KR102610498B1 - 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물 - Google Patents
섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 섬괴불나무 추출물은 DPPH 라디칼을 저해하고, PF (Anti-oxidant protection factor)를 증가시킴으로써 항산화 효과를 가지며, XOase, ACE, α-글루코시다아제 활성을 저해함으로써 대사성 질환 예방효과를 나타내고, Helicobacter pylori 및 Propionibacterium acne에 대하여 항균 활성을 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 섬괴불나무 추출물은 항산화 또는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 항균 조성물 등으로 유용하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
최근 경제발전과 식습관의 변화에 따라 비만, 고지혈증, 고혈압, 동맥경화, 고인슐린혈증, 당뇨병 또는 통풍 등 다양한 질환을 포함하는 대사성 질환의 발병이 급증하고 있다. 이와 같은 질환들은 각각 발생하기도 하지만 일반적으로 서로 밀접한 관련을 맺고 있으며 여러 증상들을 동반하여 발생되는 경우가 대부분이다.
한편, 체내에서 일어나는 산화 반응은 노화와 세포의 변이를 유발하여 암세포를 생성할 수 있으며, 이러한 산화 반응에 따른 산화스트레스는 근육과 지방에서 당의 섭취를 방해하고, 췌장 베타세포에서 인슐린 분비를 감소시키는 등 대사성 질환에도 영향을 주는 것으로 보고되고 있다.
따라서, 체내에서 일어나는 산화반응을 억제시키거나 그 속도를 느리게 하는 항산화 작용은 이런 체내의 부정적인 반응을 억제하기 위한 예방 방편으로 볼 수 있으며, 항산화제(anti-oxidant)로 부틸레이트하이드록시아니솔 (butylatedhydrox yanisole; BHA), 부틸레이트하이드록시톨루엔(butylated hydroxytoluene; BHT)과 같은 합성물질들이 개발되어 있다.
그러나, 이러한 항산화제는 인체에 대한 여러가지 부작용을 야기할 수 있어 우수한 항산화 효과와 더불어 부작용을 최소화할 수 있는 식물 유래의 천연 화합물 항산화제의 개발이 요구되고 있으며, 급증하는 대사성 질환을 예방하기 위해 생체활성을 지닌 새로운 천연물 소재의 개발 또한 요구되고 있다.
또한, 병원성 미생물은 식품 산업에서의 식품 유통 과정 중의 부패로 인한 손실, 농산업에서의 농작물에 대한 과량의 화학 살충제의 사용으로 인한 인체의 유해성 및 환경오염, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성 균주의 출현 등 사회 전반에 직접 혹은 간접적으로 많은 문제를 야기시키고 있다. 현재 사용되고 있는 대부분의 항생제는 화학적인 합성을 통해 제조된 것으로 고비용이 소요되며 부작용을 유발하는 등의 많은 한계를 가지고 있다. 따라서, 최근에는 천연물로부터 새로운 항균 물질을 분리하고자 하는 연구가 활발하게 진행되고 있다.
한편, 생리활성 효과를 지닌 물질은 동식물에 널리 분포하고 있으며, 식물체는 자외선에 의한 산화나 자동산화, 곤충들로 인한 피해로부터 자신을 보호하기 위하여 폴리페놀류의 항산화 물질을 세포 내 함유하며, 플라보노이드(flavonoid)류와 산성의 페놀 화합물은 항산화, 항알러지, 항당뇨, 항암, 항염증, 항균, 미백, 주름개선 등 다양한 생리활성을 지닌 것으로 알려져 있다. 최근에는 효능이 검증된 약용식물자원 유래의 생리활성과 우수한 기능성 물질에 대한 기능성 식품 및 기능성 화장품 분야에서 많은 연구와 개발이 이루어지고 있으며, 약용식물이나 산채류, 한약재, 과실류 등 약용부위의 물질을 탐색하여 건강기능성 식품이나 식품부재료로 개발하는 것은 천연자원의 효율적인 측면과 새로운 식품자원 개발, 신소재 개발에 기여할수 있다는 측면에서도 매우 의미 있는 일이라 할 수 있다.
섬괴불나무(Lonicera morrowii A.Gray)는 인동과 인동속에 속하는 낙엽활엽 관목으로 울릉도와 독도의 바닷가에 분포하는 한국특산식물이다. 섬괴불나무의 꽃, 잎, 줄기는 민간에서 열내림약, 종창과 종독, 곪는 질병 및 암 치료 등에 사용되고 있으나, 현재 섬괴불나무에 대한 연구는 화학성분에 관한 연구, 분자생물지리에 대한 연구에 국한되어 있고, 기능성 식품으로써의 그 기능과 효능에 대한 연구는 거의 없는 실정이다.
본 발명자들은 한국특산식물인 섬괴불나무가 항산화, 항균 및 대사성 질환 개선효과가 뛰어남을 확인하였다.
이에, 본 발명의 목적은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물의 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물의 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약제 제조를 위한 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일구현예로, 상기 대사성 질환은 통풍, 고혈압, 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 지방간, 뇌졸중, 동맥경화 및 심장병으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 추출물은 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl; DPPH) 라디칼을 저해하거나 항산화물질 보호 인자(Antioxidant protection factor; PF)를 증가시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 추출물은 크잔틴 산화효소(xanthine oxidase; XOase)를 저해할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 추출물은 추출물은 안지오텐신변환효소(Angiotensin converting enzyme; ACE)를 저해할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 추출물은 α-글루코시다아제(α-Glucosidase)를 저해할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출될 수 있다.
또한, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 추출물은 Helicobacter pylori 및 Propionibacterium acne로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 균주에 대해 항균 활성을 가질 수 있다.
또한, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일구현예로, 상기 감염성 질환은 Helicobacter pylori 또는 Propionibacterium acne 균주에 의한 질환일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 감염성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물의 감염성 질환의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물의 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약제 제조를 위한 용도를 제공한다.
본 발명의 섬괴불나무 추출물은 DPPH 라디칼을 저해하고 PF(Antioxidant protection factor)를 증가시킴으로써 항산화 효과를 가지며, XOase 또는 α-glucosidase 효소의 활성을 저해하거나 ACE를 저해함으로써 대사성 질환인 통풍, 고혈압, 또는 2형 당뇨병을 억제하는 효과가 있다. 뿐만 아니라, 섬괴불나무 추출물은 Helicobacter pylori 및 Propionibacterium acne에 대하여 항균 활성을 가진다.
따라서, 본 발명에 따른 섬괴불나무 추출물은 항산화용, 대사성, 또는 감염성 질환의 예방, 치료 또는 개선용 약학적 조성물, 식품 조성물 또는 항균용 조성물 등으로 유용하게 이용할 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일구현예에 따른 섬괴불나무의 용매 종류별 추출물에서 페놀 함량을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일구현예에 따른 섬괴불나무의 에탄올 농도별 추출물에서 페놀 함량을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일구현예에 따른 알로푸리놀(allopurinol)과 섬괴불나무의 열수 및 에탄올 추출물의 페놀 농도별 xanthine oxidase(XOase) 저해 효과를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 일구현예에 따른 캡토프릴(captoril)과 섬괴불나무의 열수 및 에탄올 추출물의 페놀 농도별 ACE 저해 효과를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일구현예에 따른 아카보즈(acarbose)와 섬괴불나무 잎의 열수 및 에탄올 추출물의 페놀 농도별 α-glucosidase 저해 효과를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일구현예에 따른 섬괴불나무의 에탄올 농도별 추출물에서 페놀 함량을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일구현예에 따른 알로푸리놀(allopurinol)과 섬괴불나무의 열수 및 에탄올 추출물의 페놀 농도별 xanthine oxidase(XOase) 저해 효과를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 일구현예에 따른 캡토프릴(captoril)과 섬괴불나무의 열수 및 에탄올 추출물의 페놀 농도별 ACE 저해 효과를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일구현예에 따른 아카보즈(acarbose)와 섬괴불나무 잎의 열수 및 에탄올 추출물의 페놀 농도별 α-glucosidase 저해 효과를 나타낸 도면이다.
본 발명자들은 새로운 기능성 식품 개발을 위한 생리활성 자원의 발굴하고자 연구 노력한 결과, 섬괴불나무 추출물의 항산화 효과, 대사성 질환 예방 또는 치료 효과, 항균 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 “섬괴불나무(Lonicera morrowii A.Gray)”는, 인동과 인동속에 속하는 낙엽활엽 관목으로 울릉도와 독도의 바닷가 양지에 분포하는 한국특산식물이다. 꽃은 5-6월에 피고 백색에서 황색으로 변하며 꽃줄기에는 털이 있다. 잎은 마주 달리고 난형, 도란형, 타원형 또는 타원상 도란형이며, 끝은 뾰족하거나 둔하고 넓은 원저 예저 또는 아심저로 뒷면에 털이 밀생하고 주로 약용으로 쓰인다. 열매는 장과로 둥글며 7-8월에 붉게 익는다.
본 발명에서 “섬괴불나무 추출물”은 식물체 전체 또는 식물의 일부로부터 수득될 수 있으며, 예를 들어 줄기, 뿌리, 잎, 열매, 및 꽃으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 부위로부터 수득될 수 있다.
상기 “섬괴불나무 추출물”은 섬괴불나무 잎에 추출용매를 처리하여 얻은 추출 결과물을 의미하며, 상기 추출 결과물의 희석액이나 농축액, 상기 추출 결과물을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출 결과물의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출 결과물 자체 및 추출 결과물을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명의 상기 섬괴불나무 추출물에 있어서, 상기 섬괴불나무를 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 섬괴불나무를 추출하는 데에 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 본 발명에서 섬괴불나무 추출물은 물, 탄소 수 1 내지 4의 저급 알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 에탄올, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출할 수 있다.
또한, 상기 섬괴불나무를 추출하는데 사용되는 에탄올 용매의 농도는 1 내지 100 %, 10 내지 90 %, 10 내지 80 %, 10 내지 70 %, 10 내지 60 %, 20 내지 60 %, 20 내지 50 %, 21 내지 50 %, 22 내지 50 %, 23 내지 50 %, 24 내지 50 %, 25 내지 50 %, 26 내지 50 %, 27 내지 50 %, 28 내지 50 %, 29 내지 50 %, 30 내지 50 %, 31 내지 50 %, 25 내지 49 %, 25 내지 48 %, 25 내지 47 %, 25 내지 46 %, 26 내지 46 %, 27 내지 46 %, 28 내지 46 %, 29 내지 46 %, 30 내지 46 %, 31 내지 46 %, 32 내지 46 %, 33 내지 46 %, 34 내지 46 %, 35 내지 46 %, 35 내지 45 %, 36 내지 45 %, 37 내지 45 %, 38 내지 45 %, 38 내지 44 %, 38 내지 43 %, 38 내지 42 %, 39 내지 42 %, 39 내지 41 %, 39 내지 40 %, 40 내지 41 %, 또는 약 40 %일 수 있다.
상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 “항산화”는, 산화를 억제하는 모든 작용을 포함하는 것을 의미하며, 구체적으로 활성 산소종 등의 자유 라디칼을 제거하는 작용을 의미할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 구체적으로, 본 발명의 항산화는 DPPH 라디칼을 저해하거나 항산화물질 보호 인자(Antioxidant protection factor; PF)를 증가시키는 것을 통해 달성될 수 있다.
본 발명에서 “대사성 질환(metabolic disease)”은, 지질 또는 당 대사 이상으로 인한 질환을 총칭하며, 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 통풍, 고혈압, 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 지방간, 뇌졸중, 동맥경화, 심장병 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에서 “통풍”은, 여러가지 원인에 의해 체내 요산(uric acid) 농도가 증가하고, 그로 인해서 과잉 축적된 요산이 결정화되면서 뾰족한 모양으로 형성되어 관절과 관절 주위 조직에 축척되면서 재발성 발작성 염증을 일으키는 질환이다. 통풍은 고요산혈증과 관련이 되어있으며, 혈중 요산염(urate)이 6.8 mg/dL(404 μmol/L) 이상일 때를 말한다. 요산은 체내의 퓨린(purine) 대사의 최종산물이며, 체내 대사과정 중 hypoxanthine과 xanthine이 XOase의 작용에 의해서 통풍을 유발시킬 수 있는 요산을 생성하므로 XOase는 통풍 발생에 결정적 역할을 수행하는 효소로 알려져 있다.
본 발명에서 “고혈압”은, 정상 혈압보다 높게 즉, 수축시 혈압이 140 mmHg 이상, 확장기 혈압이 90 mmHg 이상 지속적으로 유지되는 대사성 질환으로, 전세계적으로 총 인구의 15 %, 특히 63세 이상의 고령 인구의 50 %에서 발생하는 매우 중요한 대사성 질환이다. 인체 내 ACE(Angiotensin converting enzyme)는 불활성인 안지오텐신 I의 C-말단 디펩타이드(His-Leu)를 가수분해하여, 혈관벽 평활근 수축 등의 작용을 가지는 안지오텐신 II로 전환시켜 고혈압을 일으킨다.
본 발명에서 “당뇨병”은, 고혈당을 특징으로 하는 일련의 대사 질환군으로 크게 두가지 유형으로 구분된다. 1형 당뇨병은 혈액 내의 포도당 조절 호르몬인 인슐린의 분비 결핍으로 야기되는 것으로 주로 10 내지 20대의 젊은 연령층에서 발병되며, 2형 당뇨병은 주로 40대 이후에 발병되는 것으로 대한민국 당뇨병 환자의 대부분을 차지한다. 2형 당뇨병의 병인으로 췌장 베타세포에서 인슐린 분비의 장애와 표적세포에서 인슐린 작용의 결함이 모두 관찰된다. 소장 융모막에 존재하는 α-glucosidase는 이당류나 다당류들을 보다 작은 단당류로 분해하여 당의 흡수를 촉진시켜 혈당 상승작용을 일으키므로 α-glucosidase의 활성이 높은 경우에 혈당이 급격히 증가하여 2형 당뇨병 환자들에게 심각한 영향을 미칠 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 섬괴불나무 추출물이 항산화제인 대조군보다 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl; DPPH) 라디칼 저해 효과가 우수하며, 항산화물질 보호 인자(Antioxidant protection factor; PF)를 증가시킨다는 것을 확인함으로써 항산화 효과를 확인하였다(실시예 2 참조).
본 발명의 다른 실시예에서는 섬괴불나무 추출물이 통풍의 원인이 되는 XOase 저해 효과가 우수하고, 고혈압의 원인이 되는 ACE 저해 효과가 우수하며, 당뇨병 특히, 2형 당뇨병의 원인이 되는 α-glucosidase의 저해 효과가 우수한 것을 확인함으로써 대사성 질환의 예방 또는 치료 효과를 확인하였다(실시예 3 참조).
본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.
본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 “약학적 조성물”은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는 에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아검(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9 % 염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO3) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na2S2O5), 아황산나트륨(Na2SO3), 질소가스(N2), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1 %, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, tween 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 또는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
이 때, 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 섬괴불나무 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 섬괴불나무 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 섬괴불나무 추출물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20 g, 또는 약 0.04-0.10 g이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에서는 섬괴불나무 추출물이 위십이장 질환의 원인 균인 Helicobacter pylori 및 여드름 원인 균인 Propionibacterium acne에 대해 항균 활성을 가지는 것을 확인하였다(실시예 4 참조).
본 발명에서 “항균용 조성물”이란 항미생물제를 총칭하는 의미인 항생제와 같은 의미일 수 있고, 항진균제, 살균제, 방부제, 보존제 또는 제균제와 같은 의미일 수 있으며, 바람직하게는 위십이지장 질환의 원인이 되는 Helicobacter pylori 및 피부 질환의 원인이 되는 Propionibacterium acne의 발육과 생활기능을 저지 또는 억제할 수 있는 물질을 의미한다.
상기 항균용 조성물에 포함된 섬괴불나무 추출물의 함량은 항균용 조성물의 사용방법 및 사용 목적에 따라 적절히 조절될 수 있으며, 섬괴물나무 추출물 외에 당질, 단백질, 비타민류 및 미네랄류를 포함할 수 있다. 상기 당질, 단백질, 지질, 비타민류 또는 미네랄류는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적절히 선택될 수 있으며, 일예로 상기 당질은 벌꿀, 덱스트린, 수크로오스, 팔라티노스, 포도당, 과당, 물엿, 당알콜(sugar alcohol), 소르비톨, 크실리톨, 말티톨일 수 있고 상기 단백질은 카제인(casein), 유청 단백질(whey protein)등의 우유 유래 단백질, 대두 단백질, 이들 단백질의 트립신, 펩신 등의 동물 유래 효소 및 뉴트라아제(neutrase), 알칼라아제(alkilase)에 의한 가수분해물일 수 있으며, 상기 지질은 제1가 포화지방산, 다가 불포화지방산을 포함하는 해바라기유, 채종유(rapeseed oil), 올리브유, 홍화유(safflower oil), 옥수수유, 대두유, 팜유(palm oil), 야자유 등의 각종 식물 유래 유지, 중쇄 지방산(middle-chain fatty acid), EPA, DHA, 대두유래 인지질, 우유 유래 인지질일 수 있고, 상기 미네랄류는 인산칼륨, 탄산칼륨, 염화칼륨, 염화나트륨, 유산칼슘, 글루콘산칼슘, 판토텐산칼슘, 카제인칼슘, 염화마그네슘, 황산제1철, 탄산수소나트륨일 수 있으나, 각각의 예에 의해 특별히 제한되는 것은 아니다.
상기 당질, 단백질, 지질, 비타민류 및 미네랄류 중 어느 것에 대해서도, 조성물의 항균성이 유지되는 한 상기 구체예에 한정되지 않고 다른 성분을 포함할 수 있으며, 각각의 함량은 항균성이 유지되는 한 제한되지 않는다.
또한, 상기 항균용 조성물은 본 발명의 효과를 유지하고, 상기 첨가되는 성분에 의한 부작용을 발생시키지 아니하는 범위에서, 상기 유효성분 외에 Helicobacter pylori 및 Propionibacterium acne의 살균 목적을 위한 첨가제, 바람직하게는 Helicobacter pylori 및 Propionibacterium acne에 대한 살균 활성이 인정된 물질을 추가로 포함할 수 있으며, 상기 추가 성분 또는 첨가제는 조성물의 다른 구성으로 방해될 수 없게 제공될 수 있다.
본 발명의 상기 항균용 조성물은 항균 활성이 요구되는 다양한 목적 및 용도로 사용될 수 있고, 구체적으로는 Helicobacter pylori 또는 Propionibacterium acne의 생육억제를 위한 용도로 사용될 수 있으며, 바람직하게는 Helicobacter pylori 및 Propionibacterium acne에 대한 항생제 또는 Helicobacter pylori가 원인 균인 위십이지장 질환 또는 Propionibacterium acne 가 원인 균인 피부 질환의 치료, 예방 또는 개선의 목적으로 사용될 수 있다.
본 발명에서 “위십이지장 질환”이란 위 또는 십이지장 부위에 발생하는 질환을 의미하고 소화성 궤양과 위암을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 위염, 십이지장염, 위궤양, 십이지장궤양 및 위암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. Helicobacter pylori는 상기 위십이지장 질환의 주 원인균으로 보고 되어 있다.
본 발명에서 “피부 질환”이란 Propionibacterium acne가 분비하는 리파아제가 피지 중 중성지방을 분해하여 유리 지방산을 형성시켜 모낭벽을 직접 자극하고 진피 내로 들어가 염증을 일으켜 발생하는 것으로, 면포, 구진 및 결절 형성을 특징으로 하는 모낭 피지 선의 만성 염증성 질환인 여드름을 의미한다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명의 섬괴불나무 추출물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 섬괴불나무 추출물 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물은 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제, 패치, 손소독제, 또는 필터 충진제일 수 있으나, 이제 제한되지 않는다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 섬괴불나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
보다 구체적으로, 본 발명의 감염성 질환은 Helicobacter pylori 또는 Propionibacterium acne에 의한 감염성 질환일 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실험예]
실험예 1. 재료 준비
1-1. 섬괴불나무 시료 제조
울릉도에서 자생하는 섬괴불나무의 잎을 채취하여 동정하였으며, 잎을 제외한 이물질을 제거한 후, 45 ℃ 드라이 오븐에서 건조하였다. 건조한 시료는 분쇄기를 이용하여 40 mesh로 분쇄하여 사용하였다.
1-2. 섬괴불나무 잎으로부터 페놀성 추출물 제조
기능성 의약품, 식품 활성 분석을 위한 추출물의 제조는 열수 추출물의 경우 섬괴불나무 시료 1 g에 증류수 200 mL를 넣고 가열하여 액이 100 mL이 되었을 때 냉각하였으며, 용매 추출물의 경우 섬괴불나무 시료 1 g에 10-100 % 에탄올, 메탄올, 아세톤, 부탄올 용액을 각각 100 mL씩 가하여 호모게나이저(homogeniger)로 20,000 rpm에서 1분간 균질화하였다. 추출물 모두 12시간 이상 교반 추출하고 추출액은 whatman No.1 filter paper로 여과한 후 필요에 따라 회전식 진공 증발기(rotary vacuum evaporater) (Eyela NE, Tokyo, Japan)로 농축하여 실험에 사용하였다.
실험예 2. 실험 방법
2-1. 총 페놀 화합물(Total phenolic compounds; TPC) 함량 정량
TPC 함량 정량은 Folin과 Denis의 방법(Folin O, Denis W (1912) On phoshotungstic-phosphomolybdic compounds as color reagents. J Biol Chem, 12, 239-243)에 준하여 상기 실시예 1-2에서 제조한 섬괴불나무 추출물 1 mL, 동량의 95 % 에탄올 1 mL와 5 mL의 증류수를 첨가한 후 2 N 농도의 Folin-ciocalteu reagent를 1 N 농도로 희석하여 0.5 mL를 첨가하였다. 발색시약인 Na2CO3 1 mL를 가하여 암실에서 725 nm의 흡광도를 측정하여 갈산(gallic acid)를 이용한 표준곡선으로로부터 양을 환산하였다.
2-2. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 저해 효과 측정
DPPH 라디칼 저해 효과는 Blois 방법(Blois MS (1958) Antioxidant determination by the use of stable free radical. Nature, 181, 1199-1200)에 준하여 상기 실시예 1-2에서 제조한 섬괴불나무 추출물 시료 1 mL에 60 μM DPPH 3 mL를 넣고 혼합한 후 실온에서 15분 동안 시약 반응시킨 뒤 517 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.
2-3. Anti-oxidant protection factor (PF) 저해 효과 측정
PF 측정은 Jo와 Cho의 방법(Jo BS, Cho YJ (2012) Biological activity of extracts from acanthopanax sessiliflorum fruit. korean J food Preserv 19: 586593)에 준하여 증발기용 수기에 β카로틴과 클로로포름(chloroform)을 각각 1 mg당 5 mL 비율로 제조하여 1 mL를 넣고 40-50 ℃ 워터 베스(water bath)를 통해 용액을 증류시킨 다음, 각각의 리놀레산(linoleic acid)과 tween 40을 20, 184 μL씩 분주하여 β카로틴을 재용해한 후, 50 mL의 H2O2를 가하여 에멀젼(Emulsion) 용액을 제조하고, 상기 실시예 1-2에서 제조한 섬괴불나무 추출물 100 μL와 에멀젼(Emulsion) 용액 5 mL을 혼합하여 볼텍싱(vortexing)한 후 50 ℃ 워터 베스(water bath)에서 30분간 반응시켜 470 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다.
2-4. Xanthine oxidase (XOase) 저해 효과 측정
Xanthine oxidase (XOase) 저해 효과는 Stirpe와 Della-Corte의 방법(Stirpe F, Della-Corte E (1969) The regulation of rat liver xanthine oxidase. J Biol Chem 244: 38553863)에 준하여 측정하였다. 샘플군은 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.5)에 녹인 기질액 2 mM xanthine 3 mL를 넣고 XOase (0.05 U/0.1 mL) 0.1 mL와 상기 실시예 1-2에서 제조한 섬괴불나무 추출물 0.3 mL를 넣었으며, 대조군은 추출물 대신 증류수를 0.3 mL 첨가하여 37 ℃에서 5분간 시약 반응시킨 후 종료시약인 20% trichloroacetic acid를 1 mL 가한 후 원심분리하여 단백질을 제거하고 생성된 요산(uric acid)을 흡광도 292 nm에서 측정하였다.
2-5. ACE(Angiotensin converting enzyme) 저해 효과 측정
ACE 저해 효과는 Cushman과 Cheung의 방법(Cushman DW, Cheung HS (1971) Spectrophotometric assay and properties of the angiotensin-converting enzyme of rabbit lung. Biochemical pharmacol 20: 16371648)에 준하여 측정하였다. 샘플군은 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 8.3)에 0.3 M NaCl를 첨가하여 제조한 용액에 2.5 mM hippuryl-L-histidyl-L-leucine (HHL, Sigma-Aldrich Co, Louis, MO, USA)를 녹인 기질용액 0.15mL와 ACE (0.25 unit/mL, Sigma-Aldrich Co.) 0.1 mL, 상기 실시예 1-2에서 제조한 섬괴불나무 추출물 0.1 mL를 혼합하였으며, 대조군은 추출물 대신 증류수 0.1 mL를 첨가하여 37 ℃에서 30분간 시약 반응시킨 후 1 N HCl 0.25 mL를 첨가하여 시약 반응을 정지시킨 뒤 3 mL의 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 에틸 아세테이트 층으로부터 용매를 증류시킨 잔사에 2 mL의 증류수를 첨가하여 추출된 히푸르산(hippuric acid)을 흡광도 280 nm에서 측정하였다.
2-6. α-Glucosidase 저해 효과 측정
α-Glucosidase 저해 효과는 Tibbot과 Skadsen의 방법(Tibbot BK, Skadsen RW (1996) Molecular cloning and characterization of a gibberellin inducible, putative alpha-glucosidase gene from barley. plant Mol Biol 30: 229241) 에 준하여 50 mM sodium succinate buffer (pH 4.2)에 ρ-nitrophenol-α-D-glucopyranoside를 용해시켜 1 mg/mL 농도로 기질을 만들고, 기질 1 mL와 효소액 0.1 mL를 혼합하고, 대조군에는 증류수 0.1 mL, 샘플군에는 상기 실시예 1-2에서 제조한 섬괴불나무 추출물 0.1 mL를 넣어 37 ℃에서 30분간 반응시킨 후 발색시약인 1 N NaOH 0.1 mL를 첨가하여 효소반응에 의해 생성된 ρ-nitrophenol을 표준곡선을 통해 측정하였다.
2-7. 항균 활성 측정
항균 활성을 평가하기 위한 균주로, 피부상재균으로 세균각막염과 안검결막염 등의 원인 균인 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 및 Staphylococcus aureus ATCC 12600, 여드름 원인 균인 Propionibacterium acne ATCC 11828, 위십이지장 질환의 원인 균인 Helicobacter pylori ATCC 43504, 병원성 대장균인 Escherichia coli ATCC 9637, 충치 원인 균인 Streptococcus mutans ATCC 700610, 구강 내 세균인 Candida albicans ATCC 18804를 사용하였다.
S. mutans 및 C. albicans의 배양을 위한 액체배지로는 brain heart infusion 및 YM broth를 각각 사용하였으며, E. coli 및 S. epidermidis의 액체배지로는 nutrient broth를 사용하였고, S. aureus의 액체배지로는 tryptic soy broth를 사용하였으며, 고체배지는 액체배지에 agar를 첨가하여 본 실험에 사용하였다. 미호기성 균인 H. pylori는 조건을 유지시켜 주기 위해서 10 % CO2 인큐베이터에서 습도를 항상 95 % 이상으로 유지하여 배양하였다.
Agar plate상에서 37 ℃에 48-72시간 동안 배양하였으며, S. epidermidis, S.aureus, 및 E. coli 배양에는 nutrient medium을 사용하였으며, agar plate상으로 37 ℃의 BOD 인큐베이터에서 24-48시간 동안 배양하였다. 디스크법에 의한 항균활성 검색은 최적 배지 agar plate에 준비한 균 배양액 100 μL를 분주하여 멸균 유리봉으로 도말하고 멸균된 지름 8 mm 크기의 disc paper를 올려놓고 0.45 μm 멤브레인 필터로 제균한 상기 실시예 1-2에서 제조한 섬괴불나무 추출물 100 μL에 TPC 농도를 50 μg, 100 μg, 150 μg, 및 200 μg로 분주하였다. 대조군으로 멸균수 100 μL를 흡수시켜 24시간 동안 배양하여, disc 주위의 생육저해환(clear zone) 생성 유무와 직경을 측정함으로써 항균 활성을 측정하였다.
2-8. 통계적 분석
통계적 분석은 Duncan's multiple range test에 의해 수행되었으며, 그래프에 표시된 서로 다른 위첨자 문자(a-d)는 p <0.05에서 유의적인 차이를 의미한다.
[실시예]
실시예 1. 섬괴불나무의 용매 종류별, 농도별 페놀 화합물 추출수율 비교
섬괴불나무 잎을 다양한 용매를 이용하여 추출하고 상기 실험예 2-1 방법으로 페놀 함량을 측정하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 열수(water), 에탄올(ethanol), 메탄올(methanol), 아세톤(aceton), 부탄올(butanol) 순으로 3.59 mg/g, 2.61 mg/g, 2.64 mg/g, 1.67 mg/g 및 3.54 mg/g의 페놀 함량을 나타내었으며, 가장 높은 추출수율을 나타낸 열수 추출물과 인체에 무해한 에탄올 추출물을 대상으로 실험하였다.
또한, 섬괴불나무 잎을 에탄올 농도별 추출하여 상기 실험예 2-1 방법으로 페놀 함량을 측정하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 40 % 에탄올 추출물에서 2.82 mg/g으로 가장 높은 추출수율을 나타내었다.
따라서, 높은 추출 수율과 실험에의 적용을 위하여 섬괴불나무 잎을 열수와 40 % 에탄올을 용매로 추출하여 이하 실험을 진행하였다.
실시예 2. 섬괴불나무 추출물의 항산화 효과 확인
2-1. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 저해 효과 확인
전자공여능 측정에 사용된 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)는 페놀 화합물과 같은 전자공여체와 반응하게되면 페녹시 라디칼(phenoxy radical)을 생성하게 되며, 안정한 분자가 된다. 또한, 공여된 전자는 비가역적으로 결합하여 결합된 수에 비례하여 DPPH의 진보라 색깔이 점점 옅어지게 된다. 따라서, DPPH는 항산화 물질의 전자공여능으로 인해 방향족 아민류에 의해 환원되어 짙은 자색에서 탈색되는 정도를 나타내는 지표로, 항산화 효과를 나타내는 척도로 활용되므로 섬괴불나무 추출물의 항산화 효과를 평가하기 위해 상기 실험예 2-2의 방법으로 DPPH 라디칼 소거능을 측정하였다.
그 결과, 하기 표 1에 나타낸 바와 같이 섬괴불나무 잎의 열수 추출물(water extract) 및 에탄올 추출물(ethanol) 모두 농도가 증가함에 따라 DPPH 라디칼 소거능이 유의하게 증가하였으며, 50 μg/mL의 낮은 농도에서도 각각 85.11 %, 84.95 %로 양성 대조군으로 사용한 항산화제 BHT 보다 높은 소거능을 나타냄으로써 DPPH 라디칼 저해 효과가 뛰어난 것을 알 수 있었다.
2-2. Anti-oxidant protection factor (PF) 저해 효과 확인
11개의 이중 결합으로 구성되어 있어 높은 불포화 성질을 가지고 있는 β카로틴은 과산화 라디칼(peroxy radical)과 매우 쉽게 반응하는데 불포화된 탄소 중 하나에 선택적 연쇄 절단되어 항산화제로서 작용하는 성질을 이용하여 지용성 항산화능을 나타내는 PF를 상기 실험예 2-3의 방법으로 측정하였다.
그 결과, 상기 표 1에 나타낸 바와 같이 섬괴불나무의 열수 추출물 및 에탄올 추출물의 50 μg/mL 페놀 농도에서 각각 1.91 PF, 1.48 PF를 나타내었으며, 양성 대조군으로 사용한 항산화제 BHT에서는 50-200 μg/mL 페놀 농도에서 섬괴불나무 추출물보다 낮은 PF를 나타내었다. 1.2 PF 이상이면 지용성 물질에 대한 항산화력이 높은 것으로 섬괴불나무 추출물은 50 μg/mL 페놀 농도에서 각각 1.91 PF(열수), 1.48 PF(에탄올) 로 우수한 지용성 항산화능을 나타내는 것을 확인하였다.
실시예 3. 섬괴불나무 잎 추출물의 대사성 질환에 대한 효과 확인
3-1. Xanthine oxidase (XOase) 저해 효과 확인
섬괴불나무 추출물의 통풍 억제 효과를 확인하기 위해 통풍 유발 물질인 요산(uric acid)을 생성하는 XOase 저해 효과를 상기 실험예 2-4의 방법으로 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 섬괴불나무의 열수 및 에탄올 추출물 모두 농도 의존적으로 XOase 저해 효과가 증가하였으며, 200 μg/mL 페놀 농도에서 대조군으로 사용한 통풍치료약인 알로푸리놀(allopurinol)이 70.37 %의 XOase 저해 효과를 나타나낸 것에 비해 열수 및 에탄올 추출물 각각 76.35 %, 99.83 %로 높은 XOase 저해 효과를 나타내었다.
3-2. ACE(Angiotensin converting enzyme) 저해 효과 확인
불활성인 안지오텐신 I의 C-말단 디펩타이드(His-Leu)를 가수분해하여, 혈관벽 평활근 수축 등의 작용을 가지는 안지오텐신 II로 전환시켜 고혈압의 원인이 되는 인체 내 ACE의 저해 효과를 상기 실험예 2-5의 방법으로 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 섬괴불나무 잎의 열수 및 에탄올 추출물 모두 농도 의존적으로 ACE 저해 효과가 유의적으로 증가하였으며, 200 μg/mL 페놀 농도에서 대조군으로 사용한 ACE 억제제인 캡토프릴(captoril)이 63 %의 저해 효과를 나타낸 것에 비해 열수 및 에탄올 추출물 각각 79.06 %, 87.14 %로 매우 높은 ACE 저해 효과를 나타내었다.
3-3. α-Glucosidase 저해 효과 확인
효모기원 α-Glucosidase 활성 저해 효과를 상기 실시예 2-6 방법으로 측정하였다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 섬괴불나무의 열수 및 에탄올 추출물 모두 농도 의존적으로 α-Glucosidase 저해 효과가 증가하였으며, 200 μg/mL 페놀 농도에서 대조군으로 사용한 혈당강하제인 아카보즈(acarbose)가 40 %의 저해 효과를 나타낸 것에 비해 열수 및 에탄올 추출물 각각 80.35 %, 63.58 %의 높은 α-Glucosidase 저해 효과를 나타내었다.
따라서, 상기 결과로부터 섬괴불나무 추출물이 탄수화물 분해 효소의 활성을 저해하는 것으로 확인되어, 당분해 억제 효과가 확인됨에 따라, 2형 당뇨병 억제에 효과를 나타낼 것으로 확인되었다.
실시예 4. 섬괴불나무 추출물의 항균 효과 확인
섬괴불나무 추출물의 항균 효과를 평가하기 위해 상기 실험예 2-7 방법으로 항균활성을 측정하였다.
그 결과, 하기 표 2에서와 같이, 여드름 원인 균인 P. acne에 대하여 열수 추출물은 100 μg/100 μL, 150 μg/100 μL, 200 μg/100 μL 농도에서 각각 13 mm, 14 mm, 18.5 mm의 생육저해환을 나타내었으며, 40 % 에탄올 추출물은 150 μg/100 μL, 200 μg/100 μL 농도에서 각각 9 mm, 10 mm의 생육저해환을 나타내었다. 또한, 위십이지장 질환 원인 균인 H. pylori에 대하여 오직 열수 추출물 200 μg/100 μL 농도에서만 11.5 mm의 생육저해환을 나타내었으며, 그 외의 S. epidermidis, S. aureus, C. albicans, E. coli, 및 S. mutans에는 생육 저해 효과를 나타내지 않았다.
따라서, 상기 결과로부터 섬괴불나무 추출물은 위십이지장 질환 원인 균과 여드름 원인 균에 대한 우수한 항균 활성을 나타내어 항균 기능성 소재로 활용이 가능할 것으로 판단되었다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.
Claims (14)
- 섬괴불나무(Lonicera morrowii A.Gray) 추출물을 유효성분으로 포함하는 통풍, 고혈압, 및 당뇨병으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
상기 추출물은 물, 에탄올, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 크잔틴 산화효소(xanthine oxidase; XOase)를 저해하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 안지오텐신변환효소(Angiotensin converting enzyme; ACE)를 저해하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 α-글루코시다아제(α-Glucosidase)를 저해하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
- 삭제
- 섬괴불나무(Lonicera morrowii A.Gray) 추출물을 유효성분으로 포함하는 통풍, 고혈압, 및 당뇨병으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물로서,
상기 추출물은 물, 에탄올, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
- 섬괴불나무(Lonicera morrowii A.Gray) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물로서,
상기 추출물은 Propionibacterium acne 균주에 대해 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 항균용 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 에탄올, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 항균용 조성물.
- 삭제
- 섬괴불나무(Lonicera morrowii A.Gray) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 의약외품 조성물로서,
상기 추출물은 Propionibacterium acne 균주에 대해 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 항균용 의약외품 조성물.
- 섬괴불나무(Lonicera morrowii A.Gray) 추출물을 유효성분으로 포함하는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
상기 감염성 질환은 Propionibacterium acne 균주에 의한 질환인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물. - 삭제
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