KR102566131B1

KR102566131B1 - 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물

Info

Publication number: KR102566131B1
Application number: KR1020210120707A
Authority: KR
Inventors: 마진열; 김지혜; 김태인; 조원경
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Priority date: 2021-09-10
Filing date: 2021-09-10
Publication date: 2023-08-11
Also published as: KR20230037764A

Abstract

본 발명은 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 인삼 및 뽕나무(상백피 또는 상지) 혼합 추출물은 인삼, 상지 또는 상백피 단독 추출물에 비해 티로시나아제 활성과 관련된 모노페놀레이즈 및 디페놀레이즈 활성을 억제하는 효과가 현저하고, 멜라노마 세포에서 멜라닌의 생성을 억제하는 효과가 우수하므로, 피부 미백을 위한 화장품, 멜라닌 색소 침착 질환 개선용 건강기능식품 또는 멜라닌 색소 침착 질환 치료제의 소재로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물{Composition for skin whitening comprising mixed extract of ginseng and mulberry as effective component}

본 발명은 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

고대부터 희고 밝은 피부는 아름다움뿐만 아니라 건강과 명성의 상징으로 인식해 왔다. 표피 가장 아래 기저층의 멜라닌 세포는 피부의 다양한 자극 요인에 의해 멜라닌을 만들어 위층으로 보내게 되는데, 이 멜라닌이 각질층에 도달하면 피부가 검게 보인다. 멜라닌 형성에 관여하는 요인으로는 난포 호르몬, 황체 호르몬, 색소 세포 자극 호르몬, 햇빛의 자외선, 스트레스 그리고 유전 등이 있다.

불필요해진 멜라닌 색소를 재빨리 배출해서 그 사람이 지니고 있는 본래 피부의 투명함을 되찾는 일을 피부 미백이라 한다. 식품의약품안전청에 닥나무 추출물, 알부틴, 에틸아스코빌에텔, 유용성 감초 추출물, 아스코빌글루코사이드, 나이아신아마이드, 알파-비사볼올 및 아스코빌테트라이소팔미테이트가 미백 성분으로 등록되어 있으며, 이와 같은 물질을 이용해 로션이나 액제, 크림, 마스크팩 등으로 만드는 것이 미백화장품이다.

닥나무 추출물, 알부틴, 알파-비사볼올 및 유용성 감초 추출물은 멜라닌을 만드는데 관련된 효소인 티로시나아제가 활성화되는 것을 억제하고, 아스코빌글루코사이드, 에틸아스코빌에텔 및 아스코빌테트라이소팔미테이트는 티로시나아제 효소에 자극받은 티로신이 산화되는 것을 억제하며, 나이아신아마이드는 이미 생성된 멜라닌이 멜라노사이트에서 각질형성세포로 넘어가는 단계를 억제하여 멜라닌이 실제 피부 세포에 들어가는 마지막 단계를 막는다.

미용이 아닌 의료 목적으로 사용되는 미백 관련 물질의 대표는 의약품으로 처방되는 하이드로퀴논이다. 하이드로퀴논은 주로 피부 연고로 사용된다. 한국에서 이 물질이 4% 이상 함유된 연고를 구입하려면 반드시 의사의 처방이 있어야 하며, 2% 연고는 처방전 없이도 약국에서 구입할 수 있다. 의료 목적으로 사용되는 하이드로퀴논 연고는 미백화장품과는 다르게 멜라닌이 있는 피부 세포를 직접 파괴해 새로운 피부 세포가 자라도록 돕는다.

하지만, 상기 물질들은 비교적 높은 농도에서만 티로시나아제 활성 저해 효과가 나타나거나, 안정성이 낮아 효과가 오래 지속되지 못하는 등 제품의 적용 범위가 좁다는 문제점이 있으며, 하이드로퀴논은 피부자극 및 안정성 문제로 인하여 화장료에서의 사용이 제한되고 있다.

한편, 인삼(Panax ginseng)은 오가피과(Araliaceae) 파낙스속, 인삼종으로 다년생 초본류로서, 한방에서는 그 뿌리를 인삼(Ginseng radix)이라 하며 약용으로 사용하고 있다. 인삼은 고대로부터 건강유지 목적으로 의약품 또는 전통식품으로 사용하였으며, 특히 우리나라의 고려인삼은 세계적으로도 인정받아 고려시대에 널리 유럽과 아랍지역까지 무역 되어왔던 토산품이다.

한편, 뽕나무(Morus alba)는 장미목 뽕나무과의 식물로서 잎, 뿌리, 열매 등이 예로부터 여러 약리활성이 있다고 알려져 왔다. 동의보감에 "뽕잎은 따뜻하고 독이 없으며, 각기와 수종을 없애주고 대·소장을 이롭게 하며 하기(기운 또는 흥분을 가라앉힘)하고 풍통을 없앤다."라고 기록되어 있고, 중국 의서에는 "풍을 쫓아주고 폐의 열을 없애준다. 감기로 오는 열과 두통, 기침을 치료해 주고 가래를 없애준다. 눈과 간을 깨끗하게 해주고 음허와 풍열로 생긴 눈병을 치료해 주고 눈의 충혈, 건조, 통증 등을 치료해 준다"고 기록되어 있다.

미백과 관련된 선행기술로는 한국등록특허 제1685579호에 측백엽을 포함하는 천연유래물질을 이용한 피부 미백 화장료 조성물의 제조방법 및 이에 따라 제조된 피부 미백 화장료 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1903983호에 금강송 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관해서는 전혀 개시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 인삼 및 상지 혼합 추출물; 또는 인삼 및 상백피 혼합 추출물;을 유효성분으로 함유하는 미백용 조성물을 제공하고, 상기 인삼 및 상지 혼합 추출물이 인삼 단독 또는 상지 단독에 비해 미백 효과가 현저하고, 인삼 및 상백피 혼합 추출물이 인삼 단독 또는 상백피 단독에 비해 미백효과가 현저하다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

도 1은 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼 추출물; 상백피 추출물; 인삼 및 상백피 혼합 추출물; 처리군의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인한 결과이다. 최종 농도가 20μM이 되도록 포스콜린(forskolin)을 처리하여 멜라닌 생성을 유도하였고, 최종 농도가 100μM이 되도록 코직산(kojic acid)을 처리하여 양성대조군으로 사용하였다. 각각의 추출물은 12.5㎍/mL 처리하였다. ***은 포스콜린 단독 처리군; 인삼+포스콜린 처리군; 상백피+포스콜린 처리군; 대비 인삼 및 상백피 혼합 추출물+포스콜린 처리군;의 멜라닌 생성량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
도 2는 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼 추출물; 상지 추출물; 인삼 및 상지 혼합 추출물; 처리군의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인한 결과이다. 최종 농도가 20μM이 되도록 포스콜린(forskolin)을 처리하여 멜라닌 생성을 유도하였고, 최종 농도가 100μM이 되도록 코직산(kojic acid)을 처리하여 양성대조군으로 사용하였다. 각각의 추출물은 12.5㎍/mL 처리하였다. ***은 포스콜린 단독 처리군; 인삼+포스콜린 처리군; 상지+포스콜린 처리군; 대비 인삼 및 상지 혼합 추출물+포스콜린 처리군;의 멜라닌 생성량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, ***은 p<0.001이다.
도 3은 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼 추출물; 상백피 추출물; 인삼 및 상백피 혼합 추출물; 처리군의 모노페놀레이즈 활성(A) 및 디페놀레이즈 활성(B)을 확인한 결과이다. 각 추출물은 10㎕ 처리하였다.
도 4는 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼 추출물; 상지 추출물; 인삼 및 상지 혼합 추출물; 처리군의 모노페놀레이즈 활성(A) 및 디페놀레이즈 활성(B)을 확인한 결과이다. 각 추출물은 10㎕ 처리하였다.
도 5는 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼 및 상백피 혼합 추출물의 혼합비율(w/w)에 따른 디페놀레이즈 활성을 확인한 결과이다. 각 추출물은 10㎕ 처리하였다. *, **, ***은 시료 무처리군; 인삼 및 상백피가 2:3, 1:1의 중량비로 혼합된 혼합 추출물 처리군; 대비 인삼 및 상백피가 3:2 중량비로 혼합된 혼합 추출물 처리군;의 디페놀레이즈 활성이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다.
도 6은 본 발명의 제조방법으로 제조된 인삼 및 상지 혼합 추출물의 혼합비율(w/w)에 따른 디페놀레이즈 활성을 확인한 결과이다. 각 추출물은 10㎕ 처리하였다. **, ***은 시료 무처리군; 인삼 및 상지가 2:3, 1:1의 중량비로 혼합된 혼합 추출물 처리군; 대비 인삼 및 상지가 3:2 중량비로 혼합된 혼합 추출물 처리군;의 디페놀레이즈 활성이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다.

본 발명의 목적을 제공하기 위하여, 본 발명은 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 뽕나무는 뽕나무의 어느 부위라도 사용 가능하지만, 바람직하게는 상지(뽕나무 어린 가지) 또는 상백피(뽕나무 뿌리껍질)인 것이고, 더욱 바람직하게는 상지를 이용하는 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물은 인삼 3 중량부에 대하여 뽕나무 1~5 중량부를 혼합하여 추출한 것일 수 있고, 바람직하게는 인삼 3 중량부에 대하여 뽕나무 1.5~2.5 중량부를 혼합하여 추출한 것일 수 있고, 더 바람직하게는 인삼 3 중량부에 대하여 뽕나무 2 중량부를 혼합하여 추출한 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.

상기 혼합 추출물의 추출 용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물일 수 있고, 바람직하게는 에탄올을 용매로 사용하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 피부 미백용 화장료 조성물은 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 형광 물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.

상기 멜라닌 색소 과다 침착(hyperpigmentation)은 피부 또는 손·발톱의 특정 부위에서 멜라닌의 과도한 증가에 의해 다른 부위에 비해 검게 또는 어둡게 되는 것을 의미한다. 상기 멜라닌 색소 과다 침착 질환은 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른흑피증(cyanic melasma), 약물 사용 후의 과다색소침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma) 또는 찰상 및 화상을 비롯한 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소 침착 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 이너뷰티 푸드(inner beauty food)의 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티는 '먹는 화장품 또는 뷰티 푸드'로 일컬어지는 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 전술한 화장료 조성물을 포함하는 화장품과 본 발명의 화합물을 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품만 사용하는 것에 비해 피부 미백 효과가 월등히 높아져 멜라닌 색소 과다 침착 질환에 더욱 효과적일 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 하나의 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.

상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등), 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 조합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제제, 외용제, 좌제 및 주사제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여의 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

제조예 1. 인삼 및 뽕나무 혼합 추출물의 제조

1) 인삼 및 상백피 혼합 추출물의 제조(실험예 1)

인삼 및 상백피 원물을 3:2 중량비로 혼합한 후, 혼합물 50g에 대하여 300mL의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 다음 40℃에서 24시간 동안 진탕하여 추출하였고, 이후 추출물을 여과한 다음 70%(v/v) 에탄올을 90mL 첨가한 후, 농축한 뒤 동결건조하여 보관하였다. 동결건조된 추출물 분말은 DMSO에 용해한 후 실험에 사용하였다.

2) 인삼 및 상지 혼합 추출물의 제조(실험예 2)

인삼 및 상지 원물을 3:2 중량비로 혼합한 후, 혼합물 50g에 대하여 300mL의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 다음 40℃에서 24시간 동안 진탕하여 추출하였고, 이후 추출물은 여과한 다음 70%(v/v) 에탄올을 90mL 첨가한 후, 농축한 뒤 동결건조하여 보관하였다. 동결건조된 추출물 분말은 DMSO에 용해한 후 실험에 사용하였다.

3) 인삼 추출물의 제조(비교예 1)

인삼 원물 50g에 대하여 300mL의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 다음 40℃에서 24시간 동안 진탕하여 추출하였고, 이후 추출물을 여과한 다음 70%(v/v) 에탄올을 90mL 첨가한 후, 농축한 뒤 동결건조하여 보관하였다. 동결건조된 추출물 분말은 DMSO에 용해한 후 실험에 사용하였다.

4) 상백피 추출물의 제조(비교예 2)

상백피 원물 50g에 대하여 300mL의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 다음 40℃에서 24시간 동안 진탕하여 추출하였고, 이후 추출물을 여과한 다음 70%(v/v) 에탄올을 90mL 첨가한 후, 농축한 뒤 동결건조하여 보관하였다. 동결건조된 추출물 분말은 DMSO에 용해한 후 실험에 사용하였다.

5) 상지 추출물의 제조(비교예 3)

상지 원물 50g에 대하여 300mL의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 다음 40℃에서 24시간 동안 진탕하여 추출하였고, 이후 추출물을 여과한 다음 70%(v/v) 에탄올을 90mL 첨가한 후, 농축한 뒤 동결건조하여 보관하였다. 동결건조된 추출물 분말은 DMSO에 용해한 후 실험에 사용하였다.

실시예 1. 멜라닌 생성 저해 효과

상기 제조예 1의 추출물들의 멜라닌 생성 저해 효과를 측정하기 위해, 마우스 유래 멜라닌 생성 세포(B16 melanoma)에 포스콜린(forskolin) 및 제조예 1 추출물을 처리한 후 포스콜린에 의해 유도된 멜라닌 생성의 억제효과를 확인하였다

구체적으로, B16 멜라노마 세포(KCLB, Seoul, Korea)를 6-웰 플레이트(well plate)에 접종(seeding)하고, 10%(v/v) 우태아혈청(fetal bovine serum) 및 항생제가 첨가된 DMEM(Dulbecco Modified Eagle Medium) 배양 배지를 사용하여, 37℃, 5% CO₂의 조건하에서 최대 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 기존 배지를 제거하고 상기 제조예 1의 추출물(12.5㎍/mL) 또는 코직산(100μM, 양성대조군)을 함유한 배지로 교체하였고, 1시간 후 포스콜린(Sigma, USA)을 최종 농도가 20μM이 되도록 하여 세포 배양 배지에 첨가하였다. 그 후, 동일한 조건하에서 세포가 웰의 바닥에 약 80% 이상 찰 때까지 배양하였다. 포스콜린 처리 후 총 4일 동안 배양하여 멜라닌 생성이 완료된 시점에 세포 외로 분비된 멜라닌의 양을 측정하였다. 배양 배지는 에펜드로프 튜브(effendrof tube)에 1mL씩 옮겨 담고, 사진으로 찍어 멜라닌 합성 정도를 육안상으로 비교하였고, 수집한 배양액을 마이크로 플레이트 리터(microplate reader; Molecular Devices, USA)를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정하고 하기 식에 따라 상대적인 멜라닌 함량을 계산하였다.

시료 및 포스콜린을 처리하지 않은 세포, 시료는 처리하지 않고, 포스콜린만 처리한 세포 및 코지산 및 포스콜린을 처리한 세포는 대조군으로 사용하였다.

[식 1]

상대적인 멜라닌 양(%)=(시험군 흡광도/양성대조군 흡광도)X100

그 결과, 도 1 및 도 2에 개시된 바와 같이 인삼 및 상백피 추출물 처리군, 인삼 및 상지 추출물 처리군은 인삼, 상백피, 상지 추출물 단독 처리군에 비해 포스콜린에 의해 유도된 멜라닌의 생성을 억제하는 효과가 현저하였다.

실시예 2. 생체 외 티로시나아제 분석

1) 혼합물에 의한 효과

미백 활성 측정을 위해, 버섯 유래 티로시나아제 활성 실험을 진행하였다. 티로시나아제는 모노페놀형 구조물질을 카테콜형 구조물질로 수산화하는 일차 수산화반응 및 모노페놀형 구조물질에서 생변환된 카테콜형 구조물질을 멜라닌 색소 전구체인 퀴논형 물질로 산화시키는 이차 산화반응을 연속하여 진행하므로, 모노페놀레이즈 활성 및 디페놀레이즈 활성으로 버섯 유래 티로시나아제 활성을 확인하였다.

생체 외 티로시나아제 분석을 위해, 80㎕의 0.1M 포타슘 포스페이트 버퍼(pH 6.8)를 96-웰 플레이트에 넣고, 10㎕의 버섯 유래의 티로시나아제, 10㎕의 제조예 1의 추출물 시료를 상기 웰에 첨가하였다. 그 후, L-티로신 또는 L-DOPA를 100㎕씩 상기 웰에 첨가하여 기질로 사용하였다. 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후, 마이크로플레이트 리더기(Molecular Devices, USA)를 이용하여 475nm에서 각 웰의 흡광도를 측정하였다. 각 측정치는 미처리 대조군에 대한 대비변화율(%)로 표시하여 티로시나아제 상대 활성으로 표현하였다.

그 결과, 도 3 및 도 4에 개시된 바와 같이 인삼 및 상백피 추출물 처리군, 인삼 및 상지 추출물 처리군은 인삼, 상백피, 상지 추출물 단독 처리군에 비해 모노페놀레이즈 및 디페놀레이즈의 활성을 억제하는 효과가 현저하였다.

2) 혼합 비율에 의한 효과

제조예 1과 동일한 방법으로 제조하되, 혼합 비율만 달리하여 인삼 및 상백피 혼합 추출물, 인삼 및 상지 혼합 추출물을 제조하였고, 인삼 및 상백피, 인삼 및 상지 혼합물의 혼합 비율에 따른 디페놀레이즈 활성 억제 효과를 확인하였다.

그 결과, 도 5 및 도 6에 개시된 바와 같이 인삼 및 상백피; 또는 인삼 및 상지가 2:3, 1:1 중량비로 혼합된 추출물 처리군에 비해 3:2 중량비로 혼합된 추출물 처리군의 디페놀레이즈 활성 억제 효과가 현저하였다.

특히, 인삼 및 상백피가 3:2 중량비로 혼합된 추출물 처리군보다 인삼 및 상지가 3:2 중량비로 혼합된 추출물 처리군의 디페놀레이즈 활성 억제 효과가 현저하였다.

Claims

인삼 및 상지 혼합 추출물; 또는 인삼 및 상백피 혼합 추출물;을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 인삼 3 중량부에 대하여 상지 또는 상백피 1~5 중량부를 혼합하여 추출한 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물의 추출 용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 모노페놀레이즈 및 디페놀레이즈 활성을 억제하고, 멜라닌의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
인삼 및 상지 혼합 추출물; 또는 인삼 및 상백피 혼합 추출물;을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제6항에 있어서, 상기 멜라닌 색소 과다 침착 질환은 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른흑피증(cyanic melasma), 약물 사용 후의 과다색소침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 또는 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소 침착인 것을 특징으로 하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제6항에 있어서, 상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제6항에 있어서, 상기 건강기능식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty food)인 것을 특징으로 하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
인삼 및 상지 혼합 추출물; 또는 인삼 및 상백피 혼합 추출물;을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제10항에 있어서, 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.