KR102497827B1 - 쉰다리 유래 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49 신균주 및 이를 이용한 기능성 포스트바이오틱스의 제조방법 - Google Patents
쉰다리 유래 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49 신균주 및 이를 이용한 기능성 포스트바이오틱스의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 제주도의 대표적인 전통식품인 '쉰다리'로부터 내산성 및 내담즙성이 우수한 신균주 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 분리하고, 상기 분리된 균주를 최적 조건에서 발효시켜 제조된 고수율, 고기능성의 포스트바이오틱스 및 그 제조방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 쉰다리 유래 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49 신균주 및 이를 이용한 기능성 포스트바이오틱스의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 제주 전통 발효 음료 '쉰다리' 유래의 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 신균주를 발굴하고, 이를 발효 균주로 이용하여 제조한 기능성 포스트바이오틱스 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
최근 건강에 대한 관심이 증가하면서 다양한 건강기능식품이 출시되고 있으며, 그 중 특히 장건강의 중요성이 대두되면서 유산균이 주목받고 있다. 유산균은 글루코오스 등의 당류를 분해하여 젖산(latic acid)을 생성하는 세균으로, 우리가 섭취하는 식품과 장내에서 유해한 물질인 인돌, 페놀, 암모니아, 아민의 생성을 억제하며, 인체의 항상성 유지를 돕는다. 유산균은 김치, 치즈, 요구르트, 발효음료 등의 식품을 발효하며, 일부는 우리 몸 안의 소화기관에 존재한다.
한편, 장에 도달하여 오랫동안 생존 가능하여 장 건강에 도움을 주는 유산균으로, '살아 있는' 세균을 프로바이오틱스(probiotics)라고 한다. 1세대인 프로바이오틱스에서 2세대인 프리바이오틱스(프로바이오틱스의 영양분), 3세대인 신바이오틱스(프로바이오틱스+프리바이오틱스)를 넘어 최근에는 4세대인 포스트바이오틱스(프로바이오틱스의 대사산물)가 주목받고 있는 상황이다.
포스트바이오틱스는 생균인 프로바이오틱스, 그의 먹이인 프리바이오틱스와 함께 이들의 대사산물인 사균체까지 포함한다. 생균은 열과 산에 약해 장에 도달하기 전에 거의 다 사멸되거나, 일부 장에 도달한 세균도 오랫동안 정착하지 못하고 배출되는 단점이 있는데, 포스트바이오틱스는 위산과 담즙에 영향을 받지 않고 장까지 이동하여 장내 유해세균을 효과적으로 억제시키며, 장을 보호하는 역할을 할 수 있다. 즉, 포스트바이오틱스는 사균화 방식에 따라 프로바이오틱스가 가지는 건강 이익을 더욱 강화시킬 수 있다.
본 발명은 제주도의 대표적인 전통식품인 '쉰다리'로부터 내산성 및 내담즙성이 우수한 신균주를 분리하고, 상기 분리된 균주를 콩 배아 배지에서 발효시켜 고수율, 고기능성의 포스트바이오틱스를 생산하고자 한다.
본 발명은 쉰다리로부터 분리된 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 제공한다.
한편, 본 발명의 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)에 있어서, 상기 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)는, 내산성 및 내담즙성이 있는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
본 발명은 콩 배아 추출물 1~5%, 글루코스(glucose) 0.17~2%, 인산나트륨(NaH2PO4) 0.2% 를 포함하는 배지에 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 접종하여 배양하는 것을 특징으로 하는 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)의 포스트바이오틱스 제조방법을 제공한다.
한편, 본 발명의 포스트바이오틱스 제조방법에 있어서, 상기 콩 배아 추출물은, 대두에서 배아를 분리하는 단계 (A); 상기 단계 (A)에서 분리한 배아 중량의 5~15배의 물을 가하고, 마쇄 및 여과하여 불용성 성분을 분리하는 단계 (B); 상기 단계 (B)에서 불용성 성분을 분리한 후 회수된 콩배아유(soy germ milk; SGM)를 건조하는 단계 (C);를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 포스트바이오틱스 제조방법에 있어서, 상기 배양 후, 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 사멸시키는 것을 특징으로 하는 포스트바이오틱스 제조방법을 제공한다.
본 발명은 제주 전통 발효 음료인 쉰다리 유래 신균주 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 이용하여 고수율, 고기능성의 포스트바이오틱스를 제조할 수 있다. 또한, 본 발명은 반응표면분석법을 이용함에 따라 포스트바이오틱스 생산 고도화를 위한 최적의 배지 조성 및 배양 조건을 확립할 수 있었다.
도 1은 콩 배아 추출물의 균주에 따른 농도별 생균수 및 pH 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주와 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 균주의 생균수 및 pH 변화를 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주와 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 균주의 시간별 이소플라본 함량을 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 콩배아유(soy germ milk; SGM)를 동결건조하여 분말 형태로 제조한 콩 배아 추출물과 본 발명의 최종 포스트바이오틱스 시료 사진을 나타낸 것이다.
도 5는 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 생균수 반응표면곡선을 나타낸 것이다.
도 6은 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 이소플라본 반응표면곡선을 나타낸 것이다.
도 7은 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 유기산 함량 반응표면곡선을 나타낸 것이다.
도 2는 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주와 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 균주의 생균수 및 pH 변화를 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주와 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 균주의 시간별 이소플라본 함량을 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 콩배아유(soy germ milk; SGM)를 동결건조하여 분말 형태로 제조한 콩 배아 추출물과 본 발명의 최종 포스트바이오틱스 시료 사진을 나타낸 것이다.
도 5는 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 생균수 반응표면곡선을 나타낸 것이다.
도 6은 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 이소플라본 반응표면곡선을 나타낸 것이다.
도 7은 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP) 유기산 함량 반응표면곡선을 나타낸 것이다.
본 발명은 쉰다리로부터 분리된 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 제공한다. 한편, 상기 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)는 한국생명공학연구원 미생물자원센터 (Korean Collection for Type Cultures, KCTC)에 2022년 05월 18일자로 기탁하여 수탁번호 KCTC14977BP를 부여받았다.
'쉰다리'는 제주도의 대표적인 전통식품으로, 보리로 밥을 지어 쉰밥을 만들고 누룩을 넣어 발효시킨 후 끓여낸 식물성 발효음료이다. 짧은 발효기간으로 인해 도수가 1% 내외로 낮고 신맛과 단맛이 강하여 주로 여름철 음료로 이용된다. 쉰다리는 보리, 누룩, 물을 원료로 하여 막걸리와 유사하지만, 발효시간이 짧고 알코올 함량이 낮아 막걸리보다는 식물성 요구르트와 비슷하다고 여겨진다.
한편, 본 발명은 콩 배아 추출물 1~5 중량%, 글루코스(glucose) 0.17~2 중량% 및 인산나트륨(NaH2PO4) 0.2 중량% 를 포함하는 배지에 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 접종하여 배양하는 것을 특징으로 하는 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)의 포스트바이오틱스 제조방법을 제공한다.
한편, 바람직하게는 상기 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 콩 배아 추출물 3 중량%, 글루코스(glucose) 0.17 중량% 및 인산나트륨(NaH2PO4) 0.2 중량% 를 포함하는 배지에 접종하여 배양하는 것이 좋다. 더욱 바람직하게는, 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 접종하고 27.1~37.1℃에서 16~24 시간 동안 발효시키는 것이 좋다.
본 발명에서 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 발효균주로 이용하여 발효시킬 경우 배지 내 적절한 생균수 및 pH가 유지되면서, 이소플라본 비배당체 함량이 증진되어 고수율, 고기능성의 포스트바이오틱스를 제조할 수 있었다. 또한, 본 발명의 실험에 의하면, 상기 콩 배아 추출물은 농도 3% 이상에서는 생균수 및 pH에 유의적인 차이가 발생하지 않아, 콩 배아 추출물의 농도가 3%가 되도록 배지를 제조하는 것이 효율적이었다.
한편, 상기 콩 배아 추출물은, 대두에서 배아를 분리하는 단계 (A); 상기 단계 (A)에서 분리한 배아 중량의 5~15배의 물을 가하고, 마쇄 및 여과하여 불용성 성분을 분리하는 단계 (B); 상기 단계 (B)에서 불용성 성분을 분리한 후 회수된 콩배아유(soy germ milk; SGM)를 건조하는 단계 (C);를 포함하여 제조되는 것이 바람직하다.
한편, 상기 포스트바이오틱스 제조방법에 있어서, 상기 배양 후 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 사멸시키는 것이 바람직하다. 이때, 바람직하게는 120~122℃에서 19~21분 동안 사균화하는 것이 좋으며, 더욱 바람직하게는 121℃에서 20분 동안 사균화한다. 한편, 사균화된 배양액은 건조하여 최종 포스트바이오틱스 시료를 제조한다. 이때, 건조는 통상의 방법을 이용하여도 무방하나, 바람직하게는 동결건조 방법으로 건조하는 것이 좋다.
또한, 본 발명의 제조방법에 따라 제조된 포스트바이오틱스는 이소플라본 비배당체 비율이 높으면서 젖산(lactic acid), 숙신산(succinic acid), 프로피온산(propionic acid) 등의 유기산 함량이 뛰어난 고수율, 고기능성의 포스트바이오틱스로 제조될 수 있었다.
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예 및 실험예를 통하여 보다 상세하게 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[실시예 1 : 쉰다리로부터 유산균의 분리 및 동정]
제주 전통 발효 음료 '쉰다리'를 MRS agar+L-cysteine-HCl 0.5mg/ml+cycloheximide 10 ug/ml+bromophenol blue 0.02 mg/ml 배지에서 37℃, 24 시간 동안 배양하였다. 아래 표 1은 동정을 위해 사용한 유전자를 나타낸 것이다.
| P. acidilactici | 23S rRNA gene | F primer | 5'-GTT TCG GAG GAG GCG CAA-3' |
| R primer | 5'-CTG TCT CGC AGT CAA GCT C-3' | ||
| 16S rRNA gene | F primer | 5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC A-3' | |
| R primer | 5'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3' | ||
| L. plantarum | unique gene | F primer | 5'-CTG TCT CGC AGT CAA GCT C-3' |
| R primer | 5'-TCT CAA CGG TTG CTG TAT CG-3' | ||
| 16S rRNA gene | F primer | 5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC A-3' | |
| R primer | 5'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3' |
* unique gene name : LPXTG-motif cell wall anchor domain protein
상기 표 1에 기재된 프라이머를 이용하여, 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) 및 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici)로 각각 동정된 총 26개 (각 12균주, 14균주)를 분리하였다.
[실험예 1 : 분리 균주의 내산성 및 내담즙성 확인]
본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 분리 및 동정한 26개의 균주의 내산성 및 내담즙성을 확인하는 실험을 진행하였다.
(1) 내산성
내산성 확인을 위하여, 실시예 1의 26개 분리균주를 MRS broth에 접종하고, 37 ℃에서 OD600 1.0까지 배양하였다. 배양액을 3 ml centrifuge(4,000 g for 10 min)로 원심분리하고, 세포 펠렛(cell pellet)을 MRS broth(control) 3 ml, MRS broth(1,000 unit/ml pepsin + pH2 or 3) 3 ml에 재현탁(resuspend)한 후 37 ℃에서 3 시간 배양하였다. 배양된 샘플은 연속 희석(serial dilution)하고, MRS agar에 접종하여 37 ℃에서 24 시간 배양한 후, 생성된 콜로니를 계수 및 균수 비교하였다.
(2) 내담즙성
내담즙성 확인을 위하여, 실시예 1의 26개 분리균주를 MRS broth에 접종하고, 37 ℃에서 OD600 1.0까지 배양하였다. 배양액을 3 ml centrifuge(4,000 g for 10 min)로 원심분리하고, 세포 펠렛(cell pellet)을 MRS broth(control) 3 ml, MRS broth(0.3% oxgall) 3 ml에 재현탁(resuspend)한 후 37 ℃에서 3 시간 배양하였다. 배양된 샘플은 연속 희석(serial dilution)하고, MRS agar에 접종하여 37 ℃에서 24 시간 배양한 후, 생성된 콜로니를 계수 및 균수 비교하였다.
(3) 실험결과
아래 표 2는 26개 분리균주의 산 및 담즙 내성을 나타낸 표로, 표 2에 나타난 바와 같이, 분리한 균주 중 15개의 균주가 대조균주(LGG 유산균, Lactobacillus rhamnosus GG) 대비 높은 내산성을 보였으며, 분리한 26개 균주 모두 생존율 97% 이상의 높은 내담즙성을 나타내었다.
| Strains No. | Species | control | pH2.0 | SR(%) | pH3.0 | SR(%) | 0.3% oxgall | SR(%) |
| DCF_1 | Pediococcus acidilactici | 9.57±0.08 | 4.63±0.04 | 48% | 8.40±0.41 | 88% | 9.38±0.01 | 98% |
| DCF_3 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.53±0.07 | 3.68±0.28 | 39% | 8.76±0.10 | 92% | 9.52±0.07 | 100% |
| DCF_7 | Pediococcus acidilactici | 9.53±0.10 | 4.36±0.16 | 46% | 8.57±0.06 | 90% | 9.35±0.10 | 98% |
| DCF_8 | Pediococcus acidilactici | 9.54±0.12 | 5.10±0.25 | 53% | 8.28±0.33 | 87% | 9.40±0.02 | 98% |
| DCF_9 | Pediococcus acidilactici | 9.61±0.07 | 3.42±0.39 | 36% | 7.36±0.47 | 77% | 9.34±0.08 | 97% |
| DCF_10 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.53±0.12 | 3.41±0.37 | 36% | 8.45±0.12 | 89% | 9.33±0.18 | 98% |
| DCF_11 | Pediococcus acidilactici | 9.63±0.01 | 4.21±0.10 | 44% | 7.57±0.31 | 79% | 9.46±0.09 | 98% |
| DCF_12 | Pediococcus acidilactici | 9.63±0.10 | 3.63±0.14 | 38% | 8.37±0.30 | 87% | 9.45±0.10 | 98% |
| DCF_13 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.50±0.07 | 2.54±0.09 | 27% | 8.76±0.14 | 92% | 9.27±0.11 | 98% |
| DCF_16 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.52±0.05 | 4.20±0.49 | 44% | 8.74±0.08 | 92% | 9.46±0.03 | 99% |
| DCF_17 | Pediococcus acidilactici | 9.67±0.09 | 4.26±0.06 | 44% | 8.36±0.26 | 86% | 9.38±0.01 | 97% |
| DCF_18 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.44±0.08 | 3.47±0.25 | 37% | 8.56±0.31 | 91% | 9.35±0.13 | 99% |
| DCF_20 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.55±0.04 | 4.12±0.46 | 43% | 9.00±0.08 | 94% | 9.48±0.08 | 99% |
| DCF_21 | Pediococcus acidilactici | 9.56±0.02 | 4.78±0.38 | 50% | 8.76±0.25 | 92% | 9.29±0.13 | 97% |
| DCF_22 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.62±0.09 | 3.68±0.38 | 38% | 8.55±0.24 | 89% | 9.45±0.12 | 98% |
| DCF_24 | Pediococcus acidilactici | 9.56±0.05 | 3.62±0.11 | 38% | 8.56±0.26 | 90% | 9.31±0.06 | 97% |
| DCF_34 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.46±0.18 | 4.53±0.29 | 48% | 8.89±0.19 | 94% | 9.50±0.01 | 100% |
| DCF_35 | Pediococcus acidilactici | 9.53±0.07 | 5.00±0.39 | 52% | 8.62±0.02 | 91% | 9.39±0.06 | 98% |
| DCF_36 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.56±0.05 | 3.60±0.38 | 38% | 8.70±0.08 | 91% | 9.43±0.10 | 99% |
| DCF_37 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.49±0.10 | 2.39±0.12 | 25% | 8.77±0.28 | 92% | 9.36±0.15 | 99% |
| DCF_41 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.54±0.11 | 2.11±0.15 | 22% | 8.61±0.21 | 90% | 9.51±0.07 | 100% |
| DCF_42 | Pediococcus acidilactici | 9.61±0.07 | 4.30±0.40 | 45% | 8.30±0.17 | 86% | 9.46±0.01 | 98% |
| DCF_43 | Pediococcus acidilactici | 9.63±0.06 | 4.74±0.01 | 49% | 8.44±0.46 | 88% | 9.32±0.12 | 97% |
| DCF_44 | Pediococcus acidilactici | 9.52±0.18 | 5.08±0.27 | 53% | 8.57±0.11 | 90% | 9.35±0.11 | 98% |
| DCF_49 | Lactiplantibacillus plantarum | 9.58±0.05 | 4.72±0.42 | 49% | 8.79±0.08 | 92% | 9.34±0.05 | 98% |
| DCF_50 | Pediococcus acidilactici | 9.54±0.11 | 4.28±0.42 | 45% | 7.79±0.49 | 82% | 9.23±0.17 | 97% |
| ATCC53103 | Lacticaseibacillus rhamnosus | 9.34±0.01 | 2.92±0.02 | 31% | 8.35±0.38 | 89% | 9.12±0.03 | 98% |
| DSM 20079 | lactobacillus acidophilus | 9.49±0.20 | 4.06±0.03 | 43% | 8.65±0.11 | 91% | 9.46±0.17 | 100% |
| * SR (survival ratio, %) = final(logCFU/ml)/control(logCFU/ml)ⅹ100 (unit : logCFU/ml) | ||||||||
본 발명에서는 분리 균주 중 내산성 및 내담즙성이 특히 뛰어난 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) 1균주(DCF8), 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) 1균주(DCF49)를 후보균주로 선정하여 하기 실험을 진행하였다.
한편, DCF8는 표 1에 기재된 프라이머를 사용하여 16S rRNA를 클로닝하였고, 그 서열을 서열번호 1에 기재하였다. 또한, DCF49는 표 1에 기재된 프라이머를 사용하여 16S rRNA를 클로닝하였고, 그 서열을 서열번호 2에 기재하였다.
한편, 상기 16S rRNA gene의 시퀀싱 확인 결과, DCF8 균주는 페디오코커스(Pediococcus) 속 내 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici), 페디오코커스 펜토사세우스(P. pentosaceus)와 상동성이 높아 근연종 사이의 구분이 어려웠다. 또한, DCF49 균주는 락티플란티바실러스(Lactiplantibacillus) 속 내 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum), 락티플란티바실러스 펜토서스(L. pentosus), 락티플란티바실러스 아르젠토라텐시스(L. argentoratensis)와 상동성이 높아 근연종 사이의 구분이 어려웠다.
이에, 추가로 다른 유전자(gene)를 검토하여 동정을 명확히 하고자 하였다. 추가 검토된 유전자 및 그 검출을 위한 프라이머(primer)는 페디오코커스(Pediococcus) 속에 대해서는 23S rRNA gene (F : 5'-GTT TCG GAG GAG GCG CAA-3', R : 5'-CTG TCT CGC AGT CAA GCT C-3')이었다. 또한, 락티플란티바실러스(Lactiplantibacillus) 속에 대해서는 unique gene (unique gene name : LPXTG-motif cell wall anchor domain protein, F : 5'-GCT GGC AAT GCC ATC GTG CT-3', R : 5'-TCT CAA CGG TTG CTG TAT CG-3') 이었다.
이를 통해 종 수준 동정이 가능할 것으로 판단되었으며, 시퀀싱 결과 서열번호 3 및 4에 기재된 서열을 확인할 수 있었다. 이를 바탕으로 블라스트 서치를 해 본 결과, DCF8 균주는 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici)로 동정되었고, DCF49 균주는 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum)으로 동정되었다.
[실시예 2-1 내지 2-5 : 콩 배아 배지 제조]
본 실시예에서는 콩 배아 추출물의 농도를 각각 달리하여 포스트바이오틱스 발효용 배지를 제조하고자 하였다.
대두에서 배아를 분리하고 배아 중량의 13배 수준의 열수를 가하여 마쇄 및 여과하여 불용성 성분을 분리하였다. 회수된 콩배아유(soy germ milk; SGM)를 동결건조하여 분말 형태의 콩 배아 추출물을 제조하였다. 한편, 하기 표 3은 본 발명에 따른 콩배아유(SGM)의 영양성분을 나타낸 것이다.
| Nutrients | Contents |
| Crude fat (g/100g) | 13.08 ± 0.32 |
| Crude protein (g/100g) | 33.59 ± 0.47 |
| Moisture (g/100g) | 2.32 ± 0.02 |
| Ash (g/100g) | 4.99 ± 0.03 |
| Sucrose (g/100g) | 6.51 ± 0.03 |
| Raffinose (g/100g) | 0.59 ± 0.01 |
| Stachyose (g/100g) | 6.10 ± 0.02 |
| Sugar (Total) (g/100g) | 13.19 ± 0.19 |
| Na (mg/kg) | 155.99 ± 1.22 |
| Mg (mg/kg) | 9874.04 ± 18.76 |
| K (mg/kg) | 19313.41 ± 98.91 |
| Ca (mg/kg) | 82.58 ± 0.55 |
| Mn (mg/kg) | 21.63 ± 0.01 |
| Fe (mg/kg) | 69.17 ± 2.02 |
| Cu (mg/kg) | 17.82 ± 0.02 |
| Zn (mg/kg) | 61.72 ± 1.07 |
표 3에서 보듯이, 동결 건조한 콩 배아 열수추출물에는 미생물이 성장에 필요한 조지방, 조단백질 등의 영양성분과 다양한 당류(sucrose, raffinose, stachyose 등)가 13.19 g/100 g 함유되어 있으며, 4.994 g/100 g의 회분이 함유되어 있어 배지의 원료로서 활용이 가능한 점을 확인하였다. 또한, 상기 콩 배아 열수추출물에는 다양한 무기성분이 존재하였는데 Na, Mg, K, Ca, Mn, Fe, Cu, Zn 등이 함유되어 있어 포스트바이오틱스 소재 배양을 위한 배지로 활용 시 미량 영양소의 공급원으로도 활용이 가능한 점을 확인하였다.
이에, 본 실시예에서는 상기 제조한 콩 배아 추출물의 농도를 1~5 중량% (1%, 2%, 3%, 4%, 5%)로 달리하고, 글루코스(glucose) 2 중량% 및 인산나트륨(NaH2PO4) 0.2 중량%를 배합하여 실시예 2-1 내지 2-5의 콩 배아 배지를 제조하였다.
[실험예 2 : 콩 배아 추출물 농도에 따른 배지의 생균수 및 pH 변화 확인]
본 실험에서는 상기 실시예 2-1 내지 2-5에서 제조한 콩 배아 추출물 농도별 배지의 생균수 및 pH 변화 측정 실험을 진행하였다.
상기 실험예 1에서 선정한 후보균주(P. acidilactici (DCF8), L. plantarum (DCF49))를 30 시간까지 배양하면서 실시예 2-1 내지 2-5 배지의 생균수 및 pH 변화를 측정하였다. 도 1은 콩 배아 추출물의 균주에 따른 농도별 생균수 및 pH 측정 결과를 나타낸 것으로, 생균수 측정 결과, 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주는 8.67(1%, 실시예 2-1), 8.30(2%, 실시예 2-2), 8.94(3%, 실시예 2-3), 9.00(4%, 실시예 2-4), 9.05(5%, 실시예 2-5) log CFU/mL 로 측정되었으며, 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주는 8.48(1%, 실시예 2-1), 8.45(2%, 실시예 2-2), 8.64(3%, 실시예 2-3), 8.75(4%, 실시예 2-4), 8.75(5%, 실시예 2-5) log CFU/mL 로 측정되었다. 한편, pH 측정 결과, 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주는 3.59(1%, 실시예 2-1), 3.60(2%, 실시예 2-2), 3.64(3%, 실시예 2-3), 3.66(4%, 실시예 2-4), 3.71(5%, 실시예 2-5)로 나타났으며, 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주는 3.77(1%, 실시예 2-1), 3.88(2%, 실시예 2-2), 3.89(3%, 실시예 2-3), 3.98(4%, 실시예 2-4), 4.02(5%, 실시예 2-5) 로 나타났다. 즉, 도 1에서 보듯이, 콩 배아 추출물의 농도가 증가할수록 생균수가 증가하나, 3% 이상의 농도에서는 유의한 차이가 없는 것으로 나타나, 3% 농도로 제조한 실시예 2-3의 배지를 이용하는 것이 바람직한 점을 알 수 있었다. 또한, 발효 16시간 이후에는 정지상(stationary phase)에 도달하여 발효는 24시간까지 진행하는 것이 바람직함을 확인하였다.
[실험예 3 : 후보균주의 발효특성 확인]
(1) 배양시간별 생균수 및 pH 측정
상기 실험예 1에서 선정한 후보균주(페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8, 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum DCF49)) 및 대조균주(L. brevis KACC11433)에 대하여, 상기 실험예 2에서 확인한 최적 조건인 실시예 2-3 배지(3% 농도)에 24시간 동안 배양하면서 배양시간별 생균수 및 pH를 측정하였다.
도 2는 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주와 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주의 생균수 및 pH 변화를 관찰한 결과로, 24시간 배양 후 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주는 8.68 log CFU/mL, pH3.89로 확인되었으며, 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주는 8.84 log CFU/mL, pH3.50으로 확인되었다.
(2) 대사체(이소플라본) 평가
콩 배아 배지 내 후보균주 발효를 통한 배지의 성분 변화를 확인하고자 대사체 평가를 진행하였다.
도 3은 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주와 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주의 시간별 이소플라본 함량을 관찰한 결과로, 도 3에서 보듯이, 24시간 배양 전후의 이소플라본 비배당체 함량을 비교하였을 때, 페디오코커스 애시디락티시(P. acidilactici) DCF8 균주는 1.66 mg/100 g에서 1.64 mg/100 g으로 오히려 수치가 감소한 반면, 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주는 1.59 mg/100 g에서 2.69 mg/100 g으로 이소플라본 비배당체 함량이 대폭 증가한 점을 확인하였다. 즉, 후보균주 중 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주가 배아 배지 내 이소플라본을 비배당체로 효과적으로 전환시킴을 알 수 있었다.
이에, 하기에서는 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주를 포스트바이오틱스 발효용 균주로 선정하여 포스트바이오틱스를 제조하고자 하였다.
[실시예 3 : 포스트바이오틱스 제조]
본 실시예에서는 상기 실험예에서 생균수, 대사체 함량 등 종합적인 평가를 통해 최적 균주로 선정된 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주를 이용하여 포스트바이오틱스 시료를 제조하였다.
균주는 3 중량% 콩 배아 추출물을 함유한 배지에서 30℃, 24 시간 동안 배양하였으며, 사균체화는 121℃, 20 분의 조건 하에서 수행하였다. 한편, 사균화된 배양액은 동결건조하여 최종 포스트바이오틱스 시료를 완성하였다. 도 4는 콩배아유(soy germ milk; SGM)를 동결건조하여 분말 형태로 제조한 콩 배아 추출물과 본 발명의 최종 포스트바이오틱스 시료 사진을 나타낸 것이다.
한편, 하기 표 4는 사균화된 포스트바이오틱스 시료의 고형분 함량을 나타낸 것으로, 본 실시예에서 제조한 최종 포스트바이오틱스 시료에 생균이 존재하지 않고 모두 사균화 되었음을 확인하였다.
| Strains | 원심분리 유무 | 열처리 방법 |
배양 후 균수 (CFU/g) |
건조 전 질량(g) |
건조 후 질량(g) |
고형분 함량(%) |
| L. plantarum DCF49 | 전체 | 121℃ | 6.77 × 108 | 161.79 | 9.67 | 5.97 |
[실험예 4 : 포스트바이오틱스 내 이소플라본 및 유기산 분석]
본 실험에서는 상기 실시예 3에서 제조한 최종 포스트바이오틱스에 포함된 이소플라본 및 유기산을 HPLC를 이용하여 분석하였다.
(1) 이소플라본
아래 표 5는 본 발명의 포스트바이오틱스 내 이소플라본 함량을 나타낸 것으로, 이소플라본 분석 결과, 포스트바이오틱스 발효 시 비배당체(Daidzein, Genistein, Glycitein) 함량이 증가하는 점을 확인하였다(배당체(Daidzin, Genistin, Glycitin)). 표 5에서 확인할 수 있듯이, 콩 배아 배지 동결건조물의 비배당체 비율은 2.81%로 나타났으나, 본 발명의 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 균주를 이용한 포스트바이오틱스의 비배당체 비율은 8.30%로 확인되어 본 발명의 포스트바이오틱스는 콩 배아 배지 동결건조물에 비해 높은 비배당체 비율을 나타내는 점을 확인하였다.
| Strains | Isoflavones | Contents |
| 콩배아배지 동결건물 (비발효) |
Daidzin (mg/100g) | 844.18 ± 2.80 |
| Glycitin (mg/100g) | 415.86 ± 0.51 | |
| Genistin (mg/100g) | 176.94 ± 0.77 | |
| Daidzein (mg/100g) | 10.50 ± 0.04 | |
| Glycitein (mg/100g) | 12.82 ± 0.06 | |
| Genistein (mg/100g) | 2.41 ± 0.07 | |
| Total (mg/100g) | 1462.71 | |
| L. plantarum DCF49 | Daidzin (mg/100g) | 556.84 ± 0.01 |
| Glycitin (mg/100g) | 428.43 ± 0.45 | |
| Genistin (mg/100g) | 154.65 ± 0.01 | |
| Daidzein (mg/100g) | 15.59 ± 0.19 | |
| Glycitein (mg/100g) | 41.11 ± 0.32 | |
| Genistein (mg/100g) | 7.56 ± 0.11 | |
| Total (mg/100g) | 1204.17 |
(2) 유기산
아래 표 6은 본 발명의 포스트바이오틱스 내 유기산 함량을 나타낸 것으로, 유기산 분석 결과, 포스트바이오틱스 발효 시 동결건조한 콩 배아 배지에 비해 젖산(lactic acid), 숙신산(succinic acid), 프로피온산(propionic acid) 등의 유기산 함량이 증가한 점을 확인할 수 있었다.
| Strains | Organic acid production (mg/g) | |||||
| Lactate | Acetate | Citrate | Succinate | Propionate | Butyrate | |
| 콩배아배지 동결건물 (비발효) |
N.D. | 50.18 ± 0.17 | 3.41 ± 0.03 | 8.66 ± 0.02 | 0.76 ± 0.19 | N.D. |
| L.plantarum DCF49 | 67.61 ± 0.26 | 51.28 | 3.96 ± 0.22 | 16.89 ± 1.13 | 4.04 ± 0.01 | N.D. |
이와 같이, 본 실험예에서 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 이용하여 포스트바이오틱스 제조 시 고수율, 고기능성의 포스트바이오틱스 제조가 가능할 것으로 판단할 수 있었다.
[실험예 5 : 포스트바이오틱스의 반응표면분석]
본 실험에서는 포스트바이오틱스 생산 고도화를 위한 최적의 배지 조성 및 배양 조건을 확립하고자, 반응표면분석법(Response surface methodology)을 수행하였다.
글루코스(glucose) 및 배양온도를 독립변수로 설정하여, 중심값(Glucose 3%/ 배양온도 37℃)을 포함한 13개의 실험군에 대해 각각 3번의 반복실험을 수행하였으며, 생균수, 이소플라본 비배당체, 유기산 총량(단쇄지방산 및 젖산)을 종속변수로 설정하여 중심합성 설계(Central composite design)를 이용하여 반응표면분석을 수행하였다. 아래 표 7은 본 발명의 포스트바이오틱스 배양조건 중심합성 설계를 나타낸 표이고, 도 5 내지 도 7은 각각 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49 생균수, 이소플라본, 유기산 함량 반응표면곡선을 나타낸 것이다.
| Factors | Symbol(unit) | Level of coded variables | ||||
| -a | -1 | 0 | +1 | +a | ||
| Glucose | X1(%) | 0.17 | 1 | 3 | 5 | 5.8 |
| Temperature | X2(℃) | 27.1 | 30 | 37 | 44 | 46.8 |
한편, 아래 수학식 1은 생균수를 종속변수로 하여, 각 독립변수와 반응값(생균수, CFU/mL)에 대한 회귀방정식을 도출하여 나타낸 것으로, 최대 생균수 확보를 위한 최적조건은 글루코스(glucose) 0.17 중량%, 배양온도 27.1℃로 분석되었으며, 각 최적조건별 최대 균체량은 6.95 x 108 CFU/mL로 분석되었다.
한편, 아래 수학식 2는 이소플라본 비배당체 비율을 종속변수로 하여, 각 독립변수와 반응값(이소플라본 비배당체 비율, %)에 대한 회귀방정식을 도출하여 나타낸 것으로, 이소플라본 비배당체 전환을 위한 최적조건은 글루코스(glucose) 0.17 중량%, 배양온도 35.5℃ 로 분석되었으며, 각 최적조건별 이소플라본 비배당체 비율은 11.53% 로 분석되었다.
한편, 아래 수학식 3은 단쇄지방산 및 젖산의 총량을 종속변수로 하여, 각 독립변수와 반응값(유기산 총량, mg/g)에 대한 회귀방정식을 도출하여 나타낸 것으로, 유기산 생성 최적조건은 글루코스(glucose) 0.17 중량%, 배양온도 37.1℃로 분석되었으며, 각 최적조건별 유기산 함량은 260.51 mg/g로 분석되었다.
이와 같이, 본 실험에서 반응표면분석법을 통해 최적 배지 조성 및 배양 조건을 확인한 결과, 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)의 경우, 글루코스(glucose) 농도는 0.17 중량%가 가장 적절한 것으로 나타났으며, 배양온도는 27.1~37.1℃ 가 최적의 배양조건으로 판단되었다.
이에 따라, 본 발명은 최적 비율로 콩 배아 추출물을 함유하는 콩 배아 배지를 제조하고, 상기 배지에 락티플란티바실러스 플란타럼(L. plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 접종하여 발효시킨 후 사균화한 다음 동결건조하는 과정을 거침으로써 이소플라본 비배당체 및 유기산 함량이 대폭 증진된 포스트바이오틱스를 제공할 수 있음을 알 수 있었다.
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<211> 1436
<212> DNA
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<400> 1
tgcaagtcga acgaacttcc gttaattgat catgacgtgc ttgcactgaa tgagatttta 60
acacgaagtg agtggcggac gggtgagtaa cacgtgggta acctgcccag aagcagggga 120
taacacctgg aaacagatgc taataccgta taacagagaa aaccgcctgg ttttctttta 180
aaagatggct ctgctatcac ttctggatgg acccgcggcg cattagctag ttggtgaggt 240
aacggctcac caaggcgatg atgcgtagcc gacctgagag ggtaatcggc cacattggga 300
ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttcca caatggacgc 360
aagtctgatg gagcaacgcc gcgtgagtga agaagggttt cggctcgtaa agctctgttg 420
ttaaagaaga acgtgggtga gagtaactgt tcacccagtg acggtattta accagaaagc 480
cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tatccggatt 540
tattgggcgt aaagcgagcg caggcggtct tttaagtcta atgtgaaagc cttcggctca 600
accgaagaag tgcattggaa actgggagac ttgagtgcag aagaggacag tggaactcca 660
tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaagg cggctgtctg 720
gtctgtaact gacgctgagg ctcgaaagca tgggtagcga acaggattag ataccctggt 780
agtccatgcc gtaaacgatg attactaagt gttggaaggt ttccgccctt cagtgctgca 840
gctaacgcat taagtaatcc gcctggggag tacgaccgca aggttgaaac tcaaaagaat 900
tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagctac gcgaagaacc 960
ttaccaggtc ttgacatctt ctgccaacct aagagattag gcgttccctt cggggacaga 1020
atgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc 1080
aacgagcgca acccttatta ctagttgcca gcattcagtt gggcactcta gtgagactgc 1140
cggtgacaaa ccggaggaag gtggggacga cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg 1200
gctacacacg tgctacaatg gatggtacaa cgagttgcga aaccgcgagg tttagctaat 1260
ctcttaaaac cattctcagt tcggactgta ggctgcaact cgcctacacg aagtcggaat 1320
cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg 1380
cccgtcacac catgagagtt tgtaacaccc aaagccggtg gggtaacctt ttagga 1436
<210> 2
<211> 1423
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> Lactiplantibacillus plantarum
<400> 2
tcgaacgaac tctggtattg attggtgctt gcatcatgat ttacatttga gtgagtggcg 60
aactggtgag taacacgtgg gaaacctgcc cagaagcggg ggataacacc tggaaacaga 120
tgctaatacc gcataacaac ttggaccgca tggtccgagc ttgaaagatg gcttcggcta 180
tcacttttgg atggtcccgc ggcgtattag ctagatggtg gggtaacggc tcaccatggc 240
aatgatacgt agccgacctg agagggtaat cggccacatt gggactgaga cacggcccaa 300
actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg acgaaagtct gatggagcaa 360
cgccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc gtaaaactct gttgttaaag aagaacatat 420
ctgagagtaa ctgttcaggt attgacggta tttaaccaga aagccacggc taactacgtg 480
ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gatttattgg gcgtaaagcg 540
agcgcaggcg gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa gaagtgcatc 600
ggaaactggg aaacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtgaaat 660
gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgt aactgacgct 720
gaggctcgaa agtatgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca taccgtaaac 780
gatgaatgct aagtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc tgcagctaac gcattaagca 840
ttccgcctgg ggagtacggc cgcaaggctg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac 900
aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag ctacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca 960
tactatgcaa atctaagaga ttagacgttc ccttcgggga catggataca ggtggtgcat 1020
ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt 1080
attatcagtt gccagcatta agttgggcac tctggtgaga ctgccggtga caaaccggag 1140
gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac 1200
aatggatggt acaacgagtt gcgaactcgc gagagtaagc taatctctta aagccattct 1260
cagttcggat tgtaggctgc aactcgccta catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga 1320
tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatgag 1380
agtttgtaac acccaaagtc ggtggggtaa ccttttagga acc 1423
<210> 3
<211> 208
<212> DNA
<213> Pediococcus acidilactici
<400> 3
tttcggagga ggcgcaagtg ggatactacc ctcgttgtat gaaccctcta acccgcgcca 60
ctaatcgtgg cgggagacag tgtctggtgg gcagtttgac tggggcggtc gcctcctaaa 120
aggtaacgga ggcgcccaaa ggttccctca gaatggttgg aaatcattcg cagagtgtaa 180
aggcagaagg gagcttgact gcgagaca 208
<210> 4
<211> 147
<212> DNA
<213> Unknown
<220>
<223> Lactiplantibacillus plantarum
<400> 4
ctggcaatgc catcgtgctt gatgcgaatg gcaagcccgt tactgacaca agtacgttga 60
atgataaggc tggctaccaa ttaacgtatc attggggtat tccagattct gaagtgttta 120
aggccggcga tacagcaacc gttgaga 147
Claims (5)
- 쉰다리로부터 분리된 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)을 콩 배아 추출물을 함유한 배지에서 27.1~37.1℃의 배양온도에서 발효시켜 수득하며, 발효 전에 비하여 비배당체인 다이드제인(Daidzein), 제인스테인(Genistein) 및 글리시테인(Glycitein)과 유기산인 젖산, 숙신산 및 프로피온산의 함량이 증진되며, 상기 배지는 콩 배아 추출물 3중량% 및 글루코스 0.17중량% 를 포함하는, 포스트바이오틱스.
- 제1항에 있어서,
상기 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)는,
내산성 및 내담즙성이 있는 것을 특징으로 하는 포스트바이오틱스.
- 콩 배아 추출물 3중량% 및 글루코스 0.17중량% 를 포함하는 배지에 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 접종하여 27.1~37.1℃의 배양온도에서 배양하여 발효 전에 비하여 비배당체인 다이드제인(Daidzein), 제인스테인(Genistein) 및 글리시테인(Glycitein)과 유기산인 젖산, 숙신산 및 프로피온산의 함량을 증진시키는 것을 특징으로 하는 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)의 포스트바이오틱스 제조방법.
- 제3항에 있어서,
상기 콩 배아 추출물은,
대두에서 배아를 분리하는 단계 (A);
상기 단계 (A)에서 분리한 배아 중량의 5~15배의 물을 가하고, 마쇄 및 여과하여 불용성 성분을 분리하는 단계 (B);
상기 단계 (B)에서 불용성 성분을 분리한 후 회수된 콩배아유(soy germ milk; SGM)를 건조하는 단계 (C);를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 포스트바이오틱스 제조방법.
- 제3항에 있어서,
상기 배양 후,
락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49(기탁번호 : KCTC14977BP)를 사멸시키는 것을 특징으로 하는 포스트바이오틱스 제조방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220078428A KR102497827B1 (ko) | 2022-06-27 | 2022-06-27 | 쉰다리 유래 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49 신균주 및 이를 이용한 기능성 포스트바이오틱스의 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220078428A KR102497827B1 (ko) | 2022-06-27 | 2022-06-27 | 쉰다리 유래 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49 신균주 및 이를 이용한 기능성 포스트바이오틱스의 제조방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102497827B1 true KR102497827B1 (ko) | 2023-02-08 |
Family
ID=85225855
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020220078428A KR102497827B1 (ko) | 2022-06-27 | 2022-06-27 | 쉰다리 유래 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum) DCF49 신균주 및 이를 이용한 기능성 포스트바이오틱스의 제조방법 |
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| KR (1) | KR102497827B1 (ko) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20060060877A (ko) * | 2004-12-01 | 2006-06-07 | 주식회사 정식품 | 대두 배아 및/또는 대두 껍질 추출물, 및 이를 포함하는발암 억제용 조성물 |
| KR20160038864A (ko) * | 2014-09-30 | 2016-04-07 | 주식회사 알엔에이 | 비배당체가 세포내에 축적되어 있는 미생물 제제의 제조방법 및 이에 의해 제조된 미생물 제제 |
| KR20220025678A (ko) | 2020-08-24 | 2022-03-03 | (주)케비젠 | 유산균을 이용한 유용성분 함량이 증가된 새싹보리 발효 포스트바이오틱스의 제조방법 |
| KR20220034453A (ko) | 2020-09-11 | 2022-03-18 | (주)정가진면역연구소 | 김치 유산균을 이용한 포스트바이오틱스 제조 방법 |
-
2022
- 2022-06-27 KR KR1020220078428A patent/KR102497827B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (4)
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|---|---|---|---|---|
| KR20060060877A (ko) * | 2004-12-01 | 2006-06-07 | 주식회사 정식품 | 대두 배아 및/또는 대두 껍질 추출물, 및 이를 포함하는발암 억제용 조성물 |
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| KR20220034453A (ko) | 2020-09-11 | 2022-03-18 | (주)정가진면역연구소 | 김치 유산균을 이용한 포스트바이오틱스 제조 방법 |
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