는 피부 투과력을 증가시키는 것이 필수적이라 할 수 있다.In terms of skin penetration, adenosine has a structure in which a sugar is attached to adenine and is water-soluble, so it is a substance with a low skin penetration rate. In particular, since the functional effectiveness value set by the Food and Drug Administration is very low at 0.04%, reaching the dermal layer through skin penetration is essential to expect the efficacy of adenosine. Therefore, in order to achieve the desired wrinkle improvement effect at a low concentration, it is essential to increase skin penetration.

상기 아데노신은 친수성 물질이긴 하나 용해도 면에서 아주 특이한 특성을 나타내는 물질이다. 제형 내에서의 시간에 따른 석출 가능성이 큰 물질로서 리포좀화된 아데노신 사용으로 석출문제를 해결할 수 있다.Although adenosine is a hydrophilic substance, it exhibits very unique properties in terms of solubility. As a substance with a high possibility of precipitation over time within the formulation, the precipitation problem can be solved by using liposomal adenosine.

상기 아데노신은 피부탄력개선 및 피부주름 예방효과가 있고, 섬유아 세포증식 촉진, 콜라겐 합성증대, 콜라겐 분해효소 활성억제, 진피내 피부세포 활성화 신호전달, 섬유아세포의 크기 증가 등의 효능 및 효과가 있다.The adenosine has the effect of improving skin elasticity and preventing skin wrinkles, and has effects such as promoting fibroblast proliferation, increasing collagen synthesis, inhibiting collagen decomposition enzyme activity, transmitting skin cell activation signals in the dermis, and increasing the size of fibroblasts. .

상기 나노 리포좀화된 글리콜산은 글리콜산을 세라마이드, 콜레스테롤 및 지방산과 혼합하여 나노 리포좀화시킬 수 있다.The nano-liposomal glycolic acid can be nano-liposomalized by mixing glycolic acid with ceramide, cholesterol, and fatty acid.

분자량이 192인 구연산(시트릭산)에 비하여 상대적으로 적은 분자량(76)을 가지는 글리콜산(Glycolic Acid)은 주로 사탕수수 등에서 추출되는 천연성분으로서 섬유아세포를 자극하여 콜라겐 합성에 도움을 주고 각질층의 탈락으로 인해 피부 브라이트닝 효과를 나타내는 성분으로 알려져 있지만 산도가 낮아 처방 중에서의 불안정성과 피부에의 자극을 유발할 가능성이 있어 직접 사용은 제한될 수 있다.Glycolic acid, which has a relatively low molecular weight (76) compared to citric acid (citric acid), which has a molecular weight of 192, is a natural ingredient mainly extracted from sugar cane, etc. It stimulates fibroblasts and helps in collagen synthesis and prevents the exfoliation of the stratum corneum. Although it is known as an ingredient that has a skin brightening effect, its low acidity may cause instability during prescription and skin irritation, so direct use may be limited.

상기 나이아신아마이드는 비타민 B 복합체로 인체에 필수적으로 필요한 요소이면서 녹색 채소나 곡류 등 식품에 포함되어 있다. 또한, 열과 빛에 안정하여 화장품에 사용하기 적합한 성분이다. 상기 나이아신아마이드는 수용성 비타민 B3 또는 비타민 PP로 알려져 있다. 식품에서는 비타민 그 자체 또는 트립토판으로 존재할 수 있다. 이때 60mg의 트립토판은 나이아신아마이드 1mg으로 전환된다.Niacinamide is a vitamin B complex that is essential for the human body and is contained in foods such as green vegetables and grains. Additionally, it is stable to heat and light, making it a suitable ingredient for use in cosmetics. The niacinamide is known as water-soluble vitamin B3 or vitamin PP. In foods, it can be present as the vitamin itself or as tryptophan. At this time, 60 mg of tryptophan is converted to 1 mg of niacinamide.

상기 나이아신아마이드는 피부건강 및 정신건강, 세포의 에너지 재생 촉진과 소화기관을 건강하게 도와준다. 상기 나이아신아마이드의 흡수가 부족하여 펠라그라(pellagra) 또는 홍반병으로 불리는 비타민 결핍증에 걸릴 수 있다. 펠라그라는 햇빛에 노출된 피부의 염증(pigmented rash), 소화관 점막의 염증, 피부암, 구토, 변비 또는 설사, 연한 홍색 혀(bright red tongue)와 같은 소화관 장애, 우울증, 무감각(apathy), 두통, 피로, 및 기억상실과 같은 신경계 장애를 나타낸다.The niacinamide promotes skin health, mental health, cellular energy regeneration, and helps maintain a healthy digestive system. Due to insufficient absorption of niacinamide, a person may develop a vitamin deficiency called pellagra or erythema. Pellagra is inflammation of sun-exposed skin (pigmented rash), inflammation of the digestive tract mucosa, skin cancer, vomiting, constipation or diarrhea, digestive tract disorders such as bright red tongue, depression, apathy, headache, and fatigue. , and neurological disorders such as amnesia.

상기 나이아신아마이드 성분은 수분보유력을 높여 피부를 부드럽게 하고 피부에 볼륨감을 형성시킨다. 피부에 피부 장벽을 형성하는 지방산과 세라마이드는 피부가 수분을 잃게 되면 그 기능을 제대로 수행하지 못한다. 이때, 상기 나이아신아마이드가 피부수분을 지속시켜 피부 장벽 형성과 강화에 도움을 줄 수 있다. 또한, 멜라닌 색소 침착을 연하게 또는 억제하여 전체적인 피부톤을 균일화 시키는데 도움을 줘 피부 미백에도 효능이 있다.The niacinamide ingredient increases moisture retention, softens the skin, and creates volume in the skin. Fatty acids and ceramides that form the skin barrier do not perform their functions properly when the skin loses moisture. At this time, the niacinamide can help maintain skin moisture and help form and strengthen the skin barrier. In addition, it is effective in skin whitening as it helps to even out the overall skin tone by lightening or suppressing melanin pigmentation.

상기 팔미토일올리고펩타이드는 팔미틱애시드와 트리펩타이드-1의 반응물로서 짧은 아미노산의 결합으로 이루어져 있다. 상기 팔미토일올리고펩타이드는 피부 본연의 콜라겐 생성 능력을 강화해서 피부결 개선에 도움이 되며 피부 노화의 원인이 되는 피부 건조와 외부자극으로부터 피부를 보호하는 역할을 한다.The palmitoyl oligopeptide is a reaction product of palmitic acid and tripeptide-1 and consists of a combination of short amino acids. The palmitoyl oligopeptide strengthens the skin's natural ability to produce collagen, helps improve skin texture, and protects the skin from skin dryness and external stimuli that cause skin aging.

상기 에탄올 수용액은 지방족 1급의 방향성 알코올로서, 물에 쉽게 녹으며 국소적으로는 피부, 점막의 수렴작용 및 살균작용을 나타낸다. 70% 수용액을 소독약으로 이용하며, 그 밖에 화장료 조성물로도 이용한다.The ethanol aqueous solution is a first-class aliphatic aromatic alcohol, is easily soluble in water, and has local astringent and sterilizing effects on the skin and mucous membranes. A 70% aqueous solution is used as a disinfectant and is also used in cosmetic compositions.

계속해서, 본 발명의 화장료 조성물에 포함된 상기 제2혼합물은, 산양삼 추출물 10중량%, 상황버섯 10중량%, 흰목이버섯 10중량%, 보리지오일 10중량%, 마치현 20중량%, 당드릅나무 추출물 20중량% 및 동백오일 20중량%의 중량 비율로 구성될 수 있다.Subsequently, the second mixture contained in the cosmetic composition of the present invention contains 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, and dandelion. It may be composed of a weight ratio of 20% by weight of tree extract and 20% by weight of camellia oil.

산양삼은 산지에서 씨나 묘삼을 뿌린 후 인공시설이나 농약 없이 재배한 삼을 말한다. 밭에서 재배한 가삼(인삼)과 구별되며 가삼에 비해 재배기간이 길다. 상기 산양삼은 다양한 유기질(사포닌, 단백질, 탄수화물, 지용성 성분)과 무기질을 가지고 있다. 그중 사포닌 3-6% 정도이며 가장 약리효과가 높은 성분으로 한방에서는 강심제, 이뇨제로 사용되었다. 사포닌은 항염증, 항당뇨, 통증 억제, 면역기능 증강, 기억력 감퇴 개선 등에 효과를 보인다. 사포닌 성분이 항암, 항산화, 콜레스테롤의 저하 효과가 있다.Wild ginseng refers to ginseng grown without artificial facilities or pesticides after sowing seeds or seedlings in the production area. It is different from ginseng grown in the field, and its cultivation period is longer than that of ginseng. The wild ginseng contains various organic substances (saponins, proteins, carbohydrates, fat-soluble components) and minerals. Among them, saponin is about 3-6% and is the ingredient with the highest pharmacological effect, and is used as a tonic and diuretic in oriental medicine. Saponin is effective in anti-inflammatory, anti-diabetic, pain suppressing, enhancing immune function, and improving memory loss. Saponin has anti-cancer, antioxidant, and cholesterol-lowering effects.

상기 산양삼 추출물의 제조 방법은 다음과 같다.The method for producing the wild ginseng extract is as follows.

산양삼 1kg을 20-40 mesh로 분쇄하여 플라스크에 담았다. 홍삼 대비 10배의 70% 에탄올을 홍삼이 담긴 플라스크에 넣고 실온에서 잘 혼합하였다. 혼합물을 냉각 콘덴서가 장착된 추출기를 이용하여 35℃에서, 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과를 거쳐 감압농축기를 이용하여 45℃에서, 12시간 동안 감압 농축하여 에탄올을 제거한 후 동결건조시켜 산양삼 165g을 얻었다.1 kg of wild ginseng was ground to 20-40 mesh and placed in a flask. 70% ethanol, 10 times the amount of red ginseng, was added to a flask containing red ginseng and mixed well at room temperature. The mixture was extracted at 35°C for 24 hours using an extractor equipped with a cooling condenser. After extraction and filtration, the extract was concentrated under reduced pressure at 45°C for 12 hours using a vacuum concentrator to remove ethanol and then freeze-dried to obtain 165g of wild ginseng.

상기 상황버섯은 균사체 버섯으로서, 한자로 桑(뽕나무 상), 黃(누를 황)을 쓰는데, 문자 그대로 주로 뽕나무(혹은 활엽수) 밑둥지 부분에서 자란다. 크기가 크며, 전체적으로 목질(cork)로 되어 있어 딱딱한 몸체 그대로를 먹을 수 없다. 그래서 주로 끓여 차로 만들어 먹는다. 함유 물질 상으로 항암, 항산화작용을 하는 효소가 함유되어 있으며, 고한방서에서 불로초 중의 하나로 인용되어 있다.The Sanghwang mushroom is a mycelium mushroom, and the Chinese characters for it are 桑 (mulberry tree top) and 黃 (pressed yellow), and it literally grows mainly at the base of mulberry trees (or broad-leaved trees). It is large and entirely made of cork, so its hard body cannot be eaten as is. So, it is mainly boiled and made into tea. It contains enzymes that have anticancer and antioxidant properties, and is cited as one of the herbs of immortality in ancient herbal medicine books.

상기 상황버섯은 독소를 배출하고 면역성을 강화하는 항염효과, 활성산소 억제로 항산화 효과, 티로시나아제의 멜라닌 색소 활성 억제 효과, 세포증식 및 콜라겐 생성에 의한 피부재생 효과가 있다.The Sanghwang mushroom has an anti-inflammatory effect that excretes toxins and strengthens immunity, an antioxidant effect by suppressing free radicals, an effect of suppressing the melanin pigment activity of tyrosinase, and a skin regeneration effect by cell proliferation and collagen production.

상기 흰목이버섯은 자실체가 순백색이고 반투명한 젤리질이며, 닭볏 모양 또는 구불구불한 꽃잎 집단과 같고, 지름은 3~8cm, 높이는 2~5cm쯤 되며, 건조하면 오므라들고 단단해지는 특징이 있다. 자실층은 표면에 발달하며 담자기는 난상의 구형인데 지름은 10~13㎛이고 세로의 칸막이에 의해 4실로 갈라진다. 포자의 크기는 6~8×5~6㎛로 거의 난형이다.The fruiting body of the white wood ear mushroom is pure white and translucent, jelly-like, shaped like a chicken crest or a group of curved petals, with a diameter of 3 to 8 cm and a height of about 2 to 5 cm, and has the characteristic of shrinking and becoming hard when dried. The fruiting layer develops on the surface, and the basidium is egg-shaped and spherical, with a diameter of 10-13㎛ and divided into four chambers by vertical partitions. The size of the spores is 6~8×5~6㎛ and is almost egg-shaped.

상기 흰목이버섯은 혈액을 맑게 하며 피부에 윤기를 준다. 유소 함량이 높고 교질상 물질이 많고 수분 흡수력이 뛰어나 체내 노폐물 및 독소 배출에 뛰어난 효능이 있다. 칼로리가 낮고 수분함량이 많으며 식이섬유를 많이 함유하고 있어 다이어트 식품으로 좋다.The white wood ear mushroom purifies the blood and gives luster to the skin. It has a high oil content, a lot of colloidal substances, and excellent water absorption, making it highly effective in discharging waste and toxins from the body. It is low in calories, high in moisture, and contains a lot of dietary fiber, making it a good diet food.

상기 흰목이버섯은 리조비움 속 미생물에 접종하여 그 발효물을 수득하며, 이러한 발효물은 피부 탄력 및 주름 개선 효과가 탁월하다.The fermented product of the white wood ear mushroom is obtained by inoculating microorganisms in Rhizobium, and this fermented product has excellent skin elasticity and wrinkle improvement effects.

보리지(Borage)는 15~70cm 정도 자라는 1년초로, 별 모양의 꽃이 사랑스러운 허브로 칼륨, 칼슘 등의 미네랄 함량이 매우 높다. 아드레날린을 분비하는 몸속 기관 중 하나인 아드레날린 분비선을 자극하는 것으로 알려져 있다. 전초에 털로 덮여 있는 줄기는 두텁고 가지를 많이 친다. 잎은 5~20cm로 긴 난상 타원형으로 녹색이며 어긋난다. 오이 냄새가 나며, 꽃은 7~8월에 보라색으로 가지 끝에 산방상으로 달린다. 꽃잎은 5장이며 수술은 검은색이다.Borage is an annual herb that grows about 15 to 70 cm in height. It is a herb with lovely star-shaped flowers and is very high in minerals such as potassium and calcium. It is known to stimulate the adrenal glands, one of the organs in the body that secretes adrenaline. The stem, which is initially covered with hair, is thick and has many branches. The leaves are 5 to 20 cm long, oval-shaped, green, and alternate. It smells like cucumbers, and the flowers are purple and hang in corymbs at the ends of branches from July to August. There are 5 petals and the stamens are black.

의학적 연구 가치가 높은 식물로, 고대인은 항우울약으로서의 효과가 있어서 그 가치를 칭송했다. 습진이나 피부병에도 효과가 있다. 이뇨(利尿), 발한작용(發汗作用)도 있다. 잎과 씨앗의 성분은 호르몬에 영향을 주기 때문에 모유량을 증가시킨다는 지적도 있다. 최근 씨앗에 함유된 고농도의 감마 리놀산이 발견되어 많은 질환에 도움을 줄 것으로 생각된다.It is a plant with high medical research value, and ancient people praised its value for its effectiveness as an antidepressant. It is also effective for eczema and skin diseases. It also has diuretic and sweating effects. It is also pointed out that the components of leaves and seeds increase breast milk supply because they affect hormones. Recently, a high concentration of gamma linoleic acid in seeds was discovered and is thought to help with many diseases.

상기 보리지오일은 씨앗에서 채유(採油)되며, 마사지 오일, 화장 크림 등을 비롯하여 화장료 조성물로 이용될 수 있다. 잎과 꽃은 목욕제로 사용하면 피부를 부드럽고 청결하게 하며 심신의 긴장 해소에 도움이 된다.The borage oil is extracted from seeds and can be used in cosmetic compositions, including massage oil and cosmetic cream. When used as a bathing agent, the leaves and flowers soften and clean the skin and help relieve mental and physical tension.

상기 마치현은 쇠비름과(科)에 속한 한해살이풀. 키는 20센티미터 정도이며, 적갈색을 띠는 줄기는 비스듬히 자라고, 잎은 끝이 뭉뚝한 달걀 모양으로 마주나거나 어긋난다. 6월부터 가을에 걸쳐 노란색의 꽃이 가지 끝에 핀다. 돼지 먹이로 이용되며, 독을 푸는 성분이 있어서 벌레나 뱀에게 물렸을 때 해독제로 사용되고 이뇨제로도 쓰인다. 길가나 채소밭, 빈터 따위에서 흔히 볼 수 있으며, 전 세계적으로 분포한다. 학명은 Portulaca oleracea이다.The Portulaca parsley is an annual herb belonging to the purslane family. It is about 20 centimeters tall, the reddish-brown stems grow at an angle, and the leaves are egg-shaped with blunt ends and are opposite or alternate. Yellow flowers bloom at the tips of branches from June to fall. It is used as feed for pigs, and has detoxifying properties, so it is used as an antidote when bitten by insects or snakes, and is also used as a diuretic. It is commonly found along roadsides, vegetable gardens, and vacant lots, and is distributed worldwide. The scientific name is Portulaca oleracea.

상기 마치현은 독소배출 및 면역력 강화의 항염효과, 활성산소 억제로 항산화 효과, 멜라닌 생성 효소의 티로시나아제의 활성 억제 효과, 세포증식 및 콜라겐 생성에 의한 피부보습 및 피부재생 효과 등이 있다.Portulaca quince has an anti-inflammatory effect in eliminating toxins and strengthening immunity, an antioxidant effect by suppressing free radicals, an effect of suppressing the activity of tyrosinase, a melanin-producing enzyme, and a skin moisturizing and skin regeneration effect by cell proliferation and collagen production.

상기 당드릅나무(Ulmus davidiana)는 당유(唐楡), 흑유(黑楡)라고도 한다. 산기슭이나 골짜기에서 자라며, 높이는 15m이고, 밑동의 지름은 50∼70cm이며, 작은 가지에 길고 부드러운 털이 있고, 나무 껍질은 엷은 회색이다. 잎은 어긋나고 길이 4∼8cm의 거꾸로 선 타원 모양 또는 긴 타원 모양이다. 잎 끝은 점점 뾰족해지고 밑은 일그러지며, 가장자리에 예리한 겹톱니가 있고, 앞면은 약간 거칠며 뒷면 맥 위에 털이 있다. 잎자루는 길이가 3∼7mm이고 길고 부드러운 털이 빽빽이 있다. 당드릅나무 뿌리는 오래전부터 한약재로 사용되어 왔다.The Dandelion tree (Ulmus davidiana) is also called Tangyu (唐楡) and Heukyu (黑楡). It grows at the foot of a mountain or valley, has a height of 15m, a diameter of the base of 50-70cm, small branches have long soft hairs, and the bark is light gray. The leaves are alternate and have the shape of an inverted oval or long oval, 4 to 8 cm long. The tips of the leaves become increasingly pointed and the bottoms are distorted, the edges have sharp double teeth, the front is slightly rough, and there are hairs on the veins on the back. The petiole is 3 to 7 mm long and has dense long, soft hairs. The roots of the dandelion tree have been used as herbal medicine for a long time.

상기 당드릅나무 추출물은 당드릅나무 뿌리에서 추출되며, 피부 산화를 방지하는 기능, 피부를 맑고 건강하게 유지시키는 역할을 한다.The Dandelion tree extract is extracted from the Dandelion tree root and has the function of preventing skin oxidation and keeping the skin clear and healthy.

동백나무(Camellia Japonica)는 상록활엽수 교목으로, 휜 줄기에서 잔가지가 많이 나와 장 타원형 또는 반 구형의 수형을 이루며, 수피는 회백색으로 평활하고, 잎은 어긋나고 타원형 또는 긴 타원형으로 잔 톱니가 길이 5~12cm, 넓이 3~7cm로 표면은 짙은 녹색이다.Camellia Japonica is an evergreen broad-leaved tree. Many twigs grow from a curved stem, forming an oblong or semi-spherical tree. The bark is gray-white and smooth, and the leaves are alternate, oval or long oval, with 5 to 5-long teeth. It is 12cm long, 3~7cm wide, and the surface is dark green.

동백속의 성분 분석 및 활용화에 관해 많은 연구가 진행되어 동백유와 유박의 급성 테스트를 통해 안전성을 확인하였으며, 유박에 함유된 성분이 알코올 흡수 저해효과가 있다고 보고된 바 있으며, 종실에서 분리한 하이퍼로사이드(hyperoside)는 AIDS 유발과 관련된 HIV-1 프로테아제(HIV-1 protease)에 대하여 억제효과를 보였고, 씨와 과피의 추출물도 항염 및 소염활성, 줄기의 메탄올 추출물은 지질과 산화를 억제하는 것으로 나타났다. 또한 동백꽃에는 프로라인과 글루타민 산을 주된 아미노산으로 존재하고 있고 기타 미량의 유리 아미노산이 존재하는 것으로 나타났다.Many studies have been conducted on the analysis and utilization of the components of the camellia genus, and the safety of camellia oil and oil cake has been confirmed through acute tests. It has been reported that the ingredients contained in the oil cake have an effect of inhibiting alcohol absorption, and Hypera, isolated from the seed, has been reported to have an alcohol absorption inhibitory effect. Hyperoside showed an inhibitory effect on HIV-1 protease, which is associated with causing AIDS. Extracts from seeds and peels also showed anti-inflammatory and anti-inflammatory activities, and methanol extracts from stems showed inhibition of lipids and oxidation. . In addition, it was found that camellia flowers contain proline and glutamic acid as the main amino acids, and trace amounts of other free amino acids.

상기 동백오일은 동백의 씨로부터 추출될 수 있다. 상기 동백오일은 오메가-3 지방산, 오메가-6 지방산 등의 불포화 지방산이 많이 함유되어 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 올레익산(oleic acid)이 많이 함유되어 있을 수 있다. 상기 올레익산은 활성 산소를 제거하는데 도움을 주며, 피부 내 수분의 탈수 방지 효과, 보호막 형성과 같은 작용을 할 수 있다.The camellia oil can be extracted from camellia seeds. The camellia oil is known to contain a lot of unsaturated fatty acids such as omega-3 fatty acids and omega-6 fatty acids, and may especially contain a lot of oleic acid. The oleic acid helps remove active oxygen and can have effects such as preventing dehydration of moisture in the skin and forming a protective film.

또한, 상기 동백오일은 보습 효과가 매우 뛰어나 아토피 치료에 효과적이며 탁월한 콘디셔닝 효과가 있어서 예로부터 머리카락과 피부를 가꾸는데 사용되었으며, 잘 변질되지 않고 피부에 잘 스며들어 마사지의 베이스 오일로서도 매우 뛰어나며 또한 피지의 산화를 억제하는 효과와 노화 피부·건성 피부에 많이 사용되고 있다.In addition, the camellia oil has an excellent moisturizing effect and is effective in treating atopic dermatitis. It has an excellent conditioning effect, so it has been used to care for hair and skin since ancient times. It does not deteriorate easily and penetrates the skin well, making it an excellent base oil for massage. It has the effect of suppressing the oxidation of sebum and is widely used for aging skin and dry skin.

다음으로, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 제1혼합물과 상기 제2혼합물을 1:0.2∼0.8 중량비로 제3혼합물을 제조하여 포함할 수 있다.Next, the cosmetic composition of the present invention may include the first mixture and the second mixture by preparing a third mixture at a weight ratio of 1:0.2 to 0.8.

마지막으로, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 제3혼합물 100중량부에 대하여, 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose) 1∼10중량부, 로즈마린산(Rosemarinic Acid) 1∼5중량부, 하이드로라이즈드콜라겐 5∼10중량부를 포함하여 구성될 수 있다.Lastly, the cosmetic composition of the present invention contains 1 to 10 parts by weight of bio cellulose, 1 to 5 parts by weight of rosemarinic acid, and 5 to 10 parts by weight of hydrolyzed collagen, based on 100 parts by weight of the third mixture. It may be composed of parts.

여기서, 상기 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)는 아세트산균(Acetobacter Xylinum)을 발효시켜 만든 섬세한 섬유구조로 156,250개의 미세한 침 형태로 구성되어 있다. 미세 침의 구조는 피부의 땀구멍보다 작은 30nm로 육안으로는 식별이 불가하며, 피부에 밀착할 경우 피부장벽을 뚫고 유효성분의 침투를 촉진시켜 준다.Here, the bio cellulose is a delicate fiber structure made by fermenting acetic acid bacteria (Acetobacter Xylinum) and is composed of 156,250 fine needles. The structure of fine needles is 30 nm, smaller than the pores of the skin, so they are invisible to the naked eye. When they come in close contact with the skin, they penetrate the skin barrier and promote the penetration of active ingredients.

상기 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)를 화장품 마스크 팩에 사용할 경우 일반 부직포 팩과 비교 시 500배의 탄성규조에 수분 보수성이 10배 이상 높아 팩에 함유한 고농축 에센스의 증발을 막아 피부 흡수율을 최대화 시켜주며, 우수한 진정효과 및 밀착력을 보여준다.When the bio cellulose is used in a cosmetic mask pack, it has 500 times the elasticity of diatoms compared to regular non-woven packs and has a water retention capacity of more than 10 times, preventing evaporation of the highly concentrated essence contained in the pack and maximizing skin absorption rate. It shows excellent soothing effect and adhesion.

상기 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)는 사용하여 고영양과 보습을 피부 깊숙이 전달하므로, 피부 레이저 시술 전후에 사용하면 더욱 우수한 효과를 낸다. 특히, 장시간의 자외선에 노출된 피부나 레이저 시술 직후의 피부에 쿨링감을 주며, 피부 진정 및 수련 작용이 뛰어나다. 병/의원 및 에스테틱에서 사용시, 피부 시술 후 스킨케어 마무리 단계에서 사용하면 보다 높은 시너지 효과를 기대할 수 있다. 또한, 모공 늘어짐이 심하고 굴곡이 심한 피부, 얼굴 라인이 매끄럽지 못하고 처지기 시작하는 피부, 효과적인 탄력 케어가 필요한 피부, 피부톤이 칙칙하여 화이트닝을 요하는 피부, 건조하여 각질이 일어나고 수분이 부족한 피부에 효과가 있다.The Bio Cellulose is used to deliver high nutrition and moisture deep into the skin, so it has an even better effect when used before and after skin laser treatment. In particular, it provides a cooling sensation to skin exposed to long-term ultraviolet rays or immediately after laser treatment, and has excellent skin soothing and soothing properties. When used in hospitals/clinics and aesthetics, a higher synergy effect can be expected if used at the final stage of skin care after skin treatment. In addition, it is effective for skin with sagging pores and severe curves, skin with uneven facial lines that are starting to sag, skin in need of effective elasticity care, skin with a dull skin tone that requires whitening, and skin with dry, flaky skin and lack of moisture. there is.

상기 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)를 생산하는 미생물로는 아세토박터(Acetobacter)속, 라이조비움(Rhizobium)속, 그리고 아그로박터(Agrobacterium)속 등을 사용할 수 있다. 또한, 생산 효율성을 위해서 여러 종의 미생물을 혼합배양할 수도 있다. 가장 바람직하게는 생산수율이 좋은 아세토박터속 자일리늄과, 잡균 오염을 방지하는 박테리오신을 생산하는 젖산균을 정치 혼합 배양 또는 교반 혼합 배양하는 것이 효과적이다.Microorganisms that produce the bio cellulose include Acetobacter, Rhizobium, and Agrobacterium. Additionally, several species of microorganisms can be mixed-cultured for production efficiency. Most preferably, it is effective to perform static or agitated mixing culture of Acetobacter xylinium, which has a high production yield, and lactic acid bacteria, which produce bacteriocins that prevent bacterial contamination.

상기 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)는 화장료 조성물이나 화장용 마스크팩 시트로 사용되기 위해서는 주입된 균체의 사멸 및 배양액 제거 공정을 거친다. 이를 위해서 열수 살균 공정을 반복하는 것이 가장 효과적이다.In order to be used as a cosmetic composition or cosmetic mask pack sheet, the bio cellulose undergoes a process to kill the injected bacteria and remove the culture medium. For this purpose, it is most effective to repeat the hot water sterilization process.

상기 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)는 '제2의 피부'라고도 불리며 피부에 가장 친숙한 화장품 마스크 팩, 화장료 조성물, 화상치료 등에 사용될 수 있다.The bio cellulose is also called 'second skin' and can be used in cosmetic mask packs, cosmetic compositions, burn treatments, etc., which are most familiar to the skin.

상기 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)의 리포좀(Liposomes) 기술은 활성 성분을 약 100nm 크기의 나노 사이즈로 만들어서 이를 친수성 선단(hydrophilic head)과 소수성 하단(hydrophobic tails)으로 구성하여 물과 지방질 모두 흡수 될 수 있는 양쪽 친매성 물질(amphiphilic) 상태로 만들고 각 성분들을 피부 단계별로 방출할 수 있도록 캡슐화 한다(encapsulation). 이 절차를 리포좀(Liposomes)이라고 하며 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose)의 활성 성분을 보다 효율적이고 빠르게 전달할 수 있다.The Liposomes technology of Bio Cellulose makes the active ingredient into a nano-size of about 100 nm and consists of a hydrophilic head and hydrophobic tails, so that both water and fat can be absorbed. It is made into an amphiphilic state and each ingredient is encapsulated so that it can be released at each stage of the skin. This procedure is called liposomes and can deliver the active ingredients of Bio Cellulose more efficiently and quickly.

상기 로즈마린산(Rosemarinic Acid)은 허브(herb)의 일종인 로즈마리(rosemary)를 비롯한 레몬, 깻잎 등 다양한 식물에서 발견되는 화합물이다. 독특한 생화학적 특성을 가지는 천연 화합물로서, 약재, 향수, 향신료 등에 다양한 용도로 활용되고 있다. 로즈마리는 대부분 지중해 연안을 원산지로 하며, 1년 내내 녹색의 잎 색깔을 가진다.The rosmarinic acid is a compound found in various plants such as rosemary, a type of herb, lemon, and perilla leaves. It is a natural compound with unique biochemical properties and is used for various purposes such as medicine, perfume, and spice. Rosemary is mostly native to the Mediterranean coast and has green leaves all year round.

상기 로즈마린산(Rosemarinic Acid)은 카페산(caffeic acid)의 에스터(ester) 형태로서, 다양한 생물학적 특성을 갖는다. 인체에 대한 대표적 효능으로는 카페산과 유사하게 항산화(antioxidant) 및 항염증(anti-inflammatory) 작용이 있다. 로즈마린산의 항산화 특성은 인체의 활성 산소 종(reactive oxygen species, ROS) 제거에 도움을 주어 질병의 치료에 보조적 역할로 활용될 수 있고, 면역 체계 강화 및 혈액 순환 개선에도 도움을 준다. 또한, 상기 로즈마린산(Rosemarinic Acid)의 폴리페놀산(Phenolic compounds)은 최종 당화 산물(A.G.E.) 구조물을 파괴하여 단백질 정상화 시키고 추가적인 당화현상을 보다 강력하게 방지한다.Rosmarinic acid is an ester form of caffeic acid and has various biological properties. Its representative effects on the human body include antioxidant and anti-inflammatory effects, similar to caffeic acid. The antioxidant properties of rosmarinic acid help remove reactive oxygen species (ROS) from the human body, so it can be used as an adjunct in the treatment of diseases, and also helps strengthen the immune system and improve blood circulation. In addition, the polyphenolic compounds of Rosemarinic Acid destroy advanced glycation end product (A.G.E.) structures, normalize proteins and more strongly prevent additional glycation.

상기 하이드로라이즈드콜라겐은 콜라겐의 가수분해를 통해 생긴 작은 펩타이드의 혼합물을 의미한다. 하이드로라이즈드콜라겐은 화장료로 사용될 경우 피부가 건조해져서 각질이 생기는 플레이킹 현상을 줄이고 탄력을 회복시켜 건조하거나 손상된 피부를 회복시킬 수 있다.The hydrolyzed collagen refers to a mixture of small peptides produced through hydrolysis of collagen. When used as a cosmetic, hydrolyzed collagen can restore dry or damaged skin by reducing the flaking phenomenon that causes dead skin cells to dry out and restore elasticity.

본 발명의 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징 크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention includes ointment for external use, cream, softening lotion, nourishing lotion, pack, essence, hair tonic, shampoo, rinse, hair conditioner, hair treatment, gel, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion. , milk lotion, moisture lotion, nutritional lotion, massage cream, nutritional cream, eye cream, moisture cream, hand cream, foundation, nutritional essence, sunscreen, soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion and body cleanser. It may have a dosage form selected from the group consisting of, but is not limited thereto. The composition of each of these formulations may contain various bases and additives necessary and appropriate for the formulation of the formulation, and the types and amounts of these components can be easily selected by those skilled in the art.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier ingredient. You can.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, or polyamide powder can be used as the carrier ingredient. In particular, when the formulation is a spray, chlorofluorohydrocarbon and propane may be used as carrier ingredients. /May contain propellants such as butane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, the carrier ingredients include water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester, and polyoxyethylene sorbitan ester, and microcrystals. Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar, or tracant may be used.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent, the carrier ingredients include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, and fatty acid amide. Ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester can be used.

화장료 조성물의 제조 방법의 실시예Examples of methods for producing cosmetic compositions

본 발명에 의한 화장료 조성물의 제조 방법은 도 1을 참조하여 설명하면 다음과 같다.The method for producing the cosmetic composition according to the present invention is described with reference to FIG. 1 as follows.

먼저, 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 결합체와 줄기세포 엑소좀 복합체를 유효성분으로 함유하는 피부 재생 및 주름 개선용 화장료 조성물의 제조 방법에 있어서, 보툴리눔톡신(botulinum toxin) 복합체 0.01∼0.05중량%, 줄기세포 엑소좀 복합체 5∼10중량%, 콜린알포세레이트 1∼5중량%, 글라이코사미노글리칸 5∼10중량%, 히아루론산 5∼10중량%, 아데노신 5∼10중량%, 나이아신아마이드 5∼10중량부, 팔미토일올리고펩타이드 5∼10중량% 및 전체 중량 중 나머지 중량 비율을 갖는 에탄올 수용액을 포함하는 제1혼합물을 제조한다.First, in the method of manufacturing a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing a botulinum toxin conjugate and a stem cell exosome complex as active ingredients, 0.01 to 0.05% by weight of the botulinum toxin complex and stem cells Exosome complex 5-10% by weight, choline alfoscerate 1-5% by weight, glycosaminoglycan 5-10% by weight, hyaluronic acid 5-10% by weight, adenosine 5-10% by weight, niacinamide 5-10 A first mixture is prepared comprising an aqueous ethanol solution having 5 to 10 parts by weight of palmitoyl oligopeptide and the remaining weight percentage of the total weight.

그 다음, 산양삼 추출물 10중량%, 상황버섯 10중량%, 흰목이버섯 10중량%, 보리지오일 10중량%, 마치현 20중량%, 당드릅나무 추출물 20중량% 및 동백오일 20중량%의 중량 비율로 제2혼합물을 제조하는 단계; 상기 제1혼합물과 상기 제2혼합물을 1:0.2∼0.8 중량비로 제3혼합물;을 제조한다.Next, the weight ratio of 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, 20% by weight of sycamore extract and 20% by weight of camellia oil. Preparing a second mixture with; A third mixture is prepared by mixing the first mixture and the second mixture in a weight ratio of 1:0.2 to 0.8.

그 다음, 상기 제3혼합물 100중량부에 대하여, 바이오셀룰로오스(Bio Cellulose) 1∼10중량부, 로즈마린산(Rosemarinic Acid) 1∼5중량부 및 하이드로라이즈드콜라겐 5∼10중량부를 혼합함으로써, 본 발명의 화장료 조성물을 제조한다.Next, with respect to 100 parts by weight of the third mixture, 1 to 10 parts by weight of Bio Cellulose, 1 to 5 parts by weight of Rosmarinic Acid, and 5 to 10 parts by weight of hydrolyzed collagen are mixed, thereby preparing the present invention. Produce a cosmetic composition.

[실시예 1] 인간 지방유래 줄기세포 유래 엑소좀 추출[Example 1] Exosome extraction derived from human adipose-derived stem cells

인체 지방유래 줄기세포를 계대(passage) 7까지 증식시키는 과정에서 엑소좀을 추출하였다. 즉, 증식하는 인체 지방유래 줄기세포로부터 엑소좀을 추출하였다.Exosomes were extracted during the process of proliferating human adipose-derived stem cells up to passage 7. That is, exosomes were extracted from proliferating human adipose-derived stem cells.

구체적으로, 인체 지방유래 줄기세포를(passage 3 ~ 7) 일반 배양배지(Dulbecco Modified Eagle Medium, DMEM containing 10% fetal bovine serum, 1% penicillin/streptomycin)에서 배양하였다. 그 다음, 엑소좀을 추출하기 24시간 전에 무혈청, 무항생제 배지이면서 페놀 레드(phenol red)가 없는 DMEM 배지로 교체하여 24시간 동안 유지하였다. 24시간 후, 세포 배양 상층액을 회수하였다. 회수한 세포배양 상층액은 300 xg에서 10분간 원심분리하여 세포를 제거하였으며, 그 후 2,000 xg에서 30분간 원심분리하여 세포 분비물을 제거해주었다. 이후, 분자량 3,000의 필터가 장착된 원심분리 튜브(molecular weight cut off=3,000, amicon tube)를 이용하여 5,000xg에서 60분간 원심분리를 하여 농축하였다. 농축 후 수득한 상층액은 엑소좀 분리 시약(exosome isolation reagent)과 1:0.5 비율로 혼합하고 4 ℃에서 하루 동안 보관하였다. 10,000 xg에서 60분간 원심분리를 통해 엑소좀 침전물을 얻은 후, 0.22 μm 필터(Exosome spin column)를 통해 여과하였고 인산완충식염수(Phosphate-buffered saline, PBS)로 세척하였다. 세척한 엑소좀 침전물은 10,000 xg에서 60분간 원심분리한 후 PBS에 재현탁하였다. 상층액을 회수한 이후 다시 일반 배양배지를 줄기세포에 첨가하여 배양하였으며, 이러한 과정은 줄기세포 계대 7까지 반복하였다. 이렇게 줄기세포를 계대 7까지 증식시키는 과정에서 추출한 엑소좀을 하기 실험에서 사용하였다. 인체 지방유래 줄기세포 엑소좀의 효능을 비교하기 위해 인체 피부각질세포 및 인체 피부섬유아세포로부터 상기 방법을 통해 동일하게 엑소좀을 추출하였다.Specifically, human adipose-derived stem cells (passages 3 to 7) were cultured in general culture medium (Dulbecco Modified Eagle Medium, DMEM containing 10% fetal bovine serum, 1% penicillin/streptomycin). Next, 24 hours before exosome extraction, the medium was replaced with DMEM, a serum-free, antibiotic-free medium without phenol red, and maintained for 24 hours. After 24 hours, the cell culture supernatant was recovered. The recovered cell culture supernatant was centrifuged at 300 xg for 10 minutes to remove cells, and then centrifuged at 2,000 xg for 30 minutes to remove cell secretions. Afterwards, it was concentrated by centrifugation at 5,000xg for 60 minutes using a centrifuge tube equipped with a filter with a molecular weight of 3,000 (molecular weight cut off=3,000, amicon tube). The supernatant obtained after concentration was mixed with exosome isolation reagent at a ratio of 1:0.5 and stored at 4°C for one day. Exosome sediment was obtained through centrifugation at 10,000 xg for 60 minutes, then filtered through a 0.22 μm filter (Exosome spin column) and washed with phosphate-buffered saline (PBS). The washed exosome sediment was centrifuged at 10,000 xg for 60 minutes and then resuspended in PBS. After collecting the supernatant, regular culture medium was added to the stem cells and cultured, and this process was repeated until stem cell passage 7. Exosomes extracted during the process of proliferating stem cells up to passage 7 were used in the following experiment. To compare the efficacy of human adipose-derived stem cell exosomes, exosomes were extracted from human skin keratinocytes and human skin fibroblasts using the same method as described above.

[실시예 2] 인체 지방유래 줄기세포로부터 추출된 엑소좀의 주름개선 효과[Example 2] Wrinkle improvement effect of exosomes extracted from human adipose-derived stem cells

인체 지방유래 줄기세포로부터 추출된 엑소좀이 인체 피부섬유아세포의 콜라겐 합성에 미치는 영향을 알아보기 위해, 증식하는 줄기세포 배양 배지로부터 추출된 엑소좀(Stem-EXO), 인체 피부각질세포로부터 추출된 엑소좀(K-EXO) 또는 인체 피부섬유아세포로부터 추출된 엑소좀(F-EXO)을 각각 포함하는 배지 조성물을 이용하였다. 상기 배지 조성물은 Stem-EXO은 10, 30, 50 μg/mL 농도로 DMEM 무혈청 배양 배지에 추가하여 사용하였고, K-EXO와 F-EXO는 50 μg/mL 농도를 DMEM 무혈청 배양 배지에 추가하여 사용하였으며, 음성대조군으로 DMEM 무혈청 배지를 사용하였다. 인간 피부섬유아세포는 48 well plate에 각각 5×10⁴ cell/well로 분주하고 배양배지(DMEM containing 10% fetal bovine serum, 1% penicillin/streptomycin)에서 72시간 동안 배양한 후, 인산완충식염수로 세포를 세척하고 엑소좀이 포함된 상기 배지 조성물을 각각의 세포에 처리하였다.To determine the effect of exosomes extracted from human adipose-derived stem cells on collagen synthesis in human skin fibroblasts, exosomes (Stem-EXO) extracted from proliferating stem cell culture medium and exosomes extracted from human skin keratinocytes were used. A medium composition containing exosomes (K-EXO) or exosomes extracted from human skin fibroblasts (F-EXO), respectively, was used. The above medium composition was used by adding Stem-EXO to DMEM serum-free culture medium at concentrations of 10, 30, and 50 μg/mL, and K-EXO and F-EXO were added to DMEM serum-free culture medium at a concentration of 50 μg/mL. was used, and DMEM serum-free medium was used as a negative control. Human skin fibroblasts were dispensed into ⁴⁸ well plates at 5 were washed and each cell was treated with the medium composition containing exosomes.

배양완료 후, 각 well의 배양액은 회수하여 25℃, 3000 rpm에서 10분 동안 원심분리하고, 이어서 상층액을 취해 수용성 콜라겐(soluble collagen)의 추출 및 정량에 사용하였다. 배양액이 제거된 플레이트의 각 well에 PBS를 넣고 세척한 후, 트립신(tyrpsin-EDTA) 처리를 통해 세포를 바닥으로부터 분리시키고 세포수를 측정하였다.After completion of incubation, the culture medium from each well was recovered and centrifuged at 25°C and 3000 rpm for 10 minutes, and then the supernatant was taken and used for extraction and quantification of soluble collagen. After adding PBS to each well of the plate from which the culture medium was removed and washing, cells were separated from the bottom through trypsin (tyrpsin-EDTA) treatment, and the number of cells was measured.

수용성 콜라겐의 정량을 위해 Sircol collagen assay 키트(Biocolor, UK)를 사용하였다. 상기 획득된 상층액은 polyethylene glycol이 혼합된 Tris-HCl(pH 7.6) 버퍼를 처리하여 4 ℃에서 12시간 이상 유지시켰으며, 이후 12,000rpm에서 10분간 원심분리하여 콜라겐을 농축시켰다. 상층액을 제거한 후, 제공된 콜라겐 흡착 염료(sircol dye reagent)를 콜라겐 펠렛에 1 mL 추가하고 30분 동안 진탕 배양하였다. 12,000rpm에서 10분간 원심 분리하여 흡착되지 않은 염료를 제거하고 펠렛을 acid-salt 버퍼로 세척한 후, alkali reagent를 처리하여 콜라겐에 흡착된 염료를 녹여내고 555 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준곡선의 수식에 흡광도를 대입하여 Stem-EXO, K-EXO, F-EXO 및 음성 대조물질을 첨가한 웰의 수용성 콜라겐의 양을 계산하였다. 보정된 콜라겐의 양을 계산식에 대입하여 합성율을 계산하였다.To quantify water-soluble collagen, the Sircol collagen assay kit (Biocolor, UK) was used. The obtained supernatant was treated with Tris-HCl (pH 7.6) buffer mixed with polyethylene glycol and maintained at 4°C for more than 12 hours, and then centrifuged at 12,000 rpm for 10 minutes to concentrate collagen. After removing the supernatant, 1 mL of the provided collagen adsorption dye (sircol dye reagent) was added to the collagen pellet and incubated with shaking for 30 minutes. Unadsorbed dye was removed by centrifugation at 12,000 rpm for 10 minutes, the pellet was washed with acid-salt buffer, and then treated with alkali reagent to dissolve the dye adsorbed on collagen, and the absorbance was measured at a wavelength of 555 nm. By substituting the absorbance into the equation of the standard curve, the amount of soluble collagen in the wells containing Stem-EXO, K-EXO, F-EXO, and negative control was calculated. The synthesis rate was calculated by substituting the corrected amount of collagen into the calculation formula.

그 결과, Stem-EXO 투여군의 수용성 콜라겐 합성율은 음성 대조군(0.138 ㎍)과 비교했을 때 엑소좀 처리 농도에 의존하여 증가하였으며, 특히 50㎍/mL의 Stem-EXO 투여군의 경우 콜라겐 합성량이 2.59㎍으로, 동일양의 K-EXO(1.4 ㎍)나 F-EXO(0.8 ㎍)에 비해 유의하게 증가 되었다.As a result, the rate of soluble collagen synthesis in the Stem-EXO administered group increased depending on the exosome treatment concentration compared to the negative control group (0.138 ㎍). In particular, in the case of the 50 ㎍/mL Stem-EXO administered group, the collagen synthesis rate was 2.59 ㎍. , was significantly increased compared to the same amount of K-EXO (1.4 ㎍) or F-EXO (0.8 ㎍).

따라서, 인체 지방유래 줄기세포로부터 추출된 엑소좀은 피부 섬유아세포의 콜라겐합성을 촉진시키는 효과가 있는 것으로 판단된다Therefore, exosomes extracted from human adipose-derived stem cells are believed to be effective in promoting collagen synthesis in skin fibroblasts.

[시험예 1] 주름 개선 효과 평가[Test Example 1] Evaluation of wrinkle improvement effect

시험예 1에서는 본 발명의 화장료 조성물을 함유한 화장품을 제조하여 사람을 대상으로 피부 주름 개선 효과 및 피부 미용 효과를 평가하였다. 이를 위하여 본 발명에 의한 화장료 조성물을 크림의 총 중량의 10.0 중량% 첨가하여 크림 형태의 화장품을 제조하였으며, 본 발명의 화장료 조성물을 첨가하지 않은 시중에서 판매되고 있는 크림을 비교예 1로서 대비하였다.In Test Example 1, cosmetics containing the cosmetic composition of the present invention were prepared and the skin wrinkle improvement effect and skin beautification effect were evaluated on humans. For this purpose, a cream-shaped cosmetic was prepared by adding 10.0% by weight of the total weight of the cream to the cosmetic composition according to the present invention, and a commercially available cream without adding the cosmetic composition of the present invention was prepared as Comparative Example 1.

실시예 및 비교예 1에서 제조된 크림을 실험자(20세-35세의 여성) 30명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.The cream prepared in Example and Comparative Example 1 was applied to 30 testers (women aged 20 to 35). The cream prepared in Example 1 was applied to the right side of the face, and the cream prepared in Comparative Example 1 was applied to the left side of the face. It was applied twice a day for 2 consecutive months.

실험완료 후 피부 잔주름 완화효과는 제품 사용전과 2개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물(레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 장치와 피부 영상 분석기로 눈가 잔주름의 상태를 비교하였다.After completing the experiment, the effect of relieving skin fine wrinkles was determined by collecting wrinkles around the corners of the eyes with a silicone resin copy (replica) before using the product and after using the product for 2 months, and comparing the condition of fine wrinkles around the eyes with a skin fine wrinkle device and a skin image analyzer.

아래 [표 1]은 실시예에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 눈가 평균 잔주름 깊이 및 주름 감소율을 비교예 1의 크림을 사용한 실험자와 비교한 것이다. 하기 [표 3]에서 나타난 바와 같이, 본 발명의 복합 조성물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 눈주위 피부에서 피부 주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있었다.[Table 1] below compares the average depth of fine wrinkles around the eyes and the wrinkle reduction rate of the experimenter who used the cream prepared in Example 1 with that of the experimenter who used the cream of Comparative Example 1. As shown in [Table 3] below, it was found that the effect of improving skin wrinkles was excellent on the skin around the eyes of the experimenter who applied the cream containing the composite composition of the present invention.

[시험예 2] 탄력, 주름 개선 및 미백 효과 평가[Test Example 2] Evaluation of elasticity, wrinkle improvement and whitening effects

시험예 2에서는 본 발명의 화장료 조성물을 함유한 화장품을 제조하여 사람을 대상으로 피부 탄력, 주름 개선 및 미백 효과를 평가하였다. 이를 위하여 본 발명에 의한 화장료 조성물을 크림의 총 중량의 10.0 중량% 첨가하여 크림 형태의 화장품을 제조하였으며, 본 발명의 화장료 조성물을 첨가하지 않은 시중에서 판매되고 있는 크림을 대조구로서 대비하였다.In Test Example 2, cosmetics containing the cosmetic composition of the present invention were prepared and skin elasticity, wrinkle improvement, and whitening effects were evaluated on humans. For this purpose, a cream-type cosmetic was prepared by adding 10.0% by weight of the total weight of the cream to the cosmetic composition according to the present invention, and a commercially available cream without adding the cosmetic composition of the present invention was used as a control.

본 발명의 화장료 조성물을 함유한 크림 제형을 30인의 성인 남녀의 피부에 1개월 동안 3회/일 간격으로 도포하게 한 후 각 평가 항목에 따른 피부 변화 양상을 평가하였으며, 평가는 5점 척도법에 따라 수행하고 그 결과를 아래 표 2에 나타내었다.A cream formulation containing the cosmetic composition of the present invention was applied to the skin of 30 adult men and women at intervals of 3 times per day for 1 month, and then the skin change pattern according to each evaluation item was evaluated, and the evaluation was performed according to a 5-point scale. It was performed and the results are shown in Table 2 below.

이상과 같은 결과로부터, 본 발명에 의한 피부 재생과 피부 보습 및 주름 개선용 화장료 조성물은 MMP-1의 발현을 억제시킴으로써 주름 형성을 방지하고 주름을 개선하여 결과적으로 안티에이징, 노화를 예방할 수 있음을 확인하였다.From the above results, it can be seen that the cosmetic composition for skin regeneration, skin moisturizing and wrinkle improvement according to the present invention can prevent wrinkle formation and improve wrinkles by suppressing the expression of MMP-1, resulting in anti-aging and prevention of aging. Confirmed.

화장료 조성물의 제품예Product examples of cosmetic compositions

도 3 내지 도 8은 본 발명에 의한 화장료 조성물을 이용한 제품 사진으로, 도 3 및 도 4는 보툴리눔 유래성분 함유된 고농축 기능성 앰플의 제품 사진이고, 도 4는 보툴리눔 유래성분 함유된 고농축 기능성 마스크팩의 제품 사진이고, 도 6 내지 도 8은 본 발명의 화장료 조성물로 제조된 크림의 제품 사진이다.Figures 3 to 8 are product photos using the cosmetic composition according to the present invention, Figures 3 and 4 are product photos of a highly concentrated functional ampoule containing botulinum-derived ingredients, and Figure 4 is a highly concentrated functional mask pack containing botulinum-derived ingredients. This is a product photo, and Figures 6 to 8 are product photos of a cream made with the cosmetic composition of the present invention.

이상에서 설명한 본 발명의 바람직한 실시 예들은 기술적 과제를 해결하기 위해 개시된 것으로, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자(당업자)라면 본 발명의 사상과 범위 안에서 다양한 수정, 변경, 부가 등이 가능할 것이며, 이러한 수정 변경 등은 이하의 청구범위에 속하는 것으로 보아야 할 것이다.The preferred embodiments of the present invention described above have been disclosed to solve technical problems, and those skilled in the art can make various modifications, changes, additions, etc. within the spirit and scope of the present invention. This will be possible, and such modifications and changes should be considered as falling within the scope of the claims below.

Claims

In the cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing botulinum toxin conjugate and stem cell exosome complex as active ingredients,
Botulinum toxin conjugate 0.01-0.05% by weight, stem cell exosome complex 5-10% by weight, choline alfoscerate 1-5% by weight, glycosaminoglycan 5-10% by weight, hyaluronic acid 5-10% by weight, adenosine A first mixture comprising an aqueous ethanol solution having 5 to 10% by weight, 5 to 10 parts by weight of niacinamide, 5 to 10% by weight of palmitoyl oligopeptide, and the remaining weight percentage of the total weight;
Manufactured with a weight ratio of 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, 20% by weight of sycamore extract, and 20% by weight of camellia oil. second mixture; and
It includes a third mixture prepared from the first mixture and the second mixture at a weight ratio of 1:0.2 to 0.8,
A cosmetic composition comprising 1 to 10 parts by weight of bio cellulose, 1 to 5 parts by weight of rosemarinic acid, and 5 to 10 parts by weight of hydrolyzed collagen, based on 100 parts by weight of the third mixture.

In claim 1,
The botulinum toxin conjugate is,
A botulinum toxin selected from the group consisting of serotypes A, B, C, D, E, F and G; and
A peptide capable of mediating the transport of an active molecule into a cell, wherein the peptide includes a cell-penetrating peptide consisting of an amino acid sequence,
A cosmetic composition in which the cell-penetrating peptide is bound to the carboxy terminus, amino terminus, or both contained in the light chain portion of the botulinum toxin.

In claim 1,
The stem cell exosome complex,
A cosmetic composition containing stem cell-derived exosomes and polydeoxyribonucleotide as active ingredients.

In the manufacturing method of a cosmetic composition for skin regeneration and wrinkle improvement containing a botulinum toxin conjugate and a stem cell exosome complex as active ingredients,
Botulinum toxin complex 0.01-0.05% by weight, stem cell exosome complex 5-10% by weight, choline alfoscerate 1-5% by weight, glycosaminoglycan 5-10% by weight, hyaluronic acid 5-10 Preparing a first mixture comprising an aqueous ethanol solution having % by weight, 5 to 10 parts by weight of adenosine, 5 to 10 parts by weight of niacinamide, 5 to 10 parts by weight of palmitoyl oligopeptide, and the remaining weight percentage of the total weight;
The second weight ratio is 10% by weight of wild ginseng extract, 10% by weight of Sanghwang mushrooms, 10% by weight of white wood ear mushrooms, 10% by weight of borage oil, 20% by weight of portulaca quince, 20% by weight of sycamore extract, and 20% by weight of camellia oil. preparing a mixture;
Preparing a third mixture of the first mixture and the second mixture at a weight ratio of 1:0.2 to 0.8; and
Preparing by mixing 1 to 10 parts by weight of bio cellulose, 1 to 5 parts by weight of rosemarinic acid, and 5 to 10 parts by weight of hydrolyzed collagen with respect to 100 parts by weight of the third mixture;
A method for producing a cosmetic composition comprising.