KR102403299B1

KR102403299B1 - 원격 허혈-재관류 손상의 치료 및 예방

Info

Publication number: KR102403299B1
Application number: KR1020157028040A
Authority: KR
Inventors: 롤프 스피리그; 실비아 미셰르; 마르크 놀테; 클라우디아 뒤어코프-시세빗슈; 로베르트 리벤
Original assignee: 체에스엘 베링 게엠베하; 우니베르지테트 베른
Priority date: 2013-03-08
Filing date: 2014-03-07
Publication date: 2022-06-03
Anticipated expiration: 2034-03-07
Also published as: CN105188750A; US10286047B2; US20190269766A1; EP2964255A1; JP6636334B2; DK2964255T3; US10973891B2; HK1216607A1; JP2020007362A; CA2901225C; AU2014224599B2; KR20150128888A; ES2844189T3; JP7666891B2; AU2014224599A1; US20160008442A1; WO2014135694A1; EP2964255B1; CA2901225A1; JP2016511267A

Abstract

본 발명은, 개체에게 접촉 활성화 시스템 억제제를 투여함을 포함하는, 원격 허혈-재관류 손상(IRI)의 치료 및/또는 예방을 위한 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH에 관한 것이다.

Description

원격 허혈-재관류 손상의 치료 및 예방{TREATMENT AND PREVENTION OF REMOTE ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY}

혈액-불포함 환경의 확립은 재건 및 정형 외과에서 전제 조건이고, 이는 통상 지혈대 적용에 의해 달성된다. 허혈이라고 명명하는 혈액 및 산소의 박탈은 환부 조직의 시간-의존적 분자 및 구조 변화를 유도한다. 허혈/재관류 손상(IRI)을 유도하는, 보체, 응혈, 및 혈장 칼리크레인-키닌(kallikrein-kinin) 시스템과 같은 복합 염증 캐스케이드는 혈류가 회복될 때 활성화된다. 지혈대-유도된 IRI는 부종 형성, 근육 활력(viability)의 손실 및 아폽토시스(apoptosis)로 나타나고, 이는 외과적 개입(surgical intervention)의 결과에 유의한 영향을 미친다. 또한, IRI는, 치료소에 익히 공지되어 있는 현상인, 원격 조직 및 기관 손상을 초래하는 국소적 및 전신적 염증 반응을 유도하는 것으로 공지되어 있다. 현재까지, IRI 후 국소적 및 전신적 염증 반응을 치료하기 위해 치료소에서 이용가능한 제제는 존재하지 않는다(1).

천연 보체 억제제 C1 에스테라제 억제제(C1INH)는, 보체 경로(전형적으로 렉틴 및 대안의 경로), 응혈 시스템 및 칼리크레인-키닌 시스템 3개 전부를 억제하는 것으로 입증되어 왔다(2-4). 혈장-유도된 C1INH는, 유전성 혈관부종(HAE)을 앓고 있는 C1INH 결핍 환자를 치료하기 위해 치료소에서 성공적으로 사용된다(2). 몇몇의 동물 연구는, 국소적 IRI, 즉, 실질 기관 이식, 심근 경색, 뇌졸중, 간 및 장 IRI에 대한 혈장-유도된 C1INH의 치료학적 잠재력을 입증하였다(4). 2개의 상이한 연구들은, 보체 시스템에 대한 영향에 기여하는, 국소적 골격근 IRI에 대한 혈장-유도된 C1INH의 잠재적 치료학적 효과를 입증하였다(5, 6). "초생리학적으로(supraphysiologically)" 높은 혈장 수준으로 사람 C1INH를 과발현하는 유전자전이 마우스를 이용한 한 연구는 하반신 IRI 모델의 폐 및 골격근에서 원격 기관 손상의 감소를 나타냈다(7). 그러나, 이 모델에서, C1INH는, 배아 발달 동안을 포함하여 구성적으로 발현되었고, 이는 생리학 및 병태생리학적 반응성의 변화를 유도할 수 있다. 현재까지, IRI-유도된 원격 조직 또는 기관 손상에 대한 혈장-유도된 C1INH의 효과는 입증되어 있지 않다.

놀랍게도, 본 발명자들은, 지혈대-적용된 뒷다리 IRI의 래트 동물 모델을 이용하여 국소적 및 원격 조직 및 기관 손상에 대한 혈장-유도된 C1INH의 치료학적 효과를 입증할 수 있었다. 예를 들면, 폐 부종의 유의한 감소가 관찰되었다. C1INH는, 접촉 활성화 시스템을 억제하는데 주요 역할을 하고, 원격 조직 및 기관 손상에 대한 C1INH의 효과는, IRI 동안 관찰된 원격 손상에 대해서뿐만 아니라 국소적 조직 및 기관 손상에 대해서도 이러한 시스템의 구성성분의 주요 병태생리학적 역할을 나타낸다. 그 결과는, 접촉 활성화 시스템을 표적으로 하는 물질, 예를 들면, C1INH, 칼리크레인 억제제 또는 인자 XII(FXII) 억제제는 원격 조직 및 기관 손상을 개선하거나 심지어 예방한다는 것을 나타낸다.

본 발명의 요약

본 발명은 그 중에서도 하기 항목 [1] 내지 [32]에 정의된 대상에 관한 것이다.

[1] 개체에게 접촉 활성화 시스템 억제제를 투여함을 포함하는, 원격 허헐-재관류 손상(IRI)의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, C1 에스테라제 억제제(C1INH), 칼리크레인(kallikrein) 억제제 및 인자 XII(FXII) 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[2] 항목 [1]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 C1INH, 바람직하게는 사람 C1INH, 보다 바람직하게는 사람 혈장-유도된 C1INH 또는 사람 재조합 C1INH인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[3] 항목 [1]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 FXII 억제제인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[4] 항목 [1] 내지 [3] 중 어느 하나에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 개체에게 비경구 투여되는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[5] 항목 [1] 내지 [4] 중 어느 하나에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 개체에게 정맥내, 동맥내 또는 피하 투여되는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[6] 항목 [1] 내지 [5] 중 어느 하나에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템이 C1INH이고, 여기서, 상기 개체에게 투여된 상기 C1INH의 용량이 1 내지 5000IU/체중kg, 바람직하게는 1 내지 1000IU/체중kg, 보다 바람직하게는 10 내지 500IU/체중kg인, 접촉 활성화 시스템.

[7] 항목 [6]에 있어서, 상기 개체에게 투여된 상기 C1INH의 용량이 10 내지 250IU/체중kg, 바람직하게는 20 내지 100IU/체중kg인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[8] 항목 [3] 또는 [4]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 FXII 억제제이고, 개체에게 투여된 FXII 억제제의 용량이 FXIIa의 아미도용해(amidolytic) 활성의 완전한 억제에 적합한, 접촉 활성화 시스템 억제제. 바람직하게는, FXII 억제제가 항체인 경우, 개체에게 투여되는 용량은 0.01 내지 50mg/체중kg, 바람직하게는 0.1 내지 10mg/체중kg이다.

[9] 항목 [1] 내지 [8] 중 어느 하나에 있어서, 상기 개체가, 외과적 개입을 경험할 예정이거나 외과적 개입을 경험한 환자인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[10] 항목 [9]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH가 외과적 개입의 개시 또는 재관류의 개시 전 7일 이내에, 바람직하게는 6일 이내에, 보다 바람직하게는 5일 이내에, 더욱 더 바람직하게는 4일 이내에 환자에게 투여되는, 접촉 활성화 시스템 억제제. 외과적 개입의 개시 또는 재관류의 개시 전 72시간 이내, 바람직하게는 48시간 이내, 보다 바람직하게는 24시간 이내, 더욱 바람직하게는 12시간 이내, 더욱 더 바람직하게는 6시간 이내의 투여가 보다 바람직하다.

[11] 항목 [9] 또는 [10]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH가 외과적 개입 동안 환자에게 투여되는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[12] 항목 [9] 내지 [11] 중 어느 하나에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 외과적 개입의 종료 후에 또는 재관류의 개시 후에 환자에게 투여되는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[13] 항목 [12]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH가, 외과적 개입의 종료 또는 재관류의 개시 후 72시간 이내에, 바람직하게는 48시간 이내에, 보다 바람직하게는 24시간 이내에, 더욱 바람직하게는 12시간 이내에, 더욱 더 바람직하게는 6시간 이내에, 또는 가장 바람직하게는 바로 환자에게 투여되는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[14] 항목 [9] 내지 [13] 중 어느 하나에 있어서, 상기 외과적 개입이 재건 수술 또는 외상 수술인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[15] 항목 [9] 내지 [13] 중 어느 하나에 있어서, 상기 외과적 개입이 정형외과 수술인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[16] 항목 [15]에 있어서, 상기 정형외과 수술이, 무릎 수술, 어깨 수술 및 손 수술로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[17] 항목 [9] 내지 [13] 중 어느 하나에 있어서, 상기 외과적 개입이 이식인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[18] 항목 [17]에 있어서, 상기 이식이 바람직하게는 신장, 간, 폐, 장, 췌장, 심장, 손발(예를 들면, 손), 피부 또는 췌장 섬-세포의 기관, 조직 또는 세포 이식인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[19] 항목 [9] 내지 [13] 중 어느 하나에 있어서, 상기 외과적 개입이, 혈관 수술 또는 충돌/압박 손상을 치료하기 위한 수술인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[20] 항목 [9] 내지 [13] 중 어느 하나에 있어서, 상기 외과적 개입이, 개체에게 약리학적 활성 물질, 예를 들면, 혈전용해성 물질 또는 혈관확장제를 전달하기 위한 장치, 바람직하게는 카테터의 삽입, 또는 약리학적 활성 물질, 예를 들면, 혈전용해성 물질 또는 혈관확장제의 주사, 또는 완전 또는 부분 혈관 폐색의 기계적 제거를 위한 장치의 삽입인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[21] 항목 [20]에 있어서, 상기 개체가, 심근 경색, 뇌졸중, 혈전증, 바람직하게는 심부정맥 혈전증 또는 스텐트와 같은 이물질 표면에서의 혈전성 발병, 혈전 색전증, 폐 색전증, 죽상 동맥경화증으로 인한 만성 허혈, 바람직하게는 말초 죽상 동맥경화증으로 인한 만성 사지 허혈, 또는 기타 혈관성 완전 또는 부분 폐색을 앓고 있는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[22] 항목 [1] 내지 [8] 중 어느 하나에 있어서, 원격 IRI이, 자발적이거나 외과적 개입 이외의 수단에 의해 유도된 개체에서의 손상된 혈류의 개선으로 인한 것인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[23] 항목 [22]에 있어서, 상기 투여가 예를 들면, 예방학적으로 재관류 전에 이루어지거나, 상기 투여가, 재관류가 일어난 후 가능한 빨리 이루어지는, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[24] 항목 [1] 내지 [23] 중 어느 하나에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가, 사람 혈장으로부터 단리된 사람 C1INH인, 접촉 활성화 시스템 억제제.

[25] 개체에게 접촉 활성화 시스템 억제제의 유효량을 투여함을 포함하는, 원격 허혈-재관류 손상(IRI)을 치료하고/하거나 예방하는 방법.

[26] 외과적 개입을 경험할 예정이거나 외과적 개입을 경험한 환자에게 외과적 개입 전에 그리고/또는 외과적 개입 동안에 그리고/또는 외과적 개입 후에, 또는 재관류의 개시 전에 그리고/또는 재관류의 개시 후에 접촉 활성화 시스템 억제제의 유효량을 투여함을 포함하는, 외과적 개입을 경험할 예정이거나 외과적 개입을 경험한 환자에서의 허혈-재관류 손상(IRI)을 예방하는 방법으로서, 상기 허혈-재관류 손상(IRI)이 수술 및/또는 초기 허혈 부위로부터 먼 기관, 사지 또는 조직에 영향을 미치는, 외과적 개입을 경험할 예정이거나 외과적 개입을 경험한 환자에서에서의 허혈-재관류 손상(IRI)을 예방하는 방법.

[27] 항목 [25] 또는 [26]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가, C1INH, FXII 억제제, 및 칼리크레인 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.

[28] 항목 [27]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 C1INH, 바람직하게는 사람 C1INH, 보다 바람직하게는 혈장-유도된 사람 C1INH인, 방법.

[29] 항목 [27]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 FXII 억제제인, 방법.

[30] 항목 [25] 내지 [29] 중 어느 하나에 있어서, 상기 원격 허혈-재관류 손상(IRI)이 폐, 신장, 뇌, 간, 심장, 장, 췌장 또는 기타 기관 및 손발에 영향을 미치는, 방법.

[31] 항목 [25] 내지 [30] 중 어느 하나에 있어서, 상기 허혈-재관류 손상(IRI)이 다중 기관 기능이상 증후군 또는 전신적 염증 반응 증후군을 포함하는, 방법.

[32] 항목 [2]에 있어서, 상기 접촉 활성화 시스템 억제제가 C1INH, 바람직하게는 사람 C1INH이고, 치료학적 효과를 개선하기 위해서 상기 접촉 활성화 시스템 억제제를, 합성 또는 천연 글리코사미노글리칸, 예를 들면, 헤파린, N-아세틸헤파린, 헤파란 설페이트, 덱스트란 설페이트, 데르마탄 설페이트, 및 콘드로이틴 설페이트와 병용하고/하거나, 기타 물질, 예를 들면, 정맥내 면역글로불린, 항트롬빈 III, 알파1 항트립신 또는 FXII 억제제와 병용하는, 접촉 활성화 시스템 억제제. 이들 물질은 병용 치료요법 또는 복합 치료요법으로서 투여될 수 있다.

도 1: C1INH는, 비복근 습윤:건조 비에 의해 평가되는 국소적 골격근 부종을 유의하게 예방한다. 도 1a: 습윤:건조 비 분석. 도 1b: 비-C1INH 치료된 사지(좌측) 및 C1INH 치료된 사지(우측)의 대표 사진. 각각의 점은 한 동물의 값을 표시한다. 수평 바는 상이한 동물들의 평균을 나타낸다. 평균 ± SD 데이터를 나타낸다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험(Dunnett post-test)으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 샘플들 사이의 통계적 유의성은 이하와 같이 나타냈다, *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.
도 2: C1INH는 원격 폐 부종을 유의하게 예방한다. 각각의 점은 한 동물의 값을 표시한다. 수평 바는 상이한 동물들의 평균을 나타낸다. 평균 ± SD 데이터를 나타낸다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 샘플들 사이의 통계적 유의성은 이하와 같이 나타냈다, *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.
도 3: IF에 의해 분석된 폐에서의 브라디키닌 수용체 B1R 및 B2R의 발현에 대한 C1INH의 효과. 도 3a: B1R 발현. 도 3b: B2R 발현. 각각의 점은 한 동물의 값을 표시한다. 수평 바는 상이한 동물들의 평균을 나타낸다. 평균 ± SD 데이터를 나타낸다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 샘플들 사이의 통계적 유의성은 이하와 같이 나타냈다, *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.
도 4: C1INH은 폐에서의 피브린 침착을 예방한다. 각각의 점은 한 동물의 값을 표시한다. 수평 바는 상이한 동물들의 평균을 나타낸다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 평균 ± SD 데이터를 나타낸다. 샘플들 사이의 통계적 유의성은 이하와 같이 나타냈다, *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.
도 5: C1INH는 대측성 다리에서의 피브린 침착을 감소시킨다. 각각의 점은 한 동물의 값을 표시한다. 수평 바는 상이한 동물들의 평균을 나타낸다. 평균 ± SD 데이터를 나타낸다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 샘플들 사이의 통계적 유의성은 이하와 같이 나타냈다, *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.
도 6: C1INH는 대측성 다리에서의 C3b 및 인자 B 침착을 억제한다. 각각의 점은 한 동물의 값을 표시한다. 도 6a: C3b 침착. 도 6b: 인자 B 침착. 수평 바는 상이한 동물들의 평균을 나타낸다. 평균 ± SD 데이터를 나타낸다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 샘플들 사이의 통계적 유의성은 이하와 같이 나타냈다, *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.
도 7: 헤파란 설페이트의 쉐딩(shedding)은 대측성 다리에서의 C1INH에 의해 약화된다. 각각의 점은 한 동물의 값을 표시한다. 수평 바는 상이한 동물들의 평균을 나타낸다. 평균 ± SD 데이터를 나타낸다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 샘플들 사이의 통계적 유의성은 이하와 같이 나타냈다, *, p < 0.05; **, p < 0.01; ***, p < 0.001.

한 양상에서, 본 발명은, 개체에게 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제를 투여함을 포함하는, 원격 허혈-재관류 손상(IRI)의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제에 관한 것이다.

용어 "치료" 또는 "치료하는"은, 병리학적 병태의 개선 또는 완화 및 상기 병태의 완전한 치유를 포함하는 것으로 이해될 것이다.

용어 "예방"은, 병리학적 병태의 완전 예방, 예방, 중증도의 감소, 및 상기 병태에 걸릴 개체의 위험 저하를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 또한, 이러한 용어는, 조직이 손상되는 것이 방지되도록 매우 이른 단계(예를 들면, 외과적 개입 전, 원격 IRI의 완전한 진단 전)에 본원에 기술되어 있는 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제를 투여함에 의한 조직의 전처리를 포함하는 것으로 이해될 것이다.

용어 "개체"는 사람 또는 동물 대상체를 말한다.

표현 "유효량"은, 특히, 개체에게 투여시, 원하는 치료학적 또는 예방학적 결과를 야기하는데 충분한 본 개시에 따른 제제의 임의의 양을 포함하는 것을 의미한다.

원격 또는 원거리 IRI

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "허혈-재관류 손상"(IRI)은, 이전에 허혈 발병으로 인한 결핍성 혈류를 경험한 조직 또는 기관의 영역에의 혈류 회복으로 얻어지는 손상을 말한다.

IRI는, 예를 들면, 자연 발생(예를 들면, 심근 경색 후 혈류의 회복), 외상에 의해 또는 혈액 공급이 감소된 조직 또는 기관에 혈류를 회복시키는 하나 이상의 수술 절차 또는 기타 치료학적 개입에 의해 야기될 수 있다. 이러한 수술 절차로는, 예를 들면, 관상 동맥 우회 이식 수술, 관상 혈관성형술, 및 기관 이식 수술 등이 포함된다.

허혈 조직의 재관류는, 결국 광범위한 미세혈관 기능이상 및 변경된 조직 장벽 기능을 초래할 수 있는, 국소적 및 전신적 또는 원격 반응 둘 다를 초래한다. 염증 반응은 심지어 전신적 염증 반응 증후군(SIRS) 또는 다중 기관 기능이상 증후군(MODS)을 초래할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 상호교환적으로 사용된 어구 "원격 IRI" 또는 "원거리 IRI" 또는 "원격 또는 원거리 IRI"는, 재관류된 국소적 허혈 기관(들) 및 조직(들)과 상이한 기관 또는 조직에 영향을 미치는 병태생리학적 프로세스, 예를 들면, 혈전성, 혈전 색전성 및/또는 세포 손상, 보체 활성화 및/또는 부종 형성을 포함하는 염증 프로세스를 말한다.

한 실시형태에서, 원격 또는 원거리 IRI는 폐에 영향을 미친다. 이러한 실시형태의 원격 또는 원거리 IRI는 폐 부종, 폐에서의 혈전성 프로세스, 폐 색전증 및/또는 폐 조직의 염증을 포함할 수 있다.

다른 실시형태에서, 원격 IRI는 신장(들)에 영향을 미친다. 이러한 실시형태의 원격 IRI는 신 부전, 부종 형성, 혈전증, 혈전 색전증 및/또는 신장 조직의 염증을 포함할 수 있다.

다른 실시형태에서, 원격 IRI는 심혈관계에 영향을 미친다. 이러한 실시형태의 원격 IRI는 심근 기절(myocardial stunning)(비가역적 손상의 부재에도 불구하고 재관류 후에 지속되는 심근 기능이상), 혈전증, 재관류 부정맥 및/또는 심근 조직의 염증/경색을 포함할 수 있다.

다른 실시형태에서, 원격 IRI는 위장계, 바람직하게는 장에 영향을 미친다. 이러한 실시형태의 원격 IRI는 감소된 장 장벽 기능, 손상된 위 운동성 및 흡수, 혈전증, 혈전 색전증 및/또는 위장 조직의 염증을 포함할 수 있다.

다른 실시형태에서, 원격 IRI는 중추 신경계에 영향을 미친다. 이러한 실시형태의 원격 IRI는 혈뇌 장벽의 파괴, 무증상 뇌 허혈, 뇌졸중, 대뇌 부종, 증가된 두개내압, 및/또는 신경 조직의 염증을 포함할 수 있다.

원격 IRI는 염증, 예를 들면, 전신적 염증에 의해 특성확인될 수 있다. 염증은, 예를 들면, 폐, 위장계, 심혈관계, 기타 사지 및/또는 중추 신경계에 영향을 미칠 수 있다.

원격 IRI는 전신적 염증 반응 증후군(SIRS) 및/또는 다중 기관 기능이상 증후군(MODS)을 포함할 수 있다.

원격 IRI에 선행하는 허혈 발병은, 수술로 인한 것이거나 수술에 의해 야기되지 않은 혈관 폐색으로 인한 것일 수 있다.

외과적 개입

한 실시형태에서, 원격 IRI는 외과적 개입 후의 허혈 조직(들) 및/또는 기관들의 재관류로 인한 것이다. 외과적 개입으로는 임의의 수술 절차가 포함된다.

본 발명에 따른 가능한 적용으로는, 동맥류 질환으로 인한 흉강 또는 부신 또는 복부 대동맥의 외과적 회복과 함께, 또한, 간, 신장, 소장, 손발 및 췌장을 포함하는 주요 기관 이식 동안에 그리고 주요 기관 이식 후에 일시적 폐색 또는 내장 혈액 공급을 유도하거나 요구하는 수술 절차와 함께, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제를 투여함에 의한 원격 IRI의 예방이 포함된다. 또한, 간 및 담즙 수술적 절제술, 전체 또는 부분 췌장 절제술, 전체 및 부분 위장 절제술, 식도 절제술, 결장직장 수술, 장간막 혈관 질환을 위한 혈관 수술, 또는 복강경 수술 절차 동안의 복부 흡입법을 포함하는 혈류의 일시적 감소 또는 예방을 초래하는 수술 절차와 함께, 원격 IRI의 예방도 포함된다. 추가의 적용으로는, 자상으로부터 또는 자동차 사고에 후속하는 관통성 상처 또는 둔기성 복부 외상으로부터 일어나는 외상들을 포함하는 내장 기관으로의 혈류의 중단을 초래하는 둔기성 또는 관통성 외상이 포함된다. 추가의 적용으로는, 압박 부상, 예를 들면, 하기 자연 재해가 포함된다. 추가의 적용으로는, 초기 혈전성 또는 혈전 색전성 또는 기타 허혈-유도성 장애, 예를 들어 뇌졸중, 심근 경색, 심부정맥 혈전증, 죽상 동맥경화증 또는 이물질 표면에서의 혈전성 이벤트 등의 발병 후의, 약리학적 활성 물질, 예를 들면, 혈전용해제 또는 혈관확장제의 전달을 위한 장치 및/또는 완전 또는 부분 폐색의 기계적 제거를 위한 장치의 삽입 및 약리학적 활성 물질, 예를 들면, 혈전용해제의 주사가 포함된다.

바람직하게, 외과적 개입은, 정형외과 수술, 혈관 수술, 심장 수술, 카테터-지시된 절차, 암 수술 및 외상 수술로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 정형외과 수술은, 무릎 수술, 손 수술, 어깨 수술, 외상시의 장골, 고관절 대체술, 및 척추 수술로 이루어진 그룹으로부터 바람직하게 선택된다.

혈관 수술은 회복 및/또는 사고, 예를 들면, 대동맥류 등으로 인한 것일 수 있다.

한 실시형태에서, 수술은, 일반적으로, 예를 들면, 저혈량증을 갖는 주요 외상을 포함하는, 차 사고, 충돌 부상 및 압박 부상으로 인한 외상 수술이다.

특정 실시형태에서, 외과적 개입은 바람직하게는 기관의 이식이다.

수술에 의해 야기되지 않는 혈관 폐색

다른 바람직한 적용으로는, 실혈로 인한 출혈성 쇼크, 심근 경색 또는 심 부전으로 인한 심장성 쇼크, 신경성 쇼크, 신장성 쇼크, 또는 아나필락시스를 포함하는, 내장 기관에의 혈류를 방해하거나 감소시키는 전신적 저혈압을 초래하는 질환 또는 절차가 포함된다.

원격 IRI는, 기관 허혈 존재 또는 부재시의 말초 허혈을 유도하는 저관류로 인한 허혈 후 혈류 개선으로 인한 것일 수 있다.

또한, 원격 IRI는 1차 기관 또는 조직 내의 초기 혈전성 또는 혈전 색전성 프로세스, 예를 들면, 뇌졸중 및 심근 경색 후의 혈류 개선으로 인한 것일 수 있다.

한 실시형태에서, 원격 IRI는, 말초 죽상 동맥경화증으로 인한 만성 사지 허혈과 같은 만성 허혈 발병 후 혈류 개선으로 인한 것이다.

접촉 활성화 시스템 억제제

본원에서 사용되는 용어 "접촉 활성화 시스템 억제제"는, 접촉 활성화 시스템을 억제할 수 있는 임의의 화합물을 말한다. 접촉 활성화 시스템 억제제는, C1 에스테라제 억제제(C1INH), 인자 XII(FXII) 억제제, 및 칼리크레인 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이들 억제제는, 이들 억제제가 접촉 활성화 시스템 경로에서 조기에 작용하고, 접촉 활성화 시스템에서 다중 시점에 상호작용한다는 이점을 갖는다. 대조적으로, 브라디키닌 억제제, 예를 들면, 브라디키닌 수용체 길항제는 상기 시스템의 말단점(distal point)에서 작용하고, 개입의 초기점은 부종 형성의 수준에 있다(cf. Souza et al (10)).

C1 에스테라제 억제제

사람 혈장 유래의 C1 에스테라제 억제제(C1INH)는 478개 아미노산 잔기들의 당화된 단일쇄 폴리펩타이드이다. 사람 C1INH의 아미노산 서열은 서열번호 1에 나타낸다. 평균 혈장 농도는 약 240㎍/mL이다. C1INH의 동의어는 C1-에스테라제 억제제, α2-뉴라미노-당단백질, C1s-억제제, 및 C1-불활성화제이다.

C1INH의 1 국제 단위(IU: international unit)는 WHO 국제 표준 C1-억제제, 혈장에 대한 비교에 의해 정의된다. 현재 제1 국제 표준은 NIBSC 코드: 08/262이고, 이러한 제제의 할당된 효력은 0.89 IU/앰플이다.

본원에서 사용된 바와 같은 용어 "C1INH"는, 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 말한다. 본 발명의 목적을 위해, 아미노산 서열들 사이의 동일성 정도는, 2개의 서열들 사이에 동일한 아미노산들의 백분율을 말한다. 서열번호 1에 대한 아미노산 서열의 동일성 정도는, 하기 파라미터들: 매트릭스 BLOSUM62; 오픈 갭 11 및 연장 갭 1 페널티; 갭 x_dropoff50; 예측 10.0 워드 사이즈 3; 필터: 없음으로의 프로그램 "BLAST 2 SEQUENCES(blastp)"를 이용하여 의문의 아미노산 서열과 서열번호 1을 비교함으로써 결정된다(Tatusova et al. (1999) FEMS Microbiol. Lett. 174, 247-250). 본 발명에 따르면, 서열 비교는 400개 이상의 아미노산, 바람직하게는 425개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 450개 이상의 아미노산, 가장 바람직하게는 475개 이상의 아미노산을 포함한다.

바람직하게는 C1INH는, 문헌[Drouet et al. (1988, Clin Chim Acta. 174:121-30)]에 기술되어 있는 바와 같이 검정될 수 있는 C1-억제 활성을 갖는다. 보다 바람직하게는 C1INH는, 서열번호 1(또한 UniProt P05155 참조)에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 사람 C1INH이다.

한 실시형태에서, C1INH는 사람 또는 동물 혈장으로부터, 바람직하게는 사람 혈장으로부터 단리되어 왔다. 이러한 실시형태에 따르면, C1INH는 천연 사람 C1INH와 같이 당화되는 것이 바람직하다.

다른 실시형태에서, 사람 또는 동물 C1INH는, C1INH를 발현하는 형질감염된 숙주 세포로부터 수득된다. 이러한 "재조합적으로 생산되는" C1INH는, 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, C1INH를 암호화하는 DNA로 형질감염된 재조합 숙주 세포 또는 유기체에서 제조될 수 있다.

본 발명에서 사용하기에 적합한 C1INH는, 단백질을 분비하는 변형된 세포에 의해 조건조절된 배양 배지로부터 수득되고 표준 방법에 의해 정제될 수 있다.

단백질 또는 폴리펩타이드는, C1INH 폴리펩타이드를 암호화하는 단리된 핵산을 이용한 재조합 기술에 의해 수득될 수 있다. 일반적 분자 생물학 방법은, 예를 들면, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, N.Y., 2d ed., 1989] 및 문헌[Ausubel et al., (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, New York (1987)]에 기술되어 있다. 적절한 서열은, 게놈 또는 cDNA 라이브러리로부터 표준 기술을 이용하여 수득될 수 있다. 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 기술이 사용될 수 있다. 예를 들면, 문헌[PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, 1990, Innis et al., (Ed.), Academic Press, New York, N.Y.]을 참조한다. 라이브러리는, 적절한 세포로부터 추출된 핵산으로 구성된다. 유용한 유전자 서열은, 예를 들면, 각종 서열 데이터베이스, 예를 들면, 핵산에 관해서는 GenBank 그리고 단백질에 관해서는 Swiss-Prot에서 발견될 수 있다.

표준 방법을 이용하여, 다량의 폴리펩타이드를 발현하는 형질전환된 원핵생물, 포유동물, 효모 또는 곤충 세포주를 생산할 수 있다. 예시 포유동물 세포주로는 COS-7 세포, 마우스 L 세포 및 CHO 세포가 포함된다. 문헌[Sambrook (1989), supra and Ausubel et al., 1987, 상기]을 참조한다.

C1INH를 암호화하는 DNA를 발현하기 위해 각종 발현 벡터들을 사용할 수 있다. 원핵생물 또는 진핵생물 세포에서의 재조합 단백질의 발현에 사용된 종래 벡터를 사용할 수 있다.

C1INH는, 가용성 형태로, 예를 들면, 형질전환되거나 형질감염된 효모, 곤충 또는 포유동물 세포의 분비 생성물로 생산될 수 있다. 이어서, 펩타이드는, 당해 분야에 공지되어 있는 표준 절차에 의해 정제될 수 있다. 예를 들면, 정제 단계로는 황산 암모늄 침전, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 여과, 전기영동, 및 친화성 크로마토그래피 등이 포함될 것이다. 문헌[Enzymology Purification Principles and Practices (Springer-Verlag, N.Y., 1982)]의 방법을 참조한다.

대안으로, C1INH는 불용성 형태로, 예를 들면, 응집체 또는 봉입체(inclusion body)로 생산될 수 있다. 이러한 형태로의 C1INH는, 당해 분야에 익히 공지되어 있는 표준 절차에 의해 정제된다. 정제 단계의 예로는, 원심분리에 의해 파괴된 숙주 세포로부터 봉입체를 분리하고, 이어서, 펩타이드가 생물학적 활성 입체배좌를 갖도록 상기 봉입체를 카오트로픽제(chaotropic agent) 및 환원제로 가용화시킴이 포함된다.

숙주 세포를 형질감염시키기 위해 사용되는 뉴클레오타이드 서열은, 각종 바람직한 특성을 갖는 C1INH 또는 이의 단편을 제조하도록 표준 기술을 이용하여 변형될 수 있다. 이러한 변형된 C1INH는, 1차 구조 수준에서, 예를 들면, 아미노산, 삽입, 치환, 결실 및 융합에 의해 천연-발생 서열과 다를 수 있다. 이들 변형을 다수의 조합으로 사용하여 최종의 변형된 단백질 쇄를 생산할 수 있다. 아미노산 서열 변이체는, 혈청 반감기를 증가시키거나 감소시키고, 정제 또는 조제를 가능하게 하고, 치료학적 효능을 개선시키고, 치료학적 사용 동안 중증도 또는 부작용의 발생을 경감시킴을 포함하는 원하는 각종 목적으로 제조할 수 있다. 아미노산 서열 변이체는 통상적으로 자연에서 발견되지 않는 소정의 변이체이지만, 다른 변이체들은 번역-후 변이체일 수 있다. 이러한 변이체는, 이들이 C1INH의 생물학적 활성을 보유하는 한 본 발명에서 사용할 수 있다. 본 발명에 따른 C1INH로는, 문헌[W02007/073186 및 US 8,071,532 B2]에 개시되어 있는 C1INH 분자가 포함된다.

숙주 세포에서의 발현은, (혈장 유도된 C1INH와 비교하여) 변형된 탄수화물 구조를 갖는 C1INH를 초래할 수 있다. C1INH는, 하기 양상들 중 하나 이상에 있어서 혈장 유도된 C1INH와 비교하여 변형될 수 있다: (당단백질의 천연 발생 변이체 또는 재조합적으로 발현된 변이체로부터의) 탄수화물 모이어티의 제거, 바람직하게는 N-연결된 탄수화물 쇄로부터의 시알산 및/또는 갈락토스의 제거 및/또는 만노스, 갈락토스, N-아세틸글루코사민 및/또는 퓨코스 잔기의 노출을 초래하는 탄수화물 쇄의 제거. 또한, 혈장 반감기를 증가시키는 C1INH의 변형, 예를 들면, 반감기 연장 모이어티, 예를 들면, 알부민, 면역글로불린 Fc 영역과의 융합, 또는 화학적 변형, 예를 들면, C1INH의 페길화 또는 헤실화가 예상된다.

인자 XII 억제제

본 출원에서 사용되는 바와 같은 약어 "FXII"는, 인자 XII(FXII) 및 활성화된 인자 XII(FXIIa) 중 어느 하나 또는 둘 다를 말한다. 따라서, 용어 "FXII 억제제"로는 FXII 및 FXIIa 중 어느 하나 또는 둘 다의 억제제가 포함된다. 추가로, 항-FXII 항체로는, FXII 및 FXIIa 중 어느 하나 또는 둘 다에 결합하여 이들을 억제하는 항체가 포함된다. 또한, 용어 "FXII 억제제"는, 반감기 연장 폴리펩타이드에 연결되는 FXII의 억제제를 포함하는 것을 의미한다. FXII 억제제는 반감기 연장 폴리펩타이드에 직접적으로 연결될 수 있거나, 링커, 바람직하게는 개열가능한 링커를 통해 연결될 수 있다.

몇몇의 실시형태에서, FXII 억제제는 FXII의 직접적 억제제이다. 용어 "직접적" 억제제는, FXII(또는 FXIIa)와의 접촉(예를 들면, 결합)을 통해 작용하는 억제제를 의미한다. 대조적으로, 간접적 억제제는, FXII(또는 FXIIa) 단백질과 접촉하지 않고 작용할 수 있고; 예를 들면, 안티센스(antisense) RNA는, FXII 유전자의 발현을 감소시키기 위해 사용할 수 있고, 분자는 인자 XI와 같은 직접적 다운스트림 FXIIa 반응 파트너와의 직접적 상호작용을 통해 FXIIa의 효과를 억제할 수 있지만, FXII 단백질과 직접적으로 상호작용하지 않는다. 따라서, 간접적 억제제는, 직접적 억제제와는 대조적으로, FXII 단백질로부터 업스트림 또는 다운스트림에 작용한다. 직접적 억제제의 몇몇의 예는 하기에 제시된다. FXII 억제제는 일반적으로 비-내인성 억제제이고; 즉, 이들은, 사람 또는 동물 신체에서 자연적으로 발생하는 억제제가 아니다.

A. 인페스틴-4

한 실시형태에서, 본 출원은, 인페스틴 도메인 4를 포함하는 FXII 억제제, 인페스틴-4를 제공한다. 한 실시형태에서, FXII 억제제는 인페스틴-4의 변이체를 포함한다. 다른 실시형태에서, FXII 억제제는 인페스틴 도메인 4, 및 임의로 인페스틴 도메인 1, 2, 및/또는 3을 포함하고; 이들 단백질은 FXII의 잠재적 억제제인 것으로 공지되어 있다(WO 2008/098720을 참조하고; 또한 FEBS Lett. 512-516, 2004를 참조한다). 인페스틴-4의 야생형 폴리펩타이드 서열이 제공된다(서열번호 2). 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "변이체"는, 아미노산 돌연변이를 갖는 폴리펩타이드를 말하고, 여기서, "돌연변이"는 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 치환, 결실, 또는 부가로서 정의되고, 여기서, 이러한 변화는, FXII를 억제하는 폴리펩타이드의 기능적 능력을 변경하지 않는다. 용어 "변이체"는 야생형 또는 돌연변이된 인페스틴-4 서열의 단편을 포함한다. 이러한 변이체의 추가의 예는 하기에 제공된다.

한 실시형태에서, 인페스틴-4 변이체는, 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2-13, 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 N-말단 아미노산 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이, 또는 6개의 보존된 시스테인 잔기 및 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 70% 이상의 상동성을 포함한다. 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2-13은, 둘 다 N-말단 영역의 접촉 부위의 축적의 공통 특징을 공유하는, 트롬빈에 결합하는 관련 억제제 로드니우스 프롤릭수스(Rhodnius prolixus)(PDB: 1 TSO)에 대한 구조적 데이터의 분석, 및 키모트립신에 결합하는 SPINK-1의 분석에 기초하여 FXII에의 결합에 중요할 수 있다. 따라서, 한 실시형태에서, 인페스틴-4의 변이체는, 야생형 인페스틴-4 서열의 아미노산 2-13의 보존된 N-말단 영역, 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 이들 보존된 N-말단 아미노산 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 돌연변이는 치환, 결실 또는 부가일 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "상기 N-말단 아미노산 이외의"는, 서열 VRNPCACFRNYV를 포함하는 아미노산의 연속한 스트레치, 즉, 야생형 인페스틴-4 서열 유래의 아미노산 2-13 이외의 변이체의 폴리펩타이드 쇄에 따른 임의의 아미노산을 말한다. 다른 실시형태에서, 인페스틴-4 변이체는 6개의 보존된 시스테인 잔기를 포함하고, 야생형 인페스틴-4 서열과 70% 이상의 상동성을 갖는다. 한 실시형태에서, 6개의 보존된 시스테인 잔기는 야생형 인페스틴-4 서열의 위치 6, 8, 16, 27, 31 및 48의 아미노산이다. 한 실시형태에서, 변이체는 마지막 보존된 시스테인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 시스테인 잔기의 정확한 위치, 및 서로에 대한 상대적 위치는, 인페스틴-4 변이체에서의 삽입 또는 결실로 인하여 야생형 인페스틴-4 서열의 위치 6, 8, 16, 27, 31, 및 48로부터 변할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 이들 실시형태에서, 인페스틴-4 변이체는 6개의 시스테인 모두를 포함하고, 야생형 인페스틴-4 서열과 70%, 75%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 상동성을 공유할 수 있다.

실시형태들에서, 인페스틴-4의 변이체는, 이것이 FXII를 억제한다는 점에서 특성확인된다. FXII를 억제하는 기능적 활성은, 예를 들면, FXII 효소 활성의 억제, 연장된 응혈 시간, 즉, 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간(aPTT)을 시험하는 직접적 검정, 또는 응혈을 평가하는 생체내 방법을 포함하는 시험관내 및/또는 생체내 특성확인을 통해 평가할 수 있다. 인페스틴-4 변이체의 추가의 예로는, 하기에 기술되어 있는 SPINK-1 돌연변이체가 있다.

B. SPINK-1 돌연변이체

한 실시형태는, 사람에서의 치료학적 사용을 위한 FXII 억제제를 포함한다. 인페스틴-4에 대한 높은 유사성을 갖는 사람 단백질을 사용할 수 있다. 예를 들면, 인페스틴-4에 대한 최고의 유사성을 갖는 사람 단백질은, 췌장에서 발현된 카잘(Kazal)-형 세린 프로테아제 억제제인 SPINK-1(또한, 췌장 분비성 트립신 억제제, PSTI로서도 공지되어 있음)이다. 카잘-형 세린 프로테아제 억제제 계열은 다수의 계열의 세린 프로테아제 억제제들 중 하나이다. 다양한 종 유래의 다수의 단백질들이 기술되어 왔다(Laskowski M and Kato I, 49 Ann. Rev. Biochem. 593-626, 1980). 야생형 SPINK-1 서열에 기초하여, 인페스틴-4에 대한 SPINK-1 서열의 상동성을 증가시키기 위한 다양한 변이체들이 생성될 수 있다. 어구 "인페스틴-4에 대한 증가된 상동성"은, 프로세스에 의해 SPINK-1에 아미노산 돌연변이가 이루어져 SPINK-1이 인페스틴-4 서열에 더 가까워지게 하는 상기 프로세스를 말한다.

한 실시형태에서, SPINK-1은, 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2-13을 포함하도록 돌연변이되고; 폴리펩타이드 서열이 제공되고, K1로서 언급된다. 상기 기술되어 있는 바와 같이, 인페스틴-4 서열의 N-말단 부분은, FXII 억제성 기능에 중요한 것으로 생각된다.

따라서, 한 실시형태에서, 돌연변이된 SPINK-1의 변이체는, 또한, 야생형 인페스틴-4 서열의 N-말단 아미노산 2-13, 및 야생형 SPINK-1 서열과의 차이를 초래하고 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 변이체의 상동성을 증가시키는 상기 N-말단 아미노산 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 다른 실시형태에서, 돌연변이된 SPINK-1의 변이체는 6개의 보존된 시스테인 잔기를 포함하고, 야생형 SPINK-1 서열과의 70% 이상의 상동성을 갖는다. 돌연변이는 치환, 결실, 또는 부가일 수 있다. 상기 정의된 바와 같은 용어 "상기 N-말단 아미노산 이외의"는, 서열 VRNPCACFRNYV로 이루어진 아미노산의 연속한 스트레치, 즉, 야생형 인페스틴-4 서열 유래의 아미노산 2-13 이외의 변이체의 폴리펩타이드 쇄에 따른 임의의 아미노산을 말한다. 용어 "변이체"는 상기 돌연변이된 SPINK-1 서열의 단편을 포함한다. 한 실시형태에서, 6개의 보존된 시스테인 잔기는 야생형 SPINK-1 서열의 위치 9, 16, 24, 35, 38, 및 56의 아미노산일 수 있다. 한 실시형태에서, 변이체는, 마지막 보존된 시스테인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 시스테인의 정확한 위치, 및 서로에 대한 상대적 위치는, SPINK-1 변이체에서의 삽입 또는 결실로 인하여 야생형 SPINK-1 서열의 위치 9, 16, 24, 35, 38, 및 56으로부터 변할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 이들 실시형태에서, SPINK-1 변이체는 6개의 시스테인 모두를 포함한다. 실시형태들에서, SPINK-1 변이체는, 또한, 이것이 FXII를 억제한다는 점에서 특성확인된다. 추가의 SPINK 변이체는, 그 개시의 전문이 본원에 포함되는 EP 2497489A1에 개시되어 있다.

C. 기타 FXII 억제제

한 실시형태에서, 기타 FXII 억제제는, 의학적 절차를 받는 환자에게 투여된다. 상기 논의된 바와 같은 용어 FXII 억제제는 FXII 및 FXIIa 둘 다의 억제제를 포함한다. WO2006/066878에서는 FXII에 대한 항체의 사용 또는 FXII의 억제제의 사용이 제안된다. 구체적으로, FXII에 대한 억제제로는 항트롬빈 III(ATIII), 안지오텐신 전환 효소 억제제, 아프로티닌, 알파-1 프로테아제 억제제, 안티파인([(S)-1-카르복시-2-페닐에틸]-카르바모일-L-Arg-L-Val-아르기날), Z-Pro-프로알데하이드-디메틸 아세테이트, DX88(Dyax Inc., 300 Technology Square, Cambridge, MA 02139, USA; 문헌[Williams A and Baird LG, 29 Transfus Apheresis Sci. 255-258, 2003]에 인용됨), 류펩틴, 프롤릴 올리고펩티다제의 억제제, 예를 들면, Fmoc-Ala-Pyr-CN, com-트립신 억제제, 소 췌장 트립신 억제제의 돌연변이체, 에코틴, 각시 가자미(yellowfin sole) 항응혈 단백질, 서양계 호박(Cucurbita maxima) 이소억제제 및 하마다린을 포함하는 서양계 호박 트립신 억제제-V가 포함된다(문헌[Isawa H et al. 277 J. Biol. Chem. 27651-27658, 2002]에 개시되어 있는 바와 같음).

또 다른 실시형태에서, FXII 억제제는 H-D-Pro-Phe-Arg-클로로메틸케톤(PCK)이다. (Tans et al., Eur. J. Biochem. 1987; 164:637-42; Kleinschnitz et al., J Exp Med. 2006; 203:513-8.)

FXII 억제제는, 예를 들면, 문헌[U.S. 특허 제6,613,890호 단락 4 내지 8]에 개시되어 있는 바와 같은 아밀로이드 전구체 단백질의 쿠니츠(Kunitz) 프로테아제 억제제 도메인의 유사체일 수 있다.

다른 실시형태에서, FXII 억제제는, FXII에 결합하여 FXII 활성화 및/또는 활성을 억제하는 항-FXII 항체일 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들면, 문헌[WO 2006/066878] 및 문헌[Ravon et al., 1 Blood 4134-43, 1995]에 기술되어 왔다.

사람 FXII에 대한 기타 모노클로날 항체(mAb)로는, 문헌[Pixley et al (J Biol Chem 1987; 262, 10140-45)]에 기술되어 있는 B7C9 mAb, 문헌[Small et al (Blood 1985; 65:202-10)]에 기술되어 있는 mAb; 문헌[Nuijens et al (J. Biol. Chem. 1989; 264:12941-49)]에 기술되어 있는 mAb F1 및 F3; 문헌[WO89/11865]에 기술되어 있는 FXII의 경쇄에 대한 B6F5, C6B7, 및 D2E10 mAb; 문헌[WO90/08835]에 기술되어 있는 FXII보다 FXIIα-β에 선택적으로 결합하는 mAb; 및 문헌[WO91/17258]에 기술되어 있는 항-FXII 항체 OT-2가 포함된다.

추가의 바람직한 항-FXII/FXIIa 모노클로날 항체 및 이의 항원-결합 단편은, 본원에 인용에 의해 포함되는 문헌[WO 2013/014092]에 기술되어 있다. 이들 항체는, 사람 FXII에 비해 사람 FXIIa-베타에 대해 2배 이상 더 높은 결합 친화도를 갖고, 사람 FXIIa의 아미도용해 활성을 억제시킬 수 있다. 몇몇의 실시형태에서, 당해 항체 또는 항원-결합 단편은 하기 특징들 중 하나 이상을 갖는다: (a) 뮤린 FXII/FXIIa에 결합하거나; (b) 서열번호 7의 서열과 85% 초과로 동일한 중쇄 가변(VH) 영역을 포함하거나; (c) 서열번호 8의 서열과 85% 초과로 동일한 경쇄 가변(vL) 영역을 포함하거나; (d) 서열번호 9의 서열과 80% 이상 동일한 중쇄 CDR1, 및/또는 서열번호 10과 60% 이상 동일한 중쇄 CDR2, 및/또는 서열번호 12와 80% 이상 동일한 중쇄 CDR3을 포함하거나; (e) 서열번호 14와 50% 이상 동일한 경쇄 CDR1, 및/또는 서열번호 15의 경쇄 CDR2, 및/또는 서열 A-X₁-W-X₂-X₃-X₄-X₅-R-X₆-X₇(여기서, X₁은 A 또는 S일 수 있고, X₅는 L 또는 V일 수 있고, 기타 X_n은 임의의 아미노산일 수 있다)(서열번호 17)을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하거나; (f) 10^-8M보다 양호한 K_D로 사람 FXIIa-베타에 결합하거나; (g) 사람 FXIIa-베타에 대해 결합하기 위해 인페스틴-4와 경쟁하거나; (h) 사람 IgG 또는 이의 변이체, 바람직하게는 사람 IgG4 또는 이의 변이체이다.

다른 실시형태에서, 항-FXII 항체는, 사람 FXII에 결합하고 (a) 서열번호 9에 제시되는 바와 같은 중쇄 CDR1, 서열번호 11에 제시되는 바와 같은 중쇄 CDR2, 및 서열번호 13에 제시되는 바와 같은 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및/또는 (b) 서열번호 14에 제시되는 바와 같은 경쇄 CDR1, 서열번호 15에 제시되는 바와 같은 경쇄 CDR2, 및 서열번호 17에 제시되는 바와 같은 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함하는, IgG 항체이다. 서열번호 11을 포함하는 중쇄 CDR2는 서열 GIX₁X₂X₃X₄X₅X₆TVYADSVKG(여기서, X₁은 R, N 또는 D이고, X₂는 P, V, I, 또는 M이고; X₃은 S, P, 또는 A이고; X₄는 G, L, V, 또는 T이고; X₅는 임의의 아미노산이고, 바람직하게는 X₅는 G, Y, Q, K, R, N, 또는 M이고; X₆은 T, G, 또는 S이다)를 포함한다. 서열번호 13을 포함하는 중쇄 CDR3은 서열 ALPRSGYLX₁X₂X₃X₄YYYYALDV(여기서, X₁은 I, M 또는 V이고; X₂는 S 또는 K이고; X₃은 P, K, T, 또는 H이고; X₄는 H, N, G, 또는 Q이다)를 포함한다. 서열번호 17을 포함하는 경쇄 CDR3은 서열 AX₁WX₂X₃X₄X₅RX₆X₇(여기서, X₁은 A 또는 S이고; X₂는 D, Y, E, T, W, E, 또는 S이고; X₃은 A, N, I, L, V, P, Q, 또는 E이고; X₄는 S, D, P, E, Q, 또는 R이고; X₅는 L 또는 V이고; X₆은 G, L, 또는 K이고; X₇은 V, A, D, T, M, 또는 G이다)을 포함한다.

다른 실시형태에서, 항-FXII 항체 항원-결합 단편은, 사람 FXII에 결합하고 (a) 서열번호 9에 제시되는 바와 같은 중쇄 CDR1, 서열번호 10에 제시되는 바와 같은 중쇄 CDR2, 및 서열번호 12에 제시되는 바와 같은 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및/또는 (b) 서열번호 14에 제시되는 바와 같은 경쇄 CDR1, 서열번호 15에 제시되는 바와 같은 경쇄 CDR2, 및 서열번호 16에 제시되는 바와 같은 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함하는, IgG 항체의 단편이다.

한 실시형태에서, 항-FXII 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 실시예 3에서 사용되는 항체 "3F7"이다. 3F7의 가변 영역 및 CDR의 서열은 표 1에 제시된다.

또 다른 실시형태에서, 항-FXII 항체 또는 항원 결합 단편은, (3F7에 비해) 친화성 성숙된 항체 VR115, VR112, VR24, VR110, VR119로부터 선택된다.

상기 기재된 바와 같은 서열번호 11은 퇴화 서열이다. VR119는 서열번호 11을 포함하고, 여기서, X₁은 N이고, X₂는 V이고, X₃은 P이고; X₄는 L이고, X₅는 Y이고; X₆은 G이다. VR112는 서열번호 11을 포함하고, 여기서, X₁은 N이고, X₂는 V이고, X₃은 P이고; X₄는 V이고, X₅는 Q이고; X₆은 G이다. VR115는 서열번호 11을 포함하고, 여기서, X₁은 D이고, X₂는 I이고, X₃은 P이고; X₄는 T이고, X₅는 K이고; X₆은 G이다. VR110은 서열번호 11을 포함하고, 여기서, X₁은 D이고, X₂는 M이고, X₃은 P이고; X₄는 T이고, X₅는 K이고; X₆은 G이다. VR24는 고유한 LCDR1: SGSSEMTVHHYVY (서열번호 18)를 포함한다.

항체 CDR에 관한 실시형태에서, CDR은 카바트 넘버링 시스템에 따라 정의된다. (Kabat EA, Wu TT, Perry HM, Gottesman KS, Foeller C (1991) Sequences of proteins of immunological interest, 5th edn. U.S. Department of Health and Human services, NIH, Bethesda, MD.)

몇몇의 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 1:0.2의 FXIIa-알파 대 항체의 몰비가 사용되는 경우에 FXIIa-알파를 40% 초과, 50% 초과, 또는 60% 초과만큼 억제하는 항-FXII/FXIIa 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 몇몇의 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 1:0.5의 FXIIa-알파 대 항체의 몰비에서 FXIIa-알파를 80% 초과, 85% 초과, 또는 90% 초과만큼 억제한다. 한 실시형태에서, 항체는 1:0.5의 몰비에서 FXIIa-알파의 완전한 억제를 달성한다. 한 실시형태에서, FXIIa-알파는 사람 FXIIa-알파이다. 한 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 적어도 항체 3F7과 비슷한 사람 FXIIa에 대한 친화도를 갖는다.

상기 논의된 바와 같은 "항-FXII 항체"는, FXII 및 FXIIa 중 어느 하나 또는 둘 다에 결합하여 이들을 억제하는 항체를 포함한다. 한 실시형태에서, 당해 항체는 전장 Ig, Fab, F(ab)2, Fv, scFv의 형태, 또는 기타 형태 또는 이들의 변이체의 형태로 존재할 수 있다. 당해 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있다. 당해 항체는, 이소형(isotype)이 IgM, IgD, IgA, IgG, 또는 IgE, 또는 이들의 임의의 서브클래스, 예를 들면, IgG1, 또는 이들의 변이체인 점에서 특성확인될 수 있다. 당해 항체는, 사람, 마우스, 래트, 토끼, 염소, 햄스터, 또는 원숭이를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 포유동물 종 유래일 수 있다. 당해 항체는 사람화되거나 CDR-절편이식될 수 있다. 당해 항체는, 면역원성, 반감기를 변경시키거나 치료학적 항체와 관련된 기타 유리한 특성을 부여하기 위해 돌연변이되거나 변형될 수 있다. 한 실시형태에서, 당해 항체는, FXII(여기서, "FXII"는 FXII 및 FXIIa를 포함한다)의 중쇄 또는 경쇄 상의 에피토프, 예를 들면, 중화성 에피토프에 결합하는 항-FXII 항체이다. 당해 항체는, FXII에 대한 결합에 관해 고 친화성이고/이거나 고 결합활성(avidity)일 수 있다. 당해 항체는 폴리펩타이드, 핵산 또는 소분자에 접합될 수 있다.

D. 반감기 연장 모이어티에 연결된 FXII 억제제

폴리펩타이드

본 출원의 다른 양상은, 반감기 향상 폴리펩타이드(HLEP)에 연결된 FXII 억제제를 제공한다. 예를 들면, 한 실시형태에서, FXII 억제제는 반감기 연장 단백질에 연결되어 있다. "반감기 향상 폴리펩타이드"는 환자에서의 또는 동물에서의 생체내 FXII 억제제의 반감기를 증가시킨다. 예를 들면, 알부민 및 면역글로불린 및 이들의 단편 또는 유도체는 반감기 향상 폴리펩타이드(HLEP)로서 기술되어 왔다. 문헌[Ballance et al. (WO 2001/79271)]은, 사람 혈청 알부민에 융합된 경우에 증가된 생체내 기능적 반감기 및 연장된 저장 수명(shelf life)을 갖는 것으로 예측되는 다수의 다양한 치료학적 폴리펩타이드의 융합 폴리펩타이드를 기술하였다. EP 2497489 A1에 개시되어 있는 반감기 향상 폴리펩타이드에 연결된 FXII 억제제에 관한 실시형태는 본 발명과 함께 사용할 수 있고, 이는 본원에 인용에 의해 포함된다.

E. 링커

한 실시형태에서, 개재성(intervening) 펩타이드 링커는 치료학적 폴리펩타이드와 HLEP 사이에 도입될 수 있다. 한 실시형태에서, 개열가능한 링커는, 특히, HLEP가, 예를 들면, 입체적 장해에 의해 치료학적 폴리펩타이드의 특이적 활성을 방해하는 경우에 도입된다. 소정 실시형태에서, 링커는, 내인적, 외인적, 또는 통상적 응혈 경로의 응혈 프로테아제와 같은 효소에 의해 개열된다. 내인적 경로의 응혈 프로테아제는, 예를 들면, FXIIa, FXIa, 또는 FIXa를 포함하는 접촉 활성화 경로에서의 프로테아제이다. 한 실시형태에서, 링커는 FXIIa에 의해 개열된다. 외인적 경로의 프로테아제로는 조직 인자 경로에서의 프로테아제, 예를 들면, FVIIa가 포함된다. 통상적 경로의 프로테아제로는, 피브린리노겐의 피브린으로의 전환에 관여하는 프로테아제, 예를 들면, FXa, FIIa, 및 FXIIIa가 포함된다.

병용 / 키트

본 발명의 다른 양상은 제제(agent)와 C1INH의 병용이다. 바람직하게는 C1INH는, C1INH의 활성을 강화시키는 것으로 공지되어 있는, 합성 또는 천연 글리코사미노글리칸, 예를 들면, 헤파린, N-아세틸헤파린, 헤파란 설페이트, 덱스트란 설페이트, 데르마탄 설페이트, 및 콘드로이틴 설페이트와 병용하여 투여할 수 있다. 또한, C1INH는, 정맥내 면역글로불린, 항트롬빈 III, 알파1 항트립신 또는 FXII 억제제를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 기타 물질과 병용하여 치료학적 효과를 향상시킬 수 있다. 이들 물질은 병용 치료요법 또는 복합 치료요법으로서 투여될 수 있다. 따라서, 투여를 위함 지침서를 포함하는, 원격 IRI의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한, C1INH 및 상기 언급된 물질들 중 하나 이상을 포함하는 키트도 본 발명의 양상이다. 따라서, 본 발명의 한 실시형태는, 원격 IRI의 예방 및/또는 치료시 동시적, 별도의 또는 순차적 사용을 위한 C1INH 및 상기 열거된 바와 같은 하나 이상의 기타 물질들을 포함하는 부품들의 키트이다.

투여

본원에 기술되어 있는 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제를 포함하는 약제학적 조성물, 및 약제학적으로 허용되는 부형제의 부분으로서 투여되는 것이 바람직하다. 약제학적 조성물은, 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 근육내, 복강내, 낭내, 비내, 폐내, 피부 또는 피하 도포에 의해 용이하게 비경구 투여할 수 있다. 비경구 투여는, 본 발명의 조성물을 용액, 유액 또는 현탁액에 포함시킴으로써 달성될 수 있다.

바람직하게, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제를 포함하는 조성물은, 단일 또는 다중 볼루스-주사(들)에 의해 그리고/또는 연속적 주입 또는 소정 시간에 걸친 주입에 의해 정맥내, 동맥내 또는 피하 투여된다.

대안으로, 약제학적 조성물은, 예를 들면, 경구 또는 직장 적용에 의해 장으로 투여될 것이다.

개체에게 투여되는 C1INH의 용량은 1 내지 5000IU/체중 kg의 범위이다. 바람직하게, 당해 용량은 1 내지 2500IU/체중 kg, 보다 바람직하게는 1 내지 500IU/kg 체중, 보다 더 바람직하게는 10 내지 500IU/체중 kg의 범위 내이다. 가장 바람직하게, 당해 용량은 10IU/체중 kg 내지 250IU/체중 kg, 또는 심지어 20IU/체중 kg 내지 100IU/체중 kg의 범위이다. 숙련가는, 각종 인자, 예를 들면, 투여의 경로에 따라 용량을 조절할 필요가 있음을 알 것이다.

FXII 억제제의 용량 범위는, 사용된 억제제의 유형, 투여 경로 및 숙련가가 익히 알고 있을 기타 인자들에 따라 조정된다. 용량 및 투약 간격은, 원하는 치료 기간 동안 FXIIa의 아미도용해 활성이 완전히 억제되도록 선택되는 것이 바람직하다. 예를 들면, FXII 억제성 항체는 0.01 내지 50mg/체중 kg, 약 0.01 내지 30mg/kg, 약 0.1 내지 30mg/kg, 약 0.1 내지 10mg/kg, 약 0.1 내지 5mg/kg, 약 1 내지 5mg/kg, 약 0.1 내지 2mg/kg 또는 약 0.1 내지 1mg/kg 범위의 용량으로 투여될 것이다. 치료는, 단일 용량 또는 다중 용량을 제공하는 것을 포함할 수 있다. 다중 용량이 요구되는 경우, 이들은 매일, 격일, 매주, 격주, 매월, 또는 격월, 또는 필요에 따라 투여될 수 있다. 또한, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 서서히 그리고 연속적으로 방출시키는 보관소(depository)도 사용할 수 있다. 치료학적 유효 용량은, 대상체에서 FXIIa를 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 99%, 또는 심지어 100% 억제시키는 용량일 수 있다.

인페스틴-기반 FXII 억제제, 예를 들면, 알부민-융합된 인페스틴-4의 경우에, 용량은 0.1 내지 1000mg/체중 kg, 바람직하게는 1 내지 1000mg/kg, 보다 바람직하게는 1 내지 500mg/kg, 보다 더 바람직하게는 50 내지 500mg/kg일 수 있다.

이들 및 기타 FXII 억제제에 관해, 숙련가는 치료에 따라 요구되는 용량을 조정할 수 있을 것이고, 요구되는 용량에 영향을 미치는 인자들, 예를 들면, 투여 경로, 억제제의 반감기, 억제제의 억제 활성, 및 억제제의 FXIIa에 대한 친화도 등을 알 것이다.

치료학적 개입, 예를 들면, 수술 절차에 의해 야기된 원격 또는 원거리 IRI의 치료를 위해, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 외과적 개입(예를 들면, 사지 수술, 심장 수술, 기간 이식 등) 전에 치료를 경험한 개체에게 투여되는 것이 바람직하다. 따라서, 한 양상에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 외과적 개입의 개시 전에 개체에게 투여된다.

접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 외과적 개입의 개시 전 1주, 6일, 5일, 4일, 또는 72시간 내에, 바람직하게는 48시간 내에, 보다 바람직하게는 24시간 내에, 보다 더 바람직하게는 외과적 개입의 개시 전 12시간 내에, 가장 바람직하게는 6시간 내에 환자에게 투여될 수 있다.

예를 들면, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 치료를 경험한 환자에게, 예를 들면, 외과적 개입의 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 12시간, 약 24시간, 약 36시간, 약 48시간, 또는 약 72시간 전에 투여될 수 있다. 또한, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 치료를 경험한 개체에게, 예를 들면, 치료학적 개입의 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 30분 또는 약 45분 전에 투여될 수 있다.

대안으로, 또는 추가로, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 치료를 경험한 개체에게, 외과적 개입의 시점에 또는 외과적 개입 동안에 투여될 수 있다. 따라서, 다른 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 환자에게 외과적 개입 동안에 투여된다. 예를 들면, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 간격(예를 들면, 15분 간격)을 두고 외과적 개입 과정 동안 1회 이상 투여될 수 있다. 대안으로, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 치료학적 개입의 지속기간에 걸쳐 연속적으로 투여될 수 있다.

또한, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 외과적 개입 후 치료를 경험한 개체에게 투여될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 외과적 개입의 종료 후, 바람직하게는 외과적 개입의 종료 후 72시간의 기간 내에 환자에게 투여된다. 예를 들면, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 치료를 경험한 환자에게, 예를 들면, 외과적 개입 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 12시간, 약 24시간, 또는 약 48시간 후에 투여될 수 있다. 또한, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 치료를 경험한 대상체에게, 예를 들면, 외과적 개입 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 30분 또는 약 45분 후에 투여될 수 있다. 바람직하게, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 외과적 개입 후 가능한 빨리 투여하고, 치료는, 외과적 개입 후 적어도 24시간, 바람직하게는 적어도 48시간, 보다 바람직하게는 적어도 72시간 동안 또는 필요에 따라 그 이상 동안 유지한다.

또 다른 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는, 외과적 개입 동안 그리고 외과적 개입의 종료 후 환자에게 투여된다.

추가의 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 외과적 개입의 개시 전에, 외과적 개입 동안에, 그리고, 외과적 개입의 종료 후에 환자에게 투여된다.

추가의 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 외과적 개입의 개시 전에, 외과적 개입의 종료 후에 환자에게 투여되지만, 외과적 개입 동안에는 투여되지 않는다.

추가의 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 외과적 개입의 개시 전에 그리고 외과적 개입 동안에 환자에게 투여되지만, 외과적 개입의 종료 후에는 투여되지 않는다.

추가의 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 재관류의 개시 전에 투여된다. 바람직하게, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 재관류 전 1주까지, 6일, 5일, 4일까지, 바람직하게는 72시간까지, 보다 바람직하게는 48시간까지, 보다 더 바람직하게는 24시간까지, 12시간까지, 가장 바람직하게는 6시간까지 투여된다.

다른 추가의 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 재관류의 개시 후에 투여된다. 바람직하게, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 재관류의 개시 후 72시간까지, 보다 바람직하게는 48시간까지, 12시간까지, 보다 더 바람직하게는 6시간까지, 가장 바람직하게는 재관류의 개시 직후에 투여된다.

바람직한 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 재관류의 개시 전에 그리고 재관류의 개시 후에 투여된다. 바람직하게, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 재관류 전 1주까지, 6일, 5일, 4일까지, 바람직하게는 72시간까지, 보다 바람직하게는 48시간까지, 보다 더 바람직하게는 24시간까지, 12시간까지, 가장 바람직하게는 6시간까지 투여되고, 이어서, 치료는 재관류 개시 후 일정 기간 동안, 바람직하게는 72시간 동안, 보다 바람직하게는 4일 이상 동안, 보다 더 바람직하게는 1주 이상 동안, 가장 바람직하게는 필요레 따라 2주 이상 동안 유지된다.

특정 실시형태에서, 접촉 활성화 시스템 억제제, 바람직하게는 C1INH 또는 FXII 억제제는 1개월 미만 동안, 바람직하게는 14일 미만 동안, 보다 바람직하게는 7일 미만, 가장 바람직하게는 48시간 미만 동안 환자에게 투여된다.

실시예

재료 및 방법

동물 및 하우징

모든 실험은, 스위스 동물 보호법(Swiss Animal Protection Law)의 조항 하에 수행하였고, 수의 사무국의 동물 윤리 위원회(스위스, 베른 주)에 의해 승인되었다. 수컷 위스타(Wistar) 래트(야생형, 내부 동물 시설, 유니버시티 오브 베른)를 사료 및 물의 자유식(ad libitum)으로의 표준 하우징 조건 하에 케이지당 3마리로 유지하였다. 동물들은 20 ± 2℃의 열적 중성 환경 및 45% 내지 65%의 실내 습도 제어된 룸에서 하우징하였고, 여기서, 12/12h(겨울철에 기초함)의 서캐디안 리듬(circadian rhythm)이 유지되었다. 경주기(light cycle) 동안, 동물을 200lux의 강도에 노출시켰다.

시약

C1INH(Berinert^®) 및 비히클(10mg/mL 글리신 2.9mg/mL 시트르산 나트륨 및 8.5mg/mL 염화 나트륨)은 CSL Behring AG(스위스, 베른)에 의해 제공되었다. C1INH는, 허혈 유도 5분 전에 I.V. 캐뉼라(cannula)(BD Vasculon Plus)를 이용함으로써 꼬리 정맥을 통해 볼루스로서 투여되었다.

FXIIa 억제제 rHA-인페스틴-4(Hagedorn et al, 2010, Circulation 121:1510-1517)는, 허혈 유도 5분 전에 100mg/kg의 용량으로 꼬리 정맥을 통해 볼루스로서 투여된다.

수술 절차

체중 250 내지 350g의 수컷 위스타 래트를 하기 실험에 사용하였다. 마취 유도는, 마취 유도 챔버에서 산소 중의 2.5% 이소플루란으로 수행하였고, 후에 비강 마스크(nose mask)를 통한 1.5% 이소플루란의 흡입에 의해 유지하였다. 사지 관류의 평가를 위해, 전기 면도기로 뒷다리 둘 다로부터 털을 완전히 제거하였다. 래트를 가열 패드 위에 두어 체온을 37℃로 유지하였다. 마취 유도 대략 30분 후, 편측 뒷다리 허혈을 3h 동안 유도하였다. 허혈은 대퇴 동맥을 클램핑함으로써 유도하였다. 따라서, 서혜부 절개를 수행하였고, 지방 조직을 조심스럽게 제거하였고, 대퇴 혈관을 노출시켰다. 이어서, 대퇴 동맥을 정맥으로부터 단리하였다.

동맥을 클램핑하기 전에, 이전에 기술된 바와 같이 지혈대(450g의 표준화된 중량)를 대퇴 혈관 아래에 두었다(8). 2개의 미세혈관 클램프(B1-V, S&T Switzerland)를 이용하여 대퇴 동맥을 일시적으로 폐색시켰다. 즉시, 지혈대를 단단히 조여 미세혈관 혈류를 차단시켰다. 전체 절차 동안, 혈류역학(hemodynamics)을 모니터링하였다(Mouse ox plus, Starlifesciences). 허혈 3시간 후, 24시간 동안 사지를 각각 재관류시켰다. 24시간의 재관류 동안, 래트는 깨어 있었고, 무통 처리하였다(부프레노르핀, 0.05mg/kg, Gemgesic Reckitt Benckiser(Switzerland AG)). 실험 종료 후, 분석을 위해 폐 및 허혈성 및 대측성 비복근을 채취하였다.

부종 형성의 평가

부종 형성의 평가를 위해, 양쪽 다리로부터 2개의 비복근 샘플을 채취하였고, 즉시 칭량하여 습윤 중량을 수득하였다. 일정 중량이 달성될 때까지 근육 샘플 또는 폐를 80℃에서 24시간 동안 건조시켰다. 제2 칭량 단계에서, 건조 중량을 수득하였다. 후속적으로, 습윤 중량 대 건조 중량 비를 계산하였고, 대측성 대조군 근육의 습윤 대 건조 중량 비와 비교하였다.

근육 및 폐 조직에서의 침착된 보체 구성성분 및 기타 단백질의 측정

면역형광성(IF)을 이용하여 보체 시스템의 각종 구성성분 및 피브린/피브리노겐, 헤파란 설페이트, 브라디키닌 수용체 B1 및 브라디키닌 수용체 B2의 침착을 정량하였다. 양쪽 다리의 비복근 유래의 조직 샘플 및 폐를 채취하였고, PBS 중에서 세척하였고, 블롯팅 건조시켰고, 드라이 아이스 상에서 매트릭스(OCT, Tissue tek)에 포매시켰다. 즉시, 샘플을, 동결절편을 자를 때까지(Cryostat, Leica CM 3050S) -20℃에 보관하였다. 절편을 아세톤으로 고정화시켰고 TBS 중에서 재수화시켰다. 1차 항체를 4℃에서 밤새 항온배양하였고, 이어엇, 2차 항체를 실온에서 1시간 동안 항온배양하였다. 후속적으로, 슬라이드를 마운팅하였고, 커버를 덮었다. 형광 현미경(Leica)으로 사진을 촬영하였고, Image J 소프트웨어를 이용하여 분석하였다.

다중 어레이를 이용한 사이토카인/ 케모카인 측정

표적 단백질에 대해 특이적인 포획 항체와 접합된 마그네틱 비드로 이루어진 다중 면역검정을 이용하여 사이토카인 및 케모카인의 어레이를 검출하였다(Bioplex Pro™ 래트 사이토카인 그룹 I 패널, BioRad, 미국, 허큘러스). 검정은 제조업자의 지침에 따라 수행하였다.

간략하게, 혈장을 1:3으로 희석하고, 항체-커플링된 마그네틱 비드와 함께 항온배양하였다. 세척 단계에 이어 비오티닐화된 검출 항체와 항온배양하였다. 스트렙트아비딘-피코에리트린 항온배양 후, 사이토카인/케모카인의 농도를 측정하였다. 재조합 사이토카인/케모카인을 이용하여 표준 곡선을 확립하였다. 분석물 농도는 Bio-Plex Manager 4.0 소프트웨어(Bio-Rad, 미국, 허큘러스)를 사용하여 계산하였다.

TUNEL 검정에 의한 아폽토시스의 평가

아폽토시스는, TdT-매개된 dUTP 닉 말단-표지화(TUNEL: TdT-mediated dUTP nick end-labeling) 검정을 이용하여 평가하였다(동일 반응계내 세포 사멸 검출 키트, TMR 레드, Roche, 독일, 만하임). 간략하게, 조직 샘플의 동결절편을 실온에서 5분 동안 아세톤으로 고정화시켰고, 빙상에서 0.1% Triton-X-100을 이용하여 세척 및 투과성화하였다. 절편을 어두운 곳의 37℃에서 1h 동안 TUNEL 반응 혼합물과 함께 항온배양하였고, DAPI로 대비염색(counterstain)하였다. 세척 단계 후, 절편을 마운팅하고, 커버를 덮고, 형광성 현미경으로 분석하였다. 면역형광성 화상을 이미지 J(National Institutes of Healthe, 미국 메릴랜드주 베데스다)로 분석하였다. TUNEL-양성 핵으로 덮힌 면적 백분율(%)을 분석하였고, 모든 DAPI-염색된 핵으로 덮힌 면적과 관련하여 계산하였다.

통계학적 분석

데이터는 평균 ± SD로서 표현된다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험으로의 분산의 일방 분석에 의해 측정하였다. 0.05 미만의 P 값은 통계적으로 유의한 것으로 고려되었다.

결과

i) 국소적 IRI 조직 손상에 대한 C1INH 의 효과

C1INH 는 국소적 IRI 유도된 골격근 부종을 예방하였다

제1 단계로서, C1INH(50IU/kg)의 치료학적 효과는 뒷다리에서의 국소적 부종 형성의 예방에 의해 평가되었다. 사람 혈장-유도된 C1INH로의 동물의 전신적 전부하(preload)는 골격근 부종의 형성을 매우 유의하게 예방하였다(도 1a 및 도 1b 참조). FXII 억제제, 예를 들면, 모노클로날 항-FXII 항체 또는 rHA-인페스틴-4를 이용하여, 유사한 결과, 즉, 근육 부종 형성의 감소가 기대된다.

ii) IRI 유도된 원격 조직 및 기관 손상에 대한 C1INH 의 효과

C1INH 는, 폐 부종을 약화시킴으로써 원격 기관 손상을 억제하였다

원격 조직 및 기관 손상에 대한 C1INH의 효과를 분석하였다. C1INH는, FXIIa 및 칼리크레인과 상호작용함에 의한 혈장 칼리크레인-키닌 시스템의 매우 강력한 억제제이다. 도 2에 나타낸 바와 같이, C1INH는, 습윤:건조 비에 의해 분석되는 바와 같이 부종의 형성을 유의하게 예방하였고, 따라서, 폐에서의 내피 세포 온전성(integrity)이 보존되었다.

폐 및 심장에서의 브라디키닌 수용체의 발현에 대한 C1INH 의 효과

혈장 칼리크레인-키닌 시스템의 활성화는 브라디키닌의 생성을 초래한다. 이 분자는, 혈관 확장 및 부종을 유도하는 매우 강력한 혈관작용성 펩타이드이다. 칼리크레인-키닌 시스템은 IRI의 결정적인 참여인자인 것으로 밝혀졌다. 브라디키닌 2 수용체(B2R)의 길항제는, 치료소에서 HAE 환자를 치료하기 위해 성공적으로 사용되어 왔다(9). B1R 및 B2R 발현에 대한 C1INH의 효과는 IF에 의해 분석하였다. 놀랍게도, C1INH는, 폐 조직에서의 B1R의 IRI 유도된 상향조절을 유의하게 억제하였고(도 3a 참조), 반면, B2R의 발현에 대해서는 어떠한 억제도 관찰되지 않았다(도 3b 참조). 심장 조직에서도 동일한 효과가 관찰되었다(데이터 도시하지 않음).

C1INH 는 폐에서 피브린 침착을 억제하였다

보체 억제 이외에도, C1INH는 FXII 및 FXI와의 상호작용에 의해 응혈 시스템에 작용한다. 응혈 시스템의 활성화는, 피브리노겐을 피브린으로 개열시키는 트롬빈의 생성을 초래한다. C1INH를 이용한 치료는 폐 조직에서 피브린 침착을 유의하게 억제하였다(도 4 참조).

C1INH 는, 피브린 침착을 예방함으로써 대측성 사지에서 원격 조직 손상을 예방하였다

상기 기술되어 있는 바와 같이, 본 발명자들은 비-허혈 대측성 사지에서 부종 형성을 검출할 수 없었다. 놀랍게도, 본 발명자들은 대측성 다리에서 피브린 침착을 관찰할 수 있었다(도 5 참조). 폐에서 관찰된 바와 같이(도 4a 참조), 본 발명자들은, C1INH에 의한 비-허혈 사지에서의 피브린 침착의 유의한 억제를 관찰하였다(도 5 참조).

보체 침착은 대측성 사지, 신장 및 간에서 C1INH 에 의해 억제되었다

허혈 및 대측성 비-허혈 다리를 보체 활성화에 대한 마커로서의 보체 단편의 침착에 대해 분석하였다. 도 6a 및 도 6b에 나타낸 바와 같이, C1INH는, 재관류된 다리에서뿐만 아니라 대측성 다리에서도 C3b(전형적인 렉틴 경로) 및 인자 B(보체 활성화의 대안의 경로)의 침착을 유의하게 감소시켰다. 또한, C1INH를 이용한 치료는, 신장에서 C3b 침착 및 간에서의 인자 B 침착의 유의한 감소를 야기하였다.

C1INH 를 이용한 치료는 대측성 사지에서 내피 당질피질( glycocalyx )을 보존하였다

건강한 EC는 글리코사미노글리칸, 예를 들면, 헤파란 설페이트(HS)의 층에 의해 피복되고, 이는, 내피의 항응혈 및 소염 특성에 결정적이다. HS는 염증 및 조직 손상 조건 하에 신속하게 방출된다(11-14). 놀랍게도, C1INH는 대측성 사지에서의 HS의 쉐딩을 예방하였다(도 7 참조).

염증성 사이토카인 및 케모카인 네트워크에 대한 C1INH 의 억제 효과

사이토카인, 성장 인자 및 케모카인은, 기저선에서, 즉, 허혈 유도 전에 그리고 재관류 24h 후 종료점에서 취한 EDTA-혈장에서 xMAP 기술을 이용하여 측정하였다. 분석은, C1INH 치료가 IL-1α, IL-4, IL-7, IL-17A 및 IL-18의 수준 및 IFN-γ, MIP-1α, MIP-3α 및 TNF-α를 유의하게 감소시켰음을 밝혔다(표 3 참조).

하기 사이토카인은 검출되지 않았다: IL-1β, IL-2, IL-6, IL-12p70, IL-13, G-CSF 및 GM-CSF. 데이터는 평균 ± SD로서 표현된다. 통계적 유의성은, GraphPad Prism 5 소프트웨어를 이용한 던네트 후-시험에 의해 측정하였다. 0.05 미만의 P 값은 통계적으로 유의한 것으로 고려되었다.

폐 및 신장 피질에서의 아폽토시스에 대한 C1INH 치료의 효과

아폽토시스는, TUNEL 검정을 이용하여 평가하였다. 비히클-치료된 동물의 폐 조직에서의 세포는 높은 정도의 아폽토시스(76 + 21%)를 나타냈다. 또한, 신장의 피질에서, 근위 세뇨관 상피 세포에서, 아폽토시스는 비히클-치료된 동물에서 관찰되었다(43 + 25%). 비교시, C1INH-치료된 동물은 아폽토시스성 세포의 유의한 감소(폐에서 10 + 12%(P<0.0001) 및 신장 피ㅈ리에서 7 + 8%)를 나타냈다.

iii) IRI -유도된 원격 조직 및 기관 손상에 대한 FXII 억제제 rHA - 인페스틴 -4의 효과

또한, 상기 기술되어 있는 바와 같은 rHA-인페스틴-4로의 치료는 폐 부종의 유의한 감소를 유도하고, 또한, 잠재적으로 다른 조직에서의 부종 형성을 감소시킨다.

또한, 폐에서의(그리고, 또한, 잠재적으로 다른 조직에서의) 피브린 침착의 유의한 감소가 관찰된다.

rHA-인페스틴-4를 이용한 치료 후, 폐 및 다른 조직에서의 아폽토시스에 대한 유의한 감소 효과가 관찰되고, 또한, rHA-인페스틴-4는 IgM 및 보체 구성성분의 침착의 감소를 유도하고, 잠재적으로 염증성 사이토카인 및 케모카인 네트워크에 대한 효과도 나타낸다.

참조문헌 목록

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Val Leu 145 150 155 160 Leu Gly Ala Gly Glu Asn Thr Lys Thr Asn Leu Glu Ser Ile Leu Ser 165 170 175 Tyr Pro Lys Asp Phe Thr Cys Val His Gln Ala Leu Lys Gly Phe Thr 180 185 190 Thr Lys Gly Val Thr Ser Val Ser Gln Ile Phe His Ser Pro Asp Leu 195 200 205 Ala Ile Arg Asp Thr Phe Val Asn Ala Ser Arg Thr Leu Tyr Ser Ser 210 215 220 Ser Pro Arg Val Leu Ser Asn Asn Ser Asp Ala Asn Leu Glu Leu Ile 225 230 235 240 Asn Thr Trp Val Ala Lys Asn Thr Asn Asn Lys Ile Ser Arg Leu Leu 245 250 255 Asp Ser Leu Pro Ser Asp Thr Arg Leu Val Leu Leu Asn Ala Ile Tyr 260 265 270 Leu Ser Ala Lys Trp Lys Thr Thr Phe Asp Pro Lys Lys Thr Arg Met 275 280 285 Glu Pro Phe His Phe Lys Asn Ser Val Ile Lys Val Pro Met Met Asn 290 295 300 Ser Lys Lys Tyr Pro Val Ala His Phe Ile Asp Gln Thr Leu Lys Ala 305 310 315 320 Lys Val Gly Gln Leu Gln Leu Ser His Asn Leu Ser Leu Val Ile Leu 325 330 335 Val Pro Gln Asn Leu Lys His Arg Leu Glu Asp Met Glu Gln Ala Leu 340 345 350 Ser Pro Ser Val Phe Lys Ala Ile Met Glu Lys Leu Glu Met Ser Lys 355 360 365 Phe Gln Pro Thr Leu Leu Thr Leu Pro Arg Ile Lys Val Thr Thr Ser 370 375 380 Gln Asp Met Leu Ser Ile Met Glu Lys Leu Glu Phe Phe Asp Phe Ser 385 390 395 400 Tyr Asp Leu Asn Leu Cys Gly Leu Thr Glu Asp Pro Asp Leu Gln Val 405 410 415 Ser Ala Met Gln His Gln Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Thr Gly Val 420 425 430 Glu Ala Ala Ala Ala Ser Ala Ile Ser Val Ala Arg Thr Leu Leu Val 435 440 445 Phe Glu Val Gln Gln Pro Phe Leu Phe Val Leu Trp Asp Gln Gln His 450 455 460 Lys Phe Pro Val Phe Met Gly Arg Val Tyr Asp Pro Arg Ala 465 470 475 <210> 2 <211> 48 <212> PRT <213> Triatoma infestans <400> 2 Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn Tyr Val Pro Val Cys 1 5 10 15 Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Gly Asn Pro Cys Met Leu Asn Cys Ala 20 25 30 Ala Gln Thr Lys Val Pro Gly Leu Lys Leu Val His Glu Gly Arg Cys 35 40 45 <210> 3 <211> 56 <212> PRT <213> Homo sapiens <223> SPINK-1 <400> 3 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Ala Lys Cys Tyr Asn Glu Leu Asn Gly Cys 1 5 10 15 Thr Lys Ile Tyr Asp Pro Val 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V-segment <222> (6)..(6) <223> Xaa is selected from Gly, Leu, Val and Thr <220> <221> V-segment <222> (7)..(7) <223> Xaa is selected from Gly, Tyr, Gln, Lys, Arg, Asn and Met <220> <221> V-segment <222> (8)..(8) <223> Xaa is selected from Thr, Gly and Ser <400> 11 Gly Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Ile Ser Pro His Tyr Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Leu Asp Val 20 <210> 13 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain CDR3 showing variations <220> <221> V-segment <222> (9)..(9) <223> Xaa is selected from Ala, Met and Val <220> <221> V-segment <222> (10)..(10) <223> Xaa is selcted from Ser and Lys <220> <221> V-segment <222> (11)..(11) <223> Xaa is selected from Pro, Lys, Thr and His <220> <221> V-segment <222> (12)..(12) <223> Xaa is selected from His, Asn, Gly and Gln <400> 13 Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Leu Asp Val 20 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 15 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu Arg Gly Val 1 5 10 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> V-segment <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from Ala and Ser <220> <221> V-segment <222> (4)..(6) <223> Xaa can be any amino acid <220> <221> V-segment <222> (7)..(7) <223> Xaa is selected from Leu and Val <220> <221> V-segment <222> (9)..(10) <223> Xaa can be any amino acid <400> 17 Ala Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Xaa 1 5 10 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ser Gly Ser Ser Glu Met Thr Val His His Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn Tyr Val 1 5 10

Claims

개체에게 투여되는, C1 에스테라제 억제제(C1INH)인 접촉 활성화 시스템 억제제 화합물의 유효량을 포함하는, 원격 허혈-재관류 손상(IRI)의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 C1INH가 개체에게 비경구 투여되는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 상기 C1INH가 개체에게 정맥내, 동맥내, 또는 피하 투여되는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 개체에게 투여된 상기 C1INH의 용량이 1 내지 1000IU/체중kg인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체가, 외과적 개입을 경험할 예정이거나 외과적 개입을 경험한 환자인, 약제학적 조성물.
제5항에 있어서, 상기 C1INH가 외과적 개입의 개시 또는 재관류의 개시 전 6시간 이내에 환자에게 투여되는, 약제학적 조성물.
제5항에 있어서, 상기 C1INH가, 외과적 개입 전 및/또는 도중 및/또는 후에, 또는 재관류의 개시 전 및/또는 후에 환자에게 투여되는, 약제학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 C1INH가 외과적 개입의 종료 또는 재관류의 개시 후 72시간 이내에 환자에게 투여되는, 약제학적 조성물.
제5항에 있어서, 상기 외과적 개입이, (a) 예정 수술(elective surgery), 재건 수술, 혈관 수술, 심장 수술, 외상 수술, 충돌(crash) 또는 압박(crush) 수술, 암 수술, 정형외과 수술, 이식, 최소 침습 수술, 또는 (b) 초기 혈전성 또는 혈전 색전성 또는 기타 허혈-유도성 장애의 발병 후의, 약제학적 활성 물질의 전달을 위한 장치 및/또는 완전 또는 부분 폐색의 기계적 제거를 위한 장치의 삽입, 및 약제학적 활성 물질의 주사로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
제9항에 있어서, 상기 약제학적 활성 물질이 혈전용해제 또는 혈관확장제인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재관류가 자발적으로 일어나거나, 손상된 혈류가 외과적 개입 이외의 개입을 통해 개선되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 원격 허혈-재관류 손상(IRI)이, 폐, 심장, 뇌, 신장, 장, 췌장, 간, 또는 손발/팔다리와 같은 기관에 영향을 미치는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 원격 허혈-재관류 손상(IRI)이 치료의 부재시 다중 기관 기능이상 증후군 또는 전신적 염증 반응 증후군을 초래할 것인, 약제학적 조성물.
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