KR102450280B1 - 항체 제형 - Google Patents

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Abstract

안정한 장시간 보관이 가능한 고농도 항체 제형이 개시된다.

Description

항체 제형
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2016년 7월 5일자로 출원된 미국 가출원 제62/358,404호의 이익을 청구한다. 또한 본 출원은 2016년 8월 30일자로 출원된 유럽 특허 출원 제16306090.8호의 이익을 청구한다. 이러한 출원들 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
본 발명은 유리 용기에서의 보관 안정성이 증가된 항체 제형에 관한 것이다.
버킷 림프종 수용체 (Burkitt lymphoma receptor; BLR1), CD185, MDR15, 및 MGC117347로도 공지된 CXCR5는, CXC 케모카인 수용체 패밀리의 구성원인 G 단백질-커플링된 수용체이다. CXCR5는, 말초 림프절이 결여되어 있고, 더 소수의 파이어판 (Peyer's patches)을 갖고, B 세포 수준이 감소된 CXCR5 넉아웃 (knockout) 마우스에 의해 입증되는 바와 같이, B 세포 이동 및 조직 국재성에 영향을 준다. BLC로도 공지된 CXCL13은 CXCR5의 리간드이다. CXCL13은 B 세포 화학유인물질이다. 항-CXCR5 결합 제제 (binding agent)들은 치료적으로 관련이 있으며, 이들은 염증성 질환의 치료를 위한, 대상체, 특히 인간 대상체에 투여될 수 있는 완제의약품 (drug product)으로 제형화되었다.
정맥내 또는 피하 투여에 적합한 항-CXCR5 결합 제제 함유 제약 제형은 고도로 농축되어야 한다 (약 20 mg/mL 내지 약 100~150 mg/mL로, 그리고 심지어 최대 250 mg/mL로 또는 이보다 더 큰 농도로). 그러나, 그러한 제약 제형에서의 많은 문제가 높은 농도에서 발생할 수 있으며, 이는 증가된 점도, pH 변화, 및 용액의 색 변화를 포함한다. 게다가, 높은 결합 제제 농도에서, 가시적인 그리고 육안으로 보이지 않는 입자, 결합 제제 응집물, 및/또는 결합 제제 반분자가 형성될 가능성이 증가된다. 또한, 높은 결합 제제 농도에서, 제약 제형과 그의 보관 용기 사이에 상호작용이 일어날 가능성이 증가된다. 따라서, 이러한 제한을 피하는 개선된 제약 제형에 대한 필요성이 여전히 남아 있다.
유리 보관 용기에서의 보관 안정성이 증가된 항-CXCR5 항체 제약 제형이 본원에서 제공된다.
제1 태양에서, 본 발명은 환자에게 피하 투여하기에 적합한 항체 제형을 제공한다. 본 제형은 약 50 내지 약 250 mg/mL의 항-CXCR5 항체; 시트레이트 완충제; 약 0.01% (w/v) 초과의 계면활성제; 약 50 mM 초과의 아미노산; 및 약 1% 초과의 수크로스를 포함한다. 제형의 pH는 약 pH 6이다.
제1 태양의 일 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체 또는 이의 단편은 다음을 포함한다: (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; (b) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RMSNLAS (서열 번호 59), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (c) 서열 번호 13, 서열 번호 14, 또는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; (d) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSNLAS (서열 번호 64), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (e) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSNLAS (서열 번호 65), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (f) 서열 번호 17, 서열 번호 19, 또는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL), 및 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH); (g) 서열 번호 30, 서열 번호 31, 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; (h) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RMSNLA (서열 번호 66), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (SEQ ID N:62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (i) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSNLA (서열 번호 67), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (j) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSLA (서열 번호 68), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (k) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; (l) 서열 번호 39, 서열 번호 41, 또는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 45 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; (m) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; 또는 (n) RSSKSLLHSSGKTYLYW (서열 번호 69), RMSNLA (서열 번호 66), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열.
제1 태양의 또 다른 실시 형태에서, 아미노산은 아르기닌 또는 메티오닌이다.
제1 태양의 일 실시 형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트이다.
제2 태양에서, 본 발명은 환자에게 피하 투여하기에 적합한 항체 제형을 제공한다. 이 제형은 약 100 내지 약 175 mg/mL의 항체; 약 10 mM의 시트레이트 완충제; 약 0.1% (w/v)의 계면활성제; 약 200 mM의 아르기닌; 및 약 4.5 내지 9%의 수크로스를 포함한다. 제형의 pH는 약 pH 6이다.
제2 태양의 일 실시 형태에서, 항체는 완전 인간 항-CXCR5 항체이다.
제2 태양의 또 다른 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
제2 태양의 추가 실시 형태에서, 항체는 단쇄 Fv를 포함한다.
제2 태양의 또 다른 실시 형태에서, 항체는 인간 CXCR5의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 단편이다.
제2 태양의 일 실시 형태에서, 단리된 항체 또는 이의 단편은 RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSLA (서열 번호 68), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열을 포함한다.
제2 태양의 일 실시 형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트이다.
제2 태양의 또 다른 실시 형태에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80이다.
제3 태양에서, 본 발명은 약 175 mg/mL의 인간화 IgG4 항-CXCR5 항체; 약 10 mM의 시트레이트 완충제; 약 1.0 mg/mL의 폴리소르베이트 80; 약 200 mM의 아르기닌 HCl; 및 약 45 mg/mL의 수크로스를 포함하는 항체 제형을 제공한다. 제형의 pH는 약 pH 6이다.
제3 태양의 일 실시 형태에서, 인간화 IgG4 항-CXCR5 항체는 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.
제4 태양에서, 본 발명은 전술한 태양들 또는 실시 형태들 중 임의의 것에 따른 항체 제형을 포함하는 용기를 제공한다.
제4 태양의 일 실시 형태에서, 용기는 사전충전 시린지, 바이알, 또는 오토인젝터 (autoinjector)이다.
제4 태양의 또 다른 실시 형태에서, 용기는 동결건조된 형태의 전술한 태양들 또는 실시 형태들 중 임의의 것에 따른 항체 제형을 포함한다.
제4 태양에서, 본 발명은 제4 태양 및 이의 임의의 실시 형태의 용기, 및 항체 제형의 투여 및 사용에 대한 라벨 또는 설명서를 포함하는 키트를 제공한다.
제5 태양의 일 실시 형태에서, 투여는 주사에 의한 것이다.
제6 태양에서, 본 발명은 인체 또는 동물체의 진단 또는 치료 방법에서 사용하기 위한 전술한 태양들 또는 실시 형태들 중 임의의 것에 따른 항체 제형을 제공한다.
제7 태양에서, 본 발명은 류마티스 관절염의 치료 방법을 제공하며, 이는 이를 필요로 하는 대상체에게 전술한 태양들 또는 실시 형태들 중 임의의 것에 따른 항체 제형을 투여하는 단계를 포함한다.
제8 태양에서, 본 발명은 전술한 태양들 또는 실시 형태들 중 임의의 것에 따른 항체 제형의 동결건조된 형태를 제공한다.
도 1은 제1 항-CXCR5 항체 제형 위약의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다.
도 2는 제2 항-CXCR5 항체 제형 위약의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다.
도 3은 제3 항-CXCR5 항체 제형 위약의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다.
도 4는 날진 (Nalgene) 병에 보관된 제1 항-CXCR5 항체 완제의약품 (DP; SAR113244)의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다.
도 5는 200X 배율에서의 도 4의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다.
도 6은 제2 항-CXCR5 항체 DP의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다.
도 7은 제1 대조 항-CXCR5 항체 DP의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다. 제1 대조 항-CXCR5 항체 DP는 스타더스트 입자가 아닌, 제1 항-CXCR5 항체 DP와 유사한 입자 형성을 보여주는 "스타더스트 (Stardust) 무함유" 대조 제형 (SAR252067)이다. 그러한 발생은 스타더스트 입자 분석에서의 어려움을 보여준다.
도 8은 200X 배율에서의 도 7의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다.
도 9는 SAR341403 DP의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다.
도 10은 200X 배율에서의 도 9의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다.
도 11은 제2 대조 항-CXCR5 항체 DP (SAR341403)의 여과 후의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다. 배율은 50X이다. 제2 대조 항-CXCR5 항체 DP는 제1 항-CXCR5 항체 DP와 유사한 입자 형성을 보여주었고 스타더스트 입자 분석에서 어려움을 또한 보이는 또 다른 "스타더스트 무함유" 대조 제형이다.
도 12는 200X 배율에서의 도 11의 셀룰로오스 필터의 현미경 사진이다.
도 13은 플라스틱 병에서 보관된 DP SAR113244 용액 (스타더스트-무함유 용액)에 있어서의 DLS 측정 크기 분포 차트이다.
도 14는 유리 바이알에서 보관된 DP 용액 (스타더스트-함유 용액)에 있어서의 DLS 측정 크기 분포 차트이다.
도 15는 샘플로부터의 입자의 FT-IR 스펙트럼 (상측 트레이스)을 보여주고, 하측 트레이스는 비교를 위한 단백질의 스펙트럼을 나타내며; 3300 cm-1에서의 넓은 밴드 및 각각 1650 cm-1, 1520 cm-1에서의 두 아미드 밴드가 단백질에 전형적이다.
도 16은 단백질로 확인된 입자의 라만 (Raman) 스펙트럼이며; 제1 트레이스는 샘플로부터의 입자의 스펙트럼을 나타내고; 제2 트레이스는 배경을 제한 샘플로부터의 입자의 스펙트럼을 나타내며; 제3 트레이스는 데이터베이스 (단백질)로부터의 최상의 매치의 비교를 나타낸다.
도 17은 단백질로 확인된 입자의 FT-IR 스펙트럼이다. 제1 트레이스는 샘플로부터의 입자의 FT-IR 스펙트럼을 나타내며; 제2 트레이스는 데이터베이스 (폴리에틸렌)와의 최상의 매치를 나타내고; 제3 트레이스는 비교를 위한 단백질에 대한 스펙트럼을 나타내며; 3300 cm-1에서의 넓은 밴드 및 각각 1650 cm-1, 1520 cm-1에서의 두 아미드 밴드가 단백질에 전형적이다.
도 18은 단백질로 확인된 입자의 라만 스펙트럼이다. 제1 트레이스는 샘플로부터의 입자의 스펙트럼을 나타내고; 제2 트레이스는 배경을 제한 샘플로부터의 입자의 스펙트럼을 나타내며; 제3 트레이스는 폴리에틸렌으로 확인된 데이터베이스로부터의 최상의 매치의 비교를 나타낸다.
도 19는 기계적 스트레스 연구 동안의 입자 형성의 결과를 도시하며; 짙은 회색 = 가시적 입자, 연한 회색 = 1 내지 2개의 입자, 포인트 (pointed) 백색 = 대부분 투명한 용액, 백색 = 입자 무함유 용액이며; 막대는 좌측으로부터 우측으로 제형 A, H, B, C, 및 D (표 1 참조)를 나타낸다.
도 20은 기계적 스트레스 연구 동안의 입자 형성의 결과를 도시하며; 짙은 회색 = 가시적 입자, 체크 무늬 = 스타더스트 또는 스타더스트 유사 입자, 연한 회색 = 1 내지 2개의 입자, 포인트 백색 = 대부분 투명한 용액, 백색 = 입자 무함유 용액이며; 막대는 좌측으로부터 우측으로 제형 A, H, E, F, 및 G (표 1 참조)를 나타낸다.
달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는, 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용되는 바와 같이, 문맥에서 명백하게 다르게 언급되지 않는 한, 단수형 "a", "an" 및 "the"는 복수의 언급대상을 또한 포함함이 주지된다.
용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 10% 이내, 예컨대 5% (또는 1% 이하) 이내를 의미한다.
용어 "투여하다" 또는 "투여"는, 예컨대 점막, 피내, 정맥내, 피하, 근육내 전달 및/또는 본원에 기술되거나 당업계에 공지된 임의의 기타 다른 물리적 전달 방법에 의해, 신체 밖에 존재하는 물질 (예를 들어, 본 발명의 제형)을 환자 내로 주사하는 행위 또는 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다. 질환 또는 이의 증상이 치료 중에 있을 때, 물질의 투여는 전형적으로 질환 또는 이의 증상의 발병 후에 일어난다. 질환 또는 이의 증상이 예방 중에 있을 때, 물질의 투여는 전형적으로 질환 또는 이의 증상의 발병 전에 일어난다.
폴리펩티드의 맥락에서, 용어 "유사체"는 CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 항-CXCR5 항체와 유사하거나 동일한 기능을 보유하지만 반드시 유사하거나 동일한 아미노산 서열의 CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 항-CXCR5 항체를 포함할 필요는 없거나, 유사하거나 동일한 구조의 CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 항-CXCR5 항체를 보유하는 폴리펩티드를 지칭한다.
유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 하기 중 적어도 하나를 충족시키는 폴리펩티드를 지칭한다: (a) 본원에 개시된 CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 항-CXCR5 항체의 아미노산 서열과 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드; (b) 엄격한 조건 하에, 적어도 5개의 아미노산 잔기, 적어도 10개의 아미노산 잔기, 적어도 15개의 아미노산 잔기, 적어도 20개의 아미노산 잔기, 적어도 25개의 아미노산 잔기, 적어도 40개의 아미노산 잔기, 적어도 50개의 아미노산 잔기, 적어도 60개의 아미노 잔기, 적어도 70개의 아미노산 잔기, 적어도 80개의 아미노산 잔기, 적어도 90개의 아미노산 잔기, 적어도 100개의 아미노산 잔기, 적어도 125개의 아미노산 잔기, 또는 적어도 150개의 아미노산 잔기의 본원에 개시된 CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 항-CXCR5 항체 (또는 이의 VH 또는 VL 영역)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 혼성화되는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 폴리펩티드 (예를 들어, 문헌[Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.]; 문헌[Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.] 참조); 및 (c) 본원에 개시된 CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 항-CXCR5 항체 (또는 이의 VH 또는 VL 영역)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 폴리펩티드. CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 항-CXCR5 항체와 유사한 구조를 갖는 폴리펩티드는 CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드의 단편, CXCR5 에피토프, 또는 CXCR5 항체의 유사한 2차, 3차 또는 4차 구조를 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 폴리펩티드의 구조는 X선 결정법, 핵자기 공명 및 결정학적 전자 현미경법을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 당업자에게 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
"길항제" 또는 "저해제"는 표적 분자의 하나 이상의 생물학적 활성을 저해할 수 있는 분자를 지칭한다. 길항제는, 리간드에 의해 활성화되는 세포를 무능화시키거나 사멸시킴으로써, 및/또는 수용체 또는 리간드 활성화 (예를 들어, 티로신 키나아제 활성화) 또는 수용체에의 리간드 결합 후 신호 전달을 방해함으로써 리간드에 수용체가 결합하거나 수용체에 리간드가 결합하는 것을 방해할 수 있다. 길항제는 수용체-리간드 상호작용을 완전히 차단할 수 있거나 이와 같은 상호작용을 실질적으로 감소시킬 수 있다. 길항제에 의한 모든 그러한 방해 지점은 본 발명의 목적을 위하여 동등한 것으로 간주될 것이다.
예를 들어, CXCR5의 "길항제" 또는 "저해제"는 CXCR5에 의한 하나 이상의 생물학적 활성, 예컨대 시그널링을 저해할 수 있는 분자를 지칭한다. 이와 같이, CXCR5, CXCL13 또는 기타 CXCR5 리간드, 또는 CXCR5와 이의 리간드, 예컨대 CXCL13의 복합체에 결합하는 길항제 (예를 들어, 중화 항체); CXCR5와 리간드, 예컨대 CXCL13 사이의 상호작용을 길항하는 CXCR5 또는 CXCL13의 아미노산 서열 변이체 또는 유도체; 이종 분자, 예컨대 면역글로불린 영역 (예를 들어, 면역어드헤신)에 선택적으로 융합된 용해성 CXCR5; 또 다른 수용체 또는 생물학적 분자와 회합된 CXCR5를 포함하는 복합체; CXCR5에 결합하는 합성 또는 천연 서열 펩티드 등이 본 발명의 범주 내에 포함된다.
용어 "항체", "면역글로불린", 또는 "Ig"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 용어 항체는 합성 항체, 단클론 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 다중특이성 항체 (2특이성 항체를 포함함), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 인트라바디 (intrabody), 단쇄 Fv (scFv) (예를 들어, 1특이성, 2특이성 등을 포함함), 낙타화 (camelized) 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 디술피드-연결된 Fv (sdFv), 항-이디오타입 (항-Id) 항체, 및 상기한 것 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 특히, 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 즉 CXCR5 항원에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위 (예를 들어, 항-CXCR5 항체의 하나 이상의 상보성 결정 영역 (complementarity determining region; CDR))를 함유하는 항원 결합 도메인 또는 분자를 포함한다. 항-CXCR5 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 타입 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 임의의 하위클래스 (예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)의 것일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체는 인간화 단클론 항-CXCR5 항체와 같이 인간화된다. 특정 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체는 IgG 항체, 특히 인간화 IgG4 항체이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "항-CXCR5 항체"는 CXCR5가 그의 리간드에 결합하는 것을 저해하거나 실질적으로 감소시키고/시키거나 CXCR5 활성을 저해하는 분자를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아닌, 본원에 정의된 바와 같이 인간 CXCR5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이로부터 유도되는 폴리펩티드 (유도체)를 의미한다. 예를 들어, 고려되는 항-CXCR5 항체는 모든 목적을 위하여 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제8,647,622호에 개시된 것과 같은, 인간 CXCR5의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 특히, 본 발명의 고려되는 항-CXCR5 항체는 미국 특허 제8,647,622호의 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄를 갖는다. 또 다른 실시 형태에서, 인간 CXCR5의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 단편은 미국 특허 제8,647,622호의 RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSLA (서열 번호 68), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열을 포함한다.
용어 "B 세포 활성"은 정상 B 세포 수준보다 더 높은 것 (이는 국소적일 수 있음), 또는 B 세포의 생물학적 표시 (manifestation) 또는 기능의 증거, 예컨대 항체 발현, 브루톤 티로신 키나아제 (Bruton's tyrosine kinase)의 존재 또는 활성, Cd19의 발현 또는 존재, B 세포 활성화 인자의 발현 또는 존재 등을 의미한다.
용어 "결합 제제"는, CXCR5 또는 이의 변이체 또는 단편에 결합하거나 특이적으로 결합하는 임의의 분자, 예컨대 항체, siRNA, 핵산, 압타머, 단백질, 또는 소분자 유기 화합물을 의미한다.
용어 "부산물"은 주어진 제형 중에서 치료적/예방적 결합 제제, 예컨대 항체의 비율을 떨어뜨리거나 감소시키는 원치 않는 생성물을 포함한다. 예를 들어, 전형적인 부산물은 항체의 응집물, 항체의 단편 (예를 들어, 탈아미드화 또는 가수분해에 의한 항체의 분해에 의해 생성됨), 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 전형적으로, 응집물은 분자량이 단량체 항체보다 더 큰 복합체이다. 항체 분해 생성물은, 예를 들어 항체의 단편 (예를 들어, 탈아미드화 또는 가수분해에 의해 생성됨)을 포함할 수 있다. 전형적으로, 분해 생성물은 분자량이 단량체 항체보다 더 작은 복합체이다. IgG 항체의 경우에, 이와 같은 분해 생성물은 약 150 kD 미만이다.
용어 "조성물" 및 "제형"은, 선택적으로, 명시된 양으로 특정 성분 (예를 들어, 항-CXCR5 항체)을 함유하는 제품뿐만 아니라, 선택적으로, 명시된 양으로 명시된 성분들의 조합으로부터 직접적으로 또는 간접적으로 생기는 임의의 제품을 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 항원에의 항체의 결합에 직접적으로 연루되어 있지 않지만 다양한 이펙터 작용, 예컨대 Fc 수용체와의 상호작용을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단 부분을 지칭한다. 상기 용어들은 면역글로불린의 나머지 부분, 즉 항원 결합 부위를 함유하는 가변 도메인에 비하여 더 많이 보존된 아미노산 서열을 가지는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인과, 경쇄의 CHL 도메인을 함유한다.
용어 "CXCR5"는 림프구, 특히 B 세포, 및 특히 나이브 (
Figure 112019011514017-pct00001
) B 세포 상에서 발견되는 공지된 천연 발생 분자; 그러한 세포로부터 단리된 그러한 분자; 공지된 재료 및 수단을 이용하고, CXCR5를 코딩하는 핵산을 이용하여 재조합적으로 제조된 그러한 분자와; CXCR5의 부분, 예컨대 세포외 (EC) 도메인 (이는 본 발명의 실시와 관련된 특징 및 특성, 예컨대 CXCL13 결합성을 보유함)에 관련된다. 용해성 CXCR5 분자는 본질적으로 CXCR5의 EC 도메인으로 이루어질 수 있는데, 이는 일반적으로 상기 분자의 대략 처음 60개의 아미노산, 즉, CXCR5의 아미노 말단 부분을 포함한다.
CXCR5는 비-무차별적 수용체이다. CXCL13은 CXCR5의 리간드이며, 기질 세포 (stromal cell), 예컨대 여포 수지상 세포 상에서, 그리고 림프계 조직에서 구성적으로 발현된다. CXCL13은 특이적으로 B 세포 및 B 헬퍼 여포성 T 세포, TFH로 칭해지는 T 세포의 작은 하위세트를 유인한다. 이것은 면역계 내에서의 T 세포 및 B 세포 집단 사이의 다수의 상호작용을 고려하면 예상 밖의 것은 아닐 수 있다. 게다가, 활성화된 T 세포는 CXCR5 발현을 유도하거나 상향조절한다. 림프구의 삼차 이소성 배중심 (GC) 내로의 침윤은 이러한 비정형 림프절-유사 구조로 나타나는 특정 장애에서의 증가된 질환 중증도 및 내용성 파괴와 상당히 상관된 것으로 밝혀졌다. CXCR5-/- 및 CXCL13-/- 마우스와 같은 생체 내 쥐과 모델을 사용하면, 수용체 또는 리간드 중 어느 하나의 부재는 변경된 T 및 B 세포 국재화, 및 가능하게는 상호작용으로 인한 변경된 GC 미세 아키텍처 (architecture)로 이어진다. 이들 마우스는 또한, 심각한 콜라겐-유도된 관절염 (CIA)이 발생하는 것으로부터 보호된다. CXCR5는 성숙 B 세포 상에서 선택적으로 발현되기 때문에 (이는 RA의 병인과 연관됨), 이 수용체의 차단은 병에 걸린 개체에서 관절염 유발 응답 (arthritogenic response)을 조절할 것이다. 생물학적 제제 (즉, 항-TNF-α 및 항-CD20 항체, 리툭시맙 (Rituximab))에 의한 류마티스 관절염의 치료는 임상적으로 효과적인 것으로 나타났으며; 특히 B 세포-지시된 치료를 받는 환자는 임상적 징후 및 증상의 장기간 지속적인 개선을 나타냈다. 성숙한 B 세포 및 B 헬퍼 T 세포 상에서만 발현되는 CXCR5의 선택적 표적화는 B 세포 발생에 영향을 미치지 않거나, 환자를 면역손상시키지 않을 것이다. 리툭시맙과는 달리, 본 발명의 항-CXCR5 항체는 세포의 세포독성을 매개하지 않는 중화 항체이다.
"CXCR5 질환"은 CXCL13 또는 다른 CXCR5 리간드의 과다발현 또는 수준 증가, B 세포의 수준 증가, B 세포 활성의 수준 증가, CXCR5의 수준 증가 또는 CXCR5의 부적당한 대사 및 활성을 특징으로 하거나 이에 의해 야기되는 병, 장애, 질환, 병태, 이상 등이다.
용어 "에피토프"는, 결합 제제, 예컨대 항체의 하나 이상의 항원 결합 영역에 결합할 수 있고, 동물, 예컨대 포유동물, 예를 들어 인간에서 항원성 또는 면역원성 활성을 가지며, 면역 반응을 유도할 수 있는 항원, 예컨대 CXCR5 폴리펩티드 또는 CXCR5 폴리펩티드 단편의 표면 상의 국재화 영역을 지칭한다. 면역원성 활성을 가지는 에피토프는 동물에서 항체 반응을 유도하는 폴리펩티드의 일부분이다. 항원성 활성을 가지는 에피토프는, 예를 들어 면역분석법과 같은 당업계에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 결정되는 바와 같이, 항체가 특이적으로 결합하는 폴리펩티드의 일부분이다. 항원 에피토프는 반드시 면역원성일 필요는 없다. 에피토프는 보통 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹으로 이루어지며, 특정한 3차원 구조적 특징뿐만 아니라 특이적인 전하 특징을 가진다. 에피토프에 기여하는 폴리펩티드의 영역은 폴리펩티드의 연접 아미노산일 수 있거나, 에피토프는 폴리펩티드의 2개 이상의 비연접 영역이 함께 모인 것일 수 있다. 에피토프는 항원의 3차원 표면 특징부일 수 있거나 아닐 수 있다. 항-CXCR5 항체는 단량체 (변성) 형태의 CXCR5의 에피토프, 삼량체 (천연) 형태의 CXCR5의 에피토프, 또는 단량체 (변성) 형태 및 삼량체 (천연) 형태의 CXCR5 둘 다에 특이적으로 결합할 수 있다.
용어 "부형제"는 약물을 위한 희석제, 비히클, 보존제, 결합제, 안정화제 등으로 통상 사용되는 불활성 물질을 지칭하고, 단백질 (예를 들어, 혈청 알부민 등), 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 글리신, 히스티딘 등), 지방산 및 인지질 (예를 들어, 알킬 술포네이트, 카프릴레이트 등), 계면활성제 (예를 들어, SDS, 폴리소르베이트, 비이온성 계면활성제 등), 당류 (예를 들어, 수크로스, 말토스, 트레할로스 등) 및 폴리올 (예를 들어, 만니톨, 소르비톨 등)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 또한, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa.]을 참조하는데, 이는 모든 목적을 위하여 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
펩티드 또는 폴리펩티드의 맥락에서, 용어 "단편"은 전장 아미노산 서열보다 작은 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 이러한 단편은, 예를 들어 아미노 말단에서의 절단, 카르복시 말단에서의 절단, 및/또는 아미노산 서열로부터의 잔기(들)의 내부 결실로부터 야기될 수 있다. 단편은, 예를 들어 대안적 RNA 스플라이싱 또는 생체 내 프로테아제 활성으로부터 야기될 수 있다. 특정 실시 형태에서, hCXCR5 단편은 CXCR5 폴리펩티드 또는 CXCR5 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 10개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 15개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 20개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 25개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 40개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 50개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 60개의 연접 아미노 잔기, 적어도 70개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 80개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 90개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 100개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 125개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 150개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 175개의 연접 아미노산 잔기, 적어도 200개의 연접 아미노산 잔기, 또는 적어도 250개의 연접 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시 형태에서, CXCR5 폴리펩티드, 또는 CXCR5 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 단편은 그 폴리펩티드 또는 항체의 적어도 1가지, 적어도 2가지, 또는 적어도 3가지의 기능을 보유한다.
용어 "완전 인간 항체" 또는 "인간 항체"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 인간 가변 영역 및 가능하게는 인간 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 특정한 실시 형태에서, 상기 용어들은 인간 기원의 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 특정한 실시 형태에서, 항체는 완전 인간 항체이다. 용어 "완전 인간 항체"는 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열에 상응하는 가변 및 불변 영역을 가지는 항체를 포함하며, 이는 카바트 (Kabat) 등에 의해 기술된 바와 같다 (문헌[Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 완전 인간 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다.
어구 "재조합 인간 항체"는 재조합적 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 인간 항체, 예컨대 숙주 세포를 형질감염시키는 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합적 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대하여 트랜스제닉이고/이거나 트랜스염색체성 (transchromosomal)인 동물 (예를 들어, 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체 (예를 들어, 문헌[Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295] 참조) 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열의 기타 DNA 서열로의 스플라이싱을 수반하는 임의의 기타 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다 (문헌[Kabat et al., 1991] 참조). 그러나 특정 실시 형태에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관 내에서 돌연변이 유발되고 (또는, 인간 Ig 서열에 대해 트랜스제닉인 동물이 사용되는 경우, 생체 내에서 체세포 돌연변이 유발되고), 이에 따라 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포 계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 그와 관련되는 한편, 생체 내에서의 인간 항체 생식세포 계열 레퍼토리 내에서 천연적으로는 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
"IgG4 결합 제제" 또는 "IgG4 Fc 영역의 적어도 일부분을 포함하는 결합 제제" 둘 다는 적어도 IgG4 Fc의 단편을 포함하는 본원에 기술된 결합 제제를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 상기 단편은 IgG4 Fc 영역의 10, 20, 30, 40, 50, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210 또는 220개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 상기 단편은 IgG4 Fc 영역의 10~50, 50~100, 100~150, 또는 150~200개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시 형태에서, IgG4 Fc 영역의 부분은 IgG4 Fc 영역에 대하여 특정한 상동성을 가질 수 있다. 예를 들어, IgG4 결합 제제는 IgG4 Fc 영역에 대하여 50, 60, 70, 80, 90, 93, 95, 96, 97, 98, 99% 초과, 또는 100%의 상동성을 갖는 단백질의 일부분을 포함할 수 있다. 예시적인 IgG4의 Fc 영역이 본 명세서 전체에 걸쳐 기술되어 있다.
항체와 관련하여 사용될 때 용어 "중쇄"는 중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 하여 알파 (α), 델타 (Δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ), 및 뮤 (μ)로 칭해지는 5가지 별개의 타입을 지칭한다. 중쇄의 이들 별개의 타입은 당업계에 잘 공지되어 있으며, 각각 5가지 클래스의 항체, 즉 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM (4가지의 IgG의 하위클래스, 즉 IgG1, IgG1, IgG3, 및 IgG4를 포함함)이 생기게 한다. 일부 실시 형태에서, 중쇄는 인간 중쇄이다.
비-인간 (예를 들어, 쥐과) 항체의 "인간화" 형태는 인간 항체와 비교하여 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 서열을 포함하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이들의 단편 (예컨대 Fv, Fab, Fab′, F(ab′)2 또는 항체의 다른 표적-결합 하위서열 (subsequence))이다. 일반적으로, 인간화 항체는 실질적으로 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이며, 여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 주형 서열의 것이다. 인간화 항체는 적어도 일부분의 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로, 선택된 인간 면역글로불린 주형의 것을 또한 포함할 수 있다. 일반적으로, 그 목표는 인간에서 최소의 면역원성을 갖는 항체 분자를 갖는 것이다. 따라서, 하나 이상의 CDR에서의 하나 이상의 아미노산을 또한 상기 하나 이상의 CDR이 CXCR 또는 CXCL13에 특이적으로 결합하는 기능을 실질적으로 최소화시키지 않고서 인간 숙주에 대하여 덜 면역원성인 것으로 바꿀 수 있다는 것이 가능하다. 대안적으로, FR은 비-인간 FR일 수 있지만, 가장 면역원성이 큰 그러한 아미노산은 덜 면역원성인 것으로 대체된다. 그럼에도 불구하고, CDR 그래프팅이 인간화 항체를 수득하는 유일한 방법은 아니다. 예를 들어, 단지 CDR 영역을 변형시키는 것은 불충분할 수 있으며, 그 이유는 프레임워크 잔기가 CDR 루프의 3차원 구조 및 항체의 그의 리간드에 대한 전체 친화도를 결정하는 역할을 맡는 것이 흔하기 때문이다. 따라서, 비-인간 모 항체 분자가 인간에게 덜 면역원성인 것이 되게 변형되도록 임의의 수단이 실행될 수 있으며, 전반적인 인간 항체와의 서열 동일성이 항상 필요한 것은 아니다. 그래서, 인간화는 또한 예를 들어 단지 몇 개의 잔기, 특히 항체 분자 상에 노출되고 분자 내에 묻혀 있지 않으며 따라서 숙주 면역계에 쉽게 접근가능하지 않은 잔기의 단순한 치환에 의해 달성될 수 있다. 그러한 방법이 항체 분자 상에서의 "이동성" 또는 "가요성" 잔기의 치환과 관련하여 본원에 교시되어 있으며, 그 목표는 항체의 그의 에피토프 또는 결정자에 대한 특이성을 포함하지 않고서 생성된 분자의 면역원성을 감소시키거나 약화시키는 것이다. 예를 들어, 문헌[Studnicka et al., Prot Eng 7(6)805-814, 1994; Lazar et al., Mol Immunol. 　2007 Mar;44(8):1986-98 (2007)]; 문헌[Sims et al., J Immunol 151:2296 (1993)]; 문헌[Chothia et al., J Mol Biol 196:901 (1987)]; 문헌[Carter et al., Proc Natl Acad Sci USA 89:4285 (1992)]; 문헌[Presta et al., J Immunol 151:2623 (1993)], 국제 공개 제2006/042333호, 및 미국 특허 제5,869,619호를 참조한다.
"단리된" 또는 "정제된" 결합 제제, 예컨대 항체에는, 결합 제제가 유래한 세포 또는 조직 공급원 유래의 세포 물질 또는 기타 오염 단백질이 실질적으로 없거나, 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 기타 화학물질이 실질적으로 없다. 예를 들어, "세포 물질이 실질적으로 없는"이라는 말은 항체가 세포의 세포 구성성분 (이로부터 항체가 단리되거나 재조합적으로 생성됨)으로부터 분리된 항체 제제를 포함한다. 따라서, 세포 물질이 실질적으로 없는 항체는 이종 단백질 (또한 본원에서 "오염 단백질"로서 지칭됨)을 약 30%, 20%, 10%, 또는 5% (건조 중량 기준) 미만으로 가지는 항체 제제를 포함한다. 항체가 재조합적으로 생성될 때, 항체에는 배양 배지가 실질적으로 없는 것이 또한 바람직하다 (즉, 배양 배지는 단백질 제제의 부피의 약 20%, 10%, 또는 5% 미만을 나타낸다). 일부 실시 형태에서, 항체가 화학적 합성에 의해 생성될 때, 항체에는 화학적 전구체 또는 기타 화학 물질이 실질적으로 없다 (즉, 항체는 단백질의 합성에 연루된 화학적 전구체 또는 기타 화학 물질로부터 분리된다). 따라서, 그러한 항체 제제는 관심이 있는 항체 이외의 화학적 전구체 또는 화합물을 약 30%, 20%, 10%, 5% (건조 중량 기준) 미만으로 가진다. 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체는 단리되거나 정제된다.
용어 "인간 CXCR5," "hCXCR5" 또는 "hCXCR5 폴리펩티드" 및 유사 용어는 미국 특허 제8,647,622호에 개시되고, 적합한 세포 공급원으로부터 합성되거나 단리된 폴리펩티드 ("폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환가능하게 사용됨), 및 이의 SNP 변이체를 포함하는 관련 폴리펩티드를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 관련 폴리펩티드는 CXCR5 활성을 보유하고/하거나 항-CXCR5 면역 반응을 생성시키기에 충분한 대립형질 변이체 (예를 들어, SNP 변이체); 스플라이스 변이체; 단편; 유도체; 치환, 결실, 및 삽입 변이체; 융합 폴리펩티드; 및 종간 상동체를 포함한다. 또한, 항-CXCR5 면역학적 반응을 생성시키기에 충분한 용해성 형태의 CXCR5도 포함된다. 당업자가 알고 있는 바와 같이, 항-CXCR5 결합 제제, 예컨대 항체는 CXCR5 폴리펩티드, 폴리펩티드 단편, 항원, 및/또는 에피토프에 결합할 수 있는데, 이는 에피토프가 보다 큰 항원의 일부이고, 이 항원은 보다 큰 폴리펩티드 단편의 일부이고, 이 단편은 다시 보다 큰 폴리펩티드의 일부이기 때문이다.
용어 "카바트 넘버링 (Kabat numbering)" 등의 용어는 당업계에서 인식되어 있으며, 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역, 또는 이의 항원 결합 부분에서 다른 아미노산 잔기보다 더 가변적인 (즉, 초가변적인) 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 지칭한다. (문헌[Kabat et al. (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391] 및 문헌[Kabat et al. (1991)] 참조).
항체와 관련하여 사용될 때 용어 "경쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 하여 람다(λ)의 카파(κ)로 칭해지는 2가지의 별개의 타입을 지칭한다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 잘 알려져 있다. 일부 실시 형태에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
용어 "관리하다", "관리하는", 및 "관리"는, 대상체가 요법제 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)로부터 감염의 치유로 이어지는 것이 아닌 유익한 효과를 얻는 것을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 대상체에 하나 이상의 요법제 (예를 들어, 예방제 또는 치료제, 예컨대 본 발명의 제형)가 투여되어 CXCR5-매개 질환 (예를 들어, 류마티스 관절염), 또는 이들의 하나 이상의 증상을 "관리"하여, 상기 질환의 진행 또는 악화를 방지한다.
용어 "단클론 항체"는 상동성이거나 실질적으로 상동성인 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 각각의 단클론 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 일부 실시 형태에서, "단클론 항체"는 단일 하이브리도마 또는 기타 세포에 의해 생성되는 항체이다. 용어 "단클론"은 항체를 만들기 위한 임의의 특정 방법에 한정되지 않는다. 예를 들어, 단클론 항체는 문헌[Kohler et al.; Nature, 256:495 (1975)]에 기술된 바와 같은 하이브리도마 방법에 의해 만들어질 수 있거나 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클론 세포주 및 이에 의해 발현되는 단클론 항체의 제조를 위한 기타 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌[Chapter 11, Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed.]; 문헌[Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참조).
용어 "제약상 허용가능한"은 동물, 더욱 특히는 인간에서 사용하기 위해 미국 연방 정부 또는 주 정부의 관리 기관에 의해 승인되거나 미국 약전, 유럽 약전 또는 다른 일반적으로 인지되어 있는 약전에 열거된 것을 의미한다.
"제약상 허용가능한 부형제"는 알맞은 또는 편리한 투여 형태를 제조하기 위하여 활성 분자, 예컨대 단클론 항체와 조합된 임의의 불활성 물질을 의미한다. "제약상 허용가능한 부형제"는 이용되는 투여량 및 농도에서 수용체에 비독성이며, 단클론 항체를 포함하는 제형의 다른 성분과 양립가능한 부형제이다.
용어 "예방하다", "예방하는", 및 "예방"은, 본원에서 제공되는 요법제 또는 요법제들의 조합 (예를 들어, 본 발명의 제형과 같은 예방제 또는 치료제의 조합)의 투여로 생기는, CXCR5-매개 질환 및/또는 이와 관련된 증상의 발생, 재발, 개시 또는 확산의 전체 또는 부분적인 저해를 지칭한다.
용어 "예방제"는 대상체에서 CXCR5-매개 질환 및/또는 이와 관련된 증상의 발생, 재발, 개시 또는 확산을 전체적으로 또는 부분적으로 저해할 수 있는 임의의 에이전트를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 용어 "예방제"는 본 발명의 제형을 지칭한다. 특정한 다른 실시 형태에서, 용어 "예방제"는 본 발명의 제형 이외의 에이전트를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 예방제는 CXCR5-매개 질환 및/또는 이와 관련된 증상을 예방하거나, 또는 CXCR5-매개 질환 및/또는 이와 관련된 증상의 개시, 발생, 진행 및/또는 중증도를 지연시키는 데 유용한 것으로 알려졌거나 사용되어 왔거나 또는 현재 사용되고 있는 에이전트이다. 특정한 실시 형태에서, 예방제는 완전 인간 항체, 예컨대 완전 인간 단클론 항체, 또는 인간화 항-CXCR5 항체, 예컨대 인간화 항-CXCR5 단클론 항체이다.
용어 "CXCR5 항원"은 결합 제제, 예컨대 항체가 특이적으로 결합하는 CXCR5 폴리펩티드의 부분을 지칭한다. 또한, CXCR5 항원은 결합 제제, 예컨대 항체가 특이적으로 결합하는 CXCR5 폴리펩티드 또는 이의 단편의 유사체 또는 유도체를 지칭한다. 에피토프에 기여하는 CXCR5 폴리펩티드의 영역은 이 폴리펩티드의 연접 아미노산일 수 있거나, 에피토프는 이 폴리펩티드의 2개 이상의 비-연접 영역이 함께 모인 것일 수 있다. 에피토프는 항원의 3차원 표면 특징부일 수 있거나 아닐 수 있다. 면역 반응을 유도할 수 있는 CXCR5 항원의 표면 상의 국재화된 영역이 CXCR5 에피토프이다. 에피토프는 항원의 3차원 표면 특징부일 수 있거나 아닐 수 있다.
용어 "CXCR5-매개 질환", 및 "CXCR5-매개 장애"는 상호교환가능하게 사용되며, 전적으로 또는 부분적으로 CXCR5에 의해 야기되거나, 또는 그의 결과인 임의의 질환을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, CXCR5는 세포 표면 상에서 비정상적으로 (예를 들어, 고도로) 발현된다. 일부 실시 형태에서, CXCR5는 특정 세포 타입 상에서 비정상적으로 상향조절될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 정상, 비정상 또는 과도한 세포 시그널링은 CXCR5 리간드에의 CXCR5의 결합에 의해 야기된다. 특정 실시 형태에서, CXCR5 리간드는 CXCL13이다. 특정 실시 형태에서, CXCR5-매개 질환은 류마티스 관절염 (RA)이다.
용어 "당류"는 다가 알코올의 유도체인 분자의 부류를 지칭한다. 당류는 통상적으로 탄수화물로 지칭되며, 상이한 양의 당 (당류) 단위, 예를 들어 단당류, 이당류 및 다당류를 함유할 수 있다.
용어 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적으로 결합하는"은 항원 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하지만 다른 항원에는 특이적으로 결합하지 않는 것을 의미한다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 항체는, 예를 들어 방사성면역분석법 (radioimmunoassay; RIA), 효소 결합 면역 흡착법(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA), BIACORE®, 또는 당업계에 공지된 기타 분석법에 의해 결정되는 바와 같이, 더 낮은 친화도를 가지는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 변이체 또는 단편은 관련 항원과 교차 반응성일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 변이체 또는 단편은 다른 항원과 교차 반응하지 않는다. CXCR5 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 변이체 또는 단편은 예를 들어 면역분석법, BIACORE®, 또는 당업자에게 공지된 다른 기술에 의해 확인될 수 있다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 적어도 배경 신호 또는 노이즈의 2배, 그리고 더 전형적으로, 배경의 10배 초과일 것이다. 항체 특이성에 관한 논의에 대해서는 예를 들어 문헌[Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336]을 참조한다.
"안정한" 또는 "안정화된" 제형은 제형 내 결합 제제, 예컨대 항체가 저장시 그의 물리적 안정성, 아이덴티티 (identity), 완전성, 및/또는 화학적 안정성, 아이덴티티, 완정성, 및/또는 생물학적 활성을 본질적으로 유지하는 것이다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 당업계에서 이용가능하며, 예를 들어 문헌[Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)] 및 문헌[Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 (1993)]에 개관되어 있다. 안정성은 선택된 온도 및 기타 보관 조건에서 선택된 기간 동안 측정될 수 있다. 안정성은 외관 검사, SDS-PAGE, IEF, HPSEC, RFFIT, 및 카파/람다 ELISA로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법 중 적어도 하나에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체가 색상 및/또는 투명성의 외관 검사시 또는 UV 광산란, SDS-PAGE에 의해, 또는 (고압) 크기 배제 크로마토그래피 (HPSEC)에 의해 측정될 때, 응집, 침전, 및/또는 변성의 징후를 나타내지 않는 경우, 항체는 제약 제형에서 "물리적 안정성을 유지한다". 일부 실시 형태에서, 본 발명의 제형을 사용할 때, HPSEC 또는 응집체 형성을 측정하기 위한 임의의 다른 적합한 방법에 의해 측정할 경우, 항체의 5% 이하, 전형적으로 4% 이하, 전형적으로 3% 이하, 더 전형적으로 2% 이하, 특히 1% 이하가 응집물을 형성한다. 예를 들어, 특정 제형에서 특정한 보관 조건 하에서 특정한 소정의 기간 후 항체 단량체의 순도가 약 90%, 전형적으로 약 95%, 특히 약 98%이면, 항체는 특정 제형 중에서 안정한 것으로 여겨진다. 화학적 안정성은 단백질의 화학적으로 변경된 형태를 검출 및 정량화함으로써 평가될 수 있다. 화학적 변경은 크기 변형 (예를 들어, 클리핑)을 수반할 수 있으며, 이는 예를 들어 (HP)SEC, SDS-PAGE, 및/또는 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화/비행 시간 질량 분광법(matrix-assisted laser desorption ionization/time-of-flight mass spectrometry; MALDI/TOF MS)을 사용하여 평가될 수 있다. 화학적 변경의 다른 유형은 전하 변경 (예를 들어, 탈아미드화의 결과로서 일어남)을 포함하며, 이는 예를 들어 이온-교환 크로마토그래피에 의해 평가될 수 있다. 주어진 시점에서의 항체의 생물학적 활성이 예를 들어 항원 결합 분석법 또는 바이러스 중화 분석법에서 측정될 때, 제약 제형이 제조된 때에 나타난 생물학적 활성의 (분석법의 오차 내에서) 적어도 약 90%이면, 항체는 주어진 시점에서 제약 제형에서 "생물학적 활성을 유지한다".
하나의 특정한 실시 형태에서, 항체 제형은 "스타더스트 입자 형성에 대하여 안정할" 수 있으며, 이는 6개월의 기간 동안 가속화 조건 하에서 유리 용기에서 보관될 때 스타더스트 입자를 형성하지 않는 항체 제형을 지칭한다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 대상체는 전형적으로 포유동물, 예를 들어 비-영장류 (예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 또는 영장류 (예를 들어, 원숭이 및 인간), 그리고 일부 실시 형태에서 인간이다. 일 실시 형태에서, 대상체는 CXCR5-매개 질환을 갖는 포유동물, 예컨대 인간이다. 또 다른 실시 형태에서, 대상체는 CXCR5-매개 질환의 발병 위험이 있는 포유동물, 예컨대 인간이다.
용어 "치료적 유효량"은 주어진 질환 및/또는 이와 관련된 증상의 중증도 및/또는 지속기간을 감소 및/또는 개선시키는 데 충분한 요법제 (예를 들어, 본 발명의 제형)의 양을 지칭한다. 이 용어는 또한 주어진 질환의 전진 또는 진행의 감소 또는 개선, 주어진 질환의 재발, 발생 또는 개시의 감소 또는 개선을 위해 및/또는 또 다른 요법제 (예를 들어, 본 발명의 제형 이외의 요법제)의 예방 또는 치료 효과(들)를 개선 또는 향상시키는 데 필요한 양을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체의 치료적 유효량은 약 0.1 mg/kg (항체의 mg/대상체의 체중 (kg)) 내지 약 100 mg/kg이다. 특정 실시 형태에서, 본원에서 제공되는 항체의 치료적 유효량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 90 mg/kg, 또는 약 100 mg/kg (또는 이들 내의 범위)이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 일부 실시 형태에서, "치료적 유효량"은 또한 명시된 결과 (예를 들어, 세포의 CXCR5의 생물학적 활성, 예컨대 CXCL13에의 결합의 저해)를 달성하는 본 발명의 항체의 양을 지칭한다.
용어 "치료제"는 CXCR5-매개 질환 및/또는 이와 관련된 증상의 치료, 관리 또는 개선에 사용될 수 있는 임의의 에이전트를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 용어 "치료제"는 본 발명의 제형을 지칭한다. 특정한 다른 실시 형태에서, 용어 "치료제"는 본 발명의 제형 이외의 에이전트를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 치료제는 CXCR5-매개 질환 또는 이와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 관리 또는 개선을 위해 유용한 것으로 알려져 있거나, 이를 위해 사용되어 왔거나, 현재 사용되고 있는 에이전트이다.
용어 "치료법"은 질환 (예를 들어, IBD 또는 GVHD) 또는 CXCR5-매개 질환 (예를 들어, 류마티스 관절염)의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용될 수 있는 임의의 프로토콜, 방법 및/또는 에이전트를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 용어 "치료법들" 및 "치료법"은 당업자, 예를 들어 의료인에게 알려져 있는 CXCR5-매개 질환의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 유용한 생물학적 치료법, 지지 요법 및/또는 다른 치료법을 지칭한다.
용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 하나 이상의 요법제의 투여 (하나 이상의 예방제 또는 치료제, 예컨대 본 발명의 제형의 투여를 포함하지만, 이에 한정되지 않음)로부터 야기되는 CXCR5-매개 질환 (예를 들어, 류마티스 관절염)의 진행, 중증도, 및/또는 지속기간의 감소 또는 개선을 지칭한다. CXCR5에 대한 특정한 실시 형태에서, 그러한 용어는 CXCR5의 CXCL13에의 결합의 감소 또는 저해, 및/또는 CXCR5-매개 질환, 예컨대 류마티스 관절염과 연관된 하나 이상의 증상의 저해 또는 감소를 지칭한다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은, 경쇄 및 중쇄의 일부분으로서 전형적으로 중쇄에서 아미노 말단의 약 120개 내지 130개의 아미노산 및 경쇄에서 약 100개 내지 110개의 아미노산을 지칭하며, 이는 항체 중 서열이 광범위하게 상이하고 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역 (CDR)으로 칭해지는 영역에 집중되어 있는 한편, 가변 도메인 중 더 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역 (framework region; FR)으로 칭해진다. 경쇄 및 중쇄의 CDR은 주로 항체와 항원의 상호작용에 책임이 있다. 아미노산 위치의 넘버링은 문헌[Kabat et al. (1991) Sequences of proteins of immunological interest. (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.) 5th ed. ("Kabat et al.")]에서와 같이, EU 인덱스에 따른다. 일부 실시 형태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "스타더스트" 및 "스타더스트 입자"는 유리 용기 내의 항체 제형의 존재와 연관된, 상기 용기에서 발생하는 입자를 지칭하기 위하여 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
B. 제형
본 발명의 제형은 항-CXCR5 결합 제제를 포함하는 동결건조 분말 및 액체의 형태로 발견될 수 있다. 또한, 그러한 제형은 완충제, 계면활성제, 등장화제, 아미노산, 및 기타 부형제를 포함할 수 있다.
결합 제제
본 발명의 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체는 인간화 또는 완전 인간 항체이다. 인간화 및 완전 인간 항체 이소타입의 예는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체는 IgG 항체이다. IgG의 4가지 형태가 있다. 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체는 IgG4 항체이다. 본 발명의 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체는 인간화 IgG4 항체이다.
본 발명의 제형의 특정 실시 형태는 또한 항-CXCR5 결합 제제, 예컨대 항체의 변이체를 포함한다. 항-CXCR5 항체의 변이체는 이의 높은 유사성을 기반으로 하여 유사한 물리화학적 특성을 가질 수 있으며, 따라서 본 발명의 범주 내에 또한 포함된다. 변이체는 항-CXCR5 항체에 대하여 적어도 95%, 적어도 97%, 예를 들어 적어도 98% 또는 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, CXCR5 폴리펩티드, CXCR5 폴리펩티드 단편, 또는 CXCR5 에피토프에의 결합에 대하여 경쟁할 수 있는 항체로서 정의된다. 일부 실시 형태에서, 변이체는 CXCR5의 생물학적 활성 (예를 들어, CXCL13의 CXCR5에의 결합)을 개선시키거나, 중화시키거나, 또는 저해한다. 표적에의 결합에 대한 경쟁의 결정은 당업자에게 공지된 일상적인 방법에 의해 행해질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 변이체는 인간 항체이며, 일부 실시 형태에서, IgG4 분자이다. 일부 실시 형태에서, 변이체는 아미노산 서열이 본원에 개시된 고려되는 항체와 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 용어 "변이체"는 항-CXCR5 항체의 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산이 변경된 아미노산 서열을 포함하는 항체를 지칭한다. 변이체는 아미노산 치환, 변형, 부가, 및/또는 결실을 포함하여, 보존적 서열 변형을 가질 수 있다.
변형의 예는 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해성 절단, 및 세포 리간드 또는 기타 단백질에의 연결을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 아미노산 변형은 당업계에 공지된 표준 기술, 예컨대 항체를 코딩하는 핵산에서의 부위-지정 돌연변이 유발, 분자 클로닝, 올리고뉴클레오티드-지정 돌연변이 유발, 및 무작위 PCR-매개 돌연변이 유발에 의해 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 구조적 또는 화학적 특성을 가지는 아미노산 잔기로 대체된 것을 포함한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당업계에서 정의된 바 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄를 가지는 아미노산 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 가지는 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄를 가지는 아미노산 (예를 들어, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 가지는 아미노산 (예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지 측쇄를 가지는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신), 및 방향족 측쇄를 가지는 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판)을 포함한다. 상기에서 사용된 것 이외의 아미노산 잔기 패밀리의 분류가 또한 이용될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 더욱이, 변이체는 비보존적 아미노산 치환, 예를 들어 소정 아미노산의 상이한 구조적 또는 화학적 특성을 가지는 아미노산 잔기로의 대체를 가질 수 있다. 유사한 소수의 변이는 또한 아미노산의 결실 또는 삽입, 또는 이들 둘 다를 포함할 수 있다. 어느 아미노산 잔기가 면역학적 활성을 없애지 않고서 치환되거나, 변형되거나, 삽입되거나, 결실될 수 있는지를 결정하는 데 있어서의 지침은 당업계에서 잘 알려진 컴퓨터 프로그램을 사용하여 발견될 수 있다. 당업자에게 공지된 컴퓨터 알고리즘, 예컨대 특히 Gap 또는 Bestfit이 비교할 아미노산 서열들을 최적으로 정렬하고 유사하거나 동일한 아미노산 잔기를 정의하는 데 사용될 수 있다. 변이체들은 항-CXCR5 항체와 비교하여 동일하거나 상이한, 더 높거나 더 낮은 결합 친화도를 가질 수 있지만, CXCR5에 여전히 특이적으로 결합할 수 있으며, 항-CXCR5 항체와 동일한, 더 높은 또는 더 낮은 생물학적 활성을 가질 수 있다.
본 발명의 실시 형태는 또한 항-CXCR5 결합 제제, 예컨대 항체의 항원 결합 단편을 포함한다. 용어 "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역", "항원 결합 단편" 및 유사한 용어는 항원과 상호작용하고 결합 제제 상에 항원에 대한 특이성 및 친화도를 부여하는 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 부분 (예를 들어, 상보성 결정 영역(CDR))을 지칭한다. 항원 결합 영역은 임의의 동물 종, 예컨대 설치류 (예를 들어, 토끼, 래트 또는 햄스터) 및 인간으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항원 결합 영역은 인간 기원의 것이다. 항원 결합 단편의 비제한적 예는 다음을 포함한다: Fab 단편, F(ab')2 단편, Fd 단편, Fv 단편, 단쇄 Fv (scFv) 분자, dAb 단편, 및 항체의 초가변 영역을 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인식 단위.
본 발명의 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 결합 제제 (또는 이의 변이체 또는 이의 항원 결합 단편)는 생체 내에서 CXCR5의 생물학적 활성 (예를 들어, CXCL13의 CXCR5에의 결합)을 개선시키거나, 중화시키거나, 또는 저해한다.
본 발명의 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 결합 제제 (또는 이의 변이체 또는 이의 항원 결합 단편)는 생체 내에서 CXCR5의 생물학적 활성 (예를 들어, CXCL13의 CXCR5에의 결합)을 개선시키거나, 중화시키거나, 또는 저해하는 길항제-결합 제제이다.
일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 결합 제제 (또는 이의 변이체 또는 이의 항원 결합 단편)는 제형에 약 50 내지 약 500 mg/mL, 약 25 내지 약 400 mg/mL, 약 50 내지 약 250 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 280 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 125 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 75 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 50 mg/mL, 및 약 5 mg/mL 내지 약 25 mg/mL의 양으로 존재한다. 예를 들어, 항-CXCR5 결합 제제는 제형에 약 5 mg/mL, 약 10 mg/mL, 약 15 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 30 mg/mL, 약 35 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 65 mg/mL, 약 70 mg/mL, 약 75 mg/mL, 약 80 mg/mL, 약 85 mg/mL, 약 90 mg/mL, 약 95 mg/mL, 약 100 mg/mL, 약 105 mg/mL, 약 110 mg/mL, 약 115 mg/mL, 약 120 mg/mL, 약 125 mg/mL, 약 130 mg/mL, 약 135 mg/mL, 약 140 mg/mL, 약 145 mg/mL, 약 150 mg/mL, 약 155 mg/mL, 약 160 mg/mL, 약 165 mg/mL, 약 170 mg/mL, 약 175 mg/mL, 약 180 mg/mL, 약 185 mg/mL, 약 190 mg/mL, 약 195 mg/mL, 약 200 mg/mL, 약 205 mg/mL, 약 210 mg/mL, 약 215 mg/mL, 약 220 mg/mL, 약 225 mg/mL, 약 230 mg/mL, 약 235 mg/mL, 약 240 mg/mL, 약 245 mg/mL, 약 250 mg/mL, 약 255 mg/mL, 약 260 mg/mL, 약 265 mg/mL, 약 270 mg/mL, 약 275 mg/mL, 또는 약 280 mg/mL의 양으로 존재할 수 있다.
대안적인 실시 형태에서, 항-CXCR5 결합 제제는 제형에 약 5 내지 약 25 mg/mL, 약 26 내지 약 50 mg/mL, 약 51 내지 약 75 mg/mL, 약 76 내지 약 100 mg/mL, 약 101 내지 약 125 mg/mL, 약 126 내지 약 150 mg/mL, 약 151 내지 약 175 mg/mL, 약 176 내지 약 200 mg/mL, 약 201 mg/mL 내지 약 225 mg/mL, 약 226 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 251 내지 약 280 mg/mL, 약 5 내지 약 25 mg/mL, 약 40 내지 약 60 mg/mL, 약 75 내지 약 85 mg/mL, 또는 약 90 내지 약 110 mg/mL의 양으로 존재할 수 있다.
특정한 제1 실시 형태에서, 고려되는 항체는 인간 CXCR5의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 단편이다. 본 항체 또는 이의 단편은 다음을 포함할 수 있다: (a) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; (b) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RMSNLAS (서열 번호 59), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (c) 서열 번호 13, 서열 번호 14, 또는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; (d) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSNLAS (서열 번호 64), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (e) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSNLAS (서열 번호 65), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (f) 서열 번호 17, 서열 번호 19, 또는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL), 및 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH); (g) 서열 번호 30, 서열 번호 31, 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 33 또는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; (h) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RMSNLA (서열 번호 66), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (SEQ ID N:62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (i) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSNLA (서열 번호 67), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (j) RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSLA (서열 번호 68), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열; (k) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; (l) 서열 번호 39, 서열 번호 41, 또는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 45 또는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; (m) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 56 또는 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄; 또는 (n) RSSKSLLHSSGKTYLYW (서열 번호 69), RMSNLA (서열 번호 66), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열.
특정한 제2 실시 형태에서, 고려되는 항체는 인간 CXCR5의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 단편이다. 본 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다.
특정한 제3 실시 형태에서, 고려되는 항체는 인간 CXCR5의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 단편이다. 본 항체 또는 이의 단편은 RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSLA (서열 번호 68), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열을 포함한다.
상기의 특정한 제1, 제2 또는 제3 실시 형태 중 임의의 것에서, 항체 또는 이의 단편은 하나 이상의 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다. 상기 하나 이상의 불변 영역의 도메인은 CH1, CH2, CH3, 및/또는 CL로 이루어질 수 있다. 상기 하나 이상의 불변 영역은 예를 들어 IgG4 항체일 수 있는 IgG 항체 유래의 것일 수 있다.
상기의 특별한 제1, 제2 또는 제3 실시 형태 중 임의의 것에서, 항체 또는 이의 단편은 단쇄 Fv일 수 있다.
일 실시 형태에서, 상기의 특별한 제1, 제2 또는 제3 실시 형태 중 어느 하나의 항체 또는 이의 단편의 치료적 유효량 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물이 고려된다.
완충제
본 발명의 제형은 완충제로서 시트레이트 완충제를 포함할 수 있다. 다른 완충제도 사용될 수 있다. 완충제는 생리학적으로 적합한 pH를 유지한다. 게다가, 완충제는 제형의 등장성 및 화학적 안정성을 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, 시트레이트 완충제는 제형에 약 0.5 mM 내지 약 50 mM, 예를 들어, 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 시트레이트 완충제는 제형에 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 약 25 mM, 약 26 mM, 약 27 mM, 약 28 mM, 약 29 mM, 약 30 mM, 약 31 mM, 약 32 mM, 약 33 mM, 약 34 mM, 약 35 mM, 약 36 mM, 약 37 mM, 약 38 mM, 약 39 mM, 약 40 mM, 약 41 mM, 약 42 mM, 약 43 mM, 약 44 mM, 약 45 mM, 약 46 mM, 약 47 mM, 약 48 mM, 약 49 mM, 또는 약 50 mM의 농도로 존재할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 시트레이트 완충제는 제형에 약 7 mM 내지 약 13 mM, 예컨대 약 9 mM 내지 약 11 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시 형태에서, 시트레이트 완충제는 약 10 mM의 농도로 존재한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명의 제형은 pH 6 이하의 pH를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 제형의 pH는 약 5.0 내지 약 6.0의 범위이다. 예를 들어, 제형의 pH는 약 5.0, 약 5.1, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 약 5.5, 약 5.6, 약 5.7, 약 5.8, 약 5.9, 및 약 6.0일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제형의 pH는 약 5.5 내지 약 6.0의 범위일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 상기 pH는 약 5.5 또는 약 6.0이다. 제형의 pH는 당업자에게 공지된 임의의 수단에 의해 측정될 수 있다. pH의 측정 수단으로는 마이크로전극을 갖춘 pH 미터를 사용하는 것이 있다. 제형의 pH는 당업계에 공지된 임의의 수단을 사용하여 조정될 수 있다. 제형의 pH를 변경시키는 예시적인 화학물질로는 염산 (HCl) 및 수산화나트륨 (NaOH)이 있다.
특정 실시 형태에서, 본 발명의 제형은 결합 제제, 예컨대 항체의 등전점 (pI) 이하의 pH를 갖는다. 등전점은 특정 분자 또는 표면의 순전하가 0에 이르게 하는 pH이다. 항-CXCR5 결합 제제의 pI는 당업자에게 공지된 임의의 수단에 의해 결정될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항-CXCR5 항체의 pI는 변성 등전 집속에 의해 결정된다. 본원에서 고려되는 완전 인간 IgG4 항체의 pI는 약 6.9 내지 약 9.1의 범위일 수 있다.
예를 들어, 고려되는 제형은 항-CXCR5 결합 제제 및 시트레이트 완충제를 포함하며, 여기서, 제형의 pH는 약 pH 6 이하이면서 결합 제제의 등전점 (pI) 이하이다. 본 발명의 제형은 종래의 IgG4 결합 제제 제형 (예를 들어, 인산염 완충 염수 (PBS) 제형)에 비하여 유의한 개선을 제공하는데, 상기 종래의 IgG4 결합 제제 제형은 제형 중 결합 제제의 농도의 증가시 원하지 않는 부산물을 형성한다. 특히, 본 발명의 제형은 감소된 양의 응집물, 반분자, 분해 생성물, 저분자량 단백질 (LMWP), 고분자량 단백질 (HMWP), 및 산성, 염기성, 및 중성 이소형의 결합 제제의 재배치 (제형에서)를 갖는다.
계면활성제
본 발명의 제형은 선택적으로, 안정화제로도 공지된 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 계면활성제/안정화제는 제형 중 생물학적 분자 및/또는 일반적인 제약 부형제와 상호작용하여 이를 안정화시키는 화학적 화합물이다. 특정 실시 형태에서, 계면활성제는 더 낮은 온도에서의 보관과 함께 사용될 수 있다. 계면활성제는 일반적으로 결합 제제를 공기/용액 계면에 의해 유도된 스트레스 및 용액/표면에 의해 유도된 스트레스로부터 보호할 수 있는데, 이러한 스트레스는 단백질 응집을 야기할 수 있다. 계면활성제는 폴리소르베이트, 글리세린, 디카르복실산, 옥살산, 숙신산, 푸마르산, 프탈산, 및 이들의 조합을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 당업자는 제약상 허용가능한 한, 즉 대상체에의 투여에 적합한 한 다른 계면활성제, 예를 들어 비이온성 또는 이온성 세제가 사용될 수 있음을 알고 있다. 일부 실시 형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 폴리소르베이트의 예는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 및 폴리소르베이트 80을 포함한다.
예시적인 실시 형태에서, 계면활성제는 제형에 약 0.001% 내지 약 0.1% (w/v)의 양으로 존재한다. 예를 들어, 계면활성제는 약 0.001% (w/v), 약 0.002% (w/v), 약 0.003% (w/v), 약 0.004% (w/v), 약 0.005% (w/v), 약 0.006% (w/v), 약 0.007% (w/v), 약 0.008% (w/v), 약 0.009% (w/v), 약 0.01% (w/v), 약 0.02% (w/v), 약 0.03% (w/v), 약 0.04% (w/v), 약 0.05% (w/v), 약 0.06% (w/v), 약 0.07% (w/v), 약 0.08% (w/v), 약 0.09% (w/v), 및 약 0.1% (w/v)의 양으로 제형에 존재할 수 있다. 특정한 실시 형태에서, 계면활성제는 제형에 약 0.003% 내지 약 0.05% (w/v), 약 0.004% 내지 약 0.025% (w/v), 또는 약 0.005% 내지 약 0.02% (w/v), 예를 들어 약 0.005% (w/v)로 존재한다. 예를 들어, 폴리소르베이트 20은 약 0.001% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.002% 내지 약 0.01% (w/v), 약 0.003% 내지 약 0.008% (w/v), 및 약 0.004% 내지 약 0.006% (w/v), 예를 들어, 약 0.005% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다. 대안적인 실시 형태에서, 폴리소르베이트 20은 약 0.001% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.005% 내지 약 0.05% (w/v), 및 약 0.0075% 내지 약 0.025% (w/v), 예를 들어, 약 0.01% (w/v)의 양으로 존재한다. 추가의 대안적인 실시 형태에서, 폴리소르베이트 20은 약 0.001% 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.005% 내지 약 0.05% (w/v), 및 약 0.01% 내지 약 0.03% (w/v), 예를 들어, 약 0.02% (w/v)의 양으로 존재한다.
등장화제
본 발명의 제형은 선택적으로 등장화제를 추가로 포함할 수 있다. 전형적으로, 등장화제는 제형의 오스몰 농도를 체액, 예컨대 혈액 또는 혈장의 삼투압에 가깝게 하기 위하여 상기 오스몰 농도를 조정하거나 유지하는 데 사용된다. 등장화제는 또한 제형 중 결합 제제의 수준을 유지할 수 있다. 부분적으로, 등장화제는 제형에 존재하는 치료적 활성 결합 제제의 수준, 비, 또는 비율의 보존에 기여한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "장성"은 유체 환경 또는 용액에서의 생물학적 성분의 거동을 지칭한다. 등장성 용액은 혈장과 동일한 삼투압을 보유하며, 대상체의 혈장의 삼투압을 변화시키지 않고서 대상체 내로 정맥내 주입될 수 있다. 실제로, 본 발명의 특정 실시 형태에서, 등장화제는 제형이 정맥내 주입에 적합해지도록 하기에 충분한 양으로 존재한다. 종종, 등장화제는 벌킹제 또는 안정화제로서의 역할도 한다. 이와 같이, 등장화제는 결합 제제가 다양한 스트레스, 예컨대 냉동 또는 전단을 극복하게 할 수 있다. 등장화제는 당류, 당, 글리세롤, 소르비톨, 만니톨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘 및 기타 무기 염을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 당업자는 제약상 허용가능한 한, 즉 대상체에의 투여에 적합한 한 다른 등장화제가 사용될 수 있음을 알고 있다.
특정 실시 형태에서, 등장화제는 제형에 약 0.1% 내지 10% (w/v)의 양으로 존재한다. 예를 들어, 등장화제는 제형에 약 0.1% (w/v), 약 0.2% (w/v), 약 0.3% (w/v), 약 0.4% (w/v), 약 0.5% (w/v), 약 0.6% (w/v), 약 0.7% (w/v), 약 0.8% (w/v), 약 0.9% (w/v), 약 1% (w/v), 약 2% (w/v), 약 3% (w/v), 약 4% (w/v), 약 4.5% (w/v), 약 5% (w/v), 약 5.5% (w/v), 약 6% (w/v), 약 7% (w/v), 약 8% (w/v), 약 9% (w/v), 및 약 10% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다. 대안적으로, 등장화제는 제형에 약 2% 내지 약 8% (w/v), 약 3% 내지 약 7% (w/v), 및 약 4% 내지 약 6% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다. 추가의 대안적인 실시 형태에서, 등장화제는 제형에 약 0.1% 내지 약 1%, 약 0.1% 내지 약 0.5%, 약 0.1 내지 약 0.3%, 및 약 0.2%의 양으로 존재할 수 있다.
특정한 예시적인 실시 형태에서, 등장화제는 당류이다. 당류의 예는 글루코스, 수크로스 (이는 사카로스로도 공지됨), 말토스, 트레할로스, 덱스트로스, 자일리톨, 프럭토스 및 만니톨을 포함한다. 예를 들어, 만니톨은 약 1% 내지 약 10% (w/v), 약 2% 내지 약 8% (w/v), 또는 약 3% 내지 약 5% (w/v), 예를 들어, 약 4% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다. 대안적으로, 수크로스 (이는 사카로스로도 공지됨)는 약 1% 내지 약 10% (w/v), 약 3% 내지 약 8% (w/v), 또는 약 4% 내지 약 6% (w/v), 예를 들어, 약 4.5, 5, 5.5, 또는 6% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다.
특정한 다른 예시적인 실시 형태에서, 등장화제는 염화나트륨이다. 예를 들어, 염화나트륨은 약 0.1% (w/v), 약 0.2% (w/v), 약 0.3% (w/v), 약 0.4% (w/v), 약 0.5% (w/v), 약 0.6% (w/v), 약 0.7% (w/v), 약 0.8% (w/v), 약 0.9% (w/v), 및 약 1% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다. 대안적으로, 염화나트륨은 제형에 약 0.1% 내지 약 1%, 약 0.1% 내지 약 0.5%, 약 0.1 내지 약 0.3%, 및 약 0.2%의 양으로 존재할 수 있다.
추가의 예시적인 실시 형태에서, 제형은 하나 이상의 등장화제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제형은 상기 농도의 상기 등장화제들 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 소정의 특정한 실시 형태에서, 제형은 수크로스 및 염화나트륨을 포함할 수 있으며, 여기서, 수크로스 및 염화나트륨 농도 각각은 약 0.1% 내지 약 10% (w/v)이다. 일부 실시 형태에서, 수크로스 농도는 약 6%이며, 염화나트륨 농도는 약 0.2%이다. 대안적으로, 수크로스 농도는 약 4.5%이며, 염화나트륨 농도는 약 0.2%이다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, 제형의 오스몰 농도는 약 200 mOsm/kg 내지 약 350 mOsm/kg, 약 270 mOsm/kg 내지 약 330 mOsm/kg, 약 280 mOsm/kg 내지 약 320 mOsm/kg, 또는 약 290 mOsm/kg 내지 약 310 mOsm/kg의 범위, 예를 들어, 약 300 mOsm/kg이다. 환언하면, 본 발명의 제형은, 일부 실시 형태에서, 실질적으로 등장성이며, 즉, 인간 혈액과 실질적으로 동일한 삼투압을 갖는다. 오스몰 농도는 당업자에게 공지된 임의의 수단에 의해, 예컨대 증기압 또는 얼음 냉동형
의 삼투압 측정기(ice-freezing type osmometer)를 이용하여 측정될 수 있다. 본 발명의 제형의 오스몰 농도는 예를 들어 본원에 개시된 상기 하나 이상의 등장화제에 의해 조절될 수 있다.
아미노산
본 발명의 제형은 선택적으로 아미노산을 추가로 포함할 수 있다. 아미노산의 예는 글리신, 알라닌, 아스파르트산, 라이신, 세린, 티로신, 시스테인, 글루타민, 메티오닌, 아르기닌 및 프롤린을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 예시적인 실시 형태에서, 아미노산은 제형에 약 0.1% 내지 약 5% (w/v)의 양으로 존재한다. 예를 들어, 아미노산은 제형에 약 0.1% (w/v), 약 0.2% (w/v), 약 0.3% (w/v), 약 0.4% (w/v), 약 0.5% (w/v), 약 0.6% (w/v), 약 0.7% (w/v), 약 0.8% (w/v), 약 0.9% (w/v), 약 1.0% (w/v), 약 1.1% (w/v), 약 1.2% (w/v), 약 1.3% (w/v), 약 1.4% (w/v), 약 1.5% (w/v), 약 1.6% (w/v), 약 1.7% (w/v), 약 1.8% (w/v), 약 1.9% (w/v), 약 2.0% (w/v), 약 3% (w/v), 약 4% (w/v), 및 약 5% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다. 대안적으로, 아미노산은 제형에 약 1.3% 내지 약 1.8% (w/v), 또는 약 1.4% 내지 약 1.6% (w/v), 예를 들어, 약 1.5% (w/v)의 양으로 존재한다. 추가의 대안적인 실시 형태에서, 아미노산은 제형에 약 0.5% 내지 약 1.5% (w/v), 또는 약 0.8% 내지 약 1.2% (w/v), 예를 들어, 약 1.0% (w/v)의 양으로 존재한다. 예시적인 아미노산으로는 프롤린 또는 아르기닌이 있다. 예를 들어, 프롤린은 제형에 약 1% 내지 약 2%, (w/v) 약 1.3% 내지 약 1.8% (w/v), 약 1.4% 내지 약 1.6% (w/v), 예를 들어, 약 1.5% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다. 대안적으로, 아르기닌은 제형에 약 0.5% 내지 약 1.5% (w/v), 또는 약 0.8% 내지 약 1.2% (w/v), 예를 들어, 약 1.0% (w/v)의 양으로 존재할 수 있다.
기타 부형제
더욱이, 본 발명의 제형은 주사용 물, 희석제, 가용화제, 진정제, 추가적인 완충제, 무기 또는 유기 염, 산화방지제 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는 기타 부형제를 포함할 수 있다. 그러나, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 제형은 상기 기술된 것을 제외하고서는 어떠한 기타 부형제도 포함하지 않는다. 다른 제약상 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기술된 것이 제형에 포함될 수 있되, 단, 이들은 제형의 원하는 특성에 악영향을 주지 않는다. 특정한 실시 형태에서, 제형에는 방부제가 실질적으로 없지만, 대안적인 실시 형태에서, 방부제가 필요에 따라 첨가될 수 있다. 예를 들어, 동해방지제 또는 동결건조보호제가 동결건조된 제형에 포함될 수 있다.
액체 또는 동결건조된 제형
본 발명의 제형은 액체 제형 또는 동결건조된 제형일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 액체 제형은 주사용으로 준비되거나, 희석된 후 주사될 수 있다. 대안적으로, 제형은 동결건조된 분말일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 동결건조된 분말은 다수의 용매 부피 중 하나와 조합되어 원하는 농도에 도달한 직후 투여되도록 준비된다.
예시적인 제형
본 발명의 일 실시 형태에서, 본 발명은 피하 투여에 적합한 안정한 액체 항체 제형을 제공하며, 상기 제형은
a) 약 100 mg/mL 초과, 예를 들어, 약 100 내지 약 175 mg/mL의 완전 인간 항-CXCR5 항체 (서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함함);
b) 약 10 mM의 시트레이트 완충제;
c) 약 0.1% (w/v)의 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80; 및
d) 약 200 mM의 아르기닌;
e) 약 4.5 ~ 9%의 수크로스를 포함하고,
여기서 제형의 pH는 약 pH 6이다.
본 발명의 또 다른 실시 형태에서, 본 발명은
a) 약 150 내지 약 175 mg/mL의 인간화 IgG4 항-CXCR5 항체 (서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함함);
b) 약 10 mM의 시트레이트 완충제;
c) 약 0.1%(w/v) 폴리소르베이트 80; 및
d) 약 200 mM의 아르기닌;
e) 약 4.5%의 수크로스를 포함하는 안정한 항체 제형을 제공하며,
여기서 제형의 pH는 약 pH 6.0이다.
본 발명의 특정한 실시 형태에서, 본 발명은
a) 약 175 mg/mL의 인간화 IgG4 항-CXCR5 항체 (서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함함);
b) 약 10 mM의 시트레이트 완충제;
c) 약 0.1%의 폴리소르베이트 80; 및
d) 약 200 mM의 아르기닌;
e) 약 4.5% 수크로스를 포함하는 안정한 항체 제형을 제공하며,
여기서 제형의 pH는 약 pH 6.0이다.
안정성
고려되는 제형은 5℃에서 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 이상 동안, 그리고 전형적으로 적어도 약 12, 18, 또는 24개월 이상 동안 안정하다. 예시적인 실시 형태에서, 본 제형은 5℃에서 적어도 약 6개월 이상 동안 안정하다. 다른 예시적인 실시 형태에서, 본 제형은 5℃에서 적어도 약 9개월 동안 안정하다. 추가의 예시적인 실시 형태에서, 본 제형은 5℃에서 적어도 약 1년 이상, 그리고 전형적으로 약 2년 초과 또는 약 4년 초과 동안 안정하다.
투여 방식
본 발명의 특정 실시 형태에서, 제형은 비경구, 정맥내, 근육내, 피내, 피하 투여, 또는 이들의 조합에 적합하다. 본 발명의 제형은 다양한 기술에 의한 전달에 적합하다.
투여량 및 투여 형태
본 발명의 제형의 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태, 대상체가 인간인지 동물인지 여부, 투여되는 기타 약제, 및 처치가 예방을 위한 것인지 치료를 위한 것인지 여부를 포함하여, 다수의 여러 가지 요인에 따라 달라진다. 보통, 대상체는 인간이지만, 트랜스제닉 포유동물을 포함하여 비-인간 포유동물도 처치될 수 있다. 치료 용량은 안전성 및 효능을 최적화하기 위하여 적정될 필요가 있을 수 있다.
본 발명의 제형은 여러 번 투여될 수 있다. 단일 투약 사이의 간격은 1일, 1주일, 2주일, 1개월 또는 1년일 수 있다. 간격은 또한 불규칙적일 수 있다. 일부 방법에서, 투여량은 특정한 혈장중 결합 제제, 예컨대 항체의 농도를 달성하기 위해 조정된다. 투여량 및 빈도는 대상체에서 항-CXCR5 결합 제제, 예컨대 항체의 반감기에 따라 달라진다. 일반적으로, 인간 항체가 가장 긴 반감기를 나타내며, 그 다음 인간화된 항체, 키메라 항체 및 비인간 항체의 순이다.
추가 실시 형태에서, 본 발명은 대상체에의 투여 형태의 투여를 통한 대상체에서의 하나 이상의 질환의 치료를 위한 본 발명의 제형의 치료적 유효량을 포함하는 제약적 단위 투여 형태를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 인간은 성인일 수 있거나 유아일 수 있다. 용어 "제약적 단위 투여 형태"는 치료될 대상체를 위한 단위 투약형으로서 적합한 물리적으로 별개인 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 필요한 시트레이트 완충제 및 pH와 연합되어 원하는 치료적/예방적 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다.
단위 투여 형태는 제형을 포함하는 용기일 수 있다. 적합한 용기는 밀봉 앰풀, 바이알, 병, 시린지, 및 시험관을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있으며, 살균된 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하주사기의 주사 바늘에 의해 관통될 수 있는 마개를 가지는 바이알일 수 있음). 일부 실시 형태에서, 용기는 바이알이다. 일반적으로, 용기는 제형의 살균성 및 안정성을 유지하여야 한다.
구체적인 실시 형태에서, 제형은 투명한 무색의 I형 유리로 만들어진 4 mL 바이알 (2R ISO 바이알)에 패키징되고, 플랜지 (폴리프로필렌)를 갖춘 플립-오프 캡 (flip-off cap)으로 밀봉되는 마개 (플루오로중합체-코팅 브로모부틸)로 밀폐된다. 일부 실시 형태에서, 바이알은 바이알당 약 0.2 mL의 오버필 (overfill) 부피, 및 1.5 mL의 추출 부피를 갖도록 1.7 mL의 제형으로 충전된다. 예를 들어, 이것은 항체의 투여량 강도 (예를 들어, 175 mg/mL)가 1.5 mL의 용액 내에 포함됨을 의미한다.
하나의 구체적인 실시 형태에서, 제형은 바이알을 빛으로부터 보호하는 용기, 예컨대 판지 상자에 이차적으로 패키징된다.
키트
본 발명의 특정 실시 형태는 본 발명의 제형을 포함하는 키트를 포함한다. 키트는 추가로, 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 하나 이상의 용기를 포함할 수 있으며, 필터, 바늘 및 시린지를 포함하여 상업적 사용자적 관점에서 바람직한 기타 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 치료용, 예방용 또는 진단용 제품의 사용에 관한 지시, 사용, 투여량, 제조, 투여, 사용금지사유, 및/또는 경고에 관한 정보를 포함하는 치료용, 예방용 또는 진단용 제품의 상업적 패키지 내에 관례적으로 포함된 지시사항이 키트와 결부될 수 있다. 또한 키트는 정보를 포함하는 임의의 종류의 데이터 캐리어 (예를 들어, 전단, 스티커, 칩, 프린트 또는 바코드)일 수 있는 라벨과 결부될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 상기에 열거된 바와 같은 지시사항 등이 라벨 내에 또는 라벨 상에 포함될 수 있다. 키트는 제형 투여용 디바이스, 특히 제형을 포함하는 디바이스, 즉, 사전 충전 시린지 또는 사전 충전 오토인젝터와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 사전 충전 디바이스를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 또한 제형을 포함하는 용기, 즉, 사전 충전 용기, 예컨대 사전 충전 바이알, 카르투슈 (cartouche), 사세, 또는 앰풀을 포함할 수 있다.
상이한 실시 형태들의 조합
본 발명의 맥락에서, 본원에 개시된 실시 형태들 중 임의의 것은 명백하게 반대로 기재되지 않는 한 본원에 개시된 다른 실시 형태들 중 하나 이상과 조합될 수 있다. 특히, 임의의 본원에 개시된 결합 제제 및 항체와 본원에 개시된 이의 제형은 임의의 키트, 사전 충전 디바이스 또는 사전 충전 용기와 조합되어 사용될 수 있거나, 각각의 항체와 관련하여 본원에 개시된 바와 같은 의학적 사용 또는 치료 방법에서 사용될 수 있다 (예를 들어, 항-CXCR5 항체를 포함하는 안정한 제형은 임의의 본원에 개시된 키트, 용기 또는 디바이스와 조합될 수 있다). 또한 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 본원에 개시된 결합 제제 (예를 들어, CXCR5에 특이적으로 결합하는 결합 제제)는 각각의 항체 (즉, 항-CXCR5)와 관련하여 본원에 개시된 임의의 치료 방법에서 사용될 수 있으며 그 반대도 마찬가지이다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 특정한 실시 형태를 예시한다. 본 실시예는 단지 설명 목적으로 개시되며, 본 발명을 한정하는 것으로 여겨져서는 안 된다.
실시예 1: 스타더스트 입자 형성의 분석
A) 서론
사노피 (Sanofi)에 의해 SAR113244로 표기되는 완제의약품 (DP)은 인간 CXCR5에 선택적으로 결합하는 인간화 IgG 단클론 항체 (mAb)로서, 이는 미국 특허 제8,647,622호에 개시되어 있다. 이것은 100 mg/mL의 농도로 주사하기 위한 용액으로서의 비경구 피하 투여용으로 개발되었다. 주사용 DP 용액을 플랜지 (알루미늄)를 갖춘 플립-오프 (flip off) 캡 (폴리프로필렌) 및 마개 (플루오로중합체-코팅된 브로모부틸 고무)로 밀폐되는 2 mL 투명 무색 바이알 (유리 I형)에 패키징하였다.
SAR113244 mAb를 위한 제형의 개발은 10 mg/mL의 아르기닌, 2 mg/mL의 NaCl, 0.01%의 폴리소르베이트 20 및 10 mM의 시트레이트 완충제를 포함하고 pH가 6인 제I상 임상 연구용의 제형으로 마무리되었다 (이하, "DP 용액"으로 지칭됨). 이 제형은 화학적 안정성 면에서, 그리고 육안으로 보이지 않는 입자의 면에서 안정하였다. 그러나, 제형을 유리 일차 패키징 물질, 예를 들어 바이알 또는 사전 충전 시린지에 보관했을 때, 대략 1년 후, 가시적 입자 형성이 발생하였다. 가시적 입자의 형성은 일차 패키징 물질이 플라스틱 (백 또는 플라스크)일 때에는 발생하지 않았다.
2 R ISO 유리 바이알 (미국 뉴욕주 엘름스포드 소재의 쇼트 (Schott))에서 보관한 DP 용액에서 가시적 입자가 발견된 것은 제1상 임상 연구용으로 계획된 상용성 연구 동안이었다. 입자는 매우 작고, 반짝이고, 현탁된 것이었으며, 따라서 "스타더스트 입자"로 칭해졌다. 스타더스트 입자의 발견은 연구 중단을 야기하였으며, DP 용액 배치들을 격리하여 두었다. 즉각적인 행동 계획을 적소에 두었으며, 온라인 필터 옵션을 조사하여 임상 연구에 적용하였다. 이것을 코멘트 없이 보건 당국으로부터 승인된 보정서 형태로 요약하였으며, 연구를 다시 시작할 수 있었다. 그러나, 추가의 임상 연구를 위하여, 스타더스트 입자를 포함하지 않는 제형을 개발하는 것이 바람직하였다. 여기서, 본 발명자는 스타더스트 입자가 없는 SAR113244-함유 고도 농축 제형의 제조 방법을 개시한다.
스타더스트 입자는 날진® 병에 보관되거나 백에 보관된 DP 용액에는 존재하지 않았다. 스타더스트 입자는 또한 제조 공정 직후 유리 바이알에 보관된 DP 용액에 존재하지 않았다. 유리 바이알 내의 스타더스트 입자는 대략 1년의 보관 후 발생한 것으로 믿어진다. 동일한 장비를 사용하여, 동일한 충전 라인을 사용하여, 동일한 마개를 사용하여, 동일한 종류의 바이알에 충전시킨 다른 제품 (예를 들어, 단백질 치료제)을 입자에 대하여 점검하였으며, 이는 스타더스트 입자를 전혀 발생시키지 않았다.
DP 용액에서의 광 차폐 또는 마이크로플로우 (Microflow)® 이미징을 사용한 육안으로 보이지 않는 입자의 측정치는 스타더스트 입자의 존재와는 상관 없이 항상 허용 범위 내에 있었다. 1년 이상의 긴 보관 시간을 갖는 샘플과 제조 직후 샘플의 육안으로 보이지 않는 입자의 차이는 안정성 연구 동안 탐지되지 않았다. 스타더스트 입자를 제거하기 위하여, 새로운, 스타더스트-무함유 제형을 그 후에 제II상 임상 시험용으로 개발하였다. 궁극적으로, 제형은 가속화 조건 (40℃) 하에서 6개월동안, 및 2~8℃에서 12개월 동안 유리 용기에서 안정성을 보여주었다.
B) 방법
DP 용액의 외관 검사: DP 용액의 외관 검사를 DP 배치의 완결 직후, 훈련된 스태프에 의해 수행하였다. 바이알을 1회 또는 2회 뒤집고, 후속적으로 바이알을 5 내지 15초 동안 관찰하거나 (실험실 1: 액체 검사용 뷰어 아폴로 (Liquid Inspection Viewer Apollo) II; 실험실 2: 블랙 박스) 또는 뒤집지 않고서 회전 바이알을 관찰함으로써 (실험실 3: 확대경을 갖춘 자이데나데르 (Seidenader) 바이알 검사기) 테스트하였다. 광원은 2000~3750 Lux였다.
DP 용액용 용기에서의 유리 갈라짐 (delamination): 유리 갈라짐을 4개의 상이한 배치 (3개의 임상용 배치, 하나의 기술적 배치)에 대하여 분석하였다. 이 목적을 위하여, 배치당 10 mL의 DP 용액을 테스트하여, 상기 용액 내로 침출된 유리 원소, 즉, Si, B, Ca, 및 Al의 양을 결정하였다. 다음 4개의 용기 세트를 이 연구에 사용하였다: 쇼트 타입 I 플러스 (plus) (SiO2-코팅된 바이알), 쇼트 표준 피올락스 (Fiolax), 쇼트 DC (갈라짐이 제어됨), 및 BD 사전 충전식 시린지. 상기 상이한 용액들을 60℃에서 보관하고, 3개의 상이한 시점 (1주 후, 4주 후 및 12주 후)에서 분석하였다. "박편-유사" 및/또는 박편-비유사" 입자의 존재에 관하여 육안 및 확대 비디오 카메라에 의해 외관 검사를 수행하였다. 10개의 용기를 각각의 시점에서 테스트하였다. 더욱이, 대조 샘플 세트당 5개의 빈 용기의 광학 검사를 연장된 깊이의 포커스를 이용하여 입체-현미경법을 사용하여 수행하여, 용기의 내부 표면 상에 반응 구역 또는 유리 부식에 대한 표시가 존재하는지를 정성적으로 결정하였다. 부가적으로, 풀 포인트 및 샘플 세트당 10개의 빈 용기를 연장된 깊이의 포커스를 이용하여 입체-현미경법에 의해 분석하여, 상기 내부 표면 상에 반응성 구역 또는 유리 부식에 대한 임의의 표시가 존재하는지를 결정하였다. 각각의 폴 포인트에 있어서 세트당 2개의 "최악의" 용기의 내부 표면 상에서, SEM 단면 분석을 수행하였다. 통틀어, 각각의 풀 포인트에서 각각의 샘플 세트에 있어서 용기로부터 풀링한 (pooled) 10 mL의 위약 용액 (10 mM의 시트레이트 완충제, 2 g/L의 NaCl, 10 g/L의 아르기닌-HCl, 45 g/L의 수크로스 (4.5%), 및 0.01% 폴리소르베이트 20을 함유함)을 분석하여, 상기 용액 내로 침출된 유리 원소의 양을 정량적으로 결정하였다.
기계적 안정성의 연구: 기계적 스트레스가 DP 용액 중 스타더스트 입자의 형성에 기여하는지를 결정하기 위하여, 기계적 스트레스 연구를 수행하였다. 제조 동안, DP 용액을 혼합 용기에 첨가하고, 부형제를 첨가하였다. 10 mL의 부피의 8가지의 상이한 제형 (하기 표 1 참조, 각각의 조성물은 시트레이트 완충제를 기반으로 함)을 200 rpm에서 30분 또는 2시간 동안 교반시켰다. 부형제의 혼합 후, 용액을 가시적 입자의 출현에 대하여 점검하였다. 그 후 상기 용액을 여과시키고, 2R 유리 바이알에 충전시켰다. 외관 검사가 뒤따랐으며, 상기 용액들을 40℃에서 4주 동안 보관하고, 매주 검사하였다.
[표 1]
Figure 112019011514017-pct00002
RapID 연구 (여과, 라만 (Raman), 및 FT-IR): 이 연구 동안, 5가지의 DP 용액 샘플을 분석하였다. 밀폐된 용기 내의 DP 용액의 외관 검사를 먼저 수행하였다. 각각의 샘플의 용액들을 4 mm 직경을 갖는 활성 영역을 포함하는 별개의 금-코팅 폴리카르보네이트 필터 막 (기공 크기: 0.8 μm)에서 여과시켰다. 비워진 바이알을 입자-무함유 물 2 mL로 2회 헹구고, 마개를 입자-무함유 물 2 mL로 1회 헹구었다. 확실하게 모든 입자가 필터로 옮겨지도록 하기 위하여, 여과 장비 내의 깔때기를 8 mL의 입자-무함유 물로 헹구었다. 관찰된 입자의 사진을 비디오 현미경을 통하여 촬영하였다. 가장 큰 입자 (>50 μm) 중 일부를 상이한 분광 분석법을 적용하여 추가로 분석하였다. 라만 분광분석법적 조사를 rap.ID 파티클 시스템즈 게엠베하 (rap.ID particle Systems GmbH)에 의해 제조된 Single Particle Explorer (SPE)를 사용하여 이미지 분석에 의해 수동으로 수행하였다. 이 디바이스는 532 nm의 레이저 파장에서 작동한다. FT-IR 및/또는 ATR 분광법에 있어서, 브루커 (Bruker)에 의해 제조된 FT-IR 분광계 LUMOS (일련 번호 190)를 사용하였다. 분석한 입자들 중 하나를 브루커에 의해 제조된 주사 전자 현미경 SEM-EDX (TM 3000)를 통하여 추가로 조사하였다.
여과 - 현미경법: 기공 크기가 0.45 μm인 셀룰로오스 니트레이트 필터를 적용하여 각각의 배치의 5개의 바이알로부터 입자를 단리하였다. 수득된 입자를 광학 현미경법으로 분석하였다. 15x 배율의 IR 현미경 Hyperion 2000을 사용하여 IR 분광법을 통하여 입자를 추가로 특성화하였다.
육안으로 보이지 않는 입자의 측정:
1. 입자의 광학 계수기: 입자의 광학 계수기 (HIAC, 하흐 (Hach))를 사용하여, 단백질 제형 중의 육안으로 보이지 않는 입자의 양을 측정하였다. 약전 (미국 약전, 유럽 약전)에 의해 요구되는 바와 같이, 10 μm 및 25 μm보다 큰 입자를 조사하였다. 뷰 볼륨 (view volume)에서 입자에 의해 야기되는 조명의 광학적 교란을 탐지하는 광검출기에 의해 입자의 탐지를 행한다.
2. 플로우-이미징 현미경법: 플로우-이미징 현미경법 (마이크로-플로우 이미징 (MFI), 프로테인 심플 (Protein simple))을 이용하여 단백질 제형 중 육안으로 보이지 않는 입자의 양을 측정하였다. 약전 (미국 약전, 유럽 약전)에 의해 요구되는 바와 같이, 10 μm 및 25 μm보다 큰 입자를 조사하였다. 입자를 디지털 카메라로 탐지하였다.
3. SEC: 나노미터 크기 범위의 용해성 응집물의 상대적인 양을 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 사용하여 측정하였다. 게다가, 단량체의 순도 또는 상대적인 양을 보고하였다.
4. DLS: 나노미터 크기 범위의 응집물 및 입자의 존재를 동적 광 산란 (DLS) (제타사이저 나노-ZS (Zetasizer Nano-ZS), 말번(Malvern))을 사용하여 측정하였다. 수력학적 직경 및 다분산도를 측정하였다.
C) 결과 및 고찰:
여과 실험:
스타더스트 입자 현상을 이해하기 위하여, 본 출원인은 SAR113244 완제의약품 (DP 용액)으로부터 입자를 단리하려고 하였다. 현탁물 상태의 입자의 단리는, 여과에 의해 또는 피펫 또는 스패튤라를 이용하여 입자를 꺼내려고 함으로써 달성할 수 있다. 그러나, 스타더스트 입자의 특성화는 이 입자가 단리될 수 없기 때문에 매우 어려웠다. 셀룰로오스 필터에서의 여과에 의해서는 스타더스트 입자가 단리되지 않았다 (표 2 및 도 1~도 3 참조). 3가지 위약 용액의 여과는 필터 상에의 입자를 초래하지 않은 반면, 날진 병으로부터의 DP 용액은 유의한 양의 반짝거리는 입자를 보여주었다 (도 4 및 도 5). 필터 상의 입자의 절대적인 수는 "스타더스트"에 의해 영향을 받은 샘플에 대한 것보다 더 적은 것으로 보였지만, 종횡비 및 크기는 이전에 단리된 입자와 실질적으로 다르지 않았다. 따라서, 날진 병으로부터의 DP 용액이 스타더스트 입자를 보여주지 않았기 때문에 "스타더스트" 입자를 단리하기 위한 진공 여과 방법의 유효성은 의심되어야 한다. SAR113244의 원료의약품도 스타더스트 입자를 함유하지 않았지만, 필터 상의 입자를 보여주었다 (도 6): 원료 의약품은 단지 플라스틱 백에서 시트레이트 완충제에서 보관하였으며 (제1상 과정으로부터의 오래된 원료의약품), 외관 검사를 수행했을 때 입자를 보여주지 않았지만, 여과 후, 입자를 필터 상에서 볼 수 있었다.
또한 상이한 단백질-기반 치료제 (SAR252067 및 SAR341403)로부터의 샘플은, 용액은 투명하지만 (스타더스트 입자-무함유), 필터 상에서의 입자의 존재를 나타냈다 (도 7 ~ 도 12). 이러한 발견은, 용액 구성성분이 필터 상에 침전되고 용액에 존재하는 육안으로 보이지 않거나 가시적인 가능한 입자의 확인을 불가능하게 만드는 위험성을 고도로 농축된 항체 용액의 진공 여과가 지닌다는 것을 보여준다.
[표 2]
Figure 112019011514017-pct00003
DLS에 의한 측정:
동적 광 산란에 의해 측정되는 단백질 응집물의 측정은 스타더스트 입자를 포함하지 않는, 플라스틱 병에서 보관된 DP 용액 (도 13)이 유리 바이알에서 보관된 스타더스트-함유 DP 용액 (도 14)보다 더 낮은 다분산 지수를 가짐을 보여주었다. 이것은 SAR113244 분자의 구조 변화 (conformational change)가 스타더스트 입자 형성의 근본 원인일 수 있음을 나타내는 것일 수 있다. 이 결과는, 외관 검사에 더하여, 유리 용기가 스타더스트 형성에서 그 역할을 함을 나타낸다.
갈라짐에 대한 연구:
스타더스트 입자 형성의 하나의 가능한 원인은 갈라짐이 유리 바이알로부터 발생한다는 것이었다. 따라서, 갈라짐에 대한 연구를 수행하였다. 갈라짐에 대한 연구를 10 mM의 시트레이트 완충제, 2 g/L의 NaCl, 10 g/L의 아르기닌-HCl, 45 g/L의 (4.5%) 수크로스 및 0.01%의 폴리소르베이트 20을 함유하는 위약 용액을 이용하여 실시하였다. 위약 용액들을 표 3에 약술된 상이한 종류의 유리 바이알들에서 보관하였다.
[표 3]
Figure 112019011514017-pct00004
1주, 4주 또는 12주 후 가속화 조건 (60℃) 하에서 갈라짐은 발견되지 않았다 (표 4A 및 표 4B 참조).
[표 4A]
Figure 112019011514017-pct00005
[표 4B]
Figure 112019011514017-pct00006
그러나, 증가된 농도의 유리 성분 (Al, Si, B, Ca)이 오랜 보관에 걸쳐 용액에서 검출되었다 (12주, 60℃) (표 5 참조).
[표 5]
Figure 112019011514017-pct00007
이러한 관찰을 기반으로 하면, 유리 성분 (Al, Si, B, Ca)이 입자 형성을 시작할 가능성이 매우 크며, 그 이유는 이것이 날진® 병 내의 제형과 비교되는 바이알들 내의 mAb 제형의 비교시에 관찰된 유일한 차이이기 때문이다. 위약 연구는 갈라짐을 보여주지 않았지만, 일부 성분의 침출을 보여주었는데, 이는 단백질을 포함하는 DP-용액에 대해 또한 추정될 수 있다. 게다가, 이 연구는 스타더스트 입자가 단백질의 부재 하에서는 나타나지 않음을 확립하였다.
RapID - 연구: 이 연구의 목표는 스타더스트 입자가 무엇으로 이루어져 있는가를 결정하는 것이었다. 이전의 여과 연구는 필터 상에서의 입자의 단리가 가능하지 않았기 때문에 성공적이지 않았다. RapID는 금 필터를 포함하는 용액을 제공한다. 여기서, DP 용액을 금 필터에서 여과시키고, 그 후 FT-IR (도 15) 및 라만 분광법 (도 16)을 이용하여 분석하였다. 그 결과는 5개의 바이알 중 3개에서 단백질 입자가 검출됨을 보여주었다. 다른 바이알에서, 폴리에틸렌이 검출되었다 (도 17 및 도 18). 폴리에틸렌을 포함하는 샘플로서 3000 cm-1 초과의 전형적인 단백질 흡수 피크로서의 단백질을 또한 함유할 가능성이 가장 큰 샘플이 FT-IR 분석에서 또한 관찰되었다 (도 17). 샘플들은 매우 오래된 (4년 - 저장 수명 = 3년) 것으로 기재되어야 한다. 따라서, 스타더스트 입자가 방금 검출된 샘플을 이용하여 추가 연구를 수행할 필요가 있다. 그러나, 단백질 응집이 적어도 부분적으로 스타더스트 입자 제형의 기저를 이루고 있다고 믿어진다. 따라서, 단백질 응집을 피하도록 설계된 새로운 항체 제형이 스타더스트 입자 제형을 피할 수 있다고 믿어진다.
또한, 스타더스트 입자가 발견되고 특이적 항-CXCR5 항체의 맥락에서 기술되었지만, 다른 항체가 유사한 보관 문제를 나타낼 수 있고 따라서 본원에 제시된, 제안된 항체 제형으로부터 잠재적으로 이익을 얻을 수 있다고 믿어진다.
실시예 2: 스타더스트 입자-무함유 제형의 개발
A) 서론:
스타더스트 입자 형성을 피하기 위하여, 새로운 제형을 개발해야 했다. 이 과정 동안, 육안으로 보이지 않는 입자의 부재 및 화학적 안정성은 동일하게 중요하였다.
B) 방법 및 결과:
오랜 기간에 걸쳐 응집하는 경향이 없는 강한 제형을 얻기 위하여, 기계적 스트레스 연구를 다양한 실험용 샘플에서 수행하였다. 상기 샘플들을 자기 교반기를 이용하여 스트레스를 주고, 여과 및 보관 (가속화 조건 하에서) 후, 상기 샘플들을 스타더스트 입자 형성에 관하여 테스트하였다 (외관 검사). 기계적 스트레스 연구에 의하면, 증가된 농도의 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80이 항체 제형 중 입자의 양을 감소시키는 것을 알 수 있었다. 이러한 결과를 기반으로 하여 안정성 연구를 수행하였으며, 여기서, 175 mg/mL까지 고도로 농축된 SAR113244 제형을 유리 바이알 및 사전충전 시린지에서 테스트하였다. 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80 농도가 0.1%일 때 임의의 SAR113244 농도에 있어서 스타더스트 입자는 전혀 관찰되지 않았다. 심지어 가속화 조건 (6개월, 40℃)에서도, 가시적 입자는 존재하지 않았다. 따라서, 100~175 mg/mL을 함유하는 고도로 농축된 제형은 안정하였고, 스타더스트 입자는 형성되지 않았다. 제형이 약 100~175 mg/mL의 SAR113244, 약 200 mM의 아르기닌, 약 4.5~9%의 수크로스, 약 0.1%의 폴리소르베이트 20 또는 약 0.1% 폴리소르베이트 80 및 약 10 mM의 시트레이트 완충제를 함유할 때 화학적 안정성이 성취되었다.
기계적 스트레스의 연구: 먼저 완제의약품 (SAR113244)을 혼합 용기에 첨가함으로써 실험용 제형을 제조하고, 부형제들을 후속적으로 첨가하였다 (상기 표 1 참조). 부형제들의 혼합 후, 용액들을 여과시키고, 유리 바이알에 첨가하였다. 마지막으로, 최종 제형들을 외관 검사하였다.
상기에 설명된 바와 같이 상기 바이알들에 대한 기계적 스트레스 연구를 실시하였다. 그 결과를 도 19 및 도 20에 나타낸다. 기계적 스트레스의 연구에 의하면, 심지어 여과 후에도 보관 동안 입자가 형성되는 것으로 나타났다. 그러나, 이러한 가시적 입자 형성 과정은 폴리소르베이트 농도의 증가에 의해 감소되고 심지어 중단될 수 있다. 이러한 결과를 기반으로 하여, 스타더스트 입자-무함유 제형이 폴리소르베이트 농도의 증가에 의해 성취될 수 있다고 가정되었다. 게다가, 스타더스트 입자-무함유 제형이 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80 중 어느 하나를 이용하여 성취될 수 있다.
안정성 연구: 단백질-함유 제약 제형 중 계면활성제의 포함은 널리 공지되어 있으며, 일반적인 계면활성제로는 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80이 있다. 아미노산, 예컨대 아르기닌 및 메티오닌을 안정화제로 사용하는 것도 공지되어 있다. 그러나, 본 발명자는 SAR113244 항체에 있어서, 일차 패키징 물질이 유리로 이루어져 있을 때에만 보관 (12개월) 후 입자 형성이 발생함을 관찰하였다. SAR113244의 안정한 제형을 확인하기 위하여, 항체의 제약상 관련있는 제형들을, 0.01%보다 더 높은 폴리소르베이트 농도 및 50 mM보다 더 높은 아미노산 농도를 이용하여 제조하였다 (하기 표 6 참조). 이러한 제형들을 유리 바이알 또는 유리 시린지에서 보관하고, 가속화 조건 (40℃) 하에서 안정성 연구를 하고, 입자 형성을 측정하였다 (표 7 참조).
안정성 연구의 결과는, 비록 폴리소르베이트 함량이 0.01%일지라도 많은 양의 아르기닌 (200 mM)은 6개월 동안 안정한 스타더스트 입자-무함유 제형으로 이어짐을 보여주었다. 더욱 더 높은 농도의 mAb를 성취하고 오랜 기간 동안 안정한 제형을 성취하는 것이 요망되었다. 더 이른 결과는, 제형 중 아르기닌의 높은 농도 (표 5) 및 폴리소르베이트의 많은 양 (도 19 및 도 20)이 유익함을 보여주었다. 이러한 관찰이 고려되었으며, 많은 양의 아르기닌 및 폴리소르베이트를 사용하여 새로운 안정성 연구를 수행하였다.
[표 6]
Figure 112019011514017-pct00008
표 6의 샘플들을 상이한 온도 (5℃, 25℃, 40℃ 및 -20℃)에서 2R ISO 바이알에서 2주 (T0.5), 1개월 (T1), 3개월 (T3), 및 6개월 (T6) 동안 보관하여, 실시예 1에 설명된 바와 같은 방법을 이용하여 이들의 안정성을 결정하였다. 샘플의 대조 세트도 제0일 (T0)에 측정하였다. 결과를 표 7에 나타낸다.
[표 7]
Figure 112019011514017-pct00009
Figure 112019011514017-pct00010
Figure 112019011514017-pct00011
후속적인 테스트에서, 더욱 더 높은 mAb 농도를 갖는, 제형 124D를 기반으로 하는 새로운 제형을 제조하고, 안정성에 대하여 테스트하였으며, 이는 상기에 설명된 바와 같았다. 또한, 표 5와 연관된 결과로 인하여 증가된 폴리소르베이트 농도도 테스트하였다. 상기 새로운 제형은 하기 표 8에 설명되어 있으며, 여기서, 제형 A 및 제형 B를 2R ISO 바이알에서 보관하고, 제형 C 및 제형 D를 사전충전 시린지 (1 mL 하이팍 BD)에서 보관하였다.
[표 8]
Figure 112019011514017-pct00012
안정성을 표 8의 제형에 대하여 테스트하였으며, 결과를 표 9에 나타낸다.
[표 9]
Figure 112019011514017-pct00013
Figure 112019011514017-pct00014
안정성 연구의 결과를 기반으로 하면, 높은 항체 농도의 제형, 스타더스트 입자-무함유 제제가 성취되었음이 나타난다. 실제로, 175 mg/mL까지의 항체 농도는 가속화 조건 (40℃) 하에서 6개월 동안 안정하였다 (예를 들어, 제형 B 참조). 일차 패키징 물질로서 사전충전 시린지를 사용할 때 검출되는 입자의 양은 2R ISO 바이알과 비교하여 약간 상승되었지만, 여전히 충분히 당국의 허용 기준 하에 있었다. 응집되는 경향이 있는 그러한 높은 농도의 단백질을 갖는 실험용 제형을 이용하여 가속화 조건 하에 테스트할 경우 (40℃, 6개월) 육안으로 보이지 않는 입자가 거의 없는 것을 성취하는 것은 전적으로 예기치 못한 것이었으며, 매우 안정한 고농도 항체 제형의 확립에 있어서 거대한 돌파구를 나타낸다. 실제로, 그러한 고 항체 농도 제형으로 인해 항체 제형의 투여에 오토인젝터를 사용할 수 있을 것이다. 게다가, 그러한 항체 제형은 고농도에서 장기간 동안 유리 용기에서 보관된 항체의 더욱 더 긴 저장 수명을 초래할 수 있다.
본 발명을 상세하게 그리고 이의 특정 실시 형태를 참고로 하여 기술하였지만, 첨부된 청구범위에 정의된 본 발명의 범주로부터 벗어나지 않고서 변형 및 변화가 가능함이 명백하다. 더 구체적으로, 본원에서 본 발명의 일부 태양이 특히 유리한 것으로 확인되지만, 본 발명은 본 발명의 이러한 특정 태양에 반드시 한정될 필요는 없다고 생각된다. 대안적인 실시 형태에서, 본원에서 개시된 백분율은, 본원에 개시된 값으로부터 ±10, 20, 또는 30%만큼 양이 달라질 수 있다.
서열의 표
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Figure 112019011514017-pct00021
Figure 112019011514017-pct00022
SEQUENCE LISTING <110> SANOFI <120> ANTIBODY FORMULATIONS <130> US2016/011 US PCT; 15-2048-WO <150> US 62/358,404 <151> 2016-07-05 <150> EP 16306090.8 <151> 2016-07-30 <160> 69 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Asn Tyr Pro Thr Leu Glu Met Asp Leu Glu Asn Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Phe Trp Glu Leu Asp Arg Leu Asp Asn Tyr Asn Thr Ser Leu Val Glu 20 25 30 Asn His Leu Cys 35 <210> 2 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <400> 2 cttccggaat tcsargtnma gctgsagsag tc 32 <210> 3 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <400> 3 cttccggaat tcsargtnma gctgsagsag tcwgg 35 <210> 4 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: 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10 cgactagtcg actggtggga agatggatac ag 32 <210> 11 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 11 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Ala Val Thr Pro Arg 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 12 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 12 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Arg Lys Asp Asn Ser Gln 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tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc 900 aagaccaagc ctcgggagga gcagttcaat tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc 960 gtgctgcacc aggactggct gaacggcaaa gaatacaagt gtaaggtctc caacaagggc 1020 ctgccctcct ccatcgagaa aaccatctcc aaggccaagg gccagcctag ggagcctcag 1080 gtgtacaccc tgcctcctag ccaggaagag atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt 1140 ctggtgaagg gcttctaccc ttccgacatc gccgtggagt gggagtccaa cggccagcct 1200 gagaacaact acaagaccac ccctcctgtg ctggactccg acggctcctt cttcctgtac 1260 tccaggctga ccgtggacaa gtcccggtgg caggagggca acgtcttttc ctgctccgtg 1320 atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc cagaagtccc tgtccctgtc tctgggctga 1380 agctt 1385 <210> 25 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg 1 5 10 15 Ala Thr Gly Ile Pro Ala 20 <210> 26 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26 Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile 1 5 10 <210> 27 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp 1 5 10 <210> 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 38 gctagcacca tgggctggag ctgcatcatc ctgttcctgg tggccaccgc caccggcgtg 60 cacagccagg tgcagctgaa ggagagcggc cccggcctgg tggcccccag ccagagcctg 120 agcatcacct gcaccgtgag cggcttcagc ctgatcgact acggcgtgaa ctggatccgc 180 cagccccccg gcaagggcct ggagtggctg ggcgtgatct ggggcgacgg caccacctac 240 tacaacagcg ccctgaagag ccgcctgagc atccgcaagg acaacagcca gagccaggtg 300 ttcctgaaga tgaacagcct gcagaccgac gacaccgcca tgtactactg cgcccgcatc 360 gtgtactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcgccg ccagcaccaa gggcccttcc 420 gtgttccctc tggccccttg ctcccggtcc acctccgagt ccaccgccgc tctgggctgc 480 ctggtgaagg actacttccc tgagcctgtg accgtgtcct ggaactctgg cgccctgacc 540 tccggcgtgc acaccttccc tgccgtgctg cagtcctccg gcctgtactc cctgtcctcc 600 gtggtgaccg tgccttcctc ctccctgggc accaagacct acacctgtaa cgtggaccac 660 aagccttcca acaccaaggt ggacaagcgg gtggagtcca agtacggccc tccttgccct 720 tcctgccctg cccctgagtt cctgggcgga cctagcgtgt tcctgttccc tcctaagcct 780 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gctagcacca tgggctggag ctgcatcatc ctgttcctgg tggccaccgc caccggcgtg 60 cacagcgagg tgcagctgaa ggagagcggc cccggcctgg tggcccccgg cggcagcctg 120 agcatcacct gcaccgtgag cggcttcagc ctgatcgact acggcgtgaa ctggatccgc 180 cagccccccg gcaagggcct ggagtggctg ggcgtgatct ggggcgacgg caccacctac 240 tacaacgccc ccctgaaggg ccgcctgagc atcagcaagg acaacagcaa gagccaggtg 300 ttcctgcaga tgaacagcct gaagaccgac gacaccgcca tgtactactg cgcccgcatc 360 gtgtactggg gccagggcac cctggtgacc gtgagcagcg ccagcaccaa gggcccttcc 420 gtgttccctc tggccccttg ctcccggtcc acctccgagt ccaccgccgc tctgggctgc 480 ctggtgaagg actacttccc tgagcctgtg accgtgtcct ggaactctgg cgccctgacc 540 tccggcgtgc acaccttccc tgccgtgctg cagtcctccg gcctgtactc cctgtcctcc 600 gtggtgaccg tgccttcctc ctccctgggc accaagacct acacctgtaa cgtggaccac 660 aagccttcca acaccaaggt ggacaagcgg gtggagtcca agtacggccc tccttgccct 720 tcctgccctg cccctgagtt cctgggcgga cctagcgtgt tcctgttccc tcctaagcct 780 aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct gaggtgacct gtgtggtggt ggacgtgtcc 840 caggaggacc ctgaggtcca gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc 900 aagaccaagc ctcgggagga gcagttcaat tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc 960 gtgctgcacc aggactggct gaacggcaaa gaatacaagt gtaaggtctc caacaagggc 1020 ctgccctcct ccatcgagaa aaccatctcc aaggccaagg gccagcctag ggagcctcag 1080 gtgtacaccc tgcctcctag ccaggaagag atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt 1140 ctggtgaagg gcttctaccc ttccgacatc gccgtggagt gggagtccaa cggccagcct 1200 gagaacaact acaagaccac ccctcctgtg ctggactccg acggctcctt cttcctgtac 1260 tccaggctga ccgtggacaa gtcccggtgg caggagggca acgtcttttc ctgctccgtg 1320 atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc cagaagtccc tgtccctgtc tctgggctga 1380 agctt 1385 <210> 49 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Glu Leu Leu Gly Gly 1 5 <210> 50 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Met Ile Ser Arg Thr 1 5 <210> 51 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 6x His tag <400> 51 His His His His His His 1 5 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu 1 5 10 15 <210> 53 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 1 5 10 15 <210> 54 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Ser Leu Ile Asp Tyr Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly 1 5 10 15 <210> 55 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 55 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Ala Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln His Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 56 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 56 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Thr Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ile Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala 100 105 110 Lys <210> 57 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 57 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Thr Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ile Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala 100 105 110 Lys <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 58 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 59 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 60 Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 61 Gly Phe Ser Leu Ile Asp Tyr Gly Val Asn 1 5 10 <210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 62 Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Tyr 1 5 <210> 63 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 63 Ile Val Tyr 1 <210> 64 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 64 Arg Leu Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 65 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 65 Arg Leu Ser Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 66 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 66 Arg Met Ser Asn Leu Ala 1 5 <210> 67 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 67 Arg Leu Ser Asn Leu Ala 1 5 <210> 68 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 68 Arg Leu Ser Ser Leu Ala 1 5 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 69 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 Trp

Claims (22)

  1. 환자에게 피하 투여하기에 적합한 항체 제형으로서,
    a) 약 100 내지 약 175 mg/mL의 항체;
    b) 약 10 mM의 시트레이트 완충제;
    c) 약 0.1% (w/v)의 계면활성제;
    d) 약 200 mM의 아르기닌; 및
    e) 약 4.5 내지 9%의 수크로스를 포함하며,
    제형의 pH가 약 pH 6이고,
    여기서 항체가 완전 인간 항-CXCR5 항체이며, 항체가 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인,
    항체 제형.
  2. 제1항에 있어서, 항체가 단쇄 Fv를 포함하는 것인 항체 제형.
  3. 제1항에 있어서, 항체가 인간 CXCR5의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 항체 제형.
  4. 제3항에 있어서, 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 RSSKSLLHSSGKTYLY (서열 번호 58), RLSSLA (서열 번호 68), MQHLEYPYT (서열 번호 60), GFSLIDYGVN (서열 번호 61), VIWGDGTTY (서열 번호 62), 및 IVY (서열 번호 63)의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 제형.
  5. 제1항에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트인 항체 제형.
  6. 제5항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80인 항체 제형.
  7. 항체 제형으로서,
    a) 약 175 mg/mL의 인간화 IgG4 항-CXCR5 항체;
    b) 약 10 mM의 시트레이트 완충제;
    c) 약 1.0 mg/mL의 폴리소르베이트 80;
    d) 약 200 mM의 아르기닌 HCl; 및
    e) 약 45 mg/mL의 수크로스를 포함하며,
    제형의 pH가 약 pH 6이고,
    여기서 인간화 IgG4 항-CXCR5 항체가 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인,
    항체 제형.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 제형을 포함하는 용기.
  9. 제8항에 있어서, 사전충전 시린지, 바이알, 또는 오토인젝터 (autoinjector)인 용기.
  10. 동결건조된 형태의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 제형을 포함하는 용기.
  11. 제8항의 용기와, 항체 제형의 투여 및 사용에 대한 라벨 또는 지시사항을 포함하는 키트.
  12. 제11항에 있어서, 투여는 주사에 의한 것인 키트.
  13. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 또는 동물 신체의 CXCR5 (C-X-C 케모카인 수용체 유형 5)-매개 질환 또는 장애의 진단 또는 치료 방법에 사용하기 위한 항체 제형.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 류마티스 관절염의 치료 방법에 사용하기 위한 항체 제형.
  15. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 제형의 동결건조된 형태.
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