KR101965250B1 - 효소처리된 카카두플럼 추출물이 유효성분으로 함유된 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물 및 그 추출물의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 효소처리된 카카두플럼(Kakadu plum, 학명: Terminalia ferdinandiana) 추출물이 유효성분으로 함유된 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물 및 그 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명은 카카두플럼을 효소처리하여 추출물로 제조할 경우, 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물로부터 DPPH 자유라디칼 소거능, NO(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 확인함으로써, 이를 유효성분으로 함유하여 스킨, 에센스, 로션, 크림, 파운데이션을 포함하는 베이스 화장료 및 색조 화장료 적용에 유용하다.

Description

효소처리된 카카두플럼 추출물이 유효성분으로 함유된 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물 및 그 추출물의 제조방법{COSMETIC COMPOSITION FOR ANTI-OXIDATION, ANTI-INFLAMMATORY AND ANTI-WRINKLING CONTAINING ENZYME-TREATED EXTRACTS OF KAKADU PLUM AND MANUFACTURING METHOD OF EXTRACT}

본 발명은 효소처리된 카카두플럼(Kakadu plum, 학명: Terminalia ferdinandiana) 추출물이 유효성분으로 함유된 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물 및 그 추출물의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 카카두플럼을 효소처리하여 추출물로 제조할 경우, 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물로부터 DPPH 자유라디칼 소거능, NO 생성 저해능 및 엘라스타아제 저해능을 확인함으로써, 이를 유효성분으로 함유하여 베이스 화장료 및 색조 화장료 적용에 유용한 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물 및 그 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

비타민 C는 많은 사람들이 가장 익숙하게 찾는 영양소로서, 가장 강력한 항산화 물질이기도 하며, 우리 몸 속 세포의 노화와 염증을 일으키는 활성산소의 공격을 막아준다.

일일 권장 비타민 C 섭취량은 100㎎으로 채소와 과일에 풍부한데 흔히 비타민C는 오렌지와 레몬, 감귤에 풍부하다는 인식이 많지만, 시트러스 계열을 제외한 다양한 과일과 채소도 비타민 C의 보고다.

그 중에서 카카두플럼은 지구상에서 가장 비타민 C가 풍부한 과일로 꼽히며, 비타민 C의 함량이 오렌지보다 무려 100배나 많은 100g당 4,000mg 내지 5,000mg의 비타민을 함유한 천연 항산화 물질로 주목 받고 있다.

또한, 카카두플럼은 높은 산소 라디칼 흡수 능력(oxygen radical absorbance capacity, ORAC) 값을 가지며, 또한 갈릭 산(gallic acid), 엘라직 산(ellagic acid) 등의 식물 화학물질(phytochemical)을 포함한다. 상기 함유된 식물 화학물질은 암 억제에 연관되어 있는 항산화 특성을 가진다.

구체적으로 갈릭 산(gallic acid)은 항박테리아, 항바이러스 및 항균 특성을 가지고, 또한 항염, 항종양, 항돌연변이 및 항기관지확장(anti-bronchodilatory) 특성을 가지고, 엘라직 산은 많은 인간 조직에서 여러 범위의 암종에 대항하여 항발암 효과를 가진다고 알려져 있다.

카카두플럼의 성능을 활용한 선행문헌으로서, 특허문헌 1은 카카두플럼 추출물 및 아카이베리 추출물을 포함하여 화장품 조성물로서, 상기 개별 추출물보다 두 추출물을 포함하여 시너지 효과로서, 내부 또는 외부 산화적 손상을 감소, 증가된 콜라겐 생성, 염증성 반응의 감소 및 멜라노제네시스의 억제를 제공하는 화장품 조성물을 개시하고 있다. 상기 조성물은 높은 산소 라디칼 흡수 능력(oxygen radical absorbance capacity (ORAC)) 값을 포함하고, 피부의 시각적 외관, 생리적 기능, 임상적 특성 및/또는 생물학적 특성을 개선시킬 수 있다고 보고하고 있다. 이때, 상기 발명에서 카카두플럼 추출물은 통상의 분리 기술에 의해 분리되어 함유된다.

또한, 특허문헌 2는 흑효모 발효를 통해 비타민C 함량이 증가된 카카두플럼 추출물을 함유하는 화장료 조성물이 개시되어 있다. 즉, 상기 발명은 카카두플럼(Terminalia Ferdinandiana) 추출물을 흑효모균(Aureobasidium pullulans)으로 20 내지 40℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일 동안 발효시킨 카카두플럼 흑효모 발효 추출물을 함유하여 성능을 증진한 화장료 조성물을 제공하고 있다.

이에, 본 발명자들은 카카두플럼의 성능을 극대화하기 위하여 노력한 결과, 카카두플럼을 효소처리하여 추출물로 제조할 경우, 우수한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과를 부여할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

대한민국 등록특허공보 제10-1773474호 (2017.09.12 공고) 대한민국 등록특허공보 제10-1855207호 (2018.05.09 공고)

본 발명의 목적은 효소처리된 카카두플럼 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 효소처리된 카카두플럼 추출물을 유효성분으로 함유한 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.

상기에서 효소는 셀룰라아제(Cellulase), 펙티나아제(Pectinase), 헤미셀룰라아제(Hemicellulase) 및 자일라나아제(Xylanase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상으로 처리된 것이며, 더욱 바람직하게는 셀룰라아제 및 펙티나아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것이다.

가장 바람직하게는 상기 효소가 셀룰라아제 및 펙티나아제 1:1 내지 1:5 중량비로 이루어진 혼합효소인 것이다.

상기 효소처리된 카카두플럼 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 20중량% 함유된 것이며, 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물로부터 DPPH 자유라디칼 소거능, NO (Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 확인할 수 있다.

따라서, 효소처리된 카카두플럼 추출물이 스킨, 에센스, 로션, 크림, 파운데이션, 색조 화장료 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형에 유효성분으로 함유되어, 항산화, 항염 및 주름개선용도에 유용한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 본 발명은 카카두플럼에 효소를 첨가하여 효소 반응시켜 추출하는 단계, 상기 추출 이후 에탄올을 첨가하여 효소를 침전시키고 원심분리하여 침전된 효소를 제거하는 단계 및 상기 효소 제거 이후 교반 추출하는 단계로 수행된 효소처리된 카카두플럼 추출물의 제조방법을 제공한다.

상기에서 효소는 셀룰라아제, 펙티나아제, 헤미셀룰라아제 및 자일라나아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 셀룰라아제 및 펙티나아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상이고, 가장 바람직하게는 셀룰라아제 및 펙티나아제 1:1 내지 1:5 중량비로 이루어진 혼합효소인 것이다.

본 발명의 제조방법에서, 상기 효소반응은 30 내지 55℃에서 30 내지 120분 동안 수행되는 것이다.

본 발명은 카카두플럼을 효소처리하여 추출물로 제조할 경우, 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물로부터 DPPH 자유라디칼 소거능, NO 생성 저해능 및 엘라스타아제 저해능을 확인할 수 있다.

따라서, 본 발명은 효소처리된 카카두플럼 추출물을 유효성분으로 함유하여 스킨, 에센스, 로션, 크림, 파운데이션을 포함하는 베이스 화장료 및 색조 화장료 적용이 유용하다.

도 1은 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 세포독성실험 결과이고,
도 2는 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 DPPH 자유라디칼 소거능 결과이고,
도 3은 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 NO 생성 저해능 결과이고,
도 4는 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 엘라스타아제 저해능 결과이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하고자 한다.

본 발명은 효소처리된 카카두플럼(Kakadu plum, 학명: Terminalia ferdinandiana) 추출물을 유효성분으로 함유한 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서는 효소처리된 카카두플럼 추출물로부터 DPPH 자유라디칼 소거능, NO (Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 확인한 결과, 우수한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과를 확인함으로써, 본 발명은 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에서 ‘효소처리된 카카두플럼 추출물’이라 함은 카카두플럼에 효소를 가하여 혼합한 후, 혼합액을 용매를 이용하여 추출한 추출물을 의미한다.

상기 효소는 셀룰라아제(Cellulase), 펙티나아제(Pectinase), 헤미셀룰라아제(Hemicellulase) 및 자일라나아제(Xylanase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상으로 처리된 것이며, 더욱 바람직하게는 셀룰라아제 및 펙티나아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것이다. 상기 효소일 때, 유효성분의 수득 증대를 통한 그로 인한 효능 증대까지 기대할 수 있어 바람직하다.

가장 바람직하게는 본 발명의 실시예에서는 셀룰라아제 및 펙티나아제 1:1 내지 1:5 중량비로 이루어진 혼합효소를 처리하여 제조된 카카두플럼 추출물을 설명하고 있다.

이때, 효소처리하지 않은 비교예 1의 카카두플럼 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거능, NO 생성 저해능 및 엘라스타아제 저해능 평가에서 상대적으로 낮은 결과를 보이며[도 2 내지 도 4], 효소를 단독으로 실시한 비교예 2 및 비교예 3의 경우에도, NO 생성 저해능과 엘라스타아제 저해능이 상대적으로 낮아 바람직하지 않다[미도시]. 또한, 상기 셀룰라아제 및 펙티나아제의 혼합비율 범위를 벗어난 비율로 효소처리된 비교예 4의 추출물의 경우, 세포독성이 발생하는 문제가 발생한다[미도시]. 또한, 상기 혼합효소로 처리된 카카두플럼 추출물로부터, DPPH 자유라디칼 소거능, NO 생성 저해능 및 엘라스타아제 저해능 평가에서, 우수한 결과를 제시하고 있다.

상기 카카두플럼에 효소를 처리할 경우, 수율 증대를 통한 생산량 증대를 달성하기 위하여, 카카두플럼 100 중량부에 대하여, 효소 2 내지 10 중량부로 처리하는 것이 바람직하다.

상기 조건으로 효소처리된 카카두플럼 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거능, NO 생성 저해능 및 엘라스타아제 저해능 평가에서 우수한 효과를 확인할 수 있다[도 2 내지 도 4].

따라서, 본 발명은 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물을 유효성분으로 함유하여 스킨, 에센스, 로션, 크림, 파운데이션을 포함하는 베이스 화장료에 바람직하고, 이외 색조 화장료에도 유용한 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 함량은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄하이드록사이드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물에 있어서, 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물은 상기 조성물의 총 중량을 기준으로 0.01 내지 20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 10 중량%, 가장 바람직하게는 0.5 내지 5중량%로 함유되는 것이다[도 2 내지 도 4].

본 발명은 카카두플럼에 효소를 첨가하여 효소 반응시켜 추출하는 제1단계,

상기 추출 이후 에탄올을 첨가하여 효소를 침전시키고 원심분리하여 침전된 효소를 제거하는 제2단계 및

상기 효소 제거 이후 교반 추출하는 제3단계로 수행된 효소처리된 카카두플럼 추출물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 제조방법에 있어서, 제1단계에서의 효소는 셀룰라아제, 펙티나아제, 헤미셀룰라아제 및 자일라나아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상으로 처리된 것이며, 더욱 바람직하게는 셀룰라아제 및 펙티나아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것이다. 상기 효소일 때, 유효성분의 수득 증대를 통한 그로 인한 효능 증대 측면에서 바람직하다.

가장 바람직하게는 본 발명의 실시예에서는 셀룰라아제 및 펙티나아제 1:1 내지 1:5 중량비로 이루어진 혼합효소를 처리하여 제조된 카카두플럼 추출물을 설명하고 있으며, 상기 혼합효소로 처리될 때, DPPH 자유라디칼 소거능, NO 생성 저해능 및 엘라스타아제 저해능이 우수한 카카두플럼 추출물을 제공할 수 있다.

상기 제1단계에서 카카두플럼에 효소를 첨가하여 효소 반응시킬 경우, 효소반응을 더욱 원활하게 하기 위해 물을 첨가한 후 교반하여 반응시킬 수 있다. 이때, 효소반응은 30 내지 55℃에서 30 내지 120분 동안 수행될 때, 전환 및 추출 효율 측면에서 바람직하다. 이때, 상기 온도 및 시간 범위를 벗어날 경우, 효소전환이 일어나지 않아 충분한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과를 나타낼 수 없어 바람직하지 않다.

본 발명의 제조방법에 있어서, 제2단계는 상기 추출 이후 에탄올을 첨가하여 효소를 침전시키고 원심분리한 다음, 필터 등의 일반적인 여과방법을 이용하여 침전된 효소를 제거한다.

또한, 제3단계는 효소 제거 후, 교반추출하여 효소처리된 카카두플럼 추출물을 수득하는 것으로서, 상기 교반추출은 80 내지 105℃에서 120 내지 240분 동안 수행한다. 이때, 상기 온도 및 시간 범위를 벗어날 경우, 유효성분이 충분히 용해되지 않아 충분한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과가 미흡하다.

상기 수득된 효소처리된 카카두플럼 추출물은 추출액, 상기 추출액을 건조시킨 분말, 상기 추출액을 농축여과한 농축물 등의 다양한 형태로 가공되어 이용될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다.

본 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 효소처리된 카카두플럼 추출물 제조

카카두플럼 분말(200mesh) 100g에 셀룰라아제(Novozyme) 1g 및 펙티나아제(Novozyme) 1g를 혼합하고, 물 300㎖을 첨가하여 50℃에서 120분 동안 추출하였다. 상기 수득된 추출물에 에탄올 3L를 첨가하여 효소를 침전시킨 후 원심분리기를 이용하여 8,000rpm, 20분간 분리 제거하였다. 남은 잔사 및 용액은 상온에서 3일 동안 교반추출한 다음 감압농축 및 동결건조하여 효소처리된 카카두플럼 추출물을 수득하였다.

<실시예 2∼5> 효소처리된 카카두플럼 추출물 제조

하기 표 1에 제시된 바와 같이, 셀룰라아제 및 펙티나아제의 효소 혼합비율을 변경한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일하게 수행하여 효소처리된 카카두플럼 추출물을 수득하였다.

<비교예 1> 카카두플럼 추출물 제조

효소 처리하지 않고 수행한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하되, 구체적으로, 카카두플럼 분말(200mesh) 100g에 물 300㎖을 첨가하여 80℃에서 12시간 동안 추출한 후 감압농축 및 동결건조하여 카카두플럼 추출물을 수득하였다.

<비교예 2> 카카두플럼 추출물 제조

카카두플럼 분말(200mesh) 100g에 셀룰라아제(Novozyme) 2g을 첨가하여 추출하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일하게 수행하여, 효소처리된 카카두플럼 추출물을 수득하였다.

<비교예 3> 카카두플럼 추출물 제조

카카두플럼 분말(200mesh) 100g에 펙티나아제(Novozyme) 2g을 첨가하여 추출하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일하게 수행하여, 효소처리된 카카두플럼 추출물을 수득하였다.

<비교예 4> 카카두플럼 추출물 제조

카카두플럼 분말(200mesh) 100g에 셀룰라아제(Novozyme) 1.5g 및 펙티나아제(Novozyme) 0.5g를 첨가하여 추출하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일하게 수행하여, 효소처리된 카카두플럼 추출물을 수득하였다.

<실험예 1> 세포독성 시험: WST assay

상기 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물을 이용하여 세포에 대한 자극성여부를 확인하기 위하여 대식세포(RAW 264.7)를 대상으로 세포독성실험을 수행하였다.

대식세포의 일종인 RAW 264.7cell을 1% 페니실린/스크랩토마이신, 10% FBS(Fetal bovineserum)가 포함된 DMEM 배지를 이용하여 24 웰 플레이트에 1.0×10⁴cell/well씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 셀에 상기 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물을 각 농도별(0%, 0.5%, 1%, 2%, 4%)로 배지와 혼합한 다음, 각 웰에 1㎖씩 첨가한 후 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 24시간 동안 반응시켰다. 이후 각 웰의 상등액만을 따로 취한 후 각 웰에 WST-1 에세이 용액(ez-cytox)을 첨가하여 배양기에서 2시간 반응시킨 후 ELISA reader기를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

세포 생존율은 시료를 처리하지 않은 처리군(무처리군)과 비교하여 하기 수학식 1을 이용하여 산출하였다.

수학식 1

세포 생존율(%) = (시료 처리군의 흡광도 / 시료 무처리군의 흡광도) × 100

도 1은 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 세포독성실험 결과를 도시한 것이다.

상기 결과, 대식세포(RAW 264.7)에 대한 세포생존율의 경우, 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물이 모든 농도조건에서도 세포 생존에 대한 독성을 나타내지 않아 화장품에 안전한 소재로 사용 가능함을 확인하였다.

<실험예 2> 항산화 효능 시험: 자유라디칼 생성 저해 활성

상기 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물을 이용하여 항산화 효과를 평가하기 위해 DPPH의 자유라디칼 소거능 실험을 수행하였다. 상기 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물을 50(㎍/㎖)의 농도로 희석한 다음, 0.1M DPPH 250㎕(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액을 혼합한 후 4℃에서 30분 동안 반응시켰다. 반응이 끝나면 각 샘플을 96 웰 플레이트에 담아 ELISA 기록기를 이용하여 520nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 양성 대조군으로 아스코르브산을 사용하였으며, 시료를 넣지 않은 경우를 대조군으로 하여 아래의 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거량(Free radical scavenging activity, %)을 산출하였다.

수학식 2

자유라디칼 소거능(%)=[100-(시료처리군의 흡광도/시료무처리군의 흡광도×100)]

도 2는 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 DPPH 자유라디칼 소거능 결과를 도시한 것이다.

그 결과, 비교예 1 대비 상기 실시예 1∼4에서 수득한 카카두플럼 추출물의 경우, DPPH 자유라디칼 소거능이 우수하고, 농도의존적으로 향상되었다. 그 중에서도 실시예 1의 경우 자유라디칼 소거능이 각 농도조건에서 현저하게 높아 항산화 효과가 우수함을 확인하였다.

<실험예 3> 항염 효능 시험: NO(Nitric oxide) 생성 저해 활성

상기 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물에 대한 항염증 활성도를 측정하기 위하여, 염증 유도반응에 의해 생성되는 NO의 농도를 측정하는 실험을 수행하였다.

대식세포의 일종인 RAW 264.7 셀을 1% 페니실린/스크랩토마이신 및 10% FBS(Fetal bovineserum)가 포함된 DMEM 배지를 이용하여 24 웰 플레이크에 1.0×10⁴ cell/well씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 셀에 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물을 50(㎍/㎖)농도로 배지와 혼합한 후, 각 웰에 1㎖씩 첨가하고 37℃, 5% CO₂조건의 배양기에서 24시간 반응시켰다. 이때, NO를 발현시키는 염증유발인자인 LPS(Lipo poly saccharide)를 1㎍/㎖의 농도로 같이 처리하고 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 반응시켰다. 이후 각 웰의 상등액만을 따로 취한 후 각 웰에 NO 검출키트를 이용하여 배양액 중 100㎖ 를 96웰 플레이트에 취하고 Griess reagent A(N-1-Naphthylethylenediamine (NEDHC)) 50㎕ 및 Griess reagent B(Sulfanilamide) 50㎕를 각각 넣어준 뒤 10분 동안 반응시킨 후, ELISA plate reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 3은 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 NO (Nitric oxide) 생성 저해능 결과를 나타낸 것이다.

그 결과, 비교예 1 대비 실시예 1∼4에서 수득한 카카두플럼 추출물에서 NO 생성 저해능이 우수하였으며 농도의존적으로 향상되었고, 그 중에서도 실시예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물은 NO 생성 저해능이 현저하게 높아 항염 효과가 우수함을 확인하였다.

<실험예 4> 주름 개선 시험: 엘라스테이즈 저해 활성

상기 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물에 대한 주름 개선 효과를 측정하기 위하여, 엘라스타아제 억제정도를 평가하였다. 상기 실시예 1∼4 및 비교예 1에서 수득한 카카두플럼 추출물을 50(㎍/㎖)의 농도로 희석한 다음, 10mM Tris-HCl 버퍼(pH8.0)에 녹인 0.6 mM 농도의 기질(N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide, S4760, Sigma)과 Elastase from porcine pancreas Type Ⅳ(E0258, Sigma) 0.4U/㎖를 혼합하여 25℃에서 5분 동안 반응시킨 후 96웰 플레이트에 담아 410nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 넣지 않은 경우를 대조군으로 하여 하기 수학식 3을 이용하여 산출하였다. 이때, 양성 대조군으로 올레오놀산(Oleanolic acid)를 사용하여 수행하였다.

수학식 3

엘라스테아제 저해활성(%) = 100-(시료처리군의 흡광도 / 시료무처리군의 흡광도 × 100)

도 4는 본 발명의 실시예 1∼4에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물 및 효소미처리된 비교예 1에서 제조된 추출물에 대한 엘라스타아제 저해능 결과를 도시한 것이다.

그 결과, 비교예 1 대비 실시예 1∼4에서 수득한 카카두플럼 추출물에서 엘라스타아제 저해능이 우수하였으며, 추출물 농도에 비례하여 향상된 결과를 확인하였다.

<실시예 6> 효소처리된 카카두플럼 추출물을 함유한 화장료 제조

1) 스킨 조성물 제조

상기 실시예 1에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물을 함유하고, 하기 표 2에 기재된 조성으로부터 통상의 방법에 의하여 스킨 조성물을 제조하였다.

2) 로션 조성물 제조

상기 실시예 1에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물을 함유하고, 하기 표 3에 기재된 조성으로부터 통상의 방법에 의하여 로션 조성물을 제조하였다.

3) 에센스 조성물 제조

상기 실시예 1에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물을 함유하고, 하기 표 4에 기재된 조성으로부터 통상의 방법에 의하여 에센스 조성물을 제조하였다.

4) 크림 조성물 제조

상기 실시예 1에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물을 함유하고, 하기 표 5에 기재된 조성으로부터 통상의 방법에 의하여 크림 조성물을 제조하였다.

5) 파운데이션 조성물 제조

상기 실시예 1에서 제조된 효소처리된 카카두플럼 추출물을 함유하고, 하기 표 6에 기재된 조성으로부터 통상의 방법에 의하여 파운데이션 조성물을 제조하였다.

이상에서 본 발명은 기재된 구체예에 대해서만 상세히 설명되었지만 본 발명의 기술사상 범위 내에서 다양한 변형 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속함은 당연한 것이다.

Claims (10)

1. 효소처리된 카카두플럼 추출물을 유효성분으로 함유하되,
   상기 효소가 셀룰라아제 및 펙티나아제 1:1 중량비로 이루어진 혼합효소이고, 상기 혼합효소로 처리된 카카두플럼 추출물이 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 20중량% 유효성분으로 함유되어,
   DPPH 자유라디칼 소거능, NO (Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제 저해능이 우수한 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물.
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6. 제1항에 있어서, 상기 효소처리된 카카두플럼 추출물이 스킨, 에센스, 로션, 크림, 파운데이션, 색조 화장료 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형에 유효성분으로 함유된 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물.
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