KR102470864B1 - Promotes onion growth and drought tolerance by bacillus altitudinis h5-9 and uses thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 식물의 생육 증진 및 식물의 건조 스트레스 저감 효과를 가지는 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제 및 이를 이용한 식물 종자의 생육 증진 방법과 식물의 건조 스트레스 저감 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a Bacillus altitudinis H5-9 strain having an effect of enhancing plant growth and reducing drying stress of plants, a microbial preparation comprising a culture solution of the strain or a mixture thereof as an active ingredient, and plant seeds using the same It relates to a method for promoting the growth of plants and a method for reducing drying stress in plants.

Description

양파의 생육 촉진 효과 및 가뭄 내성 증진 효과를 갖는 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주 및 이의 용도{PROMOTES ONION GROWTH AND DROUGHT TOLERANCE BY BACILLUS ALTITUDINIS H5-9 AND USES THEREOF}Bacillus altitudinis H5-9 strain having onion growth promoting effect and drought tolerance enhancing effect and use thereof

본 발명은 식물의 생육 증진 및 식물의 건조 스트레스 저감 효과를 가지는 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제 및 이를 이용한 식물 종자의 생육 증진 방법과 식물의 건조 스트레스 저감 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a Bacillus altitudinis H5-9 strain having an effect of enhancing plant growth and reducing drying stress of plants, a microbial preparation comprising a culture solution of the strain or a mixture thereof as an active ingredient, and plant seeds using the same It relates to a method for promoting the growth of plants and a method for reducing drying stress in plants.

현재 상용화되어 있는 농업 유용 미생물은 식물 병원성 미생물에 대한 길항효과, 토양 내 무기 영양분의 가용화, 다양한 식물 생육 증진 등의 효과를 가지고 있는 미생물 제제가 있으며 현재 사용 가능한 화학 농약 및 비료의 숫자도 줄어들고 있는 실정이므로 이를 대체할 수 있는 미생물 제제가 요구되고 있다.Agricultural useful microorganisms that are currently commercialized include microbial agents that have effects such as antagonizing plant pathogenic microorganisms, solubilization of inorganic nutrients in the soil, and promotion of various plant growth, and the number of currently available chemical pesticides and fertilizers is also decreasing. Therefore, a microbial agent capable of replacing it is required.

본 발명에서는 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제를 제공하고, 이를 이용한 식물 종자의 생육 증진 방법과 식물의 건조 스트레스 저감 방법을 제공하여 기존의 화학 농약 및 비료를 대체하고자 한다.The present invention provides a microbial preparation comprising a Bacillus altitudinis H5-9 strain, a culture solution of the strain or a mixture thereof as an active ingredient, and a method for promoting the growth of plant seeds using the same and reducing drying stress of plants. It is intended to replace existing chemical pesticides and fertilizers by providing methods.

본 발명은, 식물의 건조 스트레스 저감용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P)를 제공한다.The present invention provides a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for reducing drying stress in plants.

본 발명은, 식물의 생육 증진용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P)를 제공한다.The present invention provides a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for enhancing plant growth.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1로 표시되는 자이레이스(gyrase) 유전자 염기서열을 가질 수 있다.In one embodiment of the present invention, the strain may have a gyrase gene nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 식물은 양파일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the plant may be an onion.

본 발명은 식물의 건조 스트레스 저감용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P), 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나를 유효성분으로 포함하는 미생물 제제를 제공한다.The present invention provides a microbial preparation comprising at least one of a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for reducing drying stress in plants, a culture solution of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 미생물 제제는 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 및 식물 영양제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the microbial agent may further contain at least one selected from the group consisting of plant growth regulators, plant growth stimulants, and plant nutrients.

본 발명은 식물의 건조 스트레스 저감용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P), 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나를 유효성분으로 포함하고, 미생물 제제는 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 및 식물 영양제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 더 포함하는 미생물 제제 중 적어도 하나를 식물, 식물 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 식물 종자의 생육 증진 방법을 제공한다.The present invention includes at least one of a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for reducing drying stress of plants, a culture solution of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient, and the microbial preparation is a plant growth regulator Provides a method for enhancing the growth of plant seeds, comprising the step of treating the plant, the area around the plant, or both with at least one of a microbial agent further comprising at least one selected from the group consisting of a plant growth stimulant and a plant nutrient. .

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 식물은 양파일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the plant may be an onion.

본 발명은 식물의 건조 스트레스 저감용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P), 상기 균주의 배양액 중 적어도 하나 이상을 양파, 양파 모종 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 양파의 건조 스트레스 저감 방법을 제공한다.The present invention relates to the step of treating at least one of the Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for reducing drying stress in plants and the culture solution of the strain to onions, areas around onion seedlings, or both of them. It provides a method for reducing drying stress of onions comprising

본 발명은 식물의 건조 스트레스 저감용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P), 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나를 유효성분으로 포함하는 미생물 제제 중 적어도 하나 이상을 양파, 양파 모종 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 양파의 건조 스트레스 저감 방법을 제공한다.The present invention relates to at least one of microbial preparations comprising at least one of a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for reducing drying stress in plants, a culture solution of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient. It provides a method for reducing drying stress of onions, comprising the step of treating onions, areas around onion seedlings, or both.

본 발명은 식물의 건조 스트레스 저감용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P), 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물 중 적어도 하나를 유효성분으로 포함하고, 미생물 제제는 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 및 식물 영양제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 더 포함하는 미생물 제제 중 적어도 하나 이상을 양파, 양파 모종 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 양파의 건조 스트레스 저감 방법을 제공한다.The present invention includes at least one of a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for reducing drying stress of plants, a culture solution of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient, and the microbial preparation is a plant growth regulator A method for reducing drying stress of onions comprising the step of treating onions, the area around onion seedlings, or both, with at least one or more of the microbial agents further comprising any one or more selected from the group consisting of plant growth stimulants and plant nutrients. to provide.

본 발명에 따른 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주를 식물에 적용하면, 건조 스트레스에 의한 피해가 감소하므로, 본 발명에 다른 미생물을 식물 활성 증진제, 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 및 식물 영양제 등으로 활용될 수 있다.When the Bacillus altitudinis H5-9 strain according to the present invention is applied to plants, damage caused by drying stress is reduced, so other microorganisms according to the present invention are used as plant activity enhancers, plant growth regulators, plant growth stimulants and plants It can be used as a nutritional supplement.

도 1은 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주의 자이레이스(gyrase) 유전자 염기서열을 분석하여 균주의 계통도를 나타낸 것이다.
도 2a는 실험실 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 생육 증진 효과를 나타낸 것이다.
도 2b는 실험실 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 건조 내성 효과를 나타낸 것이다.
도 3a는 비닐하우스 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 수확량(g)을 나타낸 것이다.
도 3b는 비닐하우스 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 구 직경(mm)을 나타낸 것이다.
도 4a는 비닐하우스 조건에서 수분을 공급한 대조군 양파를 나타낸 사진이다.
도 4b는 비닐하우스 조건에서 수분을 공급하지 않은 대조군 양파를 나타낸 사진이다.
도 4c는 비닐하우스 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파를 나타낸 사진이다.
도 5는 농가 포장 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 수확량(g)을 나타낸 것이다.
도 6a는 농가 포장 조건에서 대조군 양파를 나타낸 사진이다.
도 6b는 농가 포장 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파를 나타낸 사진이다.
도 7은 농가 포장 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 상품성 증진 효과를 나타낸 것이다.
1 is a phylogenetic diagram of the strain by analyzing the gyrase gene sequence of the Bacillus altitudinis H5-9 strain.
Figure 2a shows the growth enhancing effect of onion inoculated with control onion and Bacillus altitudinis H5-9 strain under laboratory conditions.
Figure 2b shows the drying resistance effect of onions inoculated with control onions and Bacillus altitudinis H5-9 strains under laboratory conditions.
Figure 3a shows the yield (g) of onions inoculated with control onions and Bacillus altitudinis H5-9 strains in greenhouse conditions.
Figure 3b shows the sphere diameter (mm) of the onion inoculated with the control onion and the Bacillus altitudinis H5-9 strain in a greenhouse condition.
Figure 4a is a photograph showing a control onion supplied with water in the greenhouse conditions.
Figure 4b is a photograph showing a control onion that did not supply moisture in the greenhouse conditions.
Figure 4c is a photograph showing the onion inoculated with the Bacillus altitudinis H5-9 strain in a greenhouse condition.
Figure 5 shows the yield (g) of onions inoculated with control onions and Bacillus altitudinis H5-9 strains in farm field conditions.
Figure 6a is a photograph showing the control onion in farmhouse packaging conditions.
Figure 6b is a photograph showing onions inoculated with Bacillus altitudinis H5-9 strain in farmhouse conditions.
Figure 7 shows the marketability enhancement effect of the onion inoculated with the control onion and the Bacillus altitudinis H5-9 strain in farmhouse packaging conditions.

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 본문에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.Since the present invention can make various changes and have various embodiments, specific embodiments will be illustrated in the drawings and described in detail in the text. However, this is not intended to limit the present invention to specific embodiments, and should be understood to include all modifications, equivalents, and substitutes included in the spirit and scope of the present invention. In describing the present invention, if it is determined that a detailed description of related known technologies may obscure the gist of the present invention, the detailed description will be omitted.

이하, 본 명세서에 개시된 실시예들을 도면을 참조하여 상세하게 설명하고 자 한다. 상세한 설명, 도면들 및 청구항들에서 상술하는 예시적인 실시예들은 한정을 위한 것이 아니며, 기재된 실시예들과 다른 실시예들이 이용될 수 있으며, 여기서 개시되는 기술의 사상이나 범주를 벗어나지 않는 한 다른 변경들도 가능하다. Hereinafter, the embodiments disclosed in this specification will be described in detail with reference to the drawings. The illustrative embodiments described above in the detailed description, drawings and claims are not intended to be limiting, and other embodiments than those described may be used, and other changes may be made without departing from the spirit or scope of the technology disclosed herein. are also possible

개시된 기술에 관한 설명은 구조적 내지 기능적 설명을 위한 실시예에 불과하므로, 개시된 기술의 권리범위는 본문에 설명된 실시예에 의하여 제한되는 것으로 해석되어서는 아니된다. 즉, 실시예는 다양한 변경이 가능하고 여러 가지 형태를 가질 수 있으므로 개시된 기술의 권리범위는 기술적 사상을 실현할 수 있는 균등물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.Since the description of the disclosed technology is only an embodiment for structural or functional description, the scope of rights of the disclosed technology should not be construed as being limited by the embodiment described in the text. That is, since the embodiment can be changed in various ways and can have various forms, it should be understood that the scope of rights of the disclosed technology includes equivalents capable of realizing the technical idea.

여기서 사용된 모든 용어들은 다르게 정의되지 않는 한, 개시된 기술이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 관련기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미를 지니는 것으로 해석 될 수 없다.All terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the disclosed technology belongs, unless defined otherwise. Terms defined in commonly used dictionaries should be interpreted as consistent with meanings in the context of related art, and cannot be interpreted as having ideal or excessively formal meanings unless explicitly defined in the present application.

유기질, 화학비료의 과다사용에 의해 토양의 오염, 연작장해, 토양양분의 불균형, 병해충 발생 등의 문제가 발생되어, 생산물의 품질저하, 농가의 소득 저하 등의 부작용이 나타나고 있다. 중요한 식물 영양분인 질소(N)는 이러한 화학 비료의 사용에 의해 공급되어 왔으나, 더 높은 수확량을 유지하기 위한 화학 비료의 과잉 이용은 낮은 투입으로 높은 생산성을 요하는 지속 가능한 농업의 원리에 반하는 문제점과, 환경적인 문제가 있었다.Due to the excessive use of organic and chemical fertilizers, problems such as soil contamination, repeated crop failure, soil nutrient imbalance, and occurrence of diseases and pests occur, resulting in side effects such as reduced product quality and reduced farm household income. Nitrogen (N), an important plant nutrient, has been supplied by the use of these chemical fertilizers, but the excessive use of chemical fertilizers to maintain higher yields is a problem that goes against the principles of sustainable agriculture, which requires high productivity with low input. , there were environmental problems.

이와 같은 문제를 해결하기 위하여 화학비료를 대체할 수 있는 수단으로, 농업환경 및 생태계 부담을 최소화하면서 안전한 먹거리를 해결하는 생물학적 방법이 요구된다. 이에 따라 본 발명에서는, 상기 생물학적 방법으로 식물의 건조 스트레스를 저감시킬 수 있는 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제를 제공한다. 특히, 본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제는 식물에 작용하여 건조 스트레스를 저감시킨다. In order to solve this problem, as a means to replace chemical fertilizers, a biological method for solving safe food while minimizing the burden on the agricultural environment and ecosystem is required. Accordingly, the present invention provides a microorganism preparation comprising a strain capable of reducing drying stress of plants by the above biological method, a culture solution of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient. In particular, the microbial preparation containing the Bacillus altitudinis H5-9 strain, the culture solution of the strain, or a mixture thereof according to an embodiment of the present invention as an active ingredient acts on plants to reduce drying stress.

본 명세서에서 "식물"은 식물계에 속하는 임의의 살아있는 유기체 (즉, 식물계 내의 임의의 속/종)를 지칭하여, 나무, 허브, 관목, 목초, 덩굴, 양치식물, 이끼 및 녹조류와 같으나 이에 제한되지는 않는다. 따라서 미생물 제제가 적용될 수 있는 대표적인 식물로 양파, 고추, 브라시카, 구근 채소, 곡물, 시트러스, 목화, 조롱박, 과실 채소, 잎 채소, 콩과식물, 오일 종자 식물, 땅콩, 뿌리 채소, 괴경 채소, 구경 채소, 핵과류, 담배, 딸기 및 다른 장과류, 및 다양한 관상식물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일 실시예에 있어서, 본 발명의 양파(Onion)에 적용될 수 있다. As used herein, "plant" refers to any living organism belonging to the plant kingdom (i.e., any genus/species within the plant kingdom), such as, but not limited to, trees, herbs, shrubs, grasses, vines, ferns, mosses, and green algae. does not Therefore, representative plants to which microbial agents can be applied include onions, peppers, brassicas, bulbous vegetables, grains, citrus fruits, cotton, cucurbits, fruit vegetables, leafy vegetables, legumes, oilseed plants, peanuts, root vegetables, tuber vegetables, but is not limited to corm vegetables, stone fruits, tobacco, strawberries and other soft fruits, and various ornamental plants. In one embodiment, it can be applied to the onion of the present invention.

본 명세서에서 “배양액”은 균주를 배지에 접종하고 일정시간 배양하여 얻은 결과물로서, 본 발명에 따른 균주를 적합한 액체 배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 균주를 제거한 여액(여과액 또는 원심분리한 상등액), 상기 배양액을 초음파 처리하거나 상기 배양액에 용해효소(lysozyme)를 처리하여 수득한 세포 파쇄액, 상기 배양액, 여액, 상기 세포 파쇄액 등을 농축한 농축액 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 생균제 또는 항균용 조성물은 고체배지 배양물, 또는 상기 배양액의 건조물 또는 추출물 등의 배양물을 함유할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니고, 나아가 적합한 부형제 또는 담체(열성유전자를 이형접합의 상태로 가지고 있는 개체)를 추가로 포함할 수도 있다.In the present specification, "culture medium" is a result obtained by inoculating a strain into a medium and culturing for a certain period of time, the culture medium itself in which the strain according to the present invention is cultured in a suitable liquid medium, and the filtrate obtained by filtering or centrifuging the culture medium to remove the strain (filtering solution or centrifuged supernatant), a cell disruption solution obtained by sonicating the culture solution or treating the culture solution with a lysozyme, and a concentrate obtained by concentrating the culture solution, filtrate, or the cell disruption solution, etc. It is not limited. In addition, the probiotic or antibacterial composition may contain a culture such as a solid medium culture, or a dried product or extract of the culture medium, but is not limited thereto, and further suitable excipients or carriers (recessive gene in a heterozygous state) possessed object) may be additionally included.

본 발명의 미생물 제제는 액상 비료 형태로 제조될 수 있으며 이에 증량제를 첨가하여 가루분말의 형태로 이용하거나 이를 제형화하여 과립화시킬 수도 있다. 그러나 그 제형에 특별히 한정되지는 않는다.The microbial preparation of the present invention may be prepared in the form of a liquid fertilizer, and may be used in the form of a powder by adding an extender thereto, or may be formulated and granulated. However, the formulation is not particularly limited.

본 명세서에서 “스트레스”는 식물에 대한 비생물적 스트레스일 수 있으며, 구체적으로 비생물적 스트레스는 건조 스트레스일 수 있다. In the present specification, “stress” may be an abiotic stress for plants, and specifically, the abiotic stress may be drying stress.

용어 "비생물적 스트레스"는 특정 환경에서 살아있는 유기체에 대한 비생물적 스트레스 인자의 부정적 영향으로서 그의 통상의 의미로 본원에서 사용되며, 따라서 식물과 관련하여 특정 환경에서 식물에 대한 비생물적 스트레스 인자의 부정적 영향을 의미한다. The term "abiotic stress" is used herein in its usual sense as the adverse effect of an abiotic stressor on living organisms in a particular environment, and thus in relation to plants, an abiotic stressor on a plant in a particular environment. means the negative impact of

생물적 스트레스는 진균 또는 유해 곤충과 같은 살아있는 방해물을 포함하는 반면에, 비생물적 스트레스 인자는 자연 발생적인 것 또는 인간이 만든 것일 수 있고, 온도, 건조 토양, 삼투 스트레스, 가뭄, 염 또는 영양분 결핍을 포함하며, 이들은 모두 영향을 받은 영역에서 식물에게 해를 유발할 수 있다. Biological stressors include living disturbances such as fungi or harmful insects, whereas abiotic stressors can be naturally occurring or man-made, and include temperature, dry soil, osmotic stress, drought, salt or nutrient deprivation. , all of which can cause harm to plants in the affected area.

본 발명의 미생물 제제는 식물의 건조 스트레스를 저감시킬 수 있으며, 상기 식물은 양파일 수 있다. The microbial agent of the present invention can reduce the drying stress of plants, and the plants may be onions.

본 발명은 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제를 제공하며, 상기 미생물 제제를 이용하여, 식물의 건조 스트레스 저감 효과를 제공하는 방법을 제공한다.The present invention provides a microbial preparation comprising a Bacillus altitudinis H5-9 strain, a culture solution of the strain or a mixture thereof as an active ingredient, and using the microbial preparation, the drying stress reduction effect of plants provide a way to provide

본 발명에서 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주는 2019년 10월 14일자로 국립농업과학원에 미생물을 기탁하였으며, 수탁 번호로 KACC 92279P를 부여받았다.In the present invention, the Bacillus altitudinis H5-9 strain was deposited with the National Institute of Agricultural Sciences as of October 14, 2019, and was given KACC 92279P as the accession number.

도 1은 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주의 자이레이스(gyrase) 유전자 염기서열을 분석하여 균주의 계통도를 나타낸 것이다.1 is a phylogenetic diagram of the strain by analyzing the gyrase gene sequence of the Bacillus altitudinis H5-9 strain.

상기 유전자의 염기서열은 서열번호 1로 표시된다.The nucleotide sequence of the gene is represented by SEQ ID NO: 1.

본 발명에서의 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주는 상기 서열번호 1로 표시되는 유전자 염기서열을 포함할 수 있다.The Bacillus altitudinis H5-9 strain in the present invention may include the gene sequence represented by SEQ ID NO: 1.

본 발명의 미생물 제제는 상술한 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액, 또는 이들의 혼합물에 당해 분야에서 식물의 건조 스트레스를 저감시키는 것으로 사용되는 다른 임의의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 일례로, 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 및 식물 영양제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 그러나 이에 한정되는 것은 아니다.The microbial preparation of the present invention is added to the above-mentioned Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinis ) H5-9 strain, a culture solution of the strain, or a mixture thereof, and other optional components used in the art to reduce drying stress of plants. can be included with For example, at least one selected from the group consisting of plant growth regulators, plant growth stimulants, and plant nutrients may be further included. However, it is not limited thereto.

상기 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 또는 식물 영양제는 화학물질 또는 박테리아의 또 다른 균주 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 이에 더해, 제초제, 살균제, 살충제, 비료를 더 포함할 수도 있다. 그러나 이에 한정되는 것은 아니다.The plant growth regulator, plant growth stimulant or plant nutrient may be a chemical or another strain of bacteria or any combination thereof. In addition, it may further contain herbicides, fungicides, pesticides, and fertilizers. However, it is not limited thereto.

상기 식물 성장 조절제에는 유익한 다른 미생물들, 미생물 활성물질 및 유기 비료가 포함될 수 있다. 이에 더해, 화학비료가 포함될 수 있다. 그러나 이에 한정되는 것은 아니다.The plant growth regulator may include other beneficial microorganisms, microbial activators and organic fertilizers. In addition, chemical fertilizers may be included. However, it is not limited thereto.

상기 유익한 다른 미생물들에는 기존에 식물 생육을 증진시키는 것으로 알려진 바실러스 종(Bacillus spp.), 아조토박터 종(Azotobacter spp.), 트리코데르마 종(Trichoderma spp.) 및/또는 사카로미세스 종(Saccharomyces spp.)이 포함될 수 있다. 그러나 상기 미생물 종에 한정되는 것은 아니다.Other beneficial microorganisms include Bacillus spp., Azotobacter spp., Trichoderma spp . ) and/or Saccharomyces spp. Saccharomyces spp . ) may be included. However, it is not limited to the above microbial species.

상기 미생물 활성물질에는 효소 전구물질, 미생물 대사물질, 유기산, 탄수화물, 효소 및/또는 미량원소 등이 포함될 수 있다. 예를 들면, 미생물 활성물질에는 효모 자가용해질과 같은 가공된 효소 산물, 부식질(지표 및 땅 속에 존재하는 생물 이외의 유기물) 재료들, 해초 추출물, 전분, 아미노산, 그리고 아연, 철, 구리, 망간, 브롬, 몰리브덴과 같은 미량원소 등이 포함될 수 있다. 그러나 상기 미량원소에 한정되는 것은 아니다.The microbial active material may include enzyme precursors, microbial metabolites, organic acids, carbohydrates, enzymes, and/or trace elements. For example, microbial active substances include processed enzyme products such as yeast autolysates, humic (non-terrestrial and subsurface organic matter) materials, seaweed extracts, starch, amino acids, and zinc, iron, copper, manganese, Trace elements such as bromine and molybdenum may be included. However, it is not limited to the trace elements.

유익한 다른 미생물들, 미생물 활성물질 그리고 유기 비료는 상기에서 설명된 것과 동일할 수 있다. 화학비료에는 식물 생육을 지원하기 위하여 질소, 인, 및 칼륨 영양소를 제공할 수 있는 다양한 화학물질이 포함될 수 있다. 예를 들면, 화학비료에는 요소, 인산칼슘, 인산칼륨 및 혼합형 질소-인산-칼륨(N-P-K) 비료가 포함될 수도 있다. 화학비료에는 해당분야에 공지된 다른 재료들도 포함될 수 있다.Other beneficial microorganisms, microbial activators and organic fertilizers may be the same as described above. Chemical fertilizers can include a variety of chemicals that can provide nitrogen, phosphorus, and potassium nutrients to support plant growth. For example, chemical fertilizers may include urea, calcium phosphate, potassium phosphate and mixed nitrogen-phosphate-potassium (N-P-K) fertilizers. Chemical fertilizers may also include other materials known in the art.

상기 유익한 다른 미생물들에는 기존에 식물 생육을 증진시키는 것으로 알려진 바실러스 종(Bacillus spp.), 아조토박터 종(Azotobacter spp.), 트리코데르마 종(Trichoderma spp.) 및/또는 사카로미세스 종(Saccharomyces spp.)이 포함될 수 있다. 그러나 상기 미생물 종에 한정되는 것은 아니다.Other beneficial microorganisms include Bacillus spp., Azotobacter spp., Trichoderma spp . ) and/or Saccharomyces spp. Saccharomyces spp . ) may be included. However, it is not limited to the above microbial species.

본 발명은 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 식물, 식물 주변 영역 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 식물 종자의 생육 증진 방법을 제공한다. 상기 식물은 양파일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The present invention is Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinis ) H5-9 strain, a culture medium of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient any one or more selected from the group consisting of a microbial agent selected from the plant, the area around the plant, or both of them It provides a method for enhancing the growth of plant seeds comprising the step of treating. The plant may be an onion, but is not limited thereto.

본 발명은 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 식물, 식물 주변 영역 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 식물의 건조 스트레스 저감 방법을 제공한다. 상기 식물은 양파일 수 있다. The present invention is Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinis ) H5-9 strain, a culture medium of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient any one or more selected from the group consisting of a microbial agent selected from the plant, the area around the plant, or both of them It provides a method for reducing drying stress of plants comprising the step of treating. The plant may be an onion.

구체적으로 상기 처리하는 단계는, 상기 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주, 상기 균주를 배양한 배양액 및 상기 균주를 이용한 미생물 제제를 종자나 식물에 침지하거나 관주 또는 분무하여 수행할 수 있다. 침지하는 방법의 경우, 배양액 및 제제를 식물체 주변의 토양에 관주 또는 종자를 배양액 및 미생물 제제에 담가 접종할 수 있다. 그러나 상기 접종 방법에 한정되는 것은 아니다.Specifically, the treatment step may be performed by immersing, drenching, or spraying the Bacillus altitudinis H5-9 strain, a culture solution in which the strain is cultured, and a microbial preparation using the strain to a seed or plant. . In the case of the immersion method, the culture solution and the preparation may be inoculated by drenching the soil around the plant or by immersing the seed in the culture solution and the microbial preparation. However, it is not limited to the above inoculation method.

본 발명의 방법은 미생물 제제를 식물의 수명 주기 동안 임의의 시점에, 식물의 수명 주기의 하나 이상의 단계 동안, 또는 식물의 수명 주기에서 정기적인 간격으로, 또는 식물의 수명 전체에 걸쳐 계속적으로 적용하는 것을 포함한다. 따라서 미생물 제제는 필요에 따라 적용될 수 있다. 예를 들어 미생물 제제는 식물에게 성장 동안, 개화 전 및/또는 개화하는 동안, 및/또는 종자 발생 전 및/또는 종자가 발생하는 동안 적용될 수 있다. 일례로, 미생물 제제는 식물이 한 위치에서 또 다른 위치로, 예컨대 온실 또는 온상에서 필드로 이식되기 전, 동안 및/또는 직후에 적용될 수 있다. 또 다른 일례로, 각각의 미생물 제제는 식물에 원하는 간격 기간으로 다수 회 적용될 수 있다.The method of the present invention is a method of applying a microbial preparation at any time during the life cycle of a plant, during one or more phases of the life cycle of a plant, or at regular intervals in the life cycle of a plant, or continuously throughout the life cycle of a plant. include that Therefore, microbial preparations can be applied as needed. For example, the microbial preparation may be applied to the plant during growth, before and/or during flowering, and/or before seed development and/or during seed development. In one example, the microbial preparation may be applied before, during and/or immediately after the plant is transplanted from one location to another location, such as in a greenhouse or hotbed, into the field. In another example, each microbial preparation can be applied to the plant multiple times with a desired interval period.

상기 식물체 주변의 토양과 관련하여, 본 발명이 적용되는 주변 영역이란, 본 발명의 미생물 제제가 효과를 발휘할 수 있는 범위를 의미하는 것으로, 지상 및 지하를 모두 포함한다. 예를 들어 식물, 식물 부분 또는 과실 주위의 약 2m 이내, 약 1m 이내, 약 70㎝이내, 약 50㎝ 이내, 약 25㎝ 이내, 약 10㎝ 이내 또는 약 5㎝ 이내의 영역일 수 있다. 그러나 상기 영역에 한정되는 것은 아니다.Regarding the soil around the plant, the surrounding area to which the present invention is applied means a range in which the microbial agent of the present invention can exert an effect, and includes both ground and underground areas. For example, it may be an area within about 2 m, within about 1 m, within about 70 cm, within about 50 cm, within about 25 cm, within about 10 cm, or within about 5 cm around a plant, plant part or fruit. However, it is not limited to the above area.

상기 식물의 건조 스트레스 저감 방법은 나무, 허브, 관목, 목초, 덩굴, 양치식물, 이끼, 녹조류, 외떡잎 식물, 및 쌍떡잎 식물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물의 건조 스트레스를 저감시키는 방법이다. 상기 식물은 일 실시예로서, 본 발명의 양파일 수 있다. The drying stress reduction method for plants is a method for reducing the drying stress of at least one plant selected from the group consisting of trees, herbs, shrubs, grasses, vines, ferns, moss, green algae, monocotyledonous plants, and dicotyledonous plants. As an embodiment, the plant may be the onion of the present invention.

본 발명이 적용되는 식물의 부위는 제한되지 않는다. 따라서, 식물 전체는 물론, 식물의 부분 예를 들어 씨앗, 새순, 줄기, 뿌리, 잎, 과실, 이들의 전체는 물론 이들의 일부를 모두 포함한다.The part of the plant to which the present invention is applied is not limited. Thus, it includes the entire plant as well as parts of the plant, such as seeds, shoots, stems, roots, leaves, and fruits, all of these as well as parts thereof.

본 발명에서는 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 및 식물 영양제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 더 포함하는 미생물 제제 중 적어도 하나를, 식물, 식물 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 식물 종자의 생육 증진 방법을 제공한다. 상기 식물은 양파일 수 있다. In the present invention, a plant seed comprising the step of treating the plant, the area around the plant, or both of them with at least one of a microbial agent further comprising at least one selected from the group consisting of a plant growth regulator, a plant growth stimulant, and a plant nutrient. It provides a growth promotion method. The plant may be an onion.

이하, 실험예를 통해서 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. 하지만, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 실험예로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through experimental examples. However, these are only for explaining the present invention in more detail and the scope of the present invention is not limited to experimental examples.

실험예 1: 바실러스 알티투디니스(Experimental Example 1: Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 동정 ) Identification of strain H5-9

바실러스 알티투디니스 H5-9 균주의 계통분류학적 위치와 동정은 gyrase 유전자 염기서열 분석을 이용하였다. 염기서열 유사도는 이지탁손(EzTaxon)으로 분석하였고, 계통도의 작성을 위해 SINA 어레이너(SINA aligner) v1.2.11로 염기서열을 정렬하고 염기서열 길이를 맞추었다. 이후, 메가(MEGA) 6.0 프로그램으로 계통학(Neighbor-joining) 알고리즘을 사용하여 계통도를 작성하였으며, 계통도의 안정성은 1000회 부트스트래핑(bootstrapping)을 수행하여 확인하였다. 상기 유전자의 염기서열은 서열번호 1로 표시된다.The phylogenetic location and identification of Bacillus altitudinis H5-9 strains were analyzed using gyrase gene sequencing. The nucleotide sequence similarity was analyzed with EzTaxon, and the nucleotide sequence was aligned with SINA aligner v1.2.11 to create a phylogeny, and the length of the nucleotide sequence was matched. Thereafter, a genealogy was created using a neighbor-joining algorithm with the MEGA 6.0 program, and the stability of the genealogy was confirmed by performing bootstrapping 1000 times. The nucleotide sequence of the gene is represented by SEQ ID NO: 1.

도 1은 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주의 자이레이스(gyrase) 유전자 염기서열을 분석하여 균주의 계통도를 나타낸 것이다.1 is a phylogenetic diagram of the strain by analyzing the gyrase gene sequence of the Bacillus altitudinis H5-9 strain.

계통분석 결과 H5-9 균주는 자이레이스(gyrase) 유전자 염기서열에서 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) 41kf2bT (표준 균주)와 99.8% 유사성을 갖기 때문에 H5-9 균주를 바실러스 알티투디니스로 동정하였다.As a result of phylogenetic analysis, strain H5-9 had 99.8% similarity with Bacillus altitudinis 41kf2b T (standard strain) in the gyrase gene sequence, so strain H5-9 was identified as Bacillus altitudinis. .

실험예 2 : 바실러스 알티투디니스(Experimental Example 2: Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 옥신 생성능) Auxin production ability of strain H5-9

바실러스 알티투디니스 H5-9 균주의 옥신 생성능을 평가하기 위하여, H5-9 균주를 28ºC의 TSB(Tryptic soy broth) 배지에서 24시간 동안 배양한 후, 원심분리를 통해 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주만을 회수하고, 회수한 균주를 /2 TSB(Tryptic soy broth) 배지에 트립토판 100 μg/ml을 첨가한 배지에 24시간 동안 배양하였다. 이 후 4000 rpm으로 10분간 원심분리한 후, 40 μl의 상청액을 80 μl의 살코우스키(Salkowski) 용액(35% perchloric acid, 1ml의 0,5 M FeCl3)에 혼합하였다. 이후 2 μl의 10 mM 인산(phosphoric acid)(1/40 희석)을 첨가하여 10℃에서 24시간동안 배양한 후, 흡광도 530 nm에서 옥신 생성능을 측정하여 평가하였다.In order to evaluate the auxin-producing ability of the Bacillus altitudinis H5-9 strain, the H5-9 strain was cultured in TSB (Tryptic soy broth) medium at 28ºC for 24 hours, and then the Bacillus altitudinis H5-9 strain was subjected to centrifugation. Only the recovered strain was cultured for 24 hours in a medium in which 100 μg/ml of tryptophan was added to /2 TSB (Tryptic soy broth) medium. After centrifugation at 4000 rpm for 10 minutes, 40 μl of the supernatant was mixed with 80 μl of Salkowski's solution (35% perchloric acid, 1 ml of 0,5 M FeCl 3 ). Thereafter, 2 μl of 10 mM phosphoric acid (1/40 dilution) was added and incubated at 10° C. for 24 hours, and then the auxin generating ability was measured and evaluated at an absorbance of 530 nm.

실험예 3 : 바실러스 알티투디니스(Experimental Example 3: Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 인산 가용화능) Phosphoric acid solubilization ability of strain H5-9

바실러스 알티투디니스 H5-9 균주의 인산가용화능을 평가하기 위하여, 상기와 같이 배양한 후 PVK(Pikovskaya) 배지(glucose 10 g, Ca3(PO4)2 5 g, (NH4)2SO4 0.5 g, NaCl 0.2 g, MgSO4.7H2O 0.1 g, KCl 0.2 g, 효모 추출물 0.5 g, MnSO4.H2O 0.002 g, FeSO4.7H2O 0.002 g, Agar 15.0 g, 증류수 1000 ml, bromo-phenol-blue 0.025 g, pH 7.0)에서 2주 동안 배양하여 환형이 형성되는지 평가하였다.In order to evaluate the phosphate solubilization ability of the Bacillus altitudinis H5-9 strain, after culturing as described above, PVK (Pikovskaya) medium (glucose 10 g, Ca 3 (PO 4 ) 2 5 g, (NH 4 ) 2SO 4 0.5 g, NaCl 0.2 g, MgSO 4.7H 2 O 0.1 g, KCl 0.2 g, yeast extract 0.5 g, MnSO 4 .H 2 O 0.002 g, FeSO 4 .7H 2 O 0.002 g, Agar 15.0 g, distilled water 1000 ml, Bromo-phenol-blue 0.025 g, pH 7.0) was cultured for 2 weeks to evaluate whether an annulus was formed.

실험예 4 :Experimental Example 4: 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid) 탈 아미노 효소활성능) ACC (1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid) deaminase activity of strain H5-9

ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid) 탈 아미노 효소 활성능을 평가하기 위하여, 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 상기와 같이 배양한 후 DF(Dworkin and Foster) 최소배지에 ACC(30 μmol/plate)를 도말하고 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주 현탁액을 한방울 떨어뜨려 생육 여부를 평가하였다.In order to evaluate the activity of 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid (ACC) deamination enzyme, the Bacillus altitudinis H5-9 strain was cultured as described above, and then ACC (30 μmol/min) was added to DF (Dworkin and Foster) minimal medium. plate) was smeared and Bacillus altitudinis H5-9 strain suspension was dropped one drop to evaluate growth.

실험예 5 : 바실러스 알티투디니스(Experimental Example 5: Bacillus altitudinis ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 시드로포아 생성능) Seedrophore-producing ability of strain H5-9

시드로포아 생성능을 평가하기 위하여, H5-9 균주를 상기와 같이 배양한 후, CAS 디퓨젼 에세이(diffusion assay)로 측정하여 평가하였다. 15.125 mg의 크롬 아주롤 S(chrome azurol S)를 12.5ml 탈이온수(DW; deionized water)에 용해 2.5 ml의 철(Ⅲ용액(Iron(Ⅲ) (1 mM FeCl3 6H2O, 10 mM HCl)를 혼합하고 10 ml의 탈이온수에 18.225 mg의 HDTMA(Hexadecyl-trimethylammonium)를 혼합한 수용액을 천천히 혼합하여 혼합용액 A를 만들고, 187.5 ml의 탈이온수와 3.38 g의 한천 7.56 g의 파이퍼(Pipers), 10 mM의 NaOH를 혼합한 후 pH 6.8로 조정하여 혼합용액 B를 제조하였다. 상기 혼합용액 A와 혼합용액 B를 혼합한 후, 분주하여 CAS(chrome azurol S) 배지를 제조 후, 멸균된 메스을 이용하여 배지를 2등분 하여 한쪽을 제거하고, TSA(Tryptic soy agar) 배지를 분주하여 배지를 제조하였다. TSA면에 H5-9 균주를 접종하여 28℃배양기에 10일간 배양하고 CAS 배지가 청색에서 황색으로 변색되는 부분의 길이를 측정하였다.In order to evaluate the seed pore-producing ability, the H5-9 strain was cultured as described above, and then measured and evaluated by CAS diffusion assay. 15.125 mg of chrome azurol S was dissolved in 12.5 ml of deionized water (DW) and 2.5 ml of iron (III) (1 mM FeCl 3 6H 2 O, 10 mM HCl) and slowly mix an aqueous solution of 18.225 mg of HDTMA (Hexadecyl-trimethylammonium) in 10 ml of deionized water to make mixed solution A, 187.5 ml of deionized water, 3.38 g of agar, 7.56 g of Pipers, After mixing 10 mM NaOH, the pH was adjusted to 6.8 to prepare Mixed Solution B. Mixed Solution A and Mixed Solution B were mixed, and then dispensed to prepare a CAS (chrome azurol S) medium, using a sterilized scalpel. The medium was divided into two parts, one side was removed, and TSA (Tryptic soy agar) medium was dispensed to prepare the medium. The TSA side was inoculated with the H5-9 strain and cultured in an incubator at 28 ° C for 10 days, and the CAS medium turned from blue to yellow. The length of the discolored part was measured.

하기 표 1은 실험예 2 내지 실험예 5의 실험결과를 나타낸 것으로서, 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주의 생리화학적 특성을 요약하여 나타낸 표이다.Table 1 below shows the experimental results of Experimental Examples 2 to 5, and is a table summarizing the physiochemical characteristics of the Bacillus altitudinis H5-9 strain.

구분division 특성characteristic 작물 생육촉진 관련 특성Characteristics related to crop growth promotion 옥신류 생성production of auxins ++ ACC 탈 아미노 효소활성능ACC deaminase activity ++ 인산가용화phosphoric acid solubilization ++ 시드로포아Seedropore -- 형태학적 특성Morphological characteristics 세포크기(직경~폭)Cell size (diameter to width) 0.67±0.13
0.378±0.07
0.67±0.13
0.378±0.07
콜로니 크기(3일 배양)Colony size (3-day culture) 0.972±0.040.972±0.04 콜로니 색colony color 흰색White 생육환경growth environment 생육온도 범위Growth temperature range 15℃℃15℃℃ NaCl 내성NaCl resistant 1%-10%1%-10% 탄소 이용능carbon availability CaseinCasein ++ Starch, Lipid(Tributyrin)Starch, Lipid (Tributyrin) -- 기타Etc Catalase, Oxidase 활성Catalase, Oxidase activity ++

실험예 6 : 온실 조건에서 바실러스 알티투디니스(Experimental Example 6: Bacillus altitudinis in greenhouse conditions ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 양파 건조 내성 증진 효과) Onion drying tolerance enhancement effect of strain H5-9

온실 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 후, 양파의 생육 증진 효과를 확인하기 위해 양파 종자(품종 : 천주중고황)를 상토가 담긴 9cm 플라스틱 포트에 파종한 후 온실에서 약 2주 동안 재배하였다. 2엽이 나올 때 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주 현탁액(OD600=0.25) 20 ml를 관주 처리하고, 2달간 재배하였다. 건조 스트레스 조건의 경우 상기 표기된 바와 같이 2주간 재배 및 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주 현탁액 처리 후, 4일 후 40중량%의 폴리에틸렌글리콜-6000(PEG-6000)으로 건조 스트레스를 유발하였고, 3주 후 양파의 생체중을 측정하였다.After drenching the Bacillus altitudinis H5-9 strain under greenhouse conditions, onion seeds (variety: Quanju Junggohwang) were sown in 9cm plastic pots filled with soil to confirm the effect of onion growth promotion, and then about 2 grown for weeks. When 2 leaves appeared, 20 ml of Bacillus altitudinis H5-9 strain suspension (OD 600 = 0.25) was drenched and cultivated for 2 months. In the case of drying stress conditions, drying stress was induced with 40% by weight of polyethylene glycol-6000 (PEG-6000) after 2 weeks of cultivation and Bacillus altitudinis H5-9 strain suspension treatment as indicated above, 4 days later, and 3 weeks After that, the live weight of the onion was measured.

도 2a는 온실 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 생육 증진 효과를 나타낸 것이고, 도 2b는 온실 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 건조 내성 효과를 나타낸 것이다(Con(P)는 건조 스트레스를 가한 대조군, Con(N)은 건조 스트레스를 가하지 않은 대조군).Figure 2a shows the growth promoting effect of onion inoculated with control onion and Bacillus altitudinis H5-9 strain in greenhouse conditions, and Figure 2b shows onion inoculated with control onion and Bacillus altitudinis H5-9 strain in greenhouse conditions. It shows the effect of drying resistance (Con (P) is a control group applied with drying stress, Con (N) is a control group without application of drying stress).

실험 결과, 온실 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 생체중은 3.0g이고 대조군 양파의 생체중은 2.45g이다. 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 생체중은 대조군 양파의 생체중과 비교하여 통계적으로 유의하게 약 23.1% 증가하였다.As a result of the experiment, the live weight of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain in greenhouse conditions was 3.0 g, and the live weight of the control onion was 2.45 g. The live weight of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain was statistically significantly increased by about 23.1% compared to that of the control onion.

양파에 건조 스트레스를 유발한 조건에서는 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 생체중이 0.5g이고, 대조군 양파(Con(P))의 생체중은 0.44g이다. 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 생체중은 대조군 양파의 생체중과 비교하여 통계적으로 유의하게 약 14.5% 증가하였다.Under the condition of causing drying stress to the onion, the live weight of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain was 0.5 g, and the live weight of the control onion (Con(P)) was 0.44 g. The live weight of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain was statistically significantly increased by about 14.5% compared to that of the control onion.

실험예 7 : 비닐하우스 조건에서 바실러스 알티투디니스(Experimental Example 7: Bacillus altitudinis under vinyl house conditions ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 양파 건조 내성 증진 효과) Onion drying tolerance enhancement effect of strain H5-9

비닐하우스 재배 조건에서 H5-9 균주를 관주 처리한 후 자연 건조 조건에서 양파 생육을 측정하였다. 양파(품종: 카타마루)를 스티로폼 상자(내경 기준 가로 49.5 X 31 X 22 cm, 토양 25 kg)에 파종한 후 비닐하우스에서 재배하였다. 이식 1달간 적응기간을 거친 후 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주 현탁액(OD600=0.5 기준 1/100) 45 ml를 관주 처리하고, 이 후 4주 동안 양파를 건조한 조건에서 스트레스를 가한 후 양파의 수확량(g)과 직경(mm)을 측정하였다.Onion growth was measured under natural drying conditions after drenching the H5-9 strain under greenhouse cultivation conditions. Onions (variety: Katamaru) were sown in a Styrofoam box (49.5 X 31 X 22 cm in inner diameter, 25 kg of soil) and then grown in a vinyl house. After a month of adaptation to transplantation, 45 ml of Bacillus altitudinis H5-9 strain suspension (OD 600 = 0.5 standard 1/100) was drenched, and after that, onions were stressed under dry conditions for 4 weeks, and then onions were Yield (g) and diameter (mm) were measured.

도 3a는 비닐하우스 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 수확량(g)을 나타낸 것이고, 도 3b는 비닐하우스 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 구 직경(mm)을 나타낸 것이다. Figure 3a shows the yield (g) of onions inoculated with control onions and Bacillus altitudinis H5-9 strains in greenhouse conditions, and Figure 3b shows control onions and Bacillus altitudinis H5-9 strains in greenhouse conditions. It shows the sphere diameter (mm) of the inoculated onion.

실험 결과, 비닐하우스 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 수확량(g)은 4.2g이고, 대조군 양파(CD; Control(Drought)의 수확량은 3.6g이다. 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 수확량은 대조군 양파의 수확량과 비교하여 약 16% 증가하였다.As a result of the experiment, the yield (g) of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain in the greenhouse conditions was 4.2 g, and the yield of the control (CD; Control (Drought)) was 3.6 g. Bacillus altitudinis The yield of onions drenched with the H5-9 strain increased by about 16% compared to that of the control group.

비닐하우스 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 구 직경(mm)은 54mm이고, 대조군 양파(CD; Control(Drought)의 수확량은 50.5mm이다. 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 수확량은 대조군 양파의 수확량과 비교하여 약 7% 증가하였다.The bulb diameter (mm) of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain in the greenhouse conditions was 54 mm, and the yield of the control (CD; Control (Drought)) was 50.5 mm. Bacillus altitudinis H5-9 The yield of onion drenched with the strain was increased by about 7% compared to the yield of control onion.

도 4a는 비닐하우스 조건에서 수분을 공급한 대조군 양파를 나타낸 사진이고, 도 4b는 비닐하우스 조건에서 수분을 공급하지 않은 대조군 양파를 나타낸 사진이며, 도 4c는 비닐하우스 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파를 나타낸 사진이다.Figure 4a is a photograph showing the control onion supplied with water in the greenhouse conditions, Figure 4b is a photograph showing the control onion not supplied with water in the greenhouse conditions, Figure 4c is a Bacillus altitudinis H5- in the greenhouse conditions It is a photograph showing onions inoculated with 9 strains.

실험예 8 : 노지 포장 조건에서 바실러스 알티투디니스(Experimental Example 8: Bacillus altitudinis in open field conditions ( Bacillus altitudinisBacillus altitudinis ) H5-9 균주의 양파 수확량 및 구 직경 증진 효과) Onion yield and bulb diameter enhancement effect of strain H5-9

노지 포장 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 후 생육을 측정하였다. 노지에서 양파(품종: 카타마루)를 경엽신장기까지 재배한 후 1주 간격으로 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주 현탁액(OD600=0.5 기준 1/100) 45 ml를 관주 처리하고, 수확기에 양파 수확량과 양파의 직경을 측정하였다.Growth was measured after perfusion treatment with Bacillus altitudinis H5-9 strain in open field conditions. After cultivating onions (variety: Katamaru) in the open field until the foliage extension period, 45 ml of Bacillus altitudinis H5-9 strain suspension (OD 600 = 0.5 standard 1/100) was drenched every 1 week, and onion yield at harvest time and onion diameters were measured.

도 5는 노지 포장 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 수확량(g)을 나타낸 것이다.Figure 5 shows the yield (g) of onions inoculated with control onions and Bacillus altitudinis H5-9 strains in open field conditions.

실험 결과, 노지 포장 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 수확량(g)은 10.2kg/10a이고, 대조군 양파의 수확량은 9.2kg/10a이다. 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 수확량은 대조군 양파의 수확량과 비교하여 약 11% 증가하였다.As a result of the experiment, the yield (g) of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain in open field conditions was 10.2 kg / 10a, and the yield of the control onion was 9.2 kg / 10a. The yield of onions drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain increased by about 11% compared to the yield of the control onion.

노지 포장 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 구직경(mm)은 1650mm이고, 대조군 양파의 구직경은 1587mm이다. 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 관주 처리한 양파의 구직경은 대조군 양파의 구직경과 비교하여 약 4% 증가하였다.The spherical diameter (mm) of the onion drenched with Bacillus altitudinis H5-9 strain in open field conditions was 1650 mm, and the spherical diameter of the control onion was 1587 mm. The bulb diameter of the onion drenched with the Bacillus altitudinis H5-9 strain was increased by about 4% compared to that of the control onion.

도 6a는 노지 포장 조건에서 대조군 양파를 나타낸 사진이고, 도 6b는 노지 포장 조건에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파를 나타낸 사진이다.Figure 6a is a photograph showing a control onion in open-field packaging conditions, Figure 6b is a photograph showing onions inoculated with Bacillus altitudinis H5-9 strain in open-field packaging conditions.

상기와 같이 노지 포장 조건에서 재배한 양파의 상품성을 '국립농산물품질관리원고시 제 2018-44호(19.1.1.)'에 따라, 양파의 지름이 6cm 미만인 경우 소형, 6cm 내지 8cm인 경우 중형, 8cm 내지 9cm 인 경우 대형, 9cm 이상인 경우 특대형로 구분하였다.According to the 'National Agricultural Products Quality Management Notice No. 2018-44 (19.1.1.)', the marketability of onions grown in open-field packaging conditions as described above is small if the diameter of the onion is less than 6cm, medium if it is 6cm to 8cm, If it is 8 cm to 9 cm, it is classified as large, and if it is more than 9 cm, it is classified as extra large.

도 7은 노지 포장 조건에서 대조군 양파와 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종한 양파의 상품성 증진 효과를 나타낸 것이다.Figure 7 shows the marketability enhancement effect of onions inoculated with control onions and Bacillus altitudinis H5-9 strains in open field conditions.

노지 포장에서 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종하여 양파를 재배한 경우, 10%가 소형, 85%가 중형, 5%가 대형으로 분류되었다. 이와 달리, 대조군의 경우, 23%가 소형, 77%가 중형으로 분류되었으며, 대형으로 분류된 양파는 존재하지 않았다. 이를 통해, 바실러스 알티투디니스 H5-9 균주를 접종하여 양파를 재배한 경우, 양파의 상품성이 크게 증가한다는 점을 확인하였다.When onions were grown by inoculating Bacillus altitudinis H5-9 strains in the open field, 10% were classified as small, 85% as medium, and 5% as large. In contrast, in the case of the control group, 23% were classified as small and 77% as medium, and there were no onions classified as large. Through this, it was confirmed that when the onion was grown by inoculating the Bacillus altitudinis H5-9 strain, the marketability of the onion greatly increased.

국립농업과학원National Academy of Agricultural Sciences KACC92279PKACC92279P 2019101420191014

<110> REPUBLIC OF KOREA, REPUBLIC OF KOREA <120> PROMOTES ONION GROWTH AND DROUGHT TOLERANCE BY BACILLUS ALTITUDINIS H5-9 AND USES THEREOF <130> FP-2010063-KR <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1272 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Bacillus altitudinis H5-9 gyrB <400> 1 actagtgatt agagggtacg gatgtgcgag ccgtcgacat cggcatcggt catgatcaca 60 attttgtgat aacgtgcttt ctctaaagtg aagtcttctc cgattccagt ccctagcgct 120 gtaatcattg aacgaacctc gttgttagat aaaattttat ctagtcgtgc tttttcaacg 180 tttaggatct tccctcttaa cggtaagatc gcttggaaat gtcgatcacg accttgctta 240 gcagatccgc ccgcagaatc tccctctacg atataaagct cagagatgga aggatcttta 300 gaagaacagt ctgccagttt cccaggcaag ctagagactt ccagtgcact tttacgtctt 360 gtcagctcac gtgccttttt ggcagccatt cttgcacgag ctgccatcac acctttctcc 420 acaattttct ttgcagcatc agggttctct aagaggaatt tctcaagtgc ttcggagaag 480 agggagtcgg taatggttct tgcttctgag ttaccgagct ttgtcttcgt ttgtccttcg 540 aattgagggt ctggatgttt gatagagata atggctgcta agccttctcg tacatcttct 600 ccgctcaaat tcgagtcacc atcttcgaat acgccatttt tacgagcata atcattgatg 660 acacgcgtca gaccggtttt aaagccagct tcgtgtgatc cgccttcata tgtgttgatg 720 ttgttggcga aagaataaat attgcttgta taggaatcgt tgtattgcag tgtaacttta 780 acggtgactc cgtctttttc accctcgatg taaactggtt cttcatgaac gacttccttc 840 gagcgattca aatgttctac atagctctta ataccgcctt catagcagta ttcgtttctt 900 cgctctttgc cttcacgtaa gtcttcaatg atgatgttga cgccttttgt taagaaagct 960 aactcacgta cacggttagc aagtgtgtcg taatcaaatt caatggtttc agtgaaaatt 1020 tctggatctg gcacaaaatg agtggttgtc cctgttacat ctgtttcacc aatgatctct 1080 aaatctccaa ctggaacacc gcgtttgaat tgttgataat gaattttccc atcacggtat 1140 acagtcacgt ctaaggtcct agataacgca ttaacaacag atgcccctac gccatgcaaa 1200 ccgccagata ctttataacc gctgccgccg aatttcccac ctgcgtgcag aacggtcatg 1260 atgacttcaa tc 1272 <110> REPUBLIC OF KOREA, REPUBLIC OF KOREA <120> PROMOTES ONION GROWTH AND DROUGHT TOLERANCE BY BACILLUS ALTITUDINIS H5-9 AND USES THEREOF <130> FP-2010063-KR <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1272 <212> DNA <213> unknown <220> <223> Bacillus altitudinis H5-9 gyrB <400> 1 actagtgatt agagggtacg gatgtgcgag ccgtcgacat cggcatcggt catgatcaca 60 attttgtgat aacgtgcttt ctctaaagtg aagtcttctc cgattccagt ccctagcgct 120 gtaatcattg aacgaacctc gttgttagat aaaattttat ctagtcgtgc tttttcaacg 180 tttaggatct tccctcttaa cggtaagatc gcttggaaat gtcgatcacg accttgctta 240 gcagatccgc ccgcagaatc tccctctacg atataaagct cagagatgga aggatcttta 300 gaagaacagt ctgccagttt cccaggcaag ctagagactt ccagtgcact tttacgtctt 360 gtcagctcac gtgccttttt ggcagccatt cttgcacgag ctgccatcac acctttctcc 420 acaattttct ttgcagcatc agggttctct aagaggaatt tctcaagtgc ttcggagaag 480 agggagtcgg taatggttct tgcttctgag ttaccgagct ttgtcttcgt ttgtccttcg 540 aattgagggt ctggatgttt gatagagata atggctgcta agccttctcg tacatcttct 600 ccgctcaaat tcgagtcacc atcttcgaat acgccatttt tacgagcata atcattgatg 660 acacgcgtca gaccggtttt aaagccagct tcgtgtgatc cgccttcata tgtgttgatg 720 ttgttggcga aagaataaat attgcttgta taggaatcgt tgtattgcag tgtaacttta 780 acggtgactc cgtctttttc accctcgatg taaactggtt cttcatgaac gacttccttc 840 gagcgattca aatgttctac atagctctta ataccgcctt catagcagta ttcgtttctt 900 cgctctttgc cttcacgtaa gtcttcaatg atgatgttga cgccttttgt taagaaagct 960 aactcacgta cacggttagc aagtgtgtcg taatcaaatt caatggtttc agtgaaaatt 1020 tctggatctg gcacaaaatg agtggttgtc cctgttacat ctgtttcacc aatgatctct 1080 aaatctccaa ctggaacacc gcgtttgaat tgttgataat gaattttccc atcacggtat 1140 acagtcacgt ctaaggtcct agataacgca ttaacaacag atgcccctac gccatgcaaa 1200 ccgccagata ctttataacc gctgccgccg aatttccac ctgcgtgcag aacggtcatg 1260 atgacttcaa tc 1272

Claims (13)

양파의 건조 스트레스 저감용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P).Bacillus altitudinis for reducing drying stress of onions ( Bacillus altitudinis ) H5-9 strain (KACC 92279P). 제1 항에 있어서,
상기 균주는 서열번호 1로 표시되는 자이레이스(gyrase) 유전자 염기서열을 갖는 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P).
According to claim 1,
The strain is a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) having a gyrase gene sequence represented by SEQ ID NO: 1.
삭제delete 양파의 생육 증진용 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P). Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) for onion growth promotion. 제4 항에 있어서,
상기 균주는 서열번호 1로 표시되는 자이레이스(gyrase) 유전자 염기서열을 갖는 바실러스 알티투디니스(Bacillus altitudinis) H5-9 균주(KACC 92279P).
According to claim 4,
The strain is a Bacillus altitudinis H5-9 strain (KACC 92279P) having a gyrase gene sequence represented by SEQ ID NO: 1.
삭제delete 제1 항 또는 제4 항에 따른 균주(KACC 92279P), 상기 균주의 배양액, 및 이들의 혼합물 중 적어도 하나를 유효성분으로 포함하는 양파 건조 스트레스 저감 및 양파 생육 증진용 조성물.A composition for reducing onion drying stress and promoting onion growth, comprising at least one of the strain according to claim 1 or claim 4 (KACC 92279P), a culture medium of the strain, and a mixture thereof as an active ingredient. 제7 항에 있어서,
상기 조성물은 양파 성장 조절제, 양파 성장 자극제 및 양파 영양제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 더 포함하는, 양파 건조 스트레스 저감 및 양파 생육 증진용 조성물.
According to claim 7,
The composition further comprises at least one selected from the group consisting of an onion growth regulator, an onion growth stimulant and an onion nutrient, a composition for reducing onion drying stress and enhancing onion growth.
제8 항에 따른 양파 건조 스트레스 저감 및 양파 생육 증진용 조성물을 양파, 양파 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 양파 종자의 생육 증진 방법.A method for enhancing the growth of onion seeds, comprising the step of treating onions, areas around onions, or both with the composition for reducing onion drying stress and promoting onion growth according to claim 8. 삭제delete 제1 항 또는 제4 항에 따른 균주, 상기 균주의 배양액, 및 이들의 혼합물 중 적어도 하나를 양파, 양파 모종 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 양파의 건조 스트레스 저감 방법.A method for reducing drying stress of onions comprising the step of treating onions, a region around onion seedlings, or both of at least one of the strain according to claim 1 or 4, a culture medium of the strain, and a mixture thereof. 제7 항에 따른 양파 건조 스트레스 저감 및 양파 생육 증진용 조성물을 양파, 양파 모종 주변 영역, 또는 이들 모두에 처리하는 단계를 포함하는 양파의 건조 스트레스 저감 방법.

A method for reducing drying stress of onions comprising the step of treating onions, areas around onion seedlings, or both of them with the composition for reducing onion drying stress and promoting onion growth according to claim 7.

삭제delete
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