KR102576662B1 - 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물 - Google Patents

흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 유효성분인 흑오미자 추출물은 RBL-2H3 비만세포를 IgE로 감작시킨 후, DNP-HSA(dinitropnenyl-human serum albumin) 및 비스(2-에틸헥실)프탈레이트[Bis(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]로 자극하여 증가시킨 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하고, 칼슘운반체 A23187(Calcium Ionophore A23187) 및 비스페놀 A(bisphenol A, BPA)에 의해 증가된 인터루킨-4(interleukin-4, IL-4)의 분비를 억제하는 효과가 우수하므로, 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선을 위한 화장품, 건강기능식품 또는 환경호르몬에 의해 유도된 면역과민반응에 의한 피부질환의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물{Composition for improving skin condition damaged by environmental hormone comprising Schizandra nigra extract as effective component}
본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물에 관한 것이다.
피부의 면역과민반응은 우리나라를 포함한 산업이 발달하고 서구화된 나라에서 흔히 나타나고 있다. 대개 유소아기에 시작하여 장기간 지속되며, 사춘기까지 약 90%는 자연 치유되는 경향이 있으나 나머지 10%의 경우 성인이 되어서도 지속될 수 있다. 특히 어린 시절에 발생하여 장기간 지속되기 때문에 정상적인 성장발달과정을 저해할 수 있으며 여러 가지 환경 항원에 대한 노출이나 심한 소양감으로 인해 긁는 행위 자체가 피부상태를 더욱 악화시킨다는 특성상 이를 돌보는 가족들에게 육체적 피로뿐만 아니라 정서적인 면, 가족 관계 및 사회생활 등 여러 가지 면에서 영향을 끼치게 된다. 이는 전반적으로 삶의 질에도 많은 영향을 끼치는 것으로 알려져 있다. 또한, 장기간의 지속적인 치료가 필요하다는 점에서 경제적 비용 또한 상당하다. 따라서 피부의 면역과민반응 상태를 개선시킬 수 있는 물질은 피부의 정상적인 기능 유지에 도움을 줄 수 있으며, 더 나아가 아토피피부염으로 진행될 수 있는 요인을 억제할 수 있으므로 보건학적으로 중요한 의미를 지닌다.
과민반응이란 특정 항원에 대해 과도한 면역반응이 일어나 조직 손상 등의 부적절한 피해를 주는 면역 반응을 지칭한다. 과민반응은 제1형부터 제4형까지 분류되며, 제1형 과민반응은 알레르기로 잘 알려져 있다. 현재 알레르기는 '다양한 항원에 대한 면역계의 반응으로 발생하는 질병'으로 정의된다. 알레르기는 과민반응(hypersensitivity reactions)으로서 면역 반응들의 여러 유해반응들 중 하나이며, 이런 유해 반응들은 조직 손상을 일으키며 심각한 질병을 일으킬 수 있다.
알레르기를 일으키는 대상인 알레르겐의 종류로는 먼지, 꽃가루, 복숭아, 곰팡이 등이 있으며, 요즘에는 화학성분이나 건축물의 독성 등 환경호르몬에 의한 알레르기가 문제화되고 있다. 특히 환경호르몬은 화학물질로, 생물체에 흡수되면 내분비계 기능을 방해하거나 혼란스럽게 한다.
피부는 대다수 알레르겐들의 출입구에 대한 효과적인 방어벽을 형성하나, 소량의 알레르겐이 국소적으로 주입되면 방어벽은 무너질 수 있다. 표피나 진피로의 알레르겐 침입은 국소적인 알레르기 반응을 유발한다. 알레르겐에 의해 피부에서 국소적으로 비만세포(mast cell)가 활성화되면 즉시 혈관투과성이 증가되어 수분(혈장 단백질과 혈장액)을 혈관 외로 이동시키며 부종을 일으킨다. 알레르겐에 의해 활성화된 비만세포가 분비한 히스타민은 피부에 가려움을 동반하는 붉은 팽창을 일으킨다. 때로는 보다 오래 지속되는 염증반응이 피부에서 나타나는데, 이것은 주로 알레르기 소인이 있는 어린이들에게서 발생한다. 이들 어린이들은 습진 혹은 아토피피부염이라 부르는 지속적인 피부 발적이 생기는 만성염증을 유발한다.
한편, 흑오미자(Schizandra nigra)는 일본과 우리나라 남부지방, 특히 제주도에서 자생하고 있는 식물로서, 흑오미자의 목부를 욕탕료로 사용한다고 알려져 있으나, 흑오미자의 용도에 관한 연구는 매우 미비한 실정이다.
피부상태 개선 관련 선행기술로는 한국등록특허 제1999258호에 효소 처리된 천마 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부상태 개선용 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제2236944호에 갈락토 올리고당, 또는 갈락토 올리고당 및 콜라겐 트리펩타이드를 포함하는 면역기능 개선 및 피부상태 개선용 기능성 식품조성물 및 화장료 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부상태 개선, 특히 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물을 제공하고, 상기 흑오미자 추출물이 환경호르몬에 의해 증가된 면역과민반응을 억제하는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 유도된 면역과민반응에 의한 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 유효성분인 흑오미자 추출물은 RBL-2H3 비만세포를 IgE로 감작시킨 후, DNP-HSA(dinitropnenyl-human serum albumin) 및 비스(2-에틸헥실)프탈레이트[Bis(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]로 자극하여 증가시킨 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하고, 칼슘운반체 A23187(Calcium Ionophore A23187) 및 비스페놀 A(bisphenol A, BPA)에 의해 증가된 인터루킨-4(interleukin-4, IL-4)의 분비를 억제하는 효과가 우수하였다.
도 1은 본 발명의 흑오미자 추출물, HSA(human serum albumin) 및 DEHP의 세포 독성을 확인한 결과이다. (a)는 흑오미자 잎 에탄올 추출물(HR1910-L-70E) 처리 결과이고, (b)는 흑오미자 줄기 에탄올 추출물(HR1910-B-70E) 처리 결과이며, (c)는 흑오미자 열매 에탄올 추출물(HR1910-F-70E) 처리 결과이다.
도 2는 본 발명의 흑오미자 추출물의 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 분비 억제 효과를 확인한 결과이다. HSA 및 DEHP는 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 분비 유발 인자이고, PP2(Src kinase inhibitor)는 양성대조군이다. (a)는 흑오미자 잎 에탄올 추출물(HR1910-L-70E) 처리 결과이고, (b)는 흑오미자 줄기 에탄올 추출물(HR1910-B-70E) 처리 결과이며, (c)는 흑오미자 열매 에탄올 추출물(HR1910-F-70E) 처리 결과이다.
도 3은 본 발명의 흑오미자 추출물의 인터루킨-4(interleukin-4, IL-4) 분비 억제 효과를 확인한 결과이다. 칼슘운반체 A23187(Calcium Ionophore A23187) 및 BPA는 인터루킨-4 분비 유발 인자이고, PP2(Src kinase inhibitor)는 양성대조군이다. (a)는 흑오미자 잎 에탄올 추출물(HR1910-L-70E) 처리 결과이고, (b)는 흑오미자 줄기 에탄올 추출물(HR1910-B-70E) 처리 결과이며, (c)는 흑오미자 열매 에탄올 추출물(HR1910-F-70E) 처리 결과이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 환경호르몬은 어떠한 종류라도 상관없고, 바람직하게는 비스페놀 A(bisphenol A, BPA) 또는 비스(2-에틸헥실)프탈레이트[Bis(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]인 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선은 환경호르몬에 의해 유발된 면역과민반응에 의한 피부상태를 개선하는 것일 수 있고, 면역과민반응이란 특정 항원에 대해 과도한 면역반응이 일어나 조직 손상 등의 부적절한 피해를 주는 면역 반응을 지칭한다. 본 발명의 일 구현 예에서, 환경호르몬에 의해 유발된 면역과민반응에 의한 피부상태 개선은 면역과민반응에 의해 알레르기 또는 피부염이 유발된 피부상태를 개선하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 흑오미자 추출물은 흑오미자의 어느 부위든지 사용할 수 있고, 바람직하게는 흑오미자 잎, 줄기 또는 열매 부위를 사용하여 추출할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 흑오미자 추출물의 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 에탄올인 것이지만, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 추출물은 흑오미자 건조물 1 중량부에 대하여 50~200 중량부의 에탄올을 첨가한 후 추출한 다음 여과한 후, 상기 여과물을 10~20brix로 농축하는 제조과정을 통해 획득할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 추출물의 추출방법은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 흑오미자 추출물은 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 및 IL-4의 분비를 억제하는 효과가 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 피부외용 연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 장기간 섭취하는 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 텍스트린, 사이클로텐스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마린, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린 또는 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬에 의해 유도된 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 환경호르몬에 의해 유도된 피부질환은 환경호르몬에 의한 면역과민반응을 통해 발생한 것일 수 있고, 바람직하게는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 두드러기, 가려움증 및 접촉성 피부염 중에서 선택된 1종 이상인 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 흑오미자 추출물의 제조
1) 흑오미자 잎 에탄올 추출물의 제조
흑오미자 잎(제주산) 건조물 1 중량부에 대하여 100 중량부의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 100℃에서 4시간 동안 가열하여 추출한 다음 여과하였다. 상기 여과물은 농축기를 이용하여 10~15brix로 농축한 다음 동결건조하여 실험의 시료(HR1910-L-70E)로 사용하였다.
2) 흑오미자 줄기 에탄올 추출물의 제조
흑오미자 줄기(제주산) 건조물 1 중량부에 대하여 100 중량부의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 100℃에서 4시간 동안 가열하여 추출한 다음 여과하였다. 상기 여과물은 농축기를 이용하여 10~15brix로 농축한 다음 동결건조하여 실험의 시료(HR1910-B-70E)로 사용하였다.
3) 흑오미자 열매 에탄올 추출물의 제조
흑오미자 열매(제주산) 건조물 1 중량부에 대하여 100 중량부의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 100℃에서 4시간 동안 가열하여 추출한 다음 여과하였다. 상기 여과물은 농축기를 이용하여 10~15brix로 농축한 다음 동결건조하여 실험의 시료(HR1910-F-70E)로 사용하였다.
실시예 1. 흑오미자 추출물의 세포 독성 확인
상기 제조예 1에서 제조된 흑오미자 추출물의 세포 독성을 인간 각질형성세포(HaCaT)를 이용하여 확인하였다.
Ez-cytox(Dozen, Korea)를 이용하여 제조사의 프로토콜에 따라 MTT 분석을 수행하였고, 살아있는 세포 내 미토콘드리아의 탈수소효소에 의해 테트라졸륨염(Tetrazolium salt, WST-1)이 포르마잔(formazan)으로 변화하는 것을 이용하여, 생성된 포르마잔의 농도를 분광광도계(spectrophotometer)로 측정함으로써 세포 생존률을 확인하였다.
HaCaT 세포를 5x105 cells/mL 농도로 96웰 플레이트에 분주한 후 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 100μM DEHP[Bis(2-ethylhexyl)phthalate]와 상기 제조예 1의 시료(100, 200㎍/mL)를 처리한 뒤 24시간 동안 추가 배양하였다. 배양 후 10%(v/v) MTT 시약이 포함된 배지로 교체하였고, 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후, 마이크로플레이트 리더기(microplate reader, Epoch, Biotek)로 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료에 대한 세포 생존율 분석을 통한 세포 독성 평가는 3회 반복하여 측정하였으며, 그에 대한 평균값과 표준편차를 산출하였다.
그 결과, 도 1에 개시된 바와 같이 본 발명의 흑오미자 추출물은 세포 독성이 나타나지 않았다.
실시예 2. 흑오미자 추출물의 환경호르몬 처리에 의해 증가된 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 분비 억제 효과 분석
RBL-2H3(Rat Basophil Leukemia) 세포는 10%(v/v) FBS(Fetal Bovin Serum, Hyclone USA) 및 100units/mL 페니실린/스트렙토마이신(Hyclone, USA)이 함유된 DMEM(Dulbecco’modified of Eagle’medium, Hyclone,USA) 배지를 사용하여, 37℃, 5% CO2 존재하의 배양기(Thermo, Forma, Germany)에서 배양하였다.
RBL-2H3 세포를 5x105 cells/mL이 되도록 희석한 후, 희석한 세포에 IgE를 20ng/mL이 되도록 처리하였다. 그 후, 24웰 플레이트에 각 웰당 500㎕씩 분주한 후, 하루 동안 방치하여 세포를 감작시켰다. 그 후, 500㎕의 시라가니안 버퍼(Siraganian buffer; 119mM NaCl, 5mM KCl, 5.6mM 글루코오스, 0.4mM MgCl2, 25mM PIPES, 40mM NaOH, 1mM CaCl2, 0.1% BSA, pH 7.2)로 세정한 후, 각 웰에 140㎕의 시라가니안 버퍼, 20㎕의 제조예 1의 흑오미자 추출물 및 20㎕의 DEHP를 처리한 다음 30분 동안 반응시켰다. 양성대조군으로는 제조예 1의 흑오미자 추출물 대신 PP2(Src kinase inhibitor)를 사용하였다. 반응 후, 1㎍/mL의 DNP-HSA를 20㎕ 첨가한 다음 1시간 동안 추가 반응시켰다. 1시간 후, 상층액을 50㎕ 취해 96웰 플레이트로 옮기고, 1mM p-NAG(4-nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide) 50㎕를 첨가한 다음 2시간 동안 반응시킨 후, 0.1M 카보네이트 버퍼(carbonate buffer) 100㎕를 넣고 반응을 종결시킨 다음 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
실험에서 얻어진 통계적 유의성은 GraphPad Prism 8.0(Graph Pad software, San Diego, CA, USA) package program을 이용하여 실험군 당 평균과 표준편차로 표시하였고, Student's t-test와 ANOVA(one way analysis of varance) test를 실시하여 유의성을 검정하였다.
그 결과, 도 2에 개시된 바와 같이 HSA 및 환경호르몬인 DEHP 처리에 의해 증가된 베타-헥소사미니다아제 분비는 본 발명의 제조예 1의 흑오미자 추출물 처리시 현저히 감소하는 것을 확인하였다.
베타-헥소사미니다아제 분비는 100㎍/mL의 흑오미자 잎 에탄올 추출물 처리시 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 약 68%, 200㎍/mL 처리시 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 약 68% 억제되었다(도 2a).
또한, 100㎍/mL의 흑오미자 줄기 에탄올 추출물 처리시 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 약 69%, 200㎍/mL 처리시 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 약 71% 억제되었다(도 2b).
또한, 100㎍/mL의 흑오미자 열매 에탄올 추출물 처리시 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 약 72%, 200㎍/mL 처리시 HSA 및 DEHP 처리군(시료 무처리군) 대비 약 74% 억제되었다(도 2c).
실시예 3. 흑오미자 추출물의 환경호르몬 처리에 의해 증가된 인터루킨-4(interleukin-4, IL-4) 분비 억제 효과 분석
RBL-2H3 세포를 24웰 플레이트에 5x105cells/mL이 되도록 분주한 후, 24시간 동안 배양하였다. 그 후 신선한 배지로 교환하고, 100μM BPA 및 제조예 1의 흑오미자 추출물을 처리하여 1시간 동안 반응시킨 후, 칼슘운반체 A23187(Calcium Ionophore A23187)을 1μM 처리한 다음 30분 동안 배양하였다. 양성대조군으로는 제조예 1의 흑오미자 추출물 대신 PP2(Src kinase inhibitor)를 사용하였다. 그 후, IL-4 ELISA 키트(R&D SYSTEM, SM4000B)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 실험한 다음 ELISA 리더기를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정함으로써, 사이토카인 함량을 확인하였다.
실험에서 얻어진 통계적 유의성은 GraphPad Prism 8.0(Graph Pad software, San Diego, CA, USA) package program을 이용하여 실험군 당 평균과 표준편차로 표시하였고, Student's t-test와 ANOVA(one way analysis of varance) test를 실시하여 유의성을 검정하였다.
그 결과, 도 3에 개시된 바와 같이 BPA 및 A23187 처리에 의해 증가된 IL-4의 분비는 본 발명의 제조예 1의 흑오미자 추출물 처리시 현저히 감소하는 것을 확인하였다.
IL-4 분비는 100㎍/mL의 흑오미자 잎 에탄올 추출물 처리시 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 약 58%, 200㎍/mL 처리시 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 약 63% 억제되었다(도 3a).
또한, 100㎍/mL의 흑오미자 줄기 에탄올 추출물 처리시 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 약 52%, 200㎍/mL 처리시 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 약 67% 억제되었다(도 3b).
또한, 100㎍/mL의 흑오미자 열매 에탄올 추출물 처리시 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 약 57%, 200㎍/mL 처리시 BPA 및 A23187 처리군(시료 무처리군) 대비 약 67% 억제되었다(도 3c).

Claims (9)

  1. 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 비스페놀 A(bisphenol A, BPA) 또는 비스(2-에틸헥실)프탈레이트[Bis(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]의 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선은 비스페놀 A(bisphenol A, BPA) 또는 비스(2-에틸헥실)프탈레이트[Bis(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]의 환경호르몬에 의해 유발된 면역과민반응에 의한 피부상태를 개선하는 것을 특징으로 하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 화장료 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 환경호르몬에 의해 유발된 면역과민반응에 의한 피부상태는 알레르기 또는 피부염이 유발된 피부상태인 것을 특징으로 하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 흑오미자 추출물의 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 화장료 조성물.
  6. 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 비스페놀 A(bisphenol A, BPA) 또는 비스(2-에틸헥실)프탈레이트[Bis(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]의 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 건강기능식품 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 환경호르몬에 의해 손상된 피부상태 개선용 건강기능식품 조성물.
  8. 흑오미자 추출물을 유효성분으로 함유하는 비스페놀 A(bisphenol A, BPA) 또는 비스(2-에틸헥실)프탈레이트[Bis(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]의 환경호르몬에 의해 유도된 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 환경호르몬에 의해 유도된 피부질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 두드러기, 가려움증 및 접촉성 피부염 중에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 환경호르몬에 의해 유도된 면역과민반응에 의한 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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