KR102512891B1 - 중추 신경계 장애를 치료하기 위한 벤조산리튬의 용도 - Google Patents

중추 신경계 장애를 치료하기 위한 벤조산리튬의 용도 Download PDF

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Abstract

벤조산리튬 화합물에 의한 중추 신경계 (CNS) 장애의 치료 또는 통증의 감쇠 방법.

Description

중추 신경계 장애를 치료하기 위한 벤조산리튬의 용도
관련 출원
본 출원은 2016년 6월 13일에 출원된 미국 가출원 U.S.S.N. 62/349,600에 대한 우선권을 주장하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
중추 신경계 (CNS)는 뇌 및 척수를 포함한다. CNS는 외상, 감염, 변성, 구조적 결함 및/또는 손상, 종양, 혈류 중단 및 자가면역 장애를 포함한 다양한 인자에 의해 유발될 수 있는 다양한 장애에 취약하다. CNS 장애의 증상은 장애에 수반되고 장애의 원인이 되는 신경계 영역에 의존할 것이다.
CNS 장애에 대한 효과적인 요법의 개발은 이러한 장애의 복잡성 및 혈액-뇌 장벽을 통해 치료제를 전달하는 효율적인 기술의 부족으로 인해 다른 치료 영역보다 뒤처졌다. 따라서, CNS 장애에 대한 새로운 치료 접근법을 개발하는 것은 큰 관심사이다.
본 개시내용은, 적어도 부분적으로, 벤조산리튬이 다양한 시험관내 및 생체내 CNS 질환 모델에서 보호 효과를 나타낸 예상외의 결과에 기초한다. 예를 들어, 벤조산리튬은 미토콘드리아 기능장애, 산화성 스트레스, 및 반응성 산소 종 과다생산을 유도하는 것으로 공지되어 있는 3-니트로프로피온산 (3-NP)에 의해 유도된 뉴런 독성을 성공적으로 구제하고; 다양한 CNS 장애에서 중요한 역할을 하는 미토콘드리아 기능을 위한 예비 호흡 용량을 증진시키고; 근위축성 측삭 경화증 (ALS) 동물 모델에서 질환 진행을 개선시키고; 산소 및 글루코스 박탈로부터 뉴런을 보호하고; 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘 (MPTP) 단독에 의해 또는 3-NP와의 조합에 의해 유도된 독성으로부터 세포 사멸 및 행동 장애를 감소시키고; 아밀로이드-β 펩티드에 의해 유발된 뉴런 손상을 보호하였다. 또한, 벤조산리튬은 예상외로 통증을 완화시키는 것으로 관찰되었다. 마지막으로, 벤조산리튬은 예상외로 벤조산나트륨 및 염화리튬이 조합된 것과 비교하여 보다 우수한 약동학적 특색 및 치료 효능을 나타내었다.
따라서, 본 개시내용의 한 측면은 중추 신경계 (CNS) 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 벤조산리튬 화합물을 투여하는 것을 포함하는 CNS 질환을 치료하는 방법을 특색으로 하며, 상기 화합물은 추가로 담체를 포함하는 조성물로 제제화될 수 있다. 일부 예에서, 조성물은 제약 조성물, 의료용 식품, 또는 건강 식품일 수 있고, 이는 추가로 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, CNS 질환은 헌팅톤병, 다계통 위축 (MSA), 발작-연관 신경독성, 파킨슨병, 미토콘드리아 기능장애-유도된 CNS 장애, 미토콘드리아 근병증 뇌근병증 락트산 산증 졸중-유사 증상 (MELAS), 신경병증 운동실조 색소성 망막염 및 안검하수증 (NARP), 근신경원성 위장 뇌병증 (MNGIE), 레베르 유전성 시신경병증 (LHON), 라이 증후군, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 근간대성 간질, 다발성 경화증, 허혈 졸중, 혈관성 치매, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 다운 증후군, 루이 소체 치매 (LBD), 산발성 봉입체 근염 (sIBM) 또는 산발성 뇌 아밀로이드 혈관병증 (CAA), 전두측두엽 치매 (FTD), 유약 X 증후군 (FXS), 뇌실주위 백질연화증, 프리드라이히 운동실조, 고셔병, 지주막하 출혈, 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 두개내 고혈압, 산발성 크로이츠펠트-야콥병, 지연성 이상운동증, 레트 증후군, 측삭 경화증, 유전성 경직성 하반신부전마비, 진행성 연수 마비, 척수성 근육 위축, 또는 X-연관 척수연수성 근육 위축 (케네디병)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 신경변성 질환이다.
일부 실시양태에서, CNS 질환은 산화성 스트레스, 반응성 산소 종 과다-생산, 또는 둘 다와 연관된다. 예는 뇌실주위 백질연화증, 프리드라이히 운동실조, 고셔병, 지주막하 출혈, 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 두개내 고혈압, 산발성 크로이츠펠트-야콥병, 지연성 이상운동증, 레트 증후군, 또는 운동 뉴런 질환 (예를 들어, ALS, 원발성 측삭 경화증, 유전성 경직성 하반신부전마비, 진행성 연수 마비 (일부는 SOD1 돌연변이를 가짐), 척수성 근육 위축, 또는 X-연관 척수연수성 근육 위축 (케네디병))을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 대상체는 운동 뉴런 기능과 연관된 유전적 결함을 갖는 인간 환자이다. 한 예에서, 인간 환자는 돌연변이된 슈퍼옥시드 디스뮤타제 1 (SOD1) 유전자를 갖는다. 다른 예에서, 대상체는 미토콘드리아 기능장애를 갖는 인간 환자이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 대상체는 CNS 질환을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 인간 환자이다. 일부 예에서, 대상체는 또 다른 CNS 질환 치료 중에 있다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 벤조산리튬 화합물 중 임의의 것 (예를 들어, 벤조산리튬 또는 LiBen)의 유효량을 그를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 통증을 완화시키는 방법을 특색으로 하며, 상기 화합물은 추가로 담체, 예를 들어 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물, 의료용 식품, 또는 건강 식품)로 제제화될 수 있다. 대상체는 급성 통증, 만성 통증, 신경병증성 통증, 복합 부위 통증 증후군, 또는 당뇨병성 신경병증, 염증 또는 골다공증에 의해 유발된 통증을 앓고 있는 인간 환자일 수 있다. 일부 예에서, 대상체는 또 다른 항통증 치료 중에 있다.
본원에 기재된 임의의 방법에서, 대상체에게 벤조산리튬 화합물을 약 5 내지 약 150 mg/kg, 예를 들어, 약 15 내지 약 140 mg/kg; 약 25 내지 약 130 mg/kg; 약 35 내지 약 120 mg/kg; 약 45 내지 약 110 mg/kg; 약 55 내지 약 100 mg/kg; 약 65 내지 약 90 mg/kg; 또는 약 75 내지 약 80 mg/kg으로 투여할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 대상체에게 벤조산리튬 화합물을 1일 4회 내지 1개월 1회의 빈도로 투여할 수 있다. 벤조산리튬 화합물은 제약 조성물로 제제화될 수 있고, 이는 전신 경로, 예를 들어, 경구 투여 또는 비경구 투여에 의해 투여될 수 있다.
또한 (i) 본원에 기재된 바와 같은 표적 CNS 장애를 치료하는데 있어서 또는 통증을 완화시키는데 사용하기 위한 제약 조성물이며, 벤조산리튬 화합물 (예를 들어, 벤조산리튬) 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물; 및 (ii) 표적 CNS 질환 중 임의의 것을 치료하거나 통증을 완화시키는데 사용하기 위한 의약을 제조하기 위한 벤조산리튬 화합물 예컨대 벤조산리튬의 용도가 본 개시내용의 범주 내에 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 상세내용이 하기 설명에 제시된다. 본 발명의 다른 특색 또는 이점은 하기 도면 및 여러 실시양태의 상세한 설명, 및 또한 첨부된 청구범위로부터 명백할 것이다.
도 1은 1차 피질 배양물에서 3-니트로프로피온산 (3-NP)에 의해 유도된 독성에 대한 벤조산리튬의 신경보호 효과를 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 0, 1 또는 3 mM 벤조산리튬으로 처리된 세포에 대한 세포 생존 백분율을 나타낸 막대 그래프. b: 3-NP에 의해 처리된 또는 처리되지 않는 피질 배양물에서의, 사멸 세포 대 생존 세포의 비로 정의되는 "사멸 지수"를 보여주는 막대 그래프. c: 벤조산리튬 (1 또는 3 mM)으로 전처리된 세포의 MAP-2 면역세포화학의 결과를 보여주는 사진. 3NP는 세포 사멸을 유발하는 반면에, 벤조산리튬은 세포를 용량-의존적 방식으로 구제한다.
도 2는 1차 피질 배양물에서 3-NP에 의해 유도된 ROS 생산을 구제하는데 있어서 벤조산리튬의 효과를 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 벤조산리튬 0, 0.5, 1, 3 mM로 전처리된 피질 배양물에서의 ROS의 형광 다이어그램의 예. b: 벤조산리튬 (0.5 mM), 벤조산나트륨 (0.5 mM) 및 염화리튬 (0.5 mM) 사이의 ROS 감소 효과를 비교한, 패널 a에 제시된 형광 신호의 통계적 분석 결과를 보여주는 그래프. 막대는 표준 오차 평균을 나타낸다. * p-값 < 0.05; ** p-값 < 0.01; *** p-값 < 0.001; **** p-값 < 0.0001, $는 LiBen을 LiCl과 비교하여 나타내고, $: p-값 < 0.05; #는 LiBen을 NaBen과 비교하여 나타내고, ##: p-값 < 0.01.
도 3은 벤조산리튬이 미토콘드리아 기능을 위한 예비 호흡 용량을 증진시킨다는 것을 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 조정제의 순차적 주사에 의한 OCR의 시간-의존성 선 그래프. CTRL, 대조군; LiBen, 벤조산리튬; LiCl, 염화리튬; NABen, 벤조산나트륨; OCR, 산소 소모율; OSM, 온코스타틴 M. b 및 c: 기저 호흡, 예비 호흡 용량, 양성자 누출, 및 ATP 생산을 포함한 조정제 주사의 각각의 부문에 따른 패널 a의 결과로부터 분석된 OCR의 막대 그래프. 벤조산리튬은 벤조산나트륨 및 염화리튬보다 낮은 기저 활성, 양성자 누출, ATP 생산 뿐만 아니라 벤조산나트륨보다 큰 예비 호흡 용량으로, 보다 우수한 미토콘드리아 기능을 보여준다.
도 4는 벤조산리튬이 근위축성 측삭 경화증 (ALS)에서 질환 진행을 개선시키는 것을 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 벤조산리튬 처리에 의한, 보다 우수한 직립 동작 횟수의 보행 활동을 보여주는 다이어그램. b: 벤조산리튬 처리에 의한, 보다 우수한 총 직립 시간 (초)을 보여주는 다이어그램. c: 벤조산리튬 처리에 의한, 매달리기 시험에서 떨어질 때까지의 보다 긴 지연시간 (초)을 보여주는 다이어그램. d: 벤조산리튬 처리에 의한, 로타로드 시험에서 떨어질 때까지의 보다 긴 지연시간 (초)을 보여주는 다이어그램. e: 벤조산리튬 처리에 의한, 보다 우수한 직립 활동 (빔 중단 횟수)을 보여주는 다이어그램. f: 벤조산리튬 처리에 의한, 보다 우수한 이동 활동 (빔 중단 횟수)을 보여주는 다이어그램. g: 벤조산리튬 처리에 의한, 보다 적은 체중 감소 (g)를 보여주는 다이어그램. h: 벤조산리튬 처리에 의한, 보다 우수한 생존율 (%)을 보여주는 다이어그램. * p-값 < 0.05.
도 5는 예시적인 실험 설계를 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 1차 피질 배양물에 대한 53시간 동안의 벤조산리튬 처리 (진한 막대)의 예시적인 실험 설계. b: 1차 피질 배양물에 대한 48시간 동안의 벤조산리튬 후처리 (진한 막대)의 예시적인 실험 설계.
도 6은 벤조산리튬이 산소 및 글루코스 박탈로부터 1차 배양 뉴런을 보호한다는 것을 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 전체 53시간 보호 동안 벤조산리튬 (0, 0.3, 1, 3, 5 mM)으로 처리된 1차 피질 배양물의 세포 생존율을 보여주는 그래프. *** p-값 < 0.001. b: 48시간 동안 벤조산리튬 (0, 0.3, 0.5, 1, 2, 3 mM)으로 처리된 1차 피질 배양물의 세포 생존 (%)을 보여주는 그래프. ** p-값 < 0.01; *** p-값 < 0.001; **** p-값 < 0.0001.
도 7은 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘 (MPTP)으로 처리된 1차 피질 배양물에 대한 상이한 조건으로의 벤조산리튬 및 벤조산나트륨 처리의 예시적인 실험 설계를 보여주는 다이어그램이다.
도 8은 MPTP에 노출된 1차 피질 배양물의 세포 생존율 (%)을 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 1mM 염화리튬, 1mM 벤조산나트륨 및 1mM 벤조산리튬으로 24시간 동안 전처리된 세포의 생존율을 보여주는 다이어그램. b: 1mM 염화리튬, 1mM 벤조산나트륨 및 1mM 벤조산리튬에 의한 처리 24시간 후 세포의 생존율을 보여주는 다이어그램. 벤조산리튬은 벤조산나트륨 및 염화리튬보다 우수한 보호를 제공한다. ****: p-값 < 0.0001; $는 벤조산리튬 및 벤조산나트륨 사이의 비교를 나타내고, $: p-값 < 0.05; #는 벤조산리튬 및 염화리튬 사이의 비교를 나타내고, ###: p-값 < 0.001.
도 9는 상이한 농도의 벤조산리튬 (0.3, 1, 3mM)의 보호에 의한, MPTP 처리 하의 세포 생존 (%)의 비교를 보여주는 차트이다. * p-값 < 0.05; ** p-값 < 0.01; *** p-값 < 0.001; **** p-값 < 0.0001.
도 10은 대조군, MPTP-염수, 및 MPTP-LiBen으로 처리된 마우스의 폴 시험 수행의 전환 시간 (패널 a) 및 폴에서 소비한 총 시간 (패널 b)을 보여주는 다이어그램을 포함한다. LiBen은 MPTP-유도된 결핍을 실질적으로 개선시켰다. 결과는 평균 ±SEM이다. * p-값 < 0.05 (t-검정).
도 11은 MSA 모델의 MPTP 및 3-NP 이중 독성-유도된 마우스에 대한 벤조산리튬 치료 요법의 예시적인 실험 설계를 보여주는 다이어그램이다.
도 12는 MSA의 MPTP 및 3-NP 마우스 모델 둘 다에 노출된 마우스의 로타로드 수행에 대한 벤조산리튬의 유효성을 보여주는 차트를 포함한다. a: 표시된 바와 같은 상이한 군에서의 기준선 (무처리), 0일 (MPTP 플러스 3-NP 유도 9일 후), 및 7일 (7일 동안의 벤조산리튬 또는 염수 처리)째 로드 상에서의 체류 시간을 보여주는 다이어그램. b: 7일 동안의 벤조산리튬에 의한 처리 7일 후 상이한 군에서의 로타로드 체류 시간의 개선을 보여주는 다이어그램. 결과는 평균 ±SEM이다. * p-값 < 0.05.
도 13은 급성 통증 완화에 대한 벤조산리튬의 효과를 조사하기 위한 예시적인 실험 설계를 보여주는 다이어그램이다.
도 14는 폰 프라이 과제에서 벤조산리튬 또는 PBS 대조군 처리 후 다양한 시점의 발 회피 역치를 보여주는 선 차트이다. 결과는 평균 ±SEM이다. * p-값 < 0.05 (t-검정). 이원 ANOVA 분석은 시간-의존성 결과의 어떠한 상호작용도 보여주지 않았다. 스튜던트 t-검정으로 각각의 시점에서 PBS 대 Liben을 분석하였다. LiBen 군은 30 및 60분 둘 다에서 보다 우수한 통증 역치를 보여주었다.
도 15는 벤조산의 혈장 농도-시간 곡선의 선 차트를 보여주는 다이어그램을 포함한다. a: 0분에서 1440분까지의 벤조산의 혈장 농도를 보여주는 차트. b: 0분에서 360분까지의 벤조산의 혈장 농도를 보여주는 차트. 벤조산리튬은 탄산리튬 및 벤조산나트륨의 등몰 조합물보다 더 높이 벤조에이트 농도를 상승시켰다.
도 16은 리튬의 혈장 농도-시간 곡선을 포함한다. a: 0분에서 1440분까지의 벤조산의 혈장 농도를 보여주는 차트. b: 0분에서 720분까지의 벤조산의 혈장 농도를 보여주는 차트. 벤조산리튬은 여러 시점에서 탄산리튬 및 벤조산나트륨의 등몰 조합물보다 더 높이 리튬 농도를 상승시켰다.
도 17은 Aβ25-35 처리 후, LiCl 및 LiBen이 대조군과 비교하여 세포 생존 백분율을 유의하게 증가시켰음을 보여주는 MTT 검정의 막대 그래프이다. LiBen 처리는 LiCl보다 더 우수하게 보호하였다.
도 18은 MK801이 NMDA 수용체를 차단한 경우에 NaBen 처리 군에서만 감소된 세포 생존 백분율이 관찰되는 반면에 MK801 처리는 벤조산리튬의 보호 효과는 변화시키지 않았음을 보여주는 MTT 검정의 막대 그래프를 포함한다. a: MK801 처리의 부재 (0 μM) 하에서의 혈장 리튬 농도를 보여주는 차트. b: 10 μM의 MK801의 존재 하에서의 혈장 리튬 농도를 보여주는 차트. NaBen의 효과는 NMDA 길항제에 의해 차단될 수 있지만, 벤조산리튬의 효과는 NMDA 길항제에 의해 영향을 받지 않는다.
도 19는 벤조산리튬이 1차 피질 배양물에서 신경발생을 증진시킨다는 것을 보여주는 다이어그램을 포함한다. a 및 b: 훽스트, NeuN 및 BrdU 염색 세포를 보여주는 면역세포화학 검정. 무처리 군과 비교하여 LiCl/NaBen/LiBen-처리된 피질 세포에서 증가된 수의 BrdU(+)/NeuN(+) 세포가 관찰되었다. c: a 및 b의 결과를 정량화한 막대 그래프. ****는 p<0.0001을 나타낸다. LiBen은 LiCl 및 NaBen보다 훨씬 더 강력한 신경발생 효과를 갖는다.
도 20은 LiBen 및 LiCl이 NaBen과 비교하여 Aβ25-35 세포독성 후 GFAP(+) 세포의 수를 유의하게 감소시킨다는 것을 보여주는 다이어그램을 포함한다. 동시에, LiBen은 LiCl보다 우수한 보호 효과를 나타내었다. a: 면역세포화학 검정 결과. b: a의 막대 그래프. ****: p<0.0001.
도 21은 벤조산리튬이 헌팅톤병 (HD)의 생존율을 개선시킨다는 것을 보여주는 다이어그램이다.
본 개시내용은, 적어도 부분적으로, 벤조산리튬이 다양한 시험관내 및 생체내 CNS 질환 모델에서 보호 효과를 나타낸 예상외의 결과에 기초한다. 벤조산리튬은 미토콘드리아 기능장애, 산화성 스트레스, 및 반응성 산소 종 과다생산을 유도하는 것으로 공지되어 있는 3-니트로프로피온산 (3-NP)에 의해 유도된 뉴런 독성을 성공적으로 구제한다. 3-NP 모델은 헌팅톤병 (HD) (Ramaswamy et al., ILAR J. 48(4):356-73 (2007)); 진성 MSA (Fellner et al., Front Neurosci. 10:99 (2016)); 및 발작 (Bhowmik et al., Br. J. Pharmacol., 167(7):1398-1414 (2012))을 연구하는데 신뢰할 만하다. 또한, 3-NP는 뇌실주위 백질연화증 (Volpe et al., Pediatric Res. 50:553-562 (2001)), 프리드라이히 운동실조 (Hayashi, Free Radical Biology and Medicine, 88:10-17 (2015)), 고셔병 (de la Mata, Sci. Rep. 5: 10903 (2015)), 지주막하 출혈 (Ayer, Acta Neurochir Suppl. 104: 33-41 (2008)), 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증 (Lai, J. Biomed Biotechnol 2011, Article ID 609813 (2011)), 진행성 핵상 마비 (PSP) (Stamelou, Brain 133, 1578-1590 (2010)), 두개내 고혈압 (Marti'nez-Revelles S. Antioxid Redox Signal. 18: 51-65(2013)), 산발성 크로이츠펠트-야콥병 (Kovacic, Curr Neuropharmacol 10:289-302 (2012)), 지연성 이상운동증 (Lohr J.B. CNS Drugs 17:47-62 (2003)), 레트 증후군 (De Felice Neurobiology of Disease 68:66-77 (2014)), 및 다양한 운동 뉴런 질환: ALS, 원발성 측삭 경화증, 유전성 경직성 하반신부전마비, 진행성 연수 마비 (일부는 SOD1 돌연변이를 가짐), 척수성 근육 위축, X-연관 척수연수성 근육 위축 (케네디병) (Rossi, Int'l J. Cell Biol. 2012, Article ID 908724 (2012))을 포함한 다양한 CNS 질환과 연관이 있는 것으로 공지되어 있는, 산화성 스트레스 및 ROS 과다생산을 유도하는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 본원에 기재된 바와 같은 벤조산리튬 화합물은 이들 CNS 장애 중 임의의 것을 치료하는데 효과적일 것으로 예상될 것이다.
벤조산리튬은 또한 미토콘드리아 기능을 위한 예비 호흡 용량을 증진시키는 것으로 관찰되었다. 미토콘드리아 기능장애는 다양한 CNS 장애, 예를 들어, 파킨슨병 (Wood-Kaczmar et al., PLoS ONE, 3, e2455 (2008), Exner, N. et al., J. Neurosci., 27:12413 - 12418 (2007), 및 Dagda, R.K. et al., J. Biol. Chem., 284: 13843 - 13855 (2009)), 알츠하이머병 (Baloyannis, S.J. et al., J. Alzheimers Dis., 9:119 - 126 (2009), Manczak, M. et al., Hum. Mol. Genet., 15:1437 - 1449 (2006), 및 Lustbader, J.W. et al., Science, 304: 448 - 452 (2004)), HD (Bossy-Wetzel, et al., Trends. Neurosci., 31:609 - 616 (2008)), ALS (Menzies et al., Brain, 125:1522-1533 (2002) 및 Cozzolino, M., et al., Mol. Cell. Neurosci. 2012), 근간대성 간질 (Greaves LC et al., J Pathol., 226:274-86 (2012)), 및 다발성 경화증 (Morris et al., BMC Medicine, 13:68 (2015))의 발생에 수반되는 것으로 확인되었다. 따라서, 본원에 기재된 바와 같은 벤조산리튬 화합물은 산화성 스트레스 및/또는 ROS 과다생산을 감소시키는 것을 통해 이러한 CNS 장애를 치료하는데 유익할 것으로 예상될 것이다.
실제로, 벤조산리튬은 가족성 ALS의 약 20%를 차지하는, SOD1*G93A 돌연변이를 갖는 근위축성 측삭 경화증 (ALS) 동물 모델에서 질환 진행을 개선시키는 것으로 확인되었다 (Acevedo-Arozena et al., Disease Models and Mechanisms, 4: 686-700 (2011)). 이러한 결과는 벤조산리튬 화합물이 운동 뉴런 질환과 연관된 유전자 돌연변이를 수반하는 CNS 장애를 치료하는데 효과적일 것임을 시사한다.
또한, 벤조산리튬은 허혈 졸중 및 혈관성 치매를 포함한 수많은 CNS 장애에 유의하게 기여하는 산소 및 글루코스 박탈로부터 뉴런을 보호하는 것으로 확인되었다 (Bacigaluppi et al., The Open Neurology Journal, 4:34-38 (2010) 및 Li et al., Phytomedicine, 19 (8-9): 677-681 (2012)). 따라서, 벤조산리튬 화합물은 산소 및 글루코스 박탈에 대한 보호 효과를 통해 이러한 CNS 장애의 치료에 유익할 것이다.
또한, 벤조산리튬은 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘 (MPTP) 단독에 의해 또는 3-NP와의 조합에 의해 유도된 독성으로부터 세포 사멸 및 행동 장애를 감소시켰다. MPTP-유도된 독성은 파킨슨병 및 미토콘드리아 기능장애-유도된 뉴런 사멸에 대한 널리-확립된 모델이다 (Langston et al., Science, 219 (4587): 979-980 (1983), 및 Gloria et al., J Parkinsons Dis. 2012 December 26). MPTP 및 3-NP에 의해 유도된 이중 독성은 파킨슨증이 우세한 다계통 위축 (MSA-P) 및 미토콘드리아 기능장애-유도된 뉴런 사멸을 연구하기 위한 확립된 모델이다 (Fernagut et al., Experimental Neurology 185:47-62 (2004) 및 Fernagut et al., Neuroscience (2011)).
또한, 벤조산리튬은 동물 모델에서 아밀로이드-β 펩티드에 의해 유발된 뉴런 손상을 보호하였고, 이는 벤조산리튬 화합물이 AD, 다운 증후군, 산발성 봉입체 근염 (sIBM), 및 산발성 뇌 아밀로이드 혈관병증 (CAA)을 치료하는데 효과적일 것임을 나타낸다 (Go tz et al., Cell. Mol. Life Sci. 68:3359-3375 (2011) and Masters et al., Medical Sciences, 82:4245-4249 (1985), Mollenhauer et al., Journal of Alzheimer's Disease 24:383-391 (2011), Lu et al., Ann Neurol, 61:476-483 (2007), 및 Charidimou et al. 83:124e137 (2012)).
또한, 벤조산리튬은 예상외로 통증을 완화시키는 것으로 관찰되었고, 이는 벤조산리튬 화합물이 통증, 예컨대 신경병증성 통증, 복합 부위 통증 증후군, 또는 당뇨병성 신경병증, 염증 또는 골다공증과 연관된 (만성) 통증을 완화시키는데 유익할 것임을 시사한다 (Wang et al., Advanced Drug Delivery Reviews 55:949-965 (2003).
상기의 새롭게 발견된 치료 효과에 더하여, 벤조산리튬은 예상외로, 벤조산나트륨 및 염화리튬이 조합된 것과 비교하여 뛰어난 약동학적 특색 및 치료 효능을 나타내었다. 하기 실시예를 참조한다.
따라서, 벤조산리튬 화합물 (예를 들어, 벤조산리튬)을 포함하는 조성물의 유효량을 사용하여 본원에 기재된 것과 같은 CNS 장애를 치료하고/거나 통증을 완화시키는 방법이 본원에 기재된다.
정의
"벤조산리튬 화합물"은 화학식:
Figure 112019003099836-pct00001
의 화합물을 지칭하며, 여기서 R1은 수소, C1-3 알킬, 할로겐, -CN, -NO2, -N3, C1-C3 알케닐, C1-C3 알키닐, -OR, -NH2, 또는 -SR이고, R은 수소, 할로겐, -CN, -NO2, -N3, 아실, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, C1-3 알키닐이고; a는 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 특정 실시양태에서, 벤조산리튬 화합물은
Figure 112019003099836-pct00002
(벤조산리튬)이다.
"C1-3 알킬"은 1 내지 3개의 탄소 원자, 예를 들어, 1 내지 2개의 탄소 원자 ("C1-2 알킬") 또는 1개의 탄소 원자 ("C1 알킬")를 갖는 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 각 경우의 알킬 기는 독립적으로 비치환되거나 ("비치환된 알킬") 또는 1개 이상의 치환기 (예를 들어, 할로겐, 예컨대 F)로 치환될 수 있다 ("치환된 알킬"). 특정 실시양태에서, 알킬 기는 비치환된 C1-3 알킬 (예를 들어, -CH3 또는 -CF3)이다. "할로" 또는 "할로겐"은 플루오린 (플루오로, -F), 염소 (클로로, -Cl), 브로민 (브로모, -Br), 또는 아이오딘 (아이오도, -I)을 지칭한다.
"C2-4 알케닐"은 2 내지 4개의 탄소 원자, 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖고, 삼중 결합은 갖지 않는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다. 일부 예에서, C2-4 알케닐 기는 2, 3 또는 4개의 탄소 원자를 갖는다. 달리 명시되지 않는 한, 각 경우의 알케닐 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 즉 비치환되거나 ("비치환된 알케닐") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 알케닐"). 특정 실시양태에서, 알케닐 기는 비치환된 C2-4 알케닐이다. 특정 실시양태에서, 알케닐 기는 예를 들어 할로겐 예컨대 F 또는 Cl, 또는 C1-3 알킬 예컨대 -CH3으로 치환된, 치환된 C2-4 알케닐이다. 알케닐 기에서, 입체화학이 명시되지 않은 C=C 이중 결합 (예를 들어, -CH=CHCH3 또는
Figure 112019003099836-pct00003
)은 (E)- 또는 (Z)-이중 결합일 수 있다.
"C2-4 알키닐"은 2 내지 4개의 탄소 원자, 1개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합 및 임의로 1개 이상의 이중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2, 3, 또는 4개의 탄소 원자를 갖는다. 달리 명시되지 않는 한, 각 경우의 알키닐 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 즉 비치환되거나 ("비치환된 알키닐") 또는 1개 이상의 치환기, 예를 들어, 할로겐 예컨대 F 또는 Cl, 또는 C1-3 알킬 예컨대 -CH3으로 치환된다 ("치환된 알키닐").
용어 "제약상 허용되는 염"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등 없이 인간 및 하등 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 그러한 염을 지칭한다. 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 버지 등(Berge et al.)은 본원에 참조로 포함된 문헌 [J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19]에서 제약상 허용되는 염을 상세하게 기재한다.
본원에 기재된 화합물의 제약상 허용되는 염은 적합한 무기 및 유기 산 및 염기로부터 유래된 것을 포함한다. 제약상 허용되는 비독성 산 부가염의 예는 무기 산, 예컨대 염산, 브로민화수소산, 인산, 황산 및 과염소산, 또는 유기 산, 예컨대 아세트산, 옥살산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산으로 형성되거나 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 방법, 예컨대 이온 교환을 사용하여 형성된 아미노 기의 염이다. 다른 제약상 허용되는 염은 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 글루코네이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, p-톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 적절한 염기로부터 유래된 염은 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 암모늄 및 N+(C1-4 알킬)4 - 염을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등을 포함한다. 추가의 제약상 허용되는 염은, 적절한 경우에, 비독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 반대이온, 예컨대 할라이드, 히드록시드, 카르복실레이트, 술페이트, 포스페이트, 니트레이트, 저급 알킬 술포네이트 및 아릴 술포네이트를 사용하여 형성된 아민 양이온을 포함한다.
투여가 고려되는 "대상체"는 인간 (즉, 임의의 연령군의 남성 또는 여성, 예를 들어 소아 대상체 (예를 들어, 영아, 유아 또는 청소년) 또는 성인 대상체 (예를 들어, 청년 성인, 중년 성인 또는 노년 성인)) 또는 비-인간 동물을 지칭한다. "환자"는 질환의 치료를 필요로 하는 인간 대상체를 지칭한다.
용어 "투여하다", "투여하는" 또는 "투여"는 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 또는 그의 조성물을 대상체 내에 또는 대상체 상에 이식, 흡수, 섭취, 주사, 흡입 또는 달리 도입하는 것을 지칭한다.
용어 "치료", "치료하다" 및 "치료하는"은 본원에 기재된 질환을 역전시키거나, 완화시키거나, 그의 발병을 지연시키거나, 또는 그의 진행을 억제하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 치료는 질환의 1종 이상의 징후 또는 증상이 발생하거나 관찰된 후에 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 치료는 질환의 징후 또는 증상의 부재 하에 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료는 (예를 들어, 증상의 병력을 고려하여 및/또는 병원체에 대한 노출을 고려하여) 증상의 발병 전에 감수성 대상체에게 투여되어 질환 발생을 지연 또는 예방할 수 있다. 또한, 예를 들어 증상이 해소된 후에 치료를 계속하여 재발을 지연 또는 예방할 수 있다.
용어 "상태", "질환" 및 "장애"는 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 기재된 벤조산리튬 화합물을 포함하는 조성물의 "유효량"은 목적하는 생물학적 반응을 도출하기에, 즉, 상태를 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키에 충분한 양을 지칭한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물의 유효량은 목적하는 생물학적 종점, 벤조산리튬 화합물의 약동학, 치료될 상태, 투여 방식, 및 대상체의 연령 및 건강과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시양태에서, 유효량은 치료 유효량이다. 특정 실시양태에서, 유효량은 예방적 치료이다. 특정 실시양태에서, 유효량은 단일 용량으로의 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물의 양이다. 특정 실시양태에서, 유효량은 다중 용량으로의 본원에 기재된 벤조산리튬의 합한 양이다.
본원에 기재된 벤조산리튬 화합물의 "치료 유효량"은 상태의 치료에서 치료 이익을 제공하거나 또는 상태와 연관된 1종 이상의 증상을 지연 또는 최소화하기에 충분한 양이다. 벤조산리튬 화합물의 치료 유효량은 상태의 치료에서 치료 이익을 제공하는, 단독의 또는 다른 요법과 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "치료 유효량"은 전체 요법을 개선시키고/거나, 상태의 증상, 징후 또는 원인을 감소 또는 피하고/거나, 또 다른 치료제의 치료 효능을 증진시키는 양을 포괄할 수 있다.
본원에 기재된 벤조산리튬 화합물의 "예방 유효량"은 상태 또는 상태와 연관된 1종 이상의 증상을 예방하거나 또는 그의 재발을 예방하기에 충분한 양이다. 벤조산리튬 화합물의 예방 유효량은 상태의 예방에서 예방 이익을 제공하는, 단독의 또는 다른 작용제와 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "예방 유효량"은 전체 예방을 개선시키거나 또는 또 다른 예방제의 예방 효능을 증진시키는 양을 포괄할 수 있다.
용어 "건강 식품" 또는 "건강 식제품"은 인간 및 동물에게 영양을 공급하거나, 본원에 기재된 바와 같은 표적 CNS 질환과 연관된 적어도 1종의 증상을 완화시키거나, 또는 통증을 완화시키거나, 또는 본원에 언급된 임의의 표적 질환의 치료를 용이하게 하기 위해 사용되는 임의의 종류의 액체 및 고체/반-고체 물질을 지칭한다. 용어 "기능식품 조성물"은 식품 공급원으로부터의 성분을 함유하고 식품에서 발견된 기초 영양가 이외에 추가의 건강 이익을 부여하는 조성물을 지칭한다.
용어 "의료용 식제품"은 본원에 기재된 것과 같은 표적 질환의 특정 식이 관리를 위해 의사의 감독 하에 통상적으로 사용되는 식제품을 포함한, 경장으로 소모 또는 투여되도록 제제화되는 식제품을 지칭한다. "의료용 식제품" 조성물은 치료를 필요로 하는 환자 (예를 들어, 질병을 앓고 있거나 또는 특정 식이 관리를 통해 질환 또는 상태를 완화시키기 위해 주요 활성제로서 그러한 제품의 사용이 요구되는 인간 환자)를 위해 (자연 상태로 사용되는 자연 발생 식품과 대조적으로) 특별히 제제화되고 가공되는 조성물을 지칭할 수 있다. 용어 "기능식품 조성물"은 식품 공급원으로부터의 성분을 함유하고 식품에서 발견된 기초 영양가 이외에 추가의 건강 이익을 부여하는 조성물을 지칭한다.
조성물
본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 벤조산리튬 화합물 예컨대 벤조산리튬 (LiBen) 및 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 벤조산리튬 화합물은 상용 기술에 따라 화학적 합성에 의해 제조할 수 있거나, 또는 상업적 공급자로부터 수득할 수 있다. 특정 실시양태에서, 담체는 제약상 허용되는 부형제이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 및 담체를 포함한다. 본원에 기재된 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 표적 CNS 질환을 치료하거나 또는 통증을 완화시키는데 유용하다.
특정 실시양태에서, 조성물은 제약 조성물이다. 특정 실시양태에서, 조성물은 기능식품 조성물이다. 특정 실시양태에서, 조성물은 건강 식품이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 인간 및 동물에게 영양을 공급하거나, 표적 CNS 질환의 치료를 유익하게 하거나, 또는 통증을 완화시키기 위해 사용되는 임의의 종류의 액체 및 고체/반-고체 물질일 수 있는 건강 식품 또는 건강 식제품일 수 있다. 건강 식제품은 식제품 (예를 들어, 차-기반 음료, 주스, 청량 음료, 커피, 우유, 젤리, 쿠키, 시리얼, 초콜릿, 스낵 바, 허브 추출물, 유제품 (예를 들어, 아이스크림 및 요구르트)), 식품/식이성 보충제, 또는 기능식품 제제일 수 있다.
본원에 기재된 건강 식제품은 본원에 기재된 바와 같은 제품에 대해 1종 이상의 이익을 부여하는 1종 이상의 식용 담체를 포함할 수 있다. 식용 담체의 예는 전분, 시클로덱스트린, 말토덱스트린, 메틸셀룰로스, 카르보메톡시 셀룰로스, 크산탄 검, 및 그의 수용액을 포함한다. 다른 예는, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같이, 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 안정화제, 겔, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료, 이와 유사한 물질 및 그의 조합을 포함한다. 일부 예에서, 본원에 기재된 건강 식제품은 추가로 신경보호 식품, 예컨대 어유, 아마씨 오일 및/또는 벤조에이트를 포함할 수 있다.
일부 예에서, 건강 식제품은 식품 공급원으로부터의 성분을 함유하고 식품에서 발견된 기초 영양가 이외에 추가의 건강 이익을 부여하는 조성물을 지칭하는 기능식품 조성물이다. 본원에 기재된 바와 같은 기능식품 조성물은 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 및 우수한 건강을 촉진하고/거나 벤조산리튬 화합물의 안정성 및 생물활성을 증진시키는 추가의 성분 및 보충체를 포함한다.
기능식품 조성물의 작용은 신속 또는/및 단기일 수 있거나, 또는 본원에 기재된 바와 같은 장기 건강 목적을 달성하는 것을 도울 수 있다. 기능식품 조성물은 식용 물질에, 예를 들어 식이성 보충제 또는 제약 제제로서 함유될 수 있다. 식이성 보충제로서, 추가의 영양소, 예컨대 비타민, 미네랄 또는 아미노산이 포함될 수 있다. 조성물은 또한 음료 또는 식제품, 예를 들어 차, 청량 음료, 주스, 우유, 커피, 쿠키, 시리얼, 초콜릿 및 스낵 바일 수 있다. 원하는 경우에, 조성물은 감미제, 예컨대 소르비톨, 말티톨, 수소화된 글루코스 시럽 및 수소화된 전분 가수분해물, 고과당 옥수수 시럽, 사탕수수 당, 사탕무 당, 펙틴 또는 수크랄로스를 첨가하는 것에 의해 감미될 수 있다.
본원에 개시된 기능식품 조성물은 용액 형태일 수 있다. 예를 들어, 기능식품 제제는 매질, 예컨대 완충제, 용매, 희석제, 불활성 담체, 오일 또는 크림 중에 제공될 수 있다. 일부 예에서, 제제는 비-수성 공-용매, 예컨대 알콜을 임의로 함유하는 수용액 중에 존재한다. 기능식품 조성물은 또한 분말, 페이스트, 젤리, 캡슐 또는 정제 형태일 수 있다. 락토스 및 옥수수 전분은 통상적으로 캡슐용 희석제 및 정제용 담체로서 사용된다. 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘은 정제를 형성하기 위해 전형적으로 첨가된다.
건강 식제품은 적합한 투여 경로, 예를 들어 경구 투여를 위해 제제화될 수 있다. 경구 투여를 위해, 조성물은, 예를 들어 정제 또는 캡슐의 형태를 취할 수 있고, 이는 허용되는 부형제, 예컨대 결합제 (예를 들어, 예비젤라틴화 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로스); 충전제 (예를 들어, 락토스, 미세결정질 셀룰로스 또는 인산수소칼슘); 윤활제 (예를 들어, 스테아르산마그네슘, 활석 또는 실리카); 붕해제 (예를 들어, 감자 전분 또는 소듐 스타치 글리콜레이트); 또는 습윤제 (예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트)를 사용하여 통상적인 수단에 의해 제조된다. 정제는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 코팅될 수 있다. 또한, 바 및 다른 저작성 제제가 포함된다.
일부 예에서, 건강 식제품은 액체 형태일 수 있고, 1종 이상의 식용 담체는 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜), 지질 (예를 들어, 트리글리세리드, 식물성 오일, 리포솜) 또는 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해; 담체, 예컨대, 예를 들어 액체 폴리올 또는 지질 중 분산에 의한 요구되는 입자 크기의 유지에 의해; 계면활성제, 예컨대, 예를 들어 히드록시프로필셀룰로스의 사용에 의해; 또는 그의 조합에 의해 유지될 수 있다. 다수의 경우에서, 등장화제, 예컨대, 예를 들어 당, 염화나트륨 또는 그의 조합을 포함하는 것이 권고될 수 있을 것이다.
경구 투여를 위한 액체 제제는, 예를 들어 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태를 취할 수 있거나, 또는 이들은 사용 전 물 또는 다른 적합한 비히클에 의한 구성을 위한 건조 생성물로서 제공될 수 있다. 한 실시양태에서, 액체 제제는 과일 주스에 의한 투여를 위해 제제화될 수 있다. 이러한 액체 제제는 제약상 허용되는 첨가제, 예컨대 현탁화제 (예를 들어, 소르비톨 시럽, 셀룰로스 유도체 또는 수소화된 식용 지방); 유화제 (예를 들어, 레시틴 또는 아카시아); 비-수성 비히클 (예를 들어, 아몬드 오일, 유성 에스테르, 에틸 알콜 또는 분별화 식물성 오일); 및 보존제 (예를 들어, 메틸 또는 프로필-p-히드록시벤조에이트, 벤조에이트 또는 소르베이트)를 사용하여 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물은 의료용 식품이다. 의료용 식제품은 경장으로 소모 또는 투여되도록 제제화되는 식제품이다. 이러한 식제품은 본원에 기재된 것과 같은 표적 질환의 특정 식이 관리를 위해 의사의 감독 하에 통상적으로 사용된다. 일부 경우에, 이러한 의료용 식품 조성물은 치료를 필요로 하는 환자 (예를 들어, 질병을 앓고 있거나 또는 특정 식이 관리를 통해 질환 또는 상태를 완화시키기 위해 주요 활성제로서 그러한 제품의 사용이 요구되는 인간 환자)를 위해 (자연 상태로 사용되는 자연 발생 식품과 대조적으로) 특별히 제제화되고 가공된다. 일부 예에서, 본원에 기재된 의료용 식품 조성물은 단순히 증상을 관리하거나 질환 또는 상태의 위험을 감소시키기 위해 전체 식이의 일부로서 의사에 의해 권장될 것들 중 하나는 아니다.
벤조산리튬 화합물 및 적어도 1종의 담체 (예를 들어, 본원에 기재된 것)를 포함하는 본원에 기재된 임의의 의료용 식품 조성물은 하기 상술된 바와 같이, 액체 용액; 분말, 바, 웨이퍼, 적절한 액체 중 현탁액 또는 적합한 에멀젼의 형태일 수 있다. 자연-발생 또는 합성 (비-자연 발생)일 수 있는 적어도 1종의 담체는 조성물 중 벤조산리튬 화합물에 대해 1종 이상의 이익, 예를 들어 안정성, 생체이용률 및/또는 생물활성을 부여할 것이다. 본원에 기재된 임의의 담체는 의료용 식품 조성물을 제조하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 의료용 식품 조성물은 천연 향미제, 인공 향미제, 주요 미량 미네랄 및 초-미량 미네랄, 미네랄, 비타민, 귀리, 너트, 향신료, 우유, 계란, 염, 가루, 레시틴, 크산탄 검 및/또는 감미제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 군으로부터 선택된 1종 이상의 추가의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 의료용 식품 조성물은 적합한 용기 내에 배치될 수 있으며, 이는 적어도 본원에 기재된 것과 같은 추가의 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물은 제약 조성물 중에 유효량으로 제공된다. 특정 실시양태에서, 유효량은 치료 유효량 (예를 들어, CNS 질환을 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키는데 또는 통증을 완화시키는데 효과적인 양)이다. 특정 실시양태에서, 유효량은 예방 유효량 (예를 들어, 신경정신 장애의 예방을 필요로 하는 대상체에서 신경정신 장애를 예방하는데 효과적인 양)이다.
본원에 기재된 제약 조성물은 약리학 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 제조 방법은 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 (즉, "활성 성분")을 담체 또는 부형제, 및/또는 1종 이상의 다른 보조 성분과 회합하도록 한 다음, 필요한 경우에 및/또는 바람직한 경우에, 생성물을 목적하는 단일- 또는 다중-용량 단위로 성형 및/또는 포장하는 것을 포함한다.
제약 조성물은 단일 단위 용량으로서 및/또는 복수의 단일 단위 용량으로서 벌크로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있다. "단위 용량"은 활성 성분의 미리 결정된 양을 포함하는 제약 조성물의 개별적 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로 대상체에게 투여될 활성 성분의 투여량 및/또는 이러한 투여량의 편리한 분획, 예컨대 이러한 투여량의 1/2 또는 1/3과 동일하다.
본원에 기재된 제약 조성물 내 활성 성분, 제약상 허용되는 부형제 및/또는 임의의 추가의 성분의 상대량은 치료되는 대상체의 정체, 크기 및/또는 상태에 따라 및 추가로 조성물이 투여되는 경로에 따라 달라질 것이다. 조성물은 0.1% 내지 100% (w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다.
제공된 제약 조성물의 제조에 사용되는 제약상 허용되는 부형제는 불활성 희석제, 분산제 및/또는 과립화제, 표면 활성제 및/또는 유화제, 붕해제, 결합제, 보존제, 완충제, 윤활제, 및/또는 오일을 포함한다. 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스, 착색제, 코팅제, 감미제, 향미제, 및 퍼퓸제가 또한 조성물에 존재할 수 있다.
경구 및 비경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분 이외에도, 액체 투여 형태는 관련 기술분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대, 예를 들어 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포름아미드, 오일 (예를 들어, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자, 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸르푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 그의 혼합물을 포함할 수 있다. 불활성 희석제 이외에도, 경구 조성물은 아주반트, 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제, 및 퍼퓸제를 포함할 수 있다. 비경구 투여에 대한 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 접합체는 가용화제, 예컨대 크레모포르(Cremophor)®, 알콜, 오일, 변형된 오일, 글리콜, 폴리소르베이트, 시클로덱스트린, 중합체, 및 그의 혼합물과 혼합된다.
주사가능한 제제, 예를 들어 멸균 주사가능한 수성 또는 유질 현탁액은 공지된 기술에 따라 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 비독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중 멸균 주사가능한 용액, 현탁액 또는 에멀젼, 예를 들어 1,3-부탄디올 중 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액, U.S.P., 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 추가로, 멸균 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해 합성 모노- 또는 디-글리세리드를 포함한 임의의 무자극 고정 오일이 사용될 수 있다. 추가로, 지방산, 예컨대 올레산이 주사제의 제조에 사용된다.
주사가능한 제제는, 예를 들어 박테리아-체류 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 전 멸균수 또는 다른 멸균 주사가능한 매질 중에 용해 또는 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물 형태의 멸균제를 혼입함으로써 멸균될 수 있다.
약물의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터 약물의 흡수를 늦추는 것이 종종 바람직하다. 이것은 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이때 약물의 흡수 속도는 그의 용해 속도에 좌우되며, 이는 다시 결정 크기 및 결정질 형태에 좌우될 수 있다. 대안적으로, 비경구로 투여되는 약물 형태의 지연된 흡수는 오일 비히클 중에 약물을 용해 또는 현탁시킴으로써 달성될 수 있다.
경구 투여를 위한 고체 투여 형태는 캡슐, 정제, 환제, 분말 및 과립을 포함한다. 이러한 고체 투여 형태에서, 활성 성분은 적어도 1종의 불활성, 제약상 허용되는 부형제 또는 담체, 예컨대 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘 및/또는 (a) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및 규산, (b) 결합제, 예컨대, 예를 들어 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리디논, 수크로스 및 아카시아, (c) 함습제, 예컨대 글리세롤, (d) 붕해제, 예컨대 한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 탄산나트륨, (e) 용해 지연제, 예컨대 파라핀, (f) 흡수 촉진제, 예컨대 4급 암모늄 화합물, (g) 습윤제, 예컨대, 예를 들어 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트, (h) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토, 및 (i) 윤활제, 예컨대 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 및 그의 혼합물과 혼합된다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우, 투여 형태는 완충제를 포함할 수 있다.
유사한 유형의 고체 조성물은 부형제, 예컨대 락토스 또는 유당 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 환제 및 과립의 고체 투여 형태는 코팅 및 쉘, 예컨대 장용 코팅 및 약리학 기술분야에 널리 공지된 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 불투명화제를 임의로 포함할 수 있고, 이들이 활성 성분(들)을 단지 또는 우선적으로 장관의 특정 부분에서 임의로 지연된 방식으로 방출하는 조성을 가질 수 있다. 사용될 수 있는 캡슐화 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 유사한 유형의 고체 조성물은 부형제, 예컨대 락토스 또는 유당 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있다.
활성 성분은 상기 기재된 바와 같은 1종 이상의 부형제를 갖는 마이크로캡슐화된 형태일 수 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 환제 및 과립의 고체 투여 형태는 코팅 및 쉘, 예컨대 장용 코팅, 방출 제어 코팅 및 제약 제제화 기술분야에 널리 공지된 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 고체 투여 형태에서 활성 성분은 적어도 1종의 불활성 희석제, 예컨대 수크로스, 락토스 또는 전분과 혼합될 수 있다. 이러한 투여 형태는, 통상적인 실시에서와 같이, 불활성 희석제 이외의 다른 추가의 물질, 예를 들어 타정 윤활제 및 다른 타정 보조제, 예컨대 스테아르산마그네슘 및 미세결정질 셀룰로스를 포함할 수 있다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우, 투여 형태는 완충제를 포함할 수 있다. 이들은 불투명화제를 임의로 포함할 수 있고, 이들이 활성 성분(들)을 단지 또는 우선적으로 소화관의 특정 부분에서 임의로 지연된 방식으로 방출하는 조성을 가질 수 있다. 사용될 수 있는 캡슐화제의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 제공된 제약 조성물의 설명은 주로 인간에 대한 투여에 적합한 제약 조성물에 관한 것이지만, 이러한 조성물은 일반적으로 모든 종류의 동물에 대한 투여에 적합하다. 인간에 대한 투여에 적합한 제약 조성물을 변형시켜 조성물을 다양한 동물에 대한 투여에 적합하게 하는 것은 잘 이해되어 있고, 통상의 숙련된 수의학 약리학자는 이러한 변형을 통상의 실험으로 설계 및/또는 수행할 수 있다.
본원에 제공된 벤조산리튬 화합물은 전형적으로 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제제화된다. 그러나, 본원에 기재된 조성물의 총 1일 용법은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서 의사에 의해 결정될 것임이 이해될 것이다. 임의의 특정한 대상체 또는 유기체에 대한 구체적인 치료상 유효한 용량 수준은 치료되는 질환 및 장애의 중증도; 사용되는 특정 활성 성분의 활성; 사용되는 특정 조성물; 대상체의 연령, 체중, 전반적 건강, 성별 및 식이; 투여 시간, 투여 경로, 및 사용되는 특정 활성 성분의 배출 속도; 치료의 지속기간; 사용되는 특정 활성 성분과 조합되어 또는 동시에 사용되는 약물; 및 의학 기술분야에 널리 공지된 기타 인자를 포함한 다양한 인자에 좌우될 것이다.
또한, 본 개시내용은 키트 (예를 들어, 제약 팩)를 포괄한다. 제공된 키트는 본원에 기재된 제약 조성물 또는 벤조산리튬 화합물 및 용기 (예를 들어, 바이알, 앰플, 병, 시린지 및/또는 분배기 패키지, 또는 다른 적합한 용기)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제공된 키트는 임의로 본원에 기재된 제약 조성물 또는 벤조산리튬 화합물의 희석 또는 현탁을 위한 제약 부형제를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 용기 및 제2 용기에 제공된 본원에 기재된 제약 조성물 또는 벤조산리튬 화합물은 조합되어 하나의 단위 투여 형태를 형성한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 키트는 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 또는 조성물을 포함하는 제1 용기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 키트는 CNS 질환 또는 통증의 치료 및/또는 그의 위험의 감소를 필요로 하는 대상체에서 CNS 질환 또는 통증을 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키는데 유용하다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 키트는 키트에 포함된 벤조산리튬 화합물 또는 조성물을 사용하는 것에 대한 지침서를 추가로 포함한다. 본원에 기재된 키트는 또한 규제 기관, 예컨대 미국 식품 의약품국 (FDA)에 의해 요구되는 바와 같은 정보를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 키트에 포함된 정보는 처방 정보이다. 특정 실시양태에서, 키트 및 지침서는 신경정신 장애의 치료 및/또는 그의 위험의 감소를 필요로 하는 대상체에서 신경정신 장애를 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키는 것을 제공한다. 본원에 기재된 키트는 본원에 기재된 1종 이상의 추가의 제약 작용제를 개별 조성물로서 포함할 수 있다.
치료 방법
본 개시내용은 CNS 장애 또는 통증 장애의 치료, 그의 위험의 감소, 또는 그의 발병의 지연을 필요로 하는 대상체에게 유효량 (예를 들어, 치료 유효량)의 본원에 기재된 바와 같은 벤조산리튬 화합물 (예를 들어, LiBen) 또는 이를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 CNS 장애 또는 통증 장애를 치료하거나, 그의 위험을 감소시키거나, 또는 그의 발병을 지연시키는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 벤조산리튬 화합물에 의해 치료될 CNS 장애는 헌팅톤병 (HD), 다계통 위축 (MSA), 발작-연관 신경독성, 파킨슨병 (PD), 미토콘드리아 기능장애-유도된 CNS 장애, 미토콘드리아 근병증 뇌근병증 락트산 산증 졸중-유사 증상 (MELAS), 신경병증 운동실조 색소성 망막염 및 안검하수증 (NARP), 근신경원성 위장 뇌병증 (MNGIE), 레베르 유전성 시신경병증 (LHON), 라이 증후군, 알츠하이머병 (AD), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 근간대성 간질, 다발성 경화증, 허혈 졸중, 혈관성 치매, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 다운 증후군, 루이 소체 치매 (LBD), 산발성 봉입체 근염 (sIBM), 또는 산발성 뇌 아밀로이드 혈관병증 (CAA), 전두측두엽 치매 (FTD), 유약 X 증후군 (FXS), 뇌실주위 백질연화증, 프리드라이히 운동실조, 고셔병, 지주막하 출혈, 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 두개내 고혈압, 산발성 크로이츠펠트-야콥병, 지연성 이상운동증, 레트 증후군, 측삭 경화증, 유전성 경직성 하반신부전마비, 진행성 연수 마비, 척수성 근육 위축, 또는 X-연관 척수연수성 근육 위축 (케네디병)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 신경변성 질환이다.
일부 실시양태에서, CNS 장애는 산화성 스트레스 및/또는 ROS의 과다생산과 연관된다. 예는 뇌실주위 백질연화증, 프리드라이히 운동실조, 고셔병, 지주막하 출혈, 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 두개내 고혈압, 산발성 크로이츠펠트-야콥병, 지연성 이상운동증, 레트 증후군 또는 운동 뉴런 질환 (예를 들어, ALS, 헌팅톤병, 원발성 측삭 경화증, 유전성 경직성 하반신부전마비, 진행성 연수 마비 (일부는 SOD1 돌연변이를 가짐), 척수성 근육 위축, 또는 X-연관 척수연수성 근육 위축 (케네디병))을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, CNS 장애는 운동 뉴런 기능과 연관된 유전적 결함, 예를 들어, 돌연변이된 SOD1 유전자 또는 돌연변이된 헌팅틴 (HTT) 유전자와 연관된다. 예는 ALS, 헌팅톤병, 유전성 경직성 하반신마비; 치사성 선천성 구축 증후군, 원발성 측삭 경화증; 척수 연수성 근육 위축, 치사성 선천성 구축 증후군 및 척수성 근육 위축을 포함한다.
다른 실시양태에서, CNS 장애, 예를 들어, 뇌 손상은 산소 및/또는 글루코스 박탈과 연관된다. 예는 허혈성 졸중 및 혈관성 치매를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, CNS 장애, 예를 들어, 파킨슨병, 알츠하이머병, HD, ALS, 근간대성 간질, 및 다발성 경화증은 미토콘드리아 기능장애와 연관된다.
또 다른 실시양태에서, CNS 장애, 예를 들어, AD, 다운 증후군, 산발성 봉입체 근염 (sIBM), 및 산발성 뇌 아밀로이드 혈관병증 (CAA)은 아밀로이드-β 독성과 연관된다.
또한, CNS 장애, 예를 들어, MSA-P는 선조체흑질 변성 질환일 수 있다.
벤조산리튬 화합물 또는 이를 포함하는 조성물은 또한 치료를 필요로 하는 대상체에서 통증을 완화시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 대상체는 신경병증성 통증, 복합 부위 통증 증후군, 또는 당뇨병성 신경병증, 염증 또는 골다공증과 연관된 통증을 포함한 다양한 인자에 의해 유발된 통증을 앓고 있을 수 있다.
본원에 기재된 방법 중 임의의 것은 항-CNS 장애 작용제 또는 통증 완화제일 수 있는 추가의 제약 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 예는 부티로페논, 페노티아진, 플루페나진, 페르페나진, 프로클로르페라진, 티오리다진, 트리플루오페라진, 메소리다진, 프로마진, 트리플루프로마진, 레보메프로마진, 프로메타진, 티오크산텐, 클로르프로틱센, 플루펜틱솔, 티오틱센, 주클로펜틱솔, 클로자핀, 올란자핀, 리스페리돈, 퀘티아핀, 지프라시돈, 아미술프리드, 아세나핀, 팔리페리돈, 아리피프라졸, 도파민 부분 효능제, 라모트리진, 메만틴, 테트라베나진, 칸나비디올, LY2140023, 드로페리돌, 피모지드, 부타페라진, 카르페나진, 레목시프리드, 피페라세타진, 술피리드, 아캄프로세이트, 및 테트라베나진으로부터 선택된 항정신병제; 플루옥세틴, 파록세틴, 에스시탈로프람, 시탈로프람, 세르트랄린, 플루복사민, 벤라팍신, 밀나시프란, 둘록세틴, 미르타자핀, 미안세린, 레복세틴, 부프로피온, 아미트립틸린, 노르트립틸린, 프로트립틸린, 데시프라민, 트리미프라민, 아목사핀, 부프로피온, 부프로피온 sr, s-시탈로프람, 클로미프라민, 데시프라민, 독세핀, 이소카르복스아지드, 벤라팍신 xr, 트라닐시프로민, 트라조돈, 네파조돈, 페넬진, 라모트리진, 리튬, 토피라메이트, 가바펜틴, 카르바마제핀, 옥스카르바제핀, 발프로에이트, 마프로틸린, 미르타자핀, 브로파로민, 게피론, 모클로베미드, 이소니아지드, 및 이프로니아지드로 이루어진 군으로부터 선택된 항우울제 또는 기분 안정제; 아리셉트, 도네페질, 타크린, 리바스티그민, 메만틴, 피소스티그민, 니코틴, 아레콜린, 후페르진 알파, 셀레길린, 릴루졸, 비타민 C, 비타민 E, 카로티노이드, 징코 빌로바로 이루어진 군으로부터 선택된, 인지를 개선시키고/거나 신경변성을 억제하는 의약; 히드로코돈-아세트아미노펜, 리리카, 트라마돌, 뉴론틴, 옥시코돈, 가바펜틴, 페르코세트, 옥시콘틴, 비코딘, 비코딘 ES, 비코딘 HP, 메타돈, 노르코, 울트람, 셀레브렉스, 나프록센, 나프록센 소듐, 옥시코돈-아세트아미노펜, 누신타, 딜라우디드, 오파나 ER, 모르핀, MS 콘틴, 이부프로펜, 록시코돈, 에토돌락, 카디안, 오파나, 엔도세트, 히드로모르폰, 알레브, 울트라세트, 아세트아미노펜, 트라마돌-아세트아미노펜, 히드로코돈-이부프로펜, 비코프로펜, 부트란스 경피, 프레가발린 경구, 디클로페낙 포타슘, 아세트아미노펜-코데인, 타이레놀-코데인 #3, 타이레놀, 엠베다, 케토롤락, 데메롤, 엑세드린 미그레인, 애드빌 PM, 누신타 ER, 나프로신, 폰스텔, 프리알트 척수강내, 옥시모르폰, 지프소르, 스프릭스 비강, 아스피린, 메타도스, 그랄리스, 캄비아, 데메롤 주사, 펜타조신-날록손, 로르탑 엘릭시르, 페르코제식, 펜타닐 시트레이트 경막외, 돌로핀, 조르보렉스, 부토르파놀 타르트레이트 비강, 메타돈 인텐솔, 케토프로펜, 메페리딘, 애드빌, 타이레놀 PM 엑스트라 스트렝스, 셀레콕시브, 레프렉사인, 조돌 10/300, 조히드로 ER, 펜타닐 정맥내, 모르핀 근육내, 모르핀 정맥내, 딜라우디드 주사, 로르세트 플러스, 애드빌 미그레인, 히신글라 ER, 디플루니살, 히드로모르폰 정맥내, 코데인 술페이트, 타펜타돌, 부프레넥스 주사, 메타돈 주사, 트레직스, 모르핀 주사, 날폰 경구, 펜타닐 주사, 타이레놀-코데인 #4, 자미세트, 케타민 주사, 히드로모르폰 주사, 마그네슘 살리실레이트, 부프레노르핀 경피, 두라모르프 주사, 메페남산, 애드빌 리퀴-겔, 타이레놀 엑스트라 스트렝스, 케토롤락 주사, 이부프로펜 PM, 그랄리스 30-일 스타터 팩, 모트린 IB, 모르핀 정맥내, 부프레노르핀 HCl 주사, 모르핀 직장, 메클로페나메이트 경구, 옥시코돈-아스피린, 케토롤락 근육내, 아나프록스 DS, 0.9% 염화나트륨 중 펜타닐 정맥내, 히세트, 지코노티드 척수강내, 페르코제식 엑스트라 스트렝스, 잘테미스 XR, 나프렐란 CR, 아스피린-아세트아미노펜-카페인, 옥시모르폰 주사, 레보르파놀 타르트레이트, 데메롤 주사, 히드로코돈 비타르트레이트, 날부핀 주사, 히드로모르폰 직장, 펜타닐 HCl 경피, 메타돈 정맥내, Q-PAP, 디펜히드라민-아세트아미노펜, 알카-셀처, 메페리딘 주사, 히드로모르폰 주사, 돌로제식, 아세트아미노펜 직장, 디히드로코데인-아세트아미노펜-카페인, 엔도단, 이부프로펜 IB, 반퀴쉬, 조돌 7.5/300, 조돌 5/300, 오피르메브 정맥내, 벨부카 협측, 케타민 정맥내, 에코트린 경구, 오파나 주사, 디스케츠 경구, 로르탑 10-325, 페닐톨록사민-아세트아미노펜, 렐라제식, 부토르파놀 타르테이트, 시날고스-DC, 탈윈 주사, 페베랄 직장, 페노프로펜, 메디프록센, 아테놀, 미돌 PM, 부페린, 돌로겐, 왈-프로펜, 클로니딘 경막외, 팜프린 맥스, 이부프로펜 정맥내, 서브마이크로미터화된 디클로페낙, 로르탑 7.5-325, 옥사이도, 알펜타 주사, 서브리마제 주사, 로르세트 HD, 탁티날, 펜타조신 락테이트 주사, 아낙신, 디히드로코데인-아스피린-카페인, 프로빌, 아낙신 맥시멈 스트렝스, 0.9% 염화나트륨 중 메페리딘 정맥내, 인푸모르프 P/F 주사, 이부프로펜-디펜히드라민 시트레이트, 0.9% 염화나트륨 중 히드로모르폰 정맥내, 프리므레브, 케토롤락 비강, 케탈라 주사, 알펜타닐 주사, 클로르페니라민-아세트아미노펜, 노르템프, 아세펜 직장, 아스트라모르프 주사, 마소펜, 울티바 정맥내, 레미펜타닐 정맥내, 두라클론 경막외, 엑스트라프린, 아세트아미노펜-피릴아민 말레에이트, 0.9% NaCl 중 레미펜타닐 정맥내, 브롬페니라민-아세트아미노펜, 디클로페낙 정맥내, 나프록센-디펜히드라민, 서브마이크로미터화된 인도메타신, 부프레노르핀으로부터 선택된 통증 완화제를 포함한다. 의도하는 치료 효과를 달성하기 위해, 관련 기술분야에 공지되어 있는 임의의 항-CNS 장애 작용제 또는 통증 완화제가 벤조산리튬 화합물과 공동-사용될 수 있다.
본원에 제공된 벤조산리튬 화합물 및 이를 포함하는 조성물은 경장 (예를 들어, 경구), 비경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 수질내, 척수강내, 피하, 뇌실내, 경피, 피내, 피하, 피내, 직장, 질내, 복강내, 국소 (분말, 연고, 크림 및/또는 점적제에 의해서와 같이)를 포함한 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 구체적으로 고려되는 경로는 경구 투여, 정맥내 투여 (예를 들어, 전신 정맥내 주사), 혈액 및/또는 림프 공급을 통한 국부 투여, 및/또는 이환 부위로의 직접 투여이다. 일반적으로, 가장 적절한 투여 경로는 작용제의 성질 (예를 들어, 위장관 환경에서의 그의 안정성) 및/또는 대상체의 상태 (예를 들어, 대상체가 경구 투여를 용인할 수 있는지 여부)를 포함한 다양한 인자에 좌우될 것이다.
유효량을 달성하기 위해 요구되는 벤조산리튬 화합물의 정확한 양은, 예를 들어 대상체의 종, 연령 및 일반적 상태, 부작용 또는 장애의 중증도, 특정한 벤조산리튬 화합물의 정체, 투여 방식 등에 따라 대상체마다 달라질 것이다. 유효량은 단일 용량 (예를 들어, 단일 경구 용량) 또는 다중 용량 (예를 들어, 다중 경구 용량)에 포함될 수 있다. 특정 실시양태에서, 다중 용량이 대상체에게 투여되거나 생물학적 샘플, 조직 또는 세포에 적용되는 경우에, 다중 용량 중 임의의 2회 용량은 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물의 상이한 양 또는 실질적으로 동일한 양을 포함한다. 특정 실시양태에서, 다중 용량이 대상체에게 투여되거나 생물학적 샘플, 조직 또는 세포에 적용되는 경우에, 다중 용량을 대상체에게 투여하거나 다중 용량을 조직 또는 세포에 적용하는 빈도는 1일 3회 용량, 1일 2회 용량, 1일 1회 용량, 격일 1회 용량, 3일마다 1회 용량, 매주 1회 용량, 격주 1회 용량, 매월 1회 용량 또는 격월 1회 용량이다. 특정 실시양태에서, 다중 용량을 대상체에게 투여하거나 다중 용량을 조직 또는 세포에 적용하는 빈도는 1일에 1회 용량이다. 특정 실시양태에서, 다중 용량을 대상체에게 투여하거나 다중 용량을 조직 또는 세포에 적용하는 빈도는 1일에 2회 용량이다. 특정 실시양태에서, 다중 용량이 대상체에게 투여되거나 생물학적 샘플, 조직 또는 세포에 적용되는 경우에, 다중 용량의 제1 용량과 마지막 용량 사이의 지속기간은 1일, 2일, 4일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 6개월, 9개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 7년, 10년, 15년, 20년, 또는 대상체, 생물학적 샘플, 조직 또는 세포의 수명이다. 특정 실시양태에서, 다중 용량의 제1 용량과 마지막 용량 사이의 지속기간은 3개월, 6개월 또는 1년이다. 특정 실시양태에서, 다중 용량의 제1 용량과 마지막 용량 사이의 지속기간은 대상체, 생물학적 샘플, 조직, 또는 세포의 수명이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 용량 (예를 들어, 단일 용량, 또는 다중 용량 중 임의의 용량)은 독립적으로 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 1 mg 내지 3 mg, 3 mg 내지 10 mg, 10 mg 내지 30 mg, 30 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 300 mg, 300 mg 내지 1,000 mg, 또는 1 g 내지 10 g을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 용량은 독립적으로 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 3 mg 내지 10 mg을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 용량은 독립적으로 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 10 mg 내지 30 mg을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 용량은 독립적으로 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 30 mg 내지 100 mg을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 용량은 독립적으로 본원에 기재된 바와 같은 벤조산리튬 화합물 100 mg 내지 300 mg을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 용량은 독립적으로 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 300 mg 내지 1000 mg을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 용량 범위는 성인에 대한 제공되는 제약 조성물의 투여 지침을 제공한다. 예를 들어, 유아 또는 청소년에게 투여되는 양은 의료 진료의 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있고, 성인에게 투여되는 것보다 더 적거나 그와 동일할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 벤조산리튬 또는 이를 포함하는 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 표적 질환/상태 중 임의의 것을 치료하거나, 그의 위험을 감소시키거나, 또는 그의 발병을 지연시키는데 유용한 1종 이상의 추가의 제약 작용제 (예를 들어, 치료 및/또는 예방 활성제)와 조합되어 투여될 수 있다. 벤조산리튬 또는 이를 포함하는 조성물은 그의 활성 (예를 들어, 신경정신 장애의 치료 및/또는 그의 위험의 감소를 필요로 하는 대상체에서 신경정신 장애를 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키는데 있어서의 활성 (예를 들어, 효력 및/또는 효능))을 개선시키고/거나, 생체이용률을 개선시키고/거나, 안전성을 개선시키고/거나, 약물 내성을 감소시키고/거나, 대사를 감소 및/또는 변형시키고/거나, 배출을 억제하고/거나, 대상체, 생물학적 샘플, 조직 또는 세포에서의 분포를 변형시키는 추가의 제약 작용제와 조합되어 투여될 수 있다. 또한, 사용된 요법이 동일한 장애에 대해 목적하는 효과를 달성할 수 있고/거나, 상이한 효과를 달성할 수 있는 것으로 인지될 것이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 및 추가의 제약 작용제를 포함한 본원에 기재된 제약 조성물은, 벤조산리튬 화합물 및 추가의 제약 작용제 중 하나를 포함하나 둘 다를 포함하는 것은 아닌 제약 조성물에서 부재하는 상승작용적 효과를 나타낸다.
벤조산리튬 화합물 또는 이를 포함하는 조성물은 대상체에서 신경정신 장애를 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키는데, 예를 들어 조합 요법으로서 유용할 수 있는 1종 이상의 추가의 제약 작용제와 공동으로, 그 전에 또는 그 후에 투여될 수 있다. 제약 작용제는 치료 활성제를 포함한다. 제약 작용제는 또한 예방 활성제를 포함한다. 제약 작용제는 유기 소분자, 예컨대 약물 화합물 (예를 들어, 미국 연방 규정집 (CFR)에 제공된 바와 같이 미국 식품 의약품국에 의해 인간 또는 수의학적 사용을 위해 승인된 화합물), 펩티드, 단백질, 탄수화물, 모노사카라이드, 올리고사카라이드, 폴리사카라이드, 핵단백질, 뮤코단백질, 지단백질, 합성 폴리펩티드 또는 단백질, 항체, 항체와 같은 단백질에 연결된 소분자, 당단백질, 스테로이드, 핵산, DNA, RNA, 뉴클레오티드, 뉴클레오시드, 올리고뉴클레오티드, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 지질, 호르몬, 비타민 및 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 추가의 제약 작용제는 대상체에서 신경정신 장애를 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키는데 유용한 제약 작용제이다. 특정 실시양태에서, 추가의 제약 작용제는 대상체에서 신경정신 장애를 치료하고/거나 그의 위험을 감소시키기 위한 것으로 규제 기관 (예를 들어, 미국 FDA)에 의해 승인된 제약 작용제이다. 각각의 추가의 제약 작용제는 그 제약 작용제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케줄로 투여될 수 있다. 추가의 제약 작용제는 또한 서로 함께 및/또는 본원에 기재된 벤조산리튬 또는 이를 포함하는 조성물과 함께 단일 용량으로 투여될 수 있거나 또는 개별적으로 상이한 용량으로 투여될 수 있다. 요법에 사용하기 위한 특정한 조합은 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물과 추가의 제약 작용제(들)와의 상용성 및/또는 달성하려는 목적하는 치료 및/또는 예방 효과를 고려할 것이다. 일반적으로, 추가의 제약 작용제(들)는 이들이 개별적으로 이용되는 경우의 수준을 초과하지 않는 수준에서 조합되어 이용될 것으로 예상된다. 일부 실시양태에서, 조합되어 이용되는 수준은 개별적으로 이용되는 경우보다 더 낮을 것이다.
특정 실시양태에서, 추가의 제약 작용제는 신경정신 장애를 치료하기 위한 작용제이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 벤조산리튬 화합물 또는 제약 조성물은 CNS 장애를 치료하거나 통증을 완화시키기 위한 요법과 조합되어 투여될 수 있다.
추가의 상술 없이도, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 설명에 기초하여 본 발명을 그의 최대 범위까지 이용할 수 있을 것으로 여겨진다. 따라서, 하기 구체적 실시양태는 단지 예시적이며 어떠한 방식으로도 나머지의 본 개시내용을 제한하지 않는 것으로 해석되어야 한다. 본원에 인용된 모든 공개물은 본원에 언급된 목적 또는 주제를 위하여 참조로 포함된다.
실시예
본 개시내용이 보다 완전히 이해될 수 있도록 하기 위해, 하기 실시예를 제시한다. 본 출원에 기재된 합성 및 생물학적 실시예는 본원에 제공된 벤조산리튬 화합물, 이를 포함하는 조성물 및 방법을 예시하기 위해 제공되며, 어떠한 방식으로도 그의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예 1: 벤조산리튬은 1차 피질 뉴런을 3-NP 독성으로부터 보호한다
미토콘드리아 기능장애는 많은 신경변성 장애 뿐만 아니라 신경 손상, 예컨대, 헌팅톤병 (HD), MSA, 뇌실주위 백질연화증, 프리드라이히 운동실조, 고셔병, 지주막하 출혈, 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 두개내 고혈압, 산발성 크로이츠펠트-야콥병, 지연성 이상운동증, 레트 증후군, 및 다양한 운동 뉴런 질환: ALS, 원발성 측삭 경화증, 유전성 경직성 하반신부전마비, 진행성 연수 마비 (일부는 SOD1 돌연변이를 가짐), 척수성 근육 위축, X-연관 척수연수성 근육 위축 (케네디병)의 발병기전에 연루되어 왔다. 3-니트로프로피온산 (3-NP)은 비가역적 미토콘드리아 복합체 II 억제제이고, 미토콘드리아 기능장애의 연구를 위한 생체내 및 시험관내 모델 둘 다에서 통상적으로 사용된다. 3-NP는 또한 생체내 단백질 산화를 유도할 수 있고, 따라서 다양한 CNS 장애, 예컨대 다계통 위축 (MSA) 및 발작과 연관이 있는 것으로 공지되어 있는 산화성 스트레스 및/또는 반응성 산소 종 (ROS) 과다생산을 유도하기 위한 작용제로서 사용될 수 있다. 본 실시예에서는, 1차 피질 배양물에서 3-NP 유도된 독성에 대한 벤조산리튬의 신경보호 효과를 조사하였다.
물질 및 방법:
1차 배양물의 제조
제18일 배아 (E18) 태아 스프라그 돌리 (SD) 래트 뇌로부터 1차 피질 배양물을 제조하였다. 실험 전 수상돌기의 성장이 가능하도록 세포를 B27이 보충된 뉴로베이슬 배지 (깁코(GIBCO)/써모 피셔 사이언티픽 코포레이션(Thermo Fisher Scientific Corporation)의 라이프 테크놀로지스(Life Technologies))에서 37℃에서 7일 동안 유지시켰다.
약물 및 시약
3-NP (Cat. 번호 73803, 시그마(Sigma), 미국 미주리주 세인트 루이스)를 1 M 원액으로서 포스페이트-완충 염수 (PBS)에 용해시키고, 10 M 수산화나트륨으로 pH 7.4로 조정하였다. 3-NP 원액을 이어서 1-ml 분취물로 분배하고, 빛으로부터 보호하고, 사용 시까지 -20℃에서 저장하였다. 벤조산리튬 (LiBen), 벤조산나트륨 (NaBen), 및 염화리튬 (LiCl)을 모두 멸균 ddH2O 중에 재구성하여 50 μM의 원액을 제조한 후, 사용 시까지 4℃에서 저장하였다.
훽스트 염색
세포 생존의 정도를 평가하기 위해 훽스트 염색을 사용하였다. 세포를 포스페이트-완충 염수 (PBS) 중 4% 파라포름알데히드 (PFA) 중에 고정시키고, PBS 중 희석된 훽스트 33342 (1:1000)와 함께 5-15분 동안 인큐베이션하였다. 2.5 mM 3-NP에 24시간 동안 노출시킨 후 세포 생존의 정도를 평가하기 위해 훽스트 염색을 사용하였다.
면역세포화학 및 공초점 현미경
세포를 4% PFA 중에 고정시키고 PBS 중에서 세척하고, 2% 소 혈청 알부민 (BSA)으로 차단하고, PBS 중 0.03% 트리톤 X-100에 의해 처리한 후, 1:150 희석된 미세관-연관 단백질-2 (MAP-2)에 대한 마우스 모노클로날 항체 (Cat. 번호 MAB378, 케미콘 인터내셔널, 인크.(CHEMICON International, Inc.), 미국 캘리포니아주 테메큘라)와 함께 인큐베이션하였다. 1:500 희석된 염소 항-마우스 IgG 알렉사 플루오르-접합된 2차 항체 (Cat 번호 A11003, 써모 사이언티픽)를 적용하여 MAP-2의 1차 항체를 인식하였다. 공초점 현미경의 경우, 상응하는 형광 신호를 검출하기 위해 필터 세트가 장착된 레이저-스캐닝 공초점 현미경 (자이스 LSM700(Zeiss LSM700); 독일 오버코헨) 하에 커버슬립을 관찰하였다.
세포 반응성 산소 종 (ROS)의 검출
반응성 산소 종 (ROS)을 1차 피질 뉴런 배양물에서 셀록스(CellROX) 산화 시약 (카탈로그 번호 10444, 라이프 테크놀로지 코포레이션(Life Technologies Corp.) 미국)에 의해 검출하였다. 벤조산리튬의 치료 효과를 연구하기 위해, 배양된 세포를 벤조산리튬 (0, 0.5, 1 또는 3 mM)으로 24시간 동안 처리하였다. 이어서 세포를 2.5 mM 3-NP에 24시간 동안 노출시켰다. 후속해서, 2mM 셀록스 시약을 첨가한 다음, 10시간 동안 인큐베이션하였다. 셀록스 녹색 시약은 DNA 염료이고, 산화되면, 이는 DNA에 결합하며; 따라서, 그의 신호는 핵 및 미토콘드리아에 국재화된다. ROS를 형광 강도에 의해 정량화하였다. 형광 신호를 검출하기 위해 필터 세트가 장착된 레이저 스캐닝 공초점 현미경 자이스 LSM700 (자이스, 독일) 하에 샘플을 관찰하였다.
데이터 분석
다수의 군을 먼저 일원 분산 분석 (ANOVA)에 의해 분석한 다음, 사후 스튜던트-뉴만-쿨스 검정에 의해 분석하였다. 0.05 미만의 P-값을 유의한 것으로 간주하였다.
결과:
벤조산리튬으로 전처리된 1차 피질 배양물의 세포 생존
세포 생존 시험을 위해, 24-웰의 커버슬립에서 성장시킨 1차 피질 뉴런을 벤조산리튬 (1 또는 3 mM)으로 24시간 동안 전처리하였다. 이어서 세포를 2.5 mM 3-NP에 24시간 동안 노출시켰다. 도 1, 패널 a에 제시된 바와 같이, 3-NP의 처리는 1차 피질 뉴런의 세포 사멸을 유도한 반면에, 벤조산리튬 (1 mM 또는 3 mM)의 처리는 3-NP 독성에 의해 유도된 1차 피질 뉴런 사멸을 유의하게 보호하였다. 3-NP가 아닌 오직 벤조산리튬만으로 처리된 피질 배양물에서는 어떠한 차이도 관찰되지 않았다. 이들 결과는 벤조산리튬이 3-NP-유도된 뉴런 사멸을 구제한다는 것을 나타낸다.
또한 정량 분석을 수행하여 세포 사멸의 정도를 평가하였다. 적어도 3개의 시야 범위를 무작위로 선택하고, 각각의 커버슬립 상의 시야 범위당 사멸 세포의 평균 개수 및 모든 핵을 계산하였다. 도 1, 패널 b에 제시된 바와 같이, 3-NP에의 노출은 1차 피질 뉴런의 사멸 지수를 0.1에서 0.4까지 현저하게 상승시킨 반면에, 벤조산리튬에 의한 전처리 (24시간 동안 3 mM)는 3-NP 처리된 세포의 사멸 지수를 0.2 미만까지 유의하게 감소시켰다. 사멸 지수의 감소는 벤조산리튬의 뉴런 보호 효과를 나타낸다.
면역세포화학을 위해, 벤조산리튬, 3-NP, 또는 둘 다로 상기 기재된 바와 같이 처리한 뉴런을 MAP-2에 대한 마우스 모노클로날 항체와 함께 인큐베이션하였다. MAP-2는 뉴런 세포체 및 수상돌기에서 발견되는 뉴런 단백질이다. 공초점 현미경 분석은 3-NP 노출에 적용된 1차 피질 배양물에 대한 벤조산리튬의 보호 효과가, 적어도 부분적으로, 뉴런 보호와 연관된다는 것을 밝혀내었다 (도 1, 패널 c).
벤조산리튬으로 전처리된 피질 배양물에서의 세포 반응성 산소 종 (ROS)의 검출
또한, 3-NP는 미토콘드리아 기능장애와 상관이 있는 반응성 산소 종 (ROS) 생산을 유발한다. 총 및 미토콘드리아 ROS 생산은 셀록스 시약에 의해 정량화될 수 있었다. 도 2, 패널 a-b는 상이한 농도의 3-NP에 의한 피질 세포의 ROS의 형광 강도 (%)를 나타낸다. 3-NP는 ROS 생산을 50% 초과 증가시켰고, 이는 벤조산리튬의 처리에 의해 유의하게 감소되었다. 이러한 효과는 특히 0.5 mM에서 관찰할 수 있었고 (p<0.0001) (도 2, 패널 a 및 b), 이는 벤조산리튬이 심지어 ROS의 생산을 제거하거나 또는 억제하여 기저 수준까지 되돌린다는 것을 나타내었다. 벤조산리튬의 ROS 감소 효과와 비교하기 위해, 벤조산나트륨 및 염화리튬을 또한 1차 피질 배양물에서 3-NP 노출 24시간 전에 인큐베이션하였다. 도 2, 패널 c에 제시된 바와 같이, 벤조산나트륨 및 염화리튬도 또한 세포 ROS의 양을 감소시킬 수 있었다. 그러나, ROS 감소의 효과는 벤조산나트륨 및 염화리튬보다 벤조산리튬에 의할 때 유의하게 훨씬 더 컸다 (도 2, 패널 b).
종합하면, 본 실시예로부터 수득된 결과는 벤조산리튬 처리가 3-NP 노출에 의해 유발된 미토콘드리아 기능장애에 대해 뉴런 보호를 부여한다는 것을 나타낸다. 또한, ROS 연구의 결과는 벤조산나트륨 및 염화리튬보다 유의하게 우수한 벤조산리튬의 항산화제 능력을 밝혀내었고, 이는 뉴런 세포 사멸을 감소시키는 벤조산리튬의 잠재적 미토콘드리아 회복 메카니즘을 시사한다. ROS는 미토콘드리아 손상을 매개하고, 이는 신경변성 장애 예컨대 헌팅톤병 (Reddy et al., Trends Mol Med. 2008 Feb;14(2):45-53), MSA, 뇌실주위 백질연화증, 프리드라이히 운동실조, 고셔병, 지주막하 출혈, 주산기 저산소성 허혈성 뇌병증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 두개내 고혈압, 산발성 크로이츠펠트-야콥병, 지연성 이상운동증, 레트 증후군, 및 다양한 운동 뉴런 질환: ALS, 원발성 측삭 경화증, 유전성 경직성 하반신부전마비, 진행성 연수 마비 (일부는 SOD1 돌연변이를 가짐), 척수성 근육 위축, X-연관 척수연수성 근육 위축 (케네디병)의 발병기전에서 중요한 역할을 한다. 또한, 산화성 스트레스 및/또는 ROS 과다생산은 CNS 장애, 예컨대 MSA 및 발작과 연관이 있는 것으로 공지되어 있다. 문헌 [Fullner et al., Front Neurosci., 10:99 (2016) 및 Bhowmik et al., Br. J. Pharmacol. 167(7):1398-1414 (2012)]. 따라서, 벤조산리튬은 미토콘드리아 기능장애, 산화성 스트레스 및/또는 ROS 과다생산과 연관된 이들 CNS 장애, 예를 들어, HD, MSA, 및 발작을 치료하는데 효과적일 것이다.
실시예 2: 벤조산리튬은 미토콘드리아 기능을 위한 예비 호흡 용량을 증진시킨다
본 실시예는 벤조산리튬에 의해 개선되는 미토콘드리아 기능의 연구를 입증하였다. 벤조산리튬에 의한 신경변성 질환, 예컨대 헌팅톤병 (HD)에 대한 미토콘드리아 기능장애의 보호에 더하여, 벤조산리튬으로 처리된 피질 뉴런의 산소 소모율 (OCR)을 본 실시예에서 조사하였다.
물질 및 방법
1차 배양물의 제조
1차 피질 배양물의 제조를 이전에 기재한 바와 같이 하되, 세포를 XF 96 웰 세포 배양 마이크로플레이트 상에 시딩하였다. 검정일에, 배양 배지를 XF 검정 배지 (씨홀스 바이오사이언시스(Seahorse Biosciences), 미국)로 바꾸었다. 검정 전에, 플레이트를 CO2 보충된 37℃의 인큐베이터로 옮기고, 1시간 동안 유지시켰다. 전체 OCR을 계산하였다.
미토콘드리아 호흡
XF 셀 미토 스트레스 테스트 (XF Cell Mito Stress Test) 키트 (씨홀스 바이오사이언시스, 미국)를 사용하여 벤조산리튬 (LiBen, 3mM), 벤조산나트륨 (NaBen, 3mM) 또는 염화리튬 (LiCl, 3mM)으로 24시간 동안 전처리된 피질 뉴런의 미토콘드리아 활성을 측정하였다. 온코스타틴 M (OSM)은 미토콘드리아 기능장애를 보호할 수 있는 대등한 군으로서 수행되었다. XF 셀 미토 스트레스 테스트는 대사 기능의 주요 파라미터를 밝히기 위해 미토콘드리아의 전자 수송 사슬 (ETC)의 구성요소를 표적화하는 호흡을 조정한다. 조정제 (올리고마이신, FCCP, 및 로테논과 안티마이신 A의 믹스)를 연속 주사하여 ATP 생산, 최대 호흡, 및 비-미토콘드리아 호흡을 측정하였다. 이어서 이들 파라미터를 사용하여 양성자 누출 및 예비 호흡 용량을 계산하였다.
결과
벤조산리튬, 벤조산나트륨, 및 염화리튬으로 전처리된 피질 배양물에서의 미토콘드리아 호흡의 검출
1차 피질 배양물에서의 OSM, LiBen, NaBen 또는 LiCl의 전처리 후, XF 셀 미토 스트레스 테스트 키트에 의해 이전에 기재된 바와 같이 미토콘드리아 호흡을 검사하였다. 도 3, 패널 a에 제시된 바와 같이, 군들 사이에 최대 호흡에서 차이는 없었고, 이는 최대 호흡률을 달성하는 미토콘드리아의 일반적 기능이 동일하다는 것을 보여준다. 조정제 (올리고마이신, FCCP, 및 로테논과 안티마이신 A의 믹스)의 주사에 의해 조정된 상이한 상태 하에서, 기저 호흡, 예비 호흡 용량, 양성자 누출, 및 ATP 생산을 결정하고, 도 3, 패널 b 및 c에 제시하였다.
LiBen (3mM)의 전처리는 다른 군보다 기저 OCR을 더 많이 감소시켰고, 이는 기저 조건 하에서의 세포의 보다 낮은 에너지 요구량을 보여주었다. LiBen (3mM)에 의한 예비 호흡 용량의 증가는 세포의 보다 우수한 적응성을 입증하며, 이는 또한 에너지 요구량에 반응하는 보다 우수한 능력을 나타내었다. NaBen (3 mM) 및 LiCl (3 mM)은 세포의 예비 호흡 용량을 증가시키는 동일한 경향을 가졌지만, LiBen (3 mM)보다 덜 효과적이었다.
LiBen은 NaBen 또는 LiCl보다 우수한 양성자 누출 및 ATP 생산의 감소 수준을 나타내었다 (도 3). 양성자 누출은 미토콘드리아 손상을 반영할 것이다. 따라서, 결과는 LiBen이 세포를 미토콘드리아 손상으로부터 보호하였음을 나타낸다. 미토콘드리아에 의해 생산된 ATP는 세포의 에너지 요구량을 충족시키기 위해 사용된다. 이는 벤조산리튬에 의해 감소되며, 이는 기저 호흡으로서 보다 낮은 에너지 요구량을 나타탠다.
요약하면, 벤조산리튬은 뉴런의 기저 에너지 요구량을 감소시키고, 이를 양성자 누출로부터 보호하며, 예비 호흡 용량을 증가시킴으로써 미토콘드리아 활성의 요구량에 대한 적응성을 개선시켰다. 미토콘드리아 기능의 이들 개선은 벤조산리튬이 헌팅톤병 (HD), 다발성 경화증 (SCA), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 심근병증, 미토콘드리아 근병증, 당뇨병 및 난청 (DAD), 레베르 유전성 시신경병증 (LHON), 라이 증후군, 신경병증, 운동실조, 색소성 망막염, 및 안검하수증 (NARP), 근신경원성 위장 뇌병증 (MNGIE), 불균일 적색 근섬유를 갖는 근간대성 간질 (MERRF), 및 미토콘드리아 근병증, 뇌근병증, 락트산 산증, 졸중-유사 증상 (MELAS)을 포함한 미토콘드리아 기능장애와 연관된 질환을 치료하는데 도움이 될 수 있다는 것을 시사한다.
실시예 3: 벤조산리튬은 근위축성 측삭 경화증 (ALS)의 질환 진행을 개선시킨다
근위축성 측삭 경화증 (ALS)은 운동 뉴런의 대량 손실을 특징으로 하는 치명적 신경변성 장애이며; ALS의 증상은 진행성 약화, 골격근의 위축 및 마비로 시작되고 이는 결국 사망으로 이어진다. 적어도 일부 가족성 ALS 사례가 인간 SOD1 유전자의 미스센스 돌연변이로 인해 발생한 것으로 보고된 바 있고, 따라서, SOD1 유전자의 돌연변이체 형태를 갖는 트랜스제닉 마우스를 확립하여 인간 ALS 증상을 재현하였다. 본 실시예에서, SOD1 유전자에서 Gly93→Ala 아미노산 치환을 보유하는 트랜스제닉 마우스 B6SJL-Tg(SOD1*G93A)1Gur/J를 사용하여 ALS 대상체에서의 벤조산리튬의 효과를 조사하였다.
물질 및 방법
동물 및 수용 조건
본 개시내용의 실시예에 사용된 모든 동물은 온도 제어 (24-25℃) 및 12:12 낮-밤 주기의 동물 룸에 수용하였다. 표준 실험실 사료 및 수돗물은 자유롭게 이용가능하였다. 실험 절차는 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인받았고, 국가 동물 복지 법규를 준수하여 수행하였다. 트랜스제닉 마우스 B6SJL-Tg(SOD1*G93A)1Gur/J는 잭슨 래보러토리(Jackson Laboratory) (미국)에서 구입하였다.
코호트 1에서, 암컷 트랜스제닉 및 야생형 한배새끼를 무작위로 하기 군으로 나누었다: 비히클 (야생형, 염수로 처리됨, n=5), 비히클-ALS (SOD1(G93A) 트랜스제닉 마우스, 염수로 처리됨, n=6), 약물-ALS (SOD1(G93A) 트랜스제닉 마우스, 벤조산리튬으로 처리됨, n=6). B6SJL-Tg(SOD1*G93A)1Gur/J 마우스의 질환 발병은 약 80-90일령에 발생하였고, 135-140일까지 진행성 임상적 약화에 이어 마비 및 사망이 발생하였다.
코호트 2에서, 수컷 트랜스제닉 및 야생형 한배새끼를 무작위로 코호트 1과 같이 3개 군으로 나누었다: 비히클 (n=5), 비히클-ALS (n=6), 및 약물-ALS (n=11). 질환 발병은 약 110-120일령에 발생하였고, 약 150-155일에 진행성 임상적 약화에 이어 마비 및 사망이 발생하였다.
약물 투여
코호트 1에서, 생후 8주에 약물 요법을 개시하고, 연구 말미까지 이를 계속하였다. 벤조산리튬을 256 mg/kg 체중/일의 용량으로 복강내로 주사하였다. 비히클 군에는 동일한 부피의 염수의 주사를 제공하였다.
코호트 2에 대한 약물 요법은, 투약을 10주령에 시작하는 것을 제외하고, 코호트 1과 동일하였다.
동물 행동 과제
다양한 행동 과제를 50일령 (코호트 1) 또는 13주령 (코호트 2)에 시작해서 사망시까지 상용적으로 수행하여 신경계 결핍에 대한 약물의 효과를 평가하였다.
코호트 1
개방 현장은 전체 자발적 보행 활동을 모니터링할 수 있는 동물 행동 과제이다. 각각의 동물을 빈 시험장 (60 cm x 60 cm 플라스틱 박스)에 1시간 동안 두고, 그의 활동을 베르사맥스(VersaMax) 동물 활동 모니터링 시스템 (아큐스캔 인스트루먼츠, 인크.(AccuScan Instruments, Inc.), 미국 오하이오주 콜룸부스)에 의해 평가하였다. 총 이동 거리, 직립 동작 횟수 및 직립 시간을 분석하였다. 개방 현장 수행은 1주에 1-2회 측정하였다.
코호트 2
개방 현장 과제에서, 각각의 동물을 빈 시험장 (43.2 cm x 21.6 cm 플라스틱 박스)에 1시간 동안 두고, 그의 활동을 포토빔(Photobeam) 활동 시스템 (샌디에고 인스트루먼츠(San Diego Instruments), 미국)에 의해 평가하였다. 총 이동 및 직립 활동 (빔 중단 횟수)을 분석하였다. 개방 현장 수행은 1주에 1회 측정하였다.
동물이 회전 실린더 상에서 균형을 잡고 걷는 것을 요구하는 로타로드 과제는 협응 운동 능력을 측정하기 위해 널리 사용되는 시험이다. 마우스를 5-채널의 자동 회전식 로드 장치 (판랩(PanLab)/하버드 어패러투스(Harvard Apparatus)) 상에 놓아 두었다. 실험 전 제-5일, 제-4일, 제-3일에 모든 마우스를 일정한 속도 (8 rpm)로 훈련시켜 마우스가 장치에 순응하게 하였다. 훈련 세션 후, 16 rpm에서 최대 5분 동안 운동 협응을 평가하였다. 각각의 동물에게 1일에 3회의 시험 (10-분 간격)을 적용하였다. 로타로드 과제 수행을 1주에 1회 측정하고, 각각의 동물에 대해 가장 긴 체류 시간을 기록하였다.
신경근육 손상을 입증하기 위해 신경근육 장애 마우스 모델을 사용하여 매달리기 시험을 수행하였다. 금속 와이어 메쉬 (0.2 cm 직경, 1 cm x 1 cm 넓이 그리드)를 테이블 위 30 cm에 수평으로 고정시켰다. 한 마리의 마우스가 와이어 메쉬를 쥐게 하고 메쉬의 윗면을 아래로 전환하였다. 동물이 떨어졌을 때, 떨어질 때까지의 지연시간을 기록하였고, 분석을 위해 180초의 최대 시간을 할당하였다. 각각의 개체에 대해 30-분 간격으로 2회 세션을 제공하였고, 보다 긴 시간을 기록하였다. 매달리기 시험 수행은 1주에 1회 측정하였다.
체중
각각의 동물에 대해, 체중을 10주령에 시작하여 매주 측정하였다. 체중 감소는 질환 진행 동안 발생한 운동 장애 또는 임의의 권태감으로 인해 식품 또는 물을 수득하지 못하는 것을 나타낸다.
생존
각각의 마우스에 대해 사망일 및 원인을 기록하였다. 동물을 근접 모니터링하고, 중증 이환에 대한 기준에 따라 마우스를 옆으로 두었을 때 30초 후에 스스로 일어나지 못하는 능력으로 정의되는 빈사상태인 경우, 이를 안락사시켰다. 빈사상태 마우스를 "사망"으로 기록하고, 이산화탄소를 사용하여 안락사시켰다.
결과
벤조산리튬 처리된 SOD1 트랜스제닉 마우스에 대한 보행 활동 수행
코호트 1에서, 개방 현장 과제를 사용하여 상이한 군의 마우스의 일반적 운동성을 조사하였다. 도 4, 패널 a 및 b는 시험 기간 동안 염수 또는 벤조산리튬으로 처리된 트랜스제닉 ALS 마우스가 커버한 직립 동작 횟수 및 직립 시간을 각각 요약한 선 그래프이다. 데이터는 벤조산리튬으로 처리된 ALS 마우스의 뒷다리 기능이 약 90일령으로부터 약 130일령까지 그의 대조군 한배새끼와 비교하여 유의하게 개선되었음을 입증하였다. 상기 기재된 바와 같이, 이들 결과는 벤조산리튬 처리가 질환 진행 동안, 특히 질환 진행 초기에 뒷다리 기능을 개선시킬 수 있다는 것을 시사한다. 따라서, 벤조산리튬은 ALS를 치료하는데 치료 효능을 제시할 것으로 예상된다.
코호트 2와 관련하여, 도 4, 패널 c에서 f는 시험 기간 동안 염수로 처리한 야생형 및 트랜스제닉 ALS 마우스, 및 벤조산리튬으로 처리한 ALS 마우스에 대한 각각의 매달리기 시험, 로타로드 시험, 직립 활동 및 이동 활동의 결과를 요약한 선 그래프이다. 데이터는 벤조산리튬으로 처리된 ALS 마우스의 운동 기능이 약 133일령부터 약 147일령까지 그의 대조군 한배새끼와 비교하여 개선되었음을 입증하였다. 이들 결과는 벤조산리튬 처리가 SOD1G93A 트랜스제닉 마우스의 질환 진행 동안 운동 기능을 개선시키고/거나 협응 운동 기능 결핍을 완화시킨다는 것을 시사한다. 따라서, 벤조산리튬은 ALS에서 치료 효능을 나타내거나, 또는 운동 기능 결핍의 진행을 지연시킬 것으로 예상된다.
벤조산리튬 처리된 SOD1 트랜스제닉 마우스의 체중 변화 및 생존율
도 4, 패널 g 및 h에 제시된 바와 같이, 비히클로 처리된 ALS 마우스와 비교하여, 벤조산리튬으로 처리된 ALS 마우스의 시간의 경과에 따른 체중 변화 및 생존 마우스 비율이 또한 개선되었다.
실시예 4: 벤조산리튬은 1차 피질 뉴런을 산소 및 글루코스 박탈로부터 보호한다
중추 신경계 (CNS)의 뇌 손상은 허혈성/출혈성 졸중, 혈관성 치매, 발작, 외상성 뇌 손상 (TBI), 척수 손상 및 감염 등을 포함한 다양한 상태 하에 뇌 조직으로의 불량한 혈류 및 글루코스 공급으로 인해 발생한다. 뇌 손상 후 장애 및 심지어 사망은 통상적이다. 최근 수십년간 사망률이 감소되고 있지만; 장애는 여전히 난치성이다. 뉴런을 보호하거나, 복구하거나, 또는 신경가소성을 개발하기 위한 신규 요법은 뇌 손상을 앓고 있거나 그에 대한 위험이 있는 환자를 위해 필요하다.
물질 및 방법
1차 배양물 및 OGD 모델의 제조
산소-글루코스 박탈 (OGD)은 졸중-관련 연구와 같은 뇌 손상에서 사용되는 통상적이고 널리-검증된 세포 모델이다. 1차 피질 배양물을 앞서 기재된 바와 같이 제조하였다. OGD 모델을 유도하기 위해, B27이 보충된 뉴로베이슬 배지 (깁코/써모 피셔 사이언티픽 코포레이션의 라이프 테크놀로지스)를 배양물에서 제거한 다음, 뉴로베이슬-A 배지 (D-글루코스 및 피루브산나트륨 부재 [깁코/써모 피셔 사이언티픽 코포레이션의 라이프 테크놀로지스])로 세정하였다. 배양된 세포를 5% CO2가 존재하는 37℃의 가습 인큐베이터에서 1시간 동안 유지시켜 나머지 글루코스 및 피루베이트가 소모되게 하였다. 이어서 배양물을 95% N2 - 5% CO2의 염기성 환경에 4시간 동안 적용하였다. 산소 분석기 (프룩스-110(Proox-110), 미국 뉴욕주 라코나 데모트 스트리트)에 의해 실험 내내 대략 1.0%로 유지되는 산소 농도를 모니터링하였다.
약물 적용
피질 배양물을 벤조산리튬으로, (1) 53시간 (전처리 24시간, 습관화 1시간, 산소-글루코스 박탈 4시간, 및 처리후 재관류 24시간 포함) 동안의 벤조산리튬 (0, 0.3, 1, 3, 5 mM)의 전체 처리 (도 5, 패널 a); (2) 48시간 재관류 동안의 벤조산리튬 (0, 0.3, 0.5, 1, 3, 5 mM)의 후처리 (도 5, 패널 b)를 포함한 상이한 조건으로 처리하였다.
MTT 검정
MTT 검정을 사용하여 세포 생존의 정도를 평가하였다. MTT (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드)를 배양물에 첨가하고, 4시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 살아있는 세포에 의해 불용성 자주색 포르마잔 생성물이 생성되었다. 비색 방법을 사용하여 생존 세포를 정량화하고, "세포 생존 (%)"를 생존 세포의 평균 수로 정의하였다.
결과
벤조산리튬 처리된-1차 피질 배양물의 세포 생존
도 6, 패널 a에 제시된 바와 같이, 1차 피질 세포의 세포 생존은 산소-글루코스 박탈 하에 약 50% 감소하였지만, 박탈 전 전체 53시간 동안의 벤조산리튬 처리 (도 5, 패널 a) 및 산소 & 글루코스 박탈 후 48시간 동안의 벤조산리튬 처리 (도 5, 패널 b)를 포함한 벤조산리튬 처리는 1차 피질 세포를 사멸로부터 유의하게 보호하였다. 도 6, 패널 b의 결과에 따르면, 벤조산리튬은 모든 용량 수준에서 세포 보호 효과를 나타내었다.
벤조산리튬에 의한 OGD 피질 배양물에 대한 세포 생존의 보호는 또한 허혈성/출혈성 졸중, 혈관성 치매 (VD), 외상성 뇌 손상 (TBI), 발작 장애 및 척수 손상을 포함한 뇌 손상에 대한 그의 잠재적 치료 효과를 보여준다.
실시예 5: 벤조산리튬은 MPTP 독성으로부터 세포 사멸 및 행동 장애를 감소시킨다
파킨슨병 (PD)은 주로 흑질선조체 도파민성 경로에 대한 손상으로 인한 진행성 신경변성 장애이다. 본 실시예에서는 세포 및 동물 모델 둘 다에서 인간 특발성 파킨슨병과 유사한 병리학적 변화를 발생시키기 위해 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘 (MPTP)을 사용하였다.
물질 및 방법
세포 배양 및 약물 적용
SH-SY5Y, 인간 신경모세포종 세포주를 MPTP (750 μM)와 24시간 동안 인큐베이션하였다. 벤조산리튬/벤조산나트륨 (0, 0.3, 1, 3 mM)을, 24시간 동안 전처리, 48시간 동안 전처리 및 공동처리, 및 24시간 후처리를 포함한 상이한 조건으로 SH-SY5Y 세포에 처리하였다 (도 7). MTT 검정을 사용하여 이전에 기재된 바와 같이 세포 생존의 정도를 평가하였다.
동물 모델 및 약물 요법
동물을 이전에 기재된 것과 동일한 조건 하에 수용하고 유지시켰다. 수컷 C57BL/6J 마우스 (연령: 12주)를 2개의 군 - 비히클 군 및 MPTP-유도된 군으로 무작위로 배정하였다. MPTP-유도된 군의 마우스에 MPTP (30 mg/kg 체중/일)를 5주 동안 복강내로 주사하는 한편, 비히클 대조군의 마우스에는 동일한 부피의 염수 주사를 제공하였다. MPTP 노출 5주 후, 폴 시험을 수행하여 MPTP-유도된 장애의 효과를 규명하였다. 행동 장애를 갖는 마우스를 염수 및 벤조산리튬 (256 mg/kg 체중/일)의 상이한 처리에 의하는 2개의 군으로 무작위로 나누었다.
행동 과제
폴 시험을 사용하여 파킨슨증의 전형적 증상인 운동완만의 정도를 측정하였다. 동물을 머리를 상향으로 하여 거친-표면의 폴 (직경 1 cm 및 높이 60 cm) 상부 가까이에 위치시켰다. 동물이 하향 전환할 때까지 걸린 시간 (T전환) 및 바닥으로 내려오는데 걸린 총 시간 (TLA)을 기록하였다. 마우스가 하향 전환할 수 없을 때, T전환을 60초 걸린 것으로 하였다 (디폴트 값). 마우스가 전환에 실패하고 폴에서 떨어졌을 때 TLA는 120초 걸린 것으로 하였다.
결과
MPTP에 노출된 1차 피질 배양물에 대한 벤조산리튬 처리의 효과
도 8에 제시된 바와 같이, MPTP (750 μM) 노출은 약 50%의 세포 수 감소를 유발하였다. 24시간 동안의 모든 약물의 전처리 및 후처리는 SH-SY5Y 세포를 MPTP-유도된 세포 사멸로부터 유의하게 보호할 수 있었다. 벤조산리튬 (1mM), 벤조산나트륨 (1mM) 및 염화리튬 (1mM)의 보호 효과를 비교하면, 벤조산리튬이 다른 2개의 군보다 더 우수한 세포 생존 개선 성능을 가졌다 (도 8, 패널 a-b). 벤조산리튬의 경우에, 이러한 효과는 1mM의 용량에서 가장 분명하였다 (도 9, p<0.0001).
MPTP 독성-유도된 마우스에 대한 벤조산리튬 처리의 효과
폴 시험 수행을 약물 처리 전 및 후에 기록하였다. MPTP 주사 전, 모든 마우스를 1주 동안 폴 상에서 훈련시켰다. 도 10, 패널 a-b의 데이터는 MPTP-유도가 보다 긴 전환 시간 (T전환) 및 하향 전환을 위한 총 시간 (TLA)을 발생시킨 반면에, 벤조산리튬의 처리는 전환 시간 (T전환) 및 하향 전환을 위한 총 시간 (TLA) 둘 다를 유의하게 감소시켰다는 것을 입증한다. MPTP-유도된 마우스에 대한 폴 시험 수행은 벤조산리튬 요법에 의해 개선되었지만 벤조산리튬 처리의 부재 하에서는 악화되었다.
이들 결과는 벤조산리튬 처리가 MPTP-유도된 세포 사멸 및 행동 장애를 구제할 수 있고, 따라서, 벤조산리튬은 파킨슨병을 위한 치료제일 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 6: 벤조산리튬은 MPTP 플러스 3-NP 중독에 의해 유도된 장애를 감소시킨다
선조체흑질 변성 (SND)은 흑색질 치밀부 (SNc)의 도파민성 뉴런 및 선조체 생성 뉴런의 연합 변성으로 인한, 다계통 위축과 연관된 파킨슨증 (MSA-P)이다. SNc는 MPTP에 의한 미토콘드리아 복합체 I의 억제에 대해 특이적 감수성을 나타낸다. 3-니트로프로피온산 (3-NP)은, 다른 한편으로는, 숙시네이트 데히드로게나제 (SDH)의 비가역적 억제에 의한 미토콘드리아 호흡의 억제제이고, 대부분의 종에서 선조체의 선택적 병변을 유도한다. SND/MSA-P의 신경병리학적 특징을 재현하기 위해, C57BL/6 마우스에서 MPTP 플러스 3-NP 중독을 조합한 "이중 독소-이중 병변"이 확립되어 있다.
물질 및 방법
동물 및 수용 조건
수컷 C57BL/6J 마우스 (연령, 8-12주)를 2개의 군 - 비히클 대조군 및 MPTP/3-NP-유도된 군으로 무작위로 배정하였다. 9-일 중독 기간 동안 MPTP 및 3-NP를 투여하였다. 3-NP를 i.p.로 12시간마다 (총 용량 450 mg/kg, 9일) 및 MPTP를 i.p.로 10 mg/kg/일로 (총 용량 90 mg/kg, 9일) 투여하였다. MPTP/3-NP 중독 9일 후, 20% 초과로 감소된 로타로드를 수행하는 마우스를 1주 동안 염수 또는 벤조산리튬 (256 mg/kg 체중/일) 처리에 의하는 2개의 군으로 무작위로 나누었다.
동물 행동 과제
만성 MPTP/3-NP 유도 전 및 후에 각각 로타로드 운동 활동을 측정하였다. 각각의 회전 속도 수준에서 로드 상에서 소모한 시간은 운동 수행을 나타낸다. 시험 전 (제-7일, 제-5일, 제-3일) 5분에 걸쳐 4에서 10 rpm으로의 가속 속도로 마우스를 훈련시켰다. 시험 동안, 모든 동물을 4 rpm에서 출발시키고 5분에 걸쳐 4에서 20 rpm으로 가속하였고, 각각의 마우스가 10분의 시험-간 간격으로 1일에 3회 시험으로 체험시켰다. 각각의 마우스의 떨어질 때까지의 평균 지연 시간을 계산하였다. 마우스를 1- 또는 2-주 간격으로 시험하였고, 재훈련은 요구되지 않았다.
결과
벤조산리튬 처리에 의한 MPTP 플러스 3-NP 노출된 마우스의 로타로드 수행
도 12, 패널 a-b에 제시된 바와 같이, 9일 MPTP 플러스 3-NP 노출된 마우스의 로타로드 상에서의 체류 시간은 그의 기준선 또는 대조군과 비교하여 유의하게 감소되었다. 도 12b에서의 개선은 제7일 처리를 제0일 처리로 나눈 체류 시간 (초)으로서 계산하였다. 1주 벤조산리튬 처리 후, MPTP/3-NP 중독 후의 마우스의 로드 상에서의 체류 시간은 염수로 처리된 것과 비교하여 유의하게 개선되었고, 선조체흑질 변성 질환, 특히 MSA-P에 대한 그의 잠재적 치료 효과를 입증하였다.
실시예 7: 벤조산리튬은 급성 통증으로부터의 고통을 완화한다
통증은 환자의 삶의 질에 영향을 미치는 심각한 임상 문제이다. 국제 통증 연구 협회 (IASP)는 통증을 실제의 또는 잠재적인 조직 손상과 연관된, 또는 이러한 손상과 관련하여 설명되는 불쾌한 감각 및 정서적 경험으로 정의한다 (IASP 1979). 그의 메카니즘 및 치료를 조사하기 위해 관련 임상 상태에 대한 다중 동물 통증 모델이 개발되었다.
본 실시예에서, 동물에 대한 벤조산리튬의 효과를 검사하기 위해 급성 통증 관리 절차를 적용하였다. 실험 설계를 도 13에 제시한다. 각각의 마우스에 대한 폰 프라이 기계적 역치의 기준선을 벤조산리튬 처리 24시간 전에 시험하였다. 이어서, 벤조산리튬 주사 후, 30분, 60분, 90분, 및 120분 시점에 폰 프라이를 시험하였다.
물질 및 방법
동물 및 약물 투여
동물을 이전에 기재된 것과 동일한 조건 하에 수용하고 유지시켰다. 수컷 C57BL/6J 마우스 (연령, 8주)를 2개의 군, PBS 대조군 (n=10) 및 벤조산리튬 (n=10) 군으로 무작위로 배정하였다. 벤조산리튬 군의 각각의 마우스에 256 mg/kg의 용량을 복강내로 주사하는 한편, PBS 대조군의 마우스에는 동일한 부피의 PBS 주사를 제공하였다.
동물 행동 과제
폰 프라이 시험을 사용하여 기계적 침해수용을 평가하였다. 마우스를 와이어 메쉬의 국한된 구역 (65cm x 21cm x 31cm) 상의 작은 박스 (10cm x 6cm x10.5cm) 안에 넣어두었다 (2450 엘렉트로닉 폰 프라이 촉각계, IITC, 미국). 마우스를 박스 안에서 60분 동안 유지시켜 순응시켰다. 시험 마우스가 진정되면, 내부에 전극이 있는 특수 팁을 사용하여 그의 뒷발을 찔렀다. 힘을 점점 증가시켜 마우스를 찌르고, 회피 반응을 유도하는 기계적 역치를 측정하였다.
결과
벤조산리튬의 항침해수용성 효과
도 14에 제시된 바와 같이, 벤조산리튬의 사전-투여는 폰 프라이 시험에 의해 검사된 급성 기계적 유발 통증을 완화시켰다. 이러한 효과는 투여 30분 후에 분명하였고, 60분까지 지속되었다. 폰 프라이 시험은 신경병증성 통증, 수술후 통증, 염증, 또는 골관절염과 같은 임상 상태를 모방한 피부 통각과민 또는 이질통을 측정하였다. 따라서, 벤조산리튬은 이들 유형의 통증을 앓는 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.
실시예 8: 벤조산리튬은 벤조산나트륨보다 벤조에이트를 상승시키는 보다 우수한 생체이용률을 갖는다
본 실시예에서, 벤조산리튬 및 벤조산나트륨의 생체내 약동학을 비교하였다.
물질 및 방법
동물 및 약물 투여
240 - 260 g으로 칭량된 수컷 스프라그-돌리 래트를 2개의 군으로 무작위로 배정하였다. 군 1 래트 (n=6)는 단일 용량의 벤조산나트륨 (NaBen, 287.9mg/kg) 및 탄산리튬 (Li2CO3, 74.2mg/kg)으로 처리하는 한편, 군 2 래트 (n=6)는 벤조산리튬 (LiBen, 255.3mg/kg)으로 처리하였다. 이들 2종의 요법은 동일한 몰농도의 리튬 및 벤조에이트를 제공할 것이다. 화학물질을 PBS 중에 용해시킨 다음, 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 실험 전, 모든 래트가 물에는 자유롭게 접근하게 하면서 밤새 금식시켰다. 약물의 단일 용량 투여 후, 이어서 0, 5, 15, 30, 60, 90, 120, 240, 360, 720, 및 1440분의 시점에 혈액 샘플을 수집하였다.
혈장 샘플 수집
혈액 샘플을 경정맥 카테터삽입된 래트로부터 나트륨 헤파린이 코팅된 튜브 내로 수집하였다. 이어서, 혈액 샘플을 빙상에서 유지시키고, 2,500 x g에서 15분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 상청액을 수집한 다음, 추가 가공 시까지 - 80℃에서 동결 유지시켰다.
벤조산 정량화
벤조산의 혈장 농도를 LC/MS/MS에 의해 결정하였다. ODS 5um 칼럼 (4.6 x 150 mm, 비오실(Biosil)) 상에서 크로마토그래피 분리를 수행하였다. 이동상은 1% 이동상 A 및 99% 이동상 B의 혼합물로 이루어졌다. 이동상 A는 아세토니트릴 (ACN)/H2O/1M NH4HCO3= 25/75/0.5 (v/v)를 함유하였고; 이동상 B는 H2O/1M NH4HCO3= 100/0.5 (v/v)를 함유하였다. 용리액은 1ml/분의 유량을 가졌다. 주입 부피는 50 μL였고, 칼럼 온도는 23℃였다. 모든 용매는 HPLC 등급 품질이었다.
데이터 분석
벤조산의 혈장 농도 대 시간의 플롯을 구축하였다. 윈논린을 사용하여 혈장 데이터의 비-구획 분석 (NCA)으로부터 기본 약동학적 파라미터를 수득하였다.
결과
벤조산의 혈장 농도 대 시간
벤조산의 최고 혈장 농도 (Cmax) 및 Cmax까지의 시간 (Tmax)을 HPLC 분석에 의해 관찰하였다. T1 /2, 곡선하 면적 (AUC) 및 다른 약동학적 파라미터를 계산하였다. 도 15, 패널 a-b 및 하기 표 1에 제시된 바와 같이, 각각 NaBen 및 Li2CO3 (군 1)의 단일 투여 후 벤조산의 Cmax는 0.139시간에 71,378 ng/ml였고, LiBen (군 2)의 투여 후에는 0.19시간에 109,321 ng/ml였다. 둘 다의 군에서 벤조산은 신속하게 약 10분에 혈장 중 최고점에 이르렀다 (도 15). AUCInf (시간 0에서 무한대까지의 혈장 농도-시간 곡선하 면적) 값의 경우, 군 1에서는 41,577시간*ng/ml로 계산되었고, 군 2에서는 62,874시간*ng/ml였다. 또한, 벤조산은 군 1 래트 (NaBen+Li2CO3)에서 1.45시간, 및 군 2 래트 (LiBen)에서 2.52시간의 반감기로 혈장으로부터 신속하게 제거되는 것으로 관찰되었다. 군 1 및 2에서 둘 다의 혈장 농도는 12시간의 시점에 대략 0까지 제거되었다. 결과적으로, LiBen에서 벤조산의 Cmax, AUC 및 T1/2 값이 NaBen+Li2CO3으로부터의 값보다 훨씬 더 높다는 것은 예상외의 발견이었고, 이는 LiBen 처리가 보다 많은 벤조산을 혈장으로 방출하여 신체의 보다 우수한 노출을 생성함에 있어서 보다 우수한 생체이용률을 갖는다는 것을 의미한다.
표 1. 벤조산 약동학의 파라미터
Figure 112019003099836-pct00004
리튬의 혈장 동역학
혈장 리튬 농도를 ICP-MS에 의해 검출하였다. 도 16 및 하기 표 2에 제시된 바와 같이, 군 2의 리튬 (LiBen)의 Cmax는 군 1 (NaBen 및 Li2CO3)보다 유의하게 더 높았고, 더욱이, AUC도 또한 NaBen+Li2CO3보다 LiBen에서 더 높았다. 전체적으로, Liben은 NaBen+Li2CO3의 조합보다 더 우수한 약동학적 프로파일을 가졌다.
표 2. 리튬 약동학의 파라미터
Figure 112019003099836-pct00005
실시예 9: 벤조산리튬은 1차 피질 뉴런을 아밀로이드-베타 손상으로부터 보호한다
Aβ는 알츠하이머병 (AD) 환자의 뇌에서 관찰되는 노인성 플라크의 주요 신경독성 성분이다. 합성 Aβ25-35는 또한 미토콘드리아 기능장애를 유발하는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 본 실시예에서, 벤조산리튬을 사용하여 1차 피질 배양물에서 Aβ25-35에 대한 잠재적 세포보호 작용을 연구하였다. 또한, 동일한 조건에 대한 벤조산나트륨 및 염화리튬의 효과를 또한 검사하여, 알츠하이머병에 대한 벤조산리튬의 뛰어난 잠재적 효능을 밝혀내었다.
물질 및 방법
1차 피질 배양물 및 약물 적용
1차 피질 배양물을 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다. Aβ25-35 (Cat. 번호 A4559, 시그마(Sigma))를 오토클레이브된 ddH2O 중에 용해시켜 2 mM의 원액을 제조하고, 분취물로 분배하고, 즉시 사용 시까지 -80℃에서 저장하였다. 실험 1일 전, Aβ의 분취물을 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하여 응집되게 하였다.
면역세포화학
세포를 4% PFA 중에 고정시키고, PBS 중에서 세척하고, 2% 소 혈청 알부민 (BSA) 및 PBS 중 0.03% 트리톤 X-100으로 차단한 다음, 미세관-연관 단백질-2 (MAP-2)에 대한 마우스 모노클로날 항체 (Cat. 번호 MAB378, 1:150, 케미콘 인터내셔널, 인크., 미국 캘리포니아주 테메큘라); GFAP에 대한 토끼 폴리클로날 항체 (Cat. 번호 Z0334, 1:600, 다코시토메이션 덴마크 에이/에스(DakoCytomation Denmark A/S), 덴마크)와 함께 인큐베이션하였다. 각각 MAP-2 및 GFAP의 1차 항체를 인식하도록 염소 항-마우스 IgG 알렉사 플루오르-접합된 2차 항체 (1:500; Cat 번호 A11003, 써모 사이언티픽); 항-토끼 IgG 알렉사 플루오르-접합된 2차 항체 (1:500; 써모 사이언티픽)를 적용하였다.
BrdU에 의한 세포 표지 및 면역세포화학
제18일 배아 (E18) 태아 스프라그-돌리 (SD) 래트 뇌로부터 1차 피질 배양물을 제조하였다. 세포로부터 배양 배지를 제거하고, BrdU 표지화 용액으로 대체하고, 2일 동안의 Aβ25-35 후 처리와 정렬하여 4일 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 세포를 4% PFA 중에 고정시키고, PBS 중에서 세척하고, 2% 소 혈청 알부민 (BSA) 및 PBS 중 0.03% 트리톤 X-100으로 차단하고, 2N HCl 및 포스페이트/시트르산 완충제 (pH 7.4)로 산-세척하였다. 다음으로, 항-BrdU 1차 항체 (1:250, 써모 사이언티픽) 또는 항-NeuN 1차 항체 (1:300, 압캠(Abcam))를 첨가하였다. 각각 BrdU 및 NeuN의 1차 항체를 인식하도록 염소 항-래트 IgG 알렉사 플루오르-접합된 2차 항체 (1:200; 써모 사이언티픽); 항-마우스 IgG 알렉사 플루오르-접합된 2차 항체 (1:500; 써모 사이언티픽)를 적용하였다.
형광 현미경검사
상응하는 형광 신호를 검출하기 위해 필터 세트가 장착된 디지털 영상화 형광 현미경 (올림푸스 BX61(Olympus BX61); 일본) 하에 커버슬립을 관찰하였다.
데이터 분석
다수의 군을 먼저 일원 분산 분석 (ANOVA)에 의해 분석한 다음, 사후 스튜던트-뉴만-쿨스 검정에 의해 분석하였다. 0.05 미만의 P-값을 유의한 것으로 간주하였다.
결과
피질 세포에 대한 벤조산리튬 처리는 Aβ 세포독성에 대한 신경보호 효과를 밝혀내었다.
1차 피질 뉴런을 10 μM Aβ 25-35에 2일 동안 노출시킨 다음, 이어서 벤조산리튬 (1mM), 벤조산나트륨 (1mM) 또는 염화리튬 (1mM)으로 4일 동안 처리하였다. 세포 생존 시험의 결과를 도 17에 제시하며, 이는 Aβ 25-35의 노출이 다량의 세포 사멸을 유발하지만 (p < 0.0001); 모든 약물은 피질 세포 생존의 개선을 보여준다는 것을 나타낸다. 특히, 염화리튬 및 벤조산리튬은 비 약물 처리와 비교하여 통계적인 개선을 보여주었고, 더욱이, 벤조산리튬은 다른 2종의 약물보다 훨씬 더 Aβ 25-35 독성으로부터 세포 사멸을 유의하게 감소시켰다 (p < 0.0001).
벤조산리튬의 신경보호 효과에 따라, 아밀로이드-베타 독성에 대해 피질 세포를 보호하는 메카니즘을 다음과 같이 검사하였다.
벤조산리튬의 신경보호 효과는 NMDA 수용체에 의하지 않는다
첫째로, N-메틸-D-아스파르테이트 수용체 (또한 NMDA 수용체로도 공지됨) 경로를 벤조산리튬, 벤조산나트륨 및 염화리튬에 대해 연구하였다. NMDA 수용체는 높은 칼슘 투과성을 매개하는 뉴런 세포의 특이적 이온성 글루타메이트 수용체이다. 과도한 칼슘 유입에 의해 유발된 흥분독성은 알츠하이머병을 포함한 많은 신경변성 질환과 연관된 중심 뉴런 사멸의 주요 메카니즘인 것으로 간주된다. 더욱이, 최근 연구는 NMDA 수용체 매개 글루타메이트 신경독성이 Aβ-유도된 세포 사멸을 촉발할 수 있다는 것을 나타낸다.
디조실핀 (또한 MK-801로도 공지됨)은 NMDA 수용체의 메카니즘을 연구하는데 널리 사용되고 있는 NMDA 수용체의 무경쟁적 길항제이다. 이러한 연구에서, MK801의 적용은 약물의 신경보호 효과가 NMDA 수용체에 의해 매개되는지 여부를 밝혀낼 수 있다. 도 18, 패널 a에 제시된 바와 같이, 벤조산리튬 (0.5mM) 및 벤조산나트륨 (1mM)을 포함한 약물의 후처리는 Aβ25-35 노출된 피질 세포에서 세포 생존을 상승시킬 수 있었던 반면에, 벤조산나트륨의 이러한 보호 효과는 MK801 (10μM)에 의해 차단되었다 (도 18, 패널 b). 벤조산리튬에서는 MK801 처리의 존재 또는 부재 하에 어떠한 명백한 차이도 존재하지 않았고, 이는 벤조산리튬의 신경보호 효과가 NMDA 수용체 경로를 통해 매개되지 않는다는 것을 나타낸다.
메카니즘 연구의 제2 파트는 신경발생에 초점을 맞추었다. 성인 해마에서 신경발생의 장애는 알츠하이머병 발병기전의 중요한 증거였다. 브로모데옥시우리딘 (5-브로모-2'-데옥시우리딘, 또한 BrdU로도 공지됨)은 티미딘의 합성 유사체이고, 이는 DNA 합성 동안 티미딘을 대체할 수 있으므로; 따라서 이는 세포 발생에 대한 마커로서 통상적으로 사용된다. 이러한 연구에서, Aβ25-35 노출된 1차 피질 세포를 0.5 또는 1mM의 벤조산리튬, 벤조산나트륨 또는 염화리튬으로 4일 동안 사후 조건화하였다. NeuN (뉴런 세포 마커) 및 BrdU의 공동-국재화는 면역세포화학에 의하면 피질 배양물에서의 신경발생을 나타낸다.
도 19, 패널 a-c는 Aβ25-35 노출이 신경발생 효과를 감소시키지만, 모든 약물은 이러한 손상을 반전시킬 수 있다는 것을 나타내었다. 벤조산리튬 (0.5mM)이 탁월한 신경발생 성능을 갖고 (p<0.0001), 이는 다른 2종의 약물보다 극도로 더 크다는 것은 분명하였다.
GFAP 발현은 Aβ25-35 노출 후 벤조산리튬-처리된 피질 뉴런에서 감소되었다.
신경교세포 원섬유성 산성 단백질 (GFAP)은 CNS의 세포에 의해 발현되는 중간 필라멘트 단백질이고, 이는 또한 성상세포 성숙 마커로서 인식된다. 신경교증을 나타내는 GFAP의 상향조절은 CNS 병변 후에 통상적으로 관찰되고; 따라서, GFAP의 발현은 신경계 질환의 상태를 이해하는데 유용할 수 있다. 도 20, 패널 a-b에서, 피질 배양물의 Aβ25-35 노출은 GFAP 양성 세포의 수를 증가시킨 반면에 (p<0.0001), 벤조산리튬 (0.5mM) 및 염화리튬 (1mM)의 후처리는 이러한 효과를 유의하게 감소시켰다. 그러나, 벤조산나트륨 (1mM)은 Aβ25-35 노출 하의 GFAP 발현에 영향을 미치지 않았다. 동시에, LiBen은 LiCl보다 우수한 효과를 가졌다.
전체적으로, 이들 연구로부터의 결과는 벤조산리튬의 Aβ25-35에 대한 치료 잠재력을 시사하며, 이는 신경발생의 상향조절 및 GFAP 양성 세포의 감소를 통해 매개되었지만, NMDA 수용체 경로에 의해 매개되지는 않았다. 이들 효과는 알츠하이머병을 치료하기 위한 벤조산리튬의 효능을 밝혀내었다.
실시예 10: 벤조산리튬은 헌팅톤병 (HD)의 생존율을 개선시킨다
헌팅톤병 (HD)은 신장된 폴리글루타민 반복부 (폴리Q-HTT)를 코딩하는 헌팅틴 유전자 (HTT)의 엑손 1에서 불안정한 CAG 반복부의 확장에 의해 유발된다 (Cell. 1993 Mar 26;72(6):971-83). 인간 돌연변이체 HTT의 엑손 1을 코딩하는 트랜스진을 발현하는 B6CBA-Tg(HD 엑손1)62Gpb/3J 마우스 (또한 B6CBA-R6/2 마우스로도 공지됨)는 인간 HD와 유사한 진행성이고 치명적인 신경계 질환이 발생하며, 이는 HD의 신경변성을 조사하기 위해 널리 사용된다.
물질 및 방법
동물 및 수용 조건
본 개시내용의 실시예에 사용된 동물은 온도 제어 (24-25℃) 및 12:12 낮-밤 주기의 동물 룸에 수용하였다. 표준 실험실 사료 및 수돗물은 자유롭게 이용가능하였다. 실험 절차는 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인받았고, 국가 동물 복지 법규를 준수하여 수행하였다. 트랜스제닉 마우스 B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/3J는 잭슨 래보러토리 (미국)에서 구입하였다.
암컷 트랜스제닉 및 둘 다의 성별의 야생형 한배새끼를 무작위로 하기 군으로 나누었다: 비히클 (야생형, 염수로 처리됨), 비히클-HD (HD엑손1 트랜스제닉 마우스, 염수로 처리됨), 약물-HD (HD엑손1 트랜스제닉 마우스, 벤조산리튬으로 처리됨).
약물 투여
생후 11주에 약물 요법을 개시하고, 연구 말미까지 이를 계속하였다. 벤조산리튬을 256 mg/kg 체중/일의 용량으로 복강내로 주사하였다. 비히클 군의 마우스에는 동일한 부피의 염수의 주사를 제공하였다.
생존
각각의 마우스에 대해 사망일 및 원인을 기록하였다. 동물을 근접 모니터링하고, 중증 이환에 대한 기준에 따라 마우스를 옆으로 두었을 때 30초 후에 스스로 일어나지 못하는 능력으로 정의되는 빈사상태인 경우, 이를 안락사시켰다. 빈사상태 마우스를 "사망"으로 기록하고, 이산화탄소를 사용하여 안락사시켰다.
결과
벤조산리튬 처리된 HD엑손1 트랜스제닉 마우스의 생존율
각각의 마우스에 대해 사망일 및 원인을 기록하였다. 생존 데이터를 분석하여 약물의 임의의 효과를 조사하였다. 도 21에 제시된 바와 같이, 벤조산리튬으로 처리된 HD엑손1 트랜스제닉 마우스의 시간의 경과에 따른 생존 마우스의 비율은 야생형 및 비히클로 처리된 HD엑손1 트랜스제닉 마우스와 비교하여 개선되었다.
등가물 및 범주
청구범위에서, 단수 용어는 달리 나타내지 않거나 또는 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 군의 1개 이상의 구성원들 사이에 "또는"을 포함하는 청구범위 또는 설명은 달리 나타내지 않거나 또는 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, 군 구성원 중 하나, 하나 초과, 또는 모두가 주어진 생성물 또는 공정에 존재하거나, 그에 사용되거나, 또는 그와 달리 관련되어 있는 경우에 충족된 것으로 간주된다. 본 발명은 군의 정확하게 하나의 구성원이 주어진 생성물 또는 공정에 존재하거나, 그에 사용되거나, 또는 그와 달리 관련되어 있는 실시양태를 포함한다. 본 발명은 군 구성원 중 하나 초과, 또는 모두가 주어진 생성물 또는 공정에 존재하거나, 그에 사용되거나, 또는 그와 달리 관련되어 있는 실시양태를 포함한다.
추가로, 본 발명은 열거된 청구항 중 1개 이상으로부터의 1개 이상의 제한, 요소, 항목 및 서술적 용어가 또 다른 청구항에 도입되는 모든 변형, 조합 및 순열을 포괄한다. 예를 들어, 또 다른 청구항에 대해 종속항인 임의의 청구항은 동일 기반 청구항에 대해 종속항인 임의의 다른 청구항에서 발견되는 1개 이상의 제한을 포함하도록 변형될 수 있다. 요소가, 예를 들어 마쿠쉬 군 포맷의 목록으로서 제시되는 경우에, 요소의 각각의 하위군이 또한 개시되고, 임의의 요소(들)는 군으로부터 제거될 수 있다. 일반적으로, 본 발명 또는 본 발명의 측면이 특정한 요소 및/또는 특색을 포함하는 것으로 지칭되는 경우에, 본 발명 또는 본 발명의 측면의 특정 실시양태는 이러한 요소 및/또는 특색으로 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어지는 것으로 이해되어야 한다. 단순성의 목적을 위해, 이들 실시양태는 본원에 구체적으로 제시되지 않았다. 또한, 용어 "포함하는" 및 "함유하는"은 개방적이고 추가의 요소 또는 단계의 포함을 허용하는 것으로 의도됨을 주목한다. 범위가 주어진 경우, 종점들이 포함된다. 추가로, 달리 나타내지 않는 한 또는 달리 문맥 및 관련 기술분야의 통상의 기술자의 이해로부터 명백하지 않는 한, 범위로서 표현된 값은 본 발명의 상이한 실시양태에서 언급된 범위 내의 임의의 구체적 값 또는 하위-범위를, 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 범위의 하한치 단위의 1/10까지 가정할 수 있다.
본 출원은 다양한 허여 특허, 공개 특허 출원, 학술지 논문 및 다른 공개물을 참조하며, 이들 모두는 본원에 참조로 포함된다. 포함된 참고문헌 중 어느 것과 본 명세서 사이에 충돌이 존재하는 경우에, 본 명세서가 우선할 것이다. 추가로, 선행 기술 내에 속하는 본 발명의 임의의 특정한 실시양태는 청구항 중 어느 1개 이상으로부터 명시적으로 제외될 수 있다. 이러한 실시양태는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 것으로 여겨지기 때문에, 이들은 제외가 본원에 명시적으로 제시되지 않더라도 제외될 수 있다. 본 발명의 임의의 특정한 실시양태는 선행 기술의 존재와 관련이 있든 없든, 임의의 이유로, 임의의 청구항으로부터 제외될 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 단지 상용 실험을 사용하여, 본원에 기재된 구체적 실시양태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 본원에 기재된 본 실시양태의 범주는 상기 설명에 제한되는 것으로 의도되지 않으며, 오히려 첨부된 청구범위에 제시된 바와 같다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이 설명에 대한 다양한 변화 및 변형이 하기 청구범위에 정의된 바와 같은 본 발명의 취지 또는 범주로부터 벗어나지 않고 이루어질 수 있음을 인지할 것이다.

Claims (27)

  1. 유효량의 벤조산리튬을 포함하는, 중추 신경계 (CNS) 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 CNS 질환을 치료하기 위한 제약 조성물이며,
    여기서 벤조산리튬의 유효량은 300 mg 내지 1,000 mg의 범위이고, CNS 질환은 파킨슨병, 헌팅톤병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 전두측두엽 치매 (FTD) 또는 알츠하이머병인 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 대상체가 중추 신경계 질환을 갖거나 이를 갖는 것으로 의심되는 인간 환자인 제약 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 대상체에게 벤조산리튬을 5 내지 150 mg/kg으로 투여하는 것인 제약 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 벤조산리튬을 전신 경로에 의해 투여하는 것인 제약 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 전신 경로가 경구 투여 또는 비경구 투여인 제약 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 대상체에게 벤조산리튬을 1일 4회 내지 1개월 1회의 빈도로 투여하는 것인 제약 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 대상체가 또 다른 CNS 질환 치료 중인 것인 제약 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 벤조산리튬이 CNS 질환을 치료하기 위한 조성물 중 유일한 활성제인 제약 조성물.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 벤조산리튬이 의료용 식품 또는 건강 식품으로 제제화되는 것인 제약 조성물.
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