KR102565132B1 - Tnf 활성의 조절인자로서의 융합된 펜타사이클릭 이미다졸 유도체 - Google Patents

Abstract

본원에 정의된 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은, 인간 TNFα 활성의 강력한 조절인자이며, 따라서 자가면역 및 염증 질환; 신경계 및 신경변성 질환; 통증 및 통각수용 질환; 심혈관 질환; 대사 질환; 안질환; 및 종양학적 질환을 포함하는 다양한 인간 질병의 치료 및/또는 예방에 유익하다.

Description

TNF 활성의 조절인자로서의 융합된 펜타사이클릭 이미다졸 유도체

본 발명은 별개의 부류의 융합된 펜타사이클릭 이미다졸 유도체 및 치료법에서의 이들의 용도에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 약리학적으로 활성인 치환된 융합된 펜타사이클릭 벤즈이미다졸 유도체에 관한 것이다. 이들 화합물은 TNFα의 신호전달의 조절인자로서 작용하므로, 특히 유해한 염증 및 자가면역 질환, 신경계 및 신경변성 질환, 통증 및 통각수용 질환, 심혈관 질환, 대사 질환, 안질환, 및 종양학적 질환의 치료에서 약제로서 유익하다.

TNFα는 세포 생존 및 세포 죽음을 조절하는 주요 기능을 공유하는 종양 괴사 인자(TNF) 슈퍼패밀리 단백질의 프로토타입 구성원이다. TNF 슈퍼패밀리의 모든 공지된 구성원에 대해 공통적인 하나의 구조적 특징은 특정 TNF 슈퍼패밀리 수용체에 결합하고 이를 활성화시키는 삼량체 복합체의 형성이다. 예로서, TNFα는 가용성 및 막관통 형태로 존재하며, 구별되는 기능적 종점을 갖는 TNFR1 및 TNFR2로 공지된 2개의 수용체를 통해 신호를 보낸다.

TNFα 활성을 조정할 수 있는 다양한 제품이 이미 상업적으로 이용 가능하다. 모두 염증 및 자가면역 질환, 예컨대 류마티스 관절염 및 크론병의 치료에 대해 승인된다. 현재 승인된 모든 제품은 거대분자이며, 인간 TNFα의 이의 수용체에 대한 결합을 억제시킴으로써 작용한다. 전형적인 거대분자 TNFα 억제제는 항-TNFα 항체; 및 가용성 TNFα 수용체 융합 단백질을 포함한다. 상업적으로 이용 가능한 항-TNFα 항체의 예는 완전 인간 항체, 예컨대 아달리무맙(Humira®) 및 골리무맙(Simponi®), 키메라 항체, 예컨대 인플릭시맙(Remicade®), 및 페길화된 Fab' 단편, 예컨대 세르톨리주맙 페골(Cimzia®)을 포함한다. 상업적으로 이용 가능한 가용성 TNFα 수용체 융합 단백질의 예는 에타네르셉트(Enbrel®)이다.

TNFα 자체를 포함하는 TNF 슈퍼패밀리 구성원은 상당한 의학적 중요성이 있는 다양한 조건에서 역할을 하는 것으로 여겨지는 다양한 생리학적 및 병리학적 기능에 연루된다(M.G. Tansey & D.E. Szymkowski, Drug Discovery Today, 2009, 14, 1082-1088; and F.S. Carneiro et al., J. Sexual Medicine, 2010, 7, 3823-3834).

본 발명에 따른 화합물은 인간 TNFα 활성의 강력한 조절인자이므로 다양한 인간 질병의 치료 및/또는 예방에 유익하다. 이들은 자가면역 및 염증 질환; 신경계 및 신경변성 질환; 통증 및 통각수용 질환; 심혈관 질환; 대사 질환; 안질환; 및 종양학적 질환을 포함한다.

본 발명에 따른 화합물은, 인간 TNFα 신호전달의 강력한 조절인자로서의 이들의 활성 이외에, 유해한 심혈관 부작용에 대한 이들의 낮은 경향성 측면에서도 현저한 이점을 갖는다(본원에 기재된 바와 같이 표준 hERG 어세이에서 약한 활성에 의해 입증됨). 본 발명의 화합물은 또한 낮은 대사 제거 및 약물-약물 상호작용을 유도하는 최소 성향을 나타낸다(CYP3A4를 포함하는 사이토크롬 P450 효소의 약한 억제에 의해 입증됨).

또한, 본 발명에 따른 화합물은 새로운 생물학적 테스트의 개발 및 새로운 약리학적 제제의 조사에 사용하기 위한 약리학적 표준물로서 유익할 수 있다. 따라서, 일 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 약리학적 활성 화합물을 검출하는 어세이에서 방사성리간드로서 유용할 수 있다. 대안적 실시양태에서, 본 발명의 특정 화합물은 형광단에 커플링시키는 데 유용하여 약리학적 활성 화합물을 검출하는 어세이(예컨대, 형광 분극 어세이)에 사용될 수 있는 형광 컨주게이트를 제공할 수 있다.

WO 2013/186229는 TNFα의 신호전달의 조절인자인 치환된 벤즈이미다졸 유도체에 관한 것이다.

WO 2015/086525는 TNFα의 신호전달의 조절인자인 융합된 트리사이클릭 이미다졸 유도체에 관한 것이다.

WO 2016/050975는 TNFα의 신호전달의 조절인자인 융합된 펜타사이클릭 이미다졸 유도체에 관한 것이다.

본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:

상기 식에서,

X는 N 또는 C-F를 나타내고;

R¹은 수소 또는 메틸을 나타내고;

R²는 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸을 나타내고;

R³은 수소, 시아노, 하이드록시 또는 하이드록시메틸을 나타낸다.

본 발명에 따른 화합물은 WO 2016/050975의 일반적인 범위 내에 포함된다. 그러나, 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 대한 구체적인 개시는 없다.

본 발명은 또한 치료법에 사용하기 위한 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 또한 TNFα 기능의 조절인자의 투여가 필요한 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 염증 또는 자가면역 질환, 신경계 또는 신경변성 질환, 통증 또는 통각수용 질환, 심혈관 질환, 대사 질환, 안질환, 또는 종양학적 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 또한 TNFα 기능의 조절인자의 투여가 필요한 질환의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조를 위한 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 염증 또는 자가면역 질환, 신경계 또는 신경변성 질환, 통증 또는 통각수용 질환, 심혈관 질환, 대사 질환, 안질환, 또는 종양학적 질환의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조를 위한 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한 TNFα 기능의 조절인자의 투여가 필요한 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법으로서, 이러한 처치가 필요한 환자에게 유효량의 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 염증 또는 자가면역 질환, 신경계 또는 신경변성 질환, 통증 또는 통각수용 질환, 심혈관 질환, 대사 질환, 안질환, 또는 종양학적 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법으로서, 이러한 처치가 필요한 환자에게 유효량의 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

의약에서의 사용을 위해, 화학식 (I)의 화합물의 염은 약학적으로 허용되는 염일 것이다. 그러나, 다른 염이 화학식 (I)의 화합물 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염의 제조에 유용할 수 있다. 약학적으로 허용되는 염의 선택 및 제조의 기반이 되는 표준 원리가, 예컨대 문헌(Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, ed. P.H. Stahl & C.G. Wermuth, Wiley-VCH, 2002)에 기재되어 있다.

화학식 (I)의 화합물이 하나 이상의 비대칭 중심을 갖는 경우, 이들은 따라서 거울상이성체로 존재할 수 있다. 본 발명에 따른 화합물이 2개 이상의 비대칭 중심을 갖는 경우, 이들은 추가로 부분입체이성체로 존재할 수 있다. 본 발명은 이러한 모든 거울상이성체 및 부분입체이성체의 이용 및 라세미체를 포함하는 임의의 비율의 이의 혼합물로 확장되는 것으로 이해된다. 화학식 (I) 및 하기에 나타낸 화학식은, 달리 언급되거나 나타내지 않는 경우, 모든 개개의 입체이성체 및 이의 모든 가능한 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다.

화학식 (I) 및 하기에 나타낸 화학식에 존재하는 각각의 개별 원자는 사실상 이의 자연적으로 발생하는 동위원소의 임의의 것의 형태로 존재할 수 있으며 가장 풍부한 동위원소(들)가 바람직하다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 예로서, 화학식 (I) 및 하기에 나타낸 화학식에 존재하는 각각의 개별 수소 원자는 ¹H, ²H(중수소; D) 또는 ³H(삼중수소; T) 원자, 바람직하게는 ¹H로 존재할 수 있다. 유사하게, 예로서, 화학식 (I) 및 하기에 나타낸 화학식에 존재하는 각각의 개별 탄소 원자는 ¹²C, ¹³C 또는 ¹⁴C 원자, 바람직하게는 ¹²C로 존재할 수 있다.

제1 실시양태에서, X는 N을 나타낸다. 제2 실시양태에서, X는 C-F를 나타낸다.

제1 실시양태에서, R¹은 수소를 나타낸다. 제2 실시양태에서, R¹은 메틸을 나타낸다.

제1 실시양태에서, R²는 수소를 나타낸다. 제2 실시양태에서, R²는 메틸을 나타낸다. 제3 실시양태에서, R²는 트리플루오로메틸을 나타낸다.

적합하게는, R²는 수소 또는 메틸을 나타낸다.

적합하게는, R²는 수소 또는 트리플루오로메틸을 나타낸다.

제1 실시양태에서, R³은 수소를 나타낸다. 제2 실시양태에서, R³은 시아노를 나타낸다. 제3 실시양태에서, R³은 하이드록시를 나타낸다. 제4 실시양태에서, R³은 하이드록시메틸(-CD₂OH를 포함)을 나타낸다.

적합하게는, R² 및 R³은 모두 수소를 나타낸다.

적합하게는, R²는 메틸을 나타내고, R³은 수소를 나타낸다.

적합하게는, R²는 메틸을 나타내고, R³은 시아노를 나타낸다.

적합하게는, R²는 메틸을 나타내고, R³은 하이드록시를 나타낸다.

적합하게는, R²는 메틸을 나타내고, R³은 하이드록시메틸(-CD₂OH를 포함)을 나타낸다.

적합하게는, R²는 트리플루오로메틸을 나타내고, R³은 하이드록시를 나타낸다.

본 발명에 따른 화합물의 특정 하위부류는 화학식 (IIA) 및(IIB)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다:

상기 식에서 X, R¹, R² 및 R³은 상기 정의된 바와 같다.

본 발명에 따른 특정 신규 화합물은 이의 제조가 첨부된 실시예에 기재된 각각의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.

본 발명에 따른 화합물은 다양한 인간 질병의 치료 및/또는 예방에 유익하다. 이들은 자가면역 및 염증 질환; 신경계 및 신경변성 질환; 통증 및 통각수용 질환; 심혈관 질환; 대사 질환; 안질환; 및 종양학적 질환을 포함한다.

염증 및 자가면역 질환은 전신 자가면역 질환, 자가면역 내분비 질환 및 기관 특이적 자가면역 질환을 포함한다. 전신 자가면역 질환은 전신 홍반 루프스(SLE), 건선, 건선성 관절병증, 혈관염, 염증 근육병증(다발근육염, 피부근육염 및 봉입체 근육염을 포함), 공피증, 다발성 경화증, 전신 경화증, 강직 척추염, 류마티스 관절염, 비특이적 염증성 관절염, 소아 염증성 관절염, 소아 특발 관절염(이의 소관절(oligoarticular) 및 다관절(polyarticular) 형태를 포함), 만성 질환의 빈혈(ACD), 스틸병(소아 및/또는 성인 발병), 베체트병 및 쇼그렌 증후군을 포함한다. 자가면역 내분비 질환은 갑상선염을 포함한다. 기관 특이적 자가면역 질환은 애디슨병, 용혈 또는 악성 빈혈, 급성 신부전(AKI; 시스플라틴 유발 AKI를 포함), 당뇨병성 신장병증(DN), 폐쇄성 요로병증(시스플라틴 유발 폐쇄성 요로병증을 포함), 사구체신염(굿파스처 증후군, 면역 복합체 매개된 사구체신염 및 항호중구 세포질 항체(ANCA) 연관 사구체신염을 포함), 루프스 신염(LN), 미세 변화 질환, 그레이브스 질환, 특발적 혈소판감소 자색반, 염증성 장 질환(크론병, 궤양성 대장염, 불확정 대장염 및 낭염을 포함), 천포창, 아토피 피부염, 자가면역 간염, 원발성 쓸개관 경화증, 자가면역 폐렴, 자가면역 심장염, 중증근육무력증, 자연 불임증, 골다공증, 골감소증, 미란성 골 질환, 연골염, 연골 퇴행 및/또는 파괴, 섬유화 질환(다양한 형태의 간 및 폐 섬유증을 포함), 천식, 비염, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 호흡 곤란 증후군, 패혈증, 열, 근육 디스트로피(듀시엔형 근육 디스트로피를 포함), 기관 이식 거부(신장 동종이식 거부를 포함), 공막염(거대세포 동맥염 공막염을 포함), 다카야스 동맥염, 고름땀샘염, 괴저고름피부증, 사코이드증, 다발근육통증, 류마티스성 및 축성 척추관절염을 포함한다.

신경계 및 신경변성 질환은 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅톤병, 허혈, 뇌졸중, 근위축 측삭 경화증, 척수 손상, 두부 외상, 발작 및 간질을 포함한다.

심혈관 질환은 혈전증, 심장 비대, 고혈압, 심장의 불규칙 수축(예컨대, 심부전 동안), 및 성적 질환(발기 기능장애 및 여성 성적 기능이상을 포함)을 포함한다. TNFα 기능의 조절인자는 또한 심근 경색의 치료 및/또는 예방에 유용할 수 있다(J.J. Wu et al., JAMA, 2013, 309, 2043-2044).

대사 질환은 당뇨병(인슐린 의존적 당뇨병 및 소아 당뇨병을 포함), 이상지질혈증 및 대사 증후군을 포함한다.

안질환은 망막병증(당뇨병성 망막병증, 증식성 망막병증, 비증식성 망막병증 및 미숙아 망막병증을 포함), 황반 부종(당뇨병성 황반 부종을 포함), 나이 관련된 황반 변성(ARMD), 혈관화(각막 혈관화 및 신혈관화를 포함), 망막 정맥 폐색, 및 다양한 형태의 포도막염(홍채염을 포함) 및 각막염을 포함한다.

급성 또는 만성일 수 있는 종양학적 질환은 증식성 질환, 특히 암, 및 암-연관된 합병증(골격 합병증, 악액질 및 빈혈을 포함)을 포함한다. 암의 특정 카테고리는 혈액암(백혈병 및 림프종을 포함) 및 비혈액암(고형 종양 암, 육종, 수막종, 다형성 아교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 위 암종 및 신장 세포 암종을 포함)을 포함한다. 만성 백혈병은 골수성 또는 림프성일 수 있다. 다양한 백혈병은 림프아구성 T 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 림프구성/림프성 백혈병(CLL), 모발상 세포 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 골수형성이상 증후군, 만성 호중구 백혈병, 급성 림프아구성 T 세포 백혈병, 형질세포종, 면역모세포 큰세포 백혈병, 맨틀 세포 백혈병, 다발성 골수종, 급성 거대모구성 백혈병, 급성 거대핵세포 백혈병, 전골수세포 백혈병 및 적백혈병을 포함한다. 다양한 림프종은 악성 림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 림프아구성 T 세포 림프종, 버킷 림프종, 소포 림프종, MALT1 림프종 및 변연부 림프종을 포함한다. 다양한 비혈액암은 전립선, 폐, 유방, 직장, 결장, 림프절, 방광, 신장, 췌장, 간, 난소, 자궁, 경부, 뇌, 피부, 골, 위 및 근육의 암을 포함한다. TNFα 기능의 조절인자는 또한 TNF의 강력한 항암 효과의 안전성을 증가시키는 데 사용될 수 있다(F.V. Hauwermeiren et al., J. Clin. Invest., 2013, 123, 2590-2603).

본 발명은 또한 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 경구, 협측, 비경구, 코, 국소, 눈 또는 직장 투여에 적합한 형태 또는 흡입 또는 통기에 의한 투여에 적합한 형태를 취할 수 있다.

경구 투여를 위해, 약학적 조성물은, 예컨대 약학적으로 허용되는 부형체, 예컨대 결합제(예컨대, 예비젤라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스); 충전제(예컨대, 락토스, 미세결정질 셀룰로스 또는 인산수소칼슘); 윤활제(예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 활석 또는 실리카); 붕해제(예컨대, 감자 전분 또는 나트륨 글리콜레이트); 또는 습윤제(예컨대, 나트륨 라우릴 술페이트)를 사용하여 통상의 수단에 의해 제조되는, 정제, 로젠지 또는 캡슐의 형태를 취할 수 있다. 정제는 당해 분야에 널리 공지된 방법으로 코팅될 수 있다. 경구 투여용 액체 제제는, 예컨대 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태를 취할 수 있거나, 이들은 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클로의 구성을 위한 건조 제품으로 제공될 수 있다. 이러한 액체 제제는 약학적으로 허용되는 첨가제, 예컨대 현탁제, 유화제, 비수성 비히클 또는 보존제를 사용하여 통상의 수단에 의해 제조될 수 있다. 제제는 또한 적절한 경우 완충 염, 향미제, 착색제 또는 감미제를 함유할 수 있다.

경구 투여를 위한 제제는 적합하게는 활성 화합물의 조절된 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다.

협측 투여를 위해, 조성물은 통상의 방식으로 제제화된 정제 또는 로젠지의 형태를 취할 수 있다.

화학식 (I)의 화합물은 주사, 예컨대 볼루스 주사 또는 주입에 의한 비경구 투여를 위해 제제화될 수 있다. 주사용 제제는 단위 제형으로, 예컨대 유리 앰플 또는 다회 용량 용기, 예를 들어 유리 바이알로 제공될 수 있다. 주사를 위한 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀션과 같은 형태를 취할 수 있으며, 제제화제, 예컨대 현탁제, 안정화제, 보존제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적합한 비히클, 예컨대 멸균된 발열물이 없는 물로 재구성하기 위한 분말 형태일 수 있다.

상기 기재된 제제 이외에, 화학식 (I)의 화합물은 또한 데포 제제로 제제화될 수 있다. 이러한 장기 작용성 제제는 이식에 의해 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다.

비강 투여 또는 흡입에 의한 투여를 위해, 본 발명에 따른 화합물은 편리하게는 적합한 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 플루오로트리클로로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 가스 또는 가스 혼합물을 사용하는 가압된 팩 또는 네뷸라이저를 위한 에어로졸 분무 프리젠테이션 형태로 전달될 수 있다.

조성물은, 필요한 경우, 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 제형을 포함할 수 있는 팩 또는 디스펜서 디바이스로 제공될 수 있다. 팩 또는 분배 디바이스는 투여를 위한 설명서가 첨부될 수 있다.

국소 투여를 위해, 본 발명에서의 사용을 위한 화합물은 편리하게는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체에 현탁되거나 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 연고로 제제화될 수 있다. 특정 담체는, 예컨대 무기 오일, 액체 석유, 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌, 유화 왁스 및 물을 포함한다. 대안적으로, 본 발명에서의 사용을 위한 화합물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체에 현탁되거나 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 로션으로 제제화될 수 있다. 특정 담체는, 예컨대, 무기 오일, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알콜, 벤질 알콜, 2-옥틸도데칸올 및 물을 포함한다.

눈 투여를 위해, 본 발명에서의 사용을 위한 화합물은 편리하게는 보존제, 예컨대 살세균제 또는 살진균제, 예컨대 페닐수은 니트레이트, 벤질알코늄 클로라이드 또는 클로르헥시딘 아세테이트를 포함하거나 포함하지 않는 등장성의 pH 조절된 멸균 식염수 중의 미분화된 현탁액으로 제제화될 수 있다. 대안적으로, 눈 투여를 위해, 화합물은 연고, 예컨대 바셀린으로 제제화될 수 있다.

직장 투여를 위해, 본 발명에서의 사용을 위한 화합물은 편리하게는 좌제로 제제화될 수 있다. 이들은 활성 성분을 실온에서는 고체이나 직장 온도에서는 액체여서 직장에서 녹아 활성 성분을 방출하는 적합한 비자극성 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 이러한 물질은, 예컨대 코코아 버터, 밀랍 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

특정 병태의 예방 또는 치료를 위해 필요한 본 발명에서의 사용을 위한 화합물의 양은 선택된 화합물 및 치료될 환자의 상태에 따라 달라질 것이다. 그러나, 일반적으로, 1일 용량은 경구 또는 협측 투여에 대해 약 10 ng/kg 내지 1000 mg/kg, 전형적으로 100 ng/kg 내지 100 mg/kg, 예컨대 약 0.01 mg/kg 내지 40 mg/kg 체중, 비경구 투여에 대해 약 10 ng/kg 내지 50 mg/kg 체중, 비강 투여 또는 흡입 또는 통기에 의한 투여에 대해 약 0.05 mg 내지 약 1000 mg, 예컨대 약 0.5 mg 내지 약 1000 mg의 범위일 수 있다.

필요한 경우, 본 발명에 따른 화합물은 또 다른 약학적 활성제, 예컨대 항-염증 분자와 함께 공동-투여될 수 있다.

상기 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (III)의 화합물을 화학식 (IV)의 화합물과 전이 금속 촉매의 존재 하에서 반응시키는 단계에 이어서, 필요에 따라, N-보호기 R^p를 제거하는 단계를 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있다:

상기 식에서, X, R¹, R² 및 R³은 상기 정의된 바와 같고, L¹은 적합한 이탈기를 나타내고, M¹은 보론산 모이어티 -B(OH)₂ 또는 유기 디올, 예컨대 피나콜, 1,3-프로판-디올 또는 네오펜틸 글리콜과 함께 형성된 이의 사이클릭 에스테르를 나타내고, R^p는 N-보호기를 나타낸다.

이탈기 L¹은 전형적으로 할로겐 원자, 예컨대 브로모이다.

N-보호기 R^p는 적합하게는 tert-부톡시카보닐(BOC)을 나타낸다. 대안적으로, N-보호기 R^p는 적합하게는 tert-부틸술피닐을 나타낼 수 있다.

화합물 (III)와 (IV) 사이의 반응에 사용하기 위한 전이 금속 촉매는 적합하게는 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0), 또는 [1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐(II), 또는 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II)(XPhos Pd G2)이다. 전이 금속 촉매는 전형적으로 2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐(XPhos) 또는 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트와 함께 사용될 수 있다. 반응은 적합하게는 인산칼륨 또는 탄산칼륨의 존재 하에서 수행된다. 반응은 편리하게는 적합한 용매, 예컨대 사이클릭 에테르, 예컨대 1,4-디옥산 중에서, 임의적으로 물과 혼합하여 승온에서 수행된다.

N-보호기 R^p가 BOC 또는 tert-부틸술피닐인 경우, 이의 후속 제거는 편리하게는 산, 예컨대 무기산, 예컨대 염산 또는 유기산, 예컨대 트리플루오로아세트산으로 처리하여 수행될 수 있다.

M¹이 피나콜과 함께 형성된 보론산 모이어티 -B(OH)₂의 사이클릭 에스테르를 나타내는 상기 화학식 (IV)의 중간체는 비스-(피나콜라토)디보론을 화학식 (V)의 화합물과 전이 금속 촉매의 존재 하에서 반응시켜 제조될 수 있다:

상기 식에서, L²는 적합한 이탈기를 나타낸다.

이탈기 L²는 전형적으로 할로겐 원자, 예컨대 클로로이다.

비스(피나콜라토)디보론과 화합물 (V) 사이의 반응에 사용하기 위한 전이 금속 촉매는 적합하게는 2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐(XPhos) 또는 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트와 함께 사용될 수 있는 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)이다. 반응은 적합하게는 아세트산칼륨의 존재 하에서 수행된다. 반응은 편리하게는 적합한 용매, 예컨대 사이클릭 에테르, 예컨대 1,4-디옥산 중에서 승온에서 수행된다.

R¹이 메틸인 상기 화학식 (V)의 중간체는 R¹이 수소인 화학식 (V)의 상응하는 화합물의 메틸 할라이드, 예컨대 요오도메탄과의 반응으로부터 제조될 수 있다. 메틸화 반응은 일반적으로 염기, 예컨대 실릴아미드 염기, 예컨대 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드의 존재 하에서 수행된다. 반응은 편리하게는 적합한 용매, 예컨대 사이클릭 에테르 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란 중에서 수행될 수 있다.

R¹이 수소이고 L²가 클로로를 나타내는 화학식 (V)의 중간체는, R¹이 수소이고 M¹이 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사-보롤란-2-일을 나타내는 상기 화학식 (IV)의 중간체와 같이, WO 2016/050975에 구체적으로 개시되어 있다.

이들이 상업적으로 이용 가능하지 않은 경우, 화학식 (III)의 출발 물질은 첨부된 실시예에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 또는 당해 분야에 널리 공지된 표준 방법에 의해 제조될 수 있다.

생성물의 혼합물이 본 발명에 따른 화합물의 제조를 위한 상기 기재된 공정 중 임의의 것으로부터 수득되는 경우, 목적하는 생성물은 통상의 방법, 예컨대 분취 HPLC; 또는 적합한 용매 시스템과 함께 예컨대, 실리카 및/또는 알루미나를 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 적합한 단계에서 이로부터 분리될 수 있다.

상기 기재된 공정이 입체이성체의 혼합물을 야기하는 경우, 이들 이성체는 통상의 기술로 분리될 수 있다. 특히, 특정 거울상이성체를 수득하는 것이 바람직한 경우, 이는 거울상이성체를 분해하기 위한 임의의 적합한 통상의 절차를 이용하여 거울상이성체의 상응하는 혼합물로부터 생성될 수 있다. 따라서, 예컨대 부분입체이성체 유도체, 예컨대 염은 거울상이성체의 혼합물, 예컨대 라세미체와 적합한 키랄 화합물, 예컨대 키랄 산 또는 염기의 반응에 의해 생성될 수 있다. 이어서, 부분입체이성체는 임의의 편리한 수단, 예컨대 결정화에 의해 분리되고, 목적하는 거울상이성체는 예컨대 부분입체이성체가 염인 경우 산으로의 처리에 의해 회수될 수 있다. 또 다른 분해 공정에서, 라세미체는 키랄 HPLC를 사용하여 분리될 수 있다. 또한, 필요한 경우, 특정 거울상이성체는 상기 기재된 공정 중 하나에서 적합한 키랄 중간체를 사용하여 수득될 수 있다. 대안적으로, 특정 거울상이성체는 거울상이성체 특이적인 효소적 생체내변환, 예컨대 에스테라제를 사용하는 에스테르 가수분해를 수행하고, 이어서 반응되지 않은 에스테르 거울상체로부터 거울상이성체적으로 순수한 가수분해된 산만을 정제함으로써 수득될 수 있다. 특정 기하 이성체를 수득하는 것이 바람직한 경우, 크로마토그래피, 재결정화 및 다른 통상의 분리 절차가 또한 이용될 수 있다. 대안적으로, 바람직하지 않은 거울상이성체는 산 또는 염기의 존재 하에서 당업자에게 공지된 방법에 따라 또는 첨부된 실시예에 기재된 방법에 따라 목적하는 거울상이성체로 라세미화될 수 있다.

임의의 상기 합성 순서 동안, 임의의 관련 분자 상의 민감성 또는 반응성 기를 보호하는 것이 필요하고/하거나 바람직할 수 있다. 이는 통상의 보호기에 의해, 에컨대 문헌(Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; and T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 3^rd edition, 1999)에 기재된 것에 의해 달성될 수 있다. 보호기는 당해 분야에 공지된 방법을 이용하여 임의의 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물은 HEK-Blue^TM CD40L로 공지된 상업적으로 이용 가능한 HEK-293 유래된 리포터 세포주에서 TNFα 활성을 강력하게 중화시킨다. 이는 5개의 NF-κB 결합 부위에 융합된 IFNβ 최소 프로모터의 조절 하에 SEAP(분비되는 배아 알칼리 포스파타제)를 발현하는 안정한 HEK-293 형질감염된 세포주이다. 이들 세포에 의한 SEAP 분비는 TNFα에 의해 농도 의존적 방식으로 자극된다. 본원에서 리포터 유전자 어세이로도 지칭되는 HEK-293 바이오어세이로 테스트되는 경우, 본 발명의 화합물은 10 nM의 IC₅₀ 값 또는 더 우수한 값을 나타낸다(당업자는 더 낮은 IC₅₀ 수치가 더 큰 활성 화합물을 나타낸다는 것을 이해할 것이다).

본 발명에 따른 화합물은, 본원에 기재된 표준 hERG 어세이(유해한 심혈관 부작용에 대한 경향을 나타냄)로 테스트할 때, 약한 활성을 나타낸다. 실제로, 이 어세이로 테스트할 때, 본 발명의 화합물은 적어도 5 μM의 IC₅₀ 값을 나타낸다(당업자는 hERG 어세이에서 더 높은 IC₅₀ 수치가 더 우수한 화합물, 즉 유해한 심혈관 부작용에 대한 경향이 덜할 것 같은 화합물을 나타낸다는 것을 이해할 것이다).

리포터 유전자 어세이

TNFα에 의해 유도된 NF-κB 활성화의 억제

TNFα에 의한 HEK-293 세포의 자극은 NF-κB 경로의 활성화를 이끈다. TNFα 활성을 결정하는 데 사용된 리포터 세포주는 인비보겐(InvivoGen)으로부터 구매되었다. HEK-Blue^TM CD40L은 5개의 NF-κB 결합 부위에 융합된 IFNβ 최소 프로모터의 조절 하에 SEAP(분비되는 배아 알칼리 포스파타제)를 발현하는 안정한 HEK-293 형질감염된 세포주이다. 이들 세포에 의한 SEAP의 분비는 TNFα에 의해 용량 의존적 방식으로 자극되고, 인간 TNFα에 대해 0.5 ng/mL의 EC50을 갖는다. 화합물을 10 mM DMSO 스톡으로부터 희석시켜(최종 어세이 농도 0.3% DMSO) 10-포인트 3배 계열 희석 곡선을 생성하였다(예컨대, 30,000 nM 내지 2 nM 최종 농도). 희석된 화합물을 384웰 미량적정 플레이트에 첨가하기 전 60분 동안 TNFα와 함께 예비인큐베이션하고, 18시간 동안 인큐베이션하였다. 어세이 플레이트 중의 최종 TNFα 농도는 0.5 ng/mL였다. 비색 기질, 예컨대 QUANTI-Blue^TM 또는 HEK-Blue^TM 검출 매질(인비보겐)을 사용하여 상청액에서 SEAP 활성을 결정하였다. 화합물 희석에 대한 퍼센트 억제는 DMSO 대조군과 최대 억제(과량의 대조군 화합물에 의함) 사이에서 계산되고, IC₅₀ 값은 ActivityBase에서 XLfit^TM(4개의파라미터 로지스틱 모델)을 사용하여 계산되었다.

첨부된 실시예의 화합물들은 모두, 리포터 유전자 어세이로 테스트할 때, 10 nM의 IC₅₀ 값 또는 더 우수한 값을 나타내는 것으로 밝혀졌다.

첨부된 실시예의 화합물들은, 리포터 유전자 어세이로 테스트할 때, 일반적으로 0.01 nM 내지 10 nM 범위의 IC₅₀ 값을 나타낸다.

hERG 어세이

심장 hERG 채널(Kv11.1)에서 화합물의 약리학적 활성을 자동 평면 패치-클램프 전기생리 스테이션을 사용하여 기능적으로 평가하였다. 인간 hERG 채널을 안정적으로 발현하는 CHO 세포를 제조사의 사양에 따라 적합한 선별 항생제의 영구 압력 하에 성장시켰다(hERG-Duo 세포, B'SYS GmbH, 스위스). 세포를 80% 이하의 합류에서 수거하고, 혈청을 함유하지 않는 배지 중에 현탁시키고, QPatch HTX 워크스테이션(Sophion, BiolinScientific AB, Denmark) 상에서 전체 세포 전압-클램프 기록을 위해 다중웰 기록 플레이트에 자동적으로 분배하였다. 세포외 기록 완충액의 조성(mM)은 NaCl, 150; KCl, 4; CaCl₂, 2; MgCl₂, 1; HEPES, 10; 및 글루코스, 10이었으며; NaOH로 pH 7.4로 조정하였다. 세포내 완충액(mM)은 KCl, 120; CaCl₂, 5; MgCl₂, 2; EGTA, 10; HEPES, 10; 및 Mg-ATP, 4를 함유하였으며; KOH로 pH 7.2로 조정하였다. hERG 전류를 활성화시키는 데 사용된 전압 프로토콜은 -80 mV에서 5초 동안 +20 mV로 전위를 유지하는 제1 탈분극 단계에 이어 -50 mV로의 제2 재분극 단계로 이루어진다. 사이클 시간은 15초이고, 기록은 실온에서 수행되고, 약물 효과는 제2 재분극 단계에 의해 유도된 피크 테일-전류에 대해 평가되었다. 약리학을 위해, 10 mM의 테스트 물품의 스톡 용액을 DMSO 중에 제조하였다. 먼저 초기 10 mM 스톡을 DMSO 중에 1:3으로 연속적으로 희석한 다음 6개의 중간 워킹 용액 각각을 0.06% Pluronic F-68(Gibco/Thermofischer, France)을 함유하는 세포외 기록 매질 중에 1:333으로 희석시킴으로써 폴리프로필렌 미량적정 플레이트에 6-포인트 농도-범위를 제조하였다. 테스트 물품의 최종 농도(즉, 0.12 μM, 0.37 μM, 1.1 μM, 3.3 μM, 10 μM 및 30 μM)를 오름순으로 세포에 누적 적용하였다. 양성 대조군(테르페나딘, 10 μM)을 각각의 기록 순서의 끝에 추가하였다. hERG 테일 전류 진폭의 시간-경과를 임의적인 누출 전류 차감 및 필요에 따라 전류 런다운 보상에 따라 오프라인으로 분석하였다. 최대 억제 농도의 절반(IC₅₀)을 각각의 노출 시간 끝에 측정된 전류 진폭을 피팅하고 4개의 파라미터 시그모이드 식으로 약물 전(pre-drug) 베이스라인에 대해 정규화하였다.

hERG 어세이로 테스트할 때, 첨부된 실시예의 화합물들은 모두 적어도 5 μM의 IC₅₀ 값을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 구체적으로, 실시예 6의 화합물은 약 8 μM의 IC₅₀ 값을 나타내고; 실시예 9의 화합물은 약 20 μM의 IC₅₀ 값을 나타내고; 실시예 1-5, 7, 8 및 10-16은 모두 >30 μM의 IC₅₀ 값을 나타낸다.

하기 실시예는 본 발명에 따른 화합물의 제조를 설명한다.

실시예

약어

DCM: 디클로로메탄

EtOAc: 에틸 아세테이트

MeOH: 메탄올

THF: 테트라하이드로푸란

DMSO: 디메틸 술폭사이드

DMF: N,N-디메틸포름아미드

TBAF: 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드

LDA: 리튬 디이소프로필아미드

데스-마르틴 페리오디난(Dess-Martin periodinane): 1,1,1-트리스(아세틸옥시)-1,1-디하이드로-1,2-벤즈요오독솔-3-(1H)-온

XPhos: 2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐

XPhos Pd G2: 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II)

r.t.: 실온

h: 시간

M: 질량

RT: 체류 시간

HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피

LCMS: 액체 크로마토그래피 질량 분광측정

ES+: 전기분무 양성 이온화

분석 조건

모든 NMR 스펙트럼은 250 MHz, 300 MHz, 400 MHz 또는 500 MHz에서 얻었다.

공기 또는 수분에 민감한 시약을 수반하는 모든 반응은 무수 용매 및 유리제품을 사용하여 질소 분위기 하에서 수행하였다.

LCMS 데이터 결정

방법 1

컬럼: X-브릿지 C18 워터스 2.1 x 20 mm, 2.5 μm 컬럼

이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄 + 0.1% 암모니아 용액

이동상 B: 아세토니트릴 + 5% 물 + 0.1% 암모니아 용액

구배 프로그램: 유속 펌프 1: 1 mL/min; 유속 펌프 2: 0.5 mL/min

펌프 1: 펌프 2:

시간 A% B% 시간 A% B%

0.00 95.10 4.90 0.10 5.00 95.00

4.00 5.00 95.00 1.00 5.00 95.00

5.00 5.00 95.00 1.10 95.00 5.00

5.10 95.10 4.90

방법 2

컬럼: X-브릿지 C18 워터스 2.1 x 20 mm, 2.5 μm 컬럼

이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄 + 0.1% 포름산

이동상 B: 아세토니트릴 + 5% 물 + 0.1% 포름산

구배 프로그램: 유속 펌프 1: 1 mL/min; 유속 펌프 2: 0.5 mL/min

펌프 1: 펌프 2:

시간 A% B% 시간 A% B%

0.00 95.00 5.00 0.10 5.00 95.00

4.00 5.00 95.00 1.00 5.00 95.00

5.00 5.00 95.00 1.10 95.00 5.00

5.10 95.00 5.00

방법 3

컬럼: X-브릿지 C18 워터스 2.1 x 20 mm, 2.5 μm 컬럼

이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄 + 0.1% 암모니아 용액

이동상 B: 아세토니트릴 + 5% 물 + 0.1% 암모니아 용액

구배 프로그램: 유속 1 mL/min

시간 A% B%

0.00 96.00 4.00

1.50 5.00 95.00

2.25 5.00 95.00

2.50 96.00 4.00

방법 4

컬럼: X-브릿지 C18 워터스 2.1 x 20 mm, 2.5 μm 컬럼

이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄 + 0.1% 암모니아 용액

이동상 B: 아세토니트릴 + 5% 물 + 0.1% 암모니아 용액

구배 프로그램: 유속 1 mL/min

시간 A% B%

0.00 96.00 4.00

4.00 5.00 95.00

5.00 5.00 95.00

5.10 96.00 4.00

방법 5

컬럼: X-브릿지 C18 워터스 2.1 x 20 mm, 2.5 μm 컬럼

이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄 + 0.1% 암모니아 용액

이동상 B: 아세토니트릴 + 5% 물 + 0.1% 암모니아 용액

구배 프로그램: 유속 1 mL/min

시간 A% B%

0.00 94.00 6.00

1.50 5.00 95.00

2.25 5.00 95.00

2.50 94.00 6.00

방법 6

아질렌트 테크놀로지스(Agilent Technologies) 1260 인피니티(Infinity)

파트 모델

LC/MSD G6130B

탈기기 G4225A

빈펌프(BinPupmp) G1312B

HiP ALS(자동샘플러) G1367E

벨브 드라이브 G1170A

TCC G1316A

DAD VL G1315D

인터페이스 5900E

기구

아질렌트 1260 Bin. 펌프: G1312B, 탈기기; 자동샘플러, ColCom. DAD: 아질렌트 G1315D, 220-320 nm. MSD: 아질렌트 LC/MSD G6130B ESI, pos/neg 100-800, ELSD Alltech 3300.

가스 유동: 1.5 mL/min; 가스 온도: 40℃; 컬럼: 워터스 XSelect^TM C18, 30 x 2.1 mm, 3.5 μm; 온도: 35℃; 유동: 1 mL/min; 구배: t₀ = 5% A, t_1.6min = 98% A, t_3.0min = 98% A; 포스트-시간: 1.3분; 용리제 A: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산; 용리제 B: 물 중 0.1% 포름산.

방법 7

아질렌트 테크놀로지스 1260 인피니티

파트 모델

LC/MSD G6130B

탈기기 G4225A

빈펌프 G1312B

HiP ALS(자동샘플러) G1367E

벨브 드라이브 G1170A

TCC G1316A

DAD VL G1315D

인터페이스 5900E

기구

아질렌트 1260 Bin. 펌프: G1312B, 탈기기; 자동샘플러, ColCom. DAD: 아질렌트 G1315D, 220-320 nm. MSD: 아질렌트 LC/MSD G6130B ESI, pos/neg 100-800, ELSD Alltech 3300.

가스 유동 1.5 mL/min; 가스 온도: 40℃; 컬럼: 워터스 XSelect^TM C18, 50 x 2.1 mm, 3.5μm; 온도: 35℃; 유동: 0.8 mL/min; 구배: t₀ = 5% A, t_3.5min = 98% A, t_6.0min = 98% A; 포스트-시간: 2.0분; 용리제 A: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산; 용리제 B: 물 중 0.1% 포름산.

방법 8

컬럼: 키네텍스 코어-쉘(Kinetex Core-Shell) C18, 50 x 2.1 mm, 5 μm 컬럼, 페노메넥스(Phenomenex) '시큐리티 가드' 컬럼으로 보호됨

이동상 A: 물 중 0.1% 포름산

이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산

구배 프로그램: 유속 1.2 mL/min

컬럼 온도: 40℃

시간 A% B%

0.00 95 5

1.20 0 100

1.30 0 100

1.31 95 5

방법 9

컬럼: 페노메넥스 키네텍스 코어-쉘 C8, 50 x 2.1 mm, 5 μm 컬럼, 페노메넥스 '시큐리티 가드' 컬럼으로 보호됨

이동상 A: 물 중 0.1% 포름산

이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산

구배 프로그램: 유속 1.2 mL/min

컬럼 온도: 40℃

시간 A% B%

0.00 95 5

1.83 0 100

2.25 0 100

2.26 95 5

방법 10

컬럼: 페노메넥스 게미니(Phenomenex Gemini) C18, 2.0 mm x 50 mm, 3 μm 컬럼

이동상 A: 2 mM 중탄산암모늄, pH 10

이동상 B: 아세토니트릴

구배 프로그램: 유속 1.0 mL/min

컬럼 온도: 60℃

시간 A% B%

0.00 99 1

1.80 0 100

2.10 0 100

2.30 99 1

방법 11

컬럼: 페노메넥스 키네텍스-XB C18, 2.1 mm x 100 mm, 1.7 μm 컬럼

이동상 A: 물 중 0.1% 포름산

이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산

구배 프로그램: 유속 0.6 mL/min

컬럼 온도: 40℃

시간 A% B%

0.00 95 0

5.30 0 100

5.80 0 100

5.82 95 5

GCMS 데이터 결정

방법 12

아질렌트 테크놀로지스

파트 모델

5973 MSD G2577A

자동샘플러 G2614A

7683B 주입기 G2913A

6890N GC 시스템 G1530N

기기: GC: 아질렌트 6890N, FID: 검출 온도: 300℃ 및 MS: 5973 MSD, EI-양성, 검출 온도: 280℃; 질량 범위: 50-550; 컬럼: RXi-5MS 20 m, ID 180 μm, df 0.18 μm; 평균 속도: 50 cm/s; 주입 부피: 1 μL; 주입기 온도: 250℃; 분할 비율: 20/1; 캐리어 기체: He; 개시 온도: 100℃; 개시 시간: 1.5분; 용매 지연: 1.3분; 속도: 75℃/min; 최종 온도: 250℃; 최종 시간: 2.5분.

중간체 1

(R)-N-(3-시아노-3-메틸사이클로부틸리덴)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

THF(35 mL) 중에 용해된 1-메틸-3-옥소사이클로부탄카보니트릴(532 mg, 4.63 mmol)에(R)-(+)-2-메틸-2-프로판술핀아미드(570 mg, 4.61 mmol)에 이어 티타늄(IV) 에톡사이드(1.8 mL, 8.7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 질소 하에 밤새 교반하면서 가열한 후, r.t.로 냉각시켰다. 포화 중탄산나트륨 수용액(50 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 연속해서 물(50 mL)에 이어 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 상 분리기를 통해 여과한 후, 유기층을 진공에서 농축시켰다. 생성된 오렌지색 오일을 실리카(100% 이소헥산-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성된 밀짚색 오일을 정치하자 고화하여 표제 화합물(863 mg, 88%)을 회백색 고체로서 수득하였다.

중간체 2

(R)-N-[1-(5-브로모피리미딘-2-일)-3-시아노-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

5-브로모-2-요오도피리미딘(1.6 g, 5.62 mmol)의 2개의 분리된 뱃치를 DCM(50 mL) 및 DCM(100 mL) 중에 용해시켰다. 분리된 반응 혼합물을 질소 하에 -78℃로 냉각시킨 후, 2.5 M n-부틸리튬(2.26 mL, 5.65 mmol)을 각각의 반응 혼합물에 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 질소 하에 2분 동안 교반한 후, DCM(5 mL) 중에 용해된 중간체 1(1 g, 4.71 mmol)을 주사기를 통해 각각의 반응 혼합물에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 더 큰(100 mL) 뱃치를 얼음조에서 3시간 동안 교반하고, 더 작은(50 mL) 뱃치를 카디스/아세톤조에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 합하고, 포화 염화암모늄 수용액(50 mL)으로 켄칭한 후, 유기층을 분리하고, 상 분리기를 통해 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제(crude) 황색 오일을 실리카(100% 이소헥산-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(530 mg, 14%)(트랜스:시스-이성체의 60:40 혼합물)을 황색 검으로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 371.0, RT 1.66 및 1.69분, 순도 68.1%(방법 4).

중간체 3

(7R,14R)-11-클로로-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온

질소 하에 -78℃로 냉각된 무수 THF(135 mL) 중의(7R,14R)-11-클로로-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 실시예 11)(10 g, 26.6 mmol)의 용액에 15분에 걸쳐 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(THF 중 1 M, 30 mL, 30 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 요오도메탄(2.5 mL, 40 mmol)을 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 서서히 주위 온도로 밤새 가온하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(600 mL)에 붓고, EtOAc(2 x 800 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 실리카(5% MeOH/DCM으로 용리) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(9.12 g, 88%)을 베이지색 고체로서 수득하였다.

중간체 4

(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산(42 mL) 중의 중간체 3(4 g, 10.3 mmol)을 비스-(피나콜라토)디보론(3.9 g, 15 mmol) 및 아세트산칼륨(3 g, 30.6 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 탈기하고, 질소로 플러싱하였다. 트리스(디벤질리덴아세톤)-디팔라듐(0)(484 mg, 0.51 mmol) 및 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트(390 mg, 1.03 mmol)를 첨가한 후, 반응 혼합물을 탈기하고, 질소로 플러싱한 후, 밤새 140℃에서 가열하였다. 추가의 비스(피나콜라토)디보론(2.6 g, 10.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 140℃에서 24시간 동안 가열한 후, EtOAc와 염수 사이에 분배시켰다. 유기상을 분리하고, 진공에서 농축시킨 후, 실리카(0-10% EtOAc/MeOH로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(2.5 g, 50%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 482.2, RT 2.40분(방법 4).

중간체 5

(R)-N-(3-시아노-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

제3인산칼륨(171 mg, 0.80 mmol), 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트(18.8 mg, 0.050 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(16.7 mg, 0.018 mmol) 및 중간체 4(126 mg, 0.263 mmol)에 탈기된 1,4-디옥산(1.5 mL) 중에 용해된 중간체 2(83 mg, 0.225 mmol)를 첨가하였다. 탈기된 물(0.04 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3회 사이클의 진공 및 질소 하에 탈기한 후, 밀봉된 튜브에 옮기고, 미리-가열된 블럭에 110℃에서 3시간 동안 두었다. 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시킨 후, EtOAc(20 mL) 및 물(20 mL)로 희석시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 추가의 EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수(20 mL)로 세척한 후, 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 갈색 오일을 실리카(100% 이소헥산-100% EtOAc에 이어 100% DCM-25% MeOH/DCM로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(178 mg, 92%)(트랜스 및 시스-이성체의 혼합물)을 갈색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 646.2, RT 1.11분(방법 3).

중간체 6

(R)-N-(3-시아노-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

질소 하의 제3인산칼륨(80 mg, 0.377 mmol), 중간체 2(50 mg, 0.121 mmol) 및(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)(60 mg, 0.128 mmol)의 혼합물에 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트(5 mg, 0.013 mmol) 및 트리스-(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(6 mg, 0.0064 mmol)을 첨가하였다. 시약을 1,4-디옥산(3 mL) 중에 용해시키고, 물(0.2 mL)을 첨가하고, 이어서 반응 혼합물을 진공 및 질소 하에 탈기한 후, 밤새 환류 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(20 mL) 및 물(20 mL)로 희석시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 추가의 EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 상 분리기를 통해 여과한 후, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 갈색 오일을 실리카(0-100% DCM/EtOAc에 이어 1-10% MeOH/EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(51 mg, 57%)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 632.0, RT 1.85분(방법 1). LCMS(ES+) [M+H]⁺ 632.1, RT 1.81분(방법 2).

중간체 7

(R)-N-[트랜스-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-3-시아노-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸-프로판-2-술핀아미드

2,5-디브로모-3-플루오로피리딘(536 mg, 2.11 mmol)을 DCM(100 mL) 중에 용해시키고, 질소 하에 -78℃로 냉각시켰다. n-부틸리튬(2.5 M, 0.9 mL, 2 mmol) 을 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 질소 하에 5분 동안 교반한 후, DCM(10 mL) 중에 용해된 중간체 1(390 mg, 1.84 mmol)를 주사기를 통해 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안, 이어서 2시간 동안 얼음조에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(50 mL)으로 켄칭한 후, 유기층을 분리하고, 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 상 분리기를 통해 여과한 후, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 미정제 암적색/갈색 오일을 실리카(100% 이소헥산-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(220 mg, 28%)을 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 388.0/390.0, RT 0.961분(방법 3).

중간체 8

(R)-N-(시스-3-시아노-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

중간체 4(113 mg, 0.241 mmol) 및 제3인산칼륨(167 mg, 0.773 mmol)의 혼합물에 1,4-디옥산(3 mL) 중의 중간체 7(75 mg, 0.193 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 탈기하고, 질소로 플러싱하였다. 1,4-디옥산 중의 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(9.1 mg, 0.0097 mmol) 및 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트(8.8 mg, 0.023 mmol)를 여러 방울의 물과 함께 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 4시간 동안 120℃에서 가열한 후, EtOAc와 염수 사이에 분리하였다. 유기층을 상 분리기를 통해 여과하고, 유기상을 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(100% 이소헥산-100% EtOAc에 이어 1-15% MeOH/DCM으로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(102 mg, 81%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 663, RT 1.32분(방법 5).

중간체 9

(R)-N-(시스-3-시아노-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)(297 mg, 0.636 mmol)을 제3인산칼륨(441 mg, 2.04 mmol)으로 처리한 후, 중간체 7(220 mg, 0.510 mmol)를 첨가하고, 이어서 1,4-디옥산(3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 탈기하고, 질소로 플러싱하였다. 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(24 mg, 0.025 mmol) 및 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트(23 mg, 0.061 mmol)를 여러 방울의 물과 함께 첨가하였다. 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 120℃에서 4시간 동안 가열하였다. EtOAc 및 염수를 반응 혼합물에 첨가하고, 교반한 후, 상 분리기를 통해 여과하였다. 유기상을 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(100% 이소헥산-100% EtOAc에 이어 DCM 중의 1-15% MeOH로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(189 mg, 54%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 649.2, RT 1.32분(방법 5).

중간체 10

(S)-2-메틸-N-(2-메틸사이클로부틸리덴)프로판-2-술핀아미드

2-메틸사이클로부탄-1-온(1.00 g, 11.3 mmol)을 THF(30 mL) 중에 용해시키고,(S)-2-메틸-2-프로판술핀아미드(1.20 g, 9.60 mmol)를 첨가하고, 이어서 티타늄(IV) 에톡사이드(4.0 mL, 19 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 48시간 동안 교반하였다. 물(5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 교반한 후, EtOAc(100 mL)를 첨가하고, 이어서 Na₂SO₄₍10 g)를 첨가하였다. 15분 후, 혼합물을 여과하고, 고체를 EtOAc(3 x 15 mL)로 세척하였다. 합한 유기층을 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(이소헥산 중의 0-40% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(1.55 g, 86%)을 무색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 188.2, RT 1.37분 및 1.41분(방법 4).

중간체 11

또는

N-[(1S,2R)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드 또는 N-[(1R,2S)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

2,5-디브로모-3-플루오로피리딘(2.34 g, 8.81 mmol)을 DCM(30 mL) 중에 용해시키고, 질소 하에 -78℃로 냉각시킨 후, N-부틸리튬(2.5 M, 3.5 mL, 8.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후, DCM(3 mL) 중의 중간체 10(1.50 g, 8.01 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반한 후, 포화 염화암모늄 수용액(30 mL)으로 켄칭하고, 5분 동안 교반하였다. 유기층을 분리하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 잔류물을 실리카(이소헥산 중의 0-45% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(800 mg, 27%; 시스-이성체) + 주로 트랜스-이성체와 다른 시스-이성체의 3:1 혼합물(650 mg, 22%)을 수득하였다.

중간체 12

또는

N-[(1S,2R)-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-2-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드 또는 N-[(1R,2S)-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-2-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

질소 하에 1,4-디옥산(5 mL) 중의 중간체 11(187 mg, 0.51 mmol),(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)(200 mg, 0.43 mmol), 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트(16 mg, 0.042 mmol) 및 트리스-(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(20 mg, 0.021 mmol)에 물 중의 제3인산칼륨(278 mg, 1.28 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 탈기한 후, 가압 튜브에 밀봉하고, 105℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 r.t.로 냉각시킨 후, DCM과 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(DCM 중의 0-10% MeOH로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(145 mg, 54%)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 624.2, RT 2.44분(방법 4).

중간체 13

N-(사이클로부틸리덴)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

THF(722 mL) 중의 사이클로부타논(100 g, 1.43 mol)의 용액을 15-20℃로 냉각시켰다. 15-20℃로 냉각된 2-메틸-2-프로판술핀아미드(144 g, 1.19 mol)를 첨가하고, 이어서 티타늄(IV) 이소프로폭사이드(847 g, 2.98 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 가열한 후, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(구배 용리, 0-20% EtOAc/석유 에테르) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(19개 뱃치로부터의 총 수율: 2.14 kg, 55%)을 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 14

N-[1-(5-브로모피리미딘-2-일)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

5-브로모-2-요오도피리미딘(345 g, 1.21 mol)을 15-20℃로 냉각시키고, 무수 DCM(6 L) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 -60℃ 내지 -70℃로 냉각시키고, 이에 2.5 M n-부틸리튬(450 mL, 1.13 mol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 -60℃ 내지 -70℃의 온도에서 교반한 후, 무수 DCM(150 mL) 중의 중간체 13(150 g, 866 mmol)의 용액을 첨가하였다. 온도를 -60℃ 내지 -70℃로 2시간 동안 교반하면서 유지시킨 후, 15-20℃로 가온하였다. 반응 혼합물을 추가의 12시간 동안 교반한 후, 물(100 mL)로 켄칭하였다. 11개의 뱃치를 합하고, DCM(2 x 3330 mL)으로 추출하였다. 유기층을 염수(1650 mL)로 세척하고, 분리하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(1:0:10 - 1:1:3 EtOAc/DCM/석유 에테르로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(11개의 뱃치로부터의 총 수율: 1.38 kg, 44%)을 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 15

1-(5-브로모피리미딘-2-일)사이클로부탄아민 하이드로클로라이드

6개의 분리된 뱃치에서 중간체 14(302 g, 909 mmol)를 MeOH(1.2 L) 중에 15-20℃에서 용해시켰다. 혼합물에 MeOH/염산(600 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 15-20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 6개의 뱃치를 합하고, 농축시켰다. 미정제 잔사에 이소프로필 에테르(9 L) 및 MeOH(1 L)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 15-20℃에서 교반하였다. 고체를 여과하고, DCM(3 L)으로 세정하고, 건조시켜 표제 화합물(1.21 kg, 84%)을 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 16

tert-부틸 N-[1-(5-브로모피리미딘-2-일)사이클로부틸]카바메이트

얼음조 상에서 냉각된 THF(400 mL) 중의 중간체 15(202 g, 764 mmol)의 현탁액에 디-tert-부틸 디카보네이트(183 g, 832 mmol) 및 트리에틸아민(154 g, 212 mL, 1.51 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 0-5℃에서 30분 동안 교반한 후, 얼음조를 제거하고, 반응 혼합물을 주위 온도에 도달시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc(1000 mL)와 물(600 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 분리한 후, 유기상을 연속해서 물(600 mL) 및 염수(2 x 200 mL)로 세척하였다. 유기상을 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 고체를 밤새 진공에서 50℃에서 건조시켜 표제 화합물(254 g, 정량적)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES+) [M+Na]⁺ 350.0, RT 2.20분(방법 4).

중간체 17

tert-부틸(1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}사이클로부틸)-카바메이트

환류 냉각기가 장착된 질소 하의 불꽃 건조된 플라스크에 중간체 3(13.3 g, 34.0 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(1.61 g, 1.71 mmol), XPhos(1.63 g, 3.43 mmol), 비스(피나콜라토)디보론(9.85 g, 38.8 mmol) 및 아세트산칼륨(8.5 g, 87 mmol)을 충전한 후, 1,4-디옥산(136 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 22시간 동안 교반한 후, 중간체 16(12.3 g, 37.4 mmol) 및 제3인산칼륨 수용액(1.27 mol/L, 40 mL, 50.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 환류 가열한 후, 추가의 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(500 mg, 0.53 mmol), XPhos(510 mg, 1.07 mmol) 및 제3인산칼륨 수용액(1.27 mol/L, 20 mL, 25.4 mmol)을 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 실온으로 냉각시키고, DCM(600 mL)으로 희석하고, 염수(400 mL)로 세척하였다. 수성상을 DCM(500 mL)으로 추출한 후, 합한 유기 추출물을 상 분리기에 통과시키고, 진공에서 농축시켰다. 실리카(0-5% MeOH/DCM으로 용리) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(18.0 g, 88%)을 회백색 고체로서 수득하였다.

중간체 18

3-벤질옥시-1-메틸사이클로부탄올

요오도메탄(42.6 mL, 681 mmol)을 디에틸 에테르(500 mL) 중의 마그네슘(20.7 g, 851 mmol)의 혼합물에 서서히 첨가하여 메틸마그네슘 요오다이드를 제조하였다. 혼합물을 온수조 상에서 30분 동안 가열하였다. 메틸-마그네슘 요오다이드의 용액을 드라이 아이스/아세톤조에서 -25℃의 내부 온도로 냉각시킨 후, 내부 온도를 -10℃ 이하로 유지시키면서 디에틸 에테르(100 mL) 중의 3-벤질옥시사이클로부탄-1-온(94 mL, 567 mmol)의 용액을 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 혼합물을 -10℃에서 교반하고, 30분에 걸쳐 15℃로 가온하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 후, 디에틸 에테르로 희석하고, 포화 염화암모늄 수용액으로 켄칭하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 디에틸 에테르(2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 여과하고, 포화 염화암모늄 수용액으로 세척한 후, 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물(109 g, 100%)(입체이성체의 ~3:1 혼합물)을 황색 오일로서 수득하였다. GCMS: 주요 이성체 RT 3.664(74.6%), [M-C₇H₇]⁺ 101, [M-C₅H₉O₂]⁺ 91; 부수적 이성체 RT 3.630(25.4%), [M-C₇H₇]⁺ 101, [M-C₅H₉O₂]⁺ 91(방법 12).

중간체 19

(3-벤질옥시-1-메틸사이클로부톡시)-tert-부틸(디메틸)실란

이미다졸(190 g, 2.79 mol)을 DMF(1 L) 중의 중간체 18(107 g, 558 mmol)의 용액에 첨가하였다. tert-부틸(클로로)디메틸실란(252 g, 1.67 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반한 후, 빙수에 부었다. 수성상을 디에틸 에테르(3 x 500 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물로 세척한 후, 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 황색 오일(291 g)을 실리카(헵탄에 이어 헵탄 중의 2% EtOAc) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(121 g, 46%)(입체이성체의 ~3:1 혼합물)을 수득하였다.

중간체 20

3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-3-메틸사이클로부탄올

에탄올(500 mL) 중의 중간체 19(121 g, 257 mmol)의 혼합물을 노라이트(또는 활성탄)(13 g)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 규조토 상에서 여과하고, 에탄올(500 mL)로 세정하였다. 여과물을 3구 환저 플라스크(4 L)로 옮기고, 혼합물을 배기시키고, 아르곤을 3회 다시 충전하였다. 물 중의 활성탄(10%, 6.1 g, 5.73 mmol) 상의 팔라듐의 슬러리를 첨가하고, 혼합물을 배기시키고, 아르곤을 다시 충전하였다. 혼합물을 배기시키고, 수소로 3회 다시 충전한 후, 밤새 r.t.에서 교반하였다. 혼합물을 규조토를 통해 질소 흐름 하에 여과한 후, 에탄올로 세정하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔사(68 g)를 추가의 뱃치(62 g 및 63 g)와 합한 후, 실리카(헵탄 중의 10-20% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(164 g, 85%)(이성체의 ~8:2 혼합물)을 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 21

3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-3-메틸사이클로부타논

5℃에서 DCM(2 L) 중의 중간체 20(192 g, 887 mmol)의 용액에 데스-마르틴 페리오디난(452 g, 1.07 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 10℃에서 1시간 동안 교반한 후, r.t.으로 1시간에 걸쳐 가온하였다. 반응 혼합물을 포화 탄산수소나트륨 수용액(~1 L)에 붓고, 가스 발생이 멈출 때까지 교반하였다. 티오황산나트륨 수용액(10%)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성상을 DCM으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 황색 오일을 실리카(헵탄 중의 0-20% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(186 g, 98%)을 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 22

(S)-N-{3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-3-메틸사이클로부틸리덴}-2-메틸프로판-2-술핀아미드

THF(2 L) 중의 중간체 21(186 g, 0.87 mol)의 용액에(S)-(-)-tert-부틸술핀아미드(126 g, 1.04 mol)에 이어 티타늄(IV) 에톡사이드(367 mL, 1.74 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 r.t.에서 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴로 희석시켰다. 물(47 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 규조토 상에서 여과하고, 아세토니트릴로 세정하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 황색 오일(264 g)을 실리카(헵탄 중의 10% EtOAc) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(223 g, 81%)(이성체의 ~1:1 혼합물)을 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 23

(S)-N-{시스-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-3-메틸사이클로부틸}-2-메틸프로판-2-술핀아미드

3구 환저 플라스크(2 L)에 2,5-디브로모-3-플루오로피리딘(26.9 g, 106 mmol) 및 DCM(750 mL)을 충전하였다. 생성된 용액을 드라이 아이스/이소프로판올로 -70℃로 냉각시킨 후, n-부틸리튬(헥산 중 2.5 M; 46 mL, 115 mmol)을 적가하여 -50℃에서 어두운 용액을 수득하였다. 온도를 -66℃로 낮추고, DCM(150 mL) 중의 중간체 22(30.5 g, 96 mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 1.5시간 동안 교반하였고, 이때 온도는 -30℃로 상승하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액으로 켄칭하고, 물을 첨가하여 침전된 염을 용해시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 암갈색 오일(49.7 g)을 실리카(헵탄 중의 10-60% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(9.71 g, 21%)을 수득하였다.

중간체 24

(S)-N-(시스-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

3구 환저 플라스크(2 L)에 중간체 3(25.6 g, 65.7 mmol), 아세트산칼륨(16.1 g, 164 mmol), 비스(피나콜라토)디보론(20.0 g, 79 mmol) 및 무수 1,4-디옥산(400 mL)을 충전하였다. 반응 혼합물을 배기시키고, 아르곤을 3회 다시 충전하였다. 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(5 mol %, 3.01 g, 3.28 mmol) 및 XPhos(10 mol %, 3.13 g, 6.57 mmol)를 첨가하였다. 기구를 배기시키고, 아르곤을 2회 다시 충전시킨 후, 예열된 오일조에 110℃에서 2.5시간 동안 두었다. 반응 혼합물을 r.t.로 냉각시키고, 1,4-디옥산(400 mL) 중에 용해된 중간체 23(32.4 g, 65.7 mmol)을 첨가하였다. 인산삼칼륨(20.9 g, 99 mmol) 및 물(200 mL)을 첨가하고, 이어서 [1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐(II)(5 mol %, 2.40 g, 3.28 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 배기키시고, 아르곤으로 2회 다시 충전시킨 후, 예열된 오일조에 115℃에서 1시간 동안 두었다. 반응 혼합물을 r.t.로 냉각시킨 후, 트리티오시아누르산(5.24 g, 29.6 mmol) 및 활성탄(12 g)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반한 후, 규조토 패드를 통해 여과하였다. 필터 패드를 EtOAc 및 MeOH로 세정하였다. 여과물을 물(600 mL)로 희석하고, 층을 분리하였다. 수성층을 EtOAc(2 x 400 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 어둡고 진한 반고체(~130 g)를 실리카(EtOAc 중의 0-20% MeOH로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로의 정제에 이어 실리카(EtOAc 중의 0-10% MeOH) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 재정제하여, 표제 화합물(44.6 g, 88%)을 수득하였다.

중간체 25

(S)-N-(시스-3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)(1.3 g, 2.78 mmol), 중간체 23(900 mg, 1.82 mmol) 및 제3인산칼륨(1.58 g, 7.29 mmol)을 1,4-디옥산(22 mL) 및 물(2 mL)의 혼합물 중에 현탁시켰다. 반응 혼합물을 질소로 3회 탈기한 후, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(90 mg, 0.095 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 추가 탈기하고, 120℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기상을 합하고, 건조시킨 후(황산나트륨), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(0-100% EtOAc/헥산에 이어 0-10% MeOH/DCM로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(930 mg, 65%)을 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 754.2, RT 3.26분(방법 4).

중간체 26

메틸 3,3-디메톡시사이클로부탄카복실레이트

메틸 3-옥소사이클로부탄카복실레이트(45 g, 394 mmol), 트리메틸 오르토포르메이트(259 mL, 2.37 mol) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물(7.50 g, 39.4 mmol)를 MeOH(500 mL) 중에서 배합하였다. 용액을 2시간 동안 환류 교반한 후, r.t.로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르(500 mL) 중에 용해시키고, 포화 탄산수소나트륨 수용액(500 mL)으로 세척하였다. 수성상을 디에틸 에테르(500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물(74.4 g)을 수득하였다.

중간체 27

메틸 3,3-디메톡시-1-메틸사이클로부탄카복실레이트

헥산 중의 n-부틸리튬(2.5 M, 133 mL, 332 mmol)을 -78℃에서 THF(1 L) 중의 디이소프로필아민(56 mL, 398 mmol)의 냉각된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반한 후, THF(50 mL) 중의 중간체 26(68 g, 332 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 요오도메탄(41 mL, 664 mmol)을 적가하여 내부 온도를 -60℃로 증가시켰다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 후 주위 온도로 가온하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(1 L)에 붓고, 디에틸 에테르(2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔사(64.7 g)를 실리카(헵탄 중의 10-40% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피하여 표제 화합물(52.5 g)을 수득하였다.

중간체 28

(3,3-디메톡시-1-메틸사이클로부틸)메탄올

얼음조에서 냉각된 THF(800 mL) 중의 중간체 27(42 g, 224 mmol)의 용액에 THF(94 mL, 235 mmol) 중의 2.4 M 수소화알루미늄리튬 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 60분 동안 교반하였다. 물(8 mL)을 적가하고, 이어서 10% 수산화나트륨 수용액(8 mL)을 적가하였다. 현탁액에 물(24 mL)을 첨가하고, 혼합물을 교반하였다. 황산나트륨을 첨가하고, 과립상 현탁액을 여과하였다. 여과물을 디에틸 에테르로 세정하고, 합한 여과물을 진공에서 농축시켜 표제 화합물(38 g, 15%)을 밝은 오일로서 수득하였다.

중간체 29

3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부타논

아세톤(600 mL) 및 물(200 mL) 중의 중간체 28(44.8 g, 280 mmol)의 교반 용액에 p-톨루엔술폰산 일수화물(53.2 g, 280 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 가열한 후, r.t.로 냉각시켰다. 아세톤을 진공에서 농축시켜 제거하였다. 생성된 혼합물을 DCM으로 희석하고, 탄산수소나트륨 수용액으로 세척하였다. 수성층을 DCM으로 3회 역추출하였다. 합한 유기층을 건조시킨 후(MgSO₄), 진공에서 농축시켜 표제 화합물(30.8 g, 78%)을 수득하였다.

중간체 30

3-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-3-메틸사이클로부타논

이미다졸(0.63 g, 9.29 mmol)을 DMF(150 mL) 중의 중간체 29(10.6 g, 55.0 mmol)의 용액에 첨가한 후, tert-부틸(클로로)디메틸실란(24.9 g, 165 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반하였다. 디에틸 에테르를 첨가하고, 이어서 염수를 첨가하였다. 유기층을 분리하고, 염수로 3회 세척하였다. 유기층을 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔사(62 g)를 실리카(헵탄 중의 0-10% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(59.5 g)을 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 31

(S)-N-[3-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-3-메틸사이클로부틸리덴]-2-메틸-프로판-2-술핀아미드

THF(500 mL) 중의 중간체 30(54.5 g, 205 mmol)의 용액에(S)-2-메틸프로판-2-술핀아미드(29.8 g, 246 mmol) 및 티타늄(IV) 에톡사이드(87 mL, 410 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 r.t.에서 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴로 희석한 후, 물(47 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 규조토 상에서 여과하고, 아세토니트릴로 세정하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 황색 오일(71.5 g)을 실리카(헵탄 중의 0-20% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(66.9 g, 98%)을 황색 오일(이성체의 ~1:1 혼합물)로서 수득하였다.

중간체 32

(S)-N-[시스-1-(5-브로모피리미딘-2-일)-3-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

DCM(500 mL) 중의 5-브로모-2-요오도피리미딘(58.6 g, 206 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시켰다. n-부틸리튬(헥산 중 2.5 M, 90 mL, 226 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하여 농후한 현탁액을 생성하였다. 혼합물을 40분 동안 -78℃에서 교반하였다. DCM(500 mL) 중의 중간체 31(56.8 g, 171 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 2.5시간 동안 -78℃에서 교반한 후, r.t.로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액에 붓고, 5분 동안 교반하였다. 물로 희석한 후, 층을 분리하였다. 수성층을 DCM으로 2회 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(1:1 - 0:1 헵탄:EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 이어서 실리카(헵탄 중의 20-80% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 추가로 정제하여, 표제 화합물(16 g, 17%)을 수득하였다.

중간체 33

(S)-N-[시스-3-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로-메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

환저 플라스크(2 L)에 중간체 3(11.1 g, 28.4 mmol), 아세트산칼륨(6.97 g, 71.0 mmol), 비스(피나콜라토)디보론(8.65 g, 34.1 mmol) 및 1,4-디옥산(170 mL)을 충전하였다. 기구를 아르곤으로 3회 플러싱한 후, 트리스-(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(1.30 g, 1.42 mmol) 및 XPhos(1.35 g, 2.84 mmol)를 첨가하였다. 기구를 배기시키고, 아르곤으로 2회 다시 충전시킨 후, 115℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 r.t.로 냉각시키고, 1,4-디옥산(170 mL) 중에 용해된 중간체 32(16.2 g, 28.4 mmol)를 첨가하고, 이어서 물(70 mL) 및 무수 제3인산칼륨(9.04 g, 42.6 mmol)을 첨가하였다. 기구를 다시 아르곤으로 2회 탈기한 후, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로-팔라듐(II)(1.04 g, 1.42 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 115℃에서 5시간 동안 가열한 후, r.t.에서 밤새 교반하였다. 트리티오시아누르산(2.27 g, 12.78 mmol) 및 활성탄(5.19 g)을 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반한 후, 물 및 EtOAc로 희석하고, 여과하고, 고체를 EtOAc로 세척하였다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 밤새 교반하였다. 유기층을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 실리카(EtOAc 중의 0-10% MeOH로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(17.5 g, 81%)을 수득하였다. LCMS [M+H]⁺ 765, RT 2.46분(방법 6).

중간체 34

(S)-N-[시스-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-3-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

2,5-디브로모-3-플루오로피리딘(2.4 g, 9.23 mmol)을 DCM(120 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 아세톤-드라이 아이스조에서 -65℃로 냉각시켰다. n-부틸-리튬(헥산 중 2.5 M, 3.8 mL, 9.5 mmol)을 적가하고, 혼합물을 -65℃에서 15분 동안 교반하였다. DCM(20 mL) 중의 중간체 31(2.4 g, 7.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -65℃에서 1시간 동안 교반한 후, r.t.로 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 염화암모늄 수용액으로 켄칭하고, DCM으로 2회 추출하였다. 유기상을 합하고, 진공에서 농축시킨 후, 실리카(0-50% EtOAc/헥산으로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(1.15 g, 31%)을 수득하였다.

중간체 35

(S)-N-[시스-3-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로-메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)(405 mg, 0.87 mmol), 중간체 34(400 mg, 0.79 mmol), 제3인산칼륨(734 mg, 3.39 mmol) 및 트리사이클로헥실-포스포늄 테트라플루오로보레이트(40 mg, 0.11 mmol)를 1,4-디옥산(10 mL) 및 물(1 mL)의 혼합물 중에 현탁시켰다. 혼합물을 질소로 3회 탈기한 후, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(40 mg, 0.042 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소로 추가로 탈기하고, 110℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(0-100% EtOAc/헥산에 이어 0-10% MeOH/DCM로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(280 mg, 46%)을 수득하였다. LCMS(ES+) [M+H]⁺ 768.2, RT 3.42분(방법 4).

중간체 36

3-(벤질옥시)-1-(트리플루오로메틸)사이클로부탄-1-올

THF 중의 TBAF(1 M, 2.84 mL)를 0℃(외부 온도)에서 THF(50 mL) 중의 3-(벤질옥시)사이클로부탄-1-온(5 g, 28.4 mmol) 및 트리메틸(트리플루오로메틸)실란(5.03 mL, 34.1 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 밤새 r.t.에서 교반하였다. THF(25.5 mL) 중의 추가의 TBAF를 첨가하고, 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하였다. 물(50 mL)을 첨가하고, 혼합물을 염수(50 mL)에 부었다. 잔류물을 EtOAc(3 x 75 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(25 mL)로 세척하고, 건조시킨 후(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 오렌지색 오일을 실리카(헵탄 중의 0-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(6.5 g, 92%)을 옅은 오렌지색 오일로서 수득하였다.

중간체 37

[3-(벤질옥시)-1-(트리플루오로메틸)사이클로부톡시](tert-부틸)디메틸실란

tert-부틸디메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트(6.16 mL, 30 mmol)를 -78℃에서 DCM(60 mL) 중의 중간체 36(6 g, 24.4 mmol) 및 2,6-디메틸-피리딘(8.16 mL, 70 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 후, 밤새 r.t.로 서서히 가온하였다. 혼합물을 포화 탄산수소나트륨 수용액(60 mL)으로 처리하고, 층을 분리하였다. 수성상을 DCM(60 mL)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카(헵탄 중의 0-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(8.14 g, 93%)을 옅은 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 38

3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-3-(트리플루오로메틸)사이클로부탄-1-올

에탄올(163 mL) 중의 중간체 37(8.14 g, 22.6 mmol) 및 탄소 상의 10% 팔라듐(물 중 50%, 2.41 g, 11.3 mmol)의 교반된 혼합물을 수소 기체의 분위기 하에 두었다. 반응 혼합물을 r.t.에서 24시간 동안 교반한 후, 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 MeOH(3 x 50 mL)로 세척하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 어두운 잔류물을 셀라이트 상에서 여과하고, 필터 케이크를 MeOH(3 x 50 mL)로 세척하였다. 여과물을 진공에서 농축시켜 표제 화합물(6.2 g, 98%)을 불투명한 밝은 황색 왁스로서 수득하였다.

중간체 39

3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-3-(트리플루오로메틸)사이클로부탄-1-온

데스-마르틴 페리오디난(11.3 g, 26.9 mmol)을 r.t.에서 DCM(175 mL) 중의 중간체 38(6.2 g, 22.2 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반한 후, DCM(50 mL)으로 희석하고, 셀라이트 패드 상에서 여과하였다. 필터 케이크를 추가의 DCM(25 mL)으로 세척하고, 여과물을 포화 탄산수소나트륨 수용액(100 mL)에 부었다. 층을 분리하고, 수성상을 DCM(50 mL)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 납양 결정질 고체를 실리카(헵탄 중의 0-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(5.71 g, 86%)을 옅은 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 40

(R)-N-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸리덴)-2-메틸-프로판-2-술핀아미드

티타늄(IV) 에톡사이드(24.4 mL, 38.1 mmol)를 r.t.에서 질소 하에 THF(100 mL) 중의 중간체 39(5 g, 18.6 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 후,(R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드(4.52 g, 37.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 65℃에서 1.5시간 동안 가열한 후, r.t.로 냉각시켰다. 혼합물을 염수(70 mL), EtOAc(200 mL) 및 물(35 mL)로 희석한 후, 15분 동안 격렬하게 교반하였다. 유기층을 경사분리하고, 나머지 에멀션을 필터 페이퍼 상에서 여과하였다. 여과물을 EtOAc(100 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(50 mL)로 세척하고, 건조시킨 후(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 황색 시럽을 실리카(헵탄 중의 0-50% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(5.5 g, 80%)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 41

(R)-N-[1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-3-(트리플루오로-메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

헥산 중의 n-부틸리튬(2.5 M, 3.47 mL, 8.66 mmol)을 -70℃(내부 온도)에서 DCM(140 mL) 중의 2,5-디브로모-3-플루오로피리딘(2.17 g, 8.51 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 15분 동안 교반한 후, DCM(14 mL) 중의 중간체 40(2.75 g, 7.4 mmol)의 용액을 적가하였다. 2시간 동안 -70℃에서 교반하였다. 혼합물을 약 1.5시간에 걸쳐 r.t.로 서서히 가온시킨 후, 0℃로 재냉각시켰다. 포화 염화암모늄 수용액(100 mL)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 격렬하게 교반하였다. 층을 분리하고, 수성상을 DCM(2 x 100 mL)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(헵탄 중의 0-50% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(1.68 g, 42%)을 옅은 오렌지색 검으로서 수득하였다.

중간체 42

(R)-N-[3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

중간체 4(886 mg, 1.84 mmol)를 실온에서 밀봉가능한 가압 용기에서 1,4-디옥산(10 mL) 중의 중간체 41(840 mg, 1.53 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2 M 탄산칼륨 수용액(2.3 mL)으로 처리하고, 질소로 15분 동안 퍼징하였다. XPhos(73 mg, 0.15 mmol) 및 XPhos Pd G2(121 mg, 0.15 mmol)를 첨가하고, 용기를 밀봉하였다. 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반한 후, r.t.로 냉각시켰다. 어두운 혼합물을 EtOAc(30 mL)로 희석하고, 염수(50 mL)에 부었다. 층을 분리하고, 수성상을 EtOAc(2 x 25 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(25 mL)로 세척하고, 건조시킨 후(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 어두운 잔류물을 실리카(DCM 중의 0-10% MeOH로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성된 미정제 옅은 갈색 포움을 실리카(헵탄 중의 0-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 추가의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(1.00 g, 76%)을 회백색 포움으로서 수득하였다.

중간체 43

(R)-N-[1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

THF 중의 TBAF(1 M, 2.33 mL, 2.32 mmol)를 r.t.에서 THF(15 mL) 중의 중간체 42(1 g, 1.16 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 가온시키고, 35℃에서 2시간 동안 교반하였다. r.t.로 냉각시킨 후, 혼합물을 물(25 mL)에 붓고, EtOAc(3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(30 mL)로 세척하고, 건조시킨 후(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 회백색 고체(0.9 g)를 DMSO-MeOH(1:1; 6 mL) 중에 현탁시켰다. 생성된 진한 페이스트를 진공에서 농축시켜 미정제 표제 화합물(0.82 g)을 회백색 고체로서 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 사용되었다. LCMS(ESI) [M+H]⁺ 708.4, RT 3.11분(방법 11).

중간체 44

(R)-N-[1-(5-브로모피리미딘-2-일)-3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-3-(트리플루오로-메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

헥산 중의 n-부틸리튬(2.5 M, 5.09 mL, 12.7 mmol)을 -70℃(내부 온도)에서 DCM(230 mL) 중의 5-브로모-2-요오도피리미딘(3.56 g, 12.51 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 15분 동안 교반한 후, DCM(20 mL) 중의 중간체 40(4.04 g, 10.9 mmol)의 용액을 적가하였다. -70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 온도에서 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(150 mL)으로 켄칭하고, 생성된 슬러리를 r.t.로 서서히 가온하였다. 층을 분리하고, 수성상을 DCM(100 mL)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 암갈색 오일/고체를 실리카(헵탄 중의 0-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성된 부분적으로 정제된 황색 오일을 역상 실리카(0.1% 포름산이 스파이킹된 물 중의 10-100% 아세토니트릴로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여, 표제 화합물(0.51 g, 9%)을 옅은 오렌지색 오일로서 수득하였다.

중간체 45

(R)-N-[3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-피리미딘-2-일}-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

중간체 4(552 mg, 1.15 mmol)를 r.t.에서 밀봉가능한 가압 용기에서 1,4-디옥산(7 mL) 중의 중간체 44(507 mg, 0.96 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2 M 탄산칼륨 수용액(1.44 mL)으로 처리하고, 혼합물을 질소로 15분 동안 퍼징하였다. XPhos(46 mg, 0.1 mmol) 및 XPhos Pd G2(75 mg, 0.1 mmol)를 첨가하고, 용기를 밀봉하였다. 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반한 후, r.t.로 냉각시켰다. 어두운 혼합물을 EtOAc(30 mL)로 희석하고, 염수(50 mL)에 부었다. 층을 분리하고, 수성상을 EtOAc(2 x 25 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(25 mL)로 세척하고, 건조시킨 후(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 어두운 잔사(1.18 g)를 실리카(헵탄 중의 0-100% EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크롬마토그래피로 정제하였다. 생성된 미정제 옅은 오렌지색 포움을 역상 실리카(0.1% 포름산이 스파이킹된 물 중의 10-100% 아세토니트릴로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 추가로 정제하여, 표제 화합물(0.61 g, 79%)을 회백색 글래스로서 수득하였다.

중간체 46

(R)-N-[1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

THF 중의 TBAF(1 M, 1.52 mL)를 r.t.에서 THF(10 mL) 중의 중간체 45(0.61 g, 0.76 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반한 후, 물(35 mL)에 부었다. 잔류물을 EtOAc(3 x 35 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 물(30 mL) 및 염수(30 mL)로 세척한 후, 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물(0.474 g, 90%)을 회백색 고체로서 수득하였다.

중간체 47

(R)-N-[3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로-피리딘-2-일}-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

1,4-디옥산(10 mL) 중의 중간체 41(400 mg, 0.73 mmol) 및(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)(383 mg, 0.8 mmol)의 교반 용액에 2 M 탄산칼륨 수용액(1.1 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 탈기한 후, XPhos(35 mg, 0.07 mmol) 및 XPhos Pd G2(57 mg, 0.07 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시킨 후, EtOAc(50 mL)로 희석하고, 염수(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기층을 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(0-100% EtOAc/펩탄에 이어 0-20% MeOH/EtOAc로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피한 후 역상 실리카(10-100% 아세토니트릴/물 + 0.1% 포름산으로 구배 용리) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(469 mg, 72%)(시스/트랜스-이성체의 4:5 혼합물)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 48

(R)-N-[1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노-벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

THF(6 mL) 중의 중간체 47(469 mg, 0.56 mmol)의 용액에 THF 중의 TBAF(1 M, 1.11 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 35℃에서 2시간 동안 교반한 후, 냉각시키고, 염수(50 mL)로 희석하고, EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(3 x 50 mL)로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켜 미정제 표제 화합물(440 mg, 정량적)을 회백색 분말로서 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 사용되었다.

중간체 49

메틸 3,3-디메톡시사이클로부탄카복실레이트

에틸 3-옥소사이클로부탄카복실레이트(53 g, 372.8 mmol), 트리메틸 오르토포르메이트(200 mL, 1830 mmol) 및 4-메틸벤젠술폰산 수화물(1:1)(7.09 g, 37.3 mmol)를 메탄올(500 mL) 중에서 합하고, 교반하면서 1시간 동안 환류 가열하였다. 반응 혼합물을 r.t.로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르(500 mL) 중에 용해시키고, 포화 NaHCO₃ 수용액(400 mL)으로 세척하였다. 수성상을 디에틸 에테르(500 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 헵탄과 공비시켜 잔류 트리메틸 오르토포르메이트를 제거시켜 표제 화합물(71.5 g, 99%)을 밝은 베이지색 오일로서 수득하였다.

중간체 50

메틸 3,3-디메톡시-1-메틸사이클로부탄카복실레이트

질소 분위기 하에, 2 M LDA 용액(108.5 mL, 217 mmol, THF 중)을 -78℃에서 THF(300 mL)에 첨가하였다. 내부 온도를 -78℃로 유지하면서, THF(50 mL) 중의 중간체 49(90%, 35 g, 180.8 mmol)의 용액을 25분에 걸쳐 적가하였다. 첨가를 완료한 후, 혼합물을 30분 동안 교반하고, 이어서 요오도메탄(15 mL, 241 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 후, 1시간에 걸쳐 r.t.로 가온하였다. 혼합물을 포화 NH₄Cl 수용액(300 mL)에 붓고, 디에틸 에테르(2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시킨 후(Na₂SO₄), 여과하고, 건조되게 증발시켰다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(헵탄 중 40% EtOAc)로 정제하여, 표제 화합물(23 g, 57%)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 51

디듀테리오(3,3-디메톡시-1-메틸사이클로부틸)메탄올

질소 분위기 하에, 0℃(얼음조)에서 THF(400 mL) 중의 LiAlD₄₍5 g, 119 mmol)의 현탁액에 THF(100 mL) 중의 중간체 50(27.2 g, 118.5 mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가가 완료되면, 반응 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반한 후, 얼음조에서 냉각시켰다. 물(5 mL)을 교반하면서 첨가하였다. 형성된 현탁액을 THF(150 mL)로 희석한 후, 15% NaOH 수용액(5 mL) 및 물(15 mL)을 첨가하였다. 생성된 현탁액에 Na₂SO₄₍40 g)를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 과립 현탁액을 여과하고, 디에틸 에테르로 세정한 후, 합한 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(23.8 g, 99%)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 52

3-[디듀테리오(하이드록시)메틸]-3-메틸사이클로부타논

아세톤(240 mL) 및 물(80 mL) 중의 중간체 51(23.8 g, 117.3 mmol)의 교반 용액에 4-메틸벤젠술폰산 수화물(1:1)(5 g, 26.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 2시간 동안 가열한 후, r.t.에서 밤새 정치시켰다. 아세톤을 감압 하에 제거하였다. 생성된 혼합물을 고체 NaHCO₃로 pH 8로 염기성화하고, DCM(5 x 130 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 프릿 펀넬을 통해 여과한 후, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(16 g, 94%)을 밝은 갈색 오일로서 수득하였다.

중간체 53

3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시(디듀테리오)메틸}-3-메틸사이클로부타논

DMF(100 mL) 중의 중간체 52(16 g, 110 mmol)의 용액에 1H-이미다졸(15 g, 220 mmol) 및 tert-부틸(클로로)디메틸실란(22 g, 146 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 밤새 교반한 후, 디에틸 에테르(250 mL) 및 물(200 mL)로 희석시켰다. 층을 분리한 후, 수성층을 디에틸 에테르(250 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수(3 x 80 mL)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시킨 후, 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물(30 g, 97%)을 밝은 갈색 오일로서 수득하였다.

중간체 54

N-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시(디듀테리오)메틸}-3-메틸사이클로부틸리덴)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

질소 분위기 하에 무수 THF(250 mL) 중의 중간체 53(30 g, 107 mmol)의 용액에(R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드(15.53 g, 128.1 mmol)에 이어 티타늄(IV) 에톡사이드(50 mL, 202.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 r.t.에서 24시간 동안 교반하였다.(R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드(2.8 g, 23.1 mmol) 및 티타늄(IV) 에톡사이드(5 mL, 20.27 mmol)의 추가의 부분을 반응 혼합물에 첨가한 후, 65℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 r.t.로 냉각시키고, 물(13 mL)을 첨가하고, 이어서 EtOAc(200 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, 고체를 EtOAc로 광범위하게 세척하였다. 여과물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시킨 후, 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 미정제 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(헵탄 중 5-20% EtOAc)로 정제하여, 표제 화합물(31.5 g, 84%)을 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 55

N-[1-(5-브로모피리미딘-2-일)-3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시(디듀테리오)메틸}-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

질소 분위기 하에, 무수 DCM(1.25 L) 중의 5-브로모-2-요오도피리미딘(71.2 g, 250 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시켰다. 내부 온도를 -68℃ 이하로 유지하면서, 용액에 캐뉼라를 통해 2.5 M 부틸리튬 용액(100 mL, 250 mmol, 헥산 중)을 첨가하였다. 농후한 현탁액을 20분 동안 -78℃에서 교반하였다. 내부 온도를 -68℃ 이하로 유지하면서, 무수 DCM(100 mL) 중의 중간체 54(24 g, 68.3 mmol)의 용액을 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 포화 NH₄Cl 수용액(400 mL) 및 물(100 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시킨 후, 유기상을 분리하고, 수성상을 DCM(2 x 300 mL)으로 추출하였다. 합한 유기상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시킨 후, 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 미정제 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(헵탄 중 20-100% EtOAc)로 정제한 후, 헵탄으로부터 재결정화하였다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(헵탄 중 20-35% EtOAc)로 추가로 정제하여, 표제 화합물(0.93 g)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 56

N-(시스-3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시(디듀테로)메틸}-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로-메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

1,4 디옥산(5 mL) 및 물(1.5 mL) 중의 중간체 55(1.36 g, 2.51 mmol),(7R,14R)-1-(디플루오로-메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노-벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)(1.32 g, 2.51 mmol) 및 제3인산칼륨(2.13 g, 10 mmol)의 용액을 질소로 탈기한 후, 트리스(디벤질리덴아세톤)-디팔라듐(0)(0.12 g, 0.13 mmol) 및 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트(0.11 g, 0.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열한 후, 물(5 mL)로 희석하고, EtOAc(3 x 15 mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시킨 후, 진공에서 증발시켰다. 생성된 갈색 오일을 55 g KP-NH 컬럼(헵탄 중 50-100% EtOAc에 이어 EtOAc 중 0-15% MeOH)을 사용하여 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(1.68 g, 94%)을 황색 분말로서 수득하였다.

중간체 57

N-[시스-3-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-피리미딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

중간체 56에 대해 기재된 실험 절차에 따라 중간체 32 및(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)로부터 제조되었다. LCMS(ESI+) [M+H]⁺ 751.2, RT 3.20분(방법 1)

중간체 58

N-[1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시(디듀테리오)-메틸}-3-메틸사이클로부틸]-2-메틸프로판-2-술핀아미드

중간체 55에 대해 기재된 실험 절차에 따라 중간체 54 및 2,5-디브로모-3-플루오로피리딘으로부터 제조되었다.

중간체 59

N-(시스-3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시(디듀테로)메틸}-1-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로-메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-3-메틸사이클로부틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드

중간체 56에 대해 기재된 실험 절차에 따라 중간체 58 및(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-11-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온(WO 2016/050975, 중간체 171)으로부터 제조되었다.

실시예 1

시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴

MeOH(5 mL) 중에 용해된 중간체 5(178 mg, 0.24 mmol)에 1,4-디옥산(0.31 mL) 중의 4 M 염산을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 90분 동안 교반한 후, 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 갈색 글래스를 실리카(100% DCM-25% MeOH/DCM로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 시스 및 트랜스-이성체의 생성된 혼합물을 분취 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(9 mg, 7%)을 백색 고체로서 수득하였다.

실시예 2

시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴

1,4-디옥산(5 mL) 중에 용해된 중간체 6(50 mg, 0.079 mmol)에 1,4-디옥산(5 mL) 중의 4 M 염산을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 교반한 후, EtOAc(10 mL)와 0.5 M 염산 수용액(10 mL) 사이에서 분리하였다. 수성층을 DCM(2 x 10 mL)으로 세척한 후, 탄산나트륨 수용액으로 염기성화하고, DCM으로 추출하였다. 유기층을 진공에서 농축시키고, 생성된 미정제 백색 고체(시스 및 트랜스-이성체의 혼합물)를 분취 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(12 mg, 29%)을 수득하였다.

실시예 3

시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴

중간체 8(120 mg, 0.181 mmol)을 1,4-디옥산(5 mL) 중의 4 M 염산 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 디에틸 에테르를 첨가하고, 침전물을 여과시켜 표제 화합물(82 mg, 81%)을 백색 고체(7%의 트랜스 이성체를 함유)로서 수득하였다.

실시예 4

시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴

중간체 9(102 mg, 0.157 mmol)를 1,4-디옥산(5 mL) 중에 용해시키고, 1,4-디옥산(5 mL) 중의 4 M 염산으로 처리햐였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 디에틸 에테르를 첨가하고, 형성된 침전물을 여과하였다. 미정제 잔사(시스 및 트랜스-이성체의 혼합물, 81 mg)를 분취 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(11 mg, 13%)을 수득하였다.

실시예 5

또는

(7R,14R)-11-{6-[(1S,2R)-1-아미노-2-메틸사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온 또는(7R,14R)-11-{6-[(1R,2S)-1-아미노-2-메틸사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

아세토니트릴(10 mL) 중에 용해된 중간체 12(135 mg, 0.22 mmol)에 2 M 염산 수용액(10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 2 M 수산화나트륨 수용액(30 mL)으로 처리하였다. 혼합물을 DCM(3 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(DCM 중의 0-20% MeOH로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(112 mg, 100%)을 백색 고체로서 수득하였다.

실시예 6

(7R,14R)-11-[2-(1-아미노사이클로부틸)피리미딘-5-일]-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산(25 mL) 중의 중간체 17(18.0 g, 29.9 mmol)의 용액에 1,4-디옥산(40 mL) 중의 4 M 염산을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 물(500 mL) 중에 용해시키고, EtOAc(2 x 300 mL)로 세척하였다. 수성층을 2N 수산화나트륨 수용액으로 pH 9로 염기성화하여 고체를 침전시켰다. EtOAc(500 mL)를 첨가하고, 혼합물을 모든 고체가 용해될 때까지 교반하였다. 잔류물을 분배시킨 후, 수성층을 EtOAc(500 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과한 후, 진공에서 농축시키고, 밤새 높은 진공 하에 건조시켰다. 포움 잔류물을 디에틸 에테르 및 헥산(150 mL)의 혼합물 중에 현탁시킨 후, 교반하고, 격렬하게 진탕시킨 후, 진공에서 농축시켜 표제 화합물(12.4 g, 83%)을 백색 무정형 고체로서 수득하였다.

실시예 7

(7R,14R)-11-[6-(시스-1-아미노-3-하이드록시-3-메틸사이클로부틸)-5-플루오로피리딘-3-일]-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산 중의 염산(4.0 M, 100 mL, 400 mmol)을 MeOH(290 mL) 중의 중간체 24(44.6 g, 58.1 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 3시간 동안 교반한 후, DCM(400 mL)으로 희석시켰다. 물(400 mL)을 첨가한 후, 층을 분리하였다. 유기층을 2 N 염산 수용액(2 x 200 mL)으로 추출하였다. 합한 수성 추출물을 DCM으로 2회 세척하였다. 수성층을 고체 탄산칼륨으로 알칼리가 되게 하고, 추가의 물을 첨가하였다. 수성 현탁액을 DCM/MeOH 혼합물(~1:1)로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하고, 혼합물을 60시간 동안 교반하였다. 베이지색 고체를 여과로 수집한 후, 디에틸 에테르로 세척하고, 공기 스트림 상에서 건조시켜 표제 화합물(26.5 g, 83%)을 수득하였다.

실시예 8

(7R,14R)-11-[6-(시스-1-아미노-3-하이드록시-3-메틸사이클로부틸)-5-플루오로피리딘-3-일]-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온

중간체 25(930 mg, 1.23 mmol)를 에탄올(20 mL) 중에 용해시키고, 1,4-디옥산(5 mL) 중의 4 M 염산을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.로 가온시키고, 밤새 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 1 M 염산 수용액 중에 재용해시키고, DCM으로 2회 세척하였다. 수성층을 2 M 수산화나트륨 수용액으로 pH 10으로 염기성화하고, 3 부분의 DCM으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(0-100% EtOAc/헥산에 이어 0-20% MeOH/[MeOH/DCM 중 10% 7 N 암모니아]로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래필 정제하여, 표제 화합물(580 mg, 88%)을 수득하였다.

실시예 9

(7R,14R)-11-{2-[시스-1-아미노-3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부틸]피리미딘-5-일}-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산 중의 염산(4.0 M, 34.3 mL, 137 mmol)을 MeOH(114 mL) 중의 중간체 33(17.5 g, 22.9 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반한 후, DCM(200 mL) 및 물(200 mL)을 첨가하였다. 층을 분리하고, 유기층을 2 N 염산 수용액(2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 수성상을 DCM(2 x 100 mL)으로 세척한 후, 고체 탄산칼륨으로 알칼리가 되게 하였다. 수성 현탁액을 DCM/MeOH 혼합물(~1:1; 4 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na₂SO₄), 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄시키고, 밤새 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 공기 건조시켜 표제 화합물(11.3 g, 90%)을 옅은 베이지색 고체로서 수득하였다.

실시예 10

(7R,14R)-11-{6-[시스-1-아미노-3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시-3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

중간체 35(347 mg, 0.45 mmol)를 에탄올(10 mL) 중에 용해시키고, 1,4-디옥산(2.5 mL) 중의 4 M 염산을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 1 M 염산 수용액 중에 재용해시키고, DCM으로 2회 세척하였다. 수성층을 2 M 수산화나트륨 수용액으로 pH 10으로 염기성화하고, 3 부분의 DCM으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 실리카(0-100% EtOAc/헥산에 이어 0-50% DCM/[MeOH 중 10% 7 N 암모니아]로 구배 용리) 상에서 정제하여, 표제 화합물(194 mg, 78%)을 수득하였다.

실시예 11

(7R,14R)-11-{6-[시스-1-아미노-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산 중의 염화수소(4 M, 8.72 mL)를 r.t.에서 1,4-디옥산(15 mL) 중의 중간체 43(823 mg, 1.16 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 생성된 회백색 고체를 MeOH(10 mL) 중에 용해시키고, 이온 교환 카트리지(SCX-2)로 로딩하고, MeOH(2 x 15 mL)로 세척하였다. 물질을 MeOH(3 x 15 mL) 중의 2.0 M 암모니아로 용리하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔사(트랜스 및 시스-이성체의 혼합물, 642 mg)를 역상 실리카(0.1% 포름산으로 스파이킹된 물 중의 10-23% 아세토니트릴로 구배 용리) 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피하여 제1 용리 분획(트랜스 이성체, 295 mg)을 불투명한 검으로서 수득하고, 1:1 아세토니트릴-물(4 mL) 중에 현탁시키고, 1 M 염산 수용액(538 μL)으로 처리하였다. 생성된 용액을 동결건조시켜 트랜스 이성체(298 mg, 42%)를 무색 고체로서 수득하였다. 제2 용리 분획(시스-이성체)을 진공에서 농축시키고, 분취 HPLC(0.1% 포름산으로 스파이킹된 물 중의 0-100% 아세토니트릴로 용리)를 통해 재정제하였다. 생성된 회백색 고체(모노-포르메이트 염)를 MeOH(15 mL) 중에 용해시키고, 이온 교환 컬럼(SCX-2)에 로딩하였다. 물질을 MeOH(2 x 15 mL)로 세척하고, MeOH(3 x 15 mL) 중의 2.0 M 암모니아로 용리하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 불투명한 글래스(유리 염기, 147 mg)를 1:1 아세토니트릴-물(4 mL) 중에 현탁시키고, 1 M 염산 수용액(268 μL)으로 처리하였다. 생성된 용액을 동결건조시켜 표제 화합물(시스-이성체, 144 mg, 21%)을 무색 고체로서 수득하였다.

실시예 12

(7R,14R)-11-{2-[시스-1-아미노-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]피리미딘-5-일}-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산 중의 염화수소(4 M, 5.15 mL)를 주위 온도에서 1,4-디옥산(10 mL) 중의 중간체 46(474 mg, 0.69 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 생성된 미정제 회백색 고체를 MeOH(10 mL) 중에 용해시키고, 이온 교환 컬럼(SCX-2)에 로딩하고, MeOH(2 x 25 mL)로 세척하였다. 물질을 MeOH(3 x 15 mL) 중의 2.0 M 암모니아로 용리하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔사(트랜스 및 시스-이성체의 혼합물, 396 mg)를 분취 HPLC(아세토니트릴 중의 0-100% 포름산으로 용리)로 정제하여 제1 용리 분획(트랜스 이성체)을 수득하고, 진공에서 농축시킨 후, MeOH(5 mL) 중에 용해시키고, 이온 교환 컬럼(SCX-2)에 로딩하였다. 컬럼을 MeOH(2 x 15 mL)로 세척하고, 물질을 MeOH(3 x 15 mL) 중의 2.0 M 암모니아로 용리하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 불투명한 글래스(유리 염기, 215 mg)를 1:1 아세토니트릴-물(4 mL) 중에 현탁시키고, 1 M 염산 수용액(400 μL)으로 처리하였다. 생성된 용액을 동결건조시켜 트랜스 이성체(203 mg, 47%)를 무색 고체로서 수득하였다. 제2 용리 분획(시스-이성체)을 진공에서 농축시킨 후, MeOH(5 mL) 중에 용해시키고, 이온 교환 컬럼(SCX-2)에 로딩하였다. 컬럼을 MeOH(2 x 15 mL)로 세척하고, 물질을 MeOH(3 x 15 mL) 중의 2.0 M 암모니아로 용리하였다. 여과물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 불투명한 글래스(유리 염기, 118 mg)를 1:1 아세토니트릴-물(2 mL) 중에 현탁시키고, 1 M 염산 수용액(222 μL)으로 처리하였다. 생성된 용액을 동결건조시켜 표제 화합물(시스-이성체, 118 mg, 24%)을 무색 고체로서 수득하였다.

실시예 13

(7R,14R)-11-{6-[시스-1-아미노-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산(8 mL) 중의 중간체 48(440 mg, 0.55 mmol)의 용액에 1,4-디옥산(4.14 mL) 중의 4 M 염화수소를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 1시간 동안 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 DCM/MeOH 중의 이온 교환 컬럼(SCX-2)에 로딩하였다. 컬럼을 MeOH(50 mL)로 세척하고, 생성물을 MeOH(50 mL) 중의 2 M 암모니아로 용리하였다. 미정제 물질(트랜스 및 시스-이성체의 혼합물, 350 mg)을 분취 HPLC로 정제하였다. 시스-이성체를 함유하는 분획을 1:1 아세토니트릴-물(4 mL) 중에 현탁시키고, 1,4-디옥산(300 μL) 중의 4 M 염화수소로 처리하였다. 용액을 동결건조시켜 표제 화합물(하이드로클로라이드 염, 132 mg, 38%)을 회백색 분말로서 수득하였다.

실시예 14

(7R,14R)-11-(2-{시스-1-아미노-3-[하이드록시(디듀테로)메틸]-3-메틸사이클로부틸}-피리미딘-5-일)-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온

1,4-디옥산(5 mL) 중의 중간체 56(500 mg, 0.66 mmol)의 교반 용액에 1,4-디옥산(0.66 mL) 중의 4 M 염화수소를 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.에서 18시간 동안 교반한 후, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 회백색 고체를 20 g SCX-2 카트리지(메탄올 중의 2 M 암모니아로 용리)를 사용하여 정제하였다. 생성된 회백색 고체를 역상 컬럼 크로마토그래피(물(+ 0.1% 포름산) 중의 10-60% 아세토니트릴)로 추가로 정제하였다. 관련된 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 무색의 검을 1:1 아세토니트릴:물 중에 현탁시키고, 1 M HCl(1.3 당량)을 첨가하였다. 생성된 용액을 동결건조시켜 표제 화합물, 하이드로클로라이드 염(199 mg)을 백색 분말로서 수득하였다.

실시예 15

(7R,14R)-11-{2-[시스-1-아미노-3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부틸]피리미딘-5-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온

0℃에서 에탄올(12 mL) 중의 중간체 57(180 mg, 0.24 mmol)의 용액에 1,4-디옥산(2.5 mL, 10 mmol) 중의 4 M 염산을 첨가하였다. 반응 혼합물을 r.t.로 가온시키고, 밤새 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 1 M HCl 수용액 중에 재용해시키고, DCM(2 x 2.5 mL)으로 세척하였다. 수성층을 2 M NaOH 수용액으로 pH 10으로 염기성화하고, DCM(2 x 2.5 mL)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(헥산 중의 0-100% EtOAc에 이어 DCM 중의 0-20% MeOH 및 10% 7 N 암모니아)로 정제하여, 표제 화합물(62 mg, 49%)을 백색 고체로서 수득하였다.

실시예 16

(7R,14R)-11-(6-{시스-1-아미노-3-[하이드록시(디듀테로)메틸]-3-메틸사이클로부틸}-5-플루오로피리딘-3-일)-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b]-[2,5]벤조디아조신-5(14H)-온

중간체 59(130 mg, 0.17 mmol)를 1,4-디옥산(3 mL) 중에 용해시키고, 1,4-디옥산(0.9 mL) 중의 4 M 염산을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 메탄올(3 mL)로 희석하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 10 g SCX 카트리지(메탄올 중의 2 M 암모니아로 용리) 상에서 정제하였다. 잔류물을 1:1 아세토니트릴:물(~5 mL) 중에 용해시킨 후, 수성 HCl(1.2 당량)로 처리하고, 동결건조시켜 표제 화합물, 하이드로클로라이드 염(80 mg, 79%)을 회백색 고체로서 수득하였다.

Claims (23)

1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
   
   상기 식에서,
   X는 N 또는 C-F를 나타내고;
   R¹은 수소 또는 메틸을 나타내고;
   R²는 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸을 나타내고;
   R³은 수소, 시아노, 하이드록시 또는 하이드록시메틸을 나타낸다.
2. 제1항에 있어서, 하기 화학식 (IIA)로 나타내어지는 것인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
   
   상기 식에서, X, R¹, R² 및 R³은 제1항에 정의된 바와 같다.
3. 제1항에 있어서, 하기 화학식 (IIB)로 나타내어지는 것인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
   
   상기 식에서, X, R¹, R² 및 R³은 제1항에 정의된 바와 같다.
4. 제1항에 있어서, 하기로부터 선택되는 것인 화합물:
   시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴;
   시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]피리미딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴;
   시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴;
   시스-3-아미노-3-{5-[(7R,14R)-1-(디플루오로메톡시)-5-옥소-5,6,7,14-테트라하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-11-일]-3-플루오로피리딘-2-일}-1-메틸사이클로부탄카보니트릴;
   (7R,14R)-11-{6-[(1S,2R)-1-아미노-2-메틸사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-{6-[(1R,2S)-1-아미노-2-메틸사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-[2-(1-아미노사이클로부틸)피리미딘-5-일]-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-[6-(시스-1-아미노-3-하이드록시-3-메틸사이클로부틸)-5-플루오로피리딘-3-일]-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-[6-(시스-1-아미노-3-하이드록시-3-메틸사이클로부틸)-5-플루오로피리딘-3-일]-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-{2-[시스-1-아미노-3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부틸]피리미딘-5-일}-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-{6-[시스-1-아미노-3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-{6-[시스-1-아미노-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-{2-[시스-1-아미노-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]피리미딘-5-일}-1-(디플루오로메톡시)-6-메틸-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-{6-[시스-1-아미노-3-하이드록시-3-(트리플루오로메틸)사이클로부틸]-5-플루오로피리딘-3-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-(2-{시스-1-아미노-3-[하이드록시(디듀테로)메틸]-3-메틸사이클로부틸}-피리미딘-5-일)-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]-벤조디아조신-5(14H)-온;
   (7R,14R)-11-{2-[시스-1-아미노-3-(하이드록시메틸)-3-메틸사이클로부틸]피리미딘-5-일}-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b][2,5]벤조디아조신-5(14H)-온; 및
   (7R,14R)-11-(6-{시스-1-아미노-3-[하이드록시(디듀테로)메틸]-3-메틸사이클로부틸}-5-플루오로피리딘-3-일)-1-(디플루오로메톡시)-6,7-디하이드로-7,14-메타노벤즈이미다조[1,2-b]-[2,5]벤조디아조신-5(14H)-온.
5. 건선, 강직 척추염, 건선성 관절병증, 류마티스 관절염, 소아 특발 관절염, 축성 척추관절염, 고름땀샘염, 염증성 장 질환, 베체트병, 공피증, 전신 경화증, 다발성 경화증, 전신 홍반 루푸스, 루푸스 신염, 섬유화 질환 및 당뇨병성 신장병증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염증 또는 자가면역 질환; 알츠하이머병, 파킨슨병 및 척수 손상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 신경계 또는 신경변성 질환; 심장 비대 및 심근 경색으로 이루어진 군으로부터 선택되는 심혈관 질환; 당뇨병 및 대사 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택되는 대사 질환; 망막증인 안질환; 또는 혈액암 및 비혈액암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 종양학적 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 활성 성분으로 함유하는 의약.
6. 제5항에 있어서, 염증성 장 질환이 크론병, 궤양성 대장염, 불확정 대장염 및 낭염으로부터 선택되는 것인 의약.
7. 제5항에 있어서, 염증 또는 자가면역 질환이 간 및 폐 섬유증으로부터 선택되는 섬유화 질환인 의약.
8. 제5항에 있어서, 대사 질환이 인슐린 의존적 당뇨병 또는 소아 당뇨병인 의약.
9. 제5항에 있어서, 안 질환이 당뇨병성 망막병증, 증식성 망막병증, 비증식성 망막병증 및 미숙아 망막병증으로부터 선택되는 것인 의약.
10. 제5항에 있어서, 종양학적 질환이 백혈병 및 림프종으로부터 선택되는 혈액암, 또는 고형 종양 암, 육종, 수막종, 다형성 아교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 위 암종 및 신장 세포 암종으로부터 선택되는 비혈액암인 의약.
11. 건선, 강직 척추염, 건선성 관절병증, 류마티스 관절염, 소아 특발 관절염, 축성 척추관절염, 고름땀샘염, 염증성 장 질환, 베체트병, 공피증, 전신 경화증, 다발성 경화증, 전신 홍반 루푸스, 루푸스 신염, 섬유화 질환 및 당뇨병성 신장병증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염증 또는 자가면역 질환; 알츠하이머병, 파킨슨병 및 척수 손상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 신경계 또는 신경변성 질환; 심장 비대 및 심근 경색으로 이루어진 군으로부터 선택되는 심혈관 질환; 당뇨병 및 대사 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택되는 대사 질환; 망막증인 안질환; 또는 혈액암 및 비혈액암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 종양학적 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 약학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약학적 조성물.
12. 제11항에 있어서, 추가의 약학적 활성 성분을 더 포함하는 약학적 조성물.
13. 하기 화학식 (III)의 화합물을 하기 화학식 (IV)의 화합물과 전이 금속 촉매의 존재 하에서 반응시키는 단계를 포함하는, 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제조하는 공정:
    
    상기 식에서,
    X는 N 또는 C-F를 나타내고;
    R¹은 수소 또는 메틸을 나타내고;
    R²는 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸을 나타내고;
    R³은 수소, 시아노, 하이드록시 또는 하이드록시메틸을 나타내며,
    
    상기 식에서, X, R¹, R² 및 R³은 상기 정의된 바와 같고, L¹은 이탈기를 나타내고, M¹은 보론산 모이어티 -B(OH)₂ 또는 유기 디올과 함께 형성된 이의 사이클릭 에스테르를 나타내고, R^p는 N-보호기를 나타낸다.
14. 제13항에 있어서, 화학식 (III)의 화합물을 화학식 (IV)의 화합물과 반응시키는 단계에 이어서, N-보호기 R^p를 제거하는 단계를 포함하는 공정.
15. 제13항에 있어서, 이탈기 L¹이 할로겐 원자인 공정.
16. 제13항에 있어서, 이탈기 L¹이 브로모인 공정.
17. 제13항에 있어서, N-보호기 R^p가 tert-부톡시카보닐 또는 tert-부틸술피닐을 나타내는 것인 공정.
18. 제14항에 있어서, N-보호기 R^p가 산 처리에 의해 제거되는 것인 공정.
19. 제13항에 있어서, 전이 금속 촉매가 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0), 또는 [1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐(II), 또는 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II)인 공정.
20. 제19항에 있어서, 전이 금속 촉매가 2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 또는 트리사이클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트와 함께 사용되는 것인 공정.
21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (III)의 화합물과 화학식 (IV)의 화합물 사이의 반응이 인산칼륨 또는 탄산칼륨의 존재 하에서 수행되는 것인 공정.
22. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, M¹이 피나콜과 함께 형성된 모이어티 -B(OH)₂의 사이클릭 에스테르를 나타내고, 화학식 (IV)의 화합물은 비스-(피나콜라토)디보론을 하기 화학식 (V)의 화합물과 전이 금속 촉매의 존재 하에서 반응시켜 제조되는 것인 공정:
    
    상기 식에서, L²는 이탈기를 나타낸다.
23. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 제조에서 사용되는 중간체 화합물로서:
    
    상기 식에서,
    X는 N 또는 C-F를 나타내고;
    R¹은 수소 또는 메틸을 나타내고;
    R²는 수소, 메틸 또는 트리플루오로메틸을 나타내고;
    R³은 수소, 시아노, 하이드록시 또는 하이드록시메틸을 나타내며,
    하기로부터 선택되는 중간체 화합물:
    중간체 3;
    중간체 4;
    중간체 5;
    중간체 6;
    중간체 8;
    중간체 9;
    또는 중간체 12;
    중간체 17;
    중간체 24;
    중간체 25;
    중간체 33;
    중간체 35;
    중간체 42;
    중간체 43;
    중간체 45;
    중간체 46;
    중간체 47;
    중간체 48;
    중간체 56;
    중간체 57;
    중간체 59.