TWI760345B

TWI760345B - 抗體調配物

Info

Publication number: TWI760345B
Application number: TW106122178A
Authority: TW
Inventors: 唐尼法蘭西斯; 艾哈曼德尤瑟夫; 史黛芬妮雅卡魯伊娃; 馬汀納基爾希
Original assignee: 法商賽諾菲公司
Priority date: 2016-07-05
Filing date: 2017-07-03
Publication date: 2022-04-11
Also published as: TW201806618A; WO2018007456A1

Abstract

本案揭示能穩定長期儲存的高濃度抗體調配物。

Description

抗體調配物

【相關申請的交叉引用】

本案主張2016年7月5日提交的美國臨時專利申請案第62/358,404號的權益。本案亦主張2016年8月30日提交的歐洲專利申請案第16306090.8號的權益。這些申請案各自藉由引述以其全文併入本文。

本發明涉及在玻璃容器中具有延長的儲存穩定性的抗體調配物。

CXCR5，也稱為伯基特淋巴瘤受體(Burkitt lymphoma receptor,BLR1)，CD185，MDR15和MGC117347，其是作為CXC趨化因子受體家族成員的G蛋白偶聯受體。CXCR5影響B細胞遷移和組織定位，如缺乏外周淋巴結的CXCR5剔除小鼠所證明的，具有較少的培氏斑(Peyer's patches)，並且具有降低的B細胞水平。CXCL13也稱為BLC，是CXCR5的配體。CXCL13是一種B細胞化學引誘物。抗CXCR5結合劑在治療上是相關的，並且它們已被配製成藥物產品，所述藥物產品可以投予受試者(特別是人受試者)用於治療炎性疾病。

含有抗CXCR5結合劑的適於靜脈內或皮下投予的藥物調配物必須被高度濃縮(約20mg/mL至約100-150mg/mL，甚至高達250mg/mL或更高)。然而，此類藥物調配物的許多問題可能在高濃度處發生，包括增加的粘度，pH漂移和溶液顏色變化。此外，在高粘合劑濃度處，形成可見和亞可見(sub-visible)顆粒、結合劑聚集體和/或結合劑半分子的可能性是增加的。此外，在高粘合劑濃度處，藥物調配物與其儲存容器之間的相互作用機會是增加的。因此，仍然需要改進的藥物調配物以避免這些限制。

本發明提供了在玻璃儲存容器中具有增加的儲存穩定性的抗CXCR5抗體藥物調配物。

在第一個態樣，本發明提供適於對患者皮下投予的抗體調配物。所述調配物包括約50至約250mg/mL的抗CXCR5抗體；檸檬酸鹽緩衝劑；大於約0.01%(w/v)表面活性劑；大於約50mM胺基酸；和大於約1%蔗糖。調配物的pH是約pH 6。

在第一個態樣的一個具體實施例中，抗CXCR5抗體或其片段包括：(a)包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的輕鏈可變域，和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的重鏈可變域；(b)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RMSNLAS(SEQ ID NO：59)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(c)包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、或SEQ ID NO：15的胺基酸序列的輕鏈可變域，和包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的重鏈可變域；(d)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RLSNLAS(SEQ ID NO：64)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(e)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO： 58)、RLSSNLAS(SEQ ID NO：65)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(f)包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、或SEQ ID NO：21的胺基酸的可變輕鏈(VL)，和包含SEQ ID NO：23的胺基酸的可變重鏈(VH)；(g)包含SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、或SEQ ID NO：32的胺基酸的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：33或SEQ ID NO：34的胺基酸的可變重鏈；(h)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RMSNLA(SEQ ID NO：66)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID N：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(i)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RLSNLA(SEQ ID NO：67)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(j)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RLSSLA(SEQ ID NO：68)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(k)包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的可變重鏈；(l)包含SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、或SEQ ID NO：43的胺基酸序列的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：45或SEQ ID NO：47的胺基酸序列的可變重鏈；(m)包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：56或SEQ ID NO：57的胺基酸序列的可變重鏈；或(n)RSSKSLLHSSGKTYLYW(SEQ ID NO：69)、RMSNLA(SEQ ID NO：66)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列。

在第一個態樣的另一個具體實施例中，所述胺基酸是精胺酸或甲硫胺酸。

在第一個態樣的一個具體實施例中，所述表面活性劑是聚山梨醇酯(polysorbate)。

在第二個態樣，本發明提供適於對患者皮下投予的抗體調配物。所述調配物包括約100至約175mg/mL的抗體；約10mM檸檬酸鹽緩衝劑；約0.1%(w/v)表面活性劑；約200mM精胺酸；和約4.5-9%蔗糖。調配物的pH是約pH 6。

在第二個態樣的一個具體實施例中，抗體是完全人抗CXCR5抗體。

在第二個態樣的另一個具體實施例中，抗體包括重鏈和輕鏈，所述重鏈包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列且所述輕鏈包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列。

在第二個態樣的進一步的具體實施例中，抗體包含單鏈Fv。

在第二個態樣的另一個具體實施例中，抗體是特異性結合至人CXCR5的胞外結構域的分離抗體或其片段。

在第二個態樣的一個具體實施例中，所述分離抗體或其片段包含RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RLSSLA(SEQ ID NO：68)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列。

在第二個態樣的一個具體實施例中，所述表面活性劑是聚山梨醇酯。

在第二個態樣的一個具體實施例中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。

在第三個態樣，本發明提供一種抗體調配物，其包括約175mg/mL的人源化IgG4抗CXCR5抗體；約10mM檸檬酸鹽緩衝劑；約1.0mg/mL聚山梨醇酯80；約200mM精胺酸HCl；和約45mg/mL蔗糖。所述調配物的pH 是約pH 6。

在第三個態樣的一個具體實施例中，所述人源化IgG4抗CXCR5抗體包括重鏈和輕鏈，所述重鏈包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列且所述輕鏈包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列。

在第四個態樣，本發明提供一種容器，所述容器包含前述任一態樣的抗體調配物。

在第四個態樣的一個具體實施例中，所述容器是預填的注射器、小瓶或自動注射器。

在第四個態樣的另一個具體實施例中，容器包含呈凍乾形式的前述任一態樣的抗體調配物。

在第五個態樣，本發明提供一種套組，所述套組包含第四態樣及其任何具體實施例的容器，和用於投予和使用所述抗體調配物的標簽或說明。

在第五個態樣的一個具體實施例中，投予藉由注射進行。

在第六個態樣，本發明提供前述任一態樣或具體實施例的抗體調配物，其用於治療或診斷人體或動物體的方法中。

在第七個態樣，本發明提供一種用於治療類風濕性關節炎的方法，其包括將前述任一態樣或具體實施例的抗體調配物投予於對其有需要的受試者。

在第八個態樣，本發明提供前述任一態樣或具體實施例的抗體調配物的凍乾形式。

圖1是第一抗CXCR5抗體調配物安慰劑過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。

圖2是第二抗CXCR5抗體調配物安慰劑過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。

圖3是第三抗CXCR5抗體調配物安慰劑過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。

圖4是存儲在Nalgene瓶中的第一抗CXCR5抗體藥物產品(DP；SAR113244)過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。

圖5是圖4的纖維素濾器在200X放大倍率的顯微照片。

圖6是第二抗CXCR5抗體DP過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。

圖7是第一對照抗CXCR5抗體DP過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。第一對照抗CXCR5抗體DP是一種「無星塵(Stardust free)」對照調配物(SAR252067)，其顯示了與第一抗CXCR5抗體DP類似的顆粒形成，但沒有星塵顆粒。這種情况證明了星塵顆粒分析的困難。

圖8是圖7的纖維素過濾器在200X放大倍率的顯微照片。

圖9是SAR341403 DP過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。

圖10是圖9的纖維素過濾器在200X放大倍率的顯微照片。

圖11是第二對照抗CXCR5抗體DP(SAR341403)過濾後的纖維素過濾器的顯微照片。放大倍率為50倍。第二對照抗CXCR5抗體DP是另一種「無星塵」對照調配物，其顯示了與第一抗CXCR5抗體DP類似的顆粒形成，並進一步證明了星塵顆粒分析的困難。

圖12是圖11的纖維素過濾器在200X放大倍率的顯微照片。

圖13是存儲在塑料瓶中的DP SAR113244溶液(無星塵溶液)的DLS測量尺寸分布圖。

圖14是存儲在玻璃小瓶中的DP溶液(含星塵溶液)的DLS測量尺寸分布圖。

圖15顯示了來自樣品的顆粒(頂部軌迹)的FT-IR光譜；底部軌迹指示蛋白質的譜作為比較；分別位於3300cm^-1處的寬譜帶和1650cm^-1，1520cm^-1處的兩個醯胺譜帶對於蛋白質是典型的。

圖16是鑒定為蛋白質的顆粒的拉曼(Raman)光譜；第一軌迹指示來自樣品的顆粒的光譜；第二軌迹指示具有减除(subtracted)背景的來自樣品的顆粒的光譜；第三軌迹指示來自數據庫(蛋白質)的最佳匹配的比較。

圖17是鑒定為蛋白質的顆粒的FT-IR光譜。第一軌迹指示來自樣品的顆粒的FT-IR光譜；第二軌迹指示與數據庫(聚乙烯)的最佳匹配；第三軌迹指示作為比較的蛋白質的譜；分別位於3300cm^-1處的寬譜帶和1650cm^-1，1520cm^-1處的兩個醯胺譜帶對於蛋白質是典型的。

圖18是鑒定為蛋白質的顆粒的拉曼光譜。第一軌迹指示來自樣品的顆粒的光譜；第二軌迹指示具有减除背景的來自樣品的顆粒的光譜；第三軌迹指示來自鑒定為聚乙烯的數據庫的最佳匹配的比較。

圖19示出了機械應力研究期間顆粒形成的結果；深灰色=可見顆粒，淺灰色=1-2個顆粒，散點白色=大部分澄清溶液，白色=無顆粒溶液；柱形從左到右指示：調配物A，H，B，C和D(參見表1)。

圖20示出了機械應力研究期間顆粒形成的結果；深灰色=可見顆粒，方格圖案=星塵或星塵樣顆粒，淺灰色=1-2個顆粒，散點白色=大部分澄清溶液，白色=無顆粒溶液；柱形從左到右表示：調配物A，H，E，F和G(參見表1)。

除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本領域普通技術人員通常理解的相同的含義。

應當注意，如本說明書和所附申請專利範圍中所使用的，單數形式「一個(a)」，「一種(an)」和「所述(the)」也包括複數引用，除非上下文另有明確規定。

術語「約(about)」或「大約(approximately)」表示在給定值或範圍的10%內，例如5%(或1%或更小)以內。

術語「投予(administer)」或「投予(administration)」是指注射或以其他方式物理遞送存在於患者體外物質(例如本發明的調配物)的行為，例如藉由粘膜，皮內，靜脈內，皮下，肌內遞送和/或本文所述或本領域已知的任何其他物理遞送方法。當治療疾病或其症狀時，該物質的投予通常在疾病或其症狀發作之後發生。當預防疾病或其症狀時，該物質的投予通常發生在疾病或其症狀發作之前。

在多肽的上下文中，術語「類似物」是指多肽，其與CXCR5多肽，CXCR5多肽的片段，CXCR5表位，或抗CXCR5抗體具有相似或相同的功能，但其不一定包含與CXCR5多肽，CXCR5多肽的片段，CXCR5表位或抗CXCR5抗體相似或相同的胺基酸序列；或具有與CXCR5多肽，CXCR5多肽的片段，CXCR5表位，或抗CXCR5抗體相似或相同的結構。

具有相似胺基酸序列的多肽是指滿足如下至少一項的多肽：(a)具有與本文所述的CXCR5多肽、CXCR5多肽的片段、CXCR5表位、或抗CXCR5抗體的胺基酸序列至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少99%相同的胺基酸序列的多肽；(b)由核苷酸序列編碼的多肽，所述核苷酸序列在嚴格條件下與編碼本文所述的CXCR5多肽、CXCR5多肽的片段、CXCR5表位、或抗CXCR5抗體(或其VH或VL區)的核苷酸序列雜交至少5個胺基酸殘基、至少10個胺基酸殘基、至少15個胺基酸殘基、至少20個胺基酸殘基、至少25個胺基酸殘基、至少40個胺基酸殘基、至少50個胺基酸殘基、至少60個胺基酸殘基、至少70個胺基酸殘基、至少80個胺基酸殘基、至少90個胺基酸殘基、至少100個胺基酸殘基、至少125個胺基酸殘基、或至少150個胺基酸殘基(參見例如Sambrook等(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Maniatis等(1982)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y.)；及(c)由核苷酸序列編碼的多肽，所述核苷酸序列與編碼本文所述的CXCR5多肽、CXCR5多肽的片段、CXCR5表位、或抗CXCR5抗體(或其VH或VL區)的核苷酸序列至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少99%相同。具有與CXCR5多肽、CXCR5多肽的片段、CXCR5表位、或抗CXCR5抗體相似結構的多肽是指多肽，其具有與CXCR5多肽，CXCR5多肽的片段，CXCR5表位或CXCR5抗體相似的二級、三級或四級結構。多肽的結構可以藉由本領域技術人員已知的方法測定，包括但不限於X射綫晶體學、核磁共振和晶體電子顯微術。

「拮抗劑」或「抑制劑」是指能够抑制靶分子的一種或多種生物活性的分子。拮抗劑可以藉由使配體活化的細胞喪失能力或殺死細胞，和/或藉由干擾受體或配體激活(例如酪胺酸激酶激活)或配體與受體結合後的信號轉導來干擾受體對配體的結合，反之亦然。拮抗劑可以完全阻斷受體-配體相互作用或可以顯著减少這種相互作用。出於本發明的目的，拮抗劑的所有這些干預點應被視為等同的。

例如，CXCR5的「拮抗劑」或「抑制劑」是指能够抑制CXCR5的一種或多種生物活性(如信號傳輸)的分子。因此，包括在本發明範圍內的是結合CXCR5的拮抗劑(例如中和抗體)，CXCL13或CXCR5的其他配體， CXCR5及其配體(如CXCL13)的複合物；CXCR5或CXCL13的胺基酸序列變體或衍生物，其拮抗CXCR5與配體如CXCL13之間的相互作用；可溶性CXCR5，其任選地融合至異源分子如免疫球蛋白區域(例如免疫粘附素)；包含與另一種受體或生物分子締合的CXCR5的複合物；與CXCR5結合的合成或天然序列肽；等等。

術語「抗體」，「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可以互換使用。術語抗體包括但不限於合成抗體，單株抗體，重組產生的抗體，多特異性抗體(包括雙特異性抗體)，人類抗體，人源化抗體，嵌合抗體，胞內抗體，單鏈Fv(scFv)(例如包括單特異性，雙特異性等)，駱駝化(camelized)抗體，Fab片段，F(ab')片段，二硫鍵連接的Fv(sdFv)，抗獨特型(抗Id)抗體和任何上述任一者的表位結合片段。具體而言，抗體包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有與CXCR5抗原特異性結合的抗原結合位點的抗原結合結構域或分子(例如抗CXCR5抗體的一個或多個互補决定區(CDR))。抗CXCR5抗體可以是任何種類(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)，任何類型(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、和IgA2)，或任何亞類(例如IgG2a和IgG2b)的免疫球蛋白分子。在一些具體實施例中，抗CXCR5抗體是人源化的，如人源化單株抗CXCR5抗體。在一些具體實施例中，抗CXCR5抗體是IgG抗體，具體而言是人源化IgG4抗體。

如本文所用，術語「抗CXCR5抗體」是指與本文定義的人CXCR5特異性結合的抗體或其衍生出的多肽(衍生物)，包括但不限於抑制或顯著降低CXCR5對其配體的結合和/或抑制CXCR5活性的分子。例如，涵蓋的抗CXCR5抗體包括特異性結合人CXCR5胞外結構域的分離抗體或其片段，例如美國專利第8,647,622號中所公開的那些，其藉由提述併入本文用於所有目的。具體而言，本發明的涵蓋抗CXCR5抗體具有美國專利第8,647,622號的包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列的可變輕鏈和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的可變重鏈。在另一個具體實施例中，特異性結合人CXCR5胞外結構域的分離抗體或其片段包括美國專利第8,647,622號的RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RLSSLA(SEQ ID NO：68)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)、和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列。

術語「B細胞活性」意指高於正常的B細胞水平，其可以是局部的，或B細胞的生物學表現或功能的證據，如抗體表達，Bruton's酪胺酸激酶存在或活性，CD19的表達或存在，B細胞活化因子的表達或存在等。

術語「結合劑」是指與CXCR5結合或特異性結合的任何分子，如抗體、siRNA、核酸、適體、蛋白質或小分子有機化合物、或其變體或其片段。

術語「副產物」包括不期望的產物，其降低或减小給定調配物中治療/預防性結合劑(如抗體)的比例。例如，典型的副產物包括抗體的聚集體、抗體的片段，例如藉由脫醯胺或水解作用降解抗體產生的片段，或其混合物。通常，聚集體是具有大於單體抗體的分子量的複合物。抗體降解產物可以包括例如抗體的片段，例如藉由脫醯胺或水解作用產生的。通常，降解產物是具有小於單體抗體的分子量的複合物。在IgG抗體的情况下，這種降解產物小於約150kD。

術語「組合物」和「調配物」意在涵蓋含有任選地指定量的指定成分(例如抗CXCR5抗體)的產品，以及直接或間接由指定成分的組合(任選地以指定量)產生的任何產品。

術語「恒定區」和「恒定域」是指輕鏈和重鏈的羧基末端部分，其不直接參與抗體與抗原的結合，但表現出各種效應功能，例如與Fc受體的相互作用。該術語是指相對於免疫球蛋白的其他部分(含有抗原結合位點的可變域)具有更保守的胺基酸序列的免疫球蛋白分子的部分。恒定域包含重鏈的CH1，CH2和CH3域和輕鏈的CHL域。

術語「CXCR5」涉及在淋巴細胞、尤其是B細胞、特別是原初(naïve)B細胞中天然存在的已知分子；涉及從這些細胞分離出的分子；涉及使用已知材料和方法並使用編碼CXCR5的核酸經重組製備的分子；以及涉及CXCR5的某些部分，例如胞外(EC)結構域，其保留了與實施本發明有關的特點和性質，例如結合CXCL13。可溶的CXCR5分子可基本上由CXCR5的EC域組成，一般包括該分子的大約前60個胺基酸，即CXCR5的胺基末端部分。

CXCR5是非混雜受體。CXCL13是CXCR5的配體，在基底細胞例如濾泡樹突狀細胞和淋巴組織中為組成型表達。CXCL13特異吸引B細胞和一個T細胞的小亞組(其稱為B輔助性濾泡T細胞(TFH))。考慮到免疫系統中的T細胞和B細胞群體之間有許多互相作用，這可不是預料不到的。而且，活化的T細胞誘導或上調CXCR5表達。已發現淋巴細胞浸潤到三級異位生髮中心(GC)與預先具有這類非典型的淋巴結樣結構的某些病症中的病情加重和耐受崩潰充分相關。使用體內鼠模型，如CXCR5-/-和CXCL13-/-小鼠，受體或配體的缺失導致GC精細結構由於T細胞和B細胞定位改變和可能的互相作用而發生變化。這些小鼠還可受到保護，防止發生嚴重的膠原誘導的關節炎(CIA)。由於CXCR5選擇性地在與RA發病相關的成熟B細胞上表達，阻斷該受體可調節受累個體的致關節炎的反應。使用生物製品(即抗TNFα和抗CD20抗體，利妥昔單抗)治療類風濕性關節炎已顯示為臨床有效，具體而言，接受B細胞導向療法的患者的臨床體征和症狀已顯示長期改善。選擇性地靶向於僅在成熟B細胞和B輔助性T細胞上表達的CXCR5，不會影響B細胞的發育或使患者免疫力受損。與利妥昔單抗不同的是，本發明抗體是不介導細胞毒性的中和抗體。

「CXCR5疾病」是一種疾病、病症、病况、異常等，其特徵或誘因是CXCL13或其它CXCR5的配體過表達或水平升高、B細胞水平升高、B細胞活性水平升高、CXCR5水平升高或CXCR5代謝或活性異常。

術語「表位」是指抗原(例如CXCR5多肽或CXCR5多肽片段)表面上能够結合至結合劑(例如抗體)的一個或多個抗原結合區的局部區，並且其在能够引發免疫響應的動物如哺乳動物例如人中具有抗原性或免疫原性活性。具有免疫原性活性的表位是在動物中引發抗體應答的多肽的一部分。具有抗原活性的表位是抗體特異性結合的多肽的一部分，藉由本領域熟知的任何方法，例如免疫測定法確定的。抗原表位不一定是免疫原性的。表位通常由分子的化學活性表面分子組成，例如胺基酸或糖側鏈，並具有特定的三維結構特徵以及特定的電荷特徵。參與形成表位的多肽的區域可以是多肽的連續胺基酸，或表位可以從多肽的兩個或更多個非連續區域聚集而成。表位可以是或可以不是抗原的三維表面特徵。抗CXCR5抗體可以特異性結合CXCR5的單體(變性)形式的表位，CXCR5的三聚體(天然)形式的表位，或者CXCR5的單體(變性)形式和三聚體(天然的)形式二者。

術語「賦形劑」是指通對於藥物常用作稀釋劑、載劑、防腐劑、粘合劑、穩定劑等的惰性物質，包括但不限於蛋白質(例如血清白蛋白等)、胺基酸(例如天冬胺酸、谷胺酸、賴胺酸、精胺酸、，甘胺酸、組胺酸等)，脂肪酸和磷脂(例如烷基磺酸酯、辛酸酯等)，表面活性劑(例如SDS、聚山梨醇酯、非離子表面活性劑等)、糖類(例如蔗糖、麥芽糖、海藻糖等)和多元醇(例如甘露醇、山梨醇等)。另見Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,Pa.，其藉由提述以其整體併入本文用於所有目的。

在肽或多肽的上下文中，術語「片段」是指包含小於全長胺基酸序列的肽或多肽。這樣的片段可以例如來自胺基末端的截短，羧基末端的截短和/或胺基酸序列的內部殘基缺失。片段可以由於可變RNA剪接或來自體內蛋白酶活性而產生。在一些具體實施例中，hCXCR5片段包括這樣的多肽，所述多肽包含CXCR5多肽的胺基酸序列的至少5個連續胺基酸殘基，至少10個連續胺基酸殘基，至少15個連續胺基酸殘基，至少20個連續胺基酸殘基，至少25個連續胺基酸殘基的胺基酸序列的多肽，至少40個連續的胺基酸殘基，至少50個連續胺基酸殘基，至少60個連續胺基殘基，至少70個連續胺基酸殘基，至少80個連續胺基酸殘基，至少90個連續胺基酸殘基，至少連續的100個胺基酸殘基至少125個連續的胺基酸殘基，至少150個連續胺基酸殘基，至少175個連續胺基酸殘基，至少200個連續胺基酸殘基或至少250個連續胺基酸殘基，或特異性結合CXCR5多肽的抗體。在一個具體具體實施例中，CXCR5多肽的片段或特異性結合CXCR5抗原的抗體保留所述多肽或抗體的至少1個，至少2個，或至少3個功能。

術語「完全人類抗體」或「人類抗體」在本文中可互換使用，並且是指包含人可變區且可能包含人恒定區的抗體。在具體具體實施例中，術語是指包含人來源的恒定區和可變區的抗體。在具體具體實施例中，抗體是完全人類抗體。術語「完全人類抗體」包括具有對應於人種系免疫球蛋白序列的恒定區和可變區的抗體，如Kabat等(見Kabat等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生與公衆服務部，NIH出版號91-3242)。產生完全人類抗體的方法是本領域已知的。

短語「重組人類抗體」包括藉由重組方法製備、表達、產生或分離的人類抗體，例如使用轉染至宿主細胞中的重組表達載劑表達的抗體，從重組組合人類抗體文庫分離的抗體，從用於人免疫球蛋白基因的轉基因和/或轉染色體的動物(例如小鼠或牛)分離的抗體(參見例如Taylor,L.D.等(1992) Nucl.Acids Res.20：6287-6295)，或藉由涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列的任何其它方式來製備、表達、產生或分離的抗體。這樣的重組人類抗體可以具有源自人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區(參見Kabat等，1991)。然而，在一些具體實施例中，對這樣的重組人類抗體進行體外誘變(或者當使用針對人Ig序列的轉基因動物，體內體細胞誘變時)，因此，重組抗體的VH和VL區的胺基酸序列是可以不天然存在於體內的人體抗體種系庫中的序列，雖然其源自人種系VH和VL序列併與之相關。

「IgG4結合劑」或「包含IgG4 Fc區的至少一部分的結合劑」均指本文所述的至少包含IgG4 Fc的片段的結合劑。在一些具體實施例中，該片段包含IgG4 Fc區的10、20、30、40、50、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210或220個胺基酸。在其它具體實施例中，片段包含IgG4 Fc區的10-50、50-100、100-150或150-200個胺基酸。在其它具體實施例中，IgG4 Fc區的部分可以與IgG4 Fc區具有一定的同源性。例如，IgG4結合劑可包括與IgG4 Fc區具有大於50、60、70、80、90、93、95、96、97、98、99、或100%同源性的蛋白質的一部分。IgG4的例示性Fc區描述於整個說明書中。

當用於指稱抗體時，術語「重鏈」是指五種不同種類，稱為alpha(α)，delta(Δ)，epsilon(ε)，gamma(γ)和mu(μ)，其基於重鏈恒定域的胺基酸序列。這些不同類型的重鏈是本領域熟知的，分別產生五類抗體，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包括IgG的四個亞型，即IgGl、IgG1、IgG3和IgG4。在一些具體實施例中，重鏈是人類重鏈。

非人類(例如鼠)抗體的「人源化」形式是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(例如抗體的Fv、Fab、Fab'、F(ab')₂或其它靶標結合亞序列)，與人類抗體相比，其含有源自非人免疫球蛋白的序列。一般而言，所述人源化抗體基本包括一個、通常為兩個的所有可變區，其中所有或基本上所有CDR區對應於非人免疫球蛋白的CDR區，以及所有或基本上所有FR區是人免疫球蛋白模板序列的FR區。所述人源化抗體還可包括至少一部分免疫球蛋白恒定區(Fc)，通常是所選擇的人免疫球蛋白模板的恒定區。一般而言，目的是擁有在人體內免疫原性最低的抗體分子。因此，有可能一個或多個CDR中的一個或多個胺基酸也可被變化成在人宿主體內免疫原性更低的胺基酸，但基本不降低所述一個或多個CDR對CXCR5或CXCL13的特異結合功能。或者，FR可為非人的，但免疫原性最强的胺基酸被替換為免疫原性較低的胺基酸。但是，上文所討論的CDR移植並非是獲得人源化抗體的唯一途徑。例如，僅修飾CDR區可能不够充分，因為框架區殘基參與確定CDR環的三維結構以及抗體與其配體的總親和力的情况並不少見。因此，可實施任何方法以使非人親代抗體分子被修飾為對人免疫原性更低的抗體分子，而且與人類抗體的全域序列同一性並非總是必需的。因此，也可藉由例如僅取代數個殘基實現人源化，尤其是取代暴露在抗體分子外且沒有被包埋在該分子內部從而不易接近宿主免疫系統的殘基。本文在取代抗體分子上的「活動」或「柔性」殘基方面教導了該方法，其目標是降低或减少所得分子的免疫原性，却不損害所述抗體對其表位或决定簇的特異性。參見例如Studnicka等，Prot Eng 7(6)805-814,1994；Lazar等，Mol Immunol.2007 Mar；44(8)：1986-98(2007)；Sims等，J Immunol 151：2296(1993)；Chothia等，J Mol Biol 196：901(1987)；Carter等，Proc Natl Acad Sci USA 89：4285(1992)；Presta等，J Immunol 151：2623(1993)，WO2006/042333和美國專利No.5,869,619。

「分離」或「純化」的結合劑(如抗體)基本上不含細胞物質或來自細胞或組織來源或源自蛋白的培養基的其它污染蛋白，或在化學合成時基本上不含化學前體或其它化合物。例如，「基本上不含細胞物質」這一語言包括抗體的製備物，其中抗體與細胞的細胞組分分開，所述抗體從細胞中分離或以重組方式產生。因此，基本上不含細胞物質的抗體包括抗體的製備物，其具有小於約30%、20%、10%、或5%(乾重)的異源蛋白(也稱為污染蛋白)。當抗體是以重組產生時，理想的是基本上不含培養基，即，培養基占小於約20%、10%、或5%的蛋白製備物的體積。當抗體是藉由化學合成產生時，在一些具體實施例中，其基本上不含化學前體或其它化學物質，即其與化學前體或涉及蛋白合成的其它化學物質是分開的。因此，這些抗體製備物具有小於約30%、20%、10%、或5%(乾重)的目的抗體以外的化合物或化學前體。在一些具體實施例中，抗CXCR5抗體是分離或純化的。

術語「人類CXCR5」，「hCXCR5」或「hCXCR5多肽」和類似術語是指在美國專利No.8,647,622中公開、並合成或從合適的細胞源分離的多肽(「多肽」，「肽」和「蛋白質」在本文中可互換使用)，以及相關多肽，包括其SNP變體。相關多肽包括等位變體(例如SNP變體)；剪接變體；片段；衍生物；取代，缺失和插入變體；融合多肽；和種間同源物，在一些具體實施例中，其保留CXCR5活性和/或足以產生抗CXCR5免疫響應。還涵蓋CXCR5的可溶形式，其足以產生抗CXCR5免疫響應。如本領域技術人員會理解的，抗CXCR5結合劑(如抗體)可以結合CXCR5多肽，多肽片段，抗原和/或表位，因為表位是較大抗原的一部分，所述較大抗原是較大多肽片段的一部分，所述較大多肽片段又是較大多肽的一部分。

術語「Kabat編號」和類似術語是本領域中公認的，並且是指比抗體或其抗原結合部分的重鏈和輕鏈可變區中的其他胺基酸殘基更可變(即高變)胺基酸殘基的編號系統。(參見Kabat等(1971)Ann.NY Acad.Sci.190：382-391和Kabat等(1991))。

當指稱抗體時，術語「輕鏈」是指基於恒定域的胺基酸序列的兩種不同類型，稱為kappa(κ)或lambda(λ)。輕鏈胺基酸序列是本領域公知的。在一些具體實施例中，輕鏈是人類輕鏈。

術語「管理(manage)」，「管理(managing)」和「管理(management)」是指受試者從治療(例如預防或治療劑)獲得的有益效果，其不會導致感染的治愈。在一些具體實施例中，對受試者投予一種或多種治療(例如預防或治療劑，例如本發明的調配物)以「管理」CXCR5介導的疾病(例如類風濕性關節炎)或其一種或多種症狀，以防止疾病的進展或惡化。

術語「單株抗體」是指從同質或基本上同質的抗體的群體獲得的抗體，並且每個單株抗體通常會識別抗原上的單一表位。在一些具體實施例中，「單株抗體」是由單個融合瘤或其他細胞產生的抗體。術語「單株」不限於製備抗體的任何具體方法。例如，單株抗體可以藉由如Kohler等；Nature,256：495(1975)所述的融合瘤方法製備或可以從噬菌體文庫中分離出來。製備選殖細胞系和由其表達的單株抗體的其它方法是本領域中已知的(參見例如Short Protocols in Molecular Biology,(2002)第五版；Ausubel等編，John Wiley and Sons，New York的第11章)。

術語「藥學上可接受的」指由聯邦或州政府的管理機構批准，或在美國藥典、歐洲藥典或其他公認的藥典中列出用於在動物，尤其是在人類中使用的。

「藥學上可接受的賦形劑」是指與活性分子如單株抗體組合用於製備接受的或方便的劑型的任何惰性物質。「藥學上可接受的賦形劑」是所采用的劑量和濃度對受體無毒，並且與包含單株抗體的調配物的其它成分相容的賦形劑。

術語「預防」是指由投予或本文提供的治療或治療組合(例如預防或治療劑(如本發明的調配物)的組合)引起的CXCR5介導的疾病和/或與之相關的症狀的進展、復發、發作或擴散的全部或部分抑制。

術語「預防劑」是指可以完全或部分抑制受試者中CXCR5介導的疾病和/或與之相關的症狀的進展、復發、發作或擴散的任何試劑。在一些具體實施例中，術語「預防劑」是指本發明的調配物。在一些其它具體實施例中，術語「預防劑」是指除本發明調配物外的試劑。在一些具體實施例中，預防劑是已知可用於或已經或正在用於預防CXCR5介導的疾病和/或與其相關的症狀，或妨礙CXCR5介導的疾病和/或與其相關的症狀的發作、發展、進展和/或嚴重程度的藥劑。在具體具體實施例中，預防劑是完全人類抗體，如完全人單株抗體或人源化抗CXCR5抗體，如人源化抗CXCR5單株抗體。

術語「CXCR5抗原」是指結合劑(如抗體)特異性結合CXCR5多肽的部分。CXCR5抗原還指結合劑(如抗體)特異性結合的CXCR5多肽或其片段的類似物或衍生物。對表位有貢獻的CXCR5多肽的區可以是多肽的連續胺基酸，或者表位可以由多肽的兩個或更多個非連續區聚集而成。表位可以是或可以不是抗原的三維表面特徵。能够引起免疫響應的CXCR5抗原的表面上的局部區是CXCR5表位。表位可以是或可以不是抗原的三維表面特徵。

術語「CXCR5介導的疾病」和「CXCR5介導的病症」可互換使用，且是指完全或部分由CXCR5引起或作為CXCR5的結果的任何疾病。在一些具體實施例中，CXCR5在細胞表面上異常(例如高度)表達。在一些具體實施例中，CXCR5可在特定細胞類型上異常上調。在其他具體實施例中，正常、異常或過量的細胞信號傳導由CXCR5與CXCR5配體的結合引起。在一些具體實施例中，CXCR5的配體是CXCL13。在一些具體實施例中，CXCR5介導的疾病是類風濕性關節炎(RA)。

術語「糖」是指作為多元醇的衍生物的一類分子。糖通常被稱為碳水化合物，並且可以含有不同量的糖(糖)單元，例如單糖、雙糖和多糖。

術語「特異性結合」或「特異性結合」表示特異性結合抗原或其片段而不特異性結合其他抗原。例如，特異性結合抗原的抗體可以以較低親和力結合至其它肽或多肽，如藉由例如放射免疫測定(RIA)，酶聯免疫吸附測定(ELISA)，BIACORE®或本領域已知的其它測定法確定的。特異性結合抗原的抗體或其變體或片段可以與相關抗原交叉反應。在一些具體實施例中，與抗原特異性結合的抗體或其變體或片段不與其他抗原交叉反應。特異性結合CXCR5抗原的抗體或其變體或其片段可以例如藉由免疫測定法，BIACORE®或本領域技術人員已知的其它技術來鑒定。通常，特異性或選擇性反應為至少兩倍背景信號或噪聲，更通常為多於10倍背景。關於抗體特異性的討論參見例如Paul編，1989,Fundamental Immunology第二版，Raven Press,New York，第332-336頁。

「穩定」或「穩定化」調配物是其中結合劑(如抗體)在其中基本上保留其存儲時的物理穩定性，同一性，完整性和/或化學穩定性，身份(identity)，完整性和/或生物學活性的調配物。用於測量蛋白質穩定性的各種分析技術在本領域是可獲得的，並綜述於例如Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee編，Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)和Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)中。穩定性可以在選擇的溫度和其他儲存條件下於一段選擇的時間段測量。穩定性可以藉由選自由下列組成之群組的方法的至少一項來確定：目測，SDS-PAGE，IEF，HPSEC，RFFIT和κ/λELISA的方法中的至少一種來確定。例如，如果在目視檢查顏色和/或透明度時，或者藉由UV光散射、SDS-PAGE或藉由(高壓)大小排阻色譜(HPSEC)測量，其沒有顯示出聚集、沉澱和/或變性的迹象，則抗體「保留其物理穩定性」。在一些具體實施例中，當使用本發明的調配物時，5%或更少，通常為4%或更少，通常為3%或更少，更通常為2%或更少，特別是1%或更少的抗體形成聚集體，如藉由HPSEC 或用於測量聚集形成的任何其它合適的方法所測量的。例如，如果抗體單體在特定調配物中於某些儲存條件下經過一定的預定時間後具有約90%，通常約95%，特別是約98%的純度，則認為抗體在特定調配物中是穩定的。化學穩定性可藉由檢測和定量化學改變形式的蛋白質來評估。化學改變可能涉及尺寸修飾(例如剪切)，其可以使用例如(HP)SEC，SDS-PAGE和/或基質輔助激光解吸電離/飛行時間(time-of-flight)質譜(MALDI/TOF MS)來評估。其他類型的化學改變包括電荷改變(例如，作為脫醯胺的結果出現)，其可以藉由例如離子交換色譜法進行評估。例如，如果抗體在給定時間的生物活性是製備抗體調配物之時所顯示的生物活性的至少約90%(在測定誤差內)，如在抗原結合測定法或病毒中和測定法中確定的，則抗體在給定時間在藥物調配物中「保留其生物學活性」。

在一個具體具體實施例中，抗體調配物可以是「穩定抵抗星塵顆粒形成的(stable against Stardust particle formation)」，其是指當在加速條件下在玻璃容器中儲存6個月的時期時不會形成星塵顆粒的抗體調配物。

術語「受試者」和「患者」可以互換使用。如本文所用，受試者通常是哺乳動物，例如非靈長類動物(例如牛、猪、馬、猫、狗、大鼠等)或靈長類(例如猴和人類)，並且在一些具體實施例中是人類。在一個具體實施例中，受試者是具有CXCR5介導的疾病的哺乳動物，如人。在另一個具體實施例中，受試者是處於發生CXCR5介導的疾病的風險的哺乳動物，如人。

術語「治療有效量」是指足以降低和/或改善給定疾病和/或與其相關的症狀的嚴重程度和/或持續時間的治療(例如本發明的調配物)的量。該術語還包括降低或改善給定疾病的發展或進展，降低或改善給定疾病的復發、發展或發作和/或改進或增强另一療法的預防或治療效果(例如除本發明的調配物之外的治療)所必需的量。在一些具體實施例中，本發明的抗體的治療有效量為約0.1mg/kg(受試者每千克體重的毫克抗體)至約100mg/kg。在一些具體實施例中，其中提供的抗體的治療有效量是約0.1mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約60mg/kg、約70mg/kg、約80mg/kg、約90mg/kg或約100mg/kg(或其中的範圍)。在一些具體實施例中，本文所用的「治療有效量」也指實現特定結果(例如抑制細胞的CXCR5生物學活性，例如結合CXCL13)的本發明抗體的量。

術語「治療劑」是指可用於治療、管理或改善CXCR5介導的疾病和/或與其相關的症狀的任何藥劑。在一些具體實施例中，術語「治療劑」是指本發明的調配物。在某些其它具體實施例中，術語「治療劑」是指除本發明的調配物之外的藥劑。在一些具體實施例中，治療劑是已知可用於或已經或正在用於治療、管理或改善CXCR5介導的疾病或與其相關的一種或多種症狀的藥劑。

術語「療法」是指可用於預防、管理、治療和/或改善疾病(例如IBD或GVHD)或CXCR5介導的疾病(例如類風濕性關節炎)的任何方案、方法和/或藥劑。在一些具體實施例中，術語「療法(therapies)」和「療法(therapy)」是指可用於預防、管理、治療和/或改善本領域的技術人員(如醫務人員)已知的CXCR5介導的疾病的生物療法、支持性治療和/或其他療法。

術語「治療(treat)」，「治療(treatment)」和「治療(treating)」是指由投予一種或多種治療(包括但不限於投予一種或多種預防或治療劑，如本發明的調配物)所產生的CXCR5介導的疾病(例如，類風濕性關節炎)的進展、嚴重程度和/或持續時間的减少或改善。在CXCR5的具體具體實施例中，此類術語是指CXCR5與CXCL13的結合的减少或抑制，和/或與CXCR5介導的疾病(如類風濕性關節炎)相關的一種或多種症狀的抑制或减少。

術語「可變區」或「可變域」是指輕鏈和重鏈的一部分，通常是重鏈中的胺基末端約120至130個胺基酸和輕鏈中約100至110個胺基酸，其序列在抗體之間廣泛不同，並且用於每種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性。序列中的變異性集中在稱為互補决定區(CDR)的那些區域中，而可變域中更高度保守的區域稱為框架區(FR)。輕鏈和重鏈的CDR主要負責抗體與抗原的相互作用。胺基酸位置的編號根據EU標引，如Kabat等(1991)Sequences of proteins of immunological interest.(美國衛生與公衆服務部，Washington,D.C.)第5版。(「Kabat等」)。在一些具體實施例中，可變區是人可變區。

如本文所使用的，術語「星塵」和「星塵顆粒」可以互換使用，以指在容器內存在抗體調配物的情况下在玻璃容器中存在的顆粒。

B.調配物

本公開的調配物可以呈包含抗CXCR5結合劑的液體和凍乾粉末的形式。此外，此類調配物可以包括緩衝劑、表面活性劑、張力劑、胺基酸和其它賦形劑。

結合劑

在本發明的一些具體實施例中，抗CXCR5抗體是人源化或完全人類抗體。人源化和完全人類抗體同種型的實例包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在一些具體實施例中，抗CXCR5抗體是IgG抗體。有四種形式的IgG。在一些具體實施例中，抗CXCR5抗體是IgG4抗體。在本發明的一些具體實施例中，抗CXCR5抗體是人源化IgG4抗體。

本發明調配物的一些具體實施例還包括抗CXCR5結合劑的變體，例如抗體。抗CXCR5抗體的變體由於其相似性高而可以具有相似的物理化學性質，因此也包括在本發明的範圍內。變體被定義為具有與抗CXCR5抗體至少95%，至少97%，例如至少98%或99%同源的胺基酸序列的抗體，並且能够競爭結合CXCR5多肽，CXCR5多肽片段或CXCR5表位。在一些具體實施例中，這些變體會改善、中和或以其他方式抑制CXCR5生物活性(例如CXCL13與CXCR5的結合)。確定與靶標結合的競爭可以藉由本領域技術人員已知的常規方法進行。在一些具體實施例中，變體是人類抗體，且在一些具體實施例中是IgG4分子。在一些具體實施例中，變體與本文公開的涵蓋的抗體在胺基酸序列方面至少95%、96%、97%、98%或99%相同。術語「變體」是指與抗CXCR5抗體的胺基酸序列相比，包含被一個或多個胺基酸改變的胺基酸序列的抗體。該變體可以具有保守的序列修飾，包括胺基酸取代、修飾、添加和/或缺失。

修飾的實例包括但不限於糖基化，乙醯化，聚乙二醇化，磷酸化，醯胺化，藉由已知的保護/封閉基團的衍生化，蛋白水解切割和與細胞配體或其他蛋白質的連接。胺基酸修飾可以藉由本領域已知的標準技術引入編碼抗體的核酸中，所述標準技術如定點誘變、分子選殖、寡核苷酸定向誘變和隨機PCR介導的誘變。保守胺基酸取代包括其中胺基酸殘基被具有相似結構或化學性質的胺基酸殘基取代的那些取代。具有相似側鏈的胺基酸殘基的家族已經在本領域中定義。這些家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸(例如賴胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈的胺基酸(例如天冬胺酸、谷胺酸)、不帶電荷的極性側鏈的胺基酸(例如天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈的胺基酸(例如甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β-分支側鏈的胺基酸(例如蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)和芳族側鏈的胺基酸(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸)。本領域技術人員清楚的是，還可以采用除上述使用的以外的胺基酸殘基家族的分類。此外，變體可以具有非保守胺基酸取代，例如用具有不同結構或化學性質的胺基酸殘基取代某一胺基酸。類似的微小變化還可包括胺基酸缺失或插入，或二者。可以使用本領域熟知的計算機程序來找到用於確定哪些胺基酸殘基可被取代、修飾、插入或缺失而不消除免疫活性的指導。可使用本領域技術人員已知的計算機算法，例如Gap或Bestfit，來最佳地比對待比較的胺基酸序列並定義相似或相同的胺基酸殘基。變體可以具有與抗CXCR5抗體相同或不同(較高或較低)的結合親和力，但仍然能够特異性結合CXCR5，並且可以具有與抗CXCR5抗體相同、更高的或更低的生物學活性。

本發明的具體實施例還包括抗CXCR5結合劑(如抗體)的抗原結合片段。術語「抗原結合域」、「抗原結合區」、「抗原結合片段」和類似術語是指包含與抗原相互作用並賦予結合劑對抗原的特異性和親和力的胺基酸殘基的抗體部分(例如互補决定區(CDR))。抗原結合區可以來源於任何動物物種，例如嚙齒動物(例如兔、大鼠或倉鼠)和人。在一些具體實施例中，抗原結合區域源自人。抗原結合片段的非限制性實例包括：Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、單鏈Fv(scFv)分子、dAb片段和由模擬抗體的高變區的胺基酸殘基組成的最小識別單位。

在本發明的一些具體實施例中，抗CXCR5結合劑(或其變體或其抗原結合片段)會改善、中和或以其它方式抑制體內CXCR5生物活性(例如CXCL13與CXCR5的結合)。

在本發明的一些具體實施例中，抗CXCR5結合劑(或其變體或其抗原結合片段)是改善、中和或以其它方式抑制體內CXCR5生物活性(例如CXCL13與CXCR5的結合)的拮抗劑結合劑。

在一些具體實施例中，抗CXCR5結合劑(或其變體或其抗原結合片段)以約50至約500mg/mL、約25至約400mg/mL、約50至約250mg/mL、約5mg/mL至約280mg/mL、約5mg/mL至約200mg/mL、約5mg/mL至約125mg/mL、約5mg/mL至約75mg/mL、約5mg/mL至約50mg/mL、和約5mg/mL至約25mg/mL的量存在於調配物中。例如，抗CXCR5結合劑可以約5mg/mL、約10mg/mL、約15mg/mL、約20mg/mL、約25mg/mL、約30mg/mL、約35mg/mL、約40mg/mL、約45mg/mL、約50mg/mL、約55mg/mL、約60mg/mL、約65mg/mL、約70mg/mL、約75mg/mL、約80mg/mL、約85mg/mL、約90mg/mL、約95mg/mL、約100mg/mL、約105mg/mL、約110mg/mL、約115mg/mL、約120mg/mL、約125mg/mL、約130mg/mL、約135mg/mL、約140mg/mL、約145mg/mL、約150mg/mL、約155mg/mL、約160mg/mL、約165mg/mL、約170mg/mL、約175mg/mL、約180mg/mL、約185mg/mL、約190mg/mL、約195mg/mL、約200mg/mL、約205mg/mL、約210mg/mL、約215mg/mL、約220mg/mL、約225mg/mL、約230mg/mL、約235mg/mL、約240mg/mL、約245mg/mL、約250mg/mL、約255mg/mL、約260mg/mL、約265mg/mL、約270mg/mL、約275mg/mL、或約280mg/mL的量存在於調配物中。

在可供選擇具體實施例中，抗CXCR5結合劑可以以約5至約25mg/mL、約26至約50mg/mL、約51至約75mg/mL、約76至約100mg/mL、約101至約125mg/mL、約126至約150mg/mL、約151至約175mg/mL、約176至約200mg/mL、約201mg/mL至約225mg/mL、約226mg/mL至約250mg/mL、約251至約280mg/mL、約5至約25mg/mL、約40至約60mg/mL、約75至約85mg/mL、或約90至約110mg/mL的量存在於調配物中。

在第一個具體具體實施例中，涵蓋的抗體是特異性結合人CXCR5的細胞外結構域的分離的抗體或其片段。抗體或其片段可以包括：(a)包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的輕鏈可變域，和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的重鏈可變域；(b)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)，RMSNLAS(SEQ ID NO：59)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)， GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(c)包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、或SEQ ID NO：15的胺基酸序列的輕鏈可變域，和包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的重鏈可變域；(d)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)，RLSNLAS(SEQ ID NO：64)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)，GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(e)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)，RLSSNLAS(SEQ ID NO：65)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)，GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(f)包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、或SEQ ID NO：21的胺基酸序列的可變輕鏈(VL)，和包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列的可變重鏈(VH)；(g)包含SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、或SEQ ID NO：32的胺基酸序列的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：33或SEQ ID NO：34的胺基酸序列的可變重鏈；(h)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)，RMSNLA(SEQ ID NO：66)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)，GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID N：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(i)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)，RLSNLA(SEQ ID NO：67)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)，GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(j)RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)，RLSSLA(SEQ ID NO：68)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)，GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列；(k)包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的可變重鏈；(l)包含SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、或SEQ ID NO：43的胺基酸序列的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：45或SEQ ID NO：47的胺基酸序列的可變重鏈；(m)包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列的可變輕鏈，和包含SEQ ID NO：56或SEQ ID NO：57的胺基酸序列的可變重鏈；或(n)RSSKSLLHSSGKTYLYW(SEQ ID NO：69)，RMSNLA(SEQ ID NO：66)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)，GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列。

在第二個具體具體實施例中，涵蓋的抗體是特異性結合人CXCR5的細胞外結構域的分離抗體或其片段。抗體或其片段包含可變輕鏈和可變重鏈，所述可變輕鏈包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列，所述可變重鏈包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列。

在第三個具體具體實施例中，涵蓋的抗體是特異性結合人CXCR5細胞外結構域的分離的抗體或其片段。抗體或其片段包含RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)，RLSSLA(SEQ ID NO：68)，MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)，GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)，VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)，和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列。

在上述第一、第二或第三具體具體實施例中的任一個中，抗體或其片段可進一步包括一個或多個恒定區。所述一個或多個恒定域可以由C_H1，C_H2，C_H3和/或C_L組成。所述一個或多個恒定區可來自IgG抗體，其可為例如IgG4抗體。

在上述第一、第二或第三具體具體實施例中的任一個中，抗體或其片段可以是單鏈Fv。

在一個具體實施例中，涵蓋了醫藥組合物，其包含治療有效量的上述第一、第二或第三具體具體實施例中的任一個的抗體或其片段和藥學上可接受的載劑。

緩衝劑

本發明的調配物可以包括檸檬酸鹽緩衝劑作為緩衝劑。也可以使用其它緩衝液。緩衝劑維持生理適宜的pH。此外，緩衝劑增强調配物的等滲性和化學穩定性。在一些具體實施例中，檸檬酸鹽緩衝液以約0.5mM至約50mM，例如約5mM至約15mM的濃度存在於調配物中。例如，檸檬酸鹽緩衝液可以以約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mM、約20mM、約21mM、約22mM、約23mM、約24mM、約25mM、約26mM、約27mM、約28mM、約29mM、約30mM、約31mM、約32mM、約33mM、約34mM、約35mM、約36mM、約37mM、約38mM、約39mM、約40mM、約41mM、約42mM、約43mM、約44mM、約45mM、約46mM、約47mM、約48mM、約49mM、或約50mM的濃度存在於調配物中。在一些具體實施例中，檸檬酸鹽緩衝液以約7mM至約13mM，如約9mM至約11mM的濃度存在於調配物中。在一些具體實施例中，檸檬酸鹽緩衝液以約10mM的濃度存在。

在一些具體實施例中，本發明的調配物具有pH6以下的pH值。在一些具體實施例中，調配物的pH範圍為約5.0至約6.0。例如，調配物的pH可為約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9和約6.0。在一些具體實施例中，調配物的pH範圍可為約5.5至約6.0。在一些具體實施例中，pH值是約5.5或約6.0。調配物的pH可以藉由本領域技術人員已知的任何手段測量。用於測量pH的手段是使用帶有微電極的pH計。可以使用本領域已知的任何方法調節調配物的pH。用於改變調配物的pH的例示性化學品是鹽酸(HCl)和氫氧化鈉(NaOH)。

在一些具體實施例中，本發明的調配物具有等於或低於結合劑(如抗體)的等電點(pI)的pH。等電點是特定分子或表面不帶有淨電荷的pH。抗 CXCR5結合劑的pI可以藉由本領域技術人員已知的任何方法來確定。在一些具體實施例中，抗CXCR5抗體的pI由變性等電聚焦來確定。本文涵蓋的完全人IgG4抗體的pI範圍可為約6.9至約9.1。

例如，涵蓋的調配物包括抗CXCR5結合劑和檸檬酸鹽緩衝劑，其中調配物的pH等於或低於約pH 6和結合劑的等電點(pI)。本發明的調配物相對於常規的IgG4結合劑調配物(例如磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)調配物)提供顯著的改進，後者在增加調配物中結合劑濃度時會形成不需要的副產物。特別地，本發明的調配物具有减少的量的聚集體，半分子，降解產物，低分子量蛋白質(LMWP)，高分子量蛋白質(HMWP)以及調配物中的結合劑的酸性、鹼性和中性同種型的重排。

表面活性劑

本發明的調配物可以任選地還包含表面活性劑，其也稱為穩定劑。表面活性劑/穩定劑是在調配物中相互作用並穩定生物分子和/或一般藥物賦形劑的化學化合物。在一些具體實施例中，表面活性劑可以連同較低溫度的儲存一起使用。表面活性劑通常保護結合劑免受空氣/溶液界面誘導的應力和溶液/表面誘導的應力，否則可能導致蛋白質聚集。表面活性劑可以包括但不限於聚山梨醇酯、甘油、二羧酸、草酸、琥珀酸、富馬酸、鄰苯二甲酸及其組合。本領域技術人員知曉，可以使用其它表面活性劑，例如非離子或離子型洗滌劑，只要它們是藥學上可接受的，即適於投予於受試者的。在一些具體實施例中，表面活性劑是聚山梨醇酯。聚山梨醇酯的實例包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65和聚山梨醇酯80。

在示例性具體實施例中，表面活性劑以約0.001%至約0.1%(w/v)的量存在於調配物中。例如，表面活性劑可以以約0.001%(w/v)、約0.002%(w/v)、約0.003%(w/v)、約0.004%(w/v)、約0.005%(w/v)、約0.006% (w/v)、約0.007%(w/v)、約0.008%(w/v)、約0.009%(w/v)、約0.01%(w/v)、約0.02%(w/v)、約0.03%(w/v)、約0.04%(w/v)、約0.05%(w/v)、約0.06%(w/v)、約0.07%(w/v)、約0.08%(w/v)、約0.09%(w/v)、和約0.1%(w/v)的量存在於調配物中。在具體具體實施例中，表面活性劑以約0.003%至約0.05%(w/v)、約0.004%至約0.025%(w/v)、或約0.005%至約0.02%(w/v)，例如約0.005%(w/v)的量存在於調配物中。例如，聚山梨醇酯20可以以約0.001%至約0.1%(w/v)、約0.002%至約0.01%(w/v)、約0.003%至約0.008%(w/v)、和約0.004%至約0.006%(w/v)，例如約0.005%(w/v)的量存在。在可選擇的具體實施例中，聚山梨醇酯20以約0.001%至約0.1%(w/v)、約0.005%至約0.05%(w/v)、和約0.0075%至約0.025%(w/v)，例如約0.01%(w/v)的量存在。在其他可選擇的具體實施例中，聚山梨醇酯20以約0.001%至約0.1%(w/v)、約0.005%至約0.05%(w/v)、和約0.01%至約0.03%(w/v)，例如約0.02%(w/v)的量存在。

張力劑

本發明的調配物可以任選地進一步包含張力劑。通常，張力劑用於調節或維持調配物的重量摩爾滲透壓濃度，以使其更接近體液(例如血液或血漿)的滲透壓。張力劑也可以維持調配物中的結合劑水平。部分地，張力劑有助於保持調配物中存在的治療活性粘合劑的水平、比率或比例。如本文所用，術語「張力」是指生物組分在流體環境或溶液中的行為。等張溶液具有與血漿相同的滲透壓，並且可以靜脈內輸注到受試者中而不改變受試者血漿的滲透壓。實際上，在本發明的一些具體實施例中，張力劑以足以使調配物適合靜脈輸注的量存在。通常，張力劑也用作填充劑或穩定劑。因此，張力劑可以允許結合劑克服各種應力，例如冷凍和剪切。張力劑可以包括但不限於糖類，糖類，甘油，山梨醇，甘露醇，氯化鈉，氯化鉀，氯化鎂和其它無機鹽。本領域技術人員知曉可以使用其它張力劑，只要它們是藥學上可接受的，即適於投予於受試者的。

在一些具體實施例中，張力劑以約0.1%至10%(w/v)的量存在於調配物中。例如，張力劑可以以約0.1%(w/v)、約0.2%(w/v)、約0.3%(w/v)、約0.4%(w/v)、約0.5%(w/v)、約0.6%(w/v)、約0.7%(w/v)、約0.8%(w/v)、約0.9%(w/v)、約1%(w/v)、約2%(w/v)、約3%(w/v)、約4%(w/v)、約4.5%(w/v)、約5%(w/v)、約5.5%(w/v)、約6%(w/v)、約7%(w/v)、約8%(w/v)、約9%(w/v)、和約10%(w/v)的量存在於調配物中。或者，張力劑可以以約2%至約8%(w/v)、約3%至約7%(w/v)、和約4%至約6%(w/v)的量存在於調配物中。在另外的可選擇的具體實施例中，張力劑可以以約0.1%至約1%，約0.1%至約0.5%，約0.1至約0.3%和約0.2%的量存在於調配物中。

在一些示例性具體實施例中，張力劑是糖。糖的實例包括葡萄糖，蔗糖(其也稱為蔗糖)，麥芽糖，海藻糖，右旋糖，木糖醇，果糖和甘露醇。例如，甘露醇可以以約1%至約10%(w/v)，約2%至約8%(w/v)或約3%至約5%(w/v)，例如約4%(w/v)的量存在。或者，蔗糖(其也稱為蔗糖)可以以約1%至約10%(w/v)，約3%至約8%(w/v)或約4%至約6%(w/v)，例如約4.5、5、5.5或6%(w/v)的量存在。

在一些其它的示例性具體實施例中，張力劑是氯化鈉。例如，氯化鈉可以以約0.1%(w/v)、約0.2%(w/v)、約0.3%(w/v)、約0.4%(w/v)、約0.5約0.6%(w/v)、約0.7%(w/v)、約0.8%(w/v)、約0.9%(w/v)和約1%(w/v)的量存在。或者，氯化鈉可以以約0.1%至約1%、約0.1%至約0.5%、約0.1至約0.3%和約0.2%的量存在於調配物中。

在另外的示例性具體實施例中，調配物可以包含一種或多種張力劑。例如，調配物可以包含上述濃度的一種或多種上述張力劑。在一些具體具體實施例中，調配物可以包含蔗糖和氯化鈉，其中蔗糖和氯化鈉濃度各自為約0.1%至約10%(w/v)。在一些具體實施例中，蔗糖濃度約為6%，氯化鈉濃度約為0.2%。或者，蔗糖濃度為約4.5%，氯化鈉濃度為約0.2%。

在本發明的某些具體實施例中，調配物的重量摩爾滲透壓濃度範圍為約200mOsm/kg至約350mOsm/kg，約270mOsm/kg至約330mOsm/kg，約280mOsm/kg至約320mOsm/kg，或約290mOsm/kg至約310mOsm/kg，例如約300mOsm/kg。換言之，一些具體實施例中，本發明的調配物在基本上是等張的，即具有與人血液基本上相同的滲透壓。重量摩爾滲透壓濃度可以藉由本領域技術人員已知的任何方法測量，例如使用蒸汽壓力或冰凍型滲透壓計。本發明調配物的重量摩爾滲透壓濃度可以例如由本文所述的一種或多種張力劑調節。

胺基酸

本發明的調配物任選還可包含胺基酸。胺基酸的實例包括但不限於甘胺酸、丙胺酸、天冬胺酸、賴胺酸、絲胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、穀胺醯胺、甲硫胺酸、精胺酸和脯胺酸。在示例性具體實施例中，胺基酸以約0.1%至5%(w/v)的量存在於調配物中。例如，胺基酸可以以約0.1%(w/v)、約0.2%(w/v)、約0.3%(w/v)、約0.4%(w/v)、約0.5%(w/v)、約0.6%(w/v)、約0.7%(w/v)、約0.8%(w/v)、約0.9%(w/v)、約1.0%(w/v)、約1.1%(w/v)、約1.2%(w/v)、約1.3%(w/v)、約1.4%(w/v)、約1.5%(w/v)、約1.6%(w/v)、約1.7%(w/v)、約1.8%(w/v)、約1.9%(w/v)、約2.0%(w/v)、約3%(w/v)、約4%(w/v)、和約5%(w/v)的量存在於調配物中。或者，胺基酸以約1.3%至約1.8%(w/v)或約1.4%至約1.6%(w/v)，例如約1.5%(w/v)的量存在於調配物中。在另外的可選擇的具體實施例中，胺基酸以約0.5%至約1.5%(w/v)，或約0.8%至約1.2%(w/v)，例如約1.0%(w/v)的量存在於調配物中。示例性的胺基酸是脯胺酸或精胺酸。例如，脯胺酸可以以約1%至約2%(w/v)，約1.3%至約1.8%(w/v)，約1.4%至約 1.6%(w/v)，例如約1.5%(w/v)的量存在於調配物中。或者，精胺酸可以以約0.5%至約1.5%(w/v)或約0.8%至約1.2%(w/v)，例如約1.0%(w/v)的量存在於調配物中。

其他賦形劑

此外，本發明的調配物可以包含其它賦形劑，包括但不限於注射用水、稀釋劑、增溶劑、舒緩劑、額外的緩衝劑、無機或有機鹽、抗氧化劑等。然而，在一些具體實施例中，除了上述那些之外，本發明的調配物不包括其它賦形劑。其它藥學上可接受的載劑、賦形劑或穩定劑，例如Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.Ed.(1980)中所述的那些可以包括在調配物中，條件是它們不會不利地影響調配物的期望特徵。在一個具體具體實施例中，調配物基本上不含防腐劑，但是在可選擇的具體實施例中，可根據需要加入防腐劑。例如，凍乾調配物中可以包括冷凍保護劑或凍乾保護劑。

液體或凍乾調配物

本發明的調配物可以是液體調配物或凍乾調配物。在一些具體實施例中，液體配方可即用於注射，也可以在注射前加以稀釋。或者，調配物可以是凍乾粉末。在一些具體實施例中，凍乾粉末準備與多種溶劑體積中的一種組合以恰好在投予之前達到期望的濃度。

示例性的調配物

在本發明的一個具體實施例中，本發明提供了適用於皮下投予的穩定液體抗體調配物，該調配物包含：a)大於約100mg/mL，例如約100至約175mg/mL的完全人抗CXCR5抗體，其包含含有SEQ ID NO：33的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：32的胺基酸序列的輕鏈；b)約10mM檸檬酸鹽緩衝劑； c)約0.1%(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；和d)約200mM精胺酸；e)約4.5-9%蔗糖，其中所述調配物的pH是約pH 6.0。

在本發明的一個具體實施例中，本發明提供了穩定的抗體調配物，其包含：a)約150至約175mg/mL的人源化IgG4抗CXCR5抗體，其包含含有SEQ ID NO：33的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：32的胺基酸序列的輕鏈；b)約10mM檸檬酸鹽緩衝劑；c)約0.1%(w/v)聚山梨醇酯80；和d)約200mM精胺酸；e)約4.5%蔗糖，其中所述調配物的pH是約pH 6.0。

在本發明的一個具體具體實施例中，本發明提供了穩定的抗體調配物，其包含：a)175mg/mL的人源化IgG4抗CXCR5抗體，其包含含有SEQ ID NO：33的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：32的胺基酸序列的輕鏈；b)約10mM檸檬酸鹽緩衝劑；c)約0.1%聚山梨醇酯80；和d)約200mM精胺酸；e)約4.5%蔗糖，其中所述調配物的pH是約pH 6.0。

穩定性

涵蓋的調配物在5℃穩定至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11或12個月或更長，通常至少約12、18或24個月或更長。在示例性具體實施例中，它們在5℃穩定至少約6個月或更長時間。在其它示例性具體實施例中，它們在5℃穩定至少約9個月。在進一步的示例性具體實施例中，它們在5℃穩定至少約1年或更長，並且通常大於約2年或大於約4年。

投予模式

在本發明的一些具體實施例中，所述調配物適合於胃腸外，靜脈內，肌內，皮內，皮下或其組合的投予。本發明的調配物適合於藉由各種技術的遞送。

劑量和劑型

本發明調配物的有效劑量取决於許多不同的因素而變化，包括投予手段，靶位點，受試者的生理狀態，受試者是人類還是動物，投予的其他藥物，以及治療是預防性還是治療性的。通常，受試者是人，但也可以治療非人哺乳動物包括轉基因哺乳動物。治療劑量可能需要滴定以優化安全性和功效。

本發明的調配物可以多次投予。單次投予之間的間隔可以是每日，每周，每兩周，每月或每年。間隔也可以是不規則的。在一些方法中，調節劑量以實現某種血漿結合劑例如抗體濃度。劑量和頻率將根據受試者中抗CXCR5結合劑(例如抗體)的半衰期而變化。通常，人類抗體顯示最長的半衰期，然後是人源化抗體、嵌合抗體和非人類抗體。

在進一步的具體實施例中，本發明提供了包含治療有效量的本發明調配物的藥物單位劑型，其用於藉由向受試者投予劑型來治療受試者中的一種或多種疾病。在一些具體實施例中，所述受試者是人。人可以是成年人或可以是嬰兒。術語「藥物單位劑型」是指適於作為待治療受試者的統一單位劑量的物理上離散的單位，每個單位含有預定量的活性化合物，其經計算與所需檸檬酸鹽緩衝液和pH相結合產生所期望的治療/預防效果。

單位劑型可為包含調配物的容器。合適的容器包括但不限於密封的安瓿、小瓶、瓶、注射器和試管。容器可由各種材料(例如玻璃或塑料)形成，並且可以具有無菌進入口(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿的塞子的小瓶)。在一些具體實施例中，容器是小瓶。通常，容器應保持調配物的無菌性和穩定性。

在具體具體實施例中，將調配物包裝在由透明、無色I型玻璃製成的4mL小瓶(2R ISO小瓶)中，並用帶有法蘭(聚丙烯)的翻轉蓋(flip-of cap)封閉的塞子(含氟聚合物塗覆的溴丁基)封閉。在一些具體實施例中，將小瓶裝有1.7mL調配物，使得小瓶具有每小瓶約0.2mL的過量體積，以及1.5mL的可提取體積。例如，這意味著抗體的劑量强度(例如175mg/mL)會包含在1.5mL溶液中。

在一個具體具體實施例中，將調配物二次包裝在保護小瓶不受光照的容器(例如紙板盒)中。

套組

本發明的一些具體實施例包括包含本發明調配物的套組。套組還可以包含一個或多個包含藥學上可接受的賦形劑的容器，並且包括來自市場和用戶的觀點所需的其它材料(包括過濾器/針和注射器)。與套組相關聯的可以是通常包括在治療、預防或診斷產品的商業包裝中的說明書，其包含關於例如關於使用這種治療、預防或診斷產品的適應症，用法、劑量、製造、投予、禁忌症和/或警告的信息。該套組還可與標簽相關聯，所述標簽可以是包含信息的任何種類的數據載劑(例如傳單、貼紙、晶片、印刷品或條碼)。在一些具體實施例中，上述指示等可包含在標簽中或標簽上。該套組可進一步包括用於投予調配物的裝置，特別是包含調配物的裝置，即預填充裝置，如但不限於預填充的注射器或預填充的自動注射器。套組還可包含容器，所述容器包含調配物，即預填充的容器，如預填充的小瓶、藥筒(cartouche)、小袋(sachet)或安瓿。

不同具體實施例的組合

在本發明的上下文中，除非另有明確說明，否則本文描述的具體實施例中的任一個可以與一個或多個本文描述的實施例組合。具體而言，本文所述的任何一種結合劑和抗體及其本文所述的調配物可以與任何套組、預填充的裝置或預填充的容器組合使用，或可用於治療方法或醫藥用途，如本文所述與各抗體相關的(例如包含抗CXCR5抗體的穩定調配物可與本文所述的任何一種套組、容器或裝置組合)。任何本文所述的特異性結合抗原的結合劑(例如特異性結合CXCR5的結合劑)也可用於如本文所述與各抗體(即抗CXCR5)相關的治療方法，反之亦然。

實施例

以下實施例闡述了本發明的具體具體實施例。它們僅用於說明目的，而不應視為限制本發明。

實施例1：星塵顆粒形成的分析

A)導言

由Sanofi命名為SAR113244的藥物產品(DP)是選擇性結合人CXCR5的人源化IgG單株抗體(mAb)，並公開在U.S.8,647,622中。它是為胃腸外皮下投予而開發的，作為用於以100mg/mL的濃度注射的溶液。注射用DP溶液包裝在2mL透明無色小瓶(I型玻璃)中，用塞子(含氟聚合物塗覆的溴丁基橡膠)和具有法蘭(鋁)的翻轉蓋(flip-off cap)(聚丙烯)封閉。

SAR113244單株抗體的調配物開發最終得到了用於I期臨床研究的調配物，其含有10mg/mL的精胺酸，2mg/mL的NaCl，0.01%的聚山梨醇酯20和10mM的檸檬酸鹽緩衝液，並具有6的pH(以下稱為「DP溶液」)。該化合物在化學穩定性和亞可見顆粒方面是穩定的。然而，大約一年之後，當將調配物儲存在玻璃主要包裝材料(例如小瓶或預填充的注射器)中時，發生可見顆粒的形成。當主要包裝材料是塑料(袋或瓶)時，不會發生可見顆粒的形成。

在針對階段1臨床研究計劃的相容性研究期間，存儲在2 R ISO玻璃小瓶(Schott，Elmsford，NY)中的DP溶液中發現了可見顆粒。顆粒非常小，有光澤，懸浮，因此稱為「星塵顆粒」。星塵顆粒的發現導致研究停止，並將DP溶液批次進行檢疫(quarantine)。實施了立即行動計劃，並對在綫過濾方案進行了調查並應用於臨床研究。這在修改文本中進行了總結，所述修改文本由衛生部門批准而無任何意見，研究可以重新啟動。然而，對於進一步的臨床研究，期望開發出沒有星塵顆粒的調配物。在此，我們描述了一種製備不含星塵顆粒的含SAR113244的高度濃縮調配物的方法。

星塵顆粒不存在於存儲在袋中或存儲在Nalgene®瓶中的DP溶液中。在製造過程後直接存儲在玻璃小瓶中的DP溶液中也不存在星塵顆粒。據信玻璃小瓶中的星塵顆粒大約在儲存一年後發生。檢查了使用相同的設備、使用相同的填充綫、使用相同的塞子、填充於相同種類的小瓶的其他產品(例如蛋白治療劑)的顆粒，並且從未發生任何星塵顆粒。

使用Microflow®成像或DP溶液中的透光度進行的亞可視粒子的測量始終處於接受範圍，而不管星塵顆粒是否存在。在穩定性研究中在製造後直接得到的樣品和長期存儲時間

1年的樣品的亞可見顆粒中未檢測到差異。為了去除星塵顆粒，隨後開發了一種新的、無星塵的調配物，用於II期臨床試驗。最終，該調配物顯示在加速條件(40℃)下出在玻璃容器中穩定6個月，在2-8℃穩定12個月。

B)方法

DP溶液的目測：在完成DP批次之後，直接由受過訓練的人員進行DP 溶液的目測。藉由如下來測試小瓶：倒置小瓶一次或兩次，隨後觀察小瓶5至15秒(實驗室1：Liquid Inspection Viewer Apollo II；實驗室2：Black Box(黑盒子))或觀察無倒置的旋轉小瓶(實驗室3：帶放大鏡的Seidenader小瓶檢驗機)。光源為2000-3750Lux。

DP溶液容器中的玻璃分層：分析四個不同批次的玻璃分層(3個臨床批次，一個技術批次)。為此，測試每批10mL的DP溶液，以確定滲入溶液中的玻璃元素(即Si，B，Ca和Al)的量。本研究使用了四組容器：SCHOTT I型加(塗覆SiO₂的小瓶)，SCHOTT標準Fiolax，SCHOTT DC(分層控制)和BD預填充的注射器。將不同溶液儲存在60℃，並在三個不同的時間點(1、4和12周後)進行分析。對於「片狀(flake-like)」和/或「非片狀」顆粒的存在，藉由眼腈和放大攝像機進行目測。在每個時間點測試了十個容器。此外，使用具有擴展的焦點深度的立體顯微鏡對每個對照樣品組的5個空容器進行了光學檢查，以定性地確定是否有存在於容器內表面上的玻璃腐蝕或反應區的任何迹象。另外，藉由具有擴展的焦點深度的立體顯微鏡分析了每個樣品組的10個空的容器和抽出點(pull point)，以確定是否有存在於容器內表面上的玻璃腐蝕或反應區的任何迹象。在每組每個抽出點處的兩個「最差」容器的內表面上，進行SEM橫截面分析。總計，對每個樣品組的每個抽出點處從容器彙集的10mL的安慰劑溶液(含有10mM檸檬酸鹽緩衝液，2g/L NaCl，10g/L精胺酸-HCl，45g/L蔗糖(4.5%)和0.01%聚山梨醇酯20)進行了分析，以定量確定滲入溶液中的玻璃元素的量。

機械穩定性研究：為了確定機械應力是否有助於DP溶液中星塵顆粒的形成，進行了機械應力研究。在製造過程中，將DP溶液添加至混合容器中並加入賦形劑。將體積為10mL的8種不同調配物(參見下表1，每種組合物基於檸檬酸鹽緩衝液)在200rpm攪拌30分鐘或2小時。混合賦形劑後，檢查溶液中是否存在可見顆粒。然後將溶液過濾並裝入2R玻璃小瓶中。隨後進行目測，溶液在40℃儲存4周，每周檢查。

DP-藥物產品(SAR113244)

RapID研究(過濾，拉曼(Raman)和FT-IR)：在本研究過程中，分析了5個DP溶液樣品。首先對封閉容器中的DP溶液進行目測。將每個樣品的溶液在具有直徑為4mm的活動區域的單獨的金塗覆的聚碳酸酯濾膜(孔徑0.8μm)上過濾。將空的小瓶用2×2mL無顆粒水沖洗，並用1×2mL無顆粒水沖洗塞子。為了確保將所有顆粒轉移到過濾器中，過濾設備內的漏斗用8mL無顆粒水沖洗。藉由視頻顯微鏡拍攝觀察到的顆粒的照片。應用不同的光譜方法進一步分析一部分最大的顆粒(>50μm)。藉由使用由rap.ID顆粒Systems GmbH製造的單顆粒探測器(Single Particle Explorer,SPE)的圖像分析手動進行拉曼光譜研究。該裝置以532nm的激光波長運行。對於FT-IR和/或ATR光譜，使用由Bruker製造的FT-IR光譜儀LUMOS(序列號190)。藉由由Bruker製造的掃描電子顯微鏡SEM-EDX(TM 3000)進一步研究分析的顆粒之一。

過濾-顯微術：使用孔徑為0.45μm的硝酸纖維素濾器從每批5瓶中分離顆粒。藉由光學顯微術分析所獲得的顆粒。藉由紅外光譜術使用IR顯微鏡Hyperion 2000以15倍放大倍率進一步表徵顆粒。

亞可見顆粒的測量：

1.光學粒子計數器：使用光學粒子計數器(HIAC，Hach)來測量蛋白質調配物中的亞可見顆粒的量。如藥典(USP,Ph.Eur.)所要求的，研究了大於10μm和25μm的顆粒。藉由光電檢測器進行了顆粒的檢測，該光電檢測器檢測由視體積中的顆粒引起的照明的光學干擾。

2.流式成像顯微術：流式成像顯微術(微流式成像(MFI)，蛋白樣品))用於測量蛋白質調配物中的亞可見顆粒的量。如藥典(USP,Ph.Eur.)所要求的，研究了大於10μm和25μm的顆粒。藉由數碼相機檢測顆粒。

3.SEC：使用大小排阻色譜(SEC)測量納米尺寸範圍內的可溶性聚集體的相對量。此外，報道了單體的純度或相對量。

4.DLS：使用動態光散射(DLS)(Zetasizer Nano-ZS，Malvern)測量納米尺寸範圍內的聚集體和顆粒的存在。測量流體動力學直徑和多分散性。

C)結果與討論：

過濾實驗：

要理解星塵顆粒現象，我們嘗試了從SAR113244藥物產品(DP溶液)分離顆粒。懸浮液中顆粒的分離可以藉由過濾或藉由用移液器或抹刀(spatula)嘗試取出顆粒來實現。然而，星塵顆粒的表徵是非常具有挑戰性的，因為它們無法被分離。在纖維素濾器上的過濾不分離星塵顆粒(參見表2和圖1-3)。雖然過濾三個安慰劑溶液不導致過濾器上的任何顆粒，但來自Nalgene瓶的DP溶液顯示出顯著量的閃光顆粒(圖4和5)。儘管濾器上的顆粒的絕對數量看起來低於「星塵」影響的樣品，但外形和尺寸與之前分離的顆粒沒有顯著差異。因此，真空過濾以分離「星塵」顆粒的方法的有效性必須受到質疑，因為來自Nalgene瓶的DP溶液沒有顯示任何星塵顆粒。SAR113244的藥物物質也在濾器上顯示出顆粒(圖6)，即使藥物物質是無星

塵顆粒的：藥物物質存儲在塑料袋中僅在檸檬酸鹽緩衝液(來自第1階段過程的舊藥物物質)中，且當進行目測時不顯示顆粒，但在過濾後，可在濾器上看到顆粒。

來自不同的基於蛋白質的治療劑(SAR252067和SAR341403)的樣品再次顯示出濾器上顆粒的存在(圖7-12)，儘管溶液已經澄清(無星塵顆粒)。這些發現顯示，高度濃縮的抗體溶液的真空過濾具有溶液成分沉澱在濾器上的風險，並使得鑒定溶液中存在的可能的亞可見或可見顆粒成為不可能的。

藉由DLS測量：

藉由動態光散射測量的蛋白質聚集體的測量結果確實顯示DP溶液儲存於塑料瓶沒有星塵顆粒(圖13)，具有比儲存在玻璃小瓶中的含星塵的DP溶液更低的多分散指數(圖14)。這可為SAR113244分子中的構象變化可能是星塵顆粒形成的潜在原因的指示。除了目測之外，這個結果指示玻璃容器在星塵形成中具有作用。

分層研究：

星塵顆粒形成的一個可能的原因是由玻璃小瓶發生的分層。因此，進行了分層研究。用含有10mM檸檬酸鹽緩衝液，2g/L NaCl，10g/L精胺酸-HCl，45g/L(4.5%)蔗糖和0.01%聚山梨醇酯20的安慰劑溶液進行分層研究。將安慰劑溶液儲存在表3中概述的不同種類的玻璃小瓶中。

在加速條件(60℃)下在1、4或12周後沒有發現分層(參見表4A和4B)。

表4A.

表4B. 玻璃腐蝕(玻璃侵蝕)和分層的概述

^a確認的分層：鋒利邊緣或分層區域(SEM)；^b早期指標：內表面的反應區(SEM)，藉由目測觀察到的著色不小於「弱」(SM)，Si/B濃度比率低於或等於5且Si濃度(ICP)高於10mg/mL(1mL多至2mL填充體積)；^d其他：淺坑，淺丘，小孔，沉積物(SEM)，目測觀察到的弱到中等散射(SM)，局部反應區(水平尺寸低於20μM)(SEM)。

然而，在長期儲存(12周，60℃)在溶液中檢測到玻璃組分(Al，Si，B，Ca)的濃度增加(參見表5)。

表5. 在加速條件下溶解的玻璃元素的濃度(ICP分析)

基於這些觀察結果，很可能的是玻璃組分(Al，Si，B，Ca)引發顆粒形成，因為當比較Nalgene®瓶中的調配物相比小瓶中的mAb調配物時，這是觀察到的僅有的差異。安慰劑研究顯示沒有分層，但是某些成分的瀝取，也可以用於具有蛋白質的DP溶液。而且，這項研究確定了星塵顆粒不在沒有蛋白質的情況下發生。

RapID-研究：這項研究的目的是確定星塵顆粒由何組成。以前的過濾研究不成功，是因為不可能在濾器上分離顆粒。RapID提供了具有金濾器的解決方案。在此，將DP溶液在金濾器上過濾，然後使用FT-IR(圖15)和拉曼光譜術(圖16)進行分析。結果顯示，在5個小瓶中的3個中檢測到蛋白質顆粒。在其他小瓶中，已經檢測到聚乙烯(圖17和18)。包含聚乙烯的樣品最可能還含有作為典型吸收峰的蛋白質，因為3000cm^-1以上的蛋白也見於FT-IR分析中(圖17)。必須說明樣品很舊(4年-保質期=3年)。因此，需要對剛剛檢測到星塵顆粒的樣品進行其他研究。然而，據信蛋白質聚集至少部分地是星塵顆粒調配物的成因。因此，經設計以避免蛋白質聚集的新抗體調配物被認為能够避免星塵顆粒調配物。

此外，雖然在特定的抗CXCR5抗體之方面發現和描述了星塵顆粒，但據信其他抗體可能表現出類似的儲存問題，並因此能够潜在地從本文所述的所提出的抗體調配物中受益。

實施例2：無星塵顆粒調配物的開發

a)導言：

為了避免星塵顆粒的形成，必須開發新的調配物。在此過程中，化學穩定性和亞可見顆粒的不存在同樣重要。

B)方法與結果：

為了獲得不容易在長時間內聚集的穩固調配物，對各種實驗樣品進行機械應力研究。使用磁力攪拌器對樣品施加應力，並在加速條件下在過濾和儲存後測試樣品關於星塵顆粒的形成(目測)。藉由機械應力研究，可顯示增加濃度的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80减少抗體調配物中的顆粒的量。基於這些結果進行了穩定性研究，其中在玻璃小瓶和預填充的注射器中測試高達175mg/mL的高度濃縮的SAR113244調配物。當聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80濃度為0.1%時，對於任何SAR113244濃度都沒有觀察到星塵顆粒。即使在加速條件下(6個月，40℃)，不存在可見顆粒。因此，含有100-175mg/mL的高度濃縮的調配物具有穩定性，而不形成星塵顆粒。當調配物含有約100-175mg/mL SAR113244，約200mM精胺酸，約4.5-9%蔗糖，約0.1%聚山梨醇酯20或約0.1%聚山梨醇酯80和約10mM檸檬酸鹽緩衝液時，實現了化學穩定性。

機械應力研究：首先將藥物(SAR113244)添加至混合容器中隨後加入賦形劑(見上表1)，來製備實驗調配物。混合賦形劑後，將溶液過濾並添加至玻璃小瓶中。最後，目測檢查最終配方。

如上所述對小瓶進行機械應力研究。結果示於圖19和圖20中。藉由機械應力研究，顯示在儲存過程中即使在過濾後也有顆粒形成。然而，藉由增加聚山梨醇酯濃度可减少甚至終止此可見顆粒形成過程。基於這些結果，推測可藉由增加聚山梨醇酯濃度來得到無星塵顆粒調配物。而且，可以使用聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80來得到無星塵顆粒調配物。

穩定性研究：在含蛋白質的藥物調配物中納入表面活性劑是衆所周知的，常見的表面活性劑是聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80。胺基酸如精胺酸和甲硫胺酸用作穩定劑也是已知的。然而，本發明人觀察到，對於SAR113244抗體，僅當主要包裝材料由玻璃組成時，儲存(12個月)後才發生顆粒形成。為了鑒定SAR113244的穩定調配物，製備了抗體的藥物相關調配物，其聚山梨醇酯的濃度高於0.01%，胺基酸的濃度高於50mM(參見下表6)。將這些調配物儲存在玻璃小瓶或玻璃注射器中，並在加速條件(40℃)下進行穩定性研究，並測量顆粒形成(參見表7)。

穩定性研究的結果顯示，即使聚山梨醇酯含量為0.01%，大量的精胺酸(200mM)也能產生穩定6個月的、無星塵顆粒的調配物。理想的是得到甚至更高濃度的單株抗體並且得到長時間穩定的調配物。較早的結果顯示，調配物中高濃度的精胺酸(表5)和大量的聚山梨醇酯(圖19和20)是有益的。考慮了這些觀察結果，並且使用大量的精胺酸和聚山梨醇酯進行了新的穩定性研究。

將表6的樣品在2R ISO小瓶中於不同溫度(5℃，25℃，40℃和-20℃)儲存2周(T0.5)，1個月(T1)，3個月(T3)和6個月(T6)，以使用實施例1中所述的方法確定其穩定性。還在第0天(T0)測量了對照組樣品。結果示於表7。

在隨後的測試中，製備基於具有甚至更高單株抗體濃度的調配物124D的新調配物，並如上所述測試其穩定性。此外，由於與表5相關的結果，還測試了增加的聚山梨醇酯濃度。新調配物描述在下表8中，其中調配物A和B儲存在2R ISO小瓶中，調配物C和D儲存在預填充的注射器(1mL Hypak BD)中。

測試表8的調配物的穩定性，結果示於表9中。

基於穩定性研究的結果，顯示得到了高抗體濃度的調配物，無星塵顆粒的製備物。實際上，多至175mg/mL的抗體濃度在加速條件(40℃)下6個月是穩定的(參見例如調配物B)。當使用預填充的注射器作為主要包裝材料時檢測到的顆粒的量與2R ISO小瓶相比略有升高，但仍然遠低於監管部門的接受標準。用具有如此高濃度的易於聚集的蛋白質的實驗調配物在測試的加速條件下(40℃，6個月)實現幾乎沒有亞可見顆粒，是絕對預料不到的並且是建立高度穩定的高濃度抗體調配物方面的巨大突破。實際上，這種高抗體濃度調配物可允許使用自動注射器來投予抗體調配物。此外，這種抗體調配物對於以高濃度在玻璃容器中儲存延長的時間的抗體能達到甚至更長的保質期。

已經詳細並藉由參考其具體實施例描述了本發明，顯而易見的是，在不背離所附申請專利範圍限定的本發明的範圍的情況下，可進行修改和變化。更具體而言，儘管本發明的一些方面在本文中被認為是特別有利的，但是預期本發明不一定限制於本發明的這些具體方面。在可供選擇的具體實施例中，本文公開的百分比可從本文公開的值變化±10，20或30%的量。

<110> 美商賽諾菲公司SANOFI

<120> 抗體調配物ANTIBODY FORMULATIONS

<130> US2016/011 US PCT；15-2048-WO

<150> US 62/358,404

<151> 2016-07-05

<150> EP 16306090.8

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<160> 69

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

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<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> 人工序列描述：合成引物

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<221> misc_feature

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<223> n是a,c,g，或t

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<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 34

<210> 35

<211> 238

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 35

<210> 36

<211> 731

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多核苷酸

<400> 36

<210> 37

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 37

<210> 38

<211> 1385

<212> DNA

<213> 人工序列

<223> 人工序列描述：合成多核苷酸

<220>

<400> 38

<210> 39

<211> 238

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 39

<210> 40

<211> 731

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 40

<210> 41

<211> 238

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 41

<210> 42

<211> 731

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多核苷酸

<400> 42

<210> 43

<211> 238

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 43

<210> 44

<211> 731

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多核苷酸

<400> 44

<210> 45

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 45

<210> 46

<211> 1385

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多核苷酸

<400> 46

<210> 47

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 47

<210> 48

<211> 1385

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多核苷酸

<400> 48

<210> 49

<211> 5

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 49

<210> 50

<211> 5

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 50

<210> 51

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成的6x His標簽

<400> 51

<210> 52

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成肽

<400> 52

<210> 53

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成肽

<400> 53

<210> 54

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成肽

<400> 54

<210> 55

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 55

<210> 56

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 56

<210> 57

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述：合成多肽

<400> 57

<210> 58

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 58

<210> 59

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 59

<210> 60

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 60

<210> 61

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 61

<210> 62

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 62

<210> 63

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 63

<210> 64

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 64

<210> 65

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 65

<210> 66

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 66

<210> 67

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 67

<210> 68

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 68

<210> 69

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 69

Claims

一種適於對患者皮下投予的抗體調配物，該調配物包含：a)約100至約175mg/mL的抗體；b)約10mM檸檬酸鹽緩衝劑；c)約0.1%(w/v)表面活性劑；d)約200mM精胺酸；和e)約4.5至9%蔗糖，其中所述調配物的pH是約pH 6，其中所述抗體是完全人抗CXCR5抗體，且其中所述抗體包含含SEQ ID NO：33的胺基酸序列之重鏈及含SEQ ID NO：32的胺基酸序列之輕鏈。
如請求項1的抗體調配物，其中所述抗體包含單鏈Fv。
如請求項1的抗體調配物，其中所述抗體是特異性結合至人類CXCR5的胞外結構域的分離抗體或其片段。
如請求項3的抗體調配物，其中所述分離抗體或其片段包含RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO：58)、RLSSLA(SEQ ID NO：68)、MQHLEYPYT(SEQ ID NO：60)、GFSLIDYGVN(SEQ ID NO：61)、VIWGDGTTY(SEQ ID NO：62)和IVY(SEQ ID NO：63)的胺基酸序列。
如請求項1的抗體調配物，其中所述表面活性劑是聚山梨醇酯。
如請求項1的抗體調配物，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
一種抗體調配物，其包含：a)約175mg/mL的人源化IgG4抗CXCR5抗體；b)約10mM檸檬酸鹽緩衝劑；c)約1.0mg/mL聚山梨醇酯80； d)約200mM精胺酸HCl；和e)約45mg/mL蔗糖，其中所述調配物的pH是約pH 6，且其中所述人源化IgG4抗CXCR5抗體包含含SEQ ID NO：33的胺基酸序列之重鏈及含SEQ ID NO：32的胺基酸序列之輕鏈。
一種容器，其包含如請求項1-7中任一項的抗體調配物。
如請求項8的容器，其中所述容器是預填的注射器、小瓶或自動注射器。
一種容器，其包含呈凍乾形式的如請求項1-7中任一項的抗體調配物。
一種套組，其包含如請求項8、9或10中任一項的容器和用於投予和使用所述抗體調配物的標簽或說明。
如請求項11的套組，其中所述投予藉由注射進行。
如請求項1-7中任一項的抗體調配物，其用於治療或診斷人或動物體的方法中。
一種如請求項1-7中任一項的抗體調配物用於製備治療類風濕性關節炎之藥物之用途。
一種如請求項1-7中任一項的抗體調配物的凍乾形式。