KR102475918B1 - 남성 갱년기 증후군 개선, 경감 또는 예방용 조성물 및 이를 포함하는 기능성 식품 - Google Patents
남성 갱년기 증후군 개선, 경감 또는 예방용 조성물 및 이를 포함하는 기능성 식품 Download PDFInfo
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Abstract
발효된 여주(Momordica charantia, bitter melon)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 것인, 남성 갱년기 증후군의 개선, 경감 또는 예방용 조성물 및 이를 함유하는 기능성 식품이 제공된다.
Description
본 발명은 남성 갱년기 증후군 개선, 경감 또는 예방용 조성물 및 이를 포함하는 기능성 식품에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 테스토스테론 결핍 또는 부족을 개선하여 남성 갱년기 증후군을 개선, 경감 또는 예방하기 위한 조성물 및 이를 포함하는 기능성 식품에 관한 것이다.
남성 갱년기(PADAM; Partial Androgen Deficiency in Aging Male)란 신체의 노화 현상에 따라 남성이 전반적인 신체적, 정신적 측면의 쇠퇴 현상을 겪게 되는 과정이다. 남성 갱년기는 남성 호르몬의 저하로 인한 영향으로 남성적 특징, 전반적인 생활 활력이나 기분이 서서히 저하되는 것을 의미한다. 남성 갱년기 증상으로는 신경 과민, 정서 불안, 우울증, 현기증, 안면 홍조, 발한, 수면 장애, 활력 저하, 기억력 저하, 업무 능력 감소, 성욕 감퇴, 피부 노화, 골 밀도 감소, 내장 지방의 증가 등이 있다.
남성 갱년기 복합 증후군의 치료 방법으로 남성 호르몬(안드로겐) 약물 보충 요법이 있다. 그러나 이와 같은 약물 보충 요법은 간 독성을 나타낼 수 있으며, 혈중 지질 대사에 영향을 미쳐 LDL을 상승시키고, HDL을 감소시켜 심혈관 질환을 야기할 수 있는 등의 부작용이 문제되고 있다. 또한, 남성 호르몬의 투여가 간, 지질 상태, 심혈관 및 전립선 질환, 및 수면 및 행동 장애에 역효과를 미칠 수도 있고, 이러한 부작용에 대해서 정기적으로 검사를 받아야 하는 문제점이 있었다. 한편으로, 무증상이거나 또는 명백한 전립선암의 존재 하에서는 남성호르몬 치료가 제공될 수 없음이 보고되어 있다.
최근에는 이러한 약물의 치료 요법에 의한 문제점을 극복하기 위하여 천연 생약을 주성분으로 하는 남성 갱년기 복합 증후군 개선제의 개발이 시도되고 있다. 그 예로, 옻나무 추출물을 포함하는 성기능 개선용 제약 조성물이 있다. 그러나 이와 같은 생약재를 주성분으로 하는 종래 기술은 주로 남성갱년기 복합증후군의 단편적 증상인 성기능 관련한 연구만 한정될 뿐, 골다공증, 근력 저하, 의욕 저하 등 남성 갱년기 복합 증후군으로 나타나는 제반 증상들을 근본적으로 개선시키는 것은 아니어서 남성 갱년기 복합 증후군 개선용 제제의 개발은 미흡한 현실이다.
또한, 일부 기술들은 남성 정력, 자양강장에 효과가 있다는 다수의 한약재 등의 혼합물을 개시하는 것으로서 특정 성분의 기능에 대해서는 명확히 드러나 있지 않다. 생약재는, 여러 종류의 생약 성분들이 섞여서 사용될 때 상호 영향을 주므로, 복합 성분, 사용량에 따라 질병에의 사용이 전혀 달라지는 특성을 가지고 있다. 또한, 사람의 체질이나 이미 가지고 있는 질병에 따라 사용이 가능한 생약재가 모두 달라, 단순히 유사한 효능을 가지는 재료들을 복합하는 것만으로는 실질적으로 환자에게 그대로 적용하는 것이 어렵다. 이와 같이 남성 갱년기의 증상 개선에 적용할 수 있는 생약에 대한 개발이 여전히 초보적인 단계에 있는 실정이다.
본 발명의 배경기술은 한국등록특허 제10-2122408호 등에 개시되어 있다.
본 발명의 목적은 남성 갱년기 증후군의 치료, 개선, 경감 또는 예방 효과를 제공하는 조성물 및 기능성 식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 관점은 남성 갱년기 증후군의 개선, 경감 또는 예방용 식품 조성물이다.
남성 갱년기 증후군의 개선, 경감 또는 예방용 식품 조성물은 발효된 여주(Momordica charantia, bitter melon)의 추출물을 유효 성분으로 함유한다.
본 발명의 다른 관점은 남성 갱년기 증후군의 치료, 개선, 경감 또는 예방용 약학적 조성물이다.
남성 갱년기 증후군 치료, 개선, 경감 또는 예방용 약학적 조성물은 발효된 여주의 추출물을 유효 성분으로 함유한다.
본 발명의 또 다른 관점은 남성 갱년기 증후군의 개선, 경감 또는 예방용 기능성 식품이다.
남성 갱년기 증후군의 개선, 경감 또는 예방용 기능성 식품은 본 발명의 남성 갱년기 증후군의 개선, 경감 또는 예방용 식품 조성물을 함유한다.
본 발명은 남성 갱년기 증후군의 치료, 개선, 경감 또는 예방 효과를 제공하는 조성물 및 기능성 식품을 제공하였다.
도 1은 총 테스토스테론 함량, SHBG 함량, 유리 테스토스테론 함량 및 전립선 특이 항원(PSA) 함량의 분석 결과이다.
도 2는 체중, 복부 지방, 외측광근, 각종 지질 함량의 분석 결과이다.
도 3은 강제 수영 시험, 총 정자, 및 운동성 정자의 개수 분석 결과이다.
도 4는 테스토스테론 생합성 관련 유전자의 발현 분석 결과이다.
도 5는 ALT 및 AST 분석에 의한 간 독성 검사 결과이다.
도 1 내지 도 5에서 "C"는 실시예 1의 추출물, 비교예 1의 추출물 어떤 것도 투여되지 않은 그룹을 의미한다.
도 2는 체중, 복부 지방, 외측광근, 각종 지질 함량의 분석 결과이다.
도 3은 강제 수영 시험, 총 정자, 및 운동성 정자의 개수 분석 결과이다.
도 4는 테스토스테론 생합성 관련 유전자의 발현 분석 결과이다.
도 5는 ALT 및 AST 분석에 의한 간 독성 검사 결과이다.
도 1 내지 도 5에서 "C"는 실시예 1의 추출물, 비교예 1의 추출물 어떤 것도 투여되지 않은 그룹을 의미한다.
본 명세서에서 수치 범위를 나타낼 때 "X 내지 Y"는 "X 이상 Y 이하(X≤ 그리고 ≤Y)"를 의미한다.
본 발명자는 여주(Momordica charantia, bitter melon)를 락토바실러스(Lactobacillus) 속 중에서도 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)으로 발효시킨 후 용매 추출하여 제조된 추출물이 남성 갱년기 증후군을 치료, 예방, 개선 또는 경감시킴을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
이하, 본 발명 일 실시예에 따른 조성물을 상세히 설명한다.
본 발명의 조성물은 발효된 여주의 추출물을 함유한다.
발효된 여주의 추출물은 총 테스토스테론 함량과 유리(free) 테스토스테론 함량을 현저하게 개선시킬 수 있다. 또한, 발효된 여주의 추출물은 테스토스테론 생합성에 관련되는 효소인 17, 20-리아제(lyase), 17β-HSD3의 발현은 높이는 반면에 테스토스테론 분해와 관련되는 효소인 아로마타아제(aromatase) 및 5α-리덕타아제(reductase)의 발현은 감소시킴으로써 체내에서 유리 테스토스테론 수준을 증가시키고 회복시킬 수 있다. 또한, 발효된 여주 추출물은 근육량, 강제 수영 시간(forced swimming time), 총 정자 개수와 운동성 정자 개수를 증가시키는 반면에, 성 호르몬 결합 글로불린, 복부 지방, 혈장 중 총 콜레스테롤, 트리글리세라이드 함량은 낮출 수 있다. 이를 통해, 발효된 여주의 추출물은 테스토스테론 결핍 또는 부족과 관련되는 남성 갱년기 증후군의 개선, 예방 또는 경감 효과를 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 테스테로스테론 감소, 근육량 감소, 정자 개수 감소, 운동성 정자 감소, 테스토스테론 생합성과 관련되는 효소의 발현 감소, 테스토스테론 분해와 관련되는 효소의 발현 증가와 관련되는 남성 갱년기 증후군의 개선, 예방 또는 경감 효과를 제공하는 식품 조성물이 될 수 있다.
식품 조성물은 캔디, 시럽, 음료, 환, 정제, 캡슐, 산제, 분말, 과립 등의 형태로 사용될 수 있지만, 특별히 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물은 테스테로스테론 감소, 근육량 감소, 정자 개수 감소, 운동성 정자 감소, 테스토스테론 생합성과 관련되는 효소의 발현 감소, 테스토스테론 분해와 관련되는 효소의 발현 증가와 관련되는 남성 갱년기 증후군의 치료, 개선, 예방 또는 경감 효과를 제공하는 약학적 조성물이 될 수 있다.
약학적 조성물은 과립, 환, 정제 등의 형태로 사용될 수 있다.
약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.
약학적 조성물은 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
약학적 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하게 사용할 수 있다.
발효된 여주의 추출물은 조성물 중 유효 성분으로 함유된다. 일 구체예에서, 발효된 여주의 추출물은 고형분 기준으로 조성물 중 0.001중량% 내지 10중량%, 구체적으로 0.01중량% 내지 5중량%로 포함될 수 있다. 상기 범위에서, 본 발명의 테스토스테론 결핍 또는 부족과 관련되는 남성 갱년기 증후군의 개선 효과를 제공할 수 있다.
발효된 여주 추출물은 분쇄한 건 여주 또는 생 여주에 물을 넣고 락토바실러스 속 중에서도 락토바실러스 플란타럼을 넣은 다음 발효시키는 단계, 얻은 발효물을 열수 추출 또는 에탄올 추출하는 단계에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에서는 건 여주 또는 생 여주에 락토바실러스 플란타럼을 먼저 넣어 발효시킨 다음, 얻은 발효물을 열수 추출 또는 에탄올 추출함으로써 발효된 여주의 추출물을 제조하는 것을 특징으로 한다.
락토바실러스 속 중에서도 락토바실러스 플란타럼은 본 발명의 발효된 여주 추출물이 본 발명의 테스토스테론 결핍 또는 부족과 관련되는 증후군의 개선, 예방 또는 경감과 관련되는 효과를 잘 구현하도록 할 수 있다.
발효는 건 여주 또는 생 여주에 물을 넣고 락토바실러스 플란타럼을 넣은 다음 통상의 발효 조건에서 수행될 수 있다. 예를 들면 발효는 30℃ 내지 40℃에서 50시간 내지 100시간 동안 수행될 수 있다. 상기 범위에서, 본 발명의 효과를 제공하는 발효된 여주의 추출물 제조가 용이할 수 있다.
얻은 발효물을 열수 추출 또는 에탄올 추출함으로써, 본 발명의 발효된 여주의 추출물이 제조될 수 있다. 열수 추출은 얻은 발효물을 70℃ 내지 85℃의 열수에 넣고 가열하면서 수행될 수 있다. 열수 추출 시간은 특별히 제한되지 않지만, 예를 들면 10시간 내지 30시간이 될 수 있다. 상기 범위에서, 본 발명의 효과를 제공하는 발효된 여주의 추출물 제조가 용이할 수 있다.
발효된 여주의 추출물에는 접종한 락토바실러스 플란타럼이 활성 상태로 남아 있어 이를 음용 목적으로 사용하기 위해서는 락토바실러스 플란타럼의 활성을 억제시키는 단계가 필요하며 열수 추출 과정에서는 열수에 의한 락토바실러스 플란타럼의 활성을 억제할 수 있으나, 저농도의 에탄올을 이용하여 추출할 경우에는 별도로 발효된 여주 추출에 포함된 락토바실러스 플란타럼의 활성을 억제하는 단계를 더 포함할 수도 있다.
한편, 발효된 여주 추출물을 농축 및/또는 건조시켜, 발효된 여주 추출물의 보관 기간을 연장시키거나 처리를 용이하게 할 수도 있다.
이하, 본 발명 일 실시예에 따른 기능성 식품을 설명한다.
기능성 식품은 본 발명의 발효된 여주 추출물 또는 본 발명의 조성물을 포함한다.
기능성 식품은 캔디, 시럽, 음료, 환, 정제, 캡슐, 산제, 분말, 과립 등의 형태로 사용될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 통해 본 발명의 구성 및 작용을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 다만, 이는 본 발명의 바람직한 예시로 제시된 것이며 어떠한 의미로도 이에 의해 본 발명이 제한되는 것으로 해석될 수는 없다.
실시예 1
여주 열매를 건조시켜 얻은 여주 열매 건조물 100g에 락토바실러스 플란타럼(KCTC 3108)을 대략 1 x 109개 첨가하고, 물 1 리터를 추가로 첨가하여 혼합하였다. 얻은 혼합물을 인큐베이터 안에 넣고 30℃에서 96시간 동안 배양시켜 젖산 발효를 수행하였다. 젖산 발효가 완료된 이후에, 물 1 리터를 추가로 첨가하고 70℃ 내지 85℃에서 24시간 동안 가열하였다. 얻은 수득물을 여과하여 진공 하에서 용매를 제거하고 동결 건조시켜, 발효된 여주 열매의 추출물을 분말 형태로 얻었다. 얻은 분말은 -20℃에서 보관하면서 사용할 때에는 물과 혼합하여 사용하였다.
비교예 1
여주 열매를 건조시켜 얻은 여주 열매 건조물 100g에 물 1 리터를 추가로 첨가하여 혼합하였다. 70℃ 내지 85℃에서 24시간 동안 가열하였다. 얻은 수득물을 여과하여 진공 하에서 용매를 제거하고 동결 건조시켜, 여주 열매 추출물을 분말 형태로 얻었다. 얻은 분말은 -20℃에서 보관하면서 사용할 때에는 물과 혼합하여 사용하였다.
실험예 1: 총 테스토스테론 함량, SHBG(sex hormone-bonding globulin)의 함량, 유리 테스토스테론 함량 및 전립선 특이 항원(PSA, prostate specific antigen)의 함량의 분석
12주령의 노화된 Sprague-Dawley familiy의 수컷 래트(충북 음성의 DBL로부터 구입함)를 준비하고, 래트는 24℃, 상대습도 50±10%, 10 내지 20회/1시간의 환기, 12시간 명 주기의 조건 하에서 길렀다. 수컷 래트는 50주령까지 길렀다. 수컷 래트는 약 560g까지 체중이 되도록 하였다. 수컷 래트를 2개의 그룹으로 나누었다. 그룹당 수컷 래트는 각각 40마리 또는 80마리로 하였다.
하나의 그룹에는 실시예 1의 추출물을 6주 동안 경구로 투여하고, 다른 그룹에는 비교예 1의 추출물을 6주 동안 경구로 투여하였다. 두 그룹에서 추출물의 1일당 투여 함량 및 투여 시기는 동일하게 하였다. 투여량은 각각 20mg/체중 kg 또는 40 mg/체중 kg으로 하였다.
위 2개의 그룹에서 매주 동일 날짜 및 동일 시간에 래트를 디에틸 에테르로 마취시키고, 꼬리 정맥에서 400 내지 500㎕의 혈액을 채취하였다. 실험 마지막 날에는 래트의 심장으로부터 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 얼음 속에 넣고 4℃에서 10,000 x g로 10분 동안 원심 분리시켜, 혈장을 채취하였다.
(1)채취한 혈장에 대해 테스토스테론 측정 키트(Enzo Life Sciences, Montgomery, PA, USA)를 사용하여 혈액 중 총 테스토스테론 함량을 측정하였다. 구체적으로는, 채취한 혈장과 표준 희석제(standard diluent)를 goat anti-mouse IgG 마이크로티터 플레이트에 투입하고, 테스토스테론 항체를 혼합한 다음 500rpm에서 1시간 동안 배양시켰고, 다시 기질 용액과 함께 37℃에서 1시간 동안 암 조건 하에서 배양시켰다. 이후에, stop solution을 투입하고 혼합한 다음, 파장 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 얻은 흡광도는 혈액 중 총 테스토스테론 함량에 대응될 수 있다. 그 결과를 도 1의 (A)에 나타내었다. 유리 테스토스테론의 함량은 유리 테스토스테론 분석 키트(Abcam, Cambridge, MA, USA)를 사용하여 측정하였다. 그 결과를 도 1의 (C)에 나타내었다.
도 1의 (A), 도 1의 (C)에서와 같이 실시예 1의 추출물을 투여한 경우는 비교예 1의 추출물을 투여한 경우 대비 총 테스토스테론 함량 및 유리 테스토스테론 함량이 증가하였음을 알 수 있다.
(2)채취한 혈액 중 SHBG의 함량을 SHBG 분석 키트(Cloud-Clone Corp, Houston, TX, USA)를 사용하여 측정하였다. SHBG는 테스토스테론과 결합하여 테스토스테론의 실제 작용을 조절하는 것으로, SHBG가 테스토스테론과 결합하면 테스토스테론의 활성을 살시하게 된다.
혈장 시료와 표준 용액을 precoated 마이크로플레이트에 첨가하고, 2시간 동안 37℃에서 밀봉 상태로 배양시켰다. 그런 다음, 용액을 제거하고, 검출 시약(detection reagent) A를 첨가하고 1시간 동안 37℃에서 밀봉 상태로 배양시켰다. 그런 다음, 세척 버퍼로 세척하고, 용액을 제거한 후에 검출 시약(detection reagent) B를 투입하고 37℃에서 30분 동안 배양시켰다. 용액을 세척 및 제거한 후에, 기질 용액을 투입하고 암 조건으로 37℃에서 20분 동안 배양시켰다. stop solution을 투입하고, 파장 450nm에서의 흡광도를 즉시 측정하였다. 얻은 흡광도는 혈액 중 SHBG 함량에 대응될 수 있다. 그 결과를 도 1의 (B)에 나타내었다.
채취한 혈액 중 전립선 특이 항원(PSA)의 함량을 PSA 분석 키트(Cusabio, Wuhan, Hubei, 중국)를 사용하여 측정하였다. PSA는 전립선에서만 생성되는 당 단백질로서 전립선 암의 진단 및 치료에서의 종양 표지자이며, 전립선 염, 양성 전립선 비대증 및 급성 비뇨기 보유를 증가시킬 수 있다.
혈장 시료와 표준 용액을 precoated 마이크로플레이트에 첨가하고, 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 이후에, 용액을 제거하였고, 비오틴 항체를 첨가하였고, 37℃에서 2시간 동안 밀봉 상태로 반응시키고, 세척 버퍼로 3회 세척하였다. 이후에, 용액을 제거하였고, HRP-아비딘을 첨가하였으며, 37℃에서 30분 동안 밀봉 상태로 반응시키고, 세척 버퍼로 5회 세척하였다. 이후에, 용액을 제거하였고, 기질 용액을 첨가하고, 암 조건에서 37℃에서 2분 동안 빛을 차단시켰다. 그런 다음, stop soultion을 첨가하였고, 450nm에서의 흡광도를 즉시 측정하였다. 얻은 흡광도는 혈액 중 PSA 함량에 대응될 수 있다. 그 결과를 도 1의 (D)에 나타내었다.
도 1의 (B), 도 1의 (D)에서와 같이 실시예 1의 추출물을 투여한 경우는 비교예 1의 추출물을 투여한 경우 대비 SHBG 함량 및 PSA 함량이 감소하였음을 알 수 있다.
실험예 2: 체중, 복부 지방, 외측광근, 각종 지질 함량의 분석
실험예 1과 동일하게 12주령의 Sprague-Dawley familiy의 수컷 래트에 대하여 실시예 1의 추출물과 비교예 1의 추출물을 각각 처리하였다. 각 그룹의 래트에 대해 아래 내용을 평가하였다.
래트의 체중을 주기적으로 재었다. 그 결과를 도 2의 (A)에 나타내었다.
래트에서 심장 혈액을 포집하고, 복막 후방의 지방을 제거한 다음 식염수로 연속적으로 세척하였다. 그런 다음 여과지로 수분을 제거한 후 복부 지방(abdominal fat) 중량을 측정하였다. 그 결과를 도 2의 (B)에 나타내었다.
래트에서 대퇴부 부분을 절개하고 외측광근(vastus lateralis)을 측정하였다. 그 결과를 도 2의 (C)에 나타내었다.
래트에서 채취한 혈액에 대해 혈액 지질 분석 키트(Asan Pharmaceutical Co. Ltd.)를 사용하여 총 콜레스테롤, 고 밀도 콜레스테롤(HDL), 트리글리세라이드를 측정하였다. 그 결과를 도 2의 (D), (E), (F)에 나타내었다.
도 2의 (A), (B), (C), (D), (E), (F)에서 나타나는 바와 같이, 실시예 1의 추출물을 투여한 경우는 비교예 1의 추출물을 투여한 경우 대비 체중, 근육량, HDL은 증가하는 반면에, 지방, 총 콜레스테롤, 트리글리세라이드는 감소하였음을 알 수 있다.
실험예 3: 강제 수영 시험(forced swimming analysis), 총 정자, 및 운동성 정자의 개수 분석
실험예 1과 동일하게 12주령의 Sprague-Dawley familiy의 수컷 래트에 대하여 실시예 1의 추출물과 비교예 1의 추출물을 각각 처리하였다. 각 그룹의 래트에 대해 아래 내용을 평가하였다.
플라스틱 수조 탱크(W50 × D40 × H60, cm) 안에 멸균수를 대략 30cm까지 채웠으며, 수조 히터(EHEIM GmbH & Co KG, Deizisau, 독일)를 사용하여 멸균수의 온도는 24±2℃로 유지하였다. 상기 플라스틱 수조 탱크 안에 상기 그룹의 래트를 넣었다. 래트의 코가 수위 아래로 2초 이상 5번 침수되었을 때 래트가 소진된 것으로 간주하였으며, 이 소진되기 까지의 시간을 측정하였다. 그 결과를 도 3의 (A)에 나타내었다.
래트의 좌측 및 우측 부고환을 추출하고, 외과용 가위로 잘게 썬 다음, 0.5% BSA를 함유하는 4ml의 37℃ M199 배지에서 10분 동안 배양한 다음 정자를 수집하였다. 수집된 정자를 32℃ M199 배지에 먼저 희석하여 래트 체내 환경과 유사하게 하여 생존율을 향상시켰다. 제1 희석제 100㎕를 900㎕의 M199 배지에 첨가하여 제2 희석제를 제조하였다. 이어서, 정자 개수는 10㎕의 제2 희석제를 적용함으로써 혈구계를 사용하여 측정하였다. 운동성 정자는 활성 정자 개수의 백분율을 측정함으로써 계산하였다. 그 결과를 도 3의 (B),(C)에 나타내었다.
도 3의 (A), (B), (C)에서와 나타나는 바와 같이, 실시예 1의 추출물을 투여한 경우는 비교예 1의 추출물을 투여한 경우 대비 강제 수영 시간, 총 정자 개수 및 운동성 정자 개수가 증가하였음을 알 수 있다.
실험예 4: 테스토스테론 생합성 관련 유전자의 발현 분석
TM3 세포주는 한국의 세포주 은행(서울, 한국)에서 구입하였다. 총 1 x 106개 TM3 세포를 10% FBS를 함유하는 DMEM/F-12 배지(Gibco-BRL, 미국 뉴욕 주 그랜드 아일랜드)에 60mm 세포 배양 접시(한국 경기도 포천시 SPL Life Science)에 37℃에서 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 24 시간 후, 배지를 버리고, 세포를 PBS로 1 회 세척하였다.
실시예 1과 비교예 1의 추출물을 각각 함유하는 신선한 배지를 각각의 세포 배양 접시에 첨가하고 추가로 48시간 동안 배양하였다. 테스토스테론 생합성과 관련된 상대 유전자 발현 수준의 차이를 비교하기 위해, Trizol Reagent(Gibco-BRL)를 사용하여 세포로부터 RNA를 추출하였다. cDNA는 ThermoScript RT-PCR 시스템(Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA)으로 추출된 RNA로부터 합성되었고 RT-PCR(Exicycler96 real-time quantitative thermal block) (Bioneer)을 사용하여 분석하였다. RT-PCR에 사용한 프라이머 서열은 다음 표 1과 같다:
| 17,20-리아제 | 정방향 | 5'-CCTGCTGGAAGGTGTAGCTC-3' | 서열번호 1 |
| 역방향 | 5'-CCTGCTGGAAGGTGTAGCTC-3' | 서열번호 2 | |
| 17β-HSD3 | 정방향 | 5'-GTTCTCGCAGCACCTTTTC-3' | 서열번호 3 |
| 역방향 | 5'-CAGCTTCCAGTGGTCCTCTC-3' | 서열번호 4 | |
| 아로마타아제 | 정방향 | 5'-ACAATAAGATGTATGGAGAGTTCA-3' | 서열번호 5 |
| 역방향 | 5'-GCTTGAGGACTTGCTGATAA-3' | 서열번호 6 | |
| 5α-리덕타아제 | 정방향 | 5'-GCAAGCCTATTACCTGGTT-3' | 서열번호 7 |
| 역방향 | 5'-AGAAGACACCGACGCTAA-3' | 서열번호 8 | |
| GADPH (내부대조군) |
정방향 | 5'-AACTTTGGCATTGTGGAAGG-3' | 서열번호 9 |
| 역방향 | 5'-CACATTGGGGGTAGGAACAC-3' | 서열번호 10 |
그 결과를 도 4의 (A), (B), (C), (D)에 나타내었다.
도 4의 (A), (B), (C), (D)에서 나타난 바와 같이, 테스토스테론 생합성에 관련되는 효소인 17,20-리아제 및 17β-HSD3는 실시예 1의 추출물을 투여한 경우가 비교예 1의 추출물을 투여한 경우 대비 발현이 증가하였음을 알 수 있다. 반면에서, 테스토스테론 분해와 관련되는 효소인 아로마타아제 및 5α-리덕타아제는 실시예 1의 추출물을 투여한 경우가 비교예 1의 추출물울 투여한 경우 대비 발현이 감소하였음을 알 수 있다.
실험예 5: ALT 및 AST 분석에 의한 간 독성 검사
실험예 1과 동일하게 12주령의 노화된 Sprague-Dawley familiy의 수컷 래트에 대하여 실시예 1과 비교예 1의 추출물을 각각 처리하였다. 각 그룹의 래트에 대해 아래 내용을 평가하였다.
래트의 혈액 중 ALT 및 AST를 통상의 방법을 사용해서 측정하였다. 그 결과를 도 5의 (A), (B)에 나타내었다. 도 5의 (A), (B)에서 나타난 바와 같이, 실시예 1의 추출물은 실시예 1의 추출물을 투여하지 않은 대조군 대비 혈장 내 AST 및 ALT 수준이 동일하여서 실시예 1의 추출물은 간 독성이 없음을 알 수 있다.
본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 실시될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.
<110> YOON, Young Geol
KIM, Hyun Pyo
<120> COMPOSITION FOR IMPROVING, RELIEVING OR PREVENTING ANDROPAUSE
SYMPTOMS AND FUNCTIONAL FOOD COMPRISING THE SAME
<130> 25077
<160> 10
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 17,20-LYASE FORWARD PRIMER
<400> 1
cctgctggaa ggtgtagctc 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 17,20-LYASE REVERSE PRIMER
<400> 2
cctgctggaa ggtgtagctc 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 17BETA-HSD3 FORWARD PRIMER
<400> 3
gttctcgcag caccttttc 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 17BETA-HSD3 REVERSE PRIMER
<400> 4
cagcttccag tggtcctctc 20
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<220>
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<213> Artificial Sequence
<220>
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gcttgaggac ttgctgataa 20
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5ALPHA-REDUCTASE FORWARD PRIMER
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gcaagcctat tacctggtt 19
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agaagacacc gacgctaa 18
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<223> GADPH REVERSE PRIMER
<400> 10
cacattgggg gtaggaacac 20
Claims (5)
- 발효된 여주(Momordica charantia, bitter melon)의 추출물을 유효 성분으로 함유하고,
상기 발효는 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillusplantarum) KCTC 3108에 의해 수행되는 것인, 남성 갱년기 증후군의 개선, 경감 또는 예방용 식품 조성물.
- 삭제
- 발효된 여주(Momordica charantia, bitter melon)의 추출물을 유효 성분으로 함유하고,
상기 발효는 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillusplantarum) KCTC 3108에 의해 수행되는 것인, 남성 갱년기 증후군의 치료, 개선, 경감 또는 예방용 약학적 조성물.
- 삭제
- 제1항의 식품 조성물을 함유하는 것인, 기능성 식품.
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|---|---|---|---|
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200116055A KR102475918B1 (ko) | 2020-09-10 | 2020-09-10 | 남성 갱년기 증후군 개선, 경감 또는 예방용 조성물 및 이를 포함하는 기능성 식품 |
Publications (2)
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ID=80936139
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| KR1020200116055A KR102475918B1 (ko) | 2020-09-10 | 2020-09-10 | 남성 갱년기 증후군 개선, 경감 또는 예방용 조성물 및 이를 포함하는 기능성 식품 |
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| Country | Link |
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR101688116B1 (ko) * | 2015-07-24 | 2016-12-21 | (주)남도농산 | 여주 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성 갱년기 치료 및 예방용 조성물 |
-
2020
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101688116B1 (ko) * | 2015-07-24 | 2016-12-21 | (주)남도농산 | 여주 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성 갱년기 치료 및 예방용 조성물 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Gao et al., Momordica charantia juice with Lactobacillus plantarum fermentation: Chemical composition, antioxidant properties and aroma profile. Food Bioscience. Vol. 29, pp. 62-72(2019) 1부.* |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20220033777A (ko) | 2022-03-17 |
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