KR102448561B1 - Cytobacillus solani LES88 EXHIBITING CONTROL EFFECT AGAINST BACTERIAL WILT - Google Patents

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Abstract

본 발명은 랄스토니아 솔라나세아륨(Ralstonia solanacearum) 병원균에 의해 발생되는 풋마름병에 대한 방제 효과를 나타내는 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP) 및 이를 포함하는 미생물 제제를 제공하여 풋마름병을 친환경적으로 방제할 수 있는 기술을 구축하고, 친환경적으로 작물을 생산할 수 있도록 한다.The present invention Ralstonia solanacearum ( Ralstonia solanacearum ) Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain (KACC 81134BP), which exhibits a control effect on blight caused by pathogens, and a microbial preparation comprising the same Establish a technology that can control green blight in an environment-friendly way, and make it possible to produce crops in an environment-friendly way.

Description

세균성 풋마름병에 대한 방제 효과를 나타내는 사이토바실러스 솔라나이 LES88 균주{Cytobacillus solani LES88 EXHIBITING CONTROL EFFECT AGAINST BACTERIAL WILT}Cytobacillus solani LES88 strain showing a control effect on bacterial blight {Cytobacillus solani LES88 EXHIBITING CONTROL EFFECT AGAINST BACTERIAL WILT}

본 발명은 랄스토니아 솔라나세아륨(Ralstonia solanacearum) 병원균에 의해 발생되는 풋마름병에 대한 방제 효과를 나타내는 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP) 및 이를 포함하는 미생물 제제에 관한 것이다. The present invention relates to Ralstonia solanacearum ( Ralstonia solanacearum ) Cytobacillus solani showing a control effect on blight caused by pathogens ( Cytobacillus solani ) LES88 strain (KACC 81134BP) and a microbial preparation comprising the same .

지구 표면 기온은 지난 한 세기 동안 지속해서 상승하고 있으며, 세기 말에는 1.0℃에서 4.8℃까지 상승할 것으로 예상된다. 전 세계적인 평균 기온 상승은 식물이 극복해야 할 주요 비생물적 스트레스 중 하나로, 식물 병해 발생이 증가하는 원인이 된다. 국내에서도 아열대 기후가 북상하고 있어 국내 주요 작물의 고온성 병해의 발생이 심화될 것으로 예측되는데, 기온 상승은 겨울철 병원균의 월동에도 유리한 조건으로 작용한다.Global surface temperature has been rising continuously over the past century and is expected to rise from 1.0°C to 4.8°C by the end of the century. An increase in the global average temperature is one of the major abiotic stresses that plants must overcome, causing an increase in the incidence of plant diseases. As the subtropical climate is moving northward in Korea, it is predicted that the occurrence of thermophilic diseases of major domestic crops will intensify.

고추는 우리나라 5대 채소 중 하나로 고추생산액은 2018년에 11,449억 원, 2019년에는 11,851억 원으로 전망되며 이는 전체 농림축산식품 생산액 중에서 9순위에 해당되었다. 2017년 고추 생산량은 생육 초기 가뭄과 여름철 고온, 잦은 강우로 인한 병해 확산으로 전년보다 35% 감소하였으며(김 등, 2017), 2018년 건고추 10a당 수확량은 248kg으로, 작황이 크게 나빴던 전년보다는 28.4% 증가하였으나, 여름철 폭염과 가뭄으로 평년보다 5% 낮았다.Red pepper is one of the five largest vegetables in Korea, and the production value of red pepper is expected to reach KRW 1144.9 billion in 2018 and KRW 1185.1 billion in 2019, ranking 9th among the total agricultural, forestry and livestock food production. Pepper production in 2017 decreased by 35% compared to the previous year due to the spread of diseases caused by drought in the early stages of growth, high temperature in summer, and frequent rainfall (Kim et al., 2017). %, but it was 5% lower than the average year due to summer heat and drought.

고추에 발생하는 풋마름병은 랄스토니아 솔라나세럼(Ralstonia solanacearum)세균병원균에 의한 것으로서 매년 정식기 이후부터 수확기까지 작기 전반에 걸쳐 발병한다. RSC(Ralstonia solanacearum species complex)는 전 세계의 열대, 아열대 및 온대지역에서 200종 이상의 식물종에서 막대한 생산량 손실의 원인이 되는 주요 세균병원균이다. 랄스토니아 솔라나세럼(R. solanacearum)에 의한 고추 풋마름병은 20℃이하에서는 발병이 거의 진행되지 않고, 고온 조건에서 발병이 심하다. 여름철 기온이 점점 상승하고 있는 국내에서도 랄스토니아 솔라나세럼(R. solanacearum)에 의한 풋마름병 피해가 증가하는 추세이며, 일반 농가에서는 두둑을 높여 배수가 잘되도록 하거나 이병주를 즉시 제거하고 있지만 효율적인 방제법은 없는 실정이다.The blight that occurs in red pepper is caused by the bacterial pathogen Ralstonia solanacearum , and it develops throughout the entire growing season from planting to harvest every year. Ralstonia solanacearum species complex (RSC) is a major bacterial pathogen that causes massive yield loss in more than 200 plant species in tropical, subtropical and temperate regions around the world. Red pepper blight caused by Ralstonia solanacearum ( R. solanacearum ) hardly progresses below 20 ℃, and the onset is severe at high temperature conditions. Even in Korea, where the summer temperature is rising, the damage caused by R. solanacearum is on the rise, and general farms are raising their ridges to make drainage better or to immediately remove the disease, but it is an effective control method. is not present.

국내에 고추 풋마름병을 방제하기 위한 화학 농약으로는 유묘 정식 전에만 처리할 수 있는 다조멧(Dazomet)과 메탐소듐(metam-sodium)이 등록되어 있다. 고추와 같은 가지과 속에 속하는 토마토의 작기 중에 처리 가능한 화학 약제로 옥시테트라사이클린(oxytetracycline)이 등록되어 있으나, 고추에 처리했을 때 시간이 경과하면서 방제 효과가 빠르게 감소하였다. 뿐만 아니라 옥시테트라사이클린(oxytetracycline)는 테트라사이클린(Tetracycline)계 항생물질로서, 플라스미드(plasmid)나 전이인자(transposon)에 존재하는 저항성 유전인자의 세균 간 수평적인 이동을 통한 저항성 발현이 다양한 세균 속에서 보고되었다. 랄스토니아 솔라나세럼(R. solanacearum)에 의한 고추 풋마름병은 이를 방제하기 위한 미생물제가 없어 친환경 재배에 어려움이 많은 실정이므로, 예방 및 치료 효과를 갖는 방제 미생물 개발이 필요하다.As chemical pesticides for controlling red pepper blight in Korea, Dazomet and metam-sodium, which can be treated only before seedling planting, are registered. Oxytetracycline is registered as a chemical agent that can be treated during the small period of tomatoes belonging to the Solanaceae genus, such as red pepper. In addition, oxytetracycline is a tetracycline-based antibiotic, and resistance is expressed in a variety of bacteria through horizontal movement of resistance genes present in plasmids or transposons. has been reported Ralstonia solana serum ( R. solanacearum ) Red pepper blight caused by the lack of a microbial agent for controlling it is difficult in environment-friendly cultivation, so it is necessary to develop a control microorganism having a preventive and therapeutic effect.

본 발명은 상기한 바와 같이 종래기술이 가지는 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로, 풋마름병 억제효과를 가지며 독성이 낮고 인축에 안전하며 토양 및 수질오염 문제가 없어 친환경 농작물 재배농가에서 고품질 농작물을 생산하는데 기여할 수 있는 풋마름병 방제용 조성물을 제공함에 목적이 있다.The present invention has been devised to solve the problems of the prior art as described above, has a blight inhibitory effect, has low toxicity, is safe for livestock, and has no soil and water pollution problems. It is an object to provide a composition for controlling blight that can be.

본 발명은 식물의 풋마름병 방제용 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP)를 제공한다.The present invention provides a Cytobacillus solani LES88 strain (KACC 81134BP) for controlling blight of plants.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 풋마름병은 랄스토니아 솔라나세아륨(Ralstonia solanacearum) 병원균으로부터 발생될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the blight may be caused by a Ralstonia solanacearum pathogen.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1의 염기서열을 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the strain may include the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 식물은 고추, 토마토, 가지, 및 담배를 포함하는 가지과 작물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the plant may be a solanaceae crop including pepper, tomato, eggplant, and tobacco.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 균주는 미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제, 및 관주살포제 중 어느 하나의 유효성분으로 이용할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the strain can be used as an active ingredient of any one of microbial pesticides, seed coating agents, soil improvers, composting agents, foliar spreaders, and irrigation sprayers.

본 발명은, 식물의 풋마름병 방제용 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP), 상기 균주의 포자, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제를 제공한다.The present invention provides a microbial preparation comprising, as an active ingredient, a Cytobacillus solani LES88 strain (KACC 81134BP), a spore of the strain, a culture solution of the strain, or a mixture thereof for controlling plant blight.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 미생물 제제는 미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제, 및 관주살포제 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the microbial preparation may include any one or more of a microbial pesticide, a seed coating agent, a soil improver, a composting agent, a foliar spreader, and a irrigation spraying agent.

본 발명은 상기 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP)를 준비하는 단계, 및 상기 균주를 TSB(Tryptic Soy Broth) 배지에 접종한 후 20~35℃100~200 rpm 조건하에서 40~50시간동안 배양하는 단계를 포함하는, 식물의 풋마름병 방제용 미생물 제제의 제조방법을 제공한다.The present invention is the Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) After preparing the LES88 strain (KACC 81134BP), and inoculating the strain in TSB (Tryptic Soy Broth) medium, 20 ~ 35 40 ~ under 100 ~ 200 rpm conditions It provides a method for producing a microbial agent for controlling plant blight, comprising the step of culturing for 50 hours.

본 발명은 상기 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP)의 균체 또는 상기 균주를 이용하여 제조한 미생물 제제 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 식물의 풋마름병 방제용 비료를 제공한다.The present invention provides a fertilizer for controlling blight of plants, comprising, as an active ingredient, any one or more of the cells of the Cytobacillus solani LES88 strain (KACC 81134BP) or a microbial preparation prepared using the strain as an active ingredient do.

본 발명은 상기 비료를 토양에 관주처리하여 식물의 풋마름병에 대한 내성을 증가시키는 방법을 제공한다.The present invention provides a method of increasing the resistance of plants to blight by irrigating the soil with the fertilizer.

본 발명에 따른 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주를 이용하여 풋마름병을 친환경적으로 방제할 수 있는 기술을 구축하고, 친환경적으로 작물을 생산할 수 있도록 한다.Cytobacillus solani according to the present invention ( Cytobacillus solani ) By using the LES88 strain to build a technology that can control the green blight in an environment-friendly way, and to produce crops in an environment-friendly way.

도 1은 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주의 16S rRNA 유전자를 이용한 계통유전학적인 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 곰취(Ligularia fischeri)의 근권(Rhizosphere) 및 내권(Endosphere)에서 분리된 박테리아를 각각 TSA 배지 및 NA 배지에서 배양한 균주의 양(CFU/g)을 나타낸 그래프이다.
도 3a는 고추 유묘에 대한 LES88 균주의 배양액의 풋마름병 방제 효과를 시험한 고추 유묘를 나타낸 것이다.
도 3b는 고추 유묘에 대한 IC(Inoculated control; 병원균 접종 대조구)의 풋마름병 방제 효과를 시험한 고추 유묘를 나타낸 것이다.
도 4은 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액, 세레나데(Serenade)를 처리하거나, 무처리한 경우(IC(Inoculated control; 병원균 접종 대조구) 및 UT(Untreated control; 병원균 비접종 대조구))의 이병주율(Diseased plant)을 나타낸 표이다.
도 5는 LES88 균주의 배양액의 고추 생육에 대한 영향을 평가하기 위해, 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액, 세레나데(Serenade)를 처리하거나, 무처리한 경우 (IC(Inoculated control; 병원균 접종 대조구) 및 UT(Untreated control; 병원균 비접종 대조구))의 초장(Plant height)을 나타낸 표이다.
Figure 1 shows the results of phylogenetic analysis using the 16S rRNA gene of the Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain.
Figure 2 is a graph showing the amount (CFU / g) of bacteria isolated from the rhizosphere and the inner sphere (Endosphere) of Gomchwi (Ligularia fischeri) cultured in TSA medium and NA medium, respectively.
Figure 3a shows the pepper seedlings tested for the blight control effect of the culture medium of the LES88 strain on the pepper seedlings.
Figure 3b shows the pepper seedlings tested for the blight control effect of IC (Inoculated control; pathogen inoculated control) on the pepper seedlings.
Figure 4 is a culture medium of the LES88 strain in pepper seedlings, serenade (Serenade) treated or untreated (IC (Inoculated control; pathogen inoculated control) and UT (Untreated control; pathogen non-inoculated control)) of the diseased strain rate (Diseased) plant).
Figure 5 is in order to evaluate the effect of the culture medium of the LES88 strain on the pepper growth, the culture medium of the LES88 strain on the pepper seedlings, serenade (Serenade), or untreated (IC (Inoculated control; pathogen inoculation control) and UT) (Untreated control; non-inoculation control with pathogens)) is a table showing the plant height (Plant height).

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 본문에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.Since the present invention can have various changes and can have various embodiments, specific embodiments are illustrated in the drawings and will be described in detail in the text. However, this is not intended to limit the present invention to specific embodiments, and should be understood to include all modifications, equivalents and substitutes included in the spirit and scope of the present invention. In describing the present invention, if it is determined that a detailed description of a related known technology may obscure the gist of the present invention, the detailed description thereof will be omitted.

이하, 본 명세서에 개시된 실시예들을 도면을 참조하여 상세하게 설명하고 자 한다. 상세한 설명, 도면들 및 청구항들에서 상술하는 예시적인 실시예들은 한정을 위한 것이 아니며, 기재된 실시예들과 다른 실시예들이 이용될 수 있으며, 여기서 개시되는 기술의 사상이나 범주를 벗어나지 않는 한 다른 변경들도 가능하다. Hereinafter, embodiments disclosed in the present specification will be described in detail with reference to the drawings. Exemplary embodiments described above in the detailed description, drawings, and claims are not for limitation, and embodiments other than the described embodiments may be used, and other changes may be made without departing from the spirit or scope of the technology disclosed herein. are also possible

개시된 기술에 관한 설명은 구조적 내지 기능적 설명을 위한 실시예에 불과하므로, 개시된 기술의 권리범위는 본문에 설명된 실시예에 의하여 제한되는 것으로 해석되어서는 아니된다. 즉, 실시예는 다양한 변경이 가능하고 여러 가지 형태를 가질 수 있으므로 개시된 기술의 권리범위는 기술적 사상을 실현할 수 있는 균등물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.Since the description of the disclosed technology is merely an embodiment for structural or functional description, the scope of the disclosed technology should not be construed as being limited by the embodiment described in the text. That is, since the embodiment may have various changes and may have various forms, it should be understood that the scope of the disclosed technology includes equivalents capable of realizing the technical idea.

여기서 사용된 모든 용어들은 다르게 정의되지 않는 한, 개시된 기술이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 관련기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미를 지니는 것으로 해석 될 수 없다.All terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the disclosed technology belongs, unless otherwise defined. Terms defined in the dictionary should be interpreted as being consistent with the meaning of the context of the related art, and cannot be interpreted as having an ideal or excessively formal meaning unless explicitly defined in the present application.

풋마름병(세균성 시들음병)은 랄스토니아 솔라나세아륨(Ralstonia solanacearum) 병원균에 의해 발생되는 병으로서, 토마토, 고추, 가지, 담배 등 주요 가지과 작물에 대발생하여 극심한 피해를 초래한다. 또한, 과채류, 엽채류, 쌈채류 등의 거의 모든 원예작물에 잠재적 위해 요소로 작용할 수 있어 그 피해의 위험성이 매우 크다. 특히, 동일한 작물의 연작 재배 및 연중 재배가 성행하고 있는 최근 농업의 추세에 따라 발생빈도는 점차 증가하고 있으며, 다른 식물병과 달리, 일단 발생하면 세균의 특성상 급속도로 진전하여 재배지 전체로 번지며, 작물 전체가 고사하여 거의 모든 수확물을 수확할 수 없다.Green blight (bacterial wilt disease) is a disease caused by a Ralstonia solanacearum pathogen, which occurs in major solanaceae crops such as tomatoes, peppers, eggplants, and tobacco, causing severe damage. In addition, it can act as a potential hazard to almost all horticultural crops such as fruits and vegetables, leafy vegetables, and green vegetables, so the risk of damage is very high. In particular, the frequency of occurrence is gradually increasing according to the recent agricultural trend in which continuous and year-round cultivation of the same crop is prevalent. Almost all crops cannot be harvested because the whole has died.

풋마름병을 방제하기 위한 수단으로 화학 약제를 이용할 수 있으나, 국내에 풋마름병 방제 화학 농약으로는 유묘 정식 전에만 처리할 수 있는 다조멧(Dazomet)과 메탐-소듐(Metam-sodium)이 등록되어 있고 고추 작기 중에는 처리가 불가하다. 토마토 작기 중에 처리 가능한 방제 약제로 옥시테트라사이클린(oxytetracycline)이 등록되어 있으나, 고추에 처리하였을 때에는 처리 후 시간이 경과함에 따라, 풋마름병 방제 효과가 빠르게 감소하였을 뿐만 아니라, 저항성 유전인자의 세균 간 수평적 이동을 통한 저항성 발현이 나타났다.Chemical agents can be used as a means to control blight, but Dazomet and Metam-sodium, which can be treated only before seedlings are planted, are registered as chemical pesticides for controlling blight in Korea. It cannot be processed while the pepper is small. Although oxytetracycline is registered as a control agent that can be treated during tomato planting, when it is treated with red pepper, as time passes after treatment, the blight control effect rapidly decreases, and Resistance expression was shown through enemy migration.

식물병 방제를 위해 상기와 같은, 화학농약과 화학비료를 과다하게 사용할 경우, 토양의 오염, 연작장해, 토양양분의 불균형, 병해충 발생 등의 문제가 발생되어, 생산물의 품질저하, 농가의 소득 저하 등의 부작용이 나타나고 있다.When chemical pesticides and chemical fertilizers are used excessively as described above to control plant diseases, problems such as soil contamination, failure of continuous cultivation, imbalance of soil nutrients, and occurrence of diseases and pests occur, resulting in a decrease in the quality of products and a decrease in the income of farmers side effects such as

이에 따라 본 발명에서는, 생물학적 방법으로 식물의 풋마름병에 대한 방제 효과를 나타내는 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주와 상기 균주의 배양액 또는 이들 중 적어도 하나를 포함하는 미생물 제제를 제공한다. 상기 식물은 예를 들어, 토마토, 고추, 가지, 담배 등 주요 가지과 작물일 수 있으며, 과채류, 엽채류, 쌈채류 등의 원예작물일 수도 있다. Accordingly, the present invention provides a microbial preparation comprising at least one of a Cytobacillus solani LES88 strain and a culture solution of the strain, or at least one of them, which exhibits a control effect on blight of plants by a biological method. The plant may be, for example, a major solanaceae crop such as tomatoes, peppers, eggplants, and tobacco, and may be horticultural crops such as fruits and vegetables, leafy vegetables, and ssam vegetables.

상기 풋마름병은 랄스토니아 솔라나세럼(Ralstonia solanacearum) 병원균 또는 슈도모나스 솔라나세럼(Pseudomonas solanacearum) 병원균에 의해 발생된다.The blight is caused by Ralstonia solanacearum pathogens or Pseudomonas solanacearum pathogens.

본 명세서에서 “배양액”은 세균을 배지에 접종하고 일정시간 배양하여 얻은 결과물로서, 본 발명에 따른 세균을 적합한 액체 배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 세균을 제거한 여액(여과액 또는 원심분리한 상등액), 상기 배양액을 초음파 처리하거나 상기 배양액에 용해효소(lysozyme)를 처리하여 수득한 세포 파쇄액, 상기 배양액, 여액, 상기 세포 파쇄액 등을 농축한 농축액 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 생균제 또는 항균용 조성물은 고체배지 배양물, 또는 상기 배양액의 건조물 또는 추출물 등의 배양물을 함유할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니고, 나아가 적합한 부형제 또는 담체(열성유전자를 이형접합의 상태로 가지고 있는 개체)를 추가로 포함할 수도 있다.As used herein, the term “culture solution” refers to a result obtained by inoculating bacteria into a medium and culturing for a certain period of time. solution or centrifuged supernatant), a cell lysate obtained by sonicating the culture medium or treating the culture medium with a lysozyme, a concentrate obtained by concentrating the culture medium, the filtrate, the cell lysate, etc. It is not limited. In addition, the probiotic or antibacterial composition may contain a culture such as a solid medium culture, or a dried product or an extract of the culture medium, but is not limited thereto, and furthermore, a suitable excipient or carrier (the recessive gene in a state of heterozygosity) objects that you have) may be additionally included.

본 발명의 미생물 제제는 액상 비료 형태로 제조될 수 있으며 이에 증량제를 첨가하여 가루분말의 형태로 이용하거나 이를 제형화하여 과립화시킬 수도 있다. 그러나 그 제형에 특별히 한정되지는 않으며, 액상, 분상 이외의 환 형태로 제조할 수도 있다.The microorganism preparation of the present invention may be prepared in the form of a liquid fertilizer, and it may be used in the form of a powder by adding an extender thereto, or it may be formulated and granulated. However, the formulation is not particularly limited, and it may be prepared in a ring form other than liquid or powder.

본 발명은 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주와 상기 균주의 배양액 또는 이들 중 적어도 하나를 포함하는 미생물 제제를 이용하여 식물의 풋마름병을 방제하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method for controlling blight of plants using a microbial preparation comprising at least one of the Cytobacillus solani LES88 strain and the culture medium of the strain or these.

본 발명에서 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주는 2020년 10월 26일자로 국립농업과학원에 미생물을 기탁하였으며, 수탁 번호로 KACC 81134BP를 부여받았다.In the present invention, Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain deposited microorganisms with the National Academy of Agricultural Sciences as of October 26, 2020, and was given KACC 81134BP as an accession number.

상기 균주의 16S rRNA 염기서열은 서열번호 1로 표시된다.The 16S rRNA nucleotide sequence of the strain is represented by SEQ ID NO: 1.

도 1은 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주의 16S rRNA 유전자를 이용한 계통유전학적인 분석 결과를 나타낸 것이다.Figure 1 shows the results of phylogenetic analysis using the 16S rRNA gene of the Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP)는 미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제 중 어느 하나의 유효성분으로 이용될 수도 있다.In one embodiment of the present invention, Cytobacillus solani LES88 strain (KACC 81134BP) is used as an active ingredient of any one of microbial pesticides, seed coating agents, soil improvers, composting agents, foliar spraying agents or drenching sprayers. it might be

사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP)를 이용하여 제조한 미생물 제제는 상기 LES88 균주, 상기 LES88 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물에 당해 분야에서 풋마름병균을 방제하는 것으로 사용되는 다른 임의의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 그러나 이에 한정되는 것은 아니며, 예를 들어 식물 영양제, 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제, 다른 식물병을 방제할 수 있는 식물병 방제제 등을 더 포함할 수도 있다. 이에 더해, 제초제, 살균제, 살충제, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제 엽면살포제, 관주살포제, 퇴비, 및 비료 중 적어도 하나 이상을 더 포함할 수도 있다. Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) Microbial preparations prepared using the LES88 strain (KACC 81134BP) are the LES88 strain, the culture solution of the LES88 strain, or a mixture thereof Any other used as controlling blight blight in the art It may further include a component of. However, the present invention is not limited thereto, and may further include, for example, plant nutrients, plant growth regulators, plant growth stimulants, and plant disease control agents capable of controlling other plant diseases. In addition, it may further include at least one or more of herbicides, fungicides, pesticides, seed coating agents, soil conditioners, compost foliar spreaders, drench spreaders, composts, and fertilizers.

상기 식물 성장 조절제에는 유익한 다른 미생물들, 미생물 활성물질 및 유기 비료가 포함될 수 있다. 그러나 이에 한정되는 것은 아니며, 화학비료를 더 포함할 수 있다.The plant growth regulator may include other beneficial microorganisms, microbial active substances and organic fertilizers. However, the present invention is not limited thereto, and may further include a chemical fertilizer.

상기 미생물 활성물질에는 효소 전구물질, 미생물 대사물질, 유기산, 탄수화물, 효소 및 미량원소 중 적어도 하나 이상이 포함될 수 있다. 예를 들면, 미생물 활성물질에는 효모 자가용해질과 같은 가공된 효소 산물, 부식질(지표 및 땅 속에 존재하는 생물 이외의 유기물) 재료들, 해초 추출물, 전분, 아미노산, 그리고 아연, 철, 구리, 망간, 브롬, 몰리브덴과 같은 미량원소 등이 포함될 수 있다. 그러나 상기 미량원소에 한정되는 것은 아니다.The microbial active material may include at least one of enzyme precursors, microbial metabolites, organic acids, carbohydrates, enzymes and trace elements. For example, microbial active substances include processed enzyme products such as yeast autolysates, humus (organic substances other than those present on the surface and in the soil), seaweed extracts, starch, amino acids, and zinc, iron, copper, manganese, Trace elements such as bromine and molybdenum may be included. However, it is not limited to the above trace elements.

상기 식물 성장 조절제 또는 식물 성장 자극제는 기존에 식물 생육을 증진시키는 것으로 알려진 바실러스 속(Bacillus spp.), 아조토박터 속(Azotobacter spp.), 트리코데르마 속(Trichoderma spp) 또는 사카로미세스 속(Saccharomyces spp) 균주 중 적어도 하나 이상이 포함될 수 있다. 그러나 상기 미생물 종에 한정되는 것은 아니며, 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.), 리조비윰 속(Rhizobium sp.), 슈도모나스 속(Pseudomonas sp.) 균주를 더 포함할 수도 있다.The plant growth regulator or plant growth stimulator is conventionally known to promote plant growth of the genus Bacillus spp ., Azotobacter spp ., Trichoderma spp , or Saccharomyces genus ( Saccharomyces spp ) At least one of the strains may be included. However, it is not limited to the microbial species, and Streptomyces sp. , Rhizobium sp. , Pseudomonas sp.) It may further include a strain.

유익한 다른 미생물들, 미생물 활성물질 그리고 유기 비료는 상기에서 설명된 것과 동일할 수 있다. 화학비료에는 식물 생육을 지원하기 위하여 질소, 인, 및 칼륨 영양소를 제공할 수 있는 다양한 화학물질이 포함될 수 있다. 예를 들면, 화학비료에는 요소, 인산칼슘, 인산칼륨 및 혼합형 질소-인산-칼륨(N-P-K) 비료가 포함될 수도 있다. 그러나 이에 한정되는 것은 아니며, 상기 화학비료에는 해당분야에 공지된 다른 재료(탄소, 수소, 산소, 유황, 석회, 고토, 붕소, 철, 망간, 아연, 동, 몰리브덴, 염소 등)도 포함될 수 있다.Other beneficial microorganisms, microbial active substances and organic fertilizers may be the same as described above. Chemical fertilizers can include a variety of chemicals that can provide nitrogen, phosphorus, and potassium nutrients to support plant growth. For example, chemical fertilizers may include urea, calcium phosphate, potassium phosphate, and mixed nitrogen-phosphate-potassium (N-P-K) fertilizers. However, the present invention is not limited thereto, and the chemical fertilizer includes other materials known in the art (carbon, hydrogen, oxygen, sulfur, lime, earth, boron, iron, manganese, zinc, copper, molybdenum, chlorine, etc.). .

이하, 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실험예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실험예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through experimental examples. These experimental examples are only for illustrating the present invention, and it will be apparent to those of ordinary skill in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these experimental examples.

<실험예 1> 균주의 분리 및 풋마름병균 방제 균주 선발<Experimental Example 1> Isolation of strains and selection of green blight control strains

1. 균주 분리 및 배양방법 1. Strain isolation and culture method

곰취(Gomchiw, Ligularia fischeri) 근권 토양으로부터 미생물을 분리하기 위해 근권 토양 3 g을 멸균수 27 ml에 넣고 28℃에서 180 rpm으로 30분 간 진탕 처리한 후 1 ml을 취하여 멸균수 9 ml에 현탁하였다. 뿌리로부터 미생물을 분리하기 위해, 곰취 뿌리를 표면살균한 뒤 멸균한 막자사발로 파쇄하였고 뿌리 1 g을 취하여 멸균수 9 ml에 현탁하였다. 근권토양 및 뿌리현탁액은 각각 단계 희석하여 TSA(Tryptic Soybean Agar) 배지와 NA(Nutrient Agar) 배지에 도말하여 28℃에서 48시간 동안 배양 후 색과 형태가 다른 단일 콜로니를 순수 분리하였고, 20% 글리세롤(glycerol)에 넣어 -70℃에 보관하며 실험에 이용하였다.Gomchiw ( Ligularia fischeri ) To isolate microorganisms from the rhizome soil, 3 g of the rhizome soil was placed in 27 ml of sterile water, shaken at 28 ° C. at 180 rpm for 30 minutes, and then 1 ml was taken and suspended in 9 ml of sterile water. . To isolate microorganisms from the roots, surface sterilization of Gomchi root was crushed with a sterilized mortar, and 1 g of the root was suspended in 9 ml of sterile water. The rhizome soil and root suspension were diluted stepwise, spread on TSA (Tryptic Soybean Agar) and NA (Nutrient Agar) medium, and cultured for 48 hours at 28 ° C. Single colonies with different colors and shapes were isolated pure, 20% glycerol (glycerol), stored at -70°C, and used for experiments.

2. 분리결과2. Separation result

분리된 상기 균주는 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주이며, 서열번호 1로 표시되는 16S rRNA 염기서열을 갖는다. The isolated strain is Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain, and has a 16S rRNA nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1.

도 1은 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주의 16S rRNA 유전자를 이용한 계통유전학적인 분석 결과를 나타낸 것이다.Figure 1 shows the results of phylogenetic analysis using the 16S rRNA gene of the Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain.

도 2는 곰취(Ligularia fischeri)의 근권(Rhizosphere) 및 내권(Endosphere)에서 분리된 박테리아를 각각 TSA 배지 및 NA 배지에서 배양한 균주의 양(CFU/g)을 나타낸 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the amount (CFU / g) of bacteria isolated from the rhizosphere and the inner sphere (Endosphere) of gomchwi ( Ligularia fischeri ) cultured in TSA medium and NA medium, respectively.

근권(Rhizosphere)에서 NA 배지를 이용하여 배양한 균주는 3.7 X 106CFU/g이고, 근권(Rhizosphere)에서 TSA 배지를 이용하여 배양한 균주는 6.8 X 106 CFU/g이다. 내권(Endosphere)에서 NA 배지를 이용하여 배양한 균주는 1.6 X 104CFU/g이고, 내권(Endosphere)에서 TSA 배지를 이용하여 배양한 균주는 3.7 X 104CFU/g이다.The strain cultured using the NA medium in the rhizosphere is 3.7 X 10 6 CFU/g, and the strain cultured using the TSA medium in the rhizosphere is 6.8 X 10 6 CFU/g. The strain cultured using the NA medium in the Endosphere is 1.6 X 10 4 CFU/g, and the strain cultured using the TSA medium in the Endosphere is 3.7 X 10 4 CFU/g.

상기 균주들 중 풋마름병균에 대한 방제효과가 가장 우수한 균주는 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주임을 확인하여, 이를 최종 선발하였다.Among the above strains, it was confirmed that the strain having the best control effect on the blight blight was the Cytobacillus solani LES88 strain, and it was finally selected.

상기 LES88 균주는 서열번호 1로 표시되는 16S rRNA 염기서열을 갖는다. The LES88 strain has a 16S rRNA nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1.

표 1은 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주와 근연관계에 있는 표준균주의 상동성을 비교한 것이다.Table 1 is a comparison of the homology of the standard strain in close relation with the Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain.

NameName Strainstrain AccessionAccession Pairwise Similarity(%)Pairwise Similarity (%) Mismatch/Total ntMismatch/Total nt Completeness(%)Completeness (%) Cytobacillus solaniCytobacillus solani FJAT-18043FJAT-18043 LJIX01000006LJIX01000006 99.8699.86 2/14712/1471 100100 Cytobacillus praediiCytobacillus praedii FJAT-25547FJAT-25547 KY582959KY582959 99.7999.79 3/14203/1420 96.4896.48

표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주는 사이토바실러스 솔라나이 FJAT-18043 균주와 2/1471의 염기서열 상동성을 가지며, 유사성 99.86%로 가장 유사한 것으로 나타났고, 사이토바실러스 프레디(Cytobacillus praedii) FJAT-25547과 3/1420의 염기서열 상동성을 가지며, 유사성 99.79%로 나타났다. As shown in Table 2, the Cytobacillus solani LES88 strain of the present invention has a nucleotide sequence homology of 2/1471 with the Cytobacillus solani FJAT-18043 strain, and the similarity was found to be the most similar with 99.86%. , Cytobacillus praedii has a nucleotide sequence homology with FJAT-25547 and 3/1420, and the similarity was found to be 99.79%.

<실험예 2> 분리 균주의 역병균에 대한 길항력 검정<Experimental Example 2> Antagonism test for inverse pathogens of isolated strains

분리균주의 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)와 파이토프토라 드레취슬레리(Phytophthora drechsleri)에 대한 길항력을 3회에 걸쳐 검정하였다. PDA(Potato Dextrose Agar) 배지의 중앙으로부터 35 ㎜ 거리에 분리 균주를 획선 도말하여 25℃에서 24시간 동안 배양하였고, 대조구에는 멸균수를 이용하였다. 파이토프토라 캡사이시(P. capsici)와 파이토프토라 드레취슬레리(P. drechsleri) 균총을 각각 PDA 배지의 정 가운데에 치상하여, 25℃에서 5일 간 배양한 후 저지대(Inhibition zone)의 크기를 측정하여 항균력이 우수한 미생물을 선별하였다.Phytophthora capsici of the isolated strain ( Phytophthora capsici ) and Phytophthora drechsleri ( Phytophthora drechsleri ) The antagonistic ability was tested three times. The isolated strain was streaked at a distance of 35 mm from the center of the PDA (Potato Dextrose Agar) medium and cultured at 25° C. for 24 hours, and sterile water was used as a control. Phytophthora capsici ( P. capsici ) and Phytophthora drechsleri ( P. drechsleri ) The colonies were placed in the center of the PDA medium, respectively, and cultured at 25° C. for 5 days, and then in the inhibition zone. Microorganisms with excellent antibacterial activity were selected by measuring the size of the.

표 2는 이중 대치배양 분석법을 이용하여 다양한 작물 (고추 식물 포함)에서 뿌리 썩음병을 유발하는 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)에 대한 LES88 균주의 항진균 활성을 나타낸 표이다.Table 2 is a table showing the antifungal activity of the LES88 strain against Phytophthora capsici , which causes root rot in various crops (including pepper plants) using a double replacement culture assay.

TreatmentTreatment Mycelial growth inhibition rate(%)*Mycelial growth inhibition rate (%)* Mean of mycelial growth inhibition rate (%)Mean of mycelial growth inhibition rate (%) Standard errorstandard error 1st trial 1st trial 2nd trial 2nd trial 3rd trial 3rd trial LES88LES88 31.131.1 28.128.1 28.728.7 2.02.0 1.231.23 Control**Control** 0.00.0 0.00.0 0.00.0 0.00.0 0.00.0

*(대조구 균체 직경 (mm) - 처리구 균체 직경 (mm)) / 대조구 균체 직경 (mm))X100 **대조구는 멸균 증류수로 처리된다. 대조구의 균체 직경은 68.4mm이다.*(Control cell cell diameter (mm) - Treatment cell cell diameter (mm)) / Control cell cell diameter (mm))X100 **Control cell is treated with sterile distilled water. The cell diameter of the control was 68.4 mm.

표 3은 이중 대치배양 분석법을 이용하여 다양한 작물 (고추 식물 포함)에서 뿌리 썩음병을 유발하는 파이토프토라 드레취슬레리(Phytophthora drechsleri)에 대한 LES88 균주의 항진균 활성을 나타낸 표이다.Table 3 is a table showing the antifungal activity of the LES88 strain against Phytophthora drechsleri , which causes root rot in various crops (including pepper plants) using a double replacement culture assay.

TreatmentTreatment Mycelial growth inhibition rate(%)*Mycelial growth inhibition rate (%)* Mean of mycelial growth inhibition rate (%)Mean of mycelial growth inhibition rate (%) Standard errorstandard error 1st trial 1st trial 2nd trial 2nd trial 3rd trial 3rd trial LES88LES88 31.131.1 28.128.1 28.728.7 29.329.3 0.770.77 Control**Control** 0.00.0 0.00.0 0.00.0 0.00.0 0.00.0

*(대조구 균체 직경 (mm) - 처리구 균체 직경 (mm)) / 대조구 균체 직경 (mm))X100 **대조구는 멸균 증류수로 처리된다. 대조구의 균체 직경은 61.3mm이다.*(Control cell cell diameter (mm) - Treatment cell cell diameter (mm)) / Control cell cell diameter (mm))X100 **Control cell is treated with sterile distilled water. The cell diameter of the control was 61.3 mm.

<실험예 3> 최종 선발된 LES88 균주의 배양액 처리에 의한 풋마름병균 방제 효과 검정<Experimental Example 3> Test of the effect of controlling green blight by the treatment of the culture solution of the finally selected LES88 strain

사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주의 풋마름병균(Ralstonia solanacearum)에 대한 방제 효과를 검정하기 위하여, 온실내에서 고추 유묘를 이용하여 생물 검정을 수행하였다. Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) In order to test the control effect on the green blight ( Ralstonia solanacearum ) of the LES88 strain, a bioassay was performed using pepper seedlings in a greenhouse.

배양된 LES88 균주의 단일 콜로니를 TSB(Tripic Soy Broth)배지에 접종하여 28℃에서 150rpm으로 48시간 동안 배양한 후, 배양액의 농도를 1.0X108 CFU/mL로 조절하였다(OD600=0.25).A single colony of the cultured LES88 strain was inoculated in TSB (Tripic Soy Broth) medium and cultured at 28 ° C. at 150 rpm for 48 hours, and the concentration of the culture medium was adjusted to 1.0X10 8 CFU/mL (OD 600 =0.25).

고추 종자(Super manitta, Nongwoo-bio, Korea)는 2시간 동안 흐르는 수돗물로 수세하고, 표면의 미생물을 제거하기 위해 1% 차아염소산나트륨과 70% 에탄올을 이용하여 표면을 살균한 후, 직경 10cm 포트에 상토(Green soil, Seoul Bio, Korea)를 담고 파종하였다(n=15). Red pepper seeds (Super manitta, Nongwoo-bio, Korea) are washed with running tap water for 2 hours, and the surface is sterilized using 1% sodium hypochlorite and 70% ethanol to remove microorganisms on the surface, followed by a 10cm diameter pot Sowing was carried out with green soil (Seoul Bio, Korea) in it (n=15).

파종 4주 후, 본엽이 7 내지 8매 전개된 고추 유묘에 분리 미생물 LES88 균주의 배양액을 50mL 관주 처리하고 7일이 경과된 후, 풋마름병균인 랄스토니아 솔라나세럼(Ralstonia solanacearum)을 1.0X108 CFU/mL(OD600=0.15) 농도로 주당 20mL 관주처리하였다. 랄스토니아 솔라나세럼 균주를 처리하고 5주 경과 후, 이병주율(%)과 초장을 조사하였다.After 4 weeks of sowing, 50 mL of the culture solution of the isolated microorganism LES88 strain was irrigated on the red pepper seedlings with 7 to 8 true leaves, and after 7 days had elapsed, Ralstonia solanacearum , a green blight, was added to 1.0. X10 8 CFU/mL (OD 600 =0.15) was administered with 20 mL per week irrigation. After 5 weeks of treatment with the Ralstonia solana serum strain, the disease rate (%) and plant height were investigated.

도 3a는 고추 유묘에 대한 LES88 균주의 배양액의 풋마름병 방제 효과를 시험한 고추 유묘를 나타낸 것이고, 도 3b는 고추 유묘에 대한 IC(Inoculated control; 병원균 접종 대조구)의 풋마름병 방제 효과를 시험한 고추 유묘를 나타낸 것이다.Figure 3a shows the pepper seedlings tested for the green blight control effect of the culture medium of the LES88 strain on the pepper seedlings, and Figure 3b is the red pepper seedlings tested for the green blight control effect of IC (Inoculated control; pathogen inoculated control) on the pepper seedlings. tombs are shown.

풋마름병 방제를 위해 LES88 균주의 배양액을 처리한 도 3a의 고추 유묘의 경우, 풋마름병이 거의 발생하지 않은 반면, 미생물을 처리하지 않은 IC(Inoculated control)를 나타내는 도 3b의 고추 유묘의 경우, 고추 유묘의 말단부가 갈색을 나타내어, 도 3a의 고추 유묘에 비해 풋마름병 방제 효과가 없었다. In the case of red pepper seedlings of FIG. 3a treated with the culture medium of the LES88 strain for green blight control, green blight hardly occurred, whereas in the case of pepper seedlings of FIG. The distal end of the seedlings were brown, and there was no effect of controlling blight blight compared to the pepper seedlings of FIG. 3a.

도 4은 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액, 세레나데(Serenade)를 처리하거나, 무처리한 경우(IC(Inoculated control; 병원균 접종 대조구) 및 UT(Untreated control; 병원균 비접종 대조구))의 이병주율(Diseased plant)을 나타낸 표이다.Figure 4 is a culture medium of the LES88 strain in pepper seedlings, serenade (Serenade) treated or untreated (IC (Inoculated control; pathogen inoculated control) and UT (Untreated control; pathogen non-inoculated control)) of the diseased strain rate (Diseased) plant).

상기 세레나데는 미생물 농약으로서, 방제 대상 병해 목록에 고추 세균성 풋마름병이 없기 때문에, 생육 및 방제효과의 차이를 확인하기 위해 대조구로 세레나데를 처리하였다.The serenade is a microbial pesticide, and since there is no pepper bacterial blight in the list of diseases to be controlled, serenade was treated as a control to confirm the difference in growth and control effect.

시험은 2회 반복하여 수행되었다. 첫 번째 시도에서, 고추 유묘에 대한 세레나데(Serenade) 처리는 80%의 이병주율을 나타내어, 대조구(IC, inoculated control; 이병주율 63.3%) 대비 방제가 0%으로 풋마름병 방제 효과가 없는 것으로 나타났다. 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액을 처리하였을 때, 22.2%의 풋마름병 이병주율을 나타내어 대조구 대비 64.9%의 방제가를 나타내어 효과가 있는 것으로 나타났다.The test was performed in two replicates. In the first attempt, Serenade treatment on pepper seedlings showed an 80% morbidity rate, indicating that the control was 0% compared to the control (IC, inoculated control; 63.3% morbidity), indicating that there was no effect of controlling blight. When the pepper seedlings were treated with the culture solution of the LES88 strain, it showed a 22.2% blight disease rate and 64.9% of the control value compared to the control, indicating that it was effective.

두 번째 시도에서, 고추 유묘에 대한 세레나데(Serenade) 처리는 40%의 이병주율을 나타내어, 대조구(IC, inoculated control, 이병주율 100%) 대비 방제가 60%로 나타났으나, LES88 균주의 배양액을 처리했을 때 이병주율 20%, 방제가 80%로, 풋마름병 방제 효과가 세레나데 처리보다 높게 나타났다. In the second attempt, Serenade treatment on pepper seedlings showed a morbidity rate of 40%, and control (IC, inoculated control, contamination rate 100%) compared to the control was 60%, but the culture solution of the LES88 strain was When it was treated, it was found that the disease prevention rate was 20%, the control rate was 80%, and the blight control effect was higher than that of the serenade treatment.

2회 반복한 실험 수행에 의해, 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액을 처리하였을 때 평균 21.1%의 풋마름병 이병주율을 나타낸 반면, 세레나데(Serenade)는 처리는 평균 60.0%의 풋마름병 이병주율을 나타내어, LES88에 의한 평균 방제가는 74.%, 세레나데에 의한 평균 방제가는 26.5%으로 나타났다.By repeating the experiment twice, when the pepper seedlings were treated with the culture solution of the LES88 strain, an average of 21.1% of the blight disease strain rate was shown, whereas the Serenade treatment showed an average blight disease strain rate of 60.0%, The average control value by LES88 was 74.%, and the average control value by Serenade was 26.5%.

도 5는 LES88 균주의 배양액의 고추 생육에 대한 영향을 평가하기 위해, 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액, 세레나데(Serenade)를 처리하거나, 무처리한 경우 (IC(Inoculated control; 병원균 접종 대조구) 및 UT(Untreated control; 병원균 비접종 대조구))의 초장(Plant height)을 나타낸 표이다.Figure 5 is in order to evaluate the effect of the culture medium of the LES88 strain on the pepper growth, the culture medium of the LES88 strain on the pepper seedlings, serenade (Serenade), or untreated (IC (Inoculated control; pathogen inoculation control) and UT) (Untreated control; non-inoculation control with pathogens)) is a table showing the plant height (Plant height).

시험은 2회 반복하여 수행되었다. 첫 번째 시도에서, 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액을 처리하였을 때, 초장은 23.1cm를 나타내었고, 세레나데(Serenade)를 처리한 경우 23.6cm, 병원균 접종 대조구(IC, Inoculated control)의 경우 21.5cm, 및 병원균 비접종 대조구(UT, Untreated control)의 경우 22.3cm의 초장을 나타내어, 초장의 차이가 미미하였다.The test was performed in two replicates. In the first attempt, when pepper seedlings were treated with the culture solution of LES88 strain, the plant height was 23.1 cm, Serenade treatment 23.6 cm, pathogen inoculated control (IC, Inoculated control) 21.5 cm, And the pathogen non-inoculated control (UT, Untreated control) showed a plant height of 22.3 cm, the difference in plant height was insignificant.

두 번째 시도에서, 고추 유묘에 LES88 균주의 배양액을 처리하였을 때, 초장은 33.8cm를 나타내었고, 세레나데(Serenade)를 처리한 경우 31.6cm, 병원균 접종 대조구(IC, Inoculated control)의 경우 28.4cm, 및 병원균 비접종 대조구(UT, Untreated control)의 경우 29.8cm의 초장을 나타내었다. 즉, 2회 반복 실험을 통해 LES88 균주 처리에 의한 고추 유묘의 초장 변화가 미미하다는 점은, LES88 균주의 처리가 고추의 생육을 억제하는 영향 없이 풋마름병을 효과적으로 방제할 수 있다고 해석될 수 있다.In the second attempt, when pepper seedlings were treated with the culture solution of the LES88 strain, the plant height was 33.8 cm, Serenade treatment 31.6 cm, pathogen inoculated control (IC, Inoculated control) 28.4 cm, And in the case of pathogen-uninoculated control (UT, Untreated control), it exhibited a plant height of 29.8 cm. That is, the fact that the change in plant height of red pepper seedlings caused by the LES88 strain treatment through two repeated experiments is insignificant can be interpreted that the LES88 strain treatment can effectively control the blight without the effect of inhibiting the growth of peppers.

상기의 본 발명은 바람직한 실험예를 중심으로 살펴보았으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 본질적 기술 범위 내에서 상기 본 발명의 상세한 설명과 다른 형태의 실시예들을 구현할 수 있을 것이다. 여기서 본 발명의 본질적 기술범위는 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been looked at with a focus on preferred experimental examples, and those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains can implement embodiments other than the detailed description of the present invention within the essential technical scope of the present invention. will be able Here, the essential technical scope of the present invention is indicated in the claims, and all differences within the scope equivalent thereto should be construed as being included in the present invention.

국립농업과학원 농업유전자센터Agricultural Gene Center, National Academy of Agricultural Sciences KACC81134BPKACC81134BP 2020092820200928

<110> REPUBLIC OF KOREA, REPUBLIC OF KOREA <120> Cytobacillus solani LES88 EXHIBITING CONTROL EFFECT AGAINST BACTERIAL WILT <130> FP-2009051-KR <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1481 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> Cytobacillus solani LES88 <400> 1 ccccaatcat ctgtcccacc ttaggcggct ggctccttac ggttacccca ccgacttcgg 60 gtgttacaaa ctctcgtggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcccc 120 cgcggcatgc tgatccgcga ttactagcga ttccggcttc atgcaggcga gttgcagcct 180 gcaatccgaa ctgagaatgg ttttatggga ttggctaaac ctcgcggtct tgcagccctt 240 tgtaccatcc attgtagcac gtgtgtagcc caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt 300 catccccacc ttcctccggt ttgtcaccgg cagtcacctt agagtgccca actgaatgct 360 ggcaactaag atcaagggtt gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct cacgacacga 420 gctgacgaca accatgcacc acctgtcact ctgtcccccg aaggggaacg tcctatctct 480 aggattgtca gaggatgtca agacctggta aggttcttcg cgttgcttcg aattaaacca 540 catgctccac cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcctttg agtttcagcc ttgcggccgt 600 actccccagg cggagtgctt aatgcgtttg ctgcagcact aaagggcgga aaccctctaa 660 cacttagcac tcatcgttta cggcgtggac taccagggta tctaatcctg ttcgctcccc 720 acgctttcgc gcctcagtgt cagttacaga ccagaaagtc gccttcgcca ctggtgttcc 780 tccaaatctc tacgcatttc accgctacac ttggaattcc actttcctct tctgcactca 840 agtctcccag tttccaatga ccctccccgg ttgagccggg ggctttcaca tcagacttaa 900 gaaaccacct gcgcgcgctt tacgcccaat aattccggac aacgcttgcc acctacgtat 960 taccgcggct gctggcacgt agttagccgt ggctttctgg ttaggtaccg tcaaggtacc 1020 gccctattcg aacggtactt gttcttccct aacaacagag ttttacgatc cgaaaacctt 1080 catcactcac gcggcgttgc tccgtcagac tttcgtccat tgcggaagat tccctactgc 1140 tgcctcccgt aggagtctgg gccgtgtctc agtcccagtg tggccgatca ccctctcagg 1200 tcggctacgc atcgtcgcct tggtgagccg ttacctcacc aactagctaa tgcgccgcgg 1260 gcccatctgt aagtgatagc cgaagccatc tttcagcttt tctacatgag tagaaaagga 1320 ttatccggta ttagctccgg tttcccgaag ttatcccagt cttacaggca ggttgcccac 1380 gtgttactca cccgtccgcc gctaatcttt gggagcaagc tccctcagat tcgctcgact 1440 tgcatgtatt aggcacgccg ccagcgttcg tcctgagcca t 1481 <110> REPUBLIC OF KOREA, REPUBLIC OF KOREA <120> Cytobacillus solani LES88 EXHIBITING CONTROL EFFECT AGAINST BACTERIAL WILT <130> FP-2009051-KR <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1481 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> Cytobacillus solani LES88 <400> 1 ccccaatcat ctgtccccacc ttaggcggct ggctccttac ggttacccca ccgacttcgg 60 gtgttacaaa ctctcgtggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcccc 120 cgcggcatgc tgatccgcga ttactagcga ttccggcttc atgcaggcga gttgcagcct 180 gcaatccgaa ctgagaatgg ttttatggga ttggctaaac ctcgcggtct tgcagccctt 240 tgtaccatcc attgtagcac gtgtgtagcc caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt 300 catccccacc ttcctccggt ttgtcaccgg cagtcacctt agagtgccca actgaatgct 360 ggcaactaag atcaagggtt gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct cacgacacga 420 gctgacgaca accatgcacc acctgtcact ctgtcccccg aaggggaacg tcctatctct 480 aggattgtca gaggatgtca agacctggta aggttcttcg cgttgcttcg aattaaacca 540 catgctccac cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcctttg agtttcagcc ttgcggccgt 600 actccccagg cggagtgctt aatgcgtttg ctgcagcact aaagggcgga aaccctctaa 660 cacttagcac tcatcgttta cggcgtggac taccagggta tctaatcctg ttcgctcccc 720 acgctttcgc gcctcagtgt cagttacaga ccagaaagtc gccttcgcca ctggtgttcc 780 tccaaatctc tacgcatttc accgctacac ttggaattcc actttcctct tctgcactca 840 agtctcccag tttccaatga ccctccccgg ttgagccggg ggctttcaca tcagacttaa 900 gaaaccacct gcgcgcgctt tacgcccaat aattccggac aacgcttgcc acctacgtat 960 taccgcggct gctggcacgt agttagccgt ggctttctgg ttaggtaccg tcaaggtacc 1020 gccctattcg aacggtactt gttcttccct aacaacagag ttttacgatc cgaaaacctt 1080 catcactcac gcggcgttgc tccgtcagac tttcgtccat tgcggaagat tccctactgc 1140 tgcctcccgt aggagtctgg gccgtgtctc agtcccagtg tggccgatca ccctctcagg 1200 tcggctacgc atcgtcgcct tggtgagccg ttacctcacc aactagctaa tgcgccgcgg 1260 gcccatctgt aagtgatagc cgaagccatc tttcagcttt tctacatgag tagaaaagga 1320 ttatccggta ttagctccgg tttcccgaag ttatcccagt cttacaggca ggttgcccac 1380 gtgttactca cccgtccgcc gctaatcttt gggagcaagc tccctcagat tcgctcgact 1440 tgcatgtatt aggcacgccg ccagcgttcg tcctgagcca t 1481

Claims (10)

풋마름병 방제용 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP).Cytobacillus solani for blight control ( Cytobacillus solani ) LES88 strain (KACC 81134BP). 제1 항에 있어서,
상기 풋마름병은 랄스토니아 솔라나세아륨(Ralstonia solanacearum) 병원균으로부터 발생되는, 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP).
The method of claim 1,
The blight is Ralstonia solanacearum ( Ralstonia solanacearum ) generated from the pathogen, Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain (KACC 81134BP).
제2 항에 있어서,
상기 균주는 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP).
3. The method of claim 2,
The strain is Cytobacillus solani containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 ( Cytobacillus solani ) LES88 strain (KACC 81134BP).
제3 항에 있어서,
상기 풋마름병 방제용 대상 식물은 고추, 토마토, 가지, 및 담배를 포함하는 가지과 작물인 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP).
4. The method of claim 3,
The target plant for controlling the blight is red pepper, tomato, eggplant, and solanaceae crops including tobacco Cytobacillus solani ( Cytobacillus solani ) LES88 strain (KACC 81134BP).
제4 항에 있어서,
상기 균주는 미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제, 및 관주살포제 중 어느 하나를 포함하는, 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP).
5. The method of claim 4,
The strain is a microbial pesticide, seed coating agent, soil improver, composting agent, foliar spreader, and Cytobacillus solani, including any one of the irrigation spraying agent, Cytobacillus solani LES88 strain (KACC 81134BP).
풋마름병 방제용 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP), 상기 균주의 포자, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제.Cytobacillus solani for green blight control ( Cytobacillus solani ) LES88 strain (KACC 81134BP), a spore of the strain, a culture solution of the strain, or a microbial preparation comprising a mixture thereof as an active ingredient. 제6 항에 있어서,
상기 미생물 제제는 미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제, 및 관주살포제 중 어느 하나 이상을 포함하는 미생물 제제.
7. The method of claim 6,
The microbial preparation is a microbial preparation comprising any one or more of a microbial pesticide, a seed coating agent, a soil improver, a composting agent, a foliar spreader, and a irrigation spraying agent.
제1 항 내지 제5 항 중 선택된 어느 한 항에 따른 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP)를 준비하는 단계; 및
상기 균주를 TSB(Tryptic Soy Broth) 배지에 접종한 후 20~35℃100~200 rpm 조건하에서 40~50시간동안 배양하는 단계;를 포함하는, 식물의 풋마름병 방제용 미생물 제제의 제조방법.
Cytobacillus solani according to any one of claims 1 to 5 selected from the steps of preparing the LES88 strain (KACC 81134BP); and
After inoculating the strain in a TSB (Tryptic Soy Broth) medium, culturing for 40-50 hours under a condition of 20-35° C. 100-200 rpm; A method of producing a microbial preparation for controlling plant blight.
제1 항 내지 제5 항 중 선택된 어느 한 항에 따른 사이토바실러스 솔라나이(Cytobacillus solani) LES88 균주(KACC 81134BP)의 균체 또는 상기 균주를 이용하여 제조한 미생물 제제 중 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 식물의 풋마름병 방제용 비료.Claims 1 to 5, Cytobacillus solani according to any one of claims 1 to 5, comprising as an active ingredient any one or more of the cells of the LES88 strain (KACC 81134BP) or a microbial preparation prepared using the strain , Fertilizer for the control of blight in plants. 제9 항에 따른 비료를 토양에 관주처리하여 식물의 풋마름병에 대한 내성을 증가시키는 방법.10. A method of increasing the resistance of plants to blight by irrigating the soil with the fertilizer according to claim 9.
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