KR102517471B1 - Cosmetic Composition Comprising a Functional Novel Fermented Bacterial Strain Lysate Having Skin Whitening, Anti-wrinkle, skin dryness improvement, Anti-aging and/or Skin beneficial bacterial strains increasing Activity - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강 활성을 갖는 신규 균주 발효용해물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a fermentation lysate of a novel strain having skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging and skin beneficial bacteria enhancing activities, and a cosmetic composition containing the same.
피부는 외부 노출 장기의 특성상 표면적이 넓고 세균, 곰팡이, 바이러스 등과 같이 다양한 미생물들이 서식하고 있다. 다양한 연구 문헌들을 통해 피부 상재 미생물의 대사물질 등이 피부세포에 영향을 미치며, 피부 외부 장벽 기능 및 노화방지와 항염증에 긍정적인 영향을 미친다고 밝혀졌으나, 어떠한 특정 미생물이 피부 세포 노화 및 장벽형성에 효과가 있는지 명확하게 밝혀져 있지 않은 실정이다. 특히 최근 장내 마이크로바이옴 연구와 유사하게 피부 마이크로바이옴 연구가 활발히 이루어지고 있으며, 피부는 적용 부위가 다양해서 부위별 미생물 균총 분포에 대한 연구내용들이 발표되어 있다. 그리고 이러한 피부 표면에서 분리된 피부 상재균을 활용한 화장품들이 국내외에서 시판되고 있다. 그러나 대부분의 제품들이 피부 마이크로바이옴, 즉 피부 상재균의 새로운 기능성과 그 역할에 주목하기보다 기존의 유산균 화장품의 카테고리에서 벗어나지 못하는 제품이 대다수이다. Due to the characteristics of externally exposed organs, the skin has a large surface area and is inhabited by various microorganisms such as bacteria, fungi, and viruses. Through various research literature, it has been found that metabolites of skin-resident microorganisms affect skin cells and have a positive effect on skin external barrier function and anti-aging and anti-inflammatory effects. It is not clear whether or not it is effective. In particular, skin microbiome research has been actively carried out similarly to the recent intestinal microbiome research, and since the skin is applied to various sites, studies on the distribution of microbial flora by site have been published. In addition, cosmetics using skin flora isolated from the skin surface are commercially available at home and abroad. However, most of the products do not break away from the category of existing lactobacillus cosmetics rather than paying attention to the new functionality and role of the skin microbiome, that is, skin flora.
미생물을 활용하여 피부에 적용하고자 하는 시도와 관련한 다음과 같은 종래 기술들이 있다. 국내 등록특허 제10-1911349호는 항균, 항산화, 피부 미백 및 피부 주름개선 효과를 갖는 신규 엑티노키네오스포라 속 R434 균주에 관해 보고하고 있다. 또한, 국내 등록특허 제10-1503979호는 락토바실러스 펜토서스 균주 배양액을 포함하는 피부 미백용 조성물 및 그 제조 방법에 관해 보고하고 있다. 또한, 국내 등록특허 제10-1869275호는 항균, 항산화, 피부 미백 및 피부 주름개선 효과를 갖는 신규 칼리디폰티박터 속 R161 균주에 관해 보고하고 있다. 다만, 선행기술들을 통해 보고된 균주들의 경우, 피부상재균에 속하는 균주로서 보고된 바 없다. There are the following prior arts related to attempts to apply microorganisms to the skin. Korean Registered Patent No. 10-1911349 reports on a new strain R434 of the genus Actinokineospora having antibacterial, antioxidant, skin whitening and skin wrinkle improvement effects. In addition, Korean Patent Registration No. 10-1503979 reports a composition for skin whitening containing a Lactobacillus pentosus strain culture solution and a manufacturing method thereof. In addition, Korean Patent Registration No. 10-1869275 reports on a novel Calidipontibacter genus R161 strain having antibacterial, antioxidant, skin whitening and skin wrinkle improvement effects. However, strains reported through prior art have not been reported as strains belonging to dermatophytes.
본 연구에서는 신규 피부 유래 미생물(상재균)의 효능과 기능성을 규명하고 신규 미생물 자원 확보를 통해 독자적인 화장료 조성물을 개발하고자 하였다.In this study, we tried to develop an independent cosmetic composition by identifying the efficacy and functionality of new skin-derived microorganisms (common flora) and securing new microbial resources.
본 발명자들은 피부상재균 중 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강 활성이 우수한 균주를 확보하고, 이를 포함하는 기능성 화장료 및 약제학적 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과 소정의 균주 복합물의 발효용해물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 경우, 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강 효능이 도출됨을 규명함으로써 본 발명을 완성하게 되었다. The present inventors have made intensive research efforts to secure strains excellent in skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging, and skin beneficial bacteria enhancement activities among skin flora, and to develop functional cosmetics and pharmaceutical compositions containing them. As a result, the present invention was completed by identifying that skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging, and skin beneficial bacteria enhancement effects were derived when a cosmetic composition containing a fermentation lysate of a predetermined strain complex was used.
따라서, 본 발명의 목적은 소정의 균주 발효용해물을 유효 성분으로 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다. Accordingly, an object of the present invention is to provide a cosmetic composition for skin improvement comprising a fermentation lysate of a predetermined strain as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적은 상기 피부 개선용 화장료 조성물 제조 방법을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a method for preparing the cosmetic composition for improving the skin.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 기탁번호 KCTC18883P로 기탁된 더마코커스 프로펀디 (Dermacoccus profundi) BS35F-3 균주, 기탁번호 KCTC18886P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) BS47C-1 균주, 기탁번호 KCTC18884P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) B424F-5 균주, 및 기탁번호 KCTC18885P로 기탁된 스트랩토코커스 살리바리우스 (Streptococcus salivarius) BS320F-4 균주의 발효용해물을 유효 성분으로 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention is Dermacoccus profundi BS35F-3 strain deposited under accession number KCTC18883P, Staphylococcus epidermidis deposited under accession number KCTC18886P, BS47C-1 strain , Staphylococcus epidermidis deposited with accession number KCTC18884P ( Staphylococcus epidermidis ) B424F-5 strain, and Streptococcus salivarius deposited with accession number KCTC18885P Fermentation lysate of BS320F-4 strain as an active ingredient It provides a cosmetic composition for skin improvement comprising.
본 발명자들은 피부상재균 중 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강 활성이 우수한 균주를 확보하고, 이를 포함하는 기능성 화장료 및 약제학적 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과 소정의 균주 복합물의 발효용해물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 경우, 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강 효능이 도출됨을 규명하였다.The present inventors have made intensive research efforts to secure strains excellent in skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging, and skin beneficial bacteria enhancement activities among skin flora, and to develop functional cosmetics and pharmaceutical compositions containing them. As a result, when using a cosmetic composition containing a fermentation lysate of a predetermined strain complex, it was found that skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging and skin beneficial bacteria enhancement effects were derived.
본 발명의 균주들은 피부상재균들로부터 동정한 균주들로서 기탁번호 KCTC18886P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) BS47C-1 균주, 기탁번호 KCTC18884P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) B424F-5 균주, 및 기탁번호 KCTC18885P로 기탁된 스트랩토코커스 살리바리우스 (Streptococcus salivarius) BS320F-4 균주에 해당한다. The strains of the present invention are strains identified from skin fungi , Staphylococcus epidermidis BS47C-1 strain deposited under accession number KCTC18886P, and Staphylococcus epidermidis deposited under accession number KCTC18884P. ) B424F-5 strain, and Streptococcus salivarius BS320F-4 strain deposited with accession number KCTC18885P.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 “균주 발효용해물” 은 균주를 균질기로 파쇄한 상태의 용액을 의미할 수 있고, 배양된 균주발효물을 열처리하여 여과한 용해물을 의미할 수 있다. 보다 구체적으로 예를 들면, 3450 oscillations/min의 속도로 3~4분 간 파쇄된 균주를 포함하는 용액을 원심분리한 뒤 분리한 상등액(supernatent) 또는 50℃ 내지 70℃에서 12~36시간 열처리 후 pore size 0.18 μm 내지 0.26 μm의 여과지에 여과하여 얻은 균주 용해물을 의미할 수 있다. 구체적으로 예를 들면, 5000 내지 15000 rpm, 3분 내지 10분, 0℃ 내지 10℃ 조건에서 원심분리를 수행하여 균주 용해물을 얻을 수 있다. 상기 원심분리 조건에 있어서, 다른 구체예들에 따르면, 8000 내지 15000 rpm, 10000 내지 15000 rpm, 12000 내지 15000 rpm 조건에서 원심분리를 수행할 수 있다. 또한, 상기 원심분리 조건에 있어서, 구체적으로 예를 들면, 3분 내지 7분, 4분 내지 6분 조건으로 원심분리를 수행할 수 있다. 또한, 상기 원심분리 조건에 있어서, 구체적으로 예를 들면, 0℃ 내지 8℃, 1℃ 내지 7℃, 2℃ 내지 6℃, 3℃ 내지 5℃ 조건에서 원심분리를 수행할 수 있다. The "strain fermentation lysate" included in the cosmetic composition of the present invention may mean a solution obtained by crushing strains with a homogenizer, and may mean a lysate obtained by heating and filtering a cultured strain fermentation product. More specifically, for example, after centrifuging the solution containing the disrupted strain at a rate of 3450 oscillations / min for 3 to 4 minutes, the separated supernatant or heat treatment at 50 ° C to 70 ° C for 12 to 36 hours It may mean a strain lysate obtained by filtering on a filter paper having a pore size of 0.18 μm to 0.26 μm. Specifically, for example, a strain lysate may be obtained by performing centrifugation at 5000 to 15000 rpm, 3 minutes to 10 minutes, and 0 ℃ to 10 ℃ conditions. As for the centrifugation conditions, according to other embodiments, centrifugation may be performed under conditions of 8000 to 15000 rpm, 10000 to 15000 rpm, and 12000 to 15000 rpm. In addition, in the centrifugation conditions, specifically, for example, centrifugation may be performed under conditions of 3 to 7 minutes and 4 to 6 minutes. In addition, in the centrifugation conditions, specifically, for example, centrifugation may be performed at 0 ° C to 8 ° C, 1 ° C to 7 ° C, 2 ° C to 6 ° C, and 3 ° C to 5 ° C conditions.
또한, 상기 여과지의 pore size는 더욱 구체적으로 예를 들면, 0.18 μm 내지 0.25 μm, 0.18 μm 내지 0.24 μm, 0.18 μm 내지 0.23 μm, 0.18 μm 내지 0.22 μm, 0.19 μm 내지 0.26 μm, 0.20 μm 내지 0.26 μm, 0.21 μm 내지 0.26 μm, 0.22 μm 내지 0.26 μm일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 일 실시예에서는 0.22μm의 여과지에 여과하여 얻은 균주 용해물을 사용하였으나, 반드시 이에 제한되지는 않는다.In addition, the pore size of the filter paper is more specifically, for example, 0.18 μm to 0.25 μm, 0.18 μm to 0.24 μm, 0.18 μm to 0.23 μm, 0.18 μm to 0.22 μm, 0.19 μm to 0.26 μm, 0.20 μm to 0.26 μm , 0.21 μm to 0.26 μm, 0.22 μm to 0.26 μm, but is not limited thereto. In one embodiment of the present invention, the strain lysate obtained by filtering with 0.22 μm filter paper was used, but is not necessarily limited thereto.
본 발명의 균주 발효용해물에 포함되는 각 균주 발효용해물의 함량비는 특별히 제한되지 않으나, 구체적으로 예를 들면, BS35F-3 균주 발효용해물: BS47C-1 균주 발효용해물 : B424F-5 균주 발효용해물 : BS320F-4 균주 발효용해물의 중량비는 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 4의 중량비일 수 있고, 보다 더 구체적으로 1 내지 3 : 1 내지 3 : 1 내지 3 : 1 내지 3의 중량비일 수 있으며, 보다 더 구체적으로 1 내지 2 : 1 내지 2 : 1 내지 2 : 1 내지 2의 중량비일 수 있다. The content ratio of each strain fermentation lysate included in the strain fermentation lysate of the present invention is not particularly limited, but specifically, for example, BS35F-3 strain fermentation lysate: BS47C-1 strain fermentation lysate: B424F-5 strain Fermentation lysate: The weight ratio of the BS320F-4 strain fermentation lysate may be 1 to 4: 1 to 4: 1 to 4: 1 to 4, more specifically 1 to 3: 1 to 3: 1 to 3 : It may be a weight ratio of 1 to 3, more specifically, it may be a weight ratio of 1 to 2: 1 to 2: 1 to 2: 1 to 2.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 BS35F-3 균주, BS47C-1 균주, B424F-5 균주 및 BS320F-4 균주 각각의 발효용해물을 1:1:1:1의 중량비로 포함할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the fermentation lysate of each of the BS35F-3 strain, BS47C-1 strain, B424F-5 strain, and BS320F-4 strain may be included in a weight ratio of 1:1:1:1.
본 명세서 상의 “피부 개선”은 육안으로 관찰되는 피부 색, 피부 톤, 주름, 기미, 주근깨 등의 잡티 등을 포함하는 피부 상태의 개선을 포함할 뿐만 아니라, 피부 건강에 직접 및 간접적으로 영향을 주는 요소를 포함하는 의미로 해석된다."Skin improvement" in the present specification not only includes the improvement of skin conditions, including blemishes such as skin color, skin tone, wrinkles, melasma, and freckles observed with the naked eye, but also directly and indirectly affects skin health. It is interpreted as meaning including the element.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 피부 개선은 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강을 의미한다. In one embodiment of the present invention, the skin improvement of the present invention means skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging, and skin beneficial bacteria enhancement.
본 발명의 피부 미백용 조성물의 “미백” 활성은 피부의 색소 침착을 예방, 개선 또는 치료하는 모든 활성을 포함하며, 구체적으로 예를 들면, 기미, 주근깨, 검버섯 및/또는 피부의 멜라닌 색소 침착에 의한 모든 잡티에 대한 예방, 개선 또는 치료 활성을 포함한다. The "whitening" activity of the composition for skin whitening of the present invention includes all activities for preventing, improving or treating pigmentation of the skin, specifically, for example, for melasma, freckles, age spots and/or melanin pigmentation of the skin. It includes preventive, ameliorative or therapeutic activity for all blemishes caused by
본 발명의 “피부 주름 개선”은 노화 또는 장시간의 자외선 노출 등에 의해 발생할 수 있는 피부 주름을 예방 또는 완화시키는 효능을 의미하고, 본 발명의 피부 주름 개선용 조성물은 피부 미용을 위한 목적의 화장료 조성물로서 이용될 수 있고, 주름 치료 목적의 약제학적 조성물로서도 이용될 수 있다. "Skin wrinkle improvement" of the present invention means the efficacy of preventing or alleviating skin wrinkles that may occur due to aging or long-term exposure to ultraviolet rays, etc., and the composition for improving skin wrinkles of the present invention is a cosmetic composition for the purpose of skin care. It can be used, and can also be used as a pharmaceutical composition for the purpose of treating wrinkles.
본 발명의 “피부 건조 개선”은 피부 내 수분 함량이 저하되는 것을 예방하고, 수분 함량이 저하된 상태의 피부의 수분 함량을 상대적으로 증가시키는 활성을 의미한다. "Improvement of skin dryness" of the present invention means an activity that prevents the moisture content in the skin from decreasing and relatively increases the moisture content of the skin in a state in which the moisture content is reduced.
본 발명의 항노화용 조성물에 있어서, “항노화” 활성은 피부 노화를 예방, 개선할 수 있는 활성을 의미하고, 상기 피부 노화는 유형적, 무형적인 변화를 통칭하는 의미로 해석된다. 상기 노화의 원인은 내인성과 외인성으로 나뉘며, 내인성 노화는 시간이 흐름에 따라 내부적으로 발생하는 노화를 의미하고, 구체적으로 예를 들면, 활성 산소가 주요 내적 요인으로 손꼽히고, 신체의 대사 과정에서 발생한 활성산소가 염증 반응을 일으키며 노화가 진행되는 것으로 알려져 있다. 또한 외인성 노화란 외부 환경이나 생활 습관 등에 의해 발생하는 것을 의미하고, 외부 자극에 의해 발생한 활성 산소가 주요 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 이러한 피부 노화는 피부 주름, 기미, 주근깨, 피부톤의 변화, 수분 저하, 피내 콜라겐 저하 등의 증상일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. In the anti-aging composition of the present invention, the “anti-aging” activity means an activity capable of preventing or improving skin aging, and the skin aging is interpreted as a collective meaning of tangible and intangible changes. The causes of aging are divided into endogenous and extrinsic, and endogenous aging means aging that occurs internally over time. Specifically, for example, active oxygen is considered as a major internal factor, and the It is known that active oxygen causes an inflammatory reaction and aging progresses. In addition, extrinsic aging means that it is caused by an external environment or lifestyle, and active oxygen generated by external stimuli is known to be the main cause. Such skin aging may include symptoms such as skin wrinkles, melasma, freckles, changes in skin tone, moisture loss, and intradermal collagen degradation, but is not limited thereto.
본 발명의 피부 유익균 증강용 조성물에 있어서, “피부 유익균 증강”이란, 피부에 상재하는 균총의 양적 확장 및 질적 다양성을 가져오는 효과를 의미하고, 특히, 피부 상태를 개선하여 더욱 다양한 유익균이 상재하는데 유리한 환경이 조성되어, 상재 유익균 종이 다양화되는 효과를 의미한다. In the composition for enhancing skin beneficial bacteria of the present invention, "enhancement of beneficial skin bacteria" means the effect of quantitative expansion and qualitative diversity of the flora residing on the skin. It means the effect of diversifying the resident beneficial bacteria species by creating a favorable environment.
본 발명의 일 일시예에 있어서, 본 발명의 피부 유익균은 피부 상재 유산균일 수 있다. 피부 상재 유산균은 피내 콜라겐 형성을 촉진시키는 것으로 알려져 있으며, 결과적으로 주름 방지 및 피부 탄력 개선에 도움을 줄 수 있으며, 피부 노화 방지에 영향을 줄 수 있다. In one embodiment of the present invention, the skin beneficial bacteria of the present invention may be skin resident lactic acid bacteria. Skin resident lactic acid bacteria are known to promote the formation of intradermal collagen, and as a result, can help prevent wrinkles and improve skin elasticity, and can affect skin aging prevention.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 본 발명의 피부 상재 유산균은 락토바실러스 및 비피도박테리움으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다. 락토바실러스 속은 여성의 질 내 미생물의 대부분을 차지하는 것으로 알려져 있는 균의 속에 해당하며, 피부에 상재하는 락토바실러스 속 균주들 역시 외부의 유해균을 억제하는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한, 비피도박테리움 속은 인간의 위장관에 주로 존재하는 그람 양성 유산균으로 알려져 있으며, 위암, 위궤양에 원인이 되는 헬리코박터 파일로리 균 억제에 도움을 주는 것으로 알려져 있고, 피부에 상재하는 비피도박테리움의 경우, 상술한 락토바실러스 속 균주들과 마찬가지로, 외부의 유해균을 억제하고, 유익균들이 보다 잘 성장할 수 있는 환경을 형성할 수 있다. 본 발명의 조성물은 피부 상재 균총 내에 포함되는 유익균들의 종류를 확장시키고, 잘 성장할 수 있는 환경을 제공해 줄 수 있어, 다양한 피부 질환, 보다 구체적으로 외부 유해균을 억제하고, 다양한 피부에 악영향을 미치는 증상을 개선시키는 효능을 발휘할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the lactic acid bacteria present on the skin of the present invention may contain at least one selected from Lactobacillus and Bifidobacterium. The genus Lactobacillus corresponds to a genus of bacteria known to occupy most of the microorganisms in the vagina of women, and strains of the genus Lactobacillus residing on the skin are also known to play a role in suppressing external harmful bacteria. In addition, the genus Bifidobacterium is known as a Gram-positive lactic acid bacterium mainly present in the human gastrointestinal tract, and is known to help suppress Helicobacter pylori bacteria that cause gastric cancer and gastric ulcer, and in the case of Bifidobacterium residing on the skin , Like the strains of the genus Lactobacillus described above, it is possible to suppress external harmful bacteria and form an environment in which beneficial bacteria can grow better. The composition of the present invention can expand the types of beneficial bacteria included in the skin flora and provide an environment in which they can grow well, thereby suppressing various skin diseases, more specifically, external harmful bacteria, and various symptoms that adversely affect the skin. can exert an improvement effect.
본 발명에서 용어 '예방'이란 본 발명에 따른 조성물의 사용에 의해 소정의 질병의 발병을 저해 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.In the present invention, the term 'prevention' means any action that inhibits or delays the onset of a given disease by using the composition according to the present invention.
본 발명에서 용어 '개선'이란 본 발명에 따른 조성물의 사용에 의해 소정의 질병 또는 질병에 의한 일 증상을 감소시키는 모든 행위를 의미한다.In the present invention, the term 'improvement' refers to any action that reduces a certain disease or symptom caused by a disease by using the composition according to the present invention.
본 발명의 피부 개선용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 로션, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition for skin improvement of the present invention can be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant - It may be formulated as a cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, etc., but is not limited thereto. More specifically, it may be formulated into a softening lotion, nourishing lotion, lotion, nourishing cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분 이외에 화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 "화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장료 제제에 포함될 수 있는 것으로 공지되어 사용되며, 유효 성분의 주된 효능을 유의하게 감쇄시키거나, 인체에 대한 부작용을 나타내지 않으면서, 유효 성분의 피부에 대한 적용, 사용자의 사용 편의성 및 선호도를 개선시킬 수 있는 부가 성분을 의미한다. The cosmetic composition of the present invention may include carriers acceptable in cosmetic formulations in addition to active ingredients. The term "acceptable carrier in cosmetic preparations" is known and used as being capable of being included in cosmetic preparations, and does not significantly attenuate the main efficacy of active ingredients or exhibit side effects on the human body. It refers to an additional component that can improve application, user convenience and preference.
상기 담체는 본 발명의 조성물의 전체 중량에 대하여 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 조성물 전체 중량의 약 50 중량% 내지 약 99 중량%로 포함될 수 있다. 그러나 상기 담체의 함량은 화장료의 제형, 구체적인 적용 부위 및 바람직한 적용량 등에 따라 적절하게 조절될 수 있으며, 특별히 제한되지 않는다. The carrier may be included in about 1 wt % to about 99.99 wt %, preferably about 50 wt % to about 99 wt %, based on the total weight of the composition of the present invention. However, the content of the carrier may be appropriately adjusted depending on the formulation of the cosmetic, specific application site and desired application amount, and the like, and is not particularly limited.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림, 로션, 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream, lotion, or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide, etc. this can be used
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane / May contain a propellant such as butane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butyl glycol oil, fatty acid esters of glycerol, polyethylene glycol or sorbitan.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, an ethoxylated isostearyl alcohol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Star cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth and the like may be used.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleanser, as carrier components, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분과 담체 성분 이외에, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.Ingredients included in the cosmetic composition of the present invention include ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to active ingredients and carrier ingredients, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and conventional adjuvants such as fragrances. can include
본 발명의 다른 일 양태에 따르면 본 발명은 다음 단계를 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물 제조 방법을 제공한다:According to another aspect of the present invention, the present invention provides a method for preparing a cosmetic composition for skin improvement comprising the following steps:
(a) 기탁번호 KCTC18883P로 기탁된 더마코커스 프로펀디 (Dermacoccus profundi) BS35F-3 균주, 기탁번호 KCTC18886P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) BS47C-1 균주, 기탁번호 KCTC18884P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) B424F-5 균주, 및 기탁번호 KCTC18885P로 기탁된 스트랩토코커스 살리바리우스 (Streptococcus salivarius) BS320F-4 균주 각각을 35℃ 내지 40℃에서 12~24시간 종균배양하는 단계;(a) Dermacoccus profundi BS35F-3 strain deposited under accession number KCTC18883P, Staphylococcus epidermidis deposited under accession number KCTC18886P, Staphylococcus epidermidis BS47C-1 strain, star deposited under accession number KCTC18884P Step of seed culture of each of the Staphylococcus epidermidis B424F-5 strain and the Streptococcus salivarius BS320F-4 strain deposited under accession number KCTC18885P at 35 ° C to 40 ° C for 12 to 24 hours ;
(b) 단계(a)에서 배양한 종균을 대량 배양용 배지에 접종 후 35℃ 내지 40℃에서 36시간 내지 60시간 배양하는 단계;(b) inoculating the seed cultured in step (a) into a medium for mass culture and culturing at 35° C. to 40° C. for 36 hours to 60 hours;
(c) 각각의 배양물을 원심분리하고, 용해 및 여과하는 단계; 및(c) centrifuging, lysing and filtering each culture; and
(d) 각각의 여과물을 1:1:1:1의 중량비로 혼합하는 단계.(d) mixing each filtrate in a weight ratio of 1:1:1:1.
상술한 단계 (b)에 있어서의 “대량 배양용 배지”는 본 발명 상의 균주를 대량으로 배양할 수 있는 것으로 일반적으로 알려진 다양한 배지를 제한없이 이용할 수 있으며, 보다 구체적으로 예를 들면, 트립톤, 소이톤, 글루코오스, 소듐 클로라이드 및 디포타슘포스페이스를 포함하는 배양 배지를 이용할 수 있다. 이러한 배지의 일례로서 상업적으로 이용가능한 배지는 본 발명의 실시예에서 이용한 Tryptic So Broth (TSB) 배지가 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. As the "mass culture medium" in the above step (b), various media generally known to be capable of mass-cultivating the strains of the present invention can be used without limitation, and more specifically, for example, tryptone, A culture medium comprising soytone, glucose, sodium chloride and dipotassium phosphate can be used. As an example of such a medium, a commercially available medium is Tryptic So Broth (TSB) medium used in Examples of the present invention, but is not limited thereto.
상술한 단계 (c)에 있어서, 각각의 배양물의 원심분리는 7000 rpm 내지 9000 rpm에서 4시간 내지 8시간 동안 연속식으로 진행될 수 있다. 예를 들면, 7000 rpm 내지 8800 rpm, 7000 rpm 내지 8600 rpm, 7000 rpm 내지 8400 rpm, 7000 rpm 내지 8200 rpm, 7000 rpm 내지 8000 rpm, 7200 rpm 내지 9000 rpm, 7400 rpm 내지 9000 rpm, 7600 rpm 내지 9000 rpm, 7800 rpm 내지 9000 rpm, 8000 rpm 내지 9000 rpm, 7500 rpm 내지 8500 rpm, 또는 7800 rpm 내지 8200 rpm에서 진행될 수 있으며, 예를 들면 4시간 내지 7시간, 4시간 내지 6시간, 5시간 내지 8시간, 6시간 내지 8시간 또는 5시간 내지 7시간 연속식으로 진행될 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 또한 용해 및 여과하는 단계는 원심 분리 후의 열처리 과정을 포함할 수 있다. 열처리 과정은 50℃ 내지 70℃에서 10시간 내지 40시간 진행되는 것일 수 있다. 예를 들면, 50℃ 내지 68℃, 50℃ 내지 66℃, 50℃ 내지 64℃, 50℃ 내지 62℃, 50℃ 내지 60℃, 52℃ 내지 70℃, 54℃ 내지 70℃, 56℃ 내지 70℃, 58℃ 내지 70℃, 60℃ 내지 70℃, 52℃ 내지 68℃, 54℃ 내지 66℃, 56℃ 내지 74℃, 58℃ 내지 72℃에서 진행될 수 있으며, 10시간 내지 38시간, 10시간 내지 36시간, 12시간 내지 40시간, 12시간 내지 36시간, 14시간 내지 34시간, 16시간 내지 32시간, 18시간 내지 30시간, 20시간 내지 28시간, 22시간 내지 26시간 일 수 있으나 이에 제한되지는 않으며, 더욱 구체적인 구체예에서 최소 12시간 내지 최대 36시간의 열처리를 거칠 수 있다. 여과 단계에서 공극 크기(pore size)는 0.18 μm 내지 0.26 μm일 수 있다. 더욱 구체적으로, 0.18 μm 내지 0.25 μm, 0.18 μm 내지 0.24 μm, 0.18 μm 내지 0.23 μm, 0.18 μm 내지 0.22 μm, 0.19 μm 내지 0.26 μm, 0.20 μm 내지 0.26 μm, 0.21 μm 내지 0.26 μm, 0.22 μm 내지 0.26 μm일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.In the above-described step (c), the centrifugation of each culture may be continuously performed at 7000 rpm to 9000 rpm for 4 to 8 hours. For example, 7000 rpm to 8800 rpm, 7000 rpm to 8600 rpm, 7000 rpm to 8400 rpm, 7000 rpm to 8200 rpm, 7000 rpm to 8000 rpm, 7200 rpm to 9000 rpm, 7400 rpm to 9000 rpm, 7600 rpm to 900 rpm rpm, 7800 rpm to 9000 rpm, 8000 rpm to 9000 rpm, 7500 rpm to 8500 rpm, or 7800 rpm to 8200 rpm, for example, 4 hours to 7 hours, 4 hours to 6 hours, 5 hours to 8 hours hour, 6 hours to 8 hours or 5 hours to 7 hours may be performed continuously, but is not limited thereto. In addition, the steps of dissolving and filtering may include a heat treatment process after centrifugation. The heat treatment process may be carried out at 50 ° C to 70 ° C for 10 hours to 40 hours. 50 °C to 68 °C, 50 °C to 66 °C, 50 °C to 64 °C, 50 °C to 62 °C, 50 °C to 60 °C, 52 °C to 70 °C, 54 °C to 70 °C, 56 °C to 70 °C ℃, 58 ℃ to 70 ℃, 60 ℃ to 70 ℃, 52 ℃ to 68 ℃, 54 ℃ to 66 ℃, 56 ℃ to 74 ℃, may proceed at 58 ℃ to 72 ℃, 10 hours to 38 hours, 10 hours to 36 hours, 12 hours to 40 hours, 12 hours to 36 hours, 14 hours to 34 hours, 16 hours to 32 hours, 18 hours to 30 hours, 20 hours to 28 hours, 22 hours to 26 hours, but limited thereto It is not, and in more specific embodiments, it may be subjected to a heat treatment of at least 12 hours to a maximum of 36 hours. In the filtration step, the pore size may be 0.18 μm to 0.26 μm. More specifically, 0.18 μm to 0.25 μm, 0.18 μm to 0.24 μm, 0.18 μm to 0.23 μm, 0.18 μm to 0.22 μm, 0.19 μm to 0.26 μm, 0.20 μm to 0.26 μm, 0.21 μm to 0.26 μm, 0.22 μm to 0.22 μm It may be μm, but is not limited thereto.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 피부 개선은 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강을 의미한다.In one embodiment of the present invention, the skin improvement of the present invention means skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging, and skin beneficial bacteria enhancement.
본 발명의 일 양태에 따른 “피부 개선용 화장료 조성물 제조 방법”은 상술한 본 발명의 다른 일 양태인 “피부 개선용 화장료 조성물”을 제조하는 방법에 관한 것인 바, 중복되는 내용을 원용하며, 본 명세서 기재의 과도한 복잡성을 피하기 위해 그 기재를 생략하도록 한다.The "method for producing a cosmetic composition for improving skin" according to one aspect of the present invention relates to a method for producing the "cosmetic composition for improving skin", which is another aspect of the present invention described above, and the overlapping content is incorporated, In order to avoid excessive complexity of the description in this specification, the description is omitted.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:The features and advantages of the present invention are summarized as follows:
(a) 본 발명은 소정의 균주 발효용해물을 유효 성분으로 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다. (a) The present invention provides a cosmetic composition for skin improvement comprising a fermentation lysate of a predetermined strain as an active ingredient.
(b) 본 발명은 상기 피부 개선용 화장료 조성물 제조 방법을 제공한다. (b) The present invention provides a method for preparing the cosmetic composition for skin improvement.
(c) 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 경우, 효과적으로 피부 개선, 구체적으로 예를 들면, 피부 미백, 피부 주름 개선, 피부 건조 개선, 항노화 및 피부 유익균 증강 효능을 달성할 수 있다. (c) When using the cosmetic composition of the present invention, it is possible to effectively achieve skin improvement, specifically, for example, skin whitening, skin wrinkle improvement, skin dryness improvement, anti-aging, and skin beneficial bacteria enhancement effects.
도 1은 본 발명의 균주 발효용해물을 제조하는 공정의 일례를 도시한 순서도를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 화장료 조성물(CKDB-01)의 세포 독성을 확인하기 위한 피부 3D 모델을 이용한 세포 생존률 실험 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 화장료 조성물(CKDB-01)의 피부톤 개선 효과를 확인하기 위한 실험 결과를 나타낸다.
도 4는 본 발명의 화장료 조성물(CKDB-01)의 주름 개선 효과를 확인하기 위한 실험 결과를 나타낸다.
도 5는 본 발명의 화장료 조성물(CKDB-01)의 피부 수분량 개선 효과를 확인하기 위한 실험 결과를 나타낸다.
도 6은 본 발명의 화장료 조성물(CKDB-01)의 피부 상재 균총의 증강 효과(다양성 확장)를 확인하기 위한 실험 결과를 나타낸다.
도 7은 유익균인 유산균종에 대한 본 발명의 화장료 조성물(CKDB-01)의 증강 효과(유산균종 분포 증가)를 확인하기 위한 실험 결과를 나타낸다.Figure 1 shows a flow chart showing an example of a process for producing a strain fermentation lysate of the present invention.
Figure 2 shows the results of cell viability experiments using a skin 3D model to confirm the cytotoxicity of the cosmetic composition (CKDB-01) of the present invention.
Figure 3 shows the experimental results for confirming the skin tone improvement effect of the cosmetic composition (CKDB-01) of the present invention.
Figure 4 shows the experimental results for confirming the wrinkle improvement effect of the cosmetic composition (CKDB-01) of the present invention.
Figure 5 shows the experimental results for confirming the skin moisture improvement effect of the cosmetic composition (CKDB-01) of the present invention.
6 shows experimental results for confirming the enhancement effect (diversity expansion) of the skin flora of the cosmetic composition (CKDB-01) of the present invention.
Figure 7 shows the experimental results for confirming the enhancing effect (increase in the distribution of lactic acid bacteria species) of the cosmetic composition (CKDB-01) of the present invention on lactic acid bacteria species, which are beneficial bacteria.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for explaining the present invention in more detail, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples according to the gist of the present invention. .
실시예Example
실시예 1: 피부 유익 균주 발효용해물의 제조Example 1: Preparation of skin beneficial strain fermentation lysate
다양한 피부 상재균을 사용하여 가장 바람직한 균주 발효용해물 조합을 선정하였고, 하기 실시예의 인체 피부테스트를 통해 4종 복합 균주의 균주 발효용해물의 효능을 검증하였다. 보다 상세하게는 더마코커스 프로펀디(Dermacoccus profundi) 1종, 스트렙토코커스 살리바리우스(Streptococcus salivarius) 1종, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 2종 균주를 각각 37℃에서 12~24시간 종균배양 후 대량 배양용 배지인 Tryptic Soy Broth (BDTM Difco)를 사용하여 이에 접종 후 37℃에서 48시간 배양하였다. 이후 각각의 배양물을 8000 rpm에서 6시간 동안 연속식으로 원심분리하고, 60℃에서 최소 12시간 내지 최대 36시간 열처리 후 0.22 μm pore size로 여과하여 제조한 발효 용해물을 1:1:1:1의 비율로 혼합하여 화장료 조성물 제조에 이용하였다. 균주 발효용해물의 상세한 제조 과정을 도 1에 도식화하였다. The most desirable strain fermentation lysate combination was selected using various skin flora, and the efficacy of the strain fermentation lysate of the four complex strains was verified through human skin tests in the following examples. More specifically, 1 strain of Dermacoccus profundi, 1 strain of Streptococcus salivarius, and 2 strains of Staphylococcus epidermidis were seeded at 37 ° C for 12-24 hours, respectively. After inoculation using Tryptic Soy Broth (BD TM Difco), a medium for mass culture, the cells were incubated at 37°C for 48 hours. Thereafter, each culture was continuously centrifuged at 8000 rpm for 6 hours, heat-treated at 60 ° C for a minimum of 12 hours to a maximum of 36 hours, and the fermentation lysate prepared by filtering with a 0.22 μm pore size was 1: 1: 1: It was mixed in a ratio of 1 and used for preparing a cosmetic composition. The detailed manufacturing process of strain fermentation lysate is schematically shown in FIG.
실시예 2: 피부 유익 균주 발효용해물을 함유하는 화장료 조성물Example 2: Cosmetic Composition Containing Fermentation Lysate of Skin Beneficial Strains
상기 피부 유익 균주 발효용해물을 포함한 화장료 조성물은 정제수, 부틸렌글라이콜, 1,2-헥산다이올, 더마코커스 프로펀디 용해추출물, 스트렙토코커스 살리바리우스 용해추출물, 스타필로코커스 에피더미디스 2종 용해추출물을 각각 표 1에 나타낸 일정 비율로 혼합하여 제조하였다. The cosmetic composition including the fermentation lysate of the skin-beneficial strain is purified water, butylene glycol, 1,2-hexanediol, Dermacoccus profundi soluble extract, Streptococcus salivarius soluble extract, and
(중량 %)content
(weight %)
실시예 3: 3D 피부 모델 내 효과 확인Example 3: Confirmation of effect in 3D skin model
상기 제조한 화장료 조성물의 피부 독성과 피부 미백 효과를 확인하기 위해 상용화된 3D 피부 모델인 Neoderm®-ME를 활용하여 in vivo 대체 효능 평가를 진행하였다. Neoderm®-ME 모델은 한국인 인체 진피세포와 각질세포 그리고 멜라닌 세포가 공배양(co-culture)된 모델로 인체피부와 생리적, 형태적으로 매우 유사한 모델이다. UV 조사 및 약물, 화장품 원료에 의한 독성 및 멜라닌 생성량 변화를 다양한 방법으로 측정 가능한 바 본 연구에 적용하였다. In order to confirm the skin toxicity and skin whitening effect of the cosmetic composition prepared above , an in vivo alternative efficacy evaluation was conducted using Neoderm ® -ME, a commercialized 3D skin model. The Neoderm ® -ME model is a co-culture model of Korean human dermal cells, keratinocytes, and melanocytes, and is physiologically and morphologically very similar to human skin. Toxicity and changes in melanin production caused by UV irradiation and raw materials for drugs and cosmetics can be measured in various ways, so they were applied to this study.
3-1. 독성 확인3-1. toxicity check
상기 화장료 조성물의 3D 피부모델 내 독성평가는 식약처 가이드라인을 준수하여 평가를 진행하였고, 시험물질의 독성 여부는 MTT assay를 통해 확인하였다. 3D 피부 모델 내 독성을 확인하기 위해 피부에 계면활성 성분인 SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)를 대조군으로 사용하여 평가를 수행하였다. MTT 용액의 제조는 MTT 1 g을 PBS 40 ml에 혼합하여 0.22 μm 필터링 후, 25 mg/ml MTT 스톡 용액(stock solution)을 준비한 후, 49.4 ml의 보존 배지(Maintenance medium) (with serum)와 0.6 ml의 25 mg/ml MTT 스톡 용액(stock solution)을 혼합하여 최종 50 ml의 0.3 mg/ml MTT 작업 용액(working solution)을 제조하였다. 화장료 조성물과 양성대조군인 5% SDS와 비교처리군인 알부틴(Arbutin) 70 ㎍/㎖을 Neoderm® 모델에 각각 70 ㎕ 처리하여, 7일간 배양 후 세포 독성을 측정하였다. 측정 방법은 배양이 완료된 피부 모델에 보존 배지(Maintenance medium)로 1-2회 세척하여 Neoderm® 내 잔여물질을 제거하였다. 12 웰 컬쳐 플레이트(well culture plate)에 웰(well)당 2 ml의 0.3 mg/ml MTT 용액을 첨가한 후, Neoderm®을 상기 준비한 웰(well)로 옮겨 37℃, 5% CO2 배양기(incubator)에서 3시간 배양하였다. 미리 준비한 0.04 N HCl-이소프로판올(isopropanol)을 1.5 ml 브라운 마이크로튜브(brown microtube)에 500 μl씩 미리 분주해 놓은 후, 배양이 완료된 Neoderm®을 흡수지 위에 올려 여분의 MTT 용액을 제거하고 8 mm 바이옵시 펀치(biopsy punch)로 Neoderm® 조직을 분리하였다. 분리한 Neoderm® 조직을 0.04 N HCl-이소프로판올(isopropanol)이 분주된 튜브(tube)에 넣고 교반하여 4시간 동안 탈색시켰다. 이후, 6 웰 플레이트(well plate)에 200 μl씩 옮겨 570±30 nm 파장에서 흡광도를 측정하였고, blank는 0.04 N HCl-이소프로판올(isopropanol)을 사용하였다. Blank의 흡광도 평균값을 구한 후, 음성대조군 및 비교처리군, 균주처리군의 흡광도 값을 blank 흡광도 평균값으로 빼서 보정된 흡광도 값을 구하였다. 세포생존율(%)은 상기 보정한 음성대조군 흡광도 값에 대한 시험물질 흡광도 값을 백분율로 계산하였다(식 1).The toxicity evaluation in the 3D skin model of the cosmetic composition was evaluated in compliance with the Ministry of Food and Drug Safety guidelines, and the toxicity of the test substance was confirmed through the MTT assay. In order to confirm toxicity in the 3D skin model, evaluation was performed using SDS (Sodium Dodecyl Sulfate), a surface active ingredient on the skin, as a control. To prepare the MTT solution, 1 g of MTT was mixed in 40 ml of PBS, filtered through 0.22 μm, and a 25 mg/ml MTT stock solution was prepared, followed by 49.4 ml of Maintenance medium (with serum) and 0.6 ml of MTT. A final 50 ml of 0.3 mg/ml MTT working solution was prepared by mixing ml of 25 mg/ml MTT stock solution. 70 μl of the cosmetic composition, 5% SDS as a positive control group, and 70 μg/ml of Arbutin as a comparative treatment group were treated with Neoderm ® model, respectively, and cytotoxicity was measured after culturing for 7 days. As for the measurement method, residual substances in Neoderm ® were removed by washing the cultured skin model 1-2 times with maintenance medium. After adding 2 ml of 0.3 mg/ml MTT solution per well to a 12-well culture plate, Neoderm ® was transferred to the prepared well and placed in a 37°C, 5% CO 2 incubator. ) for 3 hours. After dispensing 500 μl of 0.04 N HCl-isopropanol prepared in advance into a 1.5 ml brown microtube in advance, place the cultured Neoderm ® on an absorbent paper to remove excess MTT solution and 8 mm biopsies. Neoderm ® tissue was separated with a biopsy punch. The separated Neoderm ® tissue was placed in a tube dispensed with 0.04 N HCl-isopropanol and agitated to decolorize for 4 hours. Thereafter, 200 μl of each was transferred to a 6-well plate and absorbance was measured at a wavelength of 570 ± 30 nm, and 0.04 N HCl-isopropanol was used as a blank. After obtaining the average value of the absorbance of the blank, the corrected absorbance value was obtained by subtracting the absorbance values of the negative control group, the comparative treatment group, and the strain treatment group by the average absorbance value of the blank. Cell viability (%) was calculated as a percentage of the absorbance value of the test substance relative to the absorbance value of the corrected negative control group (Equation 1).
[식 1][Equation 1]
실험 결과, 대조군인 5% SDS 처리구는 대부분의 피부 세포가 사멸하는 것으로 확인되었다. 음성대조군인 PBS 처리구 대비 모든 처리구에서 세포생존율이 유의적으로 감소하였으나, 본 발명의 화장료 조성물(약어: CKDB-01)의 세포생존율은 식약처 미백 고시물질인 알부틴과 유사한 수준의 세포생존율(약 52%)을 보였다(도 2).As a result of the experiment, it was confirmed that most of the skin cells in the control group treated with 5% SDS died. Although the cell viability was significantly reduced in all treatment groups compared to the negative control PBS treatment group, the cell viability rate of the cosmetic composition (abbreviation: CKDB-01) of the present invention is a cell viability rate similar to that of arbutin (about 52 %) was shown (FIG. 2).
3-2. 미백 효과 확인3-2. Check the whitening effect
화장료 조성물(CKDB-01)의 멜라닌 저해효과를 정성적으로 확인하기 위한 피부 3D 모델 내 평가를 수행하였다. 양성대조군인 알부틴을 독성 평가와 동일하게 70 ㎍/㎖을 처리하여 화장료 조성물(CKDB-01)과의 차이를 확인하였다. 멜라닌 색소 정량 방법은 시험물질을 처리한 Neoderm® 조직을 PBS로 2회 세척한 후, Blade를 이용하여 Neoderm®을 인서트(insert)의 가장자리로부터 도려내듯이 분리하였다. 분리한 피부 조직을 1.5 ml e-튜브(e-tube)에 담고 PBS를 완전히 제거하고, e-튜브(e-tube)에 용해 버퍼(lysis buffer; Solvable™)를 360 μl씩 첨가하였다. 상온에서 5~10분간 반응시킨 후, 인서트 멤브레인(insert membrane)이 피부 조직으로부터 분리된 후 포셉(forcep)으로 멤브레인(membrane)을 제거하였다. 이후 95℃의 힛 블록(heat block)에서 45분 배양(incubation)하고, 13,000 rpm, RT, 10분 동안 원심분리를 실시하였다. 원심분리 후 상층액을 1.5 ml e-튜브(e-tube)에 옮겨 준비하였다. 20 mg/ml NH4OH를 이용하여 100 μg/ml 멜라닌(Melanin) 용액을 제조하여 100 μg/ml 멜라닌(Melanin) 용액을 용해 버퍼(lysis buffer)를 이용하여 단계별 희석하여 표준용액을 준비하였다. 이후, 96 웰 플레이트에 스텐다드(standard) 용액, blank 및 시험물질을 200 μl씩 옮겨 마이크로플레이트 리더(microplate reader)에서 흡광도(405 nm)를 측정하여, 멜라닌(melanin) 표준곡선을 이용하여 정량하였다. 멜라닌(Melanin) 정량 표준 곡선을 그린 후 시험물질의 흡광도 값을 대입하여 산출하였다. 실험 결과, 음성대조군인 PBS 처리구 대비 화장료 조성물(CKDB-01) 처리 시, 대조구 대비 유의적으로 멜라닌 색소량이 감소하는 것을 확인하였다. 또한 양성대조군인 알부틴의 멜라닌 농도인 27.85 ㎍/㎖ 보다 더 낮은 농도인 20.11 ㎍/㎖로 확인되어 우수한 미백 효능을 확인하였다(표 2).In order to qualitatively confirm the melanin inhibitory effect of the cosmetic composition (CKDB-01), evaluation was performed in the skin 3D model. Arbutin, a positive control, was treated at 70 μg/ml in the same manner as in the toxicity evaluation, and differences from the cosmetic composition (CKDB-01) were confirmed. In the melanin pigment quantification method, the Neoderm ® tissue treated with the test substance was washed twice with PBS, and then Neoderm ® was separated using a blade as if cut out from the edge of the insert. The separated skin tissue was placed in a 1.5 ml e-tube, PBS was completely removed, and 360 μl of lysis buffer (Solvable™) was added to the e-tube. After reacting at room temperature for 5 to 10 minutes, the insert membrane was separated from the skin tissue, and then the membrane was removed with forceps. Thereafter, incubation was performed on a heat block at 95° C. for 45 minutes, and centrifugation was performed at 13,000 rpm, RT, and 10 minutes. After centrifugation, the supernatant was transferred to a 1.5 ml e-tube and prepared. A standard solution was prepared by preparing a 100 μg/ml melanin solution using 20 mg/ml NH 4 OH and diluting the 100 μg/ml melanin solution step by step using a lysis buffer. Thereafter, 200 μl of the standard solution, the blank, and the test material were transferred to a 96-well plate, and the absorbance (405 nm) was measured in a microplate reader, and quantified using a melanin standard curve. After drawing a standard curve for quantification of melanin, it was calculated by substituting the absorbance value of the test substance. As a result of the experiment, it was confirmed that the amount of melanin pigment decreased significantly compared to the control group when treated with the cosmetic composition (CKDB-01) compared to the negative control PBS treatment group. In addition, it was confirmed as 20.11 μg / ml, which is lower than the melanin concentration of 27.85 μg / ml of arbutin, which is a positive control, and excellent whitening efficacy was confirmed (Table 2).
실시예 4: 피부톤 개선 효과 확인Example 4: Confirmation of skin tone improvement effect
실시예 1, 2의 방법과 조성으로 제조된 화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group) 사용시의 피부톤 개선 효과를 확인하였다. 대조 물질로는 피부 유익 균주 발효용해물을 제외한 정제수 68%, 부틸렌글라이콜 30%, 1,2-헥산다이올 2%를 함유한 스킨 제형의 화장료 조성물(Control Group)을 제조하여 비교 평가하였다. 노화된 피부에서의 피부톤 개선 효과를 확인하기 위해, 평균 나이 52세의 여성 21명을 대상으로 CKDB-01 사용 후 2주, 4주의 얼굴(뺨) 피부톤 변화를 확인하였다. 아침, 저녁 세안 후 본 화장료 조성물을 사용하게 하였으며, 시험기간 중에는 다른 기초 화장품 사용을 금지하였다. CKDB-01는 피험자의 오른쪽 뺨에 도포하도록 하였고, 대조 제품은 피험자의 왼쪽 뺨에 도포하도록 하였다. 피부톤 변화 확인은 시험 전, 시험 2주 후 및 시험 4주 후에 Chromameter CR-400을 이용하여 피부 밝기 (L-value)를 측정 및 분석하였다. Chromameter CR-400은 사람의 눈과 같은 구조로, 3개의 센서에 3원색(적, 청, 녹) 필터를 이용하여 반사된 빛에 따른 반사색(율)을 통해 사람에 의해서 인지되는 색들을 측정하며, 이를 3자극치(Tristimulus) 방식이라고 한다. 개선율은 다음과 같이 산출하였다(식 2).The skin tone improvement effect when using the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group) prepared by the method and composition of Examples 1 and 2 was confirmed. As a control material, a skin-type cosmetic composition (Control Group) containing 68% of purified water, 30% of butylene glycol, and 2% of 1,2-hexanediol, excluding fermentation lysates of skin-beneficial strains, was prepared and evaluated for comparison. . In order to confirm the skin tone improvement effect on aged skin, 21 women with an average age of 52 years old were checked for changes in facial (cheek) skin tone after 2 weeks and 4 weeks of using CKDB-01. After cleansing in the morning and evening, this cosmetic composition was used, and the use of other basic cosmetics was prohibited during the test period. CKDB-01 was applied to the subject's right cheek, and the control product was applied to the subject's left cheek. Skin tone change was confirmed by measuring and analyzing skin brightness (L-value) using Chromameter CR-400 before, 2 weeks and 4 weeks after the test. Chromameter CR-400 has the same structure as the human eye, and measures the colors perceived by humans through the reflected color (rate) according to the reflected light by using three primary color (red, blue, green) filters in three sensors. This is called the tristimulus method. The improvement rate was calculated as follows (Equation 2).
[식 2][Equation 2]
화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group)의 피부톤 개선 효능 평가 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 처리 후 2주차, 4주차 모두 피부 밝기가 유의적으로 증가하는 결과를 확인하였으며, 대조구(Control Group) 대비 유의한 피부톤 개선 효과를 보였다(2주차 개선율: 2.58%, 4주차 개선율: 3.38%).As a result of evaluating the skin tone improvement efficacy of the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group), as shown in FIG. Significant improvement in skin tone was shown (2nd week improvement rate: 2.58%, 4th week improvement rate: 3.38%).
실시예 5: 눈가 주름 개선 효과 확인Example 5: Confirmation of wrinkle improvement effect around the eyes
실시예 1, 2의 방법과 조성으로 제조된 화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group) 사용시의 눈가 주름 개선 효과를 확인하였다. 효능 확인 방법은 상기 실시예 4의 내용과 동일하게 진행하였으며, 눈가 주름의 측정 및 분석은 시험 전, 시험 2주 후 및 시험 4주 후에 Antera 3D를 이용하였다. Antera 3D는 고해상도 3차원 이미지 측정장비로서, 서로 다른 주파수의 가시광선을 광원으로 피부에 조사하였을 때, 반사되는 신호를 이미지화하여 피부 상태를 분석할 수 있는 장비이다. 눈가 주름 개선율은 피부톤 개선 효과와 같은 수식으로 계산하여 도출하였다. The effect of improving wrinkles around the eyes when using the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group) prepared by the method and composition of Examples 1 and 2 was confirmed. The efficacy confirmation method was performed in the same manner as in Example 4, and the measurement and analysis of wrinkles around the eyes were performed using Antera 3D before, 2 weeks after, and 4 weeks after the test. Antera 3D is a high-resolution three-dimensional image measuring device that can analyze the skin condition by imaging the signal reflected when visible light of different frequencies is irradiated to the skin as a light source. The improvement rate of wrinkles around the eyes was derived by calculating with the same formula as the skin tone improvement effect.
화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group)의 눈가 주름 개선 효능 평가 결과, CKDB-01 처리구(Treated Group)에서 시험 전후 유의적인 눈가주름 감소 효과를 확인하였다(4주차 개선율: 7.33%). 또한 대조구(Control Group) 대비 유의적인 눈가주름 감소 효과를 보였다(도 10).As a result of evaluating the efficacy of the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group) on improving wrinkles around the eyes, a significant effect on reducing wrinkles around the eyes before and after the test was confirmed in the CKDB-01 treated group (Treated Group) (4th week improvement rate: 7.33%). In addition, a significant effect of reducing wrinkles around the eyes was shown compared to the control group (FIG. 10).
실시예 6: 피부 수분량 개선 효과 확인Example 6: Confirmation of skin moisture improvement effect
실시예 1, 2의 방법과 조성으로 제조된 화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group) 사용시의 피부 수분량 개선 효과를 확인하였다. 효능 확인 방법은 상기 실시예 4의 내용과 동일하게 진행하였으며, 피부 수분량의 측정 및 분석은 시험 전, 시험 2주 후 및 시험 4주 후에 Corneometre®를 이용하였다. Corneometer®는 피부의 정전용량(capacitance)이 수분함량과 비례하여 증가하는 성질을 이용하여 간접적으로 수분함량을 측정하는 장비이며, 측정단위는 Arbiturary Unit(A.U.)으로 표시하는데, 이는 피부 수분함량의 상대적, 임의적 수치를 의미한다. AU 측정 후 피부 수분량 개선율은 피부톤 개선율과 같은 방법으로 산출하였다.The skin moisture improvement effect was confirmed when using the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group) prepared by the method and composition of Examples 1 and 2. The efficacy confirmation method was performed in the same manner as in Example 4, and Corneometre ® was used for measurement and analysis of skin moisture before the test, 2 weeks after the test and 4 weeks after the test. Corneometer ® is a device that indirectly measures the moisture content by using the property that the capacitance of the skin increases in proportion to the moisture content. , which means an arbitrary number. After AU measurement, the skin moisture improvement rate was calculated in the same way as the skin tone improvement rate.
화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group)의 피부 수분량 개선 효능 평가 결과, CKDB-01 처리구(Treated Group)에서 시험 전 대비 시험 후 4주차에서 유의적인 피부 수분량 증가 결과를 확인하였으며(4주차 개선율: 17.40%), 대조구(Control Group) 대비 유의적인 피부 수분량 증가 효과를 보였다(도 5).As a result of evaluating the skin moisture improvement efficacy of the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group), a significant increase in skin moisture content was confirmed in the CKDB-01 treated group (Treated Group) at 4 weeks after the test compared to before the test (4th week improvement rate: 17.40 %), showed a significant skin moisture increase effect compared to the control group (Fig. 5).
실시예 7: 피부 균총 개선 효과 확인Example 7: Confirmation of skin flora improvement effect
실시예 1, 2의 방법과 조성으로 제조된 화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group) 사용시의 피부 균총 개선 효과를 확인하였다. 효능 확인 방법은 상기 실시예 4의 내용과 동일하게 진행하였으며, 시험 전, 시험 2주 후 및 시험 4주 후에 피부 시료를 채취하여, 피부 균총 DNA를 추출하여 bacterial DNA 시퀀싱 후 결과를 분석하였다. 보다 상세하게는, 시험자가 제공하는 기준 세안제를 이용하여 세안 후 페이퍼타올로 가볍게 두드려 물기를 제거한 후 30분간 항온 및 항습 조건(20~24℃, 40~60% RH)에서 안정을 취한 후, 멸균 면봉을 이용하여 피험자 뺨의 3부위를 1분 이상 문질러 채취하였다. 1명의 피험자 당 3부위 각각 총 3개의 면봉을 사용하여 채취하였고, 채취 후에는 DNA 추출을 위한 보관액이 들어있는 콜렉션 튜브(collection tube)에 수집하였다. 수집한 면봉에서 DNA를 추출하였고, 시험 전과 화장료 조성물 사용 후 2주, 4주의 피부 균총 변화를 확인하였다. The skin flora improvement effect when using the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group) prepared by the method and composition of Examples 1 and 2 was confirmed. The efficacy confirmation method was carried out in the same manner as in Example 4, and skin samples were taken before the test, 2 weeks after the test and 4 weeks after the test, skin flora DNA was extracted, and the results were analyzed after bacterial DNA sequencing. More specifically, after washing your face using the standard face wash provided by the tester, pat dry with a paper towel, rest for 30 minutes under constant temperature and humidity conditions (20 ~ 24 ℃, 40 ~ 60% RH), and then sterilize Three parts of the subject's cheek were rubbed for more than 1 minute using a cotton swab. It was collected using a total of three cotton swabs from each of the three sites per subject, and after collection, it was collected in a collection tube containing a storage solution for DNA extraction. DNA was extracted from the collected cotton swabs, and changes in skin flora were confirmed before the test and 2 weeks and 4 weeks after using the cosmetic composition.
시험 4주차의 화장료 조성물(CKDB-01; Treated Group)의 피부 균총 개선 효능 평가 결과, CKDB-01 처리구(Treated Group)에서 대조구(Control Group) 대비 피부 공생균의 다양성을 확인하는 지표인 Shannon index가 증가하는 효과를 보였다(도 6).As a result of evaluating the skin flora improvement efficacy of the cosmetic composition (CKDB-01; Treated Group) at the 4th week of the test, the Shannon index, an index to confirm the diversity of skin commensal bacteria in the CKDB-01 treated group (Treated Group) compared to the control group (Control Group), showed an increasing effect (FIG. 6).
또한, 피부에 분포하는 유산균인 락토바실러스(Lactobacillus)와 비피도박테리움(Bifidobacterium)의 시험 4주차 분포를 확인한 결과, 대조 물질(Control Group) 대비 CKDB-01(Treated Group) 처리 시 유산균종의 분포가 증가하는 결과를 확인하였다(도 7).In addition, as a result of confirming the distribution of Lactobacillus and Bifidobacterium, which are lactic acid bacteria distributed on the skin, in the 4th week of the test, distribution of lactic acid bacteria species when treated with CKDB-01 (Treatated Group) compared to the control substance (Control Group) It was confirmed that the result of increasing (FIG. 7).
Claims (7)
Dermacoccus profundi BS35F-3 strain deposited under accession number KCTC18883P, Staphylococcus epidermidis deposited under accession number KCTC18886P ( Staphylococcus epidermidis ) BS47C-1 strain, Staphylococcus epi deposited under accession number KCTC18884P Dermadidis ( Staphylococcus epidermidis ) B424F-5 strain, and Streptococcus salivarius ( Streptococcus salivarius ) BS320F-4 strain deposited with accession number KCTC18885P, comprising fermentation lysate as an active ingredient, consisting of skin whitening and skin dryness improvement Any one or more cosmetic compositions for skin improvement selected from the group.
The cosmetic according to claim 1, characterized in that the fermentation lysate of each of the BS35F-3 strain, BS47C-1 strain, B424F-5 strain and BS320F-4 strain is included in a weight ratio of 1: 1: 1: 1 composition.
(a) 기탁번호 KCTC18883P로 기탁된 더마코커스 프로펀디 (Dermacoccus profundi) BS35F-3 균주, 기탁번호 KCTC18886P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) BS47C-1 균주, 기탁번호 KCTC18884P로 기탁된 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) B424F-5 균주, 및 기탁번호 KCTC18885P로 기탁된 스트랩토코커스 살리바리우스 (Streptococcus salivarius) BS320F-4 균주 각각을 35℃ 내지 40℃에서 12~24시간 종균배양하는 단계;
(b) 단계(a)에서 배양한 종균을 대량 배양용 배지에 접종 후 35℃ 내지 40℃에서 36시간 내지 60시간 배양하는 단계;
(c) 각각의 배양물을 원심분리하고, 용해 및 여과하는 단계; 및
(d) 각각의 여과물을 1:1:1:1의 중량비로 혼합하는 단계.
A method for preparing at least one cosmetic composition for skin improvement selected from the group consisting of skin whitening and skin dryness improvement comprising the following steps:
(a) Dermacoccus profundi BS35F-3 strain deposited under accession number KCTC18883P, Staphylococcus epidermidis deposited under accession number KCTC18886P, Staphylococcus epidermidis BS47C-1 strain, star deposited under accession number KCTC18884P Step of seed culture of each of the Staphylococcus epidermidis B424F-5 strain and the Streptococcus salivarius BS320F-4 strain deposited under accession number KCTC18885P at 35 ° C to 40 ° C for 12 to 24 hours ;
(b) inoculating the seed cultured in step (a) into a medium for mass culture and culturing at 35° C. to 40° C. for 36 hours to 60 hours;
(c) centrifuging, lysing and filtering each culture; and
(d) mixing each filtrate in a weight ratio of 1:1:1:1.
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| KR1020220102354A KR102517471B1 (en) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | Cosmetic Composition Comprising a Functional Novel Fermented Bacterial Strain Lysate Having Skin Whitening, Anti-wrinkle, skin dryness improvement, Anti-aging and/or Skin beneficial bacterial strains increasing Activity |
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| KR1020220102354A KR102517471B1 (en) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | Cosmetic Composition Comprising a Functional Novel Fermented Bacterial Strain Lysate Having Skin Whitening, Anti-wrinkle, skin dryness improvement, Anti-aging and/or Skin beneficial bacterial strains increasing Activity |
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
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|---|
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