KR102579725B1

KR102579725B1 - 곤충 추출물을 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102579725B1
Application number: KR1020200187371A
Authority: KR
Inventors: 박권수; 이진
Original assignee: (주) 명품
Priority date: 2020-12-30
Filing date: 2020-12-30
Publication date: 2023-09-18
Also published as: KR20220095649A

Abstract

본 발명은 곤충 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 흰점박이꽃무지 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물 그리고, 쌍별귀뚜라미 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 흰점박이꽃무지 추출물, 쌍별귀뚜라미 추출물 또는 이들로부터 분리한 신규 화합물을 주름개선 및 피부 항산화 분야에 이용할 수 있도록 함으로써, 곤충 관련 산업 및 화장품 분야 등에서 널리 활용될 수 있다.

Description

곤충 추출물을 포함하는 화장료 조성물 {Cosmetic composition comprising insect extracts}

본 발명은 곤충 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 물리적, 화학적인 외부의 자극으로부터 1차적으로 체내를 보호하는 기능을 갖는다.

생체 외부로부터 유입되거나, 생체 내에서 발생하는 활성산소는 생체의 노화를 촉진시키거나, 암 발생의 원인이 되기도 한다. 따라서 활성산소에 의한 산화를 억제하는 항산화 물질에 대한 연구가 진행되며, 항산화 물질은 페놀성 화합물, 플라보노이드, 토코페롤, 비타민 C, 셀레늄 등이 알려져 있다.

한국공개특허 제2020-0130799호는 발효복분자추출물을 포함하는 항산화 조성물을 개시하였고, 한국등록특허 제2184823호는 블랙커런트, 링곤베리 및 씨벅손 추출물을 포함하는 항산화 조성물을 개시하였다.

그러나 천연에 존재하는 항산화 물질은 피부에 적용할 경우 실질적으로 충분한 효과를 기대할 수 없는 실정이다. 반면, 항산화력이 뛰어나고 저가의 합성 항산화제는 인체 부작용 등 안전성에 대한 우려로 그 사용이 제한되는 문제점이 있다.

한편, 주름과 가장 밀접하게 연관되어 있는 것은 피부 세포의 노화이다. 일반적으로 피부 노화의 원인은 고령화에 따라 나타나는 자연 노화와 외부환경에 의해 나타나는 내적인 노화로 분류될 수 있다. 자연 노화는 유전자적 요인 등이 많이 관여되기 때문에 제어가 어렵다. 때문에, 자외선，산화，건조 등과 같은 환경적 요인을 제어하기 위해 많은 연구가 진행되고 있다.

환경적 요인은 주로 진피층에 포함된 콜라겐 단백질, 엘라스틴(elastin) 단백질 등을 파괴하거나 변성을 일으켜 주름을 유발한다. 특히, 태양의 자외선은 피부세포(섬유아세포)를 산화시키고 엘라스틴의 생성저하 및 파괴를 일으키는데, 자외선 등에 의해 피부 내에 엘라스틴 분해효소(elastase)가 발현되며 이 효소가 피부 내의 정상적인 엘라스틴을 분해하여 피부 탄력 저하를 가져 온다.

또한, 환경적 요인에 의해 양산된 활성 산소는 산화 작용에 의해 피부 세포 내의 단백질 파괴, 당의 산화, 유전자 변형 등을 일으켜 피부에 노화 및 주름을 유발할 수 있다. 이러한 산화력과 활성 산소는 피부 세포 내의 단백질 파괴, 당의 산화, 유전자 변형 등을 일으켜 피부에 노화 및 주름을 유발할 수 있다.

이에 따라, 상기의 부작용은 최소화하면서도 산화 방지 및 주름 방지 효과를 극대화할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.

본 발명자들은 그동안 많이 연구되던 식물 이외 곤충으로부터 항산화 및 피부 주름개선 활성을 갖는 소재를 탐색하던중 흰점박이꽃무지 추출물 및 쌍별귀뚜라미 추출물이 주름개선 및 항산화 활성을 갖는다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 피부 부작용을 유발하지 않으면서, 주름개선 및 항산화 활성이 우수한 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 흰점박이꽃무지 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 쌍별귀뚜라미 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 흰점박이꽃무지 추출물, 쌍별귀뚜라미 추출물 또는 이들로부터 분리한 신규 화합물을 주름개선 및 피부 항산화 분야에 이용할 수 있도록 함으로써, 곤충 관련 산업 및 화장품 분야 등에서 널리 활용될 수 있다.

본 발명에서는 잠재력은 있지만, 아직까지 널리 활용되고 있지 않은 흰점박이꽃무지(Protaetia brevitarsis seulensis) 및 쌍별귀뚜라미(Gryllus bimaculatus De Geer)로부터 신규 생리활성물질을 갖는 화합물을 분리할 수 있음을 확인하고자 하였다.

본 발명에서는, 흰점박이꽃무지 추출물이 엘라스타제(elastase) 저해활성 및 콜라게나제(collagenase) 저해활성이 있음을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 일 관점에서, 흰점박이꽃무지 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 흰점박이꽃무지(Protaetia brevitarsis seulensis)는 딱정벌레목 꽃무지과 Protaetia 속 곤충으로서, 유충 및 성충 모두 사용 가능하지만 유충을 사용하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명에서는 쌍별귀뚜라미 추출물이 ABTS radical 소거능, DPPH radical 소거능 및 SOD 유사활성이 있음을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 다른 관점에서, 쌍별귀뚜라미 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 쌍별귀뚜라미(Gryllus bimaculatus)는 메뚜기목 귀뚜라미과의 곤충으로서, 몸은 전체적으로 검고, 앞날개 기부에 노란 점이 있기 때문에 영어로 'two-spotted cricket'이라 한다. 본 발명에서는 쌍별귀뚜라미의 유충 및 성충 모두 사용 가능지만, 성충을 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 상기 흰점박이꽃무지 추출물 및 쌍별귀뚜라미 추출물은 이들 곤충을 마쇄시킨 후, 유기용매 또는 물로 추출하여 얻을 수 있다. 상기 유기 용매로는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올 등의 극성 용매; 헥산, 에테르, 벤젠, 톨루엔 등의 무극성 용매; 클로로포름, 에틸아세테이트, 아세톤, 멜틸렌클로라이드 등의 중간극성 용매를 예시할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 흰점박이꽃무지 추출물 및 쌍별귀뚜라미 추출물은 에탄올 등의 유기용매 또는 물에 마쇄된 곤충을 침지, 중탕, 증류시켜 추출하거나 초임계 추출 또는 마이크로파 추출법으로 추출할 수 있으며, 여과 및 농축과정을 통하여 획득할 수 있다.

본 발명에서는 흰점박이꽃무지 추출물 또는 쌍별귀뚜라미 추출물로부터 특정성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획방법을 추가로 수행할 수 있다. 본 발명에서는 상기 흰점박이꽃무지 추출물 또는 쌍별귀뚜라미 추출물을 대상으로 용매 분획법, 한외여과 분획법, 크로마토그래피 분획법 등의 다양한 방법을 적용하여 분획한 결과물이 될 수 있다.

특히, 용매 분획법을 적용할 경우, 이때 사용되는 용매의 종류는 주름개선 또는 항산화 효과를 나타내는 한 특별히 제한되지 않으나, 일 례로서, 물, 알코올, 에틸렌글리콜, 부틸렌글리콜 등의 극성 용매; 또는 헥산(Hexane), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 단독으로 사용되거나 또는 2 종 이상 혼합하여 사용될 수 있고, 다른 예로서, 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 에틸렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에서는 크로마토그래피, 박막크로마토그래피(TLC) 및 고성능액체크로마토그래피(HPLC)를 수행하여 주름개선 또는 항산화 활성 본체를 더욱 분리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 흰점박이꽃무지 추출물, 쌍별귀뚜라미 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물은 상기 조성물의 총 중량을 기준으로 0.01 내지 50 중량% 함유되어 있을 수 있고, 바람직하게는 10 내지 30 중량% 함유되어 있을 수 있으나, 바람직한 항산화 또는 주름개선 효과를 제공할 수 있는 유효량을 포함한다면 이에 제한되지 않는다.

[실시예]

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물 제조

1-1: 곤충 용매 추출물 제조

흰점박이꽃무지 유충(300g) 및 쌍별귀뚜라미 성충(300g)을 믹서(Green-mix; DA5500)로 분쇄하고 주정 1 L를 넣고, 실온에서 72시간 보관후, 추출하였다. 추출물은 여과 후 감압농축(Rotary vaccum evaporatir; EYELA)하여 각 주정 추출물을 얻었다. 그 결과, 흰점박이꽃무지 26.63 g (수율 8.88%), 쌍별귀뚜라미 28.33 g (수율 9.50%)의 추출물을 얻었다.

1-2: 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물 제조

실시예 1-1에서 주정 추출 후 건조되지 않은 용매 박에 물100% 500 mL를 넣고, 실온에서 72시간 보관후, 추출하였다. 추출물은 여과 후 감압농축(Rotary vaccum evaporatir; EYELA)하여 각 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물을 얻었다.

그 결과, 흰점박이꽃무지 17.34 g(수율 5.78%)을 얻었고, 쌍별귀뚜라미(300 g)의 경우 감압농축 후 4 ℃ 냉장 보관한 다음 동결건조하여 2.19 g (수율 0.73%)의 추출물을 얻었다.

실시예 2: 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물 제조

2-1: 곤충 초임계 추출물 제조

건조된 흰점박이꽃무지 유충(220g) 및 쌍별귀뚜라미 성충(200g)를 믹서(Green-mix; DA5500)로 분쇄하였으며, 메시(2 mm)를 이용하여 2 mm 입자 크기 이하의 시료를 사용하였다. 전처리된 시료는 연구용 초임계유체 추출기를 이용하여 추출하였다. 시료 결정화조에 주입하기 전에 결정화조의 온도를 실험 온도(50 ℃)로 예열하였다. 결정화조의 온도가 안정되면 고압 펌프를 이용하여 시료를 결정화조 내에 주입하고, 시간이 지나 온도가 정상 상태가 된 이후에 상부 line을 통해 CO₂를 실험압력 400 bar에 도달할 때까지 일정량 주입하였다. 그 결과, 400 bar에서는 흰점박이꽃무지 89.1 g(수율 20.3%), 쌍별귀뚜라미 104.9g(수율 26.2%)의 추출물을 얻었다.

2-2: 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물 제조

실시예 2-1에서 초임계 추출 후 건조되지 않은 용매 박 (흰점박이꽃무지 440 g, 쌍별귀뚜라미 400g)에 주정60% 1 L를 넣고, 실온에서 72시간 보관후, 추출하였다. 추출물은 여과 후 감압농축(Rotary vaccum evaporatir; EYELA)하여 각 주정 추출물을 얻었다. 그 결과, 흰점박이꽃무지 5.50g (수율 1.58%)을 얻었고, 쌍별귀뚜라미(300g)의 경우 감압농축 후 4 ℃ 냉장 보관한 다음 동결건조하여 3.15g (수율 1.10%)의 추출물을 얻었다.

실험예 1: 주름 개선 효과 평가

(1) 엘라스타제(Elastase) 저해 활성 측정

체내 중성백혈구의 과립구내에 존재하는 elastase는 진피내 피부탄력을 유지하는 기질 단백질인 elastin, fibrotectin 및 collagen을 포함한 다양한 단백질을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소로써 효소의 활성이 매우 높아 조직 파괴의 직접적 원인이 된다. 최근 연구에서 elastase가 피부 탄력섬유의 3차원적 뒤틀림에 중요한 역할을 한다고 보고되어 있으며, 과다 생성된 elastase는 피부 진피 elastin의 그물망 구조를 절단하여 피부의 탄력섬유를 감소시킴으로써 피부 주름 형성에 기여한다고 알려져 있다. 그러므로 elastase 저해제는 피부의 주름을 개산하여 피부의 노화를 지연시킬 수 있다. Elastase 저해 활성 시험법은 원리는 기질인 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide가 elastase에 의해 활성되어 p-nitroanilide를 생성시키는데 생성된 p-nitroanilide 양을 흡광도로 측정한다. 즉, elastase가 저해된다면 p-nitroanilide 생성량이 적어 시료의 주름 개선 효능이 있는지 확인하는 시험법으로 Hong 등의 방법을 일부 변형하여 측정하였다.

elastase 저해 활성을 측정하기 위해 실시예 1 및 실시예 2에서 제조된 시료를 농도별로 각각 DMSO와 D.W에 희석하고, 시료 희석액 20㎕에 0.05M Tris-HCl buffer (pH 8.0)에 2mM N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide를 녹인 기질액 40㎕와 0.18unit elastase 20㎕(dissolved in 0.05M Tris-HCl buffer)를 넣고 37℃에서 15분간 반응시킨 후 microplate reader기로 410nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로 ascorbic acid를 사용하였다. Elastase 저해 활성은 다음과 같이 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율의 백분율(%)로 나타내었다.

표 1은 실시예 1에서 제조된 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물, 표 2는 실시예 2에서 제조된 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물의 엘라스타제 저해활성을 평가한 결과이다. 결과값은 3번 실험한 결과를 평균 ± 표준오차로 표기하였다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (2.5mg/ml)
1.25mg/ml	-8.15±4.57	24.69±17.15	89.86±1.38
2.5mg/ml	11.19±2.92	76.65±2.18	89.86±1.38

상기 표 1과 같이, 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물에서는 1.25mg/ml 농도에서, 쌍별 귀뚜라미는 -8.15%로 엘라스타제 저해활성이 없었으나, 흰점박이꽃무지는 24.69%의 엘라스타제 저해활성이 있었으며, 2.5mg/ml 농도에서는 흰점박이꽃무지가 76.65%로서, 양성대조군인 ascorbic acid(89.86%)와 유사한 저해 활성을 나타내었다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (2.5mg/ml)
1.25mg/ml	-20.55±7.62	24.22±4.15	89.86±1.38
2.5mg/ml	20.70±3.18	58.75±1.72	89.86±1.38

표 2와 같이, 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물에서는 1.25mg/ml 농도에서, 쌍별 귀뚜라미는 -20.55%로 엘라스타제 저해활성이 없었으나, 흰점박이꽃무지는 24.22%의 엘라스타제 저해활성이 있었으며, 2.5mg/ml 농도에서는 흰점박이꽃무지가 58.75%로서, 농도 의존적으로 엘라스타제 저해활성이 증가되는 것을 알 수 있었다.

(2) 콜라게나제(Collagenase) 저해 활성 측정

피부와 힘줄, 뼈 및 치아 유기물질의 대부분을 형성하는 collagen은 피부의 진피층에 있으며, 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직력, 세포분할과 분화를 유도하는 기능이 있다. 자연노화에 따른 세포 활성 감소와 스트레스 증가, 자외선 노출 등과 같은 요인에 의해 collagen은 감소하며, 이는 피부의 탄력을 저하시켜 주름과 피부 처짐의 원인이 된다. Collagen을 분해하는 효소는 다양하지만 가장 많이 알려진 분해 효소는 피부 진피층에 존재하는 matrix metalloproteinase(MMP)로 활성산소, 자외선 등에 의해 분해가 일어난다. MMP를 이루는 주요성분으로 collagenase, gelatinse, elastase 등이 있으며, 이중 피부의 탄력감소 및 주름생성 억제에 collagenase의 활성을 감소시키는 것이 매우 중요하다. Collagenase 저해 활성은 Wㆌnsch의 방법을 일부 변형하여 측정하였다.

단일 곤충 5종의 collagenase 저해 활성을 측정하기 위해 실시예 1 및 실시예 2에서 제조된 시료를 농도별로 각각 DMSO와 D.W에 희석하고, 시료 희석액 100㎕에 0.1M Tris-HCl buffer(pH 7.5)에 4mM CaCl₂를 첨가하여, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(0.3mg/ml)를 녹인 기질액 250㎕와 collagenase(0.2mg/ml, dissolved in 0.1M Tris-HCl buffer)를 150㎕씩 넣고 실온에서 20분 동안 반응시킨 후 6% citric acid 500㎕를 넣어 반응을 정지시키고, ethyl acetate 1.5ml를 넣고 혼합하여 상등액만을 취해 3207nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid를 사용하였다.

Collagenase 저해 활성은 다음과 같이 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율의 백분율(%)로 나타내었다.

표 3은 실시예 1에서 제조된 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물, 표 4는 실시예 2에서 제조된 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물의 콜라게나제 저해활성을 평가한 결과이다. 결과값은 3번 실험한 결과를 평균 ± 표준오차로 표기하였다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid
1.25mg/ml	73.44±3.47	84.84±1.51	98.33±1.96
2.5mg/ml	87.33±0.40	96.79±7.85	101.02±1.82

상기 표 3과 같이, 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물에서는 1.25mg/ml 농도에서, 쌍별귀뚜라미 73.44%, 흰점박이꽃무지 84.84%의 콜라게나제 저해활성이 있었다. 2.5mg/ml 농도에서는 농도 의존적으로 쌍별귀뚜라미 87.33%, 흰점박이꽃무지 96.79%의 콜라게나제 저해활성이 증가하는 것을 알 수 있었다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid
1.25mg/ml	74.02±2.14	83.20±1.60	98.33±1.96
2.5mg/ml	86.61±1.36	86.11±1.22	101.02±1.82

상기 표 4와 같이, 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물에서는 1.25mg/ml 농도에서, 쌍별귀뚜라미 74.02%, 흰점박이꽃무지 83.20%의 콜라게나제 저해활성이 있었다. 2.5mg/ml 농도에서는 농도 의존적으로 쌍별귀뚜라미 86.61%, 흰점박이꽃무지 86.11%의 콜라게나제 저해활성이 증가하는 것을 알 수 있었다.

실험예 2: 항산화 효과 평가

(1) ABTS radical 소거능 측정

ABTS radical을 이용한 항산화능의 측정은 potassium persulfate와의 반응에 의해 생성된 peroxide radical 성격의 ABTS가 이 추출물 내의 항산화 물질에 의해 제거되어 radical 특유의 색인 청록색이 탈색되는 것을 이용하여 항산화 활성을 측정한다. Pellegrin의 방법에 따라 추출물의 ABTS radical 소거능을 측정하였다.

ABTS radiacl 소거능을 측정하기 위해 70mM 2,2-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid(ABTS)와 24.5 mM potassium persulfate를 혼합하여 실온의 암소에 24시간 방치하여 ABTS+를 형성시킨 후 734nm에서 흡광도 값이 0.7~08이 되도록 50% ethanol로 희석하였다.

실시예 1 및 실시예 2에서 제조된 시료를 농도별로 각각 DMSO와 D.W에 희석하고, 시료 희석액 50㎕에 ABTS시약 100㎕씩 넣은 후 암소에서 30분 동안 반응시킨 후 microplate reader기로 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid를 사용하였다. ABTS radical 소거능은 다음과 같이 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율의 백분율(%)로 나타내었다.

표 5는 실시예 1에서 제조된 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물, 표 6은 실시예 2에서 제조된 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물의 ABTS radical 소거능을 평가한 결과이다. 결과값은 3번 실험한 결과를 평균 ± 표준오차로 표기하였다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (1mg/ml)
5mg/ml	100.00±0.42	100.09±0.19	99.75±0.24
10mg/ml	99.90±0.16	99.35±0.31	99.75±0.24

표 5와 같이, 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물에서는 5mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미 100%, 흰점박이꽃무지 100%의 ABTS radical 소거능 효과를 나타내어, 양성대조군인 ascorbic acid와 유의적으로 높은 소거 효과를 나타내었다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (1mg/ml)
5mg/ml	100.02±0.08	99.82±0.33	99.75±0.24
10mg/ml	99.76±0.13	99.82±0.10	99.75±0.24

표 6과 같이, 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물에서는 5mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미 100%, 흰점박이꽃무지 99.82%의 ABTS radical 소거능 효과를 나타내어, 양성대조군인 ascorbic acid와 유의적으로 높은 소거 효과를 나타내었다.

(2) DPPH radical 소거능 측정

DPPH는 free radical 소거능 평가를 위해 일상적으로 실시되며 순수한 화합물의 항산화 특성 평가를 위한 표준적이고 쉬운 비색법 중 하나이다. DPPH는 비교적 안정한 free radical로써 ascorbic acid, tocopherol, polyhydroxy 방향족화합물, 방향족 아민류에 의해 환원되어 보라색 색상으로 탈색되는 것을 이용하여 항산화 활성을 측정한다. Blois의 방법에 따라 추출물의 DPPH에 대한 전자공여 효과를 확인하기 위해 각 시료의 환원력을 측정하였다.

DPPH radiacl 소거능을 측정하기 위해 실시예 1 및 실시예 2에서 제조된 시료를 농도별로 각각 DMSO와 D.W에 희석하고, 시료 희석액 100㎕에 0.2mM DPPH 용액(dissolved in 99% ethanol)을 100㎕씩 넣고 실온의 암소에서 30분 동안 반응시킨 후 microplate reader기로 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid를 사용하였다. DPPH radical 소거능은 다음과 같이 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율의 백분율(%)로 나타내었다.

표 7은 실시예 1에서 제조된 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물, 표 8은 실시예 2에서 제조된 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물의 DPPH radical 소거능을 평가한 결과이다. 결과값은 3번 실험한 결과를 평균 ± 표준오차로 표기하였다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (1mg/ml)
5mg/ml	59.81±0.62	42.77±1.79	90.31±3.46
10mg/ml	72.78±0.34	54.47±1.77	90.31±3.46

표 7과 같이, 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물에서는 5mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미 59.81%, 흰점박이꽃무지 42.77%의 DPPH radical 소거능을 나타내었으며, 10mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미는 72.78%의 DPPH radical 소거능을 나타내었다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (1mg/ml)
5mg/ml	56.77±1.42	40.49±2.68	90.31±3.46
10mg/ml	67.65±0.99	45.55±0.78	90.31±3.46

표 8과 같이, 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물의 DPPH radical 소거율은 5mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미 56.77%, 흰점박이꽃무지 40.49%로 나타내었으며, 10mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미는 67.65%의 DPPH radical 소거능을 나타내었다.

(3) SOD 유사활성 측정

SOD는 각종 세포의 대사과정에서 끊임없이 생성되는 활성산소들 중 superoxide anion(또는 라디칼)을 산소와 과산화수소로 전환시키는 (dismutation) 반응을 촉매하는 중요한 항산화 효소이다.

SOD는 peroxidase, catalase 등과 같은 가수분해 효소에 의해 체내 생성된 hydroxyl radical을 무해한 물 분자와 정상의 산소로 분해시켜 superoxide anion radical을 제거하는 일차 방어기작에 관여하며, 가장 독성이 강한 hydroxyl radical의 생성을 억제한다. 따라서 다른 종류의 항산화제보다 우수한 효과를 나타내어 관절염이나 류머티즘 등과 같은 각종 퇴행성 질병 치료를 위한 항염증 제재나 피부 노화 방지를 위한 화장품의 첨가제로도 이용된다. SOD 유사활성은 SOD assay kit를 이용하여 각 시료의 활성을 측정하였다.

SOD 유사활성을 측정하기 위해 SOD assay kit(Dojindo, Japan)를 사용하여 제조사의 manual에 준하여 분석하여 microplate reader기로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid를 사용하였다.

표 9는 실시예 1에서 제조된 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물, 표 10은 실시예 2에서 제조된 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물의 SOD 유사활성을 평가한 결과이다. 결과값은 3번 실험한 결과를 평균 ± 표준오차로 표기하였다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (1mg/ml)
5mg/ml	72.82±2.84	57.54±6.68	103.36±0.00
10mg/ml	93.99±1.23	49.95±3.08	103.36±0.00

상기 표 9와 같이, 곤충 용매 추출물박의 물 100% 추출물에서는 5mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미 72.82%, 흰점박이꽃무지 57.54%로, 50% 이상의 SOD 유사 활성을 나타내었다. 쌍별귀뚜라미는 농도가 높아질수록 활성이 높아졌으며 쌍별귀뚜라미는 10mg/ml 농도에서 93.99%로 시료 중에 양성대조군과 가장 유사한 활성을 보였다.

%	쌍별 귀뚜라미	흰점박이꽃무지	Ascorbic acid (1mg/ml)
5mg/ml	84.78±1.63	41.01±4.20	103.36±0.00
10mg/ml	97.46±0.42	44.56±3.74	103.36±0.00

표 10과 같이, 곤충 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물에서는 5mg/ml 농도에서 쌍별귀뚜라미 84.78%, 흰점박이꽃무지 41.01%의 SOD 유사 활성을 나타내었다. 쌍별귀뚜라미 추출 시료는 농도가 높아질수록 활성이 높아졌다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

흰점박이꽃무지 주정 추출 후 건조되지 않은 용매 박의 물 추출물을 포함하며, 엘라스타제(elastase) 저해활성 및 콜라게나제(collagenase) 저해활성을 갖는 것을 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.
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쌍별귀뚜라미 초임계 추출물박의 주정 60% 추출물을 포함하며, ABTS radical 소거능, DPPH radical 소거능 및 SOD 유사활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항산화용 화장료 조성물.
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