KR102413634B1

KR102413634B1 - 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법

Info

Publication number: KR102413634B1
Application number: KR1020220004029A
Authority: KR
Inventors: 남상인; 김청룡; 김제욱; 정재우
Original assignee: 인코스(주)
Priority date: 2022-01-11
Filing date: 2022-01-11
Publication date: 2022-06-29

Abstract

본 발명은 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 십자화과 채소 각각의 추출물을 제조하는 십자화과채소추출물제조단계, 상기 십자화과채소추출물제조단계를 통해 제조된 각각의 추출물을 여과하는 여과단계, 상기 여과단계를 통해 여과된 각각의 추출물을 감압농축하는 감압농축단계 및 상기 갑압농축단계를 통해 각각 농축된 추출물을 혼합하는 추출물혼합단계로 이루어진다.
상기의 과정을 통해 제조되는 화장료 조성물은 자외선에 의해 손상된 피부의 보호 및 재생, 항염증 및 항산화 효과가 우수하다.

Description

십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법 {MANUFACTURING METHOD OF COSMETIC COMPOSITION FOR PREVENTING SKIN DAMAGE USING CRUCIFEROUS VEGETABLES}

본 발명은 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 자외선에 의해 손상된 피부의 보호 및 재생, 항염증 및 항산화 효과가 우수한 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

십자화과 식물은 베타카로틴(β-carotene)이나 루틴(rutin)과 같은 페놀화합물(phenolic compounds)과 섬유소 및 각종 비타민 류를 풍부하게 함유하고 있다.

대표적인 성분인 설포라판(Sulforaphane, 4-methylsulfinybutyl isothiocyanate, SFN)은 브로콜리에서 함량이 높고 특히 발아 후 2 내지 3일이 경과한 브로콜리의 싹에 가장 많이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.

또한, 설포라판은 유기 황 화합물인 아이소싸이오사이아네이트(isothiocynate, ITC) 그룹 내의 화합물로 식물을 통해 섭취했을 때 활성산소 생성을 억제하는 항산화 효과를 나타내 활성산소에 의해 손상을 억제하는 것으로 알려져 있어 건강보조 식품으로 많이 응용되고 있다.

또한, 설포라판은 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)균 억제, UV로부터의 피부보호 뿐만 아니라 항암, 항산화, 항균, 고혈압 예방, 심혈관 질환 예방 및 해독효소 유도 등과 같은 매우 다양한 효능 및 효과를 가지고 있는 기능성 물질이다.

또한, 설포라판의 기능은 암의 발생과 DNA의 손상을 차단시켜, 산화스트레스와 연관된 염증발생에 관여하는 유전자를 통제하기 때문에, 노화 예방과 다양한 생활 습관성 질환의 예방에도 큰 효과를 나타낸다.

이에, 본 발명자들은, 십자화과 식물의 추출물 또는 발효물을 개발하였으며, 상기의 추출물 또는 발효물을 화장료 조성물로 적용하였을 때, 자외선으로 인한 피부손상 방지, 항염증 및 항산화 효능이 현저히 우수함을 확인하여, 본 발명을 완성하게 되었다.

한국특허등록 제10-1155180호(2012.06.04.) 한국특허등록 제10-1825683호(2018.01.30.)

본 발명의 목적은 자외선에 의해 손상된 피부의 보호 및 재생, 항염증 및 항산화 효과가 우수한 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명의 목적은 십자화과 채소 각각의 추출물을 제조하는 십자화과채소추출물제조단계, 상기 십자화과채소추출물제조단계를 통해 제조된 각각의 추출물을 여과하는 여과단계, 상기 여과단계를 통해 여과된 각각의 추출물을 감압농축하는 감압농축단계 및 상기 갑압농축단계를 통해 각각 농축된 추출물을 혼합하는 추출물혼합단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 제공함에 의해 달성된다.

본 발명의 바람직한 특징에 따르면, 상기 추출물혼합단계 이후에는 상기 추출물혼합단계를 통해 제조된 혼합물에 산을 생성하는 유산균을 접종하고 발효하는 발효단계가 더 진행되며, 상기 발효단계는 35 내지 37℃의 온도와 150 내지 250rpm의 교반속도로 24 내지 72시간 동안 이루어지는 것으로 한다.

본 발명의 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 산을 생성하는 유산균은 Lactobacillus 속, Leuconostoc 속, Bifidobacteria 속으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것으로 한다.

본 발명의 더욱 바람직한 특징에 따르면, 상기 십자화과 채소는 겨자, 무, 무순, 무청, 물냉이, 방울양배추, 배추, 배추싹, 브로콜리, 브로콜리새싹, 비트, 순무, 양배추, 유채싹, 자색양배추, 적무싹, 청경채, 케일, 콜라비, 콜라비싹 및 콜리플라워로 이루어진 그룹에서 선택된 하나로 이루어지는 것으로 한다.

본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 십자화과채소추출물제조단계는 십자화과 채소를 질량농도가 65 내지 75%인 알코올에 2 내지 4시간 동안 침지하여 이루어지는 것으로 한다.

본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 여과단계는 상기 십자화과채소추출물제조단계를 통해 제조된 각각의 추출물을 4 내지 400 메시의 스테인리스 필터로 여과하여 이루어지는 것으로 한다.

본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 감압농축단계는 회전 감압 증발기를 이용하여 이루어지는 것으로 한다.

본 발명에 따른 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법은 자외선에 의해 손상된 피부의 보호 및 재생, 항염증 및 항산화 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 탁월한 효과를 나타낸다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 나타낸 순서도이다.
도 1은 본 발명의 다른 실시예에 따른 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 나타낸 순서도이다.
도 3는 본 발명의 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 항산화 효능을 평가하여 나타낸 그래프이다.
도 4은 본 발명의 상기 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 항염증 효능을 평가하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 UVB 손상에 대한 섬유아세포의 재생효과를 측정하여 나타낸 그래프이다.

이하에는, 본 발명의 바람직한 실시예와 각 성분의 물성을 상세하게 설명하되, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 발명을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세하게 설명하기 위한 것이지, 이로 인해 본 발명의 기술적인 사상 및 범주가 한정되는 것을 의미하지는 않는다.

본 발명에 따른 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법은 십자화과 채소 각각의 추출물을 제조하는 십자화과채소추출물제조단계(S101), 상기 십자화과채소추출물제조단계(S101)를 통해 제조된 각각의 추출물을 여과하는 여과단계(S103), 상기 여과단계(S103)를 통해 여과된 각각의 추출물을 감압농축하는 감압농축단계(S105) 및 상기 갑압농축단계(S105)를 통해 각각 농축된 추출물을 혼합하는 추출물혼합단계(S107)로 이루어진다.

상기 십자화과채소추출물제조단계(S101)는 십자화과 채소 각각의 추출물을 제조하는 단계로, 십자화과 채소를 질량농도가 65 내지 75%인 75 내지 85℃의 알코올에 2 내지 4시간 동안 침지하여 이루어지는데, 십자화과 채소 100 중량부 대비 알코올 1500 내지 2500 중량부를 사용하는 것이 바람직하며, 상기 알코올은 에탄올로 이루어지는 것이 더욱 바람직하다.

이때, 상기 십자화과 채소는 겨자, 무, 무순, 무청, 물냉이, 방울양배추, 배추, 배추싹, 브로콜리, 브로콜리새싹, 비트, 순무, 양배추, 유채싹, 자색양배추, 적무싹, 청경채, 케일, 콜라비, 콜라비싹 및 콜리플라워로 이루어진 그룹에서 선택된 하나를 각각 사용하는 것이 바람직하다.

상기 여과단계는(S103) 상기 십자화과채소추출물제조단계(S101)를 통해 제조된 각각의 추출물을 여과하는 단계로, 상기 십자화과채소추출물제조단계(S101)를 통해 제조된 각각의 추출물을 4 내지 400 메시의 스테인리스 필터로 각각 여과하여 이루어진다.

상기의 과정으로 진행되는 여과단계를 거치게 되면, 각각의 추출물에 함유된 이물질이나 고형분이 제거된다.

상기 감압농축단계(S105)는 상기 여과단계(S103)를 통해 여과된 각각의 추출물을 감압농축하는 단계로, 상기 여과단계(S103)를 통해 여과된 각각의 추출물을 회전 감압 증발기(rotary evaporator)에 투입하고 10 내지 300Torr의 압력으로 감압한 상태에서 증발과정을 진행하여 농축하는 단계다.

상기의 과정으로 진행되는 감압농축과정을 통해 추출물에 함유된 용매성분인 알코올이 제거된다.

상기 추출물혼합단계(S107)는 상기 갑압농축단계(S105)를 통해 각각 농축된 추출물을 혼합하는 단계로, 상기 갑압농축단계(S105)를 통해 농축된 각각의 추출물을 동일한 비율로 혼합하여 일루어지는데, 케일 추출물, 무순 추출물 및 콜라비싹 추출물을 1:1:1의 비율로 혼합하여 이루어지는 것이 가장 바람직하다.

상기의 케일 추출물, 무순 추출물 및 콜라비싹 추출물에는 베타카로틴이나 루틴과 같은 페놀화합물, 섬유소 및 각종 비타민 류가 풍부하게 함유되어 있으며, 설포라판이 풍부하여 함유되어 자외선에 의해 손상된 피부의 보호 및 재생, 항염증 및 항산화 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 상기 추출물혼합단계(S107) 이후에는 상기 추출물혼합단계(S107)를 통해 제조된 혼합물에 산을 생성하는 유산균을 접종하고 발효하는 발효단계(S109)가 더 진행될 수도 있으며, 상기 추출물혼합단계(S107)를 통해 제조된 혼합물 100 중량부에 산을 생성하는 유산균 0.01 내지 0.1 중량부를 접종하고 발효하여 이루어진다.

또한, 상기 발효단계(S109)는 35 내지 37℃의 온도와 150 내지 250rpm의 교반속도로 24 내지 72시간 동안 이루어지는 것이 바람직하며, 상기 산을 생성하는 유산균은 Lactobacillus 속, Leuconostoc 속, Bifidobacteria 속으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것이 더욱 바람직하다.

상기 발효단계(S109)를 더욱 상세하게 설명하면, 상기 추출물혼합단계(S107)를 통해 제조된 혼합물을 원심분리한 후에 MRS broth와 혼합하여 배지로 제조한 다음 산을 생성하는 유산균을 접종하여 이루어지는 것이 바람직하다.

이때, 상기 발효는 쉐이킹 인큐베이터를 이용하여 이루어질 수 있으며, 발효가 완료된 후에는 원심분리한 뒤 실린지 필터를 이용하여 제균과정을 진행하는 것이 바람직하다.

이하에서는, 본 발명에 따른 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법 및 그 제조방법으로 제조된 화장료 조성물의 물성을 실시예를 들어 설명하기로 한다.

<제조예 1> 케일 추출물의 제조

케일 분말 50 g을 70% Ethanol 용액 950ml로 80℃에서 3시간 추출하여 추출액을 얻었다. 상기 추출액을 mesh filter(stainless steel filter mesh, R&K, China, 4~400mesh)로 여과하였다 상기 여과한 여과액을 rotary evaporator(DL10-3000, Greatwall, 20L)를 이용하여 감압농축하여 용매를 제거하여 케일 추출물 분말을 제조하였다.

이때, 제조된 추출물을 멸균 처리(KRS A-1, Health up, Korea)된 용기에 옮겨 담아 5℃에서 냉장보관 하였다.

<제조예 2> 무순 추출물의 제조

상기 제조예 1과 동일하게 진행하되, 케일 대신 무순을 사용하여 무순 추출물 분말을 제조하였다.

<제조예 3> 콜라비싹 추출물의 제조

상기 제조예 1과 동일하게 진행하되, 케일 대신 콜라비싹을 사용하여 콜라비싹 추출물 분말을 제조하였다.

<실시예 1>

상기 제조예 1 내지 3을 통해 제조된 케일 추출물, 무순 추출물 및 콜라비싹 추출물을 1:1:1의 중량부 비율로 혼합하여 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물을 제조하였다.

<실시예 2>

상기 실시예 1을 통해 제조된 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물을 원심분리(8,000 rpm, 4℃, 20 분)한 다음 0.2μm 실린지 필터로 제균하여 멸균된 MRS broth(121℃, 15 분 멸균)와 혼합한 것을 배지로 사용하였다. 균주는 Lactobacillus Kunkeei를 사용하였으며, 무균 조건하에 접종한 후, 쉐이킹 인큐베이터에서 35℃, 200rpm의 교반속도로 48시간 동안 발효하여 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물을 제조하였다.

이때, 균의 생육 정도는 분광광도계를 이용하여 610nm에서 흡광도를 측정하여 확인하였으며, 유산균의 산 생성 정도는 pH meter를 통해 확인하였다. 발효 후에는 원심분리(8,000 rpm, 4℃, 20 분)한 다음 0.2μm 실린지 필터로 제균하여 냉동 보관하였다.

상기 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 항산화 효능을 평가(DPPH radical 소거능)하여 아래 도 3에 나타내었다.

[단, 항산화 효능은 DPPH를 0.2mM 농도가 되게 70% EtOH에 녹여 준비 한다. DPPH 용액과 제조된 화장료 조성물 시료를 100:100이 되도록 혼합하였다.

이와 같이 DPPH 용액과 농도별로 용매에 용해시킨 시료를 혼합하여 20 분간 반응 시키고 20분 후, 분광광도계를 이용하여 515nm에서 흡광도를 측정하여 항산화 활성을 분석하였다. 아스코르브산(Ascorbic acid)을 대조군(PC, Positive control)으로 하고, 소거 활성의 크기는 다음 식에 의해 DPPH의 활성 저해율을 나타내었다.

Inhibition (%)=｛(OD _control- OD _sample)/OD _control｝× 100]

아래 도 3에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 화장료 조성물을 우수한 항산화 효능을 나타내었으며, 실시예 2와 같은 발효과정을 통해 제조된 화장료 조성물의 항산화 효과가 더욱 우수한 것을 알 수 있다.

또한, 상기 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 항염증 효능을 평가(NO 생성 억제능)하여 아래 도 4에 나타내었다.

[단, 항염증 효능을 확인하기 위하여 Nitrite Oxide assay를 통하여 NO 생성량을 측정하였다. 24-well plate에 macrophage인 RAW 264.7Cell을 10×10⁴Cells/well로 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양된 RAW 264.7Cell에 LPS (100 ng/ml)와 시료를 농도 별로 첨가하여 16시간 동안 배양하였다. 이후, 상층액 50ul에 greiss reagent 50ul을 첨가하여 30분간 상온에서 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

이때, 대조군(PC, Positve control)으로 에피갈로카테킨 갈산염(epigallocatechin gallate, EGCG) 20 ug/mL을 사용하였다. 표준품으로 아질산나트륨을 사용하여 표준정량곡선을 작성하여 질소산화물 생성량을 산출하였다.]

아래 도 4에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 화장료 조성물은 우수한 항염 효능을 나타내었다.

또한, 상기 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 UVB 손상에 대한 섬유아세포의 재생효과를 측정하여 아래 도 5에 나타내었다.

[단, UVB 손상에 대한 섬유아세포의 재생효과는 섬유아세포(HDF Cell)의 배양에 의해 측정하였다. HDF Cell 96 well microplate에 1×10⁴ Cell/well로 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 자외선 조사는 multi light viewing booth를 이용하여 UVB를 세포가 사멸하기 시작하는 30mJ/cm²가 되게 처리 하였다.

또한, 세포 생존은 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 이용하여 다음과 같이 수행하였다. UVB를 처리한 96 well plate에서 시료 100μl씩 첨가하여 24시간 배양한 후 ELISA reader기를 사용하여 570nm에서 흡광도를 측정하하는 방법을 이용하였다.]

아래 도 5에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 1 내지 2를 통해 제조된 화장료 조성물은 UVB 손상에 대한 섬유아세포의 재생효과가 우수한 것을 알 수 있으며, 특히, 발효과정을 거쳐 제조된 실시예 2의 화장료 조성물의 재생효과가 더욱 우수한 것을 알 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법은 자외선에 의해 손상된 피부의 보호 및 재생, 항염증 및 항산화 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공한다.

S101 ; 십자화과채소추출물제조단계
S103 ; 여과단계
S105 ; 감압농축단계
S107 ; 추출물혼합단계
S109 ; 발효단계

Claims

십자화과 채소 각각의 추출물을 제조하는 십자화과채소추출물제조단계;
상기 십자화과채소추출물제조단계를 통해 제조된 각각의 추출물을 여과하는 여과단계;
상기 여과단계를 통해 여과된 각각의 추출물을 감압농축하는 감압농축단계; 및
상기 감압농축단계를 통해 각각 농축된 추출물을 혼합하는 추출물혼합단계;로 이루어지며,
상기 십자화과 채소는 케일, 무순 및 콜라비싹으로 이루어지고,
상기 추출물혼합단계는 케일 추출물, 무순 추출물 및 콜라비싹 추출물을 1:1:1의 중량부로 혼합하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법.
청구항 1에 있어서,
상기 추출물혼합단계 이후에는 상기 추출물혼합단계를 통해 제조된 혼합물에 산을 생성하는 유산균을 접종하고 발효하는 발효단계가 더 진행되며,
상기 발효단계는 35 내지 37℃의 온도와 150 내지 250rpm의 교반속도로 24 내지 72시간 동안 이루어지는 것을 특징으로 하는 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법.
청구항 2에 있어서,
상기 산을 생성하는 유산균은 상기 산을 생성하는 유산균은 Lactobacillus 속, Leuconostoc 속 및 Bifidobacteria 속으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법.
삭제
청구항 1에 있어서,
상기 십자화과채소추출물제조단계는 십자화과 채소를 질량농도가 65 내지 75%인 75 내지 85℃ 알코올에 2 내지 4시간 동안 침지하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법.
청구항 1에 있어서,
상기 여과단계는 상기 십자화과채소추출물제조단계를 통해 제조된 각각의 추출물을 4 내지 400 메시의 스테인리스 필터로 여과하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법.
청구항 1에 있어서,
상기 감압농축단계는 회전 감압 증발기를 이용하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 십자화과 채소를 이용한 피부손상 방지용 화장료 조성물의 제조방법.